CN117783534A - 一种乳腺癌分子标志物及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种乳腺癌分子标志物及其应用，其属于生物医学领域，其中，所述乳腺癌分子标志物为脂肪酶样蛋白2；脂肪酶样蛋白2在乳腺癌初期病人的血清中含量就显著增加，并一直维持到疾病后期；因此，该乳腺癌分子标志物可以应用于乳腺癌诊断试剂盒中，具体的，可以通过检测被检查者的血清中脂肪酶样蛋白2的含量来辅助诊断被检查者是否患有乳腺癌，从而辅助临床病理诊断。
Description
技术领域
本发明涉及生物医学领域，具体是一种乳腺癌分子标志物及其应用。
背景技术
肿瘤细胞会产生和释放各种代谢物，蛋白质，酶，外泌体等生命活动产物。对于由肿瘤细胞特异产生的蛋白质，核酸，外泌体等产物，可以通过其生化或免疫特性对其进行识别，从而辅助肿瘤诊断。肿瘤标志物在临床上具有重要作用。医院病理科和检验科通过对各种癌症相关的分子标志物的免疫组化检测和血液酶联免疫检测，可以实现对原发肿瘤的发现、肿瘤高危人群的筛查选、肿瘤类别和亚型的判定，肿瘤病理分期的划分。肿瘤分子标志物也可以辅助肿瘤治疗效果，肿瘤复发和转移等预后指标的判断等。
脂肪酶样蛋白2(Colipase-like protein 2，Clpsl2)是一种Good综合征相关的蛋白分子，具有酶激活剂活性，与胰磷脂酶(Clps)蛋白同源。Clpsl2首先被发现在附睾中特异性表达。虽然Clpsl2与Clps的同源性最高，但Clpsl2缺乏Clps中与脂肪酶相互作用的保守氨基酸。重组Clpsl2蛋白也不具备类似于Clps促进脂肪酶水解为底物甘油三油酸酯的功能。通过基因敲低技术发现Clpsl2参与精子细胞的运动、顶体完整性，推测参与生育能力的调节。序列分析显示Clpsl2具有与脂质结合的能力，可能通过与膜脂结合改变细胞质膜特性。但是，目前Clpsl2与癌症的关系研究不多，故须作进一步的研究。
发明内容
本发明的目的在于提供一种乳腺癌分子标志物及其应用，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明实施例提供如下技术方案：
一种乳腺癌分子标志物，所述乳腺癌分子标志物至少包括脂肪酶样蛋白2。
本发明实施例的另一目的在于提供一种乳腺癌分子标志物在制备乳腺癌诊断试剂盒中的应用，其中，所述乳腺癌分子标志物为脂肪酶样蛋白2。
优选地，所述乳腺癌诊断试剂盒用于通过检测被检查者的血清中脂肪酶样蛋白2的含量来辅助诊断被检查者是否患有乳腺癌。
优选地，患有乳腺癌的被检查者的血清中脂肪酶样蛋白2的含量大于未患有乳腺癌的被检查者血清中脂肪酶样蛋白2的含量。
优选地，检测被检查者的血清中脂肪酶样蛋白2的含量的方法为酶联免疫吸附测定法。
优选地，所述乳腺癌诊断试剂盒用于通过检测被检查者的乳腺组织中脂肪酶样蛋白2的表达情况来辅助诊断被检查者是否患有乳腺癌。
本发明实施例的另一目的在于提供一种乳腺癌诊断试剂盒，其至少包括用于检测血清中脂肪酶样蛋白2含量的试剂。
优选地，所述用于检测血清中脂肪酶样蛋白2含量的试剂为酶联免疫吸附测定法检测试剂。
本发明实施例提供的乳腺癌分子标志物为脂肪酶样蛋白2，脂肪酶样蛋白2在乳腺癌初期病人的血清中含量就显著增加，并一直维持到疾病后期；因此，可以通过检测被检者的乳腺组织中脂肪酶样蛋白2的表达情况，以及检测被检者血液中的脂肪酶样蛋白2含量情况，判断被检者是否患有乳腺癌，从而辅助临床病理诊断。
附图说明
图1为实施例1实验结果图；其中，图1的A展示了Clpsl2在正常与所有病理阶段的乳腺癌肿瘤组织中的基因表达情况比较结果(两样本T-test统计学检验)；图1的B展示了Clpsl2在每个病理阶段的乳腺癌肿瘤组织中的基因表达情况(单向Annova检验)。
图2为实施例2实验结果图；图2的A和B分别展示了Clpsl2在健康人群和肺癌患者乳腺组织中的蛋白免疫组化染色情况。
图3为实施例3实验结果图；图3的A展示了乳腺癌与健康人群血清中Clps l2蛋白含量比较结果；图3的B为依据Clpsl2蛋白含量区分乳腺癌与健康人群的受试者工作曲线(ROC曲线)。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
针对背景技术提出的技术问题，本发明实施例发现脂肪酶样蛋白2(Clpsl2)与乳腺癌的免疫治疗反应相关；对此，本发明实施例从基因、蛋白表达的角度，论证Clpsl2可以作为乳腺癌诊断分子标志物。具体如下：
在本发明的一个实施例中，提供了一种乳腺癌分子标志物，所述乳腺癌分子标志物至少包括脂肪酶样蛋白2。
本发明实施例通过对临床生物医学大样本数据库的研究，发现Clpsl2基因高表达于乳腺癌病人的组织样本，并且在各个病理分期中都维持稳定的高表达。免疫组织化学研究也显示Clpsl2不表达于来源于健康人群的乳腺组织细胞，但在乳腺癌病人组织细胞经常呈现阳性表达。此外，本发明实施例进一步使用ELISA(酶联免疫吸附测定法)对乳腺癌患者与健康对照人群血清中Clpsl2含量进行了分析，发现Clpsl2在肺癌患者血清中的含量明显增高。受试者工作特征曲线下面积(AUROC)为0.82；因此，依据乳腺组织标本中Clpsl2的表达情况，或者血清中的Clpsl2含量可以实现乳腺癌的病理诊断。
在本发明的另一个实施例中，提供了一种乳腺癌分子标志物在制备乳腺癌诊断试剂盒中的应用，其中，所述乳腺癌分子标志物为脂肪酶样蛋白2。
在本发明的一个优选实施例中，所述乳腺癌诊断试剂盒用于通过检测被检查者的血清中脂肪酶样蛋白2的含量来辅助诊断被检查者是否患有乳腺癌。
在本发明的一个优选实施例中，患有乳腺癌的被检查者的血清中脂肪酶样蛋白2的含量大于未患有乳腺癌的被检查者血清中脂肪酶样蛋白2的含量。
在本发明的一个优选实施例中，检测被检查者的血清中脂肪酶样蛋白2的含量的方法为酶联免疫吸附测定法。
在本发明的另一个优选实施例中，所述乳腺癌诊断试剂盒用于通过检测被检查者的乳腺组织中脂肪酶样蛋白2的表达情况来辅助诊断被检查者是否患有乳腺癌。
在本发明的另一个实施例中，提供了一种乳腺癌诊断试剂盒，其至少包括用于检测血清中脂肪酶样蛋白2含量的试剂。
在本发明的一个优选实施例中，所述用于检测血清中脂肪酶样蛋白2含量的试剂为酶联免疫吸附测定法检测试剂。
具体的，酶联免疫吸附测定法检测试剂可以采用现有的ELISA试剂盒，其可包括PBS溶液、辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin)、四甲基联苯胺、H2SO4、生物素交联的抗体等，但不限于此。
本发明实施例提供的乳腺癌分子标志物为脂肪酶样蛋白2，脂肪酶样蛋白2在乳腺癌初期病人的血清中含量就显著增加，并一直维持到疾病后期；因此，可以通过检测被检者的乳腺组织中脂肪酶样蛋白2的表达情况，以及检测被检者血液中的脂肪酶样蛋白2含量情况，判断被检者是否患有乳腺癌，从而辅助临床病理诊断。
下述实施例为本发明技术方案在实际应用的实施案例以及相关实验案例，但不限于此。
实施例1：该实施例对正常乳腺组织和乳腺癌患者的乳腺组织中Clpsl2基因的表达水平进行比较，具体如下：
利用TCGA癌症数据库的乳腺癌病人二代测序数据，通过gepia2在线工具分析了Clpsl2在乳腺癌组织(1065例)和正常乳腺组织(291例)中的基因表达量，结果如图1的A所示；结果显示，乳腺癌组织中Clpsl2的基因表达量显著高于正常乳腺组织。
另外，对所有乳腺肿瘤组织按照病理分级分组，结果如图1的B所示；结果显示，Clpsl2在疾病的各个病理分期(即I，II，III，IV)中含量保持恒定，表明Clpsl2在癌症进展的各个阶段都呈现高表达状态。
实施例2：该实施例对Clpsl2在健康人群和肺癌患者乳腺组织中的蛋白免疫组化染色情况进行了对比，具体如下：
HPA(Human Protein Atlas)数据库包含有各种人体正常组织和各种癌症样本的免疫组化数据。提取HPA数据库中Clpls2在正常人乳腺组织和乳腺癌病人肿瘤组织中免疫组化数据，统计发现，Clpls2蛋白在乳腺癌患者肿瘤组织呈现普遍阳性染色(如图2的B所示)，而在健康人群正常乳腺组织中染色呈现阴性(如图2的A所示)；因此，Clpls2在正常人乳腺组织内各种类型细胞(脂肪细胞，腺体细胞，肌上皮细胞)中都不表达，而在乳腺癌病人乳腺肿瘤组织的癌细胞中总是呈现低度到中度不等的表达。
实施例3：该实施例对乳腺癌与健康人群血清中Clpsl2蛋白含量进行了比较，具体如下：
本实施例研究对30例健康人及25例初诊乳腺癌患者血清Clpls2含量进行ELISA检测：受试者空腹采集血清样本，冻存于-80℃备用。ELISA试剂盒从ABBEX A公司购买。
ELISA检测步骤如下：
S1、分别设空白对照孔和待测样品孔；在酶标包被板上加入稀释10倍后的血清样本100μL；对照孔加入PBS溶液；轻轻晃动混匀样品。
S2、用封板膜封板后置于37℃温育2小时。
S3、揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满PBS洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复3-5次。
S4、加入100μL/孔的生物素交联的抗体，37℃孵育1h弃掉溶液。
S5、加入100μl/孔的辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin)，37℃孵育1h。
S6、加入底物溶液(四甲基联苯胺)进行反应，然后用H2SO4停止反应，450nm波长测量各孔的吸光度(OD值)。
ELISA检测结果如图3所示，具体如下：
从图3的A可以知道，比较健康人群与初诊乳腺癌患者血清中Clpsl2蛋白含量发现，乳腺癌病人血清Clpsl2含量相对健康人群明显升高(P值<0.001，统计学差异显著)。从图3的B可以知道，受试者工作ROC曲线下面积达到0.82，显示较高的灵敏性和特异性。以1.37μg/L作为Clpsl2的血清浓度阈值，则对乳腺癌的检测特异度达到100％，而灵敏度也可以保持60％以上。因此，通过检测血清Clpsl2的血清含量可为有效区分健康人群和乳腺癌患者提供一种方法。
以上述依据本发明的理想实施例为启示，通过上述的说明内容，相关工作人员完全可以在不偏离本项发明技术思想的范围内，进行多样的变更以及修改。本项发明的技术性范围并不局限于说明书上的内容。
Claims (8)
1.一种乳腺癌分子标志物，其特征在于，所述乳腺癌分子标志物至少包括脂肪酶样蛋白2。
2.一种乳腺癌分子标志物在制备乳腺癌诊断试剂盒中的应用，其特征在于，所述乳腺癌分子标志物为脂肪酶样蛋白2。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述乳腺癌诊断试剂盒用于通过检测被检查者的血清中脂肪酶样蛋白2的含量来辅助诊断被检查者是否患有乳腺癌。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，患有乳腺癌的被检查者的血清中脂肪酶样蛋白2的含量大于未患有乳腺癌的被检查者血清中脂肪酶样蛋白2的含量。
5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，检测被检查者的血清中脂肪酶样蛋白2的含量的方法为酶联免疫吸附测定法。
6.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述乳腺癌诊断试剂盒用于通过检测被检查者的乳腺组织中脂肪酶样蛋白2的表达情况来辅助诊断被检查者是否患有乳腺癌。
7.一种乳腺癌诊断试剂盒，其特征在于，所述乳腺癌诊断试剂盒至少包括用于检测血清中脂肪酶样蛋白2含量的试剂。
8.根据权利要求7所述的乳腺癌诊断试剂盒，其特征在于，所述用于检测血清中脂肪酶样蛋白2含量的试剂为酶联免疫吸附测定法检测试剂。
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Legal Events
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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