CN117776877A

CN117776877A - 二苯乙烯衍生物及其制备方法和用途

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Publication number: CN117776877A
Application number: CN202211170147.6A
Authority: CN
Inventors: 蔡亚仙; 贾剑敏; 韩自省; 蔡开明; 孙焕亮; 唐梦洁
Original assignee: Shanghai Zedeman Pharmaceutical Technology Co ltd
Current assignee: Shanghai Zedeman Pharmaceutical Technology Co ltd
Priority date: 2022-09-22
Filing date: 2022-09-22
Publication date: 2024-03-29

Abstract

本发明提供式I所示的化合物、其立体异构体、药学上可接受的盐或前药作为芳烃受体(AHR)调节剂的用途。式I所示的化合物相比上市药物本维莫德大大提高了分子结构的光照稳定性，改善了本维莫德光不稳定现象，在光照下易降解的问题。此外，还显著改善了对AHR蛋白的活性。最后，式I所示的化合物制备方法简单，可进行克级或千克级制备，在后续的制剂开发、安全性及临床应用上具有更优的前景。

Description

二苯乙烯衍生物及其制备方法和用途

技术领域

本发明属于炎症或免疫相关药物技术领域，具体涉及一种新的二苯乙烯衍生物、其制备方法及含有该衍生物的药物组合物，以及它们作为治疗剂，特别是作为芳烃受体(Aryl Hydrocarbon Receptor,AHR)调节剂的用途。

背景技术

芳烃受体AHR，也被称为二噁英受体，是转录调节因子bHLH(basic Helix-Loop-Helix)-PAS(Per-ARNT-Sim)家族的一员。bHLH-PAS家族成员的独特特征是具有PAS域，此域的名称来源于最先发现具有这个基序的三个蛋白：Drosophila Per，Human ARNT和Drosophila Sim。PAS结构域由260-310个氨基酸组成，包括两个非常保守性的疏水重复序列，称为PAS-A和PAS-B，由一个保守性比较差的序列所间隔。bHLH结构域负责与DNA结合，串联的PAS结构域(PAS-A和PAS-B)参与蛋白质-蛋白质相互作用和配体结合。在AHR中，配体结合发生在PAS-B结构域。bHLH-PAS家族成员中N端bHLH-PAS区域保守较好。AHR的大部分非保守性变化发生在转录激活域，导致与其他共激活子、辅抑制子或核受体的不同蛋白-蛋白相互作用，调控不同的基因表达。

在没有配体存在下，AHR是存在于细胞溶质中，与多种伴侣蛋白相结合，包括一个二聚体的热休克蛋白90(heat shock protein 90,HSP90)，辅助伴侣蛋白p23、AHR作用蛋白(AHR-Interacting Protein,AIP)和蛋白激酶Src。当与配体结合时，AHR改变其构象，转位到细胞核，与伴侣复合物分离，然后与AHR核转位蛋白(Aryl hydrocarbon ReceptorNucleus Translocator,ARNT)形成异二聚体。AHR调控基因上游的调控区域包含一个DNA共有序列(5'-TNGCGTG-3')，称为外来响应元件(Xenobiotic Responsive Element,XRE)，也叫二噁英响应元件(Dioxin Responsive Element,DRE)。它作为转录增强子，是一个和AHR结合的位点。AHR-ARNT异二聚体复合物被XRE招募，启动靶基因的转录。

研究表明，AHR参与细胞生理、宿主防御、免疫细胞增殖分化和解毒等生理过程。AHR在免疫系统的许多细胞中表达，包括树突状细胞、巨噬细胞、T细胞和NK细胞等。

由于AHR的配体结合位点是结构灵活的，许多小分子可以作为配体，包括外源性配体如多环芳烃、二噁英和多氯联苯等；内源性配体如色氨酸降解的代谢产物，食物来源的配体和细菌、微生物代谢途径的产物。例如AHR调节剂本维莫德是由昆虫病原线虫的细菌共生体产生的天然衍生小分子，是全球首个上市的芳烃受体激动剂，可用于治疗多种自身免疫性疾病，如银屑病、湿疹等。但是本维莫德由于自身的结构特点，例如存在光不稳定现象，在光照下易降解，限制了其应用。因此，开发更稳定的AHR调节剂，对于扩大其临床应该范围和降低潜在的副作用，意义重大。

发明内容

为改善现有技术的上述问题，本发明提供如下式I所示的化合物、其立体异构体、药学上可接受的盐或前药：

其中，Ar选自无取代，或任选被一个、两个或更多个Rs取代的如下基团：C_6-20芳基或5-20元杂芳基；

每一个Rs相同或不同，彼此独立地选自卤素、C_1-12烷基、卤代C_1-12烷基、-COC_1-12烷基或C_1-12烷氧基；

R₁选自卤素、氰基、C_1-12烷基、卤代C_1-12烷基、-COC_1-12烷基或C_1-12烷氧基。

在一个实施方案中，Ar选自无取代，或任选被一个、两个或更多个如下基团取代的C_6-14芳基或5-14元杂芳基：卤素或C_1-3烷基；

R₁选自F、Cl、Br、氰基、C_1-3烷基、卤代C_1-3烷基、-COC_1-3烷基或C_1-3烷氧基。

在一个优选的实施方案中，Ar选自无取代，或任选被一个、两个或更多个Rs取代的如下基团：苯基、吡啶-2-基、吡啶-3基、吡啶-4-基、噻吩基，例如被一个、两个或更多个选自氟、氯或溴的取代基取代的苯基或吡啶基，其实例可以选自4-氟代苯基、2-氟代苯基、

R₁选自F、Cl、Br、甲基、氰基、乙酰基、

在一个实施方案中，R₁取代在苯环上羟基的邻位。

在一个实施方案中，当Ar为杂芳基时，其2位与烯基相连。

作为示例，式I所示的化合物选自如下化合物：

根据本发明的实施方案，所述前药可以是式I所示的化合物的至少一个羟基与药学上可接受的具有至少一个羧基的化合物形成的酯。作为实例，所述具有至少一个羧基的化合物可以为一元、二元或多元有机酸(例如乙酸、磷酸)。或者作为选择，当所述有机酸为二元或多元有机酸时，其可以通过1个羧基与式I所示的化合物成酯，而其他羧基与羟基取代的C_1-12烷基反应成酯。

本发明还提供式I所示化合物、其立体异构体或药学上可接受的盐的制备方法，包括如下步骤：

1)当R₁为卤素时，式I化合物采用如下方法制备：

S5)化合物Id与吡啶盐酸盐加热反应得到式I所示的化合物；或者，化合物Id用三溴化硼脱除甲基后用水淬灭反应得到式I所示的化合物；

2)当R₁为甲基时，式I化合物采用如下方法制备：

S5’)化合物Id’与吡啶盐酸盐加热反应得到式I所示的化合物；

其中，Ar和R₁具有如上所述定义。

在一个实施方案中，化合物Id采用如下方法制备：

S1)3,5-二甲氧基-4-异丙基苄醇与卤代试剂(例如N-氯代丁二酰亚胺，1-氯甲基-4-氟-1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷二(四氟硼酸)盐或N-溴代丁二酰亚胺)反应得到化合物Ia；

S2)将化合物Ia加入到浓盐酸和正己烷的混合溶液中加热反应得到化合物Ib；

S3)化合物Ib与亚磷酸三乙酯加热反应得到化合物Ic；

S4)化合物Ic与化合物在碱性化合物(例如叔丁醇钾、叔丁醇钠等碱性化合物)存在下反应得到化合物Id；

化合物中Ar具有如上式I中相同定义。

任选地，所述制备方法还包括将式I所示的化合物成盐的步骤。

本发明还提供一种药物组合物，其包含治疗有效量的式I所示的化合物、其立体异构体或药学上可接受的盐。

根据本发明的实施方案，所述药物组合物进一步还包括一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂。

根据本发明的实施方案，所述药物组合物为芳烃受体(AHR)调节剂。

根据本发明的实施方案，所述芳烃受体(AHR)调节剂用于缓解和/或治疗如下疾病或病症：癌症，如白血病、前列腺癌和肠癌；眼科相关疾病，如葡萄膜炎、年龄相关性黄斑变性和干眼症；自身免疫疾病，如类风湿性关节炎、多发性硬化、系统性红斑狼疮、炎性肠病、1型糖尿病、白癜风、特应性皮炎和银屑病，以及其他具有免疫学因素的病症或不适，如哮喘、变态反应、感染、骨质疏松、动脉粥样硬化、2型糖尿病、移植物抗宿主病和移植排异。

本发明还提供式I所示的化合物、其立体异构体或药学上可接受的盐在制备芳烃受体(AHR)调节剂中的用途。

本发明还提供一种缓解和/或治疗芳烃受体(AHR)介导的疾病或病症的方法，包括给予患者治疗有效量的如式I所示的化合物、其立体异构体或药学上可接受的盐，或如上所述药物组合物。

根据本发明的实施方案，所述芳烃受体(AHR)介导的疾病或病症包括：癌症，如白血病、前列腺癌和肠癌；眼科相关疾病，如葡萄膜炎、年龄相关性黄斑变性和干眼症；自身免疫疾病，如类风湿性关节炎、多发性硬化、系统性红斑狼疮、炎性肠病、1型糖尿病、白癜风、特应性皮炎和银屑病，以及其他具有免疫学因素的病症或不适，如哮喘、变态反应、感染、骨质疏松、动脉粥样硬化、2型糖尿病、移植物抗宿主病和移植排异。

有益效果

本发明通过对本维莫德的结构进行改进，获得的化合物相比上市药物本维莫德大大提高了分子结构的光照稳定性，改善了本维莫德光不稳定现象，在光照下易降解的问题。此外，还显著改善了对AHR蛋白的活性。

最后，所得化合物制备方法简单，可进行克级或千克级制备，在后续的制剂开发、安全性及临床应用上具有更优的前景。

术语定义与说明

除非另有定义，否则本文所有科技术语具有的含义与权利要求主题所属领域技术人员通常理解的含义相同。

除非另有说明，本申请说明书和权利要求书中记载的基团和术语定义，包括其作为实例的定义、示例性的定义、优选的定义、表格中记载的定义、实施例中具体化合物的定义等，可以彼此之间任意组合和结合。这样的组合和结合后的基团定义及化合物结构，应当被理解为本申请说明书和/或权利要求书记载的范围内。

除非另有说明，本说明书和权利要求书记载的数值范围相当于至少记载了其中每一个具体的整数数值。例如，数值范围“1-10”相当于记载了数值范围“1-10”中的每一个整数数值即1、2、3、4、5、6、7、8、9、10。此外，当某些数值范围被定义为“数”时，应当理解为记载了该范围的两个端点、该范围内的每一个整数以及该范围内的每一个小数。例如，“0～10的数”应当理解为不仅记载了0、1、2、3、4、5、6、7、8、9和10的每一个整数，还至少记载了其中每一个整数分别与0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9的和。

应当理解，本文在描述一个、两个或更多个中，“更多个”应当是指大于2，例如大于等于3的整数，例如3、4、5、6、7、8、9或10。

取代基中与化学键一起组合使用的“—*”表示连接位点。

术语“卤素”包括F、Cl、Br或I。

术语“C_1-12烷基”应理解为表示具有1～12个碳原子的直链或支链饱和一价烃基，优选为C_1-6烷基。“C_1-6烷基”应理解为优选表示具有1、2、3、4、5、或6个碳原子的直链或支链饱和一价烃基。所述烷基是例如甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、异戊基、2-甲基丁基、1-甲基丁基、1-乙基丙基、1,2-二甲基丙基、新戊基、1,1-二甲基丙基、4-甲基戊基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、2-乙基丁基、1-乙基丁基、3,3-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,1-二甲基丁基、2,3-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基或1,2-二甲基丁基等或它们的异构体。特别地，所述基团具有1、2或3个碳原子(“C_1-3烷基”)，例如甲基、乙基、正丙基或异丙基。

术语“C_6-20芳基”应理解为表示具有6～20个碳原子的一价芳香性或部分芳香性的单环、双环或三环烃环，优选“C_6-14芳基”。术语“C_6-14芳基”应理解为优选表示具有6、7、8、9、10、11、12、13、14个碳原子的一价芳香性或部分芳香性的单环、双环或三环烃环(“C_6-14芳基”)，特别是具有6个碳原子的环(“C₆芳基”)，例如苯基；或联苯基，或者是具有9个碳原子的环(“C₉芳基”)，例如茚满基或茚基，或者是具有10个碳原子的环(“C₁₀芳基”)，例如四氢化萘基、二氢萘基或萘基，或者是具有13个碳原子的环(“C₁₃芳基”)，例如芴基，或者是具有14个碳原子的环(“C₁₄芳基”)，例如蒽基。当所述芳基被取代时，其可以为单取代或者多取代。并且，对其取代位点没有限制，例如可以为邻位、对位或间位取代。

“5-20元杂芳基”应理解为包括这样的一价单环、双环或三环芳族环系：其具有5、6、7、8、9、10、11、12、13……或20个环原子，特别是5或6或9或10个碳原子，且其包含1-5个，优选1-3各独立选自N、O和S的杂原子并且，另外在每一种情况下可为苯并稠合的。特别地，杂芳基选自噻吩基、呋喃基、吡咯基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、异噁唑基、异噻唑基、噁二唑基、三唑基、噻二唑基、噻-4H-吡唑基等以及它们的苯并衍生物，例如苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并噁唑基、苯并异噁唑基、苯并咪唑基、苯并三唑基、吲唑基、吲哚基、异吲哚基等；或吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基等，以及它们的苯并衍生物，例如喹啉基、喹唑啉基、异喹啉基等；或吖辛因基、吲嗪基、嘌呤基等以及它们的苯并衍生物；或噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、萘啶基、蝶啶基、咔唑基、吖啶基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噁嗪基等。当所述5-10元杂芳基被取代时，其可以为单取代或者多取代。并且，对其取代位点没有限制，例如可以为杂芳基环上与碳原子相连的氢被取代，或者杂芳基环上与杂原子相连的氢被取代。

除非另有说明，杂芳基或亚杂芳基包括其所有可能的异构形式，例如其位置异构体。因此，对于一些说明性的非限制性实例，可以包括在其1-、2-、3-、4-、5-、6-、7-、8-、9-、10-位等(如果存在)中的一个、两个或更多个位置上取代或与其他基团键合的形式，包括吡啶-2-基、亚吡啶-2-基、吡啶-3-基、亚吡啶-3-基、吡啶-4-基和亚吡啶-4-基；噻吩基或亚噻吩基包括噻吩-2-基、亚噻吩-2-基、噻吩-3-基和亚噻吩-3-基；吡唑-1-基、吡唑-3-基、吡唑-4-基、吡唑-5-基。

上述对术语的定义同样适用于含有该术语的其他术语。例如，上述对术语“C_1-12烷基”的定义同样适用于含有“C_1-12烷基”的其他术语，如术语“C_1-12烷氧基”、“-COC_1-12烷基”或“卤代C_1-12烷基”等等。

术语“前药化合物”，表示在体内释放根据式I的活性母体药物的共价键合的化合物。这样的前药通常是其中一个以上的适当基团已被修饰，使得在给药至人或哺乳动物受试者后该修饰可能被逆转的本发明化合物。通常通过这类受试者中天然存在的酶来进行逆转，尽管可能将第二药剂与这种前药一起给药以便在体内进行逆转。这类修饰的实例包括上文所述的药学上可接受的酯，其中可以由酯酶等进行这种逆转。

具体实施方式

下文将结合具体实施例对本发明的技术方案做更进一步的详细说明。应当理解，下列实施例仅为示例性地说明和解释本发明，而不应被解释为对本发明保护范围的限制。凡基于本发明上述内容所实现的技术均涵盖在本发明旨在保护的范围内。

除非另有说明，以下实施例中使用的原料和试剂均为市售商品，或者可以通过已知方法制备。

实施例1

第一步：

将水(98g，9.44mol)小心加入到浓硫酸(1.087kg，11.007mol)中，再加入化合物1a(250g，1.274mol)，控制内温不超过40℃。往上述混合物中滴加入异丙醇(110g，1.835mol)，控制内温40～45℃，滴加完后在50℃搅拌反应过夜。将反应液冷却至室温，然后缓慢倒入到冰水(1kg)中，在40℃下搅拌1h。将混合物过滤，滤饼用水洗涤后溶于乙酸乙酯(250g)，加热回流1h。控制内温在65～70℃下加入正己烷(1L)，继续搅拌0.5h，然后冷却至0℃，继续搅拌1h。将混合物过滤，滤饼用正己烷洗涤，在40℃下干燥过夜得到化合物1b。

第二步：

将化合物1b(150g，0.669mol)溶于四氢呋喃(1L)，在氮气保护下分批加入硼氢化钠(39.5g，1.037mol)，控制内温不超过25℃。将碘(76.4g，0.301mol)溶于四氢呋喃(340mL)，缓慢滴加入上述混合物中，控制内温在35℃。滴完后，将反应混合物继续在35℃下搅拌反应过夜。将反应液冷却至室温，倒入水(900mL)中，然后在室温下搅拌1h，过滤。滤液浓缩除去有机溶剂，然后加入到亚硫酸氢钠溶液(9g亚硫酸氢钠溶于900mL水中)中，室温下搅拌0.5h，过滤。滤饼用水洗涤，在40℃下干燥过夜得到化合物1c。

第三步：

将化合物1c(5g，23.8mmol)溶于四氢呋喃(50mL)，然后在0℃下加入N-氯代丁二酰亚胺(2.85g，21.3mmol)的四氢呋喃(50mL)溶液，继续在室温下搅拌反应2h。将反应混合物用乙酸乙酯(100mL)稀释，用水(100mL)和饱和食盐水(100mL)洗涤。分出有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤。滤液浓缩，残余物经硅胶柱层析色谱(石油醚：乙酸乙酯＝3：1)纯化得到化合物1d。

第四步：

将化合物1d(5.2g，21.3mmol)分批加入到浓盐酸(60mL)和正己烷(50mL)的混合液中，然后在55℃下搅拌反应4h。冷却到室温后，将反应液倒入水(100mL)中，经硅藻土过滤。滤液分出有机相，分别用饱和食盐水(200mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(200mL)和水(200mL)洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤。滤液浓缩后得到化合物1e。

第五步：

将化合物1e(3.2g，12.2mmol)加入到亚磷酸三乙酯(30mL)中，在氮气保护下加热到160℃搅拌反应5h。冷却到室温后，浓缩得到粗品化合物1f。

第六步：

将化合物1f(4.5g，粗品)，苯甲醛(1.2g，11.3mol)和叔丁醇钾(1.6g，14.3mol)加入到四氢呋喃(50mL)中，在氮气保护下加热到50℃搅拌反应2h。冷却到室温后，用乙酸乙酯(50mL)稀释，然后用水(50mL)和饱和食盐水(50mL)洗涤。有机相分离后，用无水硫酸钠干燥，过滤。滤液浓缩，残余物经硅胶柱层析(V_{石油醚：乙酸乙酯}＝10：1)纯化得到化合物1g。

第七步：

将化合物1g(1.3g，4.1mmol)和吡啶盐酸盐(3g)混合，在氮气保护下加热到180℃，搅拌反应3h。冷却到室温后，用乙酸乙酯(50mL)稀释，然后用水(50mL)和饱和食盐水(50mL)洗涤。有机相分离后，用无水硫酸钠干燥，过滤。滤液浓缩，残余物经硅胶柱层析色谱(V_{石油醚：乙酸乙酯}＝3：1)纯化得到化合物1。LCMS(ESI,m/z):289.05[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃,ppm):δ7.54-7.51(m,2H),7.39-7.34(m,2H),7.31-7.25(m,2H),7.01-6.96(m,1H),6.68(s,1H),4.82(s,1H),4.64(s,1H),3.53-3.48(m,1H),1.37(d,J＝6.8Hz,6H)。

实施例2

在氮气保护下将化合物2a(3.80kg)和吡啶盐酸盐(11.15kg)加入到100L玻璃反应釜中，搅拌下将反应液升温至165～175℃至溶解，保温反应5h。反应完成后，将反应液降温至80～90℃后倒入稀盐酸(由19.00kg水和0.94kg浓盐酸混合所得)中搅拌，加入甲基叔丁基醚(14.05kg)，搅拌15～20min，静置分层，保留有机相和水相。有机相中加入稀盐酸(由15.20kg水和0.94kg浓盐酸配置)，搅拌15～20min，静置分层，保留有机相和水相。将两次水相合并后加入甲基叔丁基醚(5.63kg)，搅拌15～20min，静置分层，保留有机相。将两次有机相合并，加入水(15.20kg)，搅拌15～20min，静置分层。分离有机相后加入活性炭(0.038kg)，室温搅拌1h，过滤，滤液在40～50℃减压浓缩。

向浓缩残余物中加入甲基叔丁基醚(2.80kg)，升温至35～45℃搅拌溶清，滴加正庚烷(10.40kg)，控温30～45℃，滴毕保温35～45℃继续搅拌0.5h。降温至0～10℃，保温搅拌1h，过滤，滤饼用预冷的混合溶剂(由0.60kg甲基叔丁基醚和2.10kg正庚烷混合所得)淋洗。收集滤饼在40～50℃下真空干燥46h，得化合物2b。将滤液进行浓缩，往残余物中加入甲基叔丁基醚(500mL)，搅拌3小时。过滤，收集滤液，将滤液浓缩得到棕黑色油状物。将上述油状物经硅胶柱层析色谱(V_{石油醚：乙酸乙酯}＝40：1)纯化，再经硅胶柱层析色谱(V_{石油醚：乙酸乙酯}＝90：1～70：1)二次纯化，得红褐色固体。往此固体中加入正庚烷(10mL)和石油醚(10mL)的混合溶剂，搅拌1小时，过滤。滤饼再用制备液相色谱(pre-HPLC)纯化得到化合物2。MS(ESI,m/z):267.14[M-H]-。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃,ppm):δ7.38(d,J＝7.4Hz,2H),7.26(t,J＝7.7Hz,2H),7.17-7.15(m,2H),6.75(d,J＝16Hz,1H),6.49(s,1H),4.74(s,1H),4.68(s,1H),3.39(sept,J＝7.1Hz,1H),2.13(s,3H),1.30(d,J＝7.2Hz,6H)。

实施例3

第一步：

将化合物1c(10.5g，50mmol)溶于乙腈(120mL)，在0℃下分批加入1-氯甲基-4-氟-1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷二(四氟硼酸)盐(21.2g，60mmol)，然后在室温下搅拌反应2h。将反应混合物用乙酸乙酯(100mL)稀释，分别用水(100mL)和饱和食盐水(100mL)洗涤。分出有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤。滤液浓缩，残余物经硅胶柱层析色谱(V_{石油醚：乙酸乙酯}＝3：1)纯化得到化合物3a。

第二步：

将化合物3a(6g，26.3mmol)分批加入到浓盐酸(60mL)和正己烷(50mL)的混合液中，然后在55℃下搅拌反应4h。冷却到室温后，将反应液倒入水(100mL)中，经硅藻土过滤。滤液分出有机相，分别用饱和食盐水(200mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(200mL)和水(200mL)洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤。滤液浓缩后得到化合物3b。

第三步：

将化合物3b(5.6g，22.7mmol)加入到亚磷酸三乙酯(50mL)中，在氮气保护下加热到160℃搅拌反应5h。冷却到室温后，浓缩得到化合物3c。

第四步：

将化合物3c(2.1g，6mmol)，苯甲醛(0.7g，6.6mol)和叔丁醇钾(0.874g，7.8mmol)加入到四氢呋喃(40mL)中，在氮气保护下加热到50℃搅拌反应2h。冷却到室温后，用乙酸乙酯(50mL)稀释，然后用水(50mL)和饱和食盐水(50mL)洗涤。有机相分离后，用无水硫酸钠干燥，过滤。滤液浓缩，残余物经硅胶柱层析(V_{石油醚：乙酸乙酯}＝10：1)纯化得到化合物3d。

第五步：

将化合物3d(0.8g，2.7mmol)和吡啶盐酸盐(2.5g)混合，在氮气保护下加热到180℃，搅拌反应3h。冷却到室温后，用乙酸乙酯(50mL)稀释，然后用水(50mL)和饱和食盐水(50mL)洗涤。有机相分离后，用无水硫酸钠干燥，过滤。滤液浓缩，残余物经硅胶柱层析色谱(V_{石油醚：乙酸乙酯}＝3：1)纯化得到化合物3。LCMS(ESI,m/z):273.1[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃,ppm):δ7.52-7.49(m,2H),7.38-7.34(m,2H),7.29-7.25(m,1H),7.16-7.03(m,2H),6.49(d,J＝6.4Hz,1H),5.22(d,J＝7.2Hz,1H),4.64(s,1H),3.50-3.42(m,1H),1.37(d,J＝7.2Hz,6H)；¹⁹F NMR(400MHz,CDCl₃,ppm):δ-154.66(1F)。

实施例4

第一步：

将化合物1c(10g，47.6mmol)溶于四氢呋喃(100mL)中，然后在室温下滴加入N-溴代丁二酰亚胺(7.62g，42.8mmol)的四氢呋喃(30mL)溶液，继续在室温下搅拌反应3h。将反应混合物用乙酸乙酯(100mL)稀释，分别用水(50mL)和饱和食盐水(50mL)洗涤。分出有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤。滤液浓缩，残余物经硅胶柱层析色谱(石油醚：乙酸乙酯＝10：1)纯化得到化合物4a。

第二步：

将化合物4a(17g，59mmol)分批加入到浓盐酸(220mL)和正己烷(120mL)的混合液中，然后在55℃下搅拌反应4h。冷却到室温后，将反应液倒入水(100mL)中，经硅藻土过滤。滤液分出有机相，分别用饱和食盐水(200mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(200mL)和水(200mL)洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤。滤液浓缩后得到化合物4b。

第三步：

将化合物4b(33.58g，109mmol)加入到亚磷酸三乙酯(167.75g)中，在氮气保护下加热到160℃搅拌反应5h。冷却到室温后，将反应混合物浓缩。往残余物中加入正己烷(70mL)，在0℃下搅拌1h，过滤。滤饼用冷的正己烷洗涤，室温干燥过夜得到化合物4c。

第四步：

将化合物4c(12.24g，30mmol)，苯甲醛(3.5g，33mmol)和叔丁醇钾(4.4g，39mmol)加入到四氢呋喃(150mL)中，加热到35℃搅拌反应3h。冷却到室温后，用乙酸乙酯(150mL)和稀盐酸(150mL，1M)稀释。分离出有机相，用饱和食盐水(150mL)洗涤后，用无水硫酸钠干燥，过滤。滤液浓缩，残余物经硅胶柱层析(V_{石油醚：乙酸乙酯}＝10：1)纯化得到化合物4d。

第五步：

将化合物4d(1.08g，3mmol)溶于二氯甲烷(20mL)中，在氮气保护下在0℃下滴加入三溴化硼(7.2mL，7.2mmol，1M的二氯甲烷溶液)，然后在室温下搅拌反应3h。用水(50mL)淬灭，有机相分离后用水(50mL)和饱和食盐水(50mL)洗涤。再用无水硫酸钠干燥，过滤。滤液浓缩，残余物经硅胶柱层析色谱(V_{石油醚：乙酸乙酯}＝5：1)纯化得到化合物4。LCMS(ESI,m/z):333.08[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃,ppm):δ7.54-7.51(m,2H),7.39-7.34(m,2H),7.32-7.25(m,2H),6.97-6.92(m,1H),6.69(s,1H),5.80(s,1H),4.85(s,1H),3.57-3.49(m,1H),1.36(d,J＝7.2Hz,6H).

实施例5

第一步：

将化合物3c(1g，3mmol)，对氟苯甲醛(409mg，3.3mmol)和叔丁醇钾(437mg，3.9mmol)加入到四氢呋喃(20mL)中，氮气保护下在室温搅拌反应1h。将反应混合物用乙酸乙酯(50mL)稀释，分别用水(50mL)和饱和食盐水(50mL)洗涤。分离出有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤。滤液浓缩，残余物经硅胶柱层析(V_{石油醚：乙酸乙酯}＝10：1)纯化得到化合物5a。

第二步：

将化合物5a(730mg，2.3mmol)和吡啶盐酸盐(2.5g)在氮气保护下加热到180℃搅拌反应4h。冷却后用乙酸乙酯(50mL)稀释，分别用水(50mL)和饱和食盐水(50mL)洗涤。有机相再用无水硫酸钠干燥，过滤。滤液浓缩，残余物经硅胶柱层析色谱(V_{石油醚：乙酸乙酯}＝4：1)纯化得到化合物5。LCMS(ESI,m/z):291.74[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆,ppm):δ9.09(d,J＝2.8Hz,1H),9.05(s,1H),7.67-7.62(m,2H),7.22-7.17(m,2H),7.14-6.99(m,2H),6.51(d,J＝6.0Hz,1H),3.49-3.41(m,1H),1.27(d,J＝7.2Hz,6H)；¹⁹F NMR(400MHz,DMSO-d₆,ppm):δ-114.09(1F),-150.87(1F).

实施例6

第一步：

将化合物3c(800mg，2.6mmol)，邻氟苯甲醛(400mg，3.2mmol)和叔丁醇钾(400mg，3.6mmol)加入到四氢呋喃(30mL)中，氮气保护下在室温搅拌反应1h。将反应混合物用乙酸乙酯(50mL)稀释，分别用水(50mL)和饱和食盐水(50mL)洗涤。分离出有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤。滤液浓缩，残余物经硅胶柱层析(V_{石油醚：乙酸乙酯}＝10：1)纯化得到化合物6a。

第二步：

将化合物6a(500mg，1.6mmol)和吡啶盐酸盐(5g)在氮气保护下加热到180℃搅拌反应4h。冷却后用乙酸乙酯(50mL)稀释，分别用水(50mL)和饱和食盐水(50mL)洗涤。有机相再用无水硫酸钠干燥，过滤。滤液浓缩，残余物经硅胶柱层析色谱(V_{石油醚：乙酸乙酯}＝4：1)纯化得到化合物6。LCMS(ESI,m/z):291.26[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆,ppm):δ9.15(d,J＝2.4Hz,1H),9.09(s,1H),7.83-7.78(m,1H),7.37-7.31(m,1H),7.28-7.21(m,3H),7.14-7.09(m,1H),6.54(d,J＝6.0Hz,1H),3.49-3.41(m,1H),1.25(d,J＝7.2Hz,6H)；¹⁹F NMR(400MHz,DMSO-d₆,ppm):δ-118.95(1F),-150.76(1F).

实施例7

第一步：

将化合物3c(1g，3mmol)，3-氟吡啶-2-甲醛(413mg，3.3mmol)和叔丁醇钾(437mg，3.9mmol)加入到四氢呋喃(20mL)中，氮气保护下在室温搅拌反应1h。将反应混合物用乙酸乙酯(50mL)稀释，分别用水(50mL)和饱和食盐水(50mL)洗涤。分离出有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤。滤液浓缩，残余物经硅胶柱层析(V_{石油醚：乙酸乙酯}＝5：1)纯化得到化合物7a。

第二步：

将化合物7a(100mg，0.31mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，在氮气保护下在0℃下滴加入三溴化硼(1.3mL，1.3mmol，1M的二氯甲烷溶液)，然后在室温下搅拌反应0.5h。用饱和碳酸氢钠溶液(50mL)淬灭，用二氯甲烷(50mL)稀释。有机相分离后用饱和食盐水(50mL)洗涤，再用无水硫酸钠干燥，过滤。滤液浓缩，残余物经硅胶柱层析色谱(V_{石油醚：乙酸乙酯}＝3：1)纯化得到化合物7。LCMS(ESI,m/z):292.42[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆,ppm):δ9.23(s,1H),9.15(s,1H),8.48-8.45(m,1H),7.79-7.71(m,2H),7.41-7.36(m,1H),7.26-7.19(m,1H),6.60(d,J＝5.2Hz,1H),3.49-3.42(m,1H),1.26(d,J＝6.4Hz,6H)；¹⁹F NMR(400MHz,DMSO-d₆,ppm):δ-127.60(1F),-150.31(1F).

实施例8

第一步：

将化合物3c(1g，3mmol)，3-氯吡啶-2-甲醛(465mg，3.3mmol)和叔丁醇钾(437mg，3.9mmol)加入到四氢呋喃(20mL)中，氮气保护下在室温搅拌反应1h。将反应混合物用乙酸乙酯(50mL)稀释，分别用水(50mL)和饱和食盐水(50mL)洗涤。分离出有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤。滤液浓缩，残余物经硅胶柱层析(V_{石油醚：乙酸乙酯}＝5：1)纯化得到化合物8a。

第二步：

将化合物8a(180mg，0.54mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，在氮气保护下在0℃下滴加入三溴化硼(2.2mL，2.2mmol，1M的二氯甲烷溶液)，然后在室温下搅拌反应0.5h。用饱和碳酸氢钠溶液(50mL)淬灭，用二氯甲烷(50mL)稀释。有机相分离后用饱和食盐水(50mL)洗涤，再用无水硫酸钠干燥，过滤。滤液浓缩，残余物经硅胶柱层析色谱(V_{石油醚：乙酸乙酯}＝3：1)纯化得到化合物8。LCMS(ESI,m/z):308.28[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆,ppm):δ9.25(d,J＝2.4Hz,1H),9.18(s,1H),8.56(dd,J＝4.4Hz,1.2Hz,1H),7.94(dd,J＝8.0Hz,1.2Hz,1H),7.84-7.80(m,1H),7.48-7.43(m,1H),7.33(dd,J＝8.0Hz,4.4Hz,1H),6.61(d,J＝6.0Hz,1H),3.50-3.42(m,1H),1.26(d,J＝7.2Hz,6H)；¹⁹F NMR(400MHz,DMSO-d₆,ppm):δ-149.99(1F).

实施例9

第一步：

将化合物3c(1g，3mmol)，5-氟吡啶-2-甲醛(413mg，3.3mmol)和叔丁醇钾(437mg，3.9mmol)加入到四氢呋喃(20mL)中，氮气保护下在室温搅拌反应1h。将反应混合物用乙酸乙酯(50mL)稀释，分别用水(50mL)和饱和食盐水(50mL)洗涤。分离出有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤。滤液浓缩，残余物经硅胶柱层析(V_{石油醚：乙酸乙酯}＝5：1)纯化得到化合物9a。

第二步：

将化合物9a(180mg，0.56mmol)溶于二氯甲烷(10mL)，在氮气保护下在0℃下滴加入三溴化硼(2.3mL，2.3mmol，1M的二氯甲烷溶液)，然后在室温下搅拌反应0.5h。用饱和碳酸氢钠溶液(50mL)淬灭，用二氯甲烷(50mL)稀释。有机相分离后用饱和食盐水(50mL)洗涤，再用无水硫酸钠干燥，过滤。滤液浓缩，残余物经硅胶柱层析色谱(V_{石油醚：乙酸乙酯}＝3：1)纯化得到化合物9。LCMS(ESI,m/z):292.34[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆,ppm):δ9.17(d,J＝2.4Hz,1H),9.12(s,1H),8.56(d,J＝2.8Hz,1H),7.75-7.64(m,2H),7.58-7.53(m,1H),7.11-7.06(m,1H),6.54(d,J＝6.0Hz,1H),3.49-3.41(m,1H),1.26(d,J＝7.2Hz,6H)；¹⁹F NMR(400MHz,DMSO-d₆,ppm):δ-128.86(1F),-150.44(1F).

实施例10

第一步：

将化合物3c(800mg，2.6mmol)，5-氯吡啶-2-甲醛(400mg，2.8mmol)和叔丁醇钾(437mg，3.9mmol)加入到四氢呋喃(30mL)中，氮气保护下在室温搅拌反应1h。将反应混合物用乙酸乙酯(50mL)稀释，分别用水(50mL)和饱和食盐水(50mL)洗涤。分离出有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤。滤液浓缩，残余物经硅胶柱层析(V_{石油醚：乙酸乙酯}＝5：1)纯化得到化合物10a。

第二步：

将化合物10a(80mg，0.24mmol)溶于二氯甲烷(10mL)，在氮气保护下在0℃下滴加入三溴化硼(2.3mL，2.3mmol，1M的二氯甲烷溶液)，然后在室温下搅拌反应0.5h。用饱和碳酸氢钠溶液(50mL)淬灭，用二氯甲烷(50mL)稀释。有机相分离后用饱和食盐水(50mL)洗涤，再用无水硫酸钠干燥，过滤。滤液浓缩，残余物经硅胶柱层析色谱(V_{石油醚：乙酸乙酯}＝3：1)纯化得到化合物10。LCMS(ESI,m/z):308.05[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆,ppm):δ9.19(d,J＝2.0Hz,1H),9.14(s,1H),8.60(d,J＝2.4Hz,1H),7.91(dd,J＝8.4Hz,2.4Hz,1H),7.66-7.60(m,2H),7.10-7.06(m,1H),6.56(d,J＝5.6Hz,1H),3.79-3.39(m,1H),1.25(d,J＝7.2Hz,6H)；¹⁹F NMR(400MHz,DMSO-d₆,ppm):δ-150.19(1F).

测试例1荧光素酶报告基因测试实验

本测试例进行荧光素酶报告基因测试实验以测试本发明化合物对AHR蛋白的激动活性效果。

供试细胞

表达AHR和荧光素酶的人肝癌细胞HepG2-Lucia购自InvivoGen，货号hpgl-ahr；

主要仪器

生物安全柜，型号307，ThermoFisher公司；

CO₂培养箱，型号CLM-240B-8-CN，ESCO公司；

细胞计数仪，型号EVE-MC2，NanoEnTeK公司；

ECHO(纳升级声波移液系统)，型号655，LabCyte公司；

微孔板离心机，型号PlatePro 3200，Monad公司；

多功能酶标仪，型号PHERAstar FSX，BMG LRBTECH公司。

主要试剂

请链霉素，Gibco公司，货号15140-122；

EMEM培养基，ATCC公司，货号30-2003；

胎牛血清，Ausgenex，货号FBS500-S；

NEAA培养基，Gibco公司，货号11140-050；

磷酸盐缓冲液，Gibco公司，货号14190250；

DMSO(二甲亚砜)，Solarbio公司，货号D8371；

FICZ(6-甲酰基吲哚并[3,2-B]咔唑)，MCE公司，货号HY-12451；

Zeocin(博来霉素)，InvivoGen公司，货号ant-zn-1；

QUANTI-Luc Gold，InvivoGen公司，货号rep-qlcg5。

实验步骤

1.HepG2-Lucia AHR细胞在含有10％灭活胎牛血清、1×NEAA、青链霉素及100μg/ml Zeocin(博莱霉素)的EMEM培养基中培养。培养温度为37℃，二氧化碳浓度为5％。

2.细胞生长至汇合度约80％，消化细胞，离心重悬计数。接种细胞至384孔板中，每孔40μL。

3.使用ECHO加入不同浓度的待测化合物，每孔40nL。

4.将加入化合物的384孔板在培养箱中继续培养24h。

5.取上清，加入QUANTI-Luc Gold检测试剂，用多功能酶标仪读取发光信号值。

试验结果

本发明化合物及本维莫德对AHR蛋白的活性EC₅₀的数据汇总于如下表1：

表1：化合物对AHR激活的EC₅₀

上述结果表明，本发明实施例化合物对AHR蛋白有较好的激活活性，且至少化合物5的活性显著优于本维莫德。

测试例2光照稳定性实验

本测试例测试对比本发明化合物及本维莫德在光照条件下的稳定性。

主要仪器

稳定性箱，型号ICH-110L，美墨尔特公司；

高效液相色谱仪(HPLC)，型号1260，安捷伦公司。

分析方法

检测波长：220nM、254nM

色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C8 4.6×250mm,5μm

流动相A：水

流动相B：乙腈

流速：1.0mL/min

柱温：35℃

进样体积：10μL

实验步骤

1.称取待测化合物置于稳定性箱中；

2.打开光源，可见光5000±500lx，紫外光250μW/cm²；

3.分别于0h、8h、24h和72h取样，溶于体积分数50％乙腈水溶液中；

4.用HPLC检测，含量采用面积归一化法。

试验结果

本发明化合物及本维莫德在光照条件下的稳定性数据汇总于如下表2：

表2：化合物在光照条件下的稳定性

上述结果表明，本发明实施例化合物在光照条件下稳定。具体地，化合物3在8，24和72h时HPLC测试的含量明显高于本维莫德，表明本发明化合物的光稳定性相对于本维莫德有明显改善。

Claims

1.下式I所示的化合物、其立体异构体、药学上可接受的盐或前药：

2.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，Ar选自无取代，或任选被一个、两个或更多个Rs取代的如下基团：苯基、吡啶-2-基、吡啶-3基、吡啶-4-基、噻吩基；

3.根据权利要求1或2所述的化合物，其特征在于，4-氟代苯基、2-氟代苯基、

R₁选自F、Cl、Br、甲基、氰基、乙酰基、

4.根据权利要求1-3任一项所述的化合物，其特征在于，式I所示的化合物选自如下化合物：

5.权利要求1-4任一项所述化合物、其立体异构体或药学上可接受的盐的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)当R₁为卤素时，式I化合物采用如下方法制备：

2)当R₁为甲基时，式I化合物采用如下方法制备：

Ar和R₁具有权利要求1-4任一项所述定义。

6.一种药物组合物，其包含治疗有效量的权利要求1-4任一项所述式I所示的化合物、其立体异构体、药学上可接受的盐或前药。

7.根据权利要求6所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物进一步还包括一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂。

8.根据权利要求6或7所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物为芳烃受体(AHR)调节剂。

9.根据权利要求6-8任一项所述的药物组合物，其特征在于，所述芳烃受体(AHR)调节剂用于缓解和/或治疗如下疾病或病症：癌症，如白血病、前列腺癌和肠癌；眼科相关疾病，如葡萄膜炎、年龄相关性黄斑变性和干眼症；自身免疫疾病，如类风湿性关节炎、多发性硬化、系统性红斑狼疮、炎性肠病、1型糖尿病、白癜风、特应性皮炎和银屑病，以及其他具有免疫学因素的病症或不适，如哮喘、变态反应、感染、骨质疏松、动脉粥样硬化、2型糖尿病、移植物抗宿主病和移植排异。

10.权利要求1-4任一项所述式I所示的化合物、其立体异构体、药学上可接受的盐或前药在制备芳烃受体(AHR)调节剂中的用途。