CN117776543B - 一种多孔细胞基板载玻片及其制备工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及医学检测技术领域，具体为一种多孔细胞基板载玻片及其制备工艺。本发明将丙烯酸树脂、水性聚氨酯、有机溶剂、着色剂、分散剂、固化剂、消泡剂、疏水试剂和增粘剂进行混合，丝网印刷在载玻片表面孔外部分形成疏水区域；将氧化壳聚糖，与水性聚氨酯共混，在戊二醛的作用下，与壳聚糖双胍盐酸盐和壳聚糖改性二氧化硅交联反应，得到亲水涂料；对孔内区域采用等离子处理或涂覆亲水涂料或采用3‑氨基丙基三乙氧基硅烷浸泡处理。在执行检测任务时，超疏水材料可以抑制检测试剂的外溢，使其能够同时进行多个样本的高通量检测工作；而孔内形成亲水表面，且细胞粘附性能好，防脱效果稳定。
Description
技术领域
本发明涉及医学检测技术领域，具体为一种多孔细胞基板载玻片及其制备工艺。
背景技术
载玻片是进行生物实验时放置材料的载体，巴氏染色、HE实验、免疫组织化学染色、原位杂交等均可利用其进行检测。其中，免疫荧光分析试验和液基细胞试验被广泛用于临床检测。
免疫荧光技术又称荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展最早的一种。在免疫荧光分析中，影响其性能的一个主要因素的是抗原抗体的固定。抗原抗体的固定方式、固定的数量、活性的大小等直接影响免疫荧光分析准确性、灵敏度等性能。目前常见的固定方式有吸附法，交联法等。吸附法是一种通过物理吸附作用将细胞与组织固定于玻片表面的方法。玻片表面经过处理或修饰后，抗原抗体由于分子间作用力直接固定于玻片表面。但是此种吸附法不适用于容易掉落的细胞或组织样本。交联法是采用双功能团试剂，在生物活性单元之间或生物活性单元与凝胶/聚合物之间交联形成网状结构而使生物活性单元固定化的方法。
液基细胞学技术是将脱落细胞保存在保存液中，在载玻片上涂抹薄薄一层细胞制成细胞涂片，经过染色后供医生进行阅片。在液基细胞制片过程中，载玻片通常作为脱落细胞黏附的基底。然而研究与临床试验结果表明，未经任何试剂处理的玻片黏附效果差，细胞易团聚。这使得镜检时细胞数量少，形态难以观察清晰而导致出现假阳性诊断结果。目前市场上的防脱载玻片有醛基基片、氨基基片、巯基片、异硫氰酸片、琼脂糖片等，但防脱效果不稳定且均只能实现单样本检测。单样品检测顾名思义一张载玻片上只能执行一个样本的检测，但目前临床医学中检测样本繁多，单通量载玻片效率低下。此外，在临床医学中，由于检测严谨性的需要，会对组织的不同结构水平进行同种检测，要求检测时间检测条件完全一致，传统意义上的载玻片已远远不能满足实际需求。
发明内容
本发明的目的在于提供一种多孔细胞基板载玻片及其制备工艺，以解决上述背景技术中提出的问题。
为了解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案：一种多孔细胞基板载玻片及其制备工艺，包括以下步骤：
步骤1：
将多孔载玻片浸泡在乙醇溶液中，超声10～15min，然后用氮气吹干后放在0.5～1mol/L的NaOH溶液中浸泡1～2h，用去离子水冲洗去除残留溶液，用氮气吹干后放在0.5～1mol/L的HCl溶液中浸泡1～2h，用去离子水冲洗去除残留溶液，用氮气吹干得到预处理多孔载玻片；
步骤2：
S21：将壳聚糖加入至过氧化氢溶液中，室温搅拌20～24h，用丙酮洗涤，离心、冷冻，得到氧化壳聚糖；
S22：将氧化壳聚糖加入至水性聚氨酯中，搅拌10～12h得到改性聚氨酯；
步骤3：
S31：取壳聚糖，溶于加入稀盐酸，在400～450W微波功率、40～50℃反应5～10min；加入双氰胺，调节体系pH至1～2，继续在90～100℃、400～450W微波功率、磁力搅拌下，通冷凝水，微波反应10～15min，乙醇析出白色絮状产物，过滤、烘干、研磨，得到壳聚糖双胍盐酸盐；
S32：取1～2份纳米二氧化硅加入到100份壳聚糖醋酸溶液中，搅拌加入戊二醛反应2～3h得到改性二氧化硅；
S33：将壳聚糖双胍盐酸盐、改性二氧化硅和改性聚氨酯混合，加入混合物总质量分数5％的戊二醛交联，在60～65℃下反应5～8h得到亲水涂料；
步骤4：
将丙烯酸树脂、水性聚氨酯、有机溶剂、着色剂、分散剂、固化剂、消泡剂、疏水试剂和增粘剂混合，得到疏水涂料；
步骤5：
将疏水涂料丝网印刷在预处理多孔载玻片孔外部区域，干燥形成厚度为30～50μm疏水涂层；将亲水聚氨酯涂覆在多孔载玻片孔内区域，干燥形成厚度为10～15μm的亲水涂层或对孔内区域进行等离子处理，等离子处理功率为200～250W，处理时间为20～30s；或进行孔内防脱处理，孔内防脱处理的方法为多孔细胞基板载玻片放置于无水乙醇中，浸泡1～5min，取出用蒸馏水漂洗、烘干后；将洗净的载玻片放入5％的3-氨基丙基三乙氧基硅烷丙酮溶液中，浸泡、取出，晾干。
进一步的，S21中，壳聚糖与过氧化氢溶液的质量比为(1～3)：50，过氧化氢溶液的质量分数为10％。
进一步的，S22中，改性聚氨酯中各组分含量，按重量百分数计，3～5％氧化壳聚糖、95～97％水性聚氨酯。
进一步的，S31中，n(壳聚糖氨基)：n(双氰胺)为1：(3～5)。
进一步的，S33中，按重量百分数计，2～3％壳聚糖双胍盐酸盐、1～2％改性二氧化硅，余料为改性聚氨酯。
进一步的，步骤4中，疏水涂料中，各组分含量，按重量份数计，50～80份丙烯酸树脂、15～30份水性聚氨酯、50～80份有机溶剂、10～15份着色剂、20～25份分散剂、1～10份固化剂、1～2份消泡剂、5～15份疏水试剂和4～10份增粘剂。
进一步的，步骤4中，有机溶剂为异佛尔酮、环己酮中的至少一种；着色剂为彩色颜料；分散剂为三聚磷酸钠、六偏磷酸钠、焦磷酸钠中的任一种；固化剂为二乙二醇二丙烯酸醋、丁二醇二丙烯酸醋、三氢甲基丙烷三丙烯酸醋中的任一种；消泡剂为聚二甲基硅氧烷；疏水试剂为六甲基二硅氮烷；增粘剂为阿拉伯胶、明胶、羟甲基纤维素中的任一种。
进一步的，步骤5中，疏水涂层厚度为30～50μm；亲水涂层厚度为10～15μm。
与现有技术相比，本发明所达到的有益效果是：本发明提供了一种孔外疏水、孔内亲水的多孔细胞基板载玻片，通过在孔外、孔内涂覆不同的疏水和亲水材料，改变载玻片的亲/疏水性能。
在制备疏水涂层时，将丙烯酸树脂、水性聚氨酯、有机溶剂、着色剂、分散剂、固化剂、消泡剂、疏水试剂和增粘剂进行混合后，丝网印刷在载玻片表面孔外部分形成疏水区域；疏水区域可以使得载玻片在同时进行多个样本的高通量检测工作时，抑制检测试剂的外溢。
在制备亲水涂层时，经过过氧化氢氧化的壳聚糖1,4-β-D-糖苷键和氢键断裂，变成小分子的氧化壳聚糖，与水性聚氨酯共混后，二者之间产生氢键作用，氧化壳聚糖被水性聚氨酯链段“限制”；在戊二醛的作用下，壳聚糖双胍盐酸盐和壳聚糖改性二氧化硅与氧化壳聚糖上的氨基交联反应。交联反应刚开始发生时，氧化壳聚糖和水性聚氨酯链段之间的氢键作用较强，因此壳聚糖双胍盐酸盐和二氧化硅被氧化壳聚糖“吸引”，从而实现二氧化硅在聚氨酯中的良好分散。二氧化硅的引入提高了涂料亲水，壳聚糖双胍盐酸盐对细胞具有良好的粘附作用，在实际应用中起到防止脱片的效果。
需要补充说明的是，必须将对氧化壳聚糖用量进行控制。氧化壳聚糖用量过低时，会被聚氨酯网络所“包裹”，从而无法与壳聚糖双胍盐酸盐、改性二氧化硅发生交联反应；而氧化壳聚糖用量过高，则会造成大量游离氧化壳聚糖发生团聚；当氧化壳聚糖的用量控制在改性聚氨酯总质量的3～5％时，聚氨酯乳液中出现少量团聚，其乳液粒径变大，从而提高更大的表面积，有利于二氧化硅在涂料中悬浮、分散，避免出现团聚、沉积的现象。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明中，所用材料及其来源：丙烯酸树脂来自佛山市上进诚展新材料科技有限公司，型号SGRW-3335；水性聚氨酯来自安徽达威华泰新材料科技有限公司，型号AH-1720D；有机溶剂为环己酮，来自阿拉丁试剂；着色剂为胭脂红，来自阔益生物科技，货号017；分散剂为焦磷酸钠，来自冠苏实业，货号GS-28；固化剂为丁二醇二丙烯酸醋，来自森菲达化工；消泡剂为聚二甲基硅氧烷，来自强力化工，型号QL-200；疏水试剂为六甲基二硅氮烷，来自华晨新材料，货号HC045；增粘剂为阿拉伯胶，来自万搏实力，货号7511622；多孔细胞基载玻片来自江苏汇达医疗器械有限公司，货号：HDAS016-9W。
实施例1：一种多孔细胞基板载玻片及其制备工艺，包括以下步骤：
步骤1：
将多孔载玻片浸泡在乙醇溶液中，超声10min，然后用氮气吹干后放在0.5mol/L的NaOH溶液中浸泡1h，用去离子水冲洗去除残留溶液，用氮气吹干后放在0.5mol/L的HCl溶液中浸泡1h，用去离子水冲洗去除残留溶液，用氮气吹干得到预处理多孔载玻片；
步骤2：
S21：将1.5g壳聚糖加入50g 10％过氧化氢溶液中，室温搅拌20h，用丙酮洗涤，离心、冷冻，得到氧化壳聚糖；
S22：按重量百分数计，将3％氧化壳聚糖加入至97％水性聚氨酯中，搅拌10h得到改性聚氨酯；
步骤3：
S31：取壳聚糖溶于加入0.8mol/L的稀盐酸，在400W微波功率、40℃反应5min；加入双氰胺，其中n(壳聚糖氨基)：n(双氰胺)为1：3，并用稀盐酸调节体系pH至1，继续在90℃、400W微波功率、磁力搅拌下，通冷凝水，微波反应10min，乙醇析出白色絮状产物，过滤、烘干、研磨，得到壳聚糖双胍盐酸盐；
S32：取1g纳米二氧化硅加入到100g壳聚糖醋酸溶液中，搅拌加入戊二醛反应3h得到改性二氧化硅；
S33：按重量百分数计，将3％壳聚糖双胍盐酸盐、1％改性二氧化硅和96％改性聚氨酯混合，加入混合物体系总质量5％的戊二醛交联，在60℃下反应5h得到亲水涂料；
步骤4：
将80g丙烯酸树脂、30g水性聚氨酯、50g有机溶剂、10g着色剂、23g分散剂、4g固化剂、2g消泡剂、5g疏水试剂和10g增粘剂混合，得到疏水涂料；
步骤5：
将疏水涂料丝网印刷在预处理多孔载玻片孔外部区域，干燥形成厚度为30μm疏水涂层；将亲水聚氨酯涂覆在多孔载玻片孔内区域，干燥形成厚度为10μm的亲水涂层。
实施例2：一种多孔细胞基板载玻片及其制备工艺，包括以下步骤：
步骤1：
将多孔载玻片浸泡在乙醇溶液中，超声13min，然后用氮气吹干后放在0.8mol/L的NaOH溶液中浸泡1.5h，用去离子水冲洗去除残留溶液，用氮气吹干后放在0.8mol/L的HCl溶液中浸泡1.5h，用去离子水冲洗去除残留溶液，用氮气吹干得到预处理多孔载玻片；
步骤2：
S21：将1.5g壳聚糖加入50g 10％过氧化氢溶液中，室温搅拌22h，用丙酮洗涤，离心、冷冻，得到氧化壳聚糖；
S22：按重量百分数计，将3％氧化壳聚糖加入至97％水性聚氨酯中，搅拌11h得到改性聚氨酯；
步骤3：
S31：取壳聚糖溶于加入0.8mol/L的稀盐酸，在420W微波功率、45℃反应7min；加入双氰胺，其中n(壳聚糖氨基)：n(双氰胺)为1：3，并用稀盐酸调节体系pH至1.5，继续在95℃、430W微波功率、磁力搅拌下，通冷凝水，微波反应12min，乙醇析出白色絮状产物，过滤、烘干、研磨，得到壳聚糖双胍盐酸盐；
S32：取1g纳米二氧化硅加入到100g壳聚糖醋酸溶液中，搅拌加入戊二醛反应3h得到改性二氧化硅；
S33：按重量百分数计，将3％壳聚糖双胍盐酸盐、1％改性二氧化硅和96％改性聚氨酯混合，加入混合物体系总质量5％的戊二醛交联，在63℃下反应6h得到亲水涂料；
步骤4：
将80g丙烯酸树脂、30g水性聚氨酯、50g有机溶剂、10g着色剂、23g分散剂、4g固化剂、2g消泡剂、5g疏水试剂和10g增粘剂混合，得到疏水涂料；
步骤5：
将疏水涂料丝网印刷在预处理多孔载玻片孔外部区域，干燥形成厚度为30μm疏水涂层；将亲水聚氨酯涂覆在多孔载玻片孔内区域，干燥形成厚度为10μm的亲水涂层。
实施例3：一种多孔细胞基板载玻片及其制备工艺，包括以下步骤：
步骤1：
将多孔载玻片浸泡在乙醇溶液中，超声15min，然后用氮气吹干后放在1mol/L的NaOH溶液中浸泡2h，用去离子水冲洗去除残留溶液，用氮气吹干后放在1mol/L的HCl溶液中浸泡2h，用去离子水冲洗去除残留溶液，用氮气吹干得到预处理多孔载玻片；
步骤2：
S21：将1.5g壳聚糖加入50g 10％过氧化氢溶液中，室温搅拌24h，用丙酮洗涤，离心、冷冻，得到氧化壳聚糖；
S22：按重量百分数计，将3％氧化壳聚糖加入到97％水性聚氨酯中，搅拌12h得到改性聚氨酯；
步骤3：
S31：取壳聚糖溶于加入0.8mol/L的稀盐酸，在450W微波功率、50℃反应10min；加入双氰胺，其中n(壳聚糖氨基)：n(双氰胺)为1：3，并用稀盐酸调节体系pH至2，继续在100℃、450W微波功率、磁力搅拌下，通冷凝水，微波反应15min，乙醇析出白色絮状产物，过滤、烘干、研磨，得到壳聚糖双胍盐酸盐；
S32：取1g纳米二氧化硅加入到100g壳聚糖醋酸溶液中，搅拌加入戊二醛反应3h得到改性二氧化硅；
S33：按重量百分数计，将3％壳聚糖双胍盐酸盐、1％改性二氧化硅和96％改性聚氨酯混合，加入混合物体系总质量5％的戊二醛交联，在65℃下反应8h得到亲水涂料；
步骤4：
将80g丙烯酸树脂、30g水性聚氨酯、50g有机溶剂、10g着色剂、23g分散剂、4g固化剂、2g消泡剂、5g疏水试剂和10g增粘剂混合，得到疏水涂料；
步骤5：
将疏水涂料丝网印刷在预处理多孔载玻片孔外部区域，干燥形成厚度为30μm疏水涂层；将亲水聚氨酯涂覆在多孔载玻片孔内区域，干燥形成厚度为10μm的亲水涂层。
实施例4：一种多孔细胞基板载玻片及其制备工艺，包括以下步骤：
步骤1：
将多孔载玻片浸泡在乙醇溶液中，超声10min，然后用氮气吹干后放在0.5mol/L的NaOH溶液中浸泡1h，用去离子水冲洗去除残留溶液，用氮气吹干后放在0.5mol/L的HCl溶液中浸泡1h，用去离子水冲洗去除残留溶液，用氮气吹干得到预处理多孔载玻片；
步骤2：
S21：将1.5g壳聚糖加入50g 10％过氧化氢溶液中，室温搅拌20h，用丙酮洗涤，离心、冷冻，得到氧化壳聚糖；
S22：按重量百分数计，将3.5％氧化壳聚糖分散在去离子水中，加入96.5％水性聚氨酯中，搅拌10h得到改性聚氨酯；
步骤3：
S31：取壳聚糖溶于加入0.8mol/L的稀盐酸，在400W微波功率、40℃反应5min；加入双氰胺，其中n(壳聚糖氨基)：n(双氰胺)为1：3，并用稀盐酸调节体系pH至1，继续在90℃、400W微波功率、磁力搅拌下，通冷凝水，微波反应10min，乙醇析出白色絮状产物，过滤、烘干、研磨，得到壳聚糖双胍盐酸盐；
S32：取1g纳米二氧化硅加入到100g壳聚糖醋酸溶液中，搅拌加入戊二醛反应3h得到改性二氧化硅；
S33：按重量百分数计，将3％壳聚糖双胍盐酸盐、1％改性二氧化硅和96％改性聚氨酯混合，加入混合物体系总质量5％的戊二醛交联，在60℃下反应5h得到亲水涂料；
步骤4：
将80g丙烯酸树脂、30g水性聚氨酯、50g有机溶剂、10g着色剂、23g分散剂、4g固化剂、2g消泡剂、8g疏水试剂和10g增粘剂混合，得到疏水涂料；
步骤5：
将疏水涂料丝网印刷在预处理多孔载玻片孔外部区域，干燥形成厚度为30μm疏水涂层；将亲水聚氨酯涂覆在多孔载玻片孔内区域，干燥形成厚度为10μm的亲水涂层。
实施例5：一种多孔细胞基板载玻片及其制备工艺，包括以下步骤：
步骤1：
将多孔载玻片浸泡在乙醇溶液中，超声12min，然后用氮气吹干后放在0.85mol/L的NaOH溶液中浸泡1.5h，用去离子水冲洗去除残留溶液，用氮气吹干后放在0.9mol/L的HCl溶液中浸泡1.5h，用去离子水冲洗去除残留溶液，用氮气吹干得到预处理多孔载玻片；
步骤2：
S21：将1.5g壳聚糖加入50g 10％过氧化氢溶液中，室温搅拌21h，用丙酮洗涤，离心、冷冻，得到氧化壳聚糖；
S22：按重量百分数计，将4％氧化壳聚糖分散在去离子水中，加入96％水性聚氨酯中，搅拌11h得到改性聚氨酯；
步骤3：
S31：取壳聚糖溶于加入0.8mol/L的稀盐酸，在440W微波功率、45C反应9min；加入双氰胺，其中n(壳聚糖氨基)：n(双氰胺)为1：3，并用稀盐酸调节体系pH至2，继续在95℃、440W微波功率、磁力搅拌下，通冷凝水，微波反应13min，乙醇析出白色絮状产物，过滤、烘干、研磨，得到壳聚糖双胍盐酸盐；
S32：取1g纳米二氧化硅加入到100g壳聚糖醋酸溶液中，搅拌加入戊二醛反应3h得到改性二氧化硅；
S33：按重量百分数计，将3％壳聚糖双胍盐酸盐、1％改性二氧化硅和96％改性聚氨酯混合，加入混合物体系总质量5％的戊二醛交联，在65℃下反应7h得到亲水涂料；
步骤4：
将80g丙烯酸树脂、30g水性聚氨酯、50g有机溶剂、10g着色剂、23g分散剂、4g固化剂、2g消泡剂、10g疏水试剂和10g增粘剂混合，得到疏水涂料；
步骤5：
将疏水涂料丝网印刷在预处理多孔载玻片孔外部区域，干燥形成厚度为30μm疏水涂层；将亲水聚氨酯涂覆在多孔载玻片孔内区域，干燥形成厚度为10μm的亲水涂层。
实施例6：一种多孔细胞基板载玻片及其制备工艺，包括以下步骤：
步骤1：
将多孔载玻片浸泡在乙醇溶液中，超声15min，然后用氮气吹干后放在1mol/L的NaOH溶液中浸泡1h，用去离子水冲洗去除残留溶液，用氮气吹干后放在0.5mol/L的HCl溶液中浸泡2h，用去离子水冲洗去除残留溶液，用氮气吹干得到预处理多孔载玻片；
步骤2：
S21：将1.5g壳聚糖加入50g 10％过氧化氢溶液中，室温搅拌24h，用丙酮洗涤，离心、冷冻，得到氧化壳聚糖；
S22：按重量百分数计，将5％氧化壳聚糖分散在去离子水中，加入95％水性聚氨酯中，搅拌12h得到改性聚氨酯；
步骤3：
S31：取壳聚糖溶于加入0.8mol/L的稀盐酸，在450W微波功率、50℃反应10min；加入双氰胺，其中n(壳聚糖氨基)：n(双氰胺)为1：3，并用稀盐酸调节体系pH至2，继续在100℃、450W微波功率、磁力搅拌下，通冷凝水，微波反应15min，乙醇析出白色絮状产物，过滤、烘干、研磨，得到壳聚糖双胍盐酸盐；
S32：取1g纳米二氧化硅加入到100g壳聚糖醋酸溶液中，搅拌加入戊二醛反应3h得到改性二氧化硅；
S33：按重量百分数计，将3％壳聚糖双胍盐酸盐、1％改性二氧化硅和96％改性聚氨酯混合，加入混合物体系总质量5％的戊二醛交联，在65℃下反应8h得到亲水涂料；
步骤4：
将80g丙烯酸树脂、30g水性聚氨酯、50g有机溶剂、10g着色剂、23g分散剂、4g固化剂、2g消泡剂、15g疏水试剂和10g增粘剂混合，得到疏水涂料；
步骤5：
将疏水涂料丝网印刷在预处理多孔载玻片孔外部区域，干燥形成厚度为30μm疏水涂层；将亲水聚氨酯涂覆在多孔载玻片孔内区域，干燥形成厚度为10μm的亲水涂层。
实施例7：等离子处理对孔内区域进行亲水改性，其余参数与实施例1相同。
孔内区域进行等离子处理，等离子处理功率为200W，处理时间为20s。
实施例8：空内进行孔内防脱处理，其余参数与实施例1相同。
孔内防脱处理的方法为多孔细胞基板载玻片放置于无水乙醇中，浸泡1min，取出用蒸馏水漂洗、烘干后；将洗净的载玻片放入5％的3-氨基丙基三乙氧基硅烷丙酮溶液中，浸泡、取出，晾干。
对比例1：制备亲水涂料时，不加入壳聚糖双胍盐酸盐，其余参数与实施例1相同。
步骤1：
将多孔载玻片浸泡在乙醇溶液中，超声10min，然后用氮气吹干后放在0.5mol/L的NaOH溶液中浸泡1h，用去离子水冲洗去除残留溶液，用氮气吹干后放在0.5mol/L的HCl溶液中浸泡1h，用去离子水冲洗去除残留溶液，用氮气吹干得到预处理多孔载玻片；
步骤2：
S21：将1.5g壳聚糖加入50g 10％过氧化氢溶液中，室温搅拌20h，用丙酮洗涤，离心、冷冻，得到氧化壳聚糖；
S22：按重量百分数计，将3％氧化壳聚糖加入至97％水性聚氨酯中，搅拌10h得到改性聚氨酯；
步骤3：
S31：取1g纳米二氧化硅加入到100g壳聚糖醋酸溶液中，搅拌加入戊二醛反应3h得到改性二氧化硅；
S32：按重量百分数计，将1％改性二氧化硅和99％改性聚氨酯混合，加入混合物体系总质量5％的戊二醛交联，在60℃下反应5h得到亲水涂料；
步骤4：
将80g丙烯酸树脂、30g水性聚氨酯、50g有机溶剂、10g着色剂、23g分散剂、4g固化剂、2g消泡剂、5g疏水试剂和10g增粘剂混合，得到疏水涂料；
步骤5：
将疏水涂料丝网印刷在预处理多孔载玻片孔外部区域，干燥形成厚度为30μm疏水涂层；将亲水聚氨酯涂覆在多孔载玻片孔内区域，干燥形成厚度为10μm的亲水涂层。
对比例2：水性聚氨酯中不加入氧化壳聚糖，其余参数与实施例2相同。
步骤1：
将多孔载玻片浸泡在乙醇溶液中，超声13min，然后用氮气吹干后放在0.8mol/L的NaOH溶液中浸泡1.5h，用去离子水冲洗去除残留溶液，用氮气吹干后放在0.8mol/L的HCl溶液中浸泡1.5h，用去离子水冲洗去除残留溶液，用氮气吹干得到预处理多孔载玻片；
步骤2：
S21：取壳聚糖溶于加入0.8mol/L的稀盐酸，在420W微波功率、45℃反应7min；加入双氰胺，其中n(壳聚糖氨基)：n(双氰胺)为1：3，并用稀盐酸调节体系pH至1.5，继续在95℃、430W微波功率、磁力搅拌下，通冷凝水，微波反应12min，乙醇析出白色絮状产物，过滤、烘干、研磨，得到壳聚糖双胍盐酸盐；
S22：取1g纳米二氧化硅加入到100g壳聚糖醋酸溶液中，搅拌加入戊二醛反应3h得到改性二氧化硅；
S23：按重量百分数计，将3％壳聚糖双胍盐酸盐、1％改性二氧化硅和96％水性聚氨酯混合，加入混合物体系总质量5％的戊二醛交联，在63℃下反应6h得到亲水涂料；
步骤3：
将80g丙烯酸树脂、30g水性聚氨酯、50g有机溶剂、10g着色剂、23g分散剂、4g固化剂、2g消泡剂、5g疏水试剂和10g增粘剂混合，得到疏水涂料；
步骤4：
将疏水涂料丝网印刷在预处理多孔载玻片孔外部区域，干燥形成厚度为30μm疏水涂层；将亲水聚氨酯涂覆在多孔载玻片孔内区域，干燥形成厚度为10μm的亲水涂层。
实验：对实施例1～6和对比例1～3中制备的载玻片进行测试，实验结果如下表所示。
其中：
接触角测试：分别测试载玻片孔外部分和孔内部分的水接触角；
防脱效果：交底材料中孔内进行IHC试验未发现掉片。IHC试验方法依次为切片脱蜡并用PBS洗涤2次(3min/次)、抑制内源性过氧化物酶、抗原修复并用PBS洗涤2次(3min/次)、滴加一抗室温下2h(或4℃过夜)并用PBS洗涤2次(3min/次)、滴加二抗酶复合物室温20-30min并用PBS洗两次(3min/次)、DAB显色、水洗终止显色、复染细胞核、分化水洗、返蓝水洗、脱水透明、封固。
结论：实施例1～7数据表明，本发明制备的载玻片孔外疏水，孔内亲水；对实施例1～6和实施例8进行IHC试验未发现掉片。实施例1和对比例1数据表明，加入壳聚糖双胍盐酸盐能够有效提高载玻片的防脱片效果；实施例2和对比例2数据表明，加入氧化壳聚糖后可以提高二氧化硅的分散效果，进而改善亲水性和防脱片效果。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (6)
1.一种多孔细胞基板载玻片的制备工艺，其特征在于：包括以下步骤：
步骤1：
将多孔载玻片浸泡在乙醇溶液中，超声10~15min，然后用氮气吹干后放在0.5~1mol/L的NaOH溶液中浸泡1~2h，用去离子水冲洗去除残留溶液，用氮气吹干后放在0.5~1mol/L的HCl溶液中浸泡1~2h，用去离子水冲洗去除残留溶液，用氮气吹干得到预处理多孔载玻片；
步骤2：
将丙烯酸树脂、水性聚氨酯、有机溶剂、着色剂、分散剂、固化剂、消泡剂、疏水试剂和增粘剂混合，得到疏水涂料；
步骤3：
将疏水涂料丝网印刷在预处理多孔载玻片孔外部区域，干燥形成疏水涂层；疏水涂层厚度为30~50μm；对多孔载玻片孔内区域涂覆亲水涂料；亲水涂料的制备方法为：
S1：按重量百分数计，将3~5%氧化壳聚糖加入至95~97%水性聚氨酯中，搅拌10~12h得到改性聚氨酯；
S2：取壳聚糖溶于稀盐酸，在400~450W微波功率、40~50°C反应5~10min；加入双氰胺，调节体系pH至1~2，继续在90~100°C、400~450W微波功率、磁力搅拌下，通冷凝水，微波反应10~15min，乙醇析出絮状产物，过滤、烘干、研磨，得到壳聚糖双胍盐酸盐；
S3：按重量份数计，取1~2份纳米二氧化硅加入到100份壳聚糖醋酸溶液中，搅拌加入戊二醛反应2~3h得到改性二氧化硅；
S4：取壳聚糖双胍盐酸盐、改性二氧化硅和改性聚氨酯的混合物，按重量百分数计，2~3%壳聚糖双胍盐酸盐、1~2%改性二氧化硅，余料为改性聚氨酯；加入戊二醛交联，在60~65℃下反应5~8h得到亲水涂料。
2.根据权利要求1所述的一种多孔细胞基板载玻片的制备工艺，其特征在于：步骤2中，疏水涂料中各组分含量，按重量份数计，50~80份丙烯酸树脂、15~30份水性聚氨酯、50~80份有机溶剂、10~15份着色剂、20~25份分散剂、1~10份固化剂、1~2份消泡剂、5~15份疏水试剂和4~10份增粘剂。
3.根据权利要求1所述的一种多孔细胞基板载玻片的制备工艺，其特征在于：涂覆亲水涂层时，涂层厚度为10~15μm。
4.根据权利要求1所述的一种多孔细胞基板载玻片的制备工艺，其特征在于：S1中，氧化壳聚糖的制备方法为：将壳聚糖加入至过氧化氢溶液中，室温搅拌20~24h，用丙酮洗涤，离心、冷冻，得到氧化壳聚糖；壳聚糖与过氧化氢溶液的质量比为（1~3）：50，过氧化氢溶液的质量分数为10%。
5.根据权利要求1所述的一种多孔细胞基板载玻片的制备工艺，其特征在于：S2中，n（壳聚糖氨基）：n（双氰胺）为1：（3~5）。
6.根据权利要求1~5中任一项所述的一种多孔细胞基板载玻片的制备工艺制备得到的载玻片。
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2023
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