CN117741155A - Abcc4蛋白用于制备前列腺癌诊断试剂盒的用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了ABCC4蛋白用于制备前列腺癌诊断试剂盒的用途。本发明请求保护ABCC4蛋白用于制备诊断前列腺癌的血浆检测试剂盒的用途，所述血浆检测试剂盒中含有检测血浆中ABCC4蛋白含量的试剂。本发明发现，以血浆中ABCC4蛋白为诊断标志物诊断区分前列腺癌患者和健康志愿者具有较高的诊断效能，诊断准确率高。因此，ABCC4蛋白具有开发成通过检测血浆中ABCC4蛋白含量诊断前列腺癌的血浆检测试剂盒的前景。
Description
技术领域
本发明属于疾病检测诊断领域，涉及生物标志物在疾病诊断中的应用，具体涉及ABCC4蛋白用于制备前列腺癌诊断试剂盒的用途。
背景技术
前列腺癌(Prostate cancer，PCa)是男性最常见的恶性肿瘤。近年来，随着人口老龄化和生活方式的改变，全球前列腺癌的发病率呈持续增长趋势。由于前列腺癌发病早期症状不明显，多数前列腺癌患者确诊时已发生局部进展或远处转移，导致预后较差。尽管前列腺特异性抗原(prostate-specific antigen，PSA)已经广泛应用于前列腺癌的早期诊断，但PSA因其特异性欠佳，常导致过度诊断，难以满足临床需求。因此，寻找其它理想的生物标志物是实现前列腺癌精准筛检工作的关键。
ABC转运蛋白是机体最大的跨膜蛋白家族之一，具有主动跨膜运输多种物质的功能。目前ABC转运蛋白家族包含12个亚家族，其中ABCC家族蛋白具有影响药物在细胞内累积的作用，与肿瘤细胞产生化疗药物耐受性相关。ABCC家族含有9个成员，其中ABC转运蛋白家族4(ABCC4)是ABC转运蛋白家族成员。
张清元等发现，前列腺癌组织中ABCC4基因表达高于癌旁组织，且ABCC4高表达组前列腺癌患者的生存能力较差，得出结论：ABCC4基因调控前列腺癌肿瘤免疫微环境的免疫细胞浸润，尤其对T细胞和NK细胞浸润有重要作用，从而影响前列腺癌的发生和免疫治疗(ABCC4基因表达对前列腺癌免疫微环境的影响，广西医科大学学报，2023)。因为张清元等人仅发现ABCC4基因在前列腺癌组织与癌旁组织中存在差异，所以其应用于前列腺癌诊断时无法摆脱穿刺手段。但是，既然都要依赖穿刺取组织样本，显然现有的通过组织诊断前列腺癌的手段比张清元等人的发现更可靠。
相比较而言，利用血浆或血清中标志物进行疾病诊断是较为简便、患者依从性高的方法。目前，尚未见血浆中ABCC4蛋白与前列腺癌诊断的相关报道。
发明内容
本发明旨在克服现有技术不足，提供ABCC4蛋白用于制备前列腺癌诊断试剂盒的用途。
本发明上述目的通过如下技术方案实现：
ABCC4蛋白用于制备诊断前列腺癌的血浆检测试剂盒的用途。
进一步地，所述血浆检测试剂盒中含有检测血浆中ABCC4蛋白含量的试剂。
有益效果：
本发明发现，以血浆中ABCC4蛋白为诊断标志物诊断区分前列腺癌患者和健康志愿者具有较高的诊断效能，诊断准确率高。因此，ABCC4蛋白具有开发成通过检测血浆中ABCC4蛋白含量诊断前列腺癌的血浆检测试剂盒的前景。
附图说明
图1为测试集中前列腺癌患者与健康志愿者血浆中ABCC4蛋白含量差异；
图2为验证集1中构建的血浆ABCC4诊断区分前列腺癌患者与健康志愿者的ROC曲线以及根据ROC曲线获得的诊断阈值(cutoff)。
具体实施方式
下面结合附图和实施例具体介绍本发明实质性内容，但并不以此限定本发明的保护范围。
实施例1：对前列腺癌患者和健康志愿者的诊断区分效能
一、实验样本
将来自常州市第一人民医院的80例前列腺癌患者与80例健康志愿者随机分为测试集样本、验证集1样本和验证集2样本。其中：测试集样本包括28例前列腺癌患者与28例健康志愿者；验证集1样本包括26例前列腺癌患者与26例健康志愿者；验证集2样本包括26例前列腺癌患者与26例健康志愿者。
入组标准：前列腺癌患者为经病理组织确诊且未经放疗或化疗的前列腺癌病例；健康志愿者为体检正常的健康人群。
排除标准：①不符合前列腺癌、健康志愿者的入组标准；②患者伴有其他前列腺疾病，如前列腺炎；③患者合并有其他严重肝、肾、心肺以及造血系统等疾病。
二、实验方法
1、血浆样本的采集和储存
使用真空抗凝(EDTA)采血管收集研究对象外周静脉血5mL，静置2小时后，4000rpm离心20分钟，使血细胞和血浆分离。然后置于2mL Eppendorf管，血浆置于-80℃长期储存。
2、ABCC4蛋白的含量测定
采用应用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)检测ABCC4蛋白在前列腺癌患者与健康志愿者血浆中含量。ELISA试剂盒购自Shanghai Enzyme-linked Biotechnology(No.ml2309415-2)。根据试剂盒说明书操作流程测定血浆ABCC4的含量。具体的实验步骤如下：将标准品或样品加入96孔微孔板中，37℃温育1h，其中的ABCC4与包被在微孔中的ABCC4抗体结合；弃去液体，加入生物素化的ABCC4抗体，37℃温育1h；弃去液体，并用洗涤液洗涤3次，洗去未结合的生物素化抗体；加入HRP(过氧化酶)标记的亲和素，37℃温育30min，使亲和素与生物素完全结合；弃去液体，洗涤液洗涤5次；加入TMB底物于37℃避光显色10-20min，TMB在HRP的催化下显蓝色；于450nm波长下测定吸光度，吸光度与ABCC4蛋白含量成正比。
3、数据处理方法
目标蛋白的表达量水平使用均数±标准差表示，并采用Student’s t-test检验比较不同组别之间的蛋白含量差异。通过绘制receiver operating characteristic(ROC)曲线，并计算曲线下面积(AUC)及其95％可信区间(confidence interval，CI)，评价ABCC4蛋白对前列腺癌的诊断价值。AUC为0.5时，表示诊断无意义；AUC在0.5-0.7时，表示诊断准确性较低；AUC在0.7-0.9时，表示诊断准确性中等；AUC大于0.9时，表示有较高的诊断准确性。采用DeLong’stest比较不同模型的AUC是否有差异，以综合性地评价血浆ABCC4作为前列腺癌诊断生物标志物的应用价值。诊断评价指标的计算如下：
灵敏度也称为真阳性率，即实际有病且被诊断试验正确地判为有病的概率，灵敏度＝[a/(a+c)]×100％。特异度也称为真阴性率，即实际无病，诊断试验正确地判为无病的概率，特异度＝[d/(b+d)]×100％。
三、实验结果
1、ABCC4蛋白在前列腺癌患者与健康志愿者中的含量水平差异
在测试集中，与健康志愿者相比，前列腺癌患者血浆中的ABCC4蛋白含量显著上调，测定结果如下表和图1所示。
2、ABCC4蛋白诊断区分前列腺癌患者和健康志愿者的ROC曲线分析
在验证集1中，测定前列腺癌患者和健康志愿者血浆中ABCC4蛋白的含量，绘制ROC曲线并计算AUC及其95％CI，评价ABCC4蛋白对前列腺癌的诊断效能。ROC分析结果显示：在验证集1中，血浆ABCC4蛋白诊断区分前列腺癌患者与健康志愿者的AUC值高达0.879(灵敏度为0.769，特异度为0.846)，接近0.9，最佳cutoff值为4955.802，见图2。
3、验证ABCC4蛋白单独诊断区分前列腺癌患者和健康志愿者的准确率
在验证集2中，测定前列腺癌患者和健康志愿者血浆中ABCC4蛋白的含量，以验证集1得到的cutoff值4955.802为诊断阈值预测验证集2中样本类型，低于该阈值的预测为健康志愿者，高于该阈值的预测为前列腺癌患者。以预测正确的样本数量除以总样本数，即为ABCC4蛋白区分前列腺癌患者与健康志愿者的准确率。结果显示，验证集2中血浆ABCC4蛋白诊断区分前列腺癌患者与健康志愿者的准确率为78.85％(41/52)，接近80％，准确率较高，在前列腺癌诊断领域已有相当大的开发应用前景。
上述实验结果表明，以血浆中ABCC4蛋白为诊断标志物诊断区分前列腺癌患者和健康志愿者具有较高的诊断效能，诊断准确率高。因此，ABCC4蛋白具有开发成通过检测血浆中ABCC4蛋白含量诊断前列腺癌的血浆检测试剂盒的前景。
实施例2：前列腺癌诊断试剂盒
一种诊断前列腺癌的血浆检测试剂盒，该血浆检测试剂盒中含有检测血浆中ABCC4蛋白含量的试剂。
上述实施例的作用在于具体介绍本发明的实质性内容，但本领域技术人员应当知道，不应将本发明的保护范围局限于该具体实施例。
Claims (2)
1.ABCC4蛋白用于制备诊断前列腺癌的血浆检测试剂盒的用途。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述血浆检测试剂盒中含有检测血浆中ABCC4蛋白含量的试剂。
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