CN117723686A - 一种hplc测定替米沙坦中的潜在基因毒性杂质的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种HPLC测定替米沙坦中的潜在基因毒性杂质的方法，包括：配制供试品溶液：取替米沙坦20～100mg，精密称定，置于20mL量瓶中，加入甲酸和乙腈的混合溶剂适量超声使样品溶解，用甲酸和乙腈的混合溶剂稀释至刻度，摇匀；配制对照品溶液，每1mL溶液中含2‑氰基‑4',4'‑二溴甲基联苯10～100ng和2‑氰基‑4'‑溴甲基联苯10～100ng的混合溶液；分别对对照品溶液、供试品溶液进行HPLC检测，采用外标法测定替米沙坦中2‑氰基‑4',4'‑二溴甲基联苯和2‑氰基‑4'‑溴甲基联苯的含量。本发明方法分离效率高、分析速度快、检测灵敏度高，能够有效控制替米沙坦的质量。
Description
技术领域
本发明属于物质检测领域，涉及一种HPLC测定替米沙坦中潜在基因毒性杂质的方法，尤其是涉及一种HPLC测定替米沙坦中2-氰基-4',4'-二溴甲基联苯(RC21)和2-氰基-4'-溴甲基联苯(RC22)的方法。
背景技术
替米沙坦，化学名称是4'-[(1,4'-二甲基-2'-丙基[2,6'-二-1H-苯并咪唑]-1'-基)甲基]-[1,1'-二联苯基]-2-羧酸。
替米沙坦的适应症是高血压。用于成年人原发性高血压的治疗，降低心血管风险。本品适用于年龄55岁及以上、存在发生严重心血管事件高风险且不能接受血管紧张素转换酶(ACE)抑制剂治疗的患者，以降低其发生心肌梗死、卒中或心血管疾病导致死亡的风险。心血管事件的高风险包括冠状动脉疾病、外周动脉疾病、卒中、一过性脑缺血发作或伴有终末器官损害症的高危2型糖尿病(胰岛素依赖或非胰岛素依赖)病史。替米沙坦还可以与其他必要的治疗药物例如降压药物，抗血小板药物或降脂药同时使用。不推荐替米沙坦与ACE抑制剂同时使用。
2-氰基-4'-溴甲基联苯(Ⅰ)是替米沙坦的初始物料，2-氰基-4',4'-二溴甲基联苯(Ⅱ)是初始物料的副产物，两者具有溴代多环芳香族的警示结构，为保证患者用药安全，应将其视为潜在遗传毒性杂质。
替米沙坦为替米沙坦相关制剂中主要活性成分，基因毒性杂质的可接受限度一般根据毒理学关注阈值(TTC)限度计算。
表1.TTC限度
| 治疗期 | ≤1个月 | 1～12个月 | 1～10年 | ≥10年 |
| 日摄入量(μg/d) | 120 | 20 | 10 | 1.5 |
替米沙坦作为口服制剂的主要活性成分，其最大日剂量是80mg，按照最严格的日摄入量1.5μg/d计算，基因毒性杂质的可接受限度为18.75ppm。
发明内容
本发明的目的在于建立一种HPLC测定替米沙坦潜在基因毒性杂质2-氰基-4',4'-二溴甲基联苯(RC21)和2-氰基-4'-溴甲基联苯(RC22)的方法，以更好的控制替米沙坦的质量。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
一种HPLC测定替米沙坦中的潜在基因毒性杂质的方法，包括：
配制供试品溶液：取替米沙坦20～100mg，精密称定，置于20mL量瓶中，加入甲酸和乙腈的混合溶剂适量超声使样品溶解，用甲酸和乙腈的混合溶剂稀释至刻度，摇匀；
配制对照品溶液：取适量2-氰基-4',4'-二溴甲基联苯和2-氰基-4'-溴甲基联苯，精密称定，用甲酸和乙腈的混合溶剂定量，配制成每1mL溶液中含2-氰基-4',4'-二溴甲基联苯10～100ng和2-氰基-4'-溴甲基联苯10～100ng的混合溶液；
分别对对照品溶液、供试品溶液进行HPLC检测，采用外标法测定替米沙坦中杂质2-氰基-4',4'-二溴甲基联苯和2-氰基-4'-溴甲基联苯的含量。
发明人基于：替米沙坦是难溶性化合物，在水中几乎不溶，在甲醇中微溶，在乙醇中极微溶解，在0.1mol/L氢氧化钠溶液中易溶，在0.1mol/L盐酸溶液中极微溶解。结合2-氰基-4',4'-二溴甲基联苯和2-氰基-4'-溴甲基联苯物质的性质和稳定性，采用甲酸和乙腈的混合溶剂溶解替米沙坦。但是当甲酸和乙腈的混合溶剂中0.2:9.8≤甲酸和乙腈的体积比＜0.5:9.5,时，替米沙坦供试品不能很好的溶解，溶液会浑浊或有颗粒存在。
所述的甲酸和乙腈的混合溶剂中甲酸和乙腈的体积比为0.5:9.5～2:8V/V，优选为1:9～2:8，更优选为1:9V/V。
配制对照品溶液使用的甲酸和乙腈的混合溶剂与配制供试品溶液使用的甲酸和乙腈的混合溶剂，甲酸和乙腈的体积比相同。
优选的，配制供试品溶液：取替米沙坦约60mg，精密称定，置于20mL量瓶中，加入甲酸和乙腈的混合溶剂适量超声使样品溶解，用甲酸和乙腈的混合溶剂稀释至刻度，摇匀。
更优选的，配制供试品溶液：取替米沙坦约60mg，精密称定，置于20mL量瓶中，加入甲酸-乙腈(1:9，V/V)适量超声使样品溶解，用甲酸-乙腈(1:9，V/V)稀释至刻度，摇匀。优选的，配制对照品溶液：取适量2-氰基-4',4'-二溴甲基联苯和2-氰基-4'-溴甲基联苯，精密称定，用甲酸和乙腈的混合溶剂定量，配制成每1mL溶液中含2-氰基-4',4'-二溴甲基联苯50ng和2-氰基-4'-溴甲基联苯50ng的混合溶液。
优选的，配制对照品溶液：取适量2-氰基-4',4'-二溴甲基联苯和2-氰基-4'-溴甲基联苯，精密称定，用甲酸和乙腈的混合溶剂定量，配制成每1mL溶液中含2-氰基-4',4'-二溴甲基联苯25～100ng和2-氰基-4'-溴甲基联苯25～100ng的混合溶液。
更优选的，配制对照品溶液：取适量2-氰基-4',4'-二溴甲基联苯和2-氰基-4'-溴甲基联苯，精密称定，用甲酸和乙腈的混合溶剂(1:9，V/V)定量，配制成每1mL溶液中含2-氰基-4',4'-二溴甲基联苯50ng和2-氰基-4'-溴甲基联苯50ng的混合溶液。
HPLC(液相色谱)检测条件为：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以水为流动相A，以乙腈为流动相B，进行梯度洗脱；检测波长为249～259nm；柱温为23～27℃；流速为0.9～1.1mL/min；进样体积50μL；梯度洗脱程序为：
所述的色谱柱选自色谱柱为Kromasil-C18(4.6mm×250mm，5μm)、AgilentExtend-C18(4.6mm×250mm，5μm)。
优选的，HPLC检测条件为：色谱柱为Kromasil-C18(4.6mm×250mm，5μm)，以水为流动相A，以乙腈为流动相B，进行梯度洗脱；检测波长为254nm；柱温为25℃；流速为1.0mL/min；进样体积50μL，梯度洗脱程序为：
本发明的有益效果：
本发明采用HPLC测定替米沙坦潜在基因毒性杂质2-氰基-4',4'-二溴甲基联苯(RC21)和2-氰基-4'-溴甲基联苯(RC22)，分离效率高、分析速度快、检测灵敏度高。
基于本发明方法，通过检测替米沙坦潜在基因毒性杂质，控制替米沙坦潜在基因毒性杂质2-氰基-4',4'-二溴甲基联苯和2-氰基-4'-溴甲基联苯不大于18.75ppm，能够有效控制替米沙坦的质量。
附图说明
图1为实施例1中空白溶液、供试品溶液、对照品溶液和加标供试品溶液的HPLC对比图；从上向下依次为空白溶剂、对照品溶液、供试品溶液、加标供试品溶液的HPLC谱图。
图2为实施例2中检测限溶液的HPLC谱图；峰1为2-氰基-4'-溴甲基联苯(RC22)，峰2为2-氰基-4',4'-二溴甲基联苯(RC21)。
图3为实施例3中定量限溶液的HPLC谱图；峰1为2-氰基-4'-溴甲基联苯(RC22)，峰2为2-氰基-4',4'-二溴甲基联苯(RC21)。
图4为实施例4中对照品溶液的HPLC谱图；a：检测波长249nm，b：检测波长254nm，c：检测波长259nm。
图5为实施例5中对照品溶液的HPLC谱图；峰1为2-氰基-4'-溴甲基联苯(RC22)，峰2为2-氰基-4',4'-二溴甲基联苯(RC21)。
图6为实施例6中对照品溶液的HPLC谱图；峰1为2-氰基-4'-溴甲基联苯(RC22)，峰2为2-氰基-4',4'-二溴甲基联苯(RC21)。
图7为实施例6中对照品溶液的HPLC谱图；峰1为2-氰基-4'-溴甲基联苯(RC22)，峰2为2-氰基-4',4'-二溴甲基联苯(RC21)。
图8为实施例7中对照品溶液的HPLC谱图；峰1为2-氰基-4'-溴甲基联苯(RC22)，峰2为2-氰基-4',4'-二溴甲基联苯(RC21)。
图9为实施例7中对照品溶液的HPLC谱图；峰1为2-氰基-4'-溴甲基联苯(RC22)，峰2为2-氰基-4',4'-二溴甲基联苯(RC21)。
图10为实施例8中对照品溶液的HPLC谱图；峰1为2-氰基-4'-溴甲基联苯(RC22)，峰2为2-氰基-4',4'-二溴甲基联苯(RC21)。
图11为实施例8中对照品溶液的HPLC谱图；峰1为2-氰基-4'-溴甲基联苯(RC22)，峰2为2-氰基-4',4'-二溴甲基联苯(RC21)。
图12为实施例9中50％准确度溶液HPLC谱图；峰1为2-氰基-4'-溴甲基联苯(RC22)，峰2为2-氰基-4',4'-二溴甲基联苯(RC21)。
图13为实施例9中100％准确度溶液HPLC谱图；峰1为2-氰基-4'-溴甲基联苯(RC22)，峰2为2-氰基-4',4'-二溴甲基联苯(RC21)。
图14为实施例9中150％准确度溶液HPLC谱图；峰1为2-氰基-4'-溴甲基联苯(RC22)，峰2为2-氰基-4',4'-二溴甲基联苯(RC21)。
图15为对照品溶液在对比例1的HPLC检测条件下的HPLC谱图。
图16为对比例2的HPLC检测条件下供试品溶液、单一对照品溶液的HPLC谱图；从上向下依次为供试品溶液、2-氰基-4'-溴甲基联苯(RC22)、2-氰基-4',4'-二溴甲基联苯(RC21)的HPLC谱图。
具体实施方式
通过下列实施例进一步说明本发明的技术方案，但实施例并非限制本发明的。
实施例中所用试剂均为市售或依据现有方法进行简单合成。
HPLC(液相色谱)型号：
所用试剂：
实施例1
HPLC测定替米沙坦中潜在基因毒性杂质的方法，包括：
配制供试品溶液：取替米沙坦约60mg，精密称定，置于20mL量瓶中，加入甲酸-乙腈(1:9，V/V)适量超声使样品溶解，用甲酸-乙腈(1:9，V/V)稀释至刻度，摇匀。
配制对照品溶液：分别取适量2-氰基-4',4'-二溴甲基联苯(RC21)和2-氰基-4'-溴甲基联苯(RC22)，精密称定，用甲酸-乙腈(1:9，V/V)定量配制成每1mL溶液约含2-氰基-4',4'-二溴甲基联苯(RC21)50ng和2-氰基-4'-溴甲基联苯(RC22)50ng的混合溶液。
配制加标供试品溶液：分别取适量替米沙坦、2-氰基-4',4'-二溴甲基联苯和2-氰基-4'-溴甲基联苯，精密称定，用甲酸-乙腈(1:9，V/V)定量，配制成每1mL溶液约含替米沙坦3mg、2-氰基-4',4'-二溴甲基联苯50ng和2-氰基-4'-溴甲基联苯50ng的加标供试品溶液。
分别对对照品溶液、供试品溶液和加标供试品溶液进行HPLC检测，HPLC检测条件：色谱柱为Kromasil-C18液相色谱柱(内径4.6mm×长度250mm，粒度45μm)，以水为流动相A，以乙腈为流动相B，进行梯度洗脱；检测波长为254nm；柱温为25℃；流速为1.0mL/min；进样体积50μL；梯度洗脱程序如下：
图1为空白溶剂、对照品溶液、供试品溶液和加标供试品溶液的HPLC对比图。说明空白溶剂对2-氰基-4',4'-二溴甲基联苯和2-氰基-4'-溴甲基联苯检测无干扰，加标供试品溶液中未知杂质与2-氰基-4'-溴甲基联苯的分离度为2.4，符合不小于1.5分离度的要求。
实施例2
配制检测限溶液：分别取适量2-氰基-4',4'-二溴甲基联苯(RC21)和2-氰基-4'-溴甲基联苯(RC22)，精密称定，用甲酸-乙腈(1:9，V/V)定量，配制成每1mL溶液约含2-氰基-4',4'-二溴甲基联苯10ng和2-氰基-4'-溴甲基联苯10ng的混合溶液。
对检测限溶液进行HPLC检测，HPLC检测条件：色谱柱为Kromasil-C18(4.6mm×250mm，5μm)，以水为流动相A，以乙腈为流动相B，进行梯度洗脱；检测波长为254nm；柱温为25℃；流速为1.0mL/min；进样体积50μL；梯度洗脱程序如下：
检测限溶液的HPLC谱图见图2。可知，本发明方法的检测限为3.3ppm，相当于限度18.75ppm的17％。说明本发明方法的检测灵敏度很高。
实施例3
配制定量限溶液：分别取适量2-氰基-4',4'-二溴甲基联苯(RC21)和2-氰基-4'-溴甲基联苯(RC22)，精密称定，用甲酸-乙腈(1:9，V/V)定量，配制成每1mL溶液约含2-氰基-4',4'-二溴甲基联苯15ng和2-氰基-4'-溴甲基联苯15ng的混合溶液。
对定量限溶液进行HPLC检测，HPLC检测条件：色谱柱为Kromasil-C18(4.6mm×250mm，5μm)，以水为流动相A，以乙腈为流动相B，进行梯度洗脱；检测波长为254nm；柱温为25℃；流速为1.0mL/min；进样体积50μL；梯度洗脱程序如下：
定量限溶液HPLC谱图见图3。可知，本发明方法的定量限为5ppm，相当于限度18.75ppm的25％。说明本发明方法的定量灵敏度很高。
实施例4
配制对照品溶液：分别取适量2-氰基-4',4'-二溴甲基联苯(RC21)和2-氰基-4'-溴甲基联苯(RC22)，精密称定，用甲酸-乙腈(1:9，V/V)定量，配制成每1mL溶液约含2-氰基-4',4'-二溴甲基联苯50ng和2-氰基-4'-溴甲基联苯50ng的混合溶液。
对对照品溶液进行HPLC检测，HPLC检测条件：色谱柱为Kromasil-C18(4.6mm×250mm，5μm)，以水为流动相A，以乙腈为流动相B，进行梯度洗脱；检测波长分别为249nm、254nm、259nm；柱温为25℃；流速为1.0mL/min；进样体积50μL；梯度洗脱程序如下：
对照品溶液HPLC谱图见图4，说明波长对检测结果没有显著影响。
实施例5
配制对照品溶液：分别取适量2-氰基-4',4'-二溴甲基联苯(RC21)和2-氰基-4'-溴甲基联苯(RC22)，精密称定，用甲酸-乙腈(1:9，V/V)定量配制成每1mL溶液约含2-氰基-4',4'-二溴甲基联苯50ng和2-氰基-4'-溴甲基联苯50ng的混合溶液。
对对照品溶液进行HPLC检测，HPLC检测条件：色谱柱为Agilent Extend-C18(4.6mm×250mm，5μm)，以水为流动相A，以乙腈为流动相B，进行梯度洗脱；检测波长为254nm；柱温为25℃；流速为1.0mL/min；进样体积50μL；梯度洗脱程序如下：
对照品溶液HPLC谱图见图5，说明不同厂家的色谱柱对检测结果没有显著影响。
实施例6
配制对照品溶液：分别取适量2-氰基-4',4'-二溴甲基联苯(RC21)和2-氰基-4'-溴甲基联苯(RC22)，精密称定，用甲酸-乙腈(1:9，V/V)定量配制成每1ml溶液约含2-氰基-4',4'-二溴甲基联苯50ng和2-氰基-4'-溴甲基联苯50ng的混合溶液。
对对照品溶液进行HPLC检测，HPLC检测条件：色谱柱为Agilent Extend-C18(4.6mm×250mm，5μm)，以水为流动相A，以乙腈为流动相B，进行梯度洗脱；检测波长为254nm；柱温为25℃；流速为0.9mL/min或1.1mL/min；进样体积50μL；梯度洗脱程序如下：
对照品溶液HPLC谱图见图6(流速为0.9mL/min)和图7(流速为1.1mL/min)，说明流速的变化对检测结果没有显著影响。
实施例7
配制对照品溶液：分别取适量2-氰基-4',4'-二溴甲基联苯(RC21)和2-氰基-4'-溴甲基联苯(RC22)，精密称定，用甲酸-乙腈(1:9，V/V)定量配制成每1mL溶液约含2-氰基-4',4'-二溴甲基联苯50ng和2-氰基-4'-溴甲基联苯50ng的混合溶液。
对对照品溶液进行HPLC检测，HPLC检测条件：色谱柱为Kromasil-C18(4.6mm×250mm，5μm)，以水为流动相A，以乙腈为流动相B，进行梯度洗脱；检测波长为254nm；柱温为23℃或27℃；流速为1.0mL/min；进样体积50μL；梯度洗脱程序如下：
对照品溶液HPLC谱图见图8(柱温为23℃)和图9(柱温为27℃)，说明柱温变化对检测结果没有显著影响。
实施例8
配制对照品溶液：分别取适量2-氰基-4',4'-二溴甲基联苯(RC21)和2-氰基-4'-溴甲基联苯(RC22)，精密称定，用甲酸-乙腈(1:9，V/V)定量，配制成每1mL溶液约含2-氰基-4',4'-二溴甲基联苯50ng和2-氰基-4'-溴甲基联苯50ng的混合溶液。
对对照品溶液进行HPLC检测，HPLC检测条件：色谱柱为Kromasil-C18(4.6mm×250mm，5μm)，以水为流动相A，以乙腈为流动相B，进行梯度洗脱；检测波长为254nm；柱温为25℃；流速为1.0mL/min；进样体积50μL；梯度洗脱程序如下：
对照品溶液HPLC谱图见图10(起始梯度：53％流动相A，47％流动相B)和图11(起始梯度：57％流动相A，43％流动相B)，说明起始流动相比例的变化对检测结果没有显著影响。
实施例9
考察本发明方法的准确度
HPLC测定替米沙坦中潜在基因毒性杂质的方法，包括：
配制供试品溶液：取替米沙坦约60mg，精密称定，置于20mL量瓶中，加甲酸-乙腈(1:9，V/V)适量超声使样品溶解，用甲酸-乙腈(1:9，V/V)稀释至刻度，摇匀。
配制对照品溶液：分别取适量2-氰基-4',4'-二溴甲基联苯(RC21)和2-氰基-4'-溴甲基联苯(RC22)，精密称定，用甲酸-乙腈(1:9，V/V)定量，配制成每1mL溶液约含2-氰基-4',4'-二溴甲基联苯50ng和2-氰基-4'-溴甲基联苯的50ng的混合溶液。
杂质对照品溶液：分别取适量2-氰基-4',4'-二溴甲基联苯(RC21)和2-氰基-4'-溴甲基联苯(RC22)，精密称定，用甲酸-乙腈(1:9，V/V)定量，配制成每1mL溶液约含2-氰基-4',4'-二溴甲基联苯2μg和2-氰基-4'-溴甲基联苯2μg的混合溶液。
50％准确度溶液：取替米沙坦约60mg，精密称定，置于20mL量瓶中，加入甲酸-乙腈(1:9，V/V)适量超声使样品溶解；精密量取杂质对照品溶液0.25mL，置于量瓶中，用甲酸-乙腈(1:9，V/V)稀释至刻度，摇匀。
100％准确度溶液：取替米沙坦约60mg，精密称定，置20mL量瓶中，加入甲酸-乙腈(1:9，V/V)适量超声使样品溶解；精密量取杂质对照品溶液0.5mL，置于量瓶中，用甲酸-乙腈(1:9，V/V)稀释至刻度，摇匀。
150％准确度溶液：取替米沙坦约60mg，精密称定，置20mL量瓶中，加入甲酸-乙腈(1:9，V/V)适量超声使样品溶解；精密量取杂质对照品溶液0.75mL，置于量瓶中，用甲酸-乙腈(1:9，V/V)稀释至刻度，摇匀。
对对照品溶液、供试品溶液、50％准确度溶液、100％准确度溶液和150％准确度溶液进行HPLC检测，HPLC检测条件：色谱柱为Kromasil-C18(4.6mm×250mm，5μm)，以水为流动相A，以乙腈为流动相B，进行梯度洗脱；检测波长为254nm；柱温为25℃；流速为1.0mL/min；进样体积50μL；梯度洗脱程序如下：
图12为50％准确度溶液HPLC谱图(峰1为2-氰基-4'-溴甲基联苯(RC22)，峰2为2-氰基-4',4'-二溴甲基联苯(RC21))；图13为100％准确度溶液HPLC谱图(峰1为2-氰基-4'-溴甲基联苯(RC22)，峰2为2-氰基-4',4'-二溴甲基联苯(RC21))；图14为150％准确度溶液HPLC谱图(峰1为2-氰基-4'-溴甲基联苯(RC22)，峰2为2-氰基-4',4'-二溴甲基联苯(RC21))。
采用外标法测定50％准确度溶液、100％准确度溶液、150％准确度溶液中2-氰基-4',4'-二溴甲基联苯(RC21)和2-氰基-4'-溴甲基联苯(RC22)的含量。2-氰基-4'-溴甲基联苯(RC22)的50％准确度水平的回收率为105.8％，100％准确度水平的回收率为98.0％，150％准确度水平的回收率为99.8％；2-氰基-4',4'-二溴甲基联苯(RC21)50％准确度水平的回收率为90.5％，100％准确度水平的回收率为92.5％，150％准确度水平的回收率为95.8％。可见，本发明方法能够有效准确的反映出产品的质量。
对比例1
发明人采用本发明优选的HPLC检测条件(实施例1)，仅仅调整梯度洗脱程序，如下：
结果见图15，在该HPLC检测条件下，对照品溶液(实施例1)进样后，未检测到2-氰基-4',4'-二溴甲基联苯和2-氰基-4'-溴甲基联苯出峰。
对比例2
发明人采用本发明优选的HPLC检测条件(实施例1)，仅仅调整检测波长(230nm，为替米沙坦检测波长)和流动相的种类，以甲醇为流动相A，以0.1％磷酸二氢钾-甲醇(35:65，含0.2％三乙胺，用磷酸调节pH值至5.0)为流动相为B。
供试品溶液(实施例1)、单一对照品溶液(参照实施例1对照品溶液配制)进行HPLC检测，结果见图16。供试品溶液干扰2-氰基-4',4'-二溴甲基联苯的检测。
Claims (10)
1.一种HPLC测定替米沙坦中的潜在基因毒性杂质的方法，其特征在于：包括：
配制供试品溶液：取替米沙坦20～100mg，精密称定，置于20mL量瓶中，加入甲酸和乙腈的混合溶剂适量超声使样品溶解，用甲酸和乙腈的混合溶剂稀释至刻度，摇匀；
配制对照品溶液：取适量2-氰基-4',4'-二溴甲基联苯和2-氰基-4'-溴甲基联苯，精密称定，用甲酸和乙腈的混合溶剂定量，配制成每1mL溶液中含2-氰基-4',4'-二溴甲基联苯10～100ng和2-氰基-4'-溴甲基联苯10～100ng的混合溶液；
分别对对照品溶液、供试品溶液进行HPLC检测，采用外标法测定替米沙坦中2-氰基-4',4'-二溴甲基联苯和2-氰基-4'-溴甲基联苯的含量。
2.根据权利要求1所述的HPLC测定替米沙坦中的潜在基因毒性杂质的方法，其特征在于：配制供试品溶液：取替米沙坦60mg，精密称定，置于20mL量瓶中，加入甲酸和乙腈的混合溶剂适量超声使样品溶解，用甲酸和乙腈的混合溶剂稀释至刻度，摇匀。
3.根据权利要求1所述的HPLC测定替米沙坦中的潜在基因毒性杂质的方法，其特征在于：配制对照品溶液：取适量2-氰基-4',4'-二溴甲基联苯和2-氰基-4'-溴甲基联苯，精密称定，用甲酸和乙腈的混合溶剂定量，配制成每1mL溶液中含2-氰基-4',4'-二溴甲基联苯25～100ng和2-氰基-4'-溴甲基联苯25～100ng的混合溶液。
4.根据权利要求3所述的HPLC测定替米沙坦中的潜在基因毒性杂质的方法，其特征在于：配制对照品溶液：取适量2-氰基-4',4'-二溴甲基联苯和2-氰基-4'-溴甲基联苯，精密称定，用甲酸和乙腈的混合溶剂定量，配制成每1mL溶液中含2-氰基-4',4'-二溴甲基联苯50ng和2-氰基-4'-溴甲基联苯50ng的混合溶液。
5.根据权利要求1-4任一项所述的HPLC测定替米沙坦中的潜在基因毒性杂质的方法，其特征在于：所述的甲酸和乙腈的混合溶剂中甲酸和乙腈的体积比为0.5:9.5～2:8。
6.根据权利要求5所述的HPLC测定替米沙坦中的潜在基因毒性杂质的方法，其特征在于：所述的甲酸和乙腈的混合溶剂中甲酸和乙腈的体积比为1:9～2:8。
7.根据权利要求6所述的HPLC测定替米沙坦中的潜在基因毒性杂质的方法，其特征在于：所述的甲酸和乙腈的混合溶剂中甲酸和乙腈的体积比为1:9。
8.根据权利要求1所述的HPLC测定替米沙坦中的潜在基因毒性杂质的方法，其特征在于：HPLC检测条件为：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以水为流动相A，以乙腈为流动相B，进行梯度洗脱；检测波长为249～259nm；柱温为23～27℃；流速为0.9～1.1mL/min；进样体积50μL；梯度洗脱程序为：
9.根据权利要求8所述的HPLC测定替米沙坦中的潜在基因毒性杂质的方法，其特征在于：所述的色谱柱选自色谱柱为Kromasil-C18(4.6mm×250mm，5μm)、Agilent Extend-C18(4.6mm×250mm，5μm)。
10.根据权利要求1或8所述的HPLC测定替米沙坦中的潜在基因毒性杂质的方法，其特征在于：HPLC检测条件为：色谱柱为Kromasil-C18(4.6mm×250mm，5μm)，以水为流动相A，以乙腈为流动相B，进行梯度洗脱；检测波长为254nm；柱温为25℃；流速为1.0mL/min；进样体积50μL，梯度洗脱程序为：
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