CN117716029A - 用于基因组编辑的组合物和方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种分子复合物，该分子复合物包含：‑第一单链核酸分子，该第一单链核酸分子包含转座酶的至少两个结合半位点；和‑第二单链核酸分子，该第二单链核酸分子包含转座酶的至少一个结合半位点。该复合物使得该第一单链核酸和第二单链核酸根据由沃森和克里克定义的碱基互补性来配对，以便限定所述转座酶的两个双链结合位点。本发明还涉及所述复合物的用途，特别是用于DNA编辑的用途。
Description
本发明涉及一种用于基因组编辑的组合物和方法。
了解修改活细胞遗传信息的影响的愿望可以追溯到遗传学的最初阶段。
首先，常规遗传学试图通过选择特定的遗传位点来了解遗传修饰以及由此产生的表型。
随后，生物化学家使用辐射和化学诱变剂来增加实验生物体中遗传突变的概率。尽管这些方法非常有用，但它们是昂贵的，并且不允许容易地控制引入到遗传物质中的修饰。
用于细胞修复或防御宿主生物体的分子机制的分子生物学和知识使得可以开发许多技术，从而允许开发所谓的反向遗传学，反向遗传学的目的与所谓的常规遗传筛选相反。
反向遗传学旨在将突变引入遗传物质中，其目的在于测量和分析所产生的表型效应。
基因组编辑策略在过去的三十年中不断发展，而在靶向基因修饰的背景下的最近创新和变革是与蛋白9(Cas9)系统相关联的CRISPR/CRISPR(CRISPR/Cas-9)。在这方面，可以提及两个专利—EP 3 144 390 B1和US 8 697 359 B1，这两个专利都描述了这种技术。
因此，CRISPR/Cas-9系统已成为遗传修饰的参考工具。然而，这种CRISPR变革类似于分子剪刀，其不足以允许整个外显子的完全重组。
最近，由CRISPR(转座子编码的CRISPR-Cas系统)系统编码的转座酶是对CRISPR技术缺陷的一种半响应。事实上，这种技术使用经由转座子Tn7靶向的整合，随后通过CRISPR技术将序列添加到基因组中。但在任何情况下其都不是重组。
引导编辑(Prime Editing)技术是将CRISPR工具与逆转录酶结合的基因替换的另一种可能性。基因组编辑中的这种最新变革允许根据大小替换两条DNA链中的一条链，这仍然是细胞整合和修复系统固有的和视其而定的强大限制。
另外，本发明特别旨在克服现有技术的这些缺点。
本发明的目的之一是提供一种允许基因组编辑的重组工具。
本发明的另一个目的是使这一新工具不依赖于所操纵的序列的大小，并使这一系统由用户控制和能够由用户控制。
本发明的又另一个目的是提供一种工具，该工具能够根据用户的意愿，以受控和受限的方式使用DNA修复系统进行所关注分子的单链或双链替换。
本发明涉及一种第一单链核酸分子，其包含允许将所关注核酸的互补序列插入的A序列或基本上由该A序列组成，
所述A序列在5’处与长度为40个至60个核苷酸的第一富T序列结合，并且在3’处与长度为40个至60个核苷酸的第二富T序列结合，所述第一富T序列和第二富T序列分别包含6个至12个富G/C核苷酸的第一结构域和第二结构域，该第一结构域的序列与该第二结构域的序列互补，所述第一结构域和第二结构域定位在距所述A序列15个至52个核苷酸处，所述第一分子在其5’末端处包含用于识别转座酶的5’至3’定向的第一序列，并且在其3’末端处包含用于识别所述转座酶的至少一个第二序列。
另外，本发明涉及一种分子复合物，其包含：
-第一单链核酸分子，该第一单链核酸分子包含允许将所关注核酸的互补序列插入的A序列或基本上由该A序列组成，
所述A序列在5’处与长度为40个至60个核苷酸的第一富A/T尤其是富T序列结合，并且在3’处与长度为40个至60个核苷酸的第二富A/T尤其是富T序列结合，所述第一富A/T尤其是富T序列和第二富A/T尤其是富T序列分别包含6个至12个富G/C核苷酸的第一结构域和第二结构域，该第一结构域的序列与该第二结构域的序列互补，所述第一结构域和第二结构域定位在距所述A序列15个至52个核苷酸处，所述第一分子在其5’末端处包含用于识别转座酶的5’至3’定向的第一序列，并且在其3’末端处包含用于识别所述转座酶的至少一个第二序列；以及
-第二单链核酸分子，该第二单链核酸分子在其5’末端处包含用于识别所述转座酶的所述第二序列的至少一个互补序列或基本上由该至少一个互补序列组成，
所述复合物使得第一单链核酸分子和第二单链核酸分子根据由沃森和克里克(Watson and Crick)定义的碱基互补性来配对，以便限定所述转座酶的两个双链结合位点。
这意味着本发明涉及一种分子复合物，该分子复合物包含第一单链核酸分子和第二单链核酸分子，所述第二单链核酸分子在其5’末端处包含用于识别所述转座酶的所述第二序列的至少一个互补序列或基本上由该至少一个互补序列组成，
所述复合物使得第一单链核酸分子和第二单链核酸分子根据由沃森和克里克定义的碱基互补性来配对，以便限定所述转座酶的两个双链结合位点。
本发明基于本发明人的意想不到的观察，即，使用能够靶向所关注核酸区域的特异性单链引导物使得可以以受控和“位点特异性”的方式调动转座酶，并因此使用所述转座酶的重组性质来替换所关注分子中的序列。
前述分子复合物实际上是本发明所定义的技术的基本单元。该基本单元可用于将重组酶引导至特定位点，在该位点处必须进行重组并因此进行序列替换。与需要存在PAM型(NGG)序列的CRISPR/Cas9系统不同，本文所定义的分子工具可用于任何靶序列，无论其序列如何。
因此，前述分子复合物是通过以下项完成的基本单元：
-靶序列的同源区，和
-靶序列的替换区。
因此，这是下文所述工具的中间产物。
该分子复合物由两个单链核酸分子组成，这两个单链核酸分子可以是DNA分子、RNA分子或混合的RNA和DNA分子。
根据沃森和克里克定义的核酸的碱基互补性，这两个分子彼此部分地互补，即腺嘌呤与胸腺嘧啶或尿嘧啶配对，并且胞嘧啶与鸟嘌呤配对，反之亦然。
更具体地，形成前述复合物的两个分子各自包含对应于转座酶的结合序列的双链分子的一条链的序列。另外，每个单链分子因此包含转座酶结合性“半序列”，并且因此无法允许与所述对应的转座酶的相互作用。另一方面，当复合物的两个分子通过上文定义的碱基配对一起相互作用时，由此形成双链分子，从而重建所述转座酶的双链结合位点，后者由此能够与所形成的分子相互作用。
第一分子。
复合物的第一分子是这样的分子，其一旦被修饰则包含使得可以特异性靶向所关注的核酸分子的所关注区域的核酸序列。该所关注序列由系统的用户根据所选择的靶标来选择。将该所关注序列插入到所述复合物的第一分子的A区。该A区至少对应于两个核酸，在这两个核酸之间插入使得可以靶向靶分子的序列。考虑到核酸的定向结构(5’至3’方向)，重要的是使得可以靶向所关注区域的序列以正确方向定位，以便允许与靶序列配对。
另外，有利地，A区包含一个或多个识别限制酶的位点，以便促进定向插入。A区中可能存在以下位点中的一个或多个位点：
[表1]
显然，在第一分子的化学合成的情况下，并不一定需要具有序列的克隆(或插入)位点来使得可以靶向靶区域，而是非常小心地提供正确定向的序列。然而这当然是可能的。
第一分子还在A区的任一侧由富A/T序列组成，或者在RNA的情况下由富A/U序列组成，以使结构具有一定的灵活性。在本发明中，富A/T或富A/U应被理解为意指这样的序列，其相对于构成该序列的核苷酸的总数，包含超过50％的A或T或U、优选超过50％的T或U。A区任一侧上的这些序列具有10个核苷酸至60个核苷酸范围内的核苷酸大小。
由于大量A、T或U碱基的存在，这些位于A区两侧的序列的灵活性可能具有使得经由重组酶进行的重组未被充分控制的影响，甚至可能在复合物尚未识别到靶分子时。
另外，为了克服这一问题，将富GC序列引入与A区邻接的富A/T(尤其是富T)或富A/U序列中的每一个序列中。这些富G/C区域由6个至12个核苷酸组成，其中C或G碱基的量大于所述富G/C序列中包含的核苷酸的50％。
为了稳定第一分子的结构，并如上文所述，防止意外重组，将富G/C区域定位在距A区末端15个至52个核苷酸处。
为了更清楚起见，如果A区由三个核苷酸组成，中心核苷酸对应于位置0，则富A/T或富A/U区域在左侧开始于位置-2，并且在右侧开始于位置+2。因此，在左侧，富G/C区域定位在距位置-17至位置-54处，并且在右侧，定位在距位置+17至位置+54处。
另一个重要元素：A区右侧(或5’)的富G/C序列必须与A区右侧(或3’)的富G/C区域互补(根据沃森和克里克配对规则)。另外，第一单链分子在富G/C区域处与其自身配对，这防止了转座酶的任何重组，只要不与区域的插入第一分子的A区中的互补靶序列相互作用。
最后，第一分子在其5’末端处包含对应于用于与转座酶结合的第一位点的序列，并且在其3’末端处包含用于与所述转座酶结合的第二位点。
第一结合位点和第二结合位点有利地是相同的，并且尤其是两者都对应于所述转座酶的双链结合位点的相同链。这意味着，存在于第一分子的5’区中的第一转座酶结合位点只能与存在于3’区中的转座酶结合位点整体地配对，并且因此稳定地配对。
第一结合位点和第二结合位点有利地是相同的，但各自对应于双链转座酶结合位点的不同链。另外，例如，如果第一转座酶结合位点对应于有义链，则第二转座酶结合位点对应于互补链的序列。因此可能具有两种构型：i)对应于互补链的第二结合位点以3’至5’方向定向，在这种情况下该第二结合位点能够与第一转座酶结合位点配对并形成双链位点，或ii)对应于互补链的第二结合位点以5’至3’方向定向，在这种情况下该第二结合位点不能与第一转座酶结合序列配对，因为它们的定向不是互补的。在前述情况i)中，如果第一单链分子在第一结合位点和第二结合位点处与其自身配对，则不可能形成前述复合物，因为不再有单链互补区可用于与第二分子配对以形成两个双链转座酶结合位点。
另外，当第一分子在A部分中缺乏靶区域的互补序列时，或者当其含有此类靶序列但后者不与所述靶序列相互作用(不与所述靶序列配对)时，该第一分子形成三维结构，其中除了与彼此配对的富G/C区域相对应的区域外，整个分子都是单链的。
第一分子的线性示意图描绘于[图1]中，并且其配对形式的示意图描绘于[图2]中。
第二分子。
前述复合物的第二分子比第一分子简单。该第二分子在其5’部分中包含转座酶结合位点，该转座酶结合位点与用于与存在于第一分子的3’部分中的所述转座酶结合的位点互补。因此，当形成复合物时，位于第一分子的3’处的(单链)转座酶结合半位点可以与定位在第二分子的5’处的(单链)转座酶结合半位点配对，从而形成双链转座酶结合位点(一种转座酶可以结合于其上的双链位点)。
在第二分子的3’部分中是与第一分子的A区类似的区域，该区域使得可以接收特定序列，该特定序列对应于待插入的序列而不是所关注的靶分子。以下是如何制备允许该取代的第二分子的更详细描述。
复合物
由第一分子和第二分子形成的复合物示意性地描绘于[图3]中。
该复合物使得当第一分子和第二分子经由转座酶结合半位点配对时，该复合物能够结合转座酶二聚体(一种允许重组的功能性二聚体)。
另外，第一分子或第二分子中的任一者还包含位于第一分子的5’处的转座酶结合半位点的互补序列。位于第一分子的5’处的转座酶结合位点的该互补区可以位于第一分子的5’或3’处，或者甚至位于第二分子的5’处，优选地位于转座酶结合位点的互补序列的5’处，该转座酶结合位点位于第一分子的3’处。
在本发明中，“所述复合物使得第一单链核酸分子和第二单链核酸分子根据由沃森和克里克定义的碱基互补性来配对，以便限定所述转座酶的两个双链结合位点”。由于第一分子在其5’区中包含至少一个转座酶结合半位点并且在其3’区中包含至少一个转座酶结合半位点，并且第二分子也包含至少一个转座酶结合半位点，这意味着在第一分子和第二分子之间的配对期间，形成两个完整的位点，因为
-以下中的任一者：
*第一分子在其5’区中包含第一转座酶结合位点的第一序列和第一转座酶结合位点的第一序列的互补序列，并且在其3’部分中包含第二转座酶结合位点的第二序列，并且
*第二分子包含第二转座酶结合位点的第二序列的互补序列，
-以下中的任一者：
*第一分子在其5’区中包含第一转座酶结合位点的第一序列，并且在其3’部分中包含第二转座酶结合位点的第二序列和第一转座酶结合位点的第一序列的互补序列，并且
*第二分子包含第二转座酶结合位点的第二序列的互补序列，
-以下中的任一者：
*第一分子在其5’区中包含第一转座酶结合位点的第一序列，并且在其3’部分中包含第二转座酶结合位点的第二序列，并且
*第二分子包含第一转座酶结合位点的第一序列的互补序列和第二转座酶结合位点的第二序列的互补序列。
所使用的术语“至少”以及分子“包含”形成转座酶识别位点的序列的事实允许本领域技术人员选择形成结合位点的半序列的位置，使得最终当复合物形成时重建两个完整的位点。
在[图4]中示意性地描绘了三个选项，其中的两个选项在下文中详细描述。
有利地，本发明涉及前述复合物，其中所述A序列包含所关注核酸的互补序列。
如上所述，A区可以含有所关注核酸的互补序列。更具体地，前述复合物的第一分子的A区中包含的序列与所关注分子的序列的5’或3’处的序列互补，使得该复合物允许特异性识别核酸分子的该区域，并且允许该复合物替换与A区中包含的序列互补的区域相邻的区域。
换句话说，本发明有利地涉及前述复合物，所述复合物包含：
-第一单链核酸分子，该第一单链核酸分子包含允许将所关注核酸的互补序列插入的A序列或基本上由该A序列组成，所述互补A序列在5’处与长度为40个至60个核苷酸的第一富A/T尤其是富T序列结合，并且在3’处与长度为40个至60个核苷酸的第二富A/T尤其是富T序列结合，所述第一富A/T尤其是富T序列和第二富A/T尤其是富T序列分别包含6个至12个富G/C核苷酸的第一结构域和第二结构域，该第一结构域的序列与该第二结构域的序列互补，所述第一结构域和第二结构域定位在距所述A序列15个至52个核苷酸处，所述第一分子在其5’末端处包含用于识别转座酶的5’至3’定向的第一序列，并且在其3’末端处包含用于识别所述转座酶的至少一个第二序列；以及
-第二单链核酸分子，该第二单链核酸分子在其5’末端处包含用于识别所述转座酶的所述第二序列的至少一个互补序列或基本上由该至少一个互补序列组成，
第一单链核酸分子和第二单链核酸分子根据由沃森和克里克定义的碱基互补性来配对，以便限定所述转座酶的两个双链结合位点。
在一个有利的实施方案中，本发明涉及一种前述复合物，其中所述第一分子在其5’末端处包含用于识别转座酶的5’至3’定向的第一序列，并且在其3’末端处包含用于识别所述转座酶的5’至3’定向的第二序列，并且
其中第二分子在其5’末端处包含用于识别所述转座酶的所述第一序列的第一互补序列，随后是用于识别所述转座酶的所述第二序列的第二互补序列。
在本发明复合物的这一有利的实施方案中，第一分子包含位置5’处的第一转座酶识别序列和位置3’处的第二转座酶识别序列。第二分子进而在位置5’处包含第一分子的第一转座酶识别序列的第一互补序列，随后是第一分子的第二转座酶识别序列的第二互补序列。另外，复合物的每个分子包含两个转座酶结合半位点，使得当形成复合物时，也就是说，当第一分子与第二分子配对时，形成两个相邻的双链转座酶结合位点，并且转座酶二聚体然后可以与其结合。
[图5]示意性地描绘了该实施方案。
有利地，本发明涉及前述复合物，其中所述第一分子在其5’末端处包含用于识别转座酶的5’至3’定向的第一序列，并且在其3’末端处包含用于识别所述转座酶的第二序列，随后是用于识别所述转座酶的所述第一序列的第一互补序列，并且
其中第二分子在其5’末端处包含用于识别所述转座酶的所述第二序列的互补序列。
在本发明复合物的这一有利的实施方案中，第一分子包含位置5’处的第一转座酶识别序列和位置3’处的第二转座酶识别序列，后者紧接着位于第一分子的5’处的转座酶识别序列的第一互补序列。第二分子进而在位置5’处包含第一分子的第二转座酶识别序列的第二互补序列。
另外，在该实施方案中，通过将第一分子的5’处的第一识别序列与该分子的3’处的第一识别序列配对，第一分子可以重新形成转座酶识别双链结合位点。第二分子进而必须与第一分子配对，以使用第一分子的3’处的第二识别序列和位于第二分子的5’处的第二互补转座酶识别序列重建第二双链转座酶结合位点。
图6B示意性地描绘了该实施方案。
还可以设想根据本发明的复合物的另一个有利的实施方案，其中第一分子在5’处包含第一转座酶识别位点的第一互补序列，随后是第一转座酶识别位点。此外，在3’处，第一分子包含第二转座酶识别位点。第二分子进而相对于先前描述的实施方案保持不变。
在本文中，第一分子的5’部分折叠到自身上，从而借助于第一识别位点和紧接着相邻的互补序列，通过配对重建双链转座酶识别位点。该实施方案在[图7]中示出。
存在另一个类似的实施方案，其中第一分子在5’处包含第一转座酶位点的第一互补序列，紧接着是用于识别第一转座酶的第一位点。
有利地，前述转座酶是细菌型转座酶，其选自转座子Tn5的转座酶、转座子Tn9的转座酶、转座子Tn10、Tn903、Tn602的转座酶、或甚至转座子Tc1的转座酶、或更一般地mariner转座子超家族的转座酶。
可用于本发明上下文中的转座酶的其他示例为：哈氏弧菌转座酶(由Agilent表征并用于产品SureSelect QXT中的转座酶)、MutA转座酶和包含末端序列R1和R2的Mu转座酶识别位点、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)转座子Tn552的转座酶、转座子Tn7的转座酶、Tn/O和IS10转座酶、转座子Tn3的转座酶。
Tn5转座酶是最著名的。其由转座子Tn5的Tnp基因编码。转座酶通过形成与其靶序列结合的转座酶二聚体来启动转座。在该复合物的情况下，转座酶然后催化四个磷酰基转移反应(DNA切割、DNA发夹形成、发夹拆分和链转移至靶DNA)，从而导致转座子整合到其新的DNA位点中：这就是所谓的“标签化”。
本发明基于这种标签化原理。通过利用转座酶的标签化性质，可以借助于前述复合物以靶向方式将一个序列插入另一个序列中。
另外，在本发明的上下文中，当提及转座酶时，提及的是前述转座酶之一，即转座子Tn5、Tn9、Tn10或Tc1/mariner的转座酶(或被突变以增加其转座或标签化活性的转座酶)。
在本发明中，当同时使用几种转座酶(一种与由第一分子和第三分子形成的复合物结合，并且另一种与由第二分子和第三分子形成的复合物结合)时，优选由转座子Tn5和Tn10产生的转座酶对。
在一个有利的实施方案中，本发明涉及一种试剂盒，该试剂盒包含允许表达前述复合物的第一分子的载体和允许表达前述第二分子的载体。
在该试剂盒的上下文中，载体优选是双链DNA的环状分子，这些分子DNA具有允许它们在宿主细胞(原核和或真核)中复制的所有元件，并且具有允许表达前述复合物的第一或第二分子的元件。
在第一分子和第二分子必须是单链DNA分子形式的情况下，所述第一分子和第二分子中的每一者的序列处于能够从双链DNA合成单链DNA的序列的控制下。例如，噬菌粒型载体中包含的f1噬菌体的复制序列的起点就是这种情况。在存在携带活化f1序列所必需的所有基因的辅助相M13的情况下，载体因此从双链质粒DNA产生单链DNA。
因此，试剂盒可以含有两个独立的载体，它们各自含有形成前述复合物的第一分子和第二分子中的一者或另一者的序列，或者含有包含两个序列但彼此在遗传上隔离的单一载体。
前述试剂盒还可以含有其他元件，诸如允许转座的转座酶。
有利地，前述复合物使得第一转座酶识别序列和第二转座酶识别序列是用于识别具有以下序列之一的Tn5转座酶的序列：
-CTGtCTCTTataCAcAtcT(SEQ ID NO:1)、
-CTGACTCTTataCACAagT(SEQ ID NO:3)和
-CTGtCTCTTgatCAgATCT(SEQ ID NO:5)。
因此，对应的互补序列如下：
-AgaTgTGtatAAGAGaCAG(SEQ ID NO:2)、
-ActTGTGtatAAGAGTCAG(SEQ ID NO:4)和
-AGATcTGatcAAGAGaCAG(SEQ ID NO:6)。
其他转座酶识别序列如下：
Tn5MErev，
5’-[phos]CTGTCTCTTATACACATCT-3’(SEQ ID NO:11)
Tn5ME-A(Illumina FC-121-1030)，
5’-TCGTCGGCAGCGTCAGATGTGTATAAGAGACAG-3’；(SEQ ID NO:12)
和Tn5ME-B(Illumina FC-121-1031)，
5’-GTCTCGTGGGCTCGGAGATGTGTATAAGAGACAG-3’(SEQ ID NO:13)
另外的序列如下：
-有义序列SEQ ID NO:i
-反义序列SEQ ID NO:i+1，
其中i在269至424的范围内。
这意味着，例如，考虑了以下相应的有义和反义序列对：SEQ ID NO:269和SEQ IDNO:270；SEQ ID NO:271和SEQ ID NO:272；SEQ ID NO:273和SEQ ID NO:274；SEQ ID NO:275和SEQ ID NO:276；SEQ ID NO:277和SEQ ID NO:278；SEQ ID NO:279和SEQ ID NO:280；SEQ ID NO:281和SEQ ID NO:282；SEQ ID NO:283和SEQ ID NO:284；SEQ ID NO:285和SEQID NO:286；SEQ ID NO:287和SEQ ID NO:288；SEQ ID NO:289和SEQ ID NO:290；SEQ IDNO:291和SEQ ID NO:292；SEQ ID NO:293和SEQ ID NO:294；SEQ ID NO:295和SEQ ID NO:296；SEQ ID NO:297和SEQ ID NO:298；SEQ ID NO:299和SEQ ID NO:300；SEQ ID NO:301和SEQ ID NO:302；SEQ ID NO:303和SEQ ID NO:304；SEQ ID NO:305和SEQ ID NO:306；SEQID NO:307和SEQ ID NO:308；SEQ ID NO:309和SEQ ID NO:310；SEQ ID NO:311和SEQ IDNO:312；SEQ ID NO:313和SEQ ID NO:314；SEQ ID NO:315和SEQ ID NO:316；SEQ ID NO:317和SEQ ID NO:318；SEQ ID NO:319和SEQ ID NO:320；SEQ ID NO:321和SEQ ID NO:322；SEQ ID NO:323和SEQ ID NO:324；SEQ ID NO:325和SEQ ID NO:326；SEQ ID NO:327和SEQID NO:328；SEQ ID NO:329和SEQ ID NO:330；SEQ ID NO:331和SEQ ID NO:332；SEQ IDNO:333和SEQ ID NO:334；SEQ ID NO:335和SEQ ID NO:336；SEQ ID NO:337和SEQ ID NO:338；SEQ ID NO:339和SEQ ID NO:340；SEQ ID NO:341和SEQ ID NO:342；SEQ ID NO:343和SEQ ID NO:344；SEQ ID NO:345和SEQ ID NO:346；SEQ ID NO:347和SEQ ID NO:348；SEQID NO:349和SEQ ID NO:350；SEQ ID NO:351和SEQ ID NO:352；SEQ ID NO:353和SEQ IDNO:354；SEQ ID NO:355和SEQ ID NO:356；SEQ ID NO:357和SEQ ID NO:358；SEQ ID NO:359和SEQ ID NO:360；SEQ ID NO:361和SEQ ID NO:362；SEQ ID NO:363和SEQ ID NO:364；SEQ ID NO:365和SEQ ID NO:366；SEQ ID NO:367和SEQ ID NO:368、SEQ ID NO:369和SEQID NO:370；SEQ ID NO:371和SEQ ID NO:372；SEQ ID NO:373和SEQ ID NO:374；SEQ IDNO:375和SEQ ID NO:376；SEQ ID NO:377和SEQ ID NO:378；SEQ ID NO:379和SEQ ID NO:380；SEQ ID NO:381和SEQ ID NO:382；SEQ ID NO:383和SEQ ID NO:384；SEQ ID NO:385和SEQ ID NO:386；SEQ ID NO:387和SEQ ID NO:388；SEQ ID NO:389和SEQ ID NO:390；SEQID NO:391和SEQ ID NO:392；SEQ ID NO:393和SEQ ID NO:394；SEQ ID NO:395和SEQ IDNO:396；SEQ ID NO:397和SEQ ID NO:398；SEQ ID NO:399和SEQ ID NO:400；SEQ ID NO:401和SEQ ID NO:402；SEQ ID NO:403和SEQ ID NO:404；SEQ ID NO:405和SEQ ID NO:406；SEQ ID NO:407和SEQ ID NO:408；SEQ ID NO:409和SEQ ID NO:410；SEQ ID NO:411和SEQID NO:412；SEQ ID NO:413和SEQ ID NO:414；SEQ ID NO:415和SEQ ID NO:416；SEQ IDNO:417和SEQ ID NO:418；SEQ ID NO:419和SEQ ID NO:420；SEQ ID NO:421和SEQ ID NO:422；SEQ ID NO:423和SEQ ID NO:424；
有利地，第一分子的第一富G/C结构域对应于以下序列GG CGATCGC(SEQ ID NO:425)，使得第二富G/C结构域是相同的。事实上，由于分子折叠到其自身上，第二富G/C结构域相对于第一富G/C结构域处于互补和反向平行的方向，并且相互作用发生在回文区(上文序列中的下划线)。
第一富G/C结构域和第二富G/C结构域也可以是以下序列GCG GCGATCGGC(SEQ IDNO:426)。上文的解释经适当修改后适用。
其他富G/C结构域序列可以如下：
-序列GGTCGC(SEQ ID NO:427)的第一富G/C结构域和序列GCGACC(SEQ ID NO:428)的第二富G/C结构域。
这些示施仅以举例说明的方式给出并且不限制本发明的范围。
在一个有利的实施方案中，所述复合物的第一分子的富A/T序列基本上由A或T组成或由A或T组成。
甚至更有利地，所述复合物的第一分子的富A/T序列由T组成。
甚至更有利地，前述复合物使得其包含对应于第一分子的以下序列：
5’-TGCAGCTGCTGTCTCTTATACACATCTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTGGCGATCGCTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTXTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTGCGATCGCCTTTTTTTTTTTTTTTTGATACATGTTTA GATGTGTATAAGAGACAGCTGTAAGC-3’(SEQ ID NO:7)，
其中X表示无核苷酸、两个核苷酸或至少一个限制性位点。
第一转座酶结合位点用两侧表示，并且第二转座酶结合位点用下划线表示。
甚至更有利地，前述复合物使得其包含对应于第二分子的以下序列：
5’-AGATGTGTATAAGAGACAGCAGCTGCAGACAAAGCTTACAGCTGTCTCTTATACACATCTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTcatatgccaagt Y-3’(SEQ ID NO:8)
其中Y表示无核苷酸、两个核苷酸或至少一个限制性位点。
第一转座酶结合位点用两侧表示，并且第二转座酶结合位点用下划线表示。
有利地，前述复合物使得其包含对应于第一分子的以下序列：
5’-ATCATCCTGTCTCTTATACACATCTTTTTTTTTTTTTTTTTTGATAGTAGCTGTCTCTTATACAC ATCTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTGGCGATCGCTTTTTTTTTTTTTTTTXTTTTTTTTTTTTTTTTGCGATCGCCTTTTTTTTTTTTTGATACATTTAGATGTGTATAAGAGACAG GATGAT-3’(SEQ ID NO:9)
其中X表示无核苷酸、两个核苷酸或至少一个限制性位点。
第一转座酶结合位点和第二转座酶结合位点的互补序列用下划线表示，并且第一转座酶结合位点用斜体和下划线表示。
在该实施方案中，前述复合物使得其包含对应于第二分子的以下序列：
5’-YacttggTTAATTAATTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTAGATGTGTATAAGAGACAGCTACTATC-3’(SEQ ID NO:10)
其中Y表示无核苷酸、两个核苷酸或至少一个限制性位点。
第二转座酶结合位点的互补序列用下划线表示。
有利地，本发明涉及以下复合物：
-序列的第一分子
5’-TGCAGCTGR1TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTGGCGATCGCTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTXTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTGCGATCGCCTTTTTTTTTTTTTTTTGATACATGTTTR2CTGTAAGC-3’(SEQID NO:436)
其中R1是5’-CTGtCTCTTataCAcAtcT(SEQ ID NO:1)，
R2是5’-AgaTgTGtatAAGAGaCAG(SEQ ID NO:2)，
X对应于允许识别靶区域的序列
以及
-包含以下序列的第二分子：
5’-R2CAGCTGCAGACAAAGCTTACAGR1TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTcatatgccaagtY-3’(SEQ ID NO:437)
其中R1是5’-CTGtCTCTTataCAcAtcT(SEQ ID NO:1)，
R2是5’-AgaTgTGtatAAGAGaCAG(SEQ ID NO:2)，
Y对应于无核苷酸，或对应于靶区域的替换序列。
这意味着，复合物由以下序列的分子组成：
5’-TGCAGCTGCTGtCTCTTataCAcAtcTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTGGCGATCGCTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTXTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTGCGATCGCCTTTTTTTTTTTTTTTTGATACATGTTTAgaTgTGtatAAGAGaCAG CTGTAAGC-3’(SEQ ID NO:438)
以及
5’-AgaTgTGtatAAGAGaCAGCAGCTGCAGACAAAGCTTACAGCTGtCTCTTataCAcAtcTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTcatatgccaagtY-3’(SEQ ID NO:439)
或者X和Y如上文所定义。
有利地，本发明涉及以下复合物：
-序列的第一分子
5’-ATCATCR1TTTTTTTTTTTTTTTTTGATAGTAGR1TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTGGCGATCGCTTTTTTTTTTTTTTTTXTTTTTTTTTTTTTTTTGCGATCGCCTTTTTTTTTTTTTGATACATTTR2GATGAT-3’(SEQ ID NO:641)
其中R1是5’-CTGtCTCTTataCAcAtcT(SEQ ID NO:1)，
R2是5’-AgaTgTGtatAAGAGaCAG(SEQ ID NO:2)，
X对应于允许识别靶区域的序列
以及
-包含以下序列的第二分子：
5’-YacttggTTAATTAATTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTR2CTACTATC-3’(SEQ ID NO:642)
其中R1是5’-CTGtCTCTTataCAcAtcT(SEQ ID NO:1)，
R2是5’-AgaTgTGtatAAGAGaCAG(SEQ ID NO:2)，
Y对应于无核苷酸，或对应于靶区域的替换序列。
有利地，本发明涉及以下复合物：
-序列的第一分子
5’-TGCAGCTGR2TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTGGCGATCGCTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTXTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTGCGATCGCCTTTTTTTTTTTTTTTTGATACATGTTTR2CTGTAAGC-3’(SEQID NO:643)
其中R1是5’-CTGtCTCTTataCAcAtcT(SEQ ID NO:1)，
R2是5’-AgaTgTGtatAAGAGaCAG(SEQ ID NO:2)，
X对应于允许识别靶区域的序列
以及
-包含以下序列的第二分子：
5’-R1CAGCTGCAGACAAAGCTTACAGR1TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTcatatgccaagtY-3’(SEQ ID NO:644)
其中R1是5’-CTGtCTCTTataCAcAtcT(SEQ ID NO:1)，
R2是5’-AgaTgTGtatAAGAGaCAG(SEQ ID NO:2)，
Y对应于无核苷酸，或对应于靶区域的替换序列。
有利地，本发明涉及以下复合物：
-序列的第一分子
5’-ATCATCR2TTTTTTTTTTTTTTTTTGATAGTAGR2TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTGGCGATCGCTTTTTTTTTTTTTTTTXTTTTTTTTTTTTTTTTGCGATCGCCTTTTTTTTTTTTTGATACATTTR1GATGAT-3’(SEQ ID NO:645)
其中R1是5’-CTGtCTCTTataCAcAtcT(SEQ ID NO:1)，
R2是5’-AgaTgTGtatAAGAGaCAG(SEQ ID NO:2)，
X对应于允许识别靶区域的序列
以及
-包含以下序列的第二分子：
5’-YacttggTTAATTAATTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTR1CTACTATC-3’(SEQ ID NO:646)
其中R1是5’-CTGtCTCTTataCAcAtcT(SEQ ID NO:1)，
R2是5’-AgaTgTGtatAAGAGaCAG(SEQ ID NO:2)，
Y对应于无核苷酸，或对应于靶区域的替换序列。
有利地，前述复合物由以下序列对组成：
[表2]
换句话说，本发明有利地涉及一种前述复合物，该复合物包含第一分子和第二分子对，所述第一分子和第二分子包含以下相应序列：
-SEQ ID NO:440和SEQ ID NO:441，其中R1是序列SEQ ID NO:n中的任一个，n是范围为269至424的偶数，并且R2是序列SEQ ID NO:n+1中的任一个，n是范围为269至424的与R1的偶数相同的偶数，
-SEQ ID NO:440和SEQ ID NO:441，其中R1是序列SEQ ID NO:n中的任一个，n是范围为269至424的奇数，并且R2是序列SEQ ID NO:n-1中的任一个，n是范围为269至424的与R1的奇数相同的奇数，
-SEQ ID NO:440和SEQ ID NO:442，其中R1是序列SEQ ID NO:n中的任一个，n是范围为269至424的偶数，并且R2是序列SEQ ID NO:n+1中的任一个，n是范围为269至424的与R1的偶数相同的偶数，
-SEQ ID NO:440和SEQ ID NO:442，其中R1是序列SEQ ID NO:n中的任一个，n是范围为269至424的奇数，并且R2是序列SEQ ID NO:n-1中的任一个，n是范围为269至424的与R1的奇数相同的奇数，
-SEQ ID NO:440和SEQ ID NO:443，其中R1是序列SEQ ID NO:n中的任一个，n是范围为269至424的偶数，并且R2是序列SEQ ID NO:n+1中的任一个，n是范围为269至424的与R1的偶数相同的偶数，
-SEQ ID NO:440和SEQ ID NO:443，其中R1是序列SEQ ID NO:n中的任一个，n是范围为269至424的奇数，并且R2是序列SEQ ID NO:n-1中的任一个，n是范围为269至424的与R1的奇数相同的奇数，
-SEQ ID NO:444和SEQ ID NO:445，其中R1是序列SEQ ID NO:n中的任一个，n是范围为269至424的偶数，并且R2是序列SEQ ID NO:n+1中的任一个，n是范围为269至424的与R1的偶数相同的偶数，
-SEQ ID NO:444和SEQ ID NO:445，其中R1是序列SEQ ID NO:n中的任一个，n是范围为269至424的奇数，并且R2是序列SEQ ID NO:n-1中的任一个，n是范围为269至424的与R1的奇数相同的奇数，
-SEQ ID NO:444和SEQ ID NO:446，其中R1是序列SEQ ID NO:n中的任一个，n是范围为269至424的偶数，并且R2是序列SEQ ID NO:n+1中的任一个，n是范围为269至424的与R1的偶数相同的偶数，
-SEQ ID NO:444和SEQ ID NO:446，其中R1是序列SEQ ID NO:n中的任一个，n是范围为269至424的奇数，并且R2是序列SEQ ID NO:n-1中的任一个，n是范围为269至424的与R1的奇数相同的奇数，
-SEQ ID NO:444和SEQ ID NO:447，其中R1是序列SEQ ID NO:n中的任一个，n是范围为269至424的偶数，并且R2是序列SEQ ID NO:n+1中的任一个，n是范围为269至424的与R1的偶数相同的偶数，
-SEQ ID NO:444和SEQ ID NO:447，其中R1是序列SEQ ID NO:n中的任一个，n是范围为269至424的奇数，并且R2是序列SEQ ID NO:n-1中的任一个，n是范围为269至424的与R1的奇数相同的奇数，
-SEQ ID NO:448和SEQ ID NO:445，其中R1是序列SEQ ID NO:n中的任一个，n是范围为269至424的偶数，并且R2是序列SEQ ID NO:n+1中的任一个，n是范围为269至424的与R1的偶数相同的偶数，
-SEQ ID NO:448和SEQ ID NO:445，其中R1是序列SEQ ID NO:n中的任一个，n是范围为269至424的奇数，并且R2是序列SEQ ID NO:n-1中的任一个，n是范围为269至424的与R1的奇数相同的奇数，
-SEQ ID NO:448和SEQ ID NO:446，其中R1是序列SEQ ID NO:n中的任一个，n是范围为269至424的偶数，并且R2是序列SEQ ID NO:n+1中的任一个，n是范围为269至424的与R1的偶数相同的偶数，
-SEQ ID NO:448和SEQ ID NO:446，其中R1是序列SEQ ID NO:n中的任一个，n是范围为269至424的奇数，并且R2是序列SEQ ID NO:n-1中的任一个，n是范围为269至424的与R1的奇数相同的奇数，
-SEQ ID NO:448和SEQ ID NO:447，其中R1是序列SEQ ID NO:n中的任一个，n是范围为269至424的偶数，并且R2是序列SEQ ID NO:n+1中的任一个，n是范围为269至424的与R1的偶数相同的偶数，
-SEQ ID NO:448和SEQ ID NO:447，其中R1是序列SEQ ID NO:n中的任一个，n是范围为269至424的奇数，并且R2是序列SEQ ID NO:n-1中的任一个，n是范围为269至424的与R1的奇数相同的奇数，
-SEQ ID NO:449和SEQ ID NO:445，其中R1是序列SEQ ID NO:n中的任一个，n是范围为269至424的偶数，并且R2是序列SEQ ID NO:n+1中的任一个，n是范围为269至424的与R1的偶数相同的偶数，
-SEQ ID NO:449和SEQ ID NO:445，其中R1是序列SEQ ID NO:n中的任一个，n是范围为269至424的奇数，并且R2是序列SEQ ID NO:n-1中的任一个，n是范围为269至424的与R1的奇数相同的奇数，
-SEQ ID NO:449和SEQ ID NO:446，其中R1是序列SEQ ID NO:n中的任一个，n是范围为269至424的偶数，并且R2是序列SEQ ID NO:n+1中的任一个，n是范围为269至424的与R1的偶数相同的偶数，
-SEQ ID NO:449和SEQ ID NO:446，其中R1是序列SEQ ID NO:n中的任一个，n是范围为269至424的奇数，并且R2是序列SEQ ID NO:n-1中的任一个，n是范围为269至424的与R1的奇数相同的奇数，
-SEQ ID NO:449和SEQ ID NO:447，其中R1是序列SEQ ID NO:n中的任一个，n是范围为269至424的偶数，并且R2是序列SEQ ID NO:n+1中的任一个，n是范围为269至424的与R1的偶数相同的偶数，
-SEQ ID NO:449和SEQ ID NO:447，其中R1是序列SEQ ID NO:n中的任一个，n是范围为269至424的奇数，并且R2是序列SEQ ID NO:n-1中的任一个，n是范围为269至424的与R1的奇数相同的奇数，
-SEQ ID NO:450和SEQ ID NO:451，其中R1是序列SEQ ID NO:n中的任一个，n是范围为269至424的偶数，并且R2是序列SEQ ID NO:n+1中的任一个，n是范围为269至424的与R1的偶数相同的偶数，
-SEQ ID NO:450和SEQ ID NO:451，其中R1是序列SEQ ID NO:n中的任一个，n是范围为269至424的奇数，并且R2是序列SEQ ID NO:n-1中的任一个，n是范围为269至424的与R1的奇数相同的奇数，
-SEQ ID NO:450和SEQ ID NO:452，其中R1是序列SEQ ID NO:n中的任一个，n是范围为269至424的偶数，并且R2是序列SEQ ID NO:n+1中的任一个，n是范围为269至424的与R1的偶数相同的偶数，
-SEQ ID NO:450和SEQ ID NO:452，其中R1是序列SEQ ID NO:n中的任一个，n是范围为269至424的奇数，并且R2是序列SEQ ID NO:n-1中的任一个，n是范围为269至424的与R1的奇数相同的奇数，
-SEQ ID NO:450和SEQ ID NO:453，其中R1是序列SEQ ID NO:n中的任一个，n是范围为269至424的偶数，并且R2是序列SEQ ID NO:n+1中的任一个，n是范围为269至424的与R1的偶数相同的偶数，
-SEQ ID NO:450和SEQ ID NO:453，其中R1是序列SEQ ID NO:n中的任一个，n是范围为269至424的奇数，并且R2是序列SEQ ID NO:n-1中的任一个，n是范围为269至424的与R1的奇数相同的奇数，
-SEQ ID NO:454和SEQ ID NO:451，其中R1是序列SEQ ID NO:n中的任一个，n是范围为269至424的偶数，并且R2是序列SEQ ID NO:n+1中的任一个，n是范围为269至424的与R1的偶数相同的偶数，
-SEQ ID NO:454和SEQ ID NO:451，其中R1是序列SEQ ID NO:n中的任一个，n是范围为269至424的奇数，并且R2是序列SEQ ID NO:n-1中的任一个，n是范围为269至424的与R1的奇数相同的奇数，
-SEQ ID NO:454和SEQ ID NO:452，其中R1是序列SEQ ID NO:n中的任一个，n是范围为269至424的偶数，并且R2是序列SEQ ID NO:n+1中的任一个，n是范围为269至424的与R1的偶数相同的偶数，
-SEQ ID NO:454和SEQ ID NO:452，其中R1是序列SEQ ID NO:n中的任一个，n是范围为269至424的奇数，并且R2是序列SEQ ID NO:n-1中的任一个，n是范围为269至424的与R1的奇数相同的奇数，
-SEQ ID NO:454和SEQ ID NO:453，其中R1是序列SEQ ID NO:n中的任一个，n是范围为269至424的偶数，并且R2是序列SEQ ID NO:n+1中的任一个，n是范围为269至424的与R1的偶数相同的偶数，
-SEQ ID NO:454和SEQ ID NO:453，其中R1是序列SEQ ID NO:n中的任一个，n是范围为269至424的奇数，并且R2是序列SEQ ID NO:n-1中的任一个，n是范围为269至424的与R1的奇数相同的奇数，
-SEQ ID NO:455和SEQ ID NO:451，其中R1是序列SEQ ID NO:n中的任一个，n是范围为269至424的偶数，并且R2是序列SEQ ID NO:n+1中的任一个，n是范围为269至424的与R1的偶数相同的偶数，
-SEQ ID NO:455和SEQ ID NO:451，其中R1是序列SEQ ID NO:n中的任一个，n是范围为269至424的奇数，并且R2是序列SEQ ID NO:n-1中的任一个，n是范围为269至424的与R1的奇数相同的奇数，
-SEQ ID NO:455和SEQ ID NO:452，其中R1是序列SEQ ID NO:n中的任一个，n是范围为269至424的偶数，并且R2是序列SEQ ID NO:n+1中的任一个，n是范围为269至424的与R1的偶数相同的偶数，
-SEQ ID NO:455和SEQ ID NO:452，其中R1是序列SEQ ID NO:n中的任一个，n是范围为269至424的奇数，并且R2是序列SEQ ID NO:n-1中的任一个，n是范围为269至424的与R1的奇数相同的奇数，
-SEQ ID NO:455和SEQ ID NO:453，其中R1是序列SEQ ID NO:n中的任一个，n是范围为269至424的偶数，并且R2是序列SEQ ID NO:n+1中的任一个，n是范围为269至424的与R1的偶数相同的偶数，
-SEQ ID NO:455和SEQ ID NO:453，其中R1是序列SEQ ID NO:n中的任一个，n是范围为269至424的奇数，并且R2是序列SEQ ID NO:n-1中的任一个，n是范围为269至424的与R1的奇数相同的奇数，
-SEQ ID NO:456和SEQ ID NO:451，其中R1是序列SEQ ID NO:n中的任一个，n是范围为269至424的偶数，并且R2是序列SEQ ID NO:n+1中的任一个，n是范围为269至424的与R1的偶数相同的偶数，
-SEQ ID NO:456和SEQ ID NO:451，其中R1是序列SEQ ID NO:n中的任一个，n是范围为269至424的奇数，并且R2是序列SEQ ID NO:n-1中的任一个，n是范围为269至424的与R1的奇数相同的奇数，
-SEQ ID NO:456和SEQ ID NO:452，其中R1是序列SEQ ID NO:n中的任一个，n是范围为269至424的偶数，并且R2是序列SEQ ID NO:n+1中的任一个，n是范围为269至424的与R1的偶数相同的偶数，
-SEQ ID NO:456和SEQ ID NO:452，其中R1是序列SEQ ID NO:n中的任一个，n是范围为269至424的奇数，并且R2是序列SEQ ID NO:n-1中的任一个，n是范围为269至424的与R1的奇数相同的奇数，
-SEQ ID NO:456和SEQ ID NO:453，其中R1是序列SEQ ID NO:n中的任一个，n是范围为269至424的偶数，并且R2是序列SEQ ID NO:n+1中的任一个，n是范围为269至424的与R1的偶数相同的偶数，
-SEQ ID NO:456和SEQ ID NO:453，其中R1是序列SEQ ID NO:n中的任一个，n是范围为269至424的奇数，并且R2是序列SEQ ID NO:n-1中的任一个，n是范围为269至424的与R1的奇数相同的奇数，
-SEQ ID NO:457和SEQ ID NO:451，其中R1是序列SEQ ID NO:n中的任一个，n是范围为269至424的偶数，并且R2是序列SEQ ID NO:n+1中的任一个，n是范围为269至424的与R1的偶数相同的偶数，
-SEQ ID NO:457和SEQ ID NO:451，其中R1是序列SEQ ID NO:n中的任一个，n是范围为269至424的奇数，并且R2是序列SEQ ID NO:n-1中的任一个，n是范围为269至424的与R1的奇数相同的奇数，
-SEQ ID NO:457和SEQ ID NO:452，其中R1是序列SEQ ID NO:n中的任一个，n是范围为269至424的偶数，并且R2是序列SEQ ID NO:n+1中的任一个，n是范围为269至424的与R1的偶数相同的偶数，
-SEQ ID NO:457和SEQ ID NO:452，其中R1是序列SEQ ID NO:n中的任一个，n是范围为269至424的奇数，并且R2是序列SEQ ID NO:n-1中的任一个，n是范围为269至424的与R1的奇数相同的奇数，
-SEQ ID NO:457和SEQ ID NO:453，其中R1是序列SEQ ID NO:n中的任一个，n是范围为269至424的偶数，并且R2是序列SEQ ID NO:n+1中的任一个，n是范围为269至424的与R1的偶数相同的偶数，
-SEQ ID NO:457和SEQ ID NO:453，其中R1是序列SEQ ID NO:n中的任一个，n是范围为269至424的奇数，并且R2是序列SEQ ID NO:n-1中的任一个，n是范围为269至424的与R1的奇数相同的奇数，
-SEQ ID NO:458和SEQ ID NO:459，其中R1是序列SEQ ID NO:n中的任一个，n是范围为269至424的偶数，并且R2是序列SEQ ID NO:n+1中的任一个，n是范围为269至424的与R1的偶数相同的偶数，
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有利地，本发明涉及前述复合物，所述复合物包含下表4的300对第一分子和第二分子中的一对：
[表4]
在另一个方面，本发明涉及一种集合体(ensemble)，其包含
-第一单链核酸分子，该第一单链核酸分子包含允许将所关注核酸的互补序列插入的A序列或基本上由该A序列组成，或者包含所关注核酸的互补序列，所述互补A序列在5’处与长度为40个至60个核苷酸的第一富A/T尤其是富T序列结合，并且在3’处与长度为40个至60个核苷酸的第二富A/T尤其是富T序列结合，所述第一富A/T尤其是富T序列和第二富A/T尤其是富T序列分别包含6个至12个富G/C核苷酸的第一结构域和第二结构域，该第一结构域的序列与该第二结构域的序列互补，所述第一结构域和第二结构域定位在距所述A序列15个至52个核苷酸处，所述第一分子在其5’末端处包含用于识别转座酶的5’至3’定向的第一序列，并且在其3’末端处包含用于识别所述转座酶的至少一个第二序列，
-第二单链核酸分子，该第二单链核酸分子包含允许将所关注核酸的互补序列插入的B序列或基本上由该B序列组成，或者包含所关注核酸的互补序列，所述互补B序列在5’处与长度为40个至60个核苷酸的第三富T序列结合，并且在3’处与长度为40个至60个核苷酸的第四富T序列结合，所述第三富T序列和第四富T序列分别包含6个至12个富G/C核苷酸的第三结构域和第四结构域，该第三结构域的序列与该第四结构域的序列互补，所述第三结构域和第四结构域定位在距所述B序列15个至52个核苷酸处，所述第二分子在其5’末端处包含用于识别所述转座酶的5’至3’定向的至少一个第一序列，并且在其3’末端处包含用于识别所述转座酶的第二序列，
所述B序列是所述所关注核酸的互补序列，该A序列定位在所述所关注核酸的所关注区域的5’处，并且该B序列定位在所述所关注核酸的所关注区域的3’处，以及
-第三单链分子，该第三单链分子包含：
在其5’部分中，(第一分子的)用于识别所述转座酶的所述第二序列的至少一个互补序列，
在其3’部分中，(第二分子的)用于识别所述转座酶的所述第一序列的至少一个互补序列，以及
-位于(第一分子的)用于识别所述转座酶的所述第二序列的互补序列与(第二分子的)用于识别所述转座酶的所述第一序列的互补序列之间的区域，该区域允许将替换核酸分子(单链)插入，
该第一单链核酸分子和第三单链核酸分子根据由沃森和克里克定义的碱基互补性来配对，以便限定所述转座酶的两个双链结合位点，并且该第二单链核酸分子和第三单链核酸分子根据由沃森和克里克定义的碱基互补性来配对，以便限定所述转座酶的两个双链结合位点。
因此，前述集合体包含上文所述的分子复合物。另外，上文针对分子复合物描述的所有实施方案和技术细节经适当修改后适用于前述集合体。
在本发明的这个方面，描述了一种三个分子的集合体，其使得可以用选定的序列精确地替换所关注核酸中包含的序列。
根据本发明的集合体基于上述复合物，该复合物补充有类似于第一分子的第三分子。[图8]示意性地示出了根据本发明的集合体。
该复合物的第一分子对应于该集合体的第一分子，该复合物的第二分子对应于该集合体的第三分子，并且该集合体的第三分子被添加并且在结构上类似于该集合体或该复合物的第一分子。
当三个分子正确配对时，根据本发明的集合体包含两对转座酶识别双链结合位点：
-第一对是通过第一分子与第三分子杂交获得的，并且
-第二对是通过第二分子与第三分子杂交获得的。
该集合体的第一分子中包含的A序列与核酸的相同链互补，该链与第二分子中包含的B序列互补。换句话说，第一分子中包含的A序列和第二分子中包含的B序列能够同时与相同的核酸杂交，因为这两个序列A和B不识别相同的序列。
为了进一步阐明这些论点，本发明中定义的集合体的目标是提出第一分子和第二分子，二者均如上文所定义，相应的序列A和B使得它们能够识别位于所关注核酸的靶序列的5’处的序列(对于一者)和位于所关注核酸的相同靶序列的3’处的序列(对于另一者)。因此，序列A和B与所关注核酸分子中待替换的与所关注序列邻接的区域互补。
因此，第一所关注分子和第二所关注分子对于特异性靶向所关注分子，以位于待替换的序列的两侧是必不可少的。
集合体的第三分子进而是提供含有替换序列的核酸分子的分子。
从机理的角度来看，根据本发明的集合体使得其由其三个分子组成，第一分子和第二分子在空间中在结构上是有组织的，使得它们的富G/C区域是成对的。
在第三分子的任一侧，即在5’和3’处，由于与第一分子和第二分子杂交，当转座酶存在时，两对用于与转座酶结合的位点允许转座酶二聚体与该集合体结合。
应注意，第一分子的转座酶结合位点可以与第二分子的转座酶结合位点相同或不同。在结合序列相同的情况下，第三分子的5’处的转座酶(通过第三分子的5’部分与第一分子的杂交)和第三分子的3’处的转座酶(通过第三分子的3’部分与第二分子的杂交)是相同的。另外，举例来说，如果结合位点都是用于Tn5转座酶的结合位点，则该集合体与两个Tn5转座酶二聚体相关联。
第一分子和第二分子的结合位点也有可能不识别相同的转座酶。在这种情况下，根据上文给出的集合体的定义，第三分子的5’部分通过与第一分子杂交形成用于与第一转座酶结合的两个双链位点，并且第三分子的3’部分通过与第二分子杂交形成用于与第二转座酶结合的两个双链位点。
如果与两个转座酶二聚体连接的前述集合体接下来被带入所关注核酸分子的存在，该分子的5’部分与该集合体的第一分子的A序列互补并且其3’部分与该集合体的第二分子的B序列互补，则所关注核酸在上述区域A和B处与该集合体配对。这种相互作用具有破坏该集合体的第一分子和第二分子中每一者的两个富G/C序列的相互作用的结果。因此，第三分子和所关注核酸分子在空间上移动得更靠近在一起，并且转座酶可以发挥其标签化活性，其结果是以序列A和B的互补序列为边界的所关注分子的序列被该集合体的第三分子的序列替换，该序列位于5’和3’处用于与转座酶结合的半位点之间。
在本发明中，该集合体的第一分子、第二分子和第三分子有利地是由脱氧核糖核苷酸组成的分子，以形成单链DNA分子。
甚至更有利地，该集合体的第一分子、第二分子和第三分子是杂合DNA/RNA分子，其中该分子的“主链”是DNA，并且所关注核酸分子的识别序列A和B以及第三分子的中心区域是RNA。当直接在RNA分子上进行本发明所需的序列替换时，这是特别有利的。
[图9]-A示出了所关注分子与根据本发明的集合体之间的相互作用。
有利地，本发明涉及前述复合物，其中所述第一分子或所述第二分子或这两种分子都与酶偶联，尤其是经由经修饰的核苷酸而偶联。这种酶旨在促进所关注分子的替换。这种酶可以是
-解旋酶，一种能够打开超卷曲的或甚至与蛋白质(诸如组蛋白)缔合的双链分子的酶，
-拓扑异构酶，一种通过产生瞬时断裂而作用于DNA拓扑结构的酶，
-连接酶，其使得可以在核苷酸的磷酸5’末端与另一核苷酸的OH 3’末端之间形成磷酸二酯键，-聚合酶，其从起始位点(游离OH 3’)以5’至3’方向合成核酸分子，尤其是通过根据沃森和克里克模型拷贝一条反平行互补链。
也可以将两种或更多种所述酶组合，以便获得实现本发明范围内考虑的序列替换所需的所有酶促材料。
在一个特定的方面，该集合体的第一分子可以在其5’部分中(更精确地在第一转座酶结合位点与A区之间)含有一个或多个经修饰的核苷酸。以相同的方式，该集合体的第三分子可以在其3’部分中(更精确地在第一转座酶结合位点与3区之间)含有一个或多个经修饰的核苷酸。
这种经修饰的核苷酸尤其是通过将经取代的碳链与蛋白质标签或其他能够进行特异性相互作用的分子(诸如链霉亲和素或生物素)进行接枝而修饰的。
然后，此类修饰使得可以将可用于促进标签化和序列替换的酶特异性地结合至该集合体的第一分子。特别有利的是，具有例如链霉亲和素接枝，其使得可以接枝用于打开双链分子的生物素化解旋酶(或相反地，接枝到链霉亲和素和生物素化核苷酸的解旋酶)。还可以考虑用生物素化连接酶(或与链霉亲和素偶联的连接酶)进行接枝，以在3’侧上连接重组链。
还可以将寡核苷酸与集合体的第一分子或第二分子缔合，使得所述寡核苷酸在所述第一或第二分子的预定区域上配对。然后，该寡核苷酸有利地与上文所解释的接枝分子偶联。
上述集合体适用于单链序列替换，诸如例如单链DNA分子或RNA上的序列的替换。
为了替换双链分子的两条链，则在前述集合体中使用两个是有用的，这两个集合体使得
-第一集合体包含如上文所定义的第一分子、第二分子和第三分子，
-第二集合体包含第四序列、第五序列和第六序列，
因此：
-第三序列和第六序列各自包含替换序列的一条链，这些序列根据沃森和克里克配对是互补的；
-第一序列和第四序列在A区和A’区(A’区相当于第一分子的A区的第四分子)中包含分别识别待替换区域的5’部分和待替换区域的互补链的3’部分的序列，并且
-第二序列和第五序列在B区和B’区(B’区相当于第二分子的B区的第五分子)中包含分别识别待替换区域的3’部分和待替换区域的互补链的5’部分的序列，
然后在[图10]-A中描绘该双重复合物或该双重集合体。
有利地，本发明涉及前述集合体，所述集合体包含下表5的300对第一分子和第三分子中的一对：
[表5]
在又另一个方面，本发明涉及一种试剂盒或套组，其包含至少一种允许表达重组酶和如上文所定义的集合体的第一分子、第二分子和第三分子的载体。
试剂盒由包含集合体的三个分子的一个容器组成，或由几个分开的容器组成。
前述试剂盒中包含的转座酶是能够识别通过复合物的第一分子与第三分子之间、和/或复合物的第二分子与第三分子之间的相互作用而形成的结合位点的转座酶。
在复合物使得其含有两个用于不同转座酶的结合位点的情况下，则试剂盒包含两个不同的载体，这两个不同的载体各自编码转座酶之一。
如上文所讨论的，试剂盒还可以进一步含有其他酶，诸如例如解旋酶或连接酶。
根据本发明的试剂盒有利地包含形成如上文所定义的两个集合体所需要的物质。
本发明还涉及如上文所定义的集合体用于核酸工程化(尤其是用于用所关注的序列替换靶序列)的用途。前述用途尤其受到以下限制：其不包括用于修改人类种系遗传同一性的方法和/或所述用途不是用于通过手术或疗法治疗人类或动物体的方法。
如上文所解释的，通过利用转座酶标签化性质，前述集合体使得可以特异性靶向靶区域并用所关注的序列替换该靶区域。
根据本发明的集合体对于在不同的活生物体中进行靶向基因修饰(并且特别是基因或非编码序列的替换)是尤其有利的，例如在植物体内进行靶向基因修饰以获得经遗传修饰的植物，或在动物体内进行靶向基因修饰以产生人类疾病的模型，或活体治疗工具，从而使得可以测试药物。
此外，本发明涉及前述集合体，其用作药物，更特别地用作基因疗法药物，尤其用于治疗或预防与核酸修饰相关联的疾病。
由于前述集合体允许特定序列的取代，因此可以通过取代、缺失或插入等修饰来设计特异性识别突变基因的第一分子和第二分子，并且可以设计包含所述突变基因的参考野生型序列的第三分子。
另外，在合适的转座酶的存在下，可以用野生型序列替换突变基因的序列，从而治疗患有由所述基因的突变引起的疾病的个体。
本发明还涉及前述复合物在制备药物中的用途，该药物用于治疗或预防与核酸修饰相关联的疾病。
在一些方面，这些药物不旨在修改人类的种系同一性，并且也不旨在造成动物的不正当痛苦。
本发明还涉及一种用于将核酸分子的靶区域用另一核酸分子的所关注区域替换以便获得杂合核酸分子的方法，尤其是体外方法，所述方法包括：
-使上文所定义的集合体与包含靶区域的核酸接触，
所述集合体使得所述第一分子的A序列包含紧接在靶区域的5’处的区域的互补序列，
所述第一分子的B序列包含紧接在靶区域的3’处的区域的互补序列，并且
第三分子在位于第一分子的用于识别所述转座酶的所述第二序列的互补序列与第二分子的用于识别所述转座酶的所述第一序列的互补序列之间的区域中包含所述所关注区域，以便获得替换复合物，
-在识别所述集合体中包含的所述转座酶的双链结合位点的转座酶的存在下放置该替换复合物，以获得重组复合物，以及
-重组该组合复合物，以便获得包含所关注区域而不是靶区域的杂合核酸分子。
应当注意，在替换期间，即通过转座酶进行的标签化期间，替换片段的3’末端通过磷酸二酯键结合至紧接在已被替换的序列之后的序列的5’末端。这种连接发生在标签化期间。
相反，位于所替换序列之前的序列的3’末端和替换链的5’末端彼此不结合。另外，为了完成替换，必须使用连接酶连接这两个末端。
还应当注意，在替换位点处，替换分子在3’和5’处以转座酶识别序列为边界。
单链靶标的替换机制描绘于[图9]中。
在第一步骤中，由分别包含靶序列的5’部分的互补区、靶序列的3’部分的互补区和所关注序列的第一分子、第二分子和第三分子组成的集合体在空间中是有组织的，使得第一分子的富G/C互补区彼此配对，并且第二分子的富G/C互补区配对在一起([图9]-A)。
在存在靶序列的情况下，分别包含在第一分子和第二分子中的靶序列的5’部分和3’部分的互补区与它们相应的互补区配对，从而形成含有靶分子和集合体的三个分子的四分子复合物。第一分子和第二分子与它们的靶标之间的相互作用(或配对)具有破坏富G/C区域的相互作用的作用，使得转座酶二聚体所定位于的转座酶结合位点在空间上靠近靶分子。如[图9]-B所示，转座酶然后可以发挥它们的活性并且切割靶分子和所关注的分子两者(在两个结合位点之间)。
因此，进行标签化以使得
-第三分子的3’末端与靶序列的3’区中由转座酶产生的游离5’末端结合。通过两个末端的连接，该键是共价的，
-第三分子的5’末端与靶序列的5’区中由转座酶产生的游离3’末端相对。九个碱基对的缺失是由靶序列的5’区中的转座酶产生的(在[图9]-C中以虚线圆圈描绘)。为了恢复具有位于初始靶序列的5’和3’区之间的所关注序列的完整分子，连接是必需的。
在5’至3’方向上，由标签化产生的最终分子由以下组成：部分地缺失九个碱基对的初始靶序列的5’区的一部分、随后的第二转座酶结合序列、随后的所关注序列本身、随后的第一转座酶结合序列以及最后的初始靶序列的5’区的一部分。
在又另一个方面，本发明涉及一种用于编辑细胞的基因组的方法，尤其是体外或离体方法，该方法使得可以将所述细胞的所述基因组的双链DNA的特定片段用另一个所关注的双链DNA片段替换，以便获得包含另一个所关注的双链DNA片段而不是双链DNA的特定片段的重组杂合基因组，所述方法包括：
-制备如上文所定义的第一集合体，
其中第一分子的A序列包含特定片段的5’处的相邻区域的互补序列；
其中第二分子的B序列包含特定片段的3’处的相邻区域的互补序列；并且
其中第三分子在位于第一分子的用于识别所述转座酶的所述第二序列的互补序列与第二分子的用于识别所述转座酶的所述第一序列的互补序列之间的区域之间包含所述特定片段的一条链的序列；
-以及任选地制备如上文所定义的第二集合体，
其中第二集合体的第一分子的所述互补区的A序列包含特定片段的5’处的相邻区域的互补序列；
其中第二集合体的第二分子的所述互补区的B序列包含特定片段的3’处的相邻区域的互补序列；并且
其中第二集合体的第三分子在位于第二集合体的第一分子的用于识别所述转座酶的所述第二序列的互补序列与第二集合体的第二分子的用于识别所述转座酶的所述第一序列的互补序列之间的区域之间包含第一集合体的第三序列中包含的所述特定片段的互补链的序列；
其中第一集合体的第一分子的A区中包含的特定片段的5’处的相邻区域的互补序列与第二集合体的第一分子的A区中包含的特定片段的5’处的相邻区域的互补序列最多95％互补；并且
其中第一集合体的第一分子的B区中包含的特定片段的3’处的相邻区域的互补序列与第二集合体的第一分子的B区中包含的特定片段的3’处的相邻区域的互补序列最多95％互补；
以便获得重组复合物；
-使所述细胞与所述重组复合物接触，以便获得准备好进行编辑的细胞，
-在所述准备好进行编辑的细胞中表达所述转座酶，以便获得经编辑的细胞，
-选择经编辑的细胞，其中所述经编辑的细胞的基因组包含另一个所关注的双链DNA片段而不是特定的双链DNA片段，
前提是所述方法不是用于修改人类种系遗传同一性的方法，并且所述方法不是用于通过手术或疗法治疗人类或动物体的方法。
有利地，本发明涉及一种用于编辑细胞的基因组的方法，该方法使得可以将所述细胞的所述基因组的双链DNA的特定片段用另一个所关注的双链DNA片段替换，以便获得包含另一个所关注的双链DNA片段而不是双链DNA的特定片段的重组杂合基因组，所述方法包括：
-制备如上文所定义的第一集合体，
其中第一分子的A序列包含特定片段的5’处的相邻区域的互补序列；
其中第二分子的B序列包含特定片段的3’处的相邻区域的互补序列；并且
其中第三分子在位于第一分子的用于识别所述转座酶的所述第二序列的互补序列与第二分子的用于识别所述转座酶的所述第一序列的互补序列之间的区域之间包含所述特定片段的一条链的序列；
-以及制备如上文所定义的第二集合体，
其中第二集合体的第一分子的所述互补区的A序列包含特定片段的5’处的相邻区域的互补序列；
其中第二集合体的第二分子的所述互补区的B序列包含特定片段的3’处的相邻区域的互补序列；并且
其中第二集合体的第三分子在位于第二集合体的第一分子的用于识别所述转座酶的所述第二序列的互补序列与第二集合体的第二分子的用于识别所述转座酶的所述第一序列的互补序列之间的区域之间包含第一集合体的第三序列中包含的所述特定片段的互补链的序列；
其中第一集合体的第一分子的A区中包含的特定片段的5’处的相邻区域的互补序列与第二集合体的第一分子的A区中包含的特定片段的5’处的相邻区域的互补序列最多95％互补；并且
其中第一集合体的第一分子的B区中包含的特定片段的3’处的相邻区域的互补序列与第二集合体的第一分子的B区中包含的特定片段的3’处的相邻区域的互补序列最多95％互补；
以便获得重组复合物；
-使所述细胞与所述重组复合物接触，以便获得准备好进行编辑的细胞，
-在所述准备好进行编辑的细胞中表达所述转座酶，以便获得经编辑的细胞，
-选择经编辑的细胞，其中所述经编辑的细胞的基因组包含另一个所关注的双链DNA片段而不是特定的双链DNA片段，
前提是所述方法不是用于修改人类种系遗传同一性的方法，并且所述方法不是用于通过手术或疗法治疗人类或动物体的方法。
就该基因组编辑方法基于上文所述的用于替换单分子的方法并使用上文所述的集合体而言，所有先前描述的特征和所有变体经适当修改后适用于本文。
在本发明的这个方面，应当注意，所考虑的集合体(第一或第二)的第一分子始终定位在所考虑的所述集合体的第三分子的5’处。
另外，第一集合体的第一分子位于第二集合体的第二分子“上方”，反之亦然。另外，前述5’至3’定向使得可以相对于靶序列正确地定位所关注的序列。
基因组编辑由以高精度修改细胞的基因组组成。可以使基因失活、引入靶向突变、纠正特定突变或插入新基因。这种遗传工程化技术涉及能够在磷酸二酯键处切割核酸的核酸酶，本文为转座酶。
在本发明的上下文中，并且如先前所解释的，根据本发明的集合体的第一分子和第二分子使得可以将该集合体定位在靶区域处从而位于该靶区域的两侧，以用第三序列中包含的所关注的序列替换该靶区域。
在编辑双链分子的情况下，为了同时替换靶分子的两条链，必须具有根据本发明的两个集合体，每个集合体特异性靶向靶分子的两条链中的一条链。
应当注意，第一集合体的第一分子的A序列中包含的互补序列不与第二集合体的第一分子的A序列中包含的互补序列互补。同样，第一集合体的第二分子的B序列不与第二集合体的第二分子的B序列中包含的互补序列互补。
此外，有利的是，第一集合体的第一分子的A序列中包含的互补序列相对于第一集合体的第二分子的B序列中包含的互补序列偏移，这两个分子中的一个在另一个“上方”。这意味着，用于识别这些互补序列的区域最多为95％。换句话说，如果所述A序列和所述B序列中包含的互补序列含有二十个核苷酸，则这些互补序列仅彼此互补达19个核苷酸。
然而，优选的是，这些互补区的相互互补性尽可能低，或甚至它们不相互互补。
为了清楚地说明这些论点，如果靶序列的5’部分被认为包含40个核苷酸，则适当的是，第一集合体的第一分子的A序列中包含的互补区与靶序列的5’部分的互补序列的前20个核苷酸互补，而第二集合体的第二分子的B序列中包含的互补区与后20个核苷酸互补。
这种偏移，即使序列定向不可能做到，避免了所关注序列的任何错误定向。
在[图10]中描绘了标签化步骤的顺序和结果。
为了获得最终的分子，并且由于在标签化后5’处的九个碱基对的缺失，细胞必须调动修复系统，以填补空隙，尤其是通过使用拷贝互补链的DNA聚合酶，该互补链的3’末端在标签化期间被结合。
附图说明
通过阅读下面的实施例和附图，可以更好地理解本发明：
[图1][图1]是线性形式的第一核酸分子的示意图。带有箭头的矩形描绘了用于与转座酶结合的位点，并且带有斜杠的矩形描绘了富G/C区域。
[图2][图2]是结构化形式的第一核酸分子的示意图。说明文字与[图1]中的相同。
[图3][图3]是根据本发明的复合物的示意图。说明文字与[图1]中的相同。
[图4][图4]是根据本发明的复合物的两个版本的示意图。说明文字与[图1]中的相同。不同的选项用虚线表示。
[图5][图5]是根据本发明的复合物的第一实施方案的示意图。说明文字与[图1]中的相同。
[图6][图6]是根据本发明的复合物的第二实施方案(6A)和第三实施方案(6B)的示意图，或第一序列的3’区包含两个转座酶半位点。说明文字与[图1]中的相同。
[图7][图7]是根据本发明的复合物的第三实施方案的示意图。说明文字与[图1]中的相同。
[图8][图8]是根据本发明的集合体的示意图。说明文字与[图1]中的相同。
[图9][图9]是用所关注的序列替换单链分子的靶序列的某些步骤的顺序的示意图。
A：表示未配对的靶分子和集合体。
B：表示配对的靶分子和集合体。转座酶用虚线表示，并且切割用剪刀表示。应当注意，对集合体的第三分子的切割是在该分子的任一侧上的两个转座酶结合位点之间进行的(两个切割)。
C：表示由标签化产生的分子。所替换区域的5’处九个碱基的缺失用虚线显示。
[图10][图10]是用自身为双链的所关注的序列替换双链分子的靶序列的某些步骤的顺序的示意图。
A：表示未配对的靶分子和集合体。
B：表示配对的靶分子和集合体。转座酶用虚线表示，并且切割用剪刀表示。应当注意，对集合体的第三分子的切割是在该分子的任一侧上的两个转座酶结合位点之间进行的(两个切割)。
C：表示由标签化产生的分子。所替换区域的5’处九个碱基的缺失用虚线显示。
[图11][图11]描绘了示出根据本发明的标签化的琼脂糖凝胶。a.具有三组样品的琼脂糖凝胶；用mCherry-CD9质粒进行的不同转座酶复合物(阴性对照、Tn5 WT、Tn5 Me和Tn5 DREAMT，即根据本发明)的测试、HEK293T总mRNA的PCR扩增和用mCherry-CD9质粒转染的HEK 293T总mRNA的PCR扩增(添加PCR+/-对照)。b.不同转座酶混合物(见a.)在mCherry-CD9质粒上十倍浓缩的琼脂糖凝胶。
[图12][图12]描绘了Tn5 DREAMT混合物的阳性扩增带(凝胶[图10]
a)的Sanger测序结果。给出了获得的序列(SEQ ID NO:429)和对应的色谱图。**表示GFP插入区。GFP序列具有两侧，并且mCherry序列加下划线。
[图13][图13]描绘了具有三组样品的琼脂糖凝胶；用mCherry-CD9质粒进行的不同转座酶复合物(阴性对照、Tn5 WT、Tn5 Me和Tn5 DREAMT)的测试、HEK 293T总cDNA的PCR扩增和用mCherry-CD9质粒转染的HEK 293T总cDNA的PCR扩增(添加PCR+/-对照)。
[图14][图14]示出了Tn5 DREAMT混合物的阳性扩增带(凝胶[图13])的Sanger测序结果。给出了获得的序列(SEQ ID NO:430)和对应的色谱图。**表示GFP插入区。CD9序列具有两侧。
[图15][图15]描绘了具有三组样品的琼脂糖凝胶；用mCherry-CD9质粒进行的不同转座酶复合物(阴性对照、Tn5 WT、Tn5 Me和Tn5 DREAMT)的测试、HEK 293T总cDNA的PCR扩增和用mCherry-CD9质粒转染的HEK 293T总cDNA的PCR扩增(添加PCR+/-对照)。
[图16][图16]示出了Tn5 DREAMT混合物的阳性扩增带(凝胶[图15])的Sanger测序结果。给出了获得的序列(SEQ ID NO:431)和对应的色谱图。**表示GFP插入区。CD9序列具有两侧。
[图17][图17]描绘了“新设计”UVRD-mSA/Tn5/DREAMT复合物在mCherry-CD9质粒上的测试。将mCherry-CD9质粒注射(转染)到HEK 293T细胞中，然后使用DREAMT技术，寻找可见的颜色变化(如图中提到的红色->绿色)
[图18][图18]描绘了根据本发明的技术在稳定表达mCherry-CD9的HEK 293T细胞系中进行的转染，然后寻找可见的颜色变化(如图中提到的红色->绿色)。
[图19][图19]描绘了来自cDNA文库的扩增的GFP片段的Sanger测序结果，该文库源自用“新设计”DREAMT技术转染的HEK 293T细胞的mCherry-CD9+细胞系(在D18上使用的细胞)–SEQ ID NO:432–GFP替换显示为在两侧。序列SEQ ID NO:433描绘了理论上的GFP序列(侧翼部分)。
实施例
实施例1-在体外实施本发明。
本实施例的目的是证实，根据本发明的集合体使得可以容易地且特异性地用所关注的序列替换单链核酸分子(RNA或cDNA)的序列。
在本实施例中，目的是用GFP的序列替换mCherry-CD9的序列。
-制备靶向mCherry-CD9的重组集合体。
制备两个单独的管，其包含：
-对于管1(10μL)：
+10μM的环A寡核苷酸(第一分子)，其在A区中包含用于识别mCherry的序列的序列；
+10μM的寡核苷酸A(第三分子)，其在3’处包含限制性半位点
+反向BSPEi Frag寡核苷酸(10μM)
-对于管2(10μL)，
+10μM的环B寡核苷酸(第二分子)，其在B区中包含用于识别CD9的序列的序列；
+10μM的寡核苷酸A(第三分子)，其在3’处包含限制性半位点
+NdeI Frag寡核苷酸(10μM)。
然后将两个管加热至95℃持续5分钟，再在室温下放置1小时。
一旦在室温下，将管的内容物置于酶NdeI或酶BSPEi的存在下，以允许消化限制性位点。
然后用PCR纯化试剂盒(洗脱20μL)纯化消化产物。
平行地，扩增编码GFP的序列，以便在5’和3’处具有Nde I和BSPEi限制性位点。然后用两种限制酶消化PCR产物，并用PCR纯化试剂盒(洗脱20μL)纯化消化产物。
然后在存在T4噬菌体连接酶(4μL，即100U)的情况下，用5μL T4缓冲液(10X)和1μLddH20将管1和2的内容物与GFP片段(扩增的和消化的)组合，总反应体积为50μL。
然后将溶液在室温下放置1小时，然后进行凝胶纯化，以分离出大于1千碱基(kb)并且在其5’和3’末端处包含两个单链分子(集合体的第一分子和第二分子)的最大GFP片段，以形成重组复合物。
然后，重组复合物准备好与转座酶二聚体一起温育。
在对照中，用MERev片段制备各10μM的MeA和MeB寡核苷酸(先前由S.Picelli等人Genome Res 2014描述)：
Tn5MErev，
5’-[phos]CTGTCTCTTATACACATCT-3’(SEQ ID NO:11)
Tn5ME-A(Illumina FC-121-1030)，
5’-TCGTCGGCAGCGTCAGATGTGTATAAGAGACAG-3’；(SEQ ID NO:12)
和Tn5ME-B(Illumina FC-121-1031)，
5’-GTCTCGTGGGCTCGGAGATGTGTATAAGAGACAG-3’(SEQ ID NO:13)
方法是通过在95℃下配对5分钟，然后在环境温度放置1小时。这些寡核苷酸作为标签化反应的阳性对照是有用的。
关于Tn5转座酶的产生，使用以下出版物的建议来产生：S.Picelli等人Genomeres 2014。
然后将两种先前的制备物(重组复合物和阳性对照寡核苷酸)经由以下方案与产生的Tn5转座酶混合：
0.125体积的10μM重组复合物或对照寡核苷酸溶液(或仅透析缓冲液(参见S.Picelli等人Genome,2014)中所谓的WT野生型Tn5)+0.4体积的100％甘油溶液+0.24体积的透析缓冲液(参见S.Picelli等人Genome res 2014)+0.36体积的Tn5溶液。
然后将反应历经30分钟从45℃降至37℃，在热循环仪中每4分钟降低1℃。
同时，产生了几个靶标，以测试根据本发明的技术。
使用mCherry-CD9质粒作为阴性对照，以及产生源自HEK 293T细胞的mRNA和cDNA文库，这些细胞先前通过lipofectamine 3000用mCherry-CD9载体进行了转染。
在HEK细胞的转染和目视检查(由于mCherry的表达导致的红色膜)后四十八小时，提取总mRNA群体并反转录成cDNA。
然后将这些mRNA或cDNA文库用于我们的DREAMT技术的“管内”测试。
为了表征和测试根据本发明的技术，使不同的mRNA/cDNA和质粒靶标与以下项接触：
-Tn5 WT二聚体：无寡核苷酸，
-Tn5 Me：具有Me寡核苷酸(阳性对照)和
-Tn5复合物：具有根据本发明的集合体。
测试了三种类型的靶标，mCherry-CD9质粒和转染或不转染mCherry-CD9的mRNA或cDNA文库。
使双链或单链DNA/RNA溶液与经由以下反应活化的Tn5的不同溶液接触：
-X或10X浓度的Tn5 WT、Tn5 Me、Tn5复合物溶液或相同体积的ddH20+500ng的mCherry-CD9质粒或2μL的cDNA或mRNA
+5X标签化缓冲液(100mM HEPES、50mM MgCl2、40％ PEG 3500)
+ddH20 Q.S.20μL。
在55℃下在热循环仪中进行各标签化反应，持续7分钟，然后添加0.5μL的蛋白酶K溶液(20μg/μL)，然后在55℃下进行第二次温育，持续7分钟，以灭活转座酶。
因此，如[图11]所示，进行GFP的3’末端向mCherry靶序列的沉降(连接)。
在[图11]中的琼脂糖凝胶上，使mCherry-CD9质粒(Davidson Lab)与两种浓度(X和10X)的Tn5溶液接触。正如预期的那样，在高浓度(10X)下，Tn5 WT混合物和Tn5 Me阳性对照进行了它们的标签化，这表现为质粒的降解(质粒条带模糊、消失)。
此外，正如预期的那样，单独的集合体无法进行标签化(质粒降解)，这表现为DNA条带保留在琼脂糖凝胶上([图11])[因为它不包含用于打开质粒的双链DNA(解旋酶)以与将释放Tn5分子并允许标签化的mCherry-CD9靶标配对的分子]。该数据使得可以通过限制Tn5复合物二聚体来进行推断，该Tn5复合物二聚体仅可以通过将待重组的链与靶单链(本文中为mCherry-CD9 mRNA片段)配对来进行它们的标签化活性。
将相同浓度的Tn5溶液(X)与2μL的mRNA文库(源自正常的或用mCherry-CD9转染的HEK 293T细胞)一起使用。然后用mCherry正向引物和GFP正向引物进行PCR(参见表3)。
表3：用于PCR反应和质粒构建的寡核苷酸
[表3]
正如预期的那样，对于从没有mCherry-CD9载体转染的细胞获得的mRNA文库，没有检测到信号。此外，对于阴性对照(单独的mRNA片段、mRNA+Tn5 WT、mRNA+Tn5 Me)和转染了mCherry-CD9的mRNA文库的样品，同样没有检测到扩增。然而，在相同批次的样品中，对于对应于用GFP序列(Tn5复合物)替换mCherry-CD9的样品，在正确分子量≈1kb处检测到清晰条带([图11])。该条带突出了mCherry 3’末端(反义mRNA)的切割以及GFP 3’末端(有义链)的插入，或者换句话说，mCherry mRNA反义链以3’至5’方向连接至GFP有义链。
对扩增产物进行测序，得到的序列如[图12]所示。正如预期的那样，通过检测通过连接方式连接的两个序列，检测到mCherry向GFP 3’侧的扩增。该测序的色谱图清楚地示出了来自靶序列的10bp处的沉降区(标签化)([图12])。
重复相同的分析，但这次改变连接至cDNA有义链的3’侧：CD9的设计([图12])。因此，对于具有mCherry-CD9转染并与根据本发明的集合体(Tn5复合物)接触的cDNA文库，使用显示出朝向≈1kb的预期条带的扩增凝胶获得了相同的结果([图13])，并对获得的片段进行测序([图14])。正如预期的那样，该测序使得可以鉴定沉淀的cDNA的CD9有义链的序列与GFP 5’侧有义链的多个序列(在GFP有义序列的3’处连接；[图14])，在距靶序列5bp处。
实施例2–在细胞中实施本发明
由于这些令人鼓舞的结果，对设计进行了修改，以便获得与Tn5质粒和链打开蛋白、UVRD细菌解旋酶的质粒的集合体的直接转染相容的版本，该细菌解旋酶的质粒与单体链霉亲和素(UVRD-mSA质粒)融合，使得后者经由先前生物素化的寡核苷酸原位附着于集合体的分子之一。为此，开发了一种新版本的集合体，用于更容易的放置并且允许接近100％的设计的控制(减少不受Beacon sarcophagus系统限制的Tn5二聚体，并且因此减少可能相关联的“脱靶”)。因此，对于这种“新设计集合体”，进行了与之前相同类型的方案，并进行了某些主要改变。根据实际设计，环nDREAMT A、B、C和D寡核苷酸(每个Tn5二聚体一个并且每个靶标一个，用于四个靶区域的标签化–完全双链替换)更长，其中有三个序列用于附着于转座酶。这允许快速且受控的配对，只需简单地添加用于附着于与GFP片段连接的转座酶的最后一个序列，以替换mCherry-CD9靶片段(nDREAMT A、B、C和D寡核苷酸)。此外，添加其他nDREAMT Bio A和B寡核苷酸(生物素化的寡核苷酸)，以允许用UVRD-mSA融合蛋白在细胞中组装集合体。
将以下寡聚物在两个单独的管1和2中混合：对于管1(10μL)，nDREAMT A和C环(10μM)+nDREAMT A和C寡核苷酸(10μM)+nDREAMT Bio A寡核苷酸(10μM)；对于试管2(10μl)，nDREAMT B和D环(10μM)+nDREAMT B和D寡核苷酸(10μM)+nDREAMT Bio B寡核苷酸(10μM)。然后将两个管加热至95℃持续5分钟，再在室温下放置1小时，然后将每个管用对应的限制酶消化并通过PCR纯化试剂盒(洗脱20μL)纯化。
同时，扩增GFP的扩增序列，其包含限制酶NdeI在5’和BSPEi在3’的侧翼序列作为末端(在PCR后消化的具有限制性位点结构的寡核苷酸)，然后用对应的限制酶消化，并通过用20μL体积洗脱的PCR纯化试剂盒纯化。
然后将管1和2的内容物与扩增的和消化的GFP neo片段、T4连接酶的溶液(4μL或100U)、5μL T4缓冲液(10X)和1μL ddH20混合，总反应体积为50μL。将溶液在室温下放置1小时，然后进行凝胶纯化，以分离出大于1kb并且在其5’和3’末端处包含四个sarcophagi A、B、C和D的最大GFP片段。然后，具有定位在5’和3’末端的四个sarcophagi的GFP替换片段准备好接受转座酶二聚体([图15])。
在细胞水平下测试该系统之前，经由与先前相同的一系列实验对新设计进行测试，其中将GFP 3’侧(有义链)连接至mCherry-CD9靶cDNA(有义链)的CD9侧。因此，在经由GFP正向和CD9反向PCR引物扩增后，获得了与先前相同类型的结果(其余所有阴性对照都不可检测)，其中具有朝向0.5kb的预期条带([图15])。正如预期的那样，在该条带的Sanger测序后，在原始靶序列的两个碱基内([图16])，通过在CD9片段的3’末端连接GFP的多个序列([图16])，以5’至3’方向对该片段进行检测。
在对这一新设计进行该阳性验证后，在表达mCherry-CD9的HEK 293T细胞中进行原位测试。为此，创建了用于Tn5转座酶和UVRD-mSA蛋白的两个细胞内蛋白表达质粒。对于Tn5质粒，经由PTXB1-Tn5质粒通过PCR扩增Tn5序列(S.Picelli等人Genome Res 2014)。应当注意，允许通过与几丁质珠结合和自切割纯化Tn5转座酶、在Tn5蛋白上不留下标签元件的内含肽尾标签(S.Picelli等人Genome Res 2014)被终止密码子替换。经由BMT1和EcoR1限制酶克隆整个质粒而不是mCherry-CD9质粒(Davidson Lab)的mCherry-CD9片段，以最终获得CMV-Tn5启动子质粒。经由pRSET-mSA质粒(Sheldon Park Lab)进行mSA片段的PCR扩增(表1)，其中在5’添加BMT1限制性位点并且在3’添加EcoR1限制性位点(表1)。经由BM1和EcoR1酶在mCherry-CD9质粒中进行第一个克隆步骤，用mSA片段替换mCherry-CD9片段，从而获得CMV-mSA启动子质粒。对于UVRD片段，生成了大肠杆菌的cDNA文库(DH5α)。使用精确的寡核苷酸进行UVRD cDNA的PCR扩增(表1)。在5’侧，发现了常用元件，诸如用于克隆的BMT1序列和Kozac序列，以及NLS导入序列，以允许将完整的复合物+Tn5+UVRD-mSA复合物导入到细胞核中。在3’处，添加柔性部分(GGGSx3型聚甘氨酸尾)，将mSA 5’序列的一端连接至PMiI mSA 5’序列中包含的精确限制酶。然后使用允许在UVRD序列的5’处添加的BMT1和PMiI限制酶进行第二个克隆步骤，并获得CMV-UVRD-mSA启动子类型的最终质粒。
通过lipofectamine 3000用mCherry-CD9质粒进行HEK 293T细胞的转染。在等待24小时并通过共聚焦显微镜验证细胞质膜上的红色信号后，用三种化合物转染细胞：CMV-Tn5和CMV-UVRD-mSA质粒和新设计复合物。这种复合物允许位于四个靶标之间的序列(靶标的四聚体；两个mCherry侧和两个CD9侧)与CMV-GFP序列的双链替换。因此，通过本实验，预期红色膜信号减少或甚至被绿色细胞质信号替换。
如在[图17]中所预期和呈现的，在用根据本发明的技术进行第二次转染后五天，检测到了绿色细胞。
通过流式细胞术进行细胞分选来分离这些细胞，并且由于CMV-GFP片段替换了CMV-mCherry-CD9质粒的mCherry-CD9部分，这种新的CMV-GFP质粒应当含有用于创建NeoR/KanR细胞系的抗生素选择序列。转染超过6天后，将这些仍为绿色的细胞置于包含2mg/mlG418的培养基中，每天更换培养基，持续14天，然后在0.5mg/ml的浓度下保持3个月。
正如预期的那样，在转染后19天之后，获得了新的GFP+绿色细胞系，尽管重复冷冻和融化循环，其仍非常稳定(参见[图17])。
为了以更大的确定性原位再次确认该结果，如前所述，通过用CMV-mCherry-CD9质粒转染并用2mg/ml G418处理来创建稳定的HEK 293T红色膜细胞系。处理两周后，获得了HEK 293T红色膜细胞系。
如前所述，将该细胞系用前述技术转染。转染三天后，开始出现第一批绿色细胞(参见[图18])。转染后14天之后，鉴定并分离出某些组的绿色细胞，用于进一步分析(参见[图18])。
分离这些细胞后，在转染后18天使用这些细胞进行逆转录，以便获得cDNA文库。
然后通过PCR扩增GFP序列，然后根据Sanger方法对扩增的片段进行测序。
正如预期的那样，在通过与序列数据库(NCBI BLAST)比较分析后，发现与替换mCherry-CD9序列的理论GFP片段非常相似[图19]。此外，几乎一个月后，获得的绿色细胞保持稳定，具有强烈的绿色信号([图18])。这些结果证实了根据本发明的技术的细胞内功效，从而允许用GFP替换序列替换mCherry-CD9靶序列，这通过从膜红色到细胞质绿色的颜色变化来说明。这种颜色变化使得可以验证新设计+Tn5+UVRD-mSA复合物(在UVRD的N-末端序列上具有NLS)的核导入、通过两个5’和3’侧解旋酶进行的DNA链的打开、在四个期望靶点(两个在mCherry侧，两个在CD9侧)处的配对以及通过根据本发明的技术用CMV-GFP片段替换mCherry-CD9序列。
序列表
<110> 本质股份有限公司
<120> 用于基因组编辑的组合物和方法
<130> BR 132275
<150> FR2106868
<151> 06/25/2021
<160> 646
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 1
ctgtctctta tacacatct 19
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<220>
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<213> 人工序列
<220>
<223> 集合体的第三分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (95)..(95)
<223> n=任何核苷酸或一个或多个限制性
位点
<400> 8
agatgtgtat aagagacagc agctgcagac aaagcttaca gctgtctctt atacacatct 60
tttttttttt tttttttttt ttcatatgcc aagtn 95
<210> 9
<211> 189
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 集合体的第二分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (117)..(117)
<223> n是a、c、g或t
<400> 9
atcatcctgt ctcttataca catctttttt tttttttttt ttgatagtag ctgtctctta 60
tacacatctt tttttttttt tttttttttt tggcgatcgc tttttttttt ttttttnttt 120
tttttttttt tttgcgatcg cctttttttt tttttgatac atttagatgt gtataagaga 180
caggatgat 189
<210> 10
<211> 63
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 集合体的第三分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> n=任何核苷酸或一个或多个限制性
位点
<400> 10
nacttggtta attaattttt tttttttttt tttttttaga tgtgtataag agacagctac 60
tatc 63
<210> 11
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Tn5结合序列
<400> 11
ctgtctctta tacacatct 19
<210> 12
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Tn5结合序列
<400> 12
tcgtcggcag cgtcagatgt gtataagaga cag 33
<210> 13
<211> 34
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Tn5结合序列
<400> 13
gtctcgtggg ctcggagatg tgtataagag acag 34
<210> 14
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> GFP有义寡核苷酸
<400> 14
ctggtcgagc tggacggcga cg 22
<210> 15
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> GFP反向寡核苷酸
<400> 15
cacgaactcc agcaggacca tg 22
<210> 16
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> mCherry有义寡核苷酸
<400> 16
aagggcgagg aggataacat g 21
<210> 17
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CD9反向寡核苷酸
<400> 17
gaccatctcg cggttcct 18
<210> 18
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> GFP Nde1有义寡核苷酸
<400> 18
acttggcata tgatggtgag caagggcgag ga 32
<210> 19
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> GFP Nde1反向寡核苷酸
<400> 19
acttggcata tgcttgtaca gctcgtccat 30
<210> 20
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> GFP BSPEI有义寡核苷酸
<400> 20
tacaagtccg gaatggtgag caagggcgag ga 32
<210> 21
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> GFP BSPEI反向寡核苷酸
<400> 21
tacaagtccg gacttgtaca gctcgtccat 30
<210> 22
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CMV Nde1有义寡核苷酸
<400> 22
acttggcata tgccaagtac gccccctatt ga 32
<210> 23
<211> 86
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> UVRD有义寡核苷酸
<400> 23
ctcttcgcta gctgccacca tgacgcgtgg ccccaagaaa aagcggaaag tgggaccggc 60
caccatggac gtttcttacc tgctcg 86
<210> 24
<211> 81
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> UVRD反向寡核苷酸
<400> 24
aacaacacgt gccggtgata cccgcttccg cgcctgatcc accaccacct gacccaccac 60
cagccaccga ctccagccgg g 81
<210> 25
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> mSA有义寡核苷酸
<400> 25
ctcttcgcta gcgcggaagc gggtatcac 29
<210> 26
<211> 35
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> mSA反向寡核苷酸
<400> 26
aacaagaatt cttattattt aactttggtg aaggt 35
<210> 27
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Tn5有义寡核苷酸
<400> 27
ctcttcgcta gcatgattac cagtgcactg cat 33
<210> 28
<211> 37
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Tn5反向寡核苷酸
<400> 28
aacaagaatt cttattagat tttaatgccc tgcgcca 37
<210> 29
<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 29
aacgtt 6
<210> 30
<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 30
aagctt 6
<210> 31
<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 31
aatatt 6
<210> 32
<211> 4
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 32
aatt 4
<210> 33
<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 33
acatgt 6
<210> 34
<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 34
accggt 6
<210> 35
<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 35
acctgc 6
<210> 36
<211> 7
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 36
accwggt 7
<210> 37
<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 37
acgcgt 6
<210> 38
<211> 5
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 38
acggc 5
<210> 39
<211> 4
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 39
acgt 4
<210> 40
<211> 5
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (3)..(3)
<223> n是a、c、g或t
<400> 40
acngt 5
<210> 41
<211> 11
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (3)..(6)
<223> n是a、c、g或t
<400> 41
acnnnngtay c 11
<210> 42
<211> 11
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (3)..(7)
<223> n是a、c、g或t
<400> 42
acnnnnnctc c 11
<210> 43
<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 43
acrygt 6
<210> 44
<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 44
actagt 6
<210> 45
<211> 5
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 45
actgg 5
<210> 46
<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 46
actggg 6
<210> 47
<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 47
agatct 6
<210> 48
<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 48
agcgct 6
<210> 49
<211> 4
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 49
agct 4
<210> 50
<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 50
aggcct 6
<210> 51
<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 51
agtact 6
<210> 52
<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 52
atcgat 6
<210> 53
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 53
atctatgtcg ggtgcggaga aagaggtaat 30
<210> 54
<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 54
atgcat 6
<210> 55
<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 55
attaat 6
<210> 56
<211> 8
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 56
atttaaat 8
<210> 57
<211> 12
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (4)..(8)
<223> n是a、c、g或t
<400> 57
caannnnngt gg 12
<210> 58
<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 58
caattg 6
<210> 59
<211> 7
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 59
cacctgc 7
<210> 60
<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 60
cacgag 6
<210> 61
<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 61
cacgag 6
<210> 62
<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 62
cacgtc 6
<210> 63
<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 63
cacgtg 6
<210> 64
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (4)..(6)
<223> n是a、c、g或t
<400> 64
cacnnngtg 9
<210> 65
<211> 10
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (4)..(7)
<223> n是a、c、g或t
<400> 65
cacnnnngtg 10
<210> 66
<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 66
cagcag 6
<210> 67
<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 67
cagctg 6
<210> 68
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (4)..(6)
<223> n是a、c、g或t
<400> 68
cagnnnctg 9
<210> 69
<211> 5
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 69
cagtg 5
<210> 70
<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 70
catatg 6
<210> 71
<211> 4
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 71
catg 4
<210> 72
<211> 4
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 72
catg 4
<210> 73
<211> 4
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 73
catg 4
<210> 74
<211> 10
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (4)..(7)
<223> n是a、c、g或t
<400> 74
caynnnnrtg 10
<210> 75
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (4)..(12)
<223> n是a、c、g或t
<400> 75
ccannnnnnn nntgg 15
<210> 76
<211> 12
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (4)..(9)
<223> n是a、c、g或t
<400> 76
ccannnnnnt gg 12
<210> 77
<211> 11
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (4)..(8)
<223> n是a、c、g或t
<400> 77
ccannnnntg g 11
<210> 78
<211> 5
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 78
ccatc 5
<210> 79
<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 79
ccatgg 6
<210> 80
<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 80
cccagc 6
<210> 81
<211> 5
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 81
cccgc 5
<210> 82
<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 82
cccggg 6
<210> 83
<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 83
cccggg 6
<210> 84
<211> 4
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 84
ccdg 4
<210> 85
<211> 4
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 85
ccgc 4
<210> 86
<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 86
ccgcgg 6
<210> 87
<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 87
ccgctc 6
<210> 88
<211> 4
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 88
ccgg 4
<210> 89
<211> 5
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (3)..(3)
<223> n是a、c、g或t
<400> 89
ccngg 5
<210> 90
<211> 5
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (3)..(3)
<223> n是a、c、g或t
<400> 90
ccngg 5
<210> 91
<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (3)..(4)
<223> n是a、c、g或t
<400> 91
ccnngg 6
<210> 92
<211> 11
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (3)..(9)
<223> n是a、c、g或t
<400> 92
ccnnnnnnng g 11
<210> 93
<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 93
ccrygg 6
<210> 94
<211> 5
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 94
ccsgg 5
<210> 95
<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 95
cctagg 6
<210> 96
<211> 4
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 96
cctc 4
<210> 97
<211> 7
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 97
cctcagc 7
<210> 98
<211> 7
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 98
cctcagc 7
<210> 99
<211> 7
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 99
cctcagc 7
<210> 100
<211> 8
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 100
cctgcagg 8
<210> 101
<211> 7
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
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<223> 限制性位点
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<212> DNA
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<223> 限制性位点
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<210> 197
<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 197
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<210> 198
<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 198
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 199
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<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 200
ggcgcc 6
<210> 201
<211> 8
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
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ggcgcgcc 8
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<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 202
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<211> 5
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
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<210> 204
<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
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<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 205
gggccc 6
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<211> 5
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (3)..(3)
<223> n是a、c、g或t
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<210> 207
<211> 6
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<223> 限制性位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (3)..(4)
<223> n是a、c、g或t
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<211> 6
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<223> 限制性位点
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<220>
<223> 限制性位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (4)..(4)
<223> n是a、c、g或t
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<220>
<223> 限制性位点
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<223> 限制性位点
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<223> 限制性位点
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<223> 限制性位点
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gtac 4
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<223> 限制性位点
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<223> 限制性位点
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<223> 限制性位点
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<211> 6
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<220>
<223> 限制性位点
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<211> 6
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<220>
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<223> 限制性位点
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<211> 6
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<220>
<223> 限制性位点
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<220>
<223> 限制性位点
<400> 231
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<211> 6
<212> DNA
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<220>
<223> 限制性位点
<400> 232
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<212> DNA
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<220>
<223> 限制性位点
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<220>
<223> 限制性位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(2)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (8)..(9)
<223> n是a、c、g或t
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<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 235
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<210> 236
<211> 6
<212> DNA
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<220>
<223> 限制性位点
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<220>
<223> 限制性位点
<400> 237
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
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<212> DNA
<213> 人工序列
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<223> 限制性位点
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<220>
<223> 限制性位点
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<211> 7
<212> DNA
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<220>
<223> 限制性位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (4)..(4)
<223> n是a、c、g或t
<400> 241
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<210> 242
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<212> DNA
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<220>
<223> 限制性位点
<400> 242
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<212> DNA
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<220>
<223> 限制性位点
<400> 243
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<210> 244
<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 244
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<212> DNA
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<220>
<223> 限制性位点
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<211> 6
<212> DNA
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<220>
<223> 限制性位点
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<212> DNA
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<220>
<223> 限制性位点
<400> 247
tccgga 6
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<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 248
tccrac 6
<210> 249
<211> 4
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 249
tcga 4
<210> 250
<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 250
tcgcga 6
<210> 251
<211> 5
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (3)..(3)
<223> n是a、c、g或t
<400> 251
tcnga 5
<210> 252
<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (3)..(4)
<223> n是a、c、g或t
<400> 252
tcnnga 6
<210> 253
<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 253
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<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 254
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<211> 4
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 255
tgca 4
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<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 256
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 257
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<210> 258
<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 258
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<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 259
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<211> 4
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 260
ttaa 4
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<211> 8
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 261
ttaattaa 8
<210> 262
<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 262
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<210> 263
<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 263
ttcgaa 6
<210> 264
<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 264
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<211> 8
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 265
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<210> 266
<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 266
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<210> 267
<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 267
yacgtr 6
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<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 限制性位点
<400> 268
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<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 269
ctgagagatc ccctcataat 20
<210> 270
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 270
attatgaggg gatctctcag 20
<210> 271
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 271
gactctctag gggagtatta 20
<210> 272
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 272
taatactccc ctagagagtc 20
<210> 273
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 273
ctgagagatc ccctcataat 20
<210> 274
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 274
attatgaggg gatctctcag 20
<210> 275
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 275
gactctctag gggagtatta 20
<210> 276
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 276
taatactccc ctagagagtc 20
<210> 277
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 277
ctgagagatc ccctcataat 20
<210> 278
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 278
attatgaggg gatctctcag 20
<210> 279
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 279
gactctctag gggagtatta 20
<210> 280
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 280
taatactccc ctagagagtc 20
<210> 281
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 281
ctgagagatc ccctcataat 20
<210> 282
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 282
attatgaggg gatctctcag 20
<210> 283
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 283
gactctctag gggagtatta 20
<210> 284
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 284
taatactccc ctagagagtc 20
<210> 285
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 285
ctgatgaatc ccctaatgat tttggtaaa 29
<210> 286
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 286
tttaccaaaa tcattagggg attcatcag 29
<210> 287
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 287
ctgagagatc ccctcataat ttccccaaa 29
<210> 288
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 288
tttggggaaa ttatgagggg atctctcag 29
<210> 289
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 289
catggccgtc aacctaagaa gccttattt 29
<210> 290
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 290
aaataaggct tcttaggttg acggccatg 29
<210> 291
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 291
catggccgtc aacctaagaa ggcataaaa 29
<210> 292
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 292
ttttatgcct tcttaggttg acggccatg 29
<210> 293
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 293
cactacagtt gcattttgtg ttgagttct 29
<210> 294
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 294
agaactcaac acaaaatgca actgtagtg 29
<210> 295
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 295
cactacagtt gcattttgtg tcgtgagtg 29
<210> 296
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 296
cactcacgac acaaaatgca actgtagtg 29
<210> 297
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 297
cataagcgct aacttaaggg ttgtggtat 29
<210> 298
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 298
ataccacaac ccttaagtta gcgcttatg 29
<210> 299
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 299
cataagcgct aacttaaggg ttgaaccat 29
<210> 300
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 300
atggttcaac ccttaagtta gcgcttatg 29
<210> 301
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 301
catgcccatc aacttaagaa tctagacta 29
<210> 302
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 302
tagtctagat tcttaagttg atgggcatg 29
<210> 303
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 303
catgcccatc aacttaagaa caaaaataa 29
<210> 304
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 304
ttatttttgt tcttaagttg atgggcatg 29
<210> 305
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 305
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<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 306
atctcctttt ccttagcttg atggcgatg 29
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<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 307
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<210> 308
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 308
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
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<210> 310
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 310
gtgaactgat ccttaactga tcggcatta 29
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 311
taatgccagt cagttaagca actgactgg 29
<210> 312
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 312
ccagtcagtt gcttaactga ctggcatta 29
<210> 313
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 313
taagagagtt aatttataat ctattttca 29
<210> 314
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 314
tgaaaataga ttataaatta actctctta 29
<210> 315
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 315
taaggatgtt aatttattaa tttaaaagg 29
<210> 316
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 316
ccttttaaat taataaatta acatcctta 29
<210> 317
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 317
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<210> 318
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 318
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 319
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<210> 320
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 320
caggggatca agatctgatc aagagacag 29
<210> 321
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 321
caggcgtgtt gattatccaa taaaatccca 30
<210> 322
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 322
tgggatttta ttggataatc aacacgcctg 30
<210> 323
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 323
cacgagtgtt gattatccaa aattataaca 30
<210> 324
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 324
tgttataatt ttggataatc aacactcgtg 30
<210> 325
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 325
cttaacgggt gacaaggcat cctctagcct 30
<210> 326
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 326
aggctagagg atgccttgtc acccgttaag 30
<210> 327
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 327
cttaacgggt gacaacgtag cctacgaagc 30
<210> 328
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 328
gcttcgtagg ctacgttgtc acccgttaag 30
<210> 329
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 329
ccttaattcc gcaacactat agtttaaca 29
<210> 330
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 330
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<210> 331
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 331
cctcaaatcc gcaacctata gggtttagt 29
<210> 332
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 332
actaaaccct ataggttgcg gatttgagg 29
<210> 333
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 333
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<210> 334
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 334
tctcaactaa ccggctttgt gaggtactg 29
<210> 335
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 335
cagtacctca caaagcattc tcggctagc 29
<210> 336
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 336
gctagccgag aatgctttgt gaggtactg 29
<210> 337
<211> 37
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 337
ggccgtgaac ccataaactg ggtaccggat tactgat 37
<210> 338
<211> 37
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 338
atcagtaatc cggtacccag tttatgggtt cacggcc 37
<210> 339
<211> 37
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 339
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<210> 340
<211> 37
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 340
aatgcgcctg tggctgcggg cttatgagtc tacggcc 37
<210> 341
<211> 37
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 341
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<210> 342
<211> 37
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 342
ttcgtacaaa agggaatcct tgaatgcaga caagccc 37
<210> 343
<211> 37
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 343
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<210> 344
<211> 37
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 344
gcgctatgat ctggttacgt tgaatgcaga cacgccc 37
<210> 345
<211> 37
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 345
ggctttgttg aataaatcga acttttgctg agttgaa 37
<210> 346
<211> 37
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 346
ttcaactcag caaaagttcg atttattcaa caaagcc 37
<210> 347
<211> 37
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 347
ggctttgttg aataaatcag atttcgggta agtctcc 37
<210> 348
<211> 37
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 348
ggagacttac ccgaaatctg atttattcaa caaagcc 37
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<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 349
ggtgatgctg ccaacttact gatttagt 28
<210> 350
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 350
actaaatcag taagttggca gcatcacc 28
<210> 351
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 351
ggtaatgact ccaacttatt gatagtgt 28
<210> 352
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 352
acactatcaa taagttggag tcattacc 28
<210> 353
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 353
ggtgatgcct ctaattagtt gaatctga 28
<210> 354
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 354
tcagattcaa ctaattagag gcatcacc 28
<210> 355
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 355
ggtgatgctt ccaattagta gaacatgt 28
<210> 356
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 356
acatgttcta ctaattggaa gcatcacc 28
<210> 357
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 357
ggtcatgcat tcaatgcgga gcggagat 28
<210> 358
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 358
atctccgctc cgcattgaat gcatgacc 28
<210> 359
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 359
ggtcatgtat tcaatctggt tattagta 28
<210> 360
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
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<212> DNA
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<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 362
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
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gagagtttca agaaagtaat gagaggcg 28
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 364
cgcctctcat tactttcttg aaactctc 28
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<212> DNA
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<220>
<223> 转座酶结合位点
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<220>
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<220>
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<212> DNA
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<220>
<223> 转座酶结合位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (23)..(46)
<223> n是a、c、g或t
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<210> 376
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (10)..(33)
<223> n是a、c、g或t
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<212> DNA
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<220>
<223> 转座酶结合位点
<220>
<221> misc_feature
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<212> DNA
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<220>
<223> 转座酶结合位点
<220>
<221> misc_feature
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<210> 379
<211> 49
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (23)..(40)
<223> n是a、c、g或t
<400> 379
gggactgttc tcaaacagtc atnnnnnnnn nnnnnnnnnn gtaaaaata 49
<210> 380
<211> 49
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (10)..(27)
<223> n是a、c、g或t
<400> 380
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
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<210> 382
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 382
agaaaaaagt tacacacaaa aaaccaaaag tggatatctt tttggccagc actg 54
<210> 383
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 383
gtcacgaccg gtttttctat aggtgaaaac caaaaaacac acattgaaaa aaga 54
<210> 384
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 384
tcttttttca atgtgtgttt tttggttttc acctatagaa aaaccggtcg tgac 54
<210> 385
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> N=T
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> N=C或A
<220>
<221> misc_feature
<222> (2)..(2)
<223> N=A
<400> 385
nngttgaagt cggaagttta catacactta ag 32
<210> 386
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (31)..(31)
<223> N=T
<220>
<221> misc_feature
<222> (32)..(32)
<223> N=G或A
<400> 386
cttaagtgta tgtaaacttc cgacttcaac nn 32
<210> 387
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> N=T或C
<220>
<221> misc_feature
<222> (2)..(2)
<223> N=A
<400> 387
nngttgaagt cggaagttta catacacctt ag 32
<210> 388
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (31)..(31)
<223> N=T
<220>
<221> misc_feature
<222> (32)..(32)
<223> N=G或A
<400> 388
ctaaggtgta tgtaaacttc cgacttcaac nn 32
<210> 389
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 389
ctttcgcgtt tttcgtgcgc cg 22
<210> 390
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 390
cggcgcacga aaaacgcgaa ag 22
<210> 391
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 391
ttttcgcatt tatcgtgaaa cg 22
<210> 392
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 392
cgtttcacga taaatgcgaa aa 22
<210> 393
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 393
ctttcgcgtt tttcgtgcgc cg 22
<210> 394
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 394
cggcgcacga aaaacgcgaa ag 22
<210> 395
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 395
gttttcgcat ttatcgtgaa acg 23
<210> 396
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 396
cgtttcacga taaatgcgaa aac 23
<210> 397
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 397
ctttcgcgtt tttcgtgcgc cg 22
<210> 398
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 398
cggcgcacga aaaacgcgaa ag 22
<210> 399
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 399
ttttcgcatt tatcgtgaaa cg 22
<210> 400
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 400
cgtttcacga taaatgcgaa aa 22
<210> 401
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 401
gaaagcgcaa aaagcacgcg gcgcaaaaag cacgcggc 38
<210> 402
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 402
gccgcgtgct ttttgcgctt tcgccgcgtg ctttttgcgc tttc 44
<210> 403
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 403
ctttcgcgtt tttcgtgcgc cg 22
<210> 404
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 404
cggcgcacga aaaacgcgaa ag 22
<210> 405
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 405
tgtgggggga caaaaaagtc tcaaactgga caaaaaagat c 41
<210> 406
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 406
gatctttttt gtccagtttg agactttttt gtccgcccac a 41
<210> 407
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 407
gatctatttt gttcagttca agactttatt gtccgcccac a 41
<210> 408
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 408
tgtgggcgga caataaagtc ttgaactgaa caaaatagat c 41
<210> 409
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 409
ggggtttggg gagcaacgga accaaaaacc aacgtaaggc ttagctagag 50
<210> 410
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 410
ctctagctaa gccttacgtt ggtttttggt tccgttgctc cccaaacccc 50
<210> 411
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 411
ggggtttggg gagcaacgga acagaaagtg cacttaagcc cagcgcctgc 50
<210> 412
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 412
gcaggcgctg ggcttaagtg cactttctgt tccgttgctc cccaaacccc 50
<210> 413
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 413
ggggtttggg gagcaacgga accaaaaacc aacttaaggc ttagctagag 50
<210> 414
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 414
ctctagctaa gccttaagtt ggtttttggt tccgttgctc cccaaacccc 50
<210> 415
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 415
ggggtttggg gagcaacgga acagaaagtg cacttaagcc cagcgcctgc 50
<210> 416
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 416
gcaggcgctg ggcttaagtg cactttctgt tccgttgctc cccaaacccc 50
<210> 417
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 417
ggggtttggg gagcaacgga accaaaaacc aacgtaaggc ttaccaacgc 50
<210> 418
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 418
gcgttggtaa gccttacgtt ggtttttggt tccgttgctc cccaaacccc 50
<210> 419
<211> 49
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 419
ggggtttggg gagcaatgga accaaaaacc aacgtaagct ctgaatccc 49
<210> 420
<211> 49
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 420
gggattcaga gcttacgttg gtttttggtt ccattgctcc ccaaacccc 49
<210> 421
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 421
ggggtttggg gagcaacgga accaaaaacc aacgtaaggc ttaccacctg 50
<210> 422
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 422
caggtggtaa gccttacgtt ggtttttggt tccgttgctc cccaaacccc 50
<210> 423
<211> 49
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 423
ggggtttggg gagcaaggaa ccaaaaacca acgtaagccc taccagcgc 49
<210> 424
<211> 49
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 转座酶结合位点
<400> 424
gcgctggtag ggcttacgtt ggtttttggt tccttgctcc ccaaacccc 49
<210> 425
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 富G/C结构域
<400> 425
ggcgatcgc 9
<210> 426
<211> 12
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 富G/C结构域
<400> 426
gcggcgatcg gc 12
<210> 427
<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 富G/C结构域
<400> 427
ggtcgc 6
<210> 428
<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 富G/C结构域
<400> 428
gcgacc 6
<210> 429
<211> 798
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 图12的序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(29)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (40)..(40)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (78)..(88)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (214)..(215)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (218)..(219)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (225)..(226)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (228)..(228)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (230)..(230)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (232)..(232)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (236)..(237)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (240)..(240)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (243)..(243)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (248)..(248)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (250)..(251)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (254)..(254)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (257)..(259)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (264)..(264)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (266)..(267)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (269)..(269)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (271)..(271)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (274)..(274)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (276)..(281)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (284)..(284)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (317)..(317)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (323)..(323)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (325)..(327)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (329)..(329)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (339)..(339)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (341)..(341)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (343)..(343)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (351)..(352)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (357)..(357)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (359)..(359)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (364)..(364)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (374)..(375)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (381)..(381)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (383)..(383)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (386)..(387)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (389)..(389)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (392)..(394)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (399)..(399)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (401)..(404)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (686)..(687)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (728)..(728)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (738)..(739)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (753)..(753)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (768)..(769)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (787)..(787)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (794)..(794)
<223> n是a、c、g或t
<400> 429
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnna gctcgccgan cactaccagc agaacacccc 60
caccatgtta tcctcctnnn nnnnnnnncg acaaccacta cctgagcacc cagtccgccc 120
tgagcaaaga ccccaacgag aagcgcgatc acatggtcct gctggagttc gtgaccgccg 180
ccgggatcac tctcggcatg gacgagctgt acanntcnnc aatgnnancn gnggannggn 240
ggncctcngn ncgntcnnnc tgtncnncna nggngnnnnn ntcnttgtgg gaggtgatgt 300
ccaacttgat gttgacnttg tangnnncng gcagctgcnc ngncttcttg nncttgnang 360
tggncttgac ctcnncgtcg nanggnncnc cnnncttcnt nnnnagcctc tgcttgatct 420
cgcccttcag ggcgccgtcc tcggggtaca tccgctcgga ggaggcctcc cagcccatgg 480
tcttcttctg cattacgggg ccgtcggagg ggaagttggt gccgcgcagc ttcaccttgt 540
agatgaactc gccgtcctgc agggaggagt cctgggtcac ggtcaccacg ccgccgtcct 600
cgaagttcat cacgcgctcc cacttgaagc cctcggggaa ggacagcttc aagtagtcgg 660
ggatgtcggc ggggtgcttc acgtanncct tggagccgta catgaactga ggggacagga 720
tgtcccangc gaagggcnng ggccaccctt ggncaccttc agcttggnng tctgggtgcc 780
ctcgtanggg cggncctc 798
<210> 430
<211> 392
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 图14的序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(19)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (22)..(22)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (24)..(24)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (26)..(27)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (30)..(34)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (38)..(38)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (143)..(152)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (154)..(165)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (167)..(167)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (172)..(172)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (175)..(175)
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nnnnnnnnnn nnnnnnnnng tnanannggn nnnntccnca tcatcggcgc agtgggcatc 60
ggcattgccg tggtcatgat atttggcatg atcttcagta tgatcttgtg ctgtgctatc 120
cgcaggaacc gcgagatggt cannnnnnnn nntnnnnnnn nnnnngngtg anggncannn 180
nnannnnnnn anngnnannn nannnnnnnn nnnnnnnnnn nnnncnnnnc cnnnnccnnn 240
nnnnnnnncn tcntnnannn nncnnnntnn nttnnnnntn ntccnnnacn tnnnnnnncn 300
nnttnnnnnn ntnnnnnnnn nnnncannnn cnncannttn ntcnnnnnct nnnnnntccn 360
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnannnnan nn 392
<210> 431
<211> 673
<212> DNA
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<220>
<223> 图16的序列
<220>
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<220>
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<220>
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<220>
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<220>
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<220>
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<220>
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<220>
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ccnatgatgt nnnaatttat tgtcgaagac ctctttgatg gcatcangac aggacttcac 120
ggtgaaggtt tcgagtacgt ccttcttggg gcagatgtct gagataaacn gctcctcgcc 180
cttgannnaa ccacagcagt tcaacgcata gtggatggct ttcagcgttt cccgctgggg 240
ctcattgaac anctcctcnc ccttgaangt gtccttgtaa aactcctnnn nttccttaat 300
cacctcatcc ttgtgggaat atccccagat ggccgcannt ngatcnntgg cgaatatcnn 360
nnanannaan ccnaanannn nnannnnnnt gcnntgggac tcctgcnnnc cngnnnnnnn 420
nnnnnnnnnn nnnnngnnnt annangnnan annnnnnnat cctacntttn acnnccctac 480
cnnnnngnnn aattnnnnnn nnnnnnnncn nncncnnnnn nnnnnnnnnn nncnnnnnnc 540
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnt nncnnnnncc cnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnncnnnc 600
cccacnnnna ngnnnnnann nnnnnnnnnn nnncnctnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 660
nnnntnnnnn nnn 673
<210> 432
<211> 671
<212> DNA
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<220>
<223> 图19的序列
<220>
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<220>
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<220>
<221> misc_feature
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<220>
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<221> misc_feature
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<220>
<221> misc_feature
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<221> misc_feature
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<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
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<220>
<221> misc_feature
<222> (370)..(370)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (378)..(381)
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<222> (394)..(398)
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<220>
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<220>
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<220>
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<220>
<221> misc_feature
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<220>
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<220>
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<220>
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<220>
<221> misc_feature
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<220>
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<220>
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<220>
<221> misc_feature
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<220>
<221> misc_feature
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<220>
<221> misc_feature
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<220>
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<220>
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<220>
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<220>
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<220>
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<220>
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<220>
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<220>
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<220>
<221> misc_feature
<222> (668)..(671)
<223> n是a、c、g或t
<400> 432
nnnnnnnnnn tnnnnnnnnn nnnnagnncn nnnnnnnngn nnctcnnnnn ntnngnnnnn 60
ngnntnnnnc ngcantnnng nnnntgnccg tgncnngncc cnncctcnng annncnntgn 120
cntacngcgt gnagngnttc ngccgctacn cntaccacnt gannnnncan nacttcttca 180
nntccnccnt gcccnaangc tanntccang ancgcaccat cttcttcnnn gacnacggcn 240
actacnnnac ccncgccgag gtgaanttcn agggcnacnc cctgnnnnan cncntcnagc 300
tgaanggcat cnacttcnnn gaggacggca acatcctggg gcacaagctg gagtacaact 360
acnnnnnccn caacgtcnnn ntcatggccg actnnnnnan naacggcntc nnggtgaant 420
tcnagatccn ccncnncntc nangacngna ncnnnnnnnn nnnngannnn nnccancnna 480
ncnnccnnnt ngnnnnnggn nnctnnnnnn ntncnnnann nnnannannn nnnnnnnnnn 540
nnnncnnnna annanannnn nnnnnnnnnn nacnnnnnnn nnnncnnnnt nnnnaannnn 600
nnnnnnacnn cnnnnnntcc nntngannnn tnnantgtat ntnanngtnn nnnntntnnn 660
nnnntntnnn n 671
<210> 433
<211> 812
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 图19的序列
<400> 433
atggtgagca agggcgagga gctgttcacc ggggtggtgc ccatcctggt cgagctggac 60
ggcgacgtaa acggccacaa gttcagcgtg tccggcgagg gcgagggcga tgccacctac 120
ggcaagctga ccctgaagtt catctgcacc accggcaagc tgcccgtgcc ctggcccacc 180
ctcgtgacca ccctgaccta cggcgtgcag tgcttcagcc gctaccccga ccacatgaag 240
cagcacgact tcttcaagtc cgccatgccc gaaggctacg tccaggagcg caccatcttc 300
ttcaaggacg acggcaacta caagacccgc gccgaggtga agttcgaggg cgacaccctg 360
gtgaaccgca tcgagctgaa gggcatcgac ttcaaggagg acggcaacat cctggggcac 420
aagctggagt acaactacaa cagccacaac gtctatatca tggccgacaa gcagaagaac 480
ggcatcaagg tgaacttcaa gatccgccac aacatcgagg acggcagcgt gcagctcgcc 540
gaccactacc agcagaacac ccccatcggc gacggccccg tgctgctgcc cgacaaccac 600
tacctgagca cccagtccgc cctgagcaaa gaccccaacg agaagcgcga tcacatggtc 660
ctgctggagt tcgtgaccgc cgccgggatc actctcggca tggacgagct gtacaagtcc 720
ggataataat tttttttttt tttttttttt tagatgtgta taagagacag ctgggcacgc 780
gtataagcag ctgagatgtg tataagagac ag 812
<210> 434
<211> 270
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 图19的序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (4)..(4)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (10)..(10)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (13)..(13)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (15)..(15)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (19)..(19)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (28)..(28)
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<220>
<221> misc_feature
<222> (30)..(30)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (37)..(37)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (41)..(45)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (48)..(49)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
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<223> n是a、c、g或t
<220>
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<220>
<221> misc_feature
<222> (67)..(67)
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<220>
<221> misc_feature
<222> (73)..(73)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (76)..(76)
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<220>
<221> misc_feature
<222> (81)..(82)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (87)..(87)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (90)..(90)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (106)..(108)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (112)..(112)
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<220>
<221> misc_feature
<222> (118)..(118)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (124)..(126)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (131)..(131)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (144)..(144)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (148)..(148)
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<220>
<221> misc_feature
<222> (154)..(154)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (157)..(157)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (163)..(166)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (168)..(168)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (170)..(170)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (172)..(172)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (175)..(175)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (183)..(183)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (190)..(190)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (196)..(198)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (241)..(245)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (248)..(248)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (256)..(259)
<223> n是a、c、g或t
<400> 434
tacngcgtgn agngnttcng ccgctacncn taccacntga nnnnncanna cttcttcann 60
tccnccntgc ccnaangcta nntccangan cgcaccatct tcttcnnnga cnacggcnac 120
tacnnnaccc ncgccgaggt gaanttcnag ggcnacnccc tgnnnnancn cntcnagctg 180
aanggcatcn acttcnnnga ggacggcaac atcctggggc acaagctgga gtacaactac 240
nnnnnccnca acgtcnnnnt catggccgac 270
<210> 435
<211> 270
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 图19的序列
<400> 435
tacggcgtgc agtgcttcag ccgctacccc gaccacatga agcagcacga cttcttcaag 60
tccgccatgc ccgaaggcta cgtccaggag cgcaccatct tcttcaagga cgacggcaac 120
tacaagaccc gcgccgaggt gaagttcgag ggcgacaccc tggtgaaccg catcgagctg 180
aagggcatcg acttcaagga ggacggcaac atcctggggc acaagctgga gtacaactac 240
aacagccaca acgtctatat catggccgac 270
<210> 436
<211> 131
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的第一分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (9)..(9)
<223> 转座酶结合位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (66)..(66)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入
的序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (123)..(123)
<223> 转座酶结合位点
<400> 436
tgcagctgnt tttttttttt tttttttttt ttttttggcg atcgcttttt tttttttttt 60
tttttntttt tttttttttt ttttttgcga tcgccttttt tttttttttt tgatacatgt 120
ttnctgtaag c 131
<210> 437
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的第二分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> 转座酶结合位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (24)..(24)
<223> 转座酶结合位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (59)..(59)
<223> 替换序列
<400> 437
ncagctgcag acaaagctta cagntttttt tttttttttt ttttttcata tgccaagtn 59
<210> 438
<211> 167
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的第一分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (84)..(84)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入
的序列
<400> 438
tgcagctgct gtctcttata cacatctttt tttttttttt tttttttttt ttttggcgat 60
cgcttttttt tttttttttt tttntttttt tttttttttt ttttgcgatc gccttttttt 120
tttttttttg atacatgttt agatgtgtat aagagacagc tgtaagc 167
<210> 439
<211> 95
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的第二分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (95)..(95)
<223> 替换序列
<400> 439
agatgtgtat aagagacagc agctgcagac aaagcttaca gctgtctctt atacacatct 60
tttttttttt tttttttttt ttcatatgcc aagtn 95
<210> 440
<211> 125
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (9)..(9)
<223> 转座酶结合位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (63)..(63)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入
的序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (117)..(117)
<223> 转座酶结合位点
<400> 440
tgcagctgnt tttttttttt tttttttttt ttttttggtc gctttttttt tttttttttt 60
ttnttttttt tttttttttt tttgcgacct tttttttttt tttttgatac atgtttnctg 120
taagc 125
<210> 441
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> 转座酶结合位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (24)..(24)
<223> 转座酶结合位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (47)..(47)
<223> 替换序列
<400> 441
ncagctgcag acaaagctta cagntttttt tttttttttt ttttttncca agt 53
<210> 442
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> 转座酶结合位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (24)..(24)
<223> 转座酶结合位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (53)..(53)
<223> 替换序列
<400> 442
ncagctgcag acaaagctta cagntttttt tttttttttt ttttttccaa gtn 53
<210> 443
<211> 137
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (9)..(9)
<223> 转座酶结合位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (69)..(69)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入
的序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (129)..(129)
<223> 转座酶结合位点
<400> 443
tgcagctgnt tttttttttt tttttttttt ttttttgcgg cgatcggctt tttttttttt 60
ttttttttnt tttttttttt tttttttttg ccgatcgccg cttttttttt tttttttgat 120
acatgtttnc tgtaagc 137
<210> 444
<211> 125
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (9)..(9)
<223> 转座酶结合位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (63)..(63)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入
的序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (117)..(117)
<223> 转座酶结合位点
<400> 444
gtgcccagnt ttctcgatca tttttttttt ttttttggtc gctttttttt tttttttttt 60
ttnttttttt tttttttttt tttgcgacct tttttttttt tttttttttt ttttttnctg 120
cttat 125
<210> 445
<211> 63
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> 替换序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (42)..(42)
<223> 转座酶结合位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (63)..(63)
<223> 转座酶结合位点
<400> 445
ntacaagtcc ggataataat tttttttttt tttttttttt tnctgggcac gcgtataagc 60
agn 63
<210> 446
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (7)..(7)
<223> 替换序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (36)..(36)
<223> 转座酶结合位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (57)..(57)
<223> 转座酶结合位点
<400> 446
tacaagntaa taattttttt tttttttttt tttttnctgg gcacgcgtat aagcagn 57
<210> 447
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> 替换序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (36)..(36)
<223> 转座酶结合位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (57)..(57)
<223> 转座酶结合位点
<400> 447
ntacaagtaa taattttttt tttttttttt tttttnctgg gcacgcgtat aagcagn 57
<210> 448
<211> 131
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (9)..(9)
<223> 转座酶结合位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (66)..(66)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入
的序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (123)..(123)
<223> 转座酶结合位点
<400> 448
gtgcccagnt ttctcgatca tttttttttt ttttttggcg atcgcttttt tttttttttt 60
tttttntttt tttttttttt ttttttgcga tcgccttttt tttttttttt tttttttttt 120
ttnctgctta t 131
<210> 449
<211> 137
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (9)..(9)
<223> 转座酶结合位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (69)..(69)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入
的序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (129)..(129)
<223> 转座酶结合位点
<400> 449
gtgcccagnt ttctcgatca tttttttttt ttttttgcgg cgatcggctt tttttttttt 60
ttttttttnt tttttttttt tttttttttg ccgatcgccg cttttttttt tttttttttt 120
ttttttttnc tgcttat 137
<210> 450
<211> 129
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (7)..(7)
<223> 转座酶结合位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (33)..(33)
<223> 转座酶结合位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (78)..(78)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入
的序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (123)..(123)
<223> 转座酶结合位点
<400> 450
atcatcnttt tttttttttt ttttgatagt agnttttttt tttttttttt tttttggtcg 60
cttttttttt tttttttntt tttttttttt ttttgcgacc tttttttttt tttgatacat 120
ttngatgat 129
<210> 451
<211> 46
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> 替换序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (38)..(38)
<223> 转座酶结合位点
<400> 451
nacttggtta attaattttt tttttttttt tttttttnct actatc 46
<210> 452
<211> 46
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (7)..(7)
<223> 替换序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (38)..(38)
<223> 转座酶结合位点
<400> 452
acttggntta attaattttt tttttttttt tttttttnct actatc 46
<210> 453
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> 替换序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (44)..(44)
<223> 转座酶结合位点
<400> 453
nacttggcat atgttaatta attttttttt tttttttttt tttnctacta tc 52
<210> 454
<211> 141
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (7)..(7)
<223> 转座酶结合位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (33)..(33)
<223> 转座酶结合位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (84)..(84)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入
的序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (135)..(135)
<223> 转座酶结合位点
<400> 454
atcatcnttt tttttttttt ttttgatagt agnttttttt tttttttttt tttttgcggc 60
gatcggcttt tttttttttt tttntttttt tttttttttt gccgatcgcc gctttttttt 120
tttttgatac atttngatga t 141
<210> 455
<211> 135
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (9)..(9)
<223> 转座酶结合位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (57)..(57)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入
的序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (105)..(105)
<223> 转座酶结合位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (135)..(135)
<223> 转座酶结合位点
<400> 455
gatagtagnt tttttttttt tttttttttt tggcgatcgc tttttttttt ttttttnttt 60
tttttttttt tttgcgatcg cctttttttt tttttgatac atttngatga tttttttttt 120
ttttttttat catcn 135
<210> 456
<211> 129
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (9)..(9)
<223> 转座酶结合位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (54)..(54)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入
的序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (99)..(99)
<223> 转座酶结合位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (129)..(129)
<223> 转座酶结合位点
<400> 456
gatagtagnt tttttttttt tttttttttt tggtcgcttt tttttttttt tttntttttt 60
tttttttttt gcgacctttt tttttttttg atacatttng atgatttttt tttttttttt 120
ttatcatcn 129
<210> 457
<211> 141
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (9)..(9)
<223> 转座酶结合位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (60)..(60)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入
的序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (111)..(111)
<223> 转座酶结合位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (141)..(141)
<223> 转座酶结合位点
<400> 457
gatagtagnt tttttttttt tttttttttt tgcggcgatc ggcttttttt tttttttttn 60
tttttttttt ttttttgccg atcgccgctt tttttttttt tgatacattt ngatgatttt 120
tttttttttt ttttatcatc n 141
<210> 458
<211> 138
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (7)..(7)
<223> 转座酶结合位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (56)..(56)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入
的序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (103)..(103)
<223> 转座酶结合位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (132)..(132)
<223> 转座酶结合位点
<400> 458
cacgtgnttt ctcgatcatt attatttttt ggcgatcgct tttttttttt tttttntttt 60
tttttttttt ttgcgatcgc cttttttttt tttttttttt ttngacgaat attttttttt 120
tttttttttt tncacgtg 138
<210> 459
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (9)..(9)
<223> 转座酶结合位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (45)..(45)
<223> 替换序列
<400> 459
tattcgtcnt tttttttttt tttttttatt aattattact tgtan 45
<210> 460
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (9)..(9)
<223> 转座酶结合位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (39)..(39)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (393)..(9)
<223> 转座酶结合位点
<400> 460
tattcgtcnt tttttttttt tttttttatt aattattanc ttgta 45
<210> 461
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (9)..(9)
<223> 转座酶结合位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (51)..(51)
<223> 替换序列
<400> 461
tattcgtcnt tttttttttt tttttttatt aattattatc cggacttgta n 51
<210> 462
<211> 132
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (7)..(7)
<223> 转座酶结合位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (53)..(53)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入
的序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (97)..(97)
<223> 转座酶结合位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (126)..(126)
<223> 转座酶结合位点
<400> 462
cacgtgnttt ctcgatcatt attatttttt ggtcgctttt tttttttttt ttnttttttt 60
tttttttttg cgaccttttt tttttttttt ttttttngac gaatattttt tttttttttt 120
tttttncacg tg 132
<210> 463
<211> 144
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (7)..(7)
<223> 转座酶结合位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (59)..(59)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入
的序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (109)..(109)
<223> 转座酶结合位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (138)..(138)
<223> 转座酶结合位点
<400> 463
cacgtgnttt ctcgatcatt attatttttt gcggcgatcg gctttttttt ttttttttnt 60
tttttttttt tttttgccga tcgccgcttt tttttttttt ttttttttng acgaatattt 120
tttttttttt tttttttnca cgtg 144
<210> 464
<211> 138
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> 转座酶结合位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (34)..(34)
<223> 转座酶结合位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (83)..(83)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入
的序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (130)..(130)
<223> 转座酶结合位点
<400> 464
ncacgtgttt tttttttttt tttttttcac gtgntttctc gatcattatt attttttggc 60
gatcgctttt tttttttttt ttnttttttt tttttttttg cgatcgcctt tttttttttt 120
tttttttttn gacgaata 138
<210> 465
<211> 132
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> 转座酶结合位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (34)..(34)
<223> 转座酶结合位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (80)..(80)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入
的序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (124)..(124)
<223> 转座酶结合位点
<400> 465
ncacgtgttt tttttttttt tttttttcac gtgntttctc gatcattatt attttttggt 60
cgcttttttt tttttttttn tttttttttt ttttttgcga cctttttttt tttttttttt 120
tttngacgaa ta 132
<210> 466
<211> 144
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> 转座酶结合位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (34)..(34)
<223> 转座酶结合位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (86)..(86)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入
的序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (136)..(136)
<223> 转座酶结合位点
<400> 466
ncacgtgttt tttttttttt tttttttcac gtgntttctc gatcattatt attttttgcg 60
gcgatcggct tttttttttt tttttntttt tttttttttt ttgccgatcg ccgctttttt 120
tttttttttt tttttngacg aata 144
<210> 467
<211> 167
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (84)..(84)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 467
tgcagctgct gtctcttata cacatctttt tttttttttt tttttttttt ttttggcgat 60
cgcttttttt tttttttttt tttntttttt tttttttttt ttttgcgatc gccttttttt 120
tttttttttg atacatgttt agatgtgtat aagagacagc tgtaagc 167
<210> 468
<211> 167
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (84)..(84)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 468
tgcagctgag atgtgtataa gagacagttt tttttttttt tttttttttt ttttggcgat 60
cgcttttttt tttttttttt tttntttttt tttttttttt ttttgcgatc gccttttttt 120
tttttttttg atacatgttt ctgtctctta tacacatctc tgtaagc 167
<210> 469
<211> 161
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (81)..(81)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 469
tgcagctgct gtctcttata cacatctttt tttttttttt tttttttttt ttttggtcgc 60
tttttttttt tttttttttt nttttttttt tttttttttt tgcgaccttt tttttttttt 120
tttgatacat gtttagatgt gtataagaga cagctgtaag c 161
<210> 470
<211> 161
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (81)..(81)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 470
tgcagctgag atgtgtataa gagacagttt tttttttttt tttttttttt ttttggtcgc 60
tttttttttt tttttttttt nttttttttt tttttttttt tgcgaccttt tttttttttt 120
tttgatacat gtttctgtct cttatacaca tctctgtaag c 161
<210> 471
<211> 173
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (87)..(87)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 471
tgcagctgct gtctcttata cacatctttt tttttttttt tttttttttt ttttgcggcg 60
atcggctttt tttttttttt ttttttnttt tttttttttt tttttttgcc gatcgccgct 120
tttttttttt tttttgatac atgtttagat gtgtataaga gacagctgta agc 173
<210> 472
<211> 173
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (87)..(87)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 472
tgcagctgag atgtgtataa gagacagttt tttttttttt tttttttttt ttttgcggcg 60
atcggctttt tttttttttt ttttttnttt tttttttttt tttttttgcc gatcgccgct 120
tttttttttt tttttgatac atgtttctgt ctcttataca catctctgta agc 173
<210> 473
<211> 161
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (81)..(81)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 473
gtgcccagct gtctcttata cacatctttt ctcgatcatt tttttttttt ttttggtcgc 60
tttttttttt tttttttttt nttttttttt tttttttttt tgcgaccttt tttttttttt 120
tttttttttt ttttagatgt gtataagaga cagctgctta t 161
<210> 474
<211> 161
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (81)..(81)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 474
gtgcccagag atgtgtataa gagacagttt ctcgatcatt tttttttttt ttttggtcgc 60
tttttttttt tttttttttt nttttttttt tttttttttt tgcgaccttt tttttttttt 120
tttttttttt ttttctgtct cttatacaca tctctgctta t 161
<210> 475
<211> 167
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (84)..(84)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 475
gtgcccagct gtctcttata cacatctttt ctcgatcatt tttttttttt ttttggcgat 60
cgcttttttt tttttttttt tttntttttt tttttttttt ttttgcgatc gccttttttt 120
tttttttttt tttttttttt agatgtgtat aagagacagc tgcttat 167
<210> 476
<211> 167
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (84)..(84)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 476
gtgcccagag atgtgtataa gagacagttt ctcgatcatt tttttttttt ttttggcgat 60
cgcttttttt tttttttttt tttntttttt tttttttttt ttttgcgatc gccttttttt 120
tttttttttt tttttttttt ctgtctctta tacacatctc tgcttat 167
<210> 477
<211> 173
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (87)..(87)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 477
gtgcccagct gtctcttata cacatctttt ctcgatcatt tttttttttt ttttgcggcg 60
atcggctttt tttttttttt ttttttnttt tttttttttt tttttttgcc gatcgccgct 120
tttttttttt tttttttttt ttttttagat gtgtataaga gacagctgct tat 173
<210> 478
<211> 173
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (87)..(87)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 478
gtgcccagag atgtgtataa gagacagttt ctcgatcatt tttttttttt ttttgcggcg 60
atcggctttt tttttttttt ttttttnttt tttttttttt tttttttgcc gatcgccgct 120
tttttttttt tttttttttt ttttttctgt ctcttataca catctctgct tat 173
<210> 479
<211> 189
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (117)..(117)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 479
atcatcctgt ctcttataca catctttttt tttttttttt ttgatagtag ctgtctctta 60
tacacatctt tttttttttt tttttttttt tggcgatcgc tttttttttt ttttttnttt 120
tttttttttt tttgcgatcg cctttttttt tttttgatac atttagatgt gtataagaga 180
caggatgat 189
<210> 480
<211> 189
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (117)..(117)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 480
atcatcagat gtgtataaga gacagttttt tttttttttt ttgatagtag agatgtgtat 60
aagagacagt tttttttttt tttttttttt tggcgatcgc tttttttttt ttttttnttt 120
tttttttttt tttgcgatcg cctttttttt tttttgatac atttctgtct cttatacaca 180
tctgatgat 189
<210> 481
<211> 183
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (114)..(114)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 481
atcatcctgt ctcttataca catctttttt tttttttttt ttgatagtag ctgtctctta 60
tacacatctt tttttttttt tttttttttt tggtcgcttt tttttttttt tttntttttt 120
tttttttttt gcgacctttt tttttttttg atacatttag atgtgtataa gagacaggat 180
gat 183
<210> 482
<211> 183
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (114)..(114)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 482
atcatcagat gtgtataaga gacagttttt tttttttttt ttgatagtag agatgtgtat 60
aagagacagt tttttttttt tttttttttt tggtcgcttt tttttttttt tttntttttt 120
tttttttttt gcgacctttt tttttttttg atacatttct gtctcttata cacatctgat 180
gat 183
<210> 483
<211> 195
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (120)..(120)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 483
atcatcctgt ctcttataca catctttttt tttttttttt ttgatagtag ctgtctctta 60
tacacatctt tttttttttt tttttttttt tgcggcgatc ggcttttttt tttttttttn 120
tttttttttt ttttttgccg atcgccgctt tttttttttt tgatacattt agatgtgtat 180
aagagacagg atgat 195
<210> 484
<211> 195
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (120)..(120)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 484
atcatcagat gtgtataaga gacagttttt tttttttttt ttgatagtag agatgtgtat 60
aagagacagt tttttttttt tttttttttt tgcggcgatc ggcttttttt tttttttttn 120
tttttttttt ttttttgccg atcgccgctt tttttttttt tgatacattt ctgtctctta 180
tacacatctg atgat 195
<210> 485
<211> 189
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (75)..(75)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 485
gatagtagct gtctcttata cacatctttt tttttttttt tttttttttg gcgatcgctt 60
tttttttttt ttttnttttt tttttttttt tgcgatcgcc tttttttttt tttgatacat 120
ttagatgtgt ataagagaca ggatgatttt tttttttttt ttttatcatc ctgtctctta 180
tacacatct 189
<210> 486
<211> 189
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (75)..(75)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 486
gatagtagag atgtgtataa gagacagttt tttttttttt tttttttttg gcgatcgctt 60
tttttttttt ttttnttttt tttttttttt tgcgatcgcc tttttttttt tttgatacat 120
ttctgtctct tatacacatc tgatgatttt tttttttttt ttttatcatc agatgtgtat 180
aagagacag 189
<210> 487
<211> 183
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (72)..(72)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 487
gatagtagct gtctcttata cacatctttt tttttttttt tttttttttg gtcgcttttt 60
tttttttttt tntttttttt ttttttttgc gacctttttt tttttttgat acatttagat 120
gtgtataaga gacaggatga tttttttttt ttttttttat catcctgtct cttatacaca 180
tct 183
<210> 488
<211> 183
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (72)..(72)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 488
gatagtagag atgtgtataa gagacagttt tttttttttt tttttttttg gtcgcttttt 60
tttttttttt tntttttttt ttttttttgc gacctttttt tttttttgat acatttctgt 120
ctcttataca catctgatga tttttttttt ttttttttat catcagatgt gtataagaga 180
cag 183
<210> 489
<211> 195
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (78)..(78)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 489
gatagtagct gtctcttata cacatctttt tttttttttt tttttttttg cggcgatcgg 60
cttttttttt tttttttntt tttttttttt ttttgccgat cgccgctttt tttttttttg 120
atacatttag atgtgtataa gagacaggat gatttttttt tttttttttt atcatcctgt 180
ctcttataca catct 195
<210> 490
<211> 195
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (78)..(78)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 490
gatagtagag atgtgtataa gagacagttt tttttttttt tttttttttg cggcgatcgg 60
cttttttttt tttttttntt tttttttttt ttttgccgat cgccgctttt tttttttttg 120
atacatttct gtctcttata cacatctgat gatttttttt tttttttttt atcatcagat 180
gtgtataaga gacag 195
<210> 491
<211> 192
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (74)..(74)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 491
cacgtgctgt ctcttataca catcttttct cgatcattat tattttttgg cgatcgcttt 60
tttttttttt tttntttttt tttttttttt gcgatcgcct tttttttttt tttttttttt 120
agatgtgtat aagagacagg acgaatattt tttttttttt tttttttaga tgtgtataag 180
agacagcacg tg 192
<210> 492
<211> 192
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (74)..(74)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 492
cacgtgagat gtgtataaga gacagtttct cgatcattat tattttttgg cgatcgcttt 60
tttttttttt tttntttttt tttttttttt gcgatcgcct tttttttttt tttttttttt 120
ctgtctctta tacacatctg acgaatattt tttttttttt tttttttctg tctcttatac 180
acatctcacg tg 192
<210> 493
<211> 186
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (71)..(71)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 493
cacgtgctgt ctcttataca catcttttct cgatcattat tattttttgg tcgctttttt 60
tttttttttt nttttttttt tttttttgcg accttttttt tttttttttt ttttagatgt 120
gtataagaga caggacgaat attttttttt tttttttttt tagatgtgta taagagacag 180
cacgtg 186
<210> 494
<211> 186
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (71)..(71)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 494
cacgtgagat gtgtataaga gacagtttct cgatcattat tattttttgg tcgctttttt 60
tttttttttt nttttttttt tttttttgcg accttttttt tttttttttt ttttctgtct 120
cttatacaca tctgacgaat attttttttt tttttttttt tctgtctctt atacacatct 180
cacgtg 186
<210> 495
<211> 198
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (77)..(77)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 495
cacgtgctgt ctcttataca catcttttct cgatcattat tattttttgc ggcgatcggc 60
tttttttttt ttttttnttt tttttttttt tttgccgatc gccgcttttt tttttttttt 120
ttttttagat gtgtataaga gacaggacga atattttttt tttttttttt tttagatgtg 180
tataagagac agcacgtg 198
<210> 496
<211> 198
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (77)..(77)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 496
cacgtgagat gtgtataaga gacagtttct cgatcattat tattttttgc ggcgatcggc 60
tttttttttt ttttttnttt tttttttttt tttgccgatc gccgcttttt tttttttttt 120
ttttttctgt ctcttataca catctgacga atattttttt tttttttttt tttctgtctc 180
ttatacacat ctcacgtg 198
<210> 497
<211> 192
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (119)..(119)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 497
agatgtgtat aagagacagc acgtgttttt tttttttttt tttttcacgt gctgtctctt 60
atacacatct tttctcgatc attattattt tttggcgatc gctttttttt ttttttttnt 120
tttttttttt tttttgcgat cgcctttttt tttttttttt tttttagatg tgtataagag 180
acaggacgaa ta 192
<210> 498
<211> 192
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (119)..(119)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 498
ctgtctctta tacacatctc acgtgttttt tttttttttt tttttcacgt gagatgtgta 60
taagagacag tttctcgatc attattattt tttggcgatc gctttttttt ttttttttnt 120
tttttttttt tttttgcgat cgcctttttt tttttttttt tttttctgtc tcttatacac 180
atctgacgaa ta 192
<210> 499
<211> 186
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (116)..(116)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 499
agatgtgtat aagagacagc acgtgttttt tttttttttt tttttcacgt gctgtctctt 60
atacacatct tttctcgatc attattattt tttggtcgct tttttttttt tttttntttt 120
tttttttttt ttgcgacctt tttttttttt ttttttttta gatgtgtata agagacagga 180
cgaata 186
<210> 500
<211> 186
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (116)..(116)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 500
ctgtctctta tacacatctc acgtgttttt tttttttttt tttttcacgt gagatgtgta 60
taagagacag tttctcgatc attattattt tttggtcgct tttttttttt tttttntttt 120
tttttttttt ttgcgacctt tttttttttt tttttttttc tgtctcttat acacatctga 180
cgaata 186
<210> 501
<211> 198
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (122)..(122)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 501
agatgtgtat aagagacagc acgtgttttt tttttttttt tttttcacgt gctgtctctt 60
atacacatct tttctcgatc attattattt tttgcggcga tcggcttttt tttttttttt 120
tntttttttt ttttttttgc cgatcgccgc tttttttttt tttttttttt tagatgtgta 180
taagagacag gacgaata 198
<210> 502
<211> 198
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (122)..(122)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 502
ctgtctctta tacacatctc acgtgttttt tttttttttt tttttcacgt gagatgtgta 60
taagagacag tttctcgatc attattattt tttgcggcga tcggcttttt tttttttttt 120
tntttttttt ttttttttgc cgatcgccgc tttttttttt tttttttttt tctgtctctt 180
atacacatct gacgaata 198
<210> 503
<211> 95
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (95)..(95)
<223> 替换序列
<400> 503
agatgtgtat aagagacagc agctgcagac aaagcttaca gctgtctctt atacacatct 60
tttttttttt tttttttttt ttcatatgcc aagtn 95
<210> 504
<211> 95
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (95)..(95)
<223> 替换序列
<400> 504
ctgtctctta tacacatctc agctgcagac aaagcttaca gagatgtgta taagagacag 60
tttttttttt tttttttttt ttcatatgcc aagtn 95
<210> 505
<211> 89
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (83)..(83)
<223> 替换序列
<400> 505
agatgtgtat aagagacagc agctgcagac aaagcttaca gctgtctctt atacacatct 60
tttttttttt tttttttttt ttnccaagt 89
<210> 506
<211> 89
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (83)..(83)
<223> 替换序列
<400> 506
ctgtctctta tacacatctc agctgcagac aaagcttaca gagatgtgta taagagacag 60
tttttttttt tttttttttt ttnccaagt 89
<210> 507
<211> 99
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> 替换序列
<400> 507
ntacaagtcc ggataataat tttttttttt tttttttttt tagatgtgta taagagacag 60
ctgggcacgc gtataagcag ctgtctctta tacacatct 99
<210> 508
<211> 99
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> 替换序列
<400> 508
ntacaagtcc ggataataat tttttttttt tttttttttt tctgtctctt atacacatct 60
ctgggcacgc gtataagcag agatgtgtat aagagacag 99
<210> 509
<211> 93
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (7)..(7)
<223> 替换序列
<400> 509
tacaagntaa taattttttt tttttttttt tttttagatg tgtataagag acagctgggc 60
acgcgtataa gcagctgtct cttatacaca tct 93
<210> 510
<211> 93
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (7)..(7)
<223> 替换序列
<400> 510
tacaagntaa taattttttt tttttttttt tttttctgtc tcttatacac atctctgggc 60
acgcgtataa gcagagatgt gtataagaga cag 93
<210> 511
<211> 93
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> 替换序列
<400> 511
ntacaagtaa taattttttt tttttttttt tttttagatg tgtataagag acagctgggc 60
acgcgtataa gcagctgtct cttatacaca tct 93
<210> 512
<211> 93
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> 替换序列
<400> 512
ntacaagtaa taattttttt tttttttttt tttttctgtc tcttatacac atctctgggc 60
acgcgtataa gcagagatgt gtataagaga cag 93
<210> 513
<211> 64
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> 替换序列
<400> 513
nacttggtta attaattttt tttttttttt tttttttaga tgtgtataag agacagctac 60
tatc 64
<210> 514
<211> 64
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> 替换序列
<400> 514
nacttggtta attaattttt tttttttttt tttttttctg tctcttatac acatctctac 60
tatc 64
<210> 515
<211> 64
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (7)..(7)
<223> 替换序列
<400> 515
acttggntta attaattttt tttttttttt tttttttaga tgtgtataag agacagctac 60
tatc 64
<210> 516
<211> 64
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (7)..(7)
<223> 替换序列
<400> 516
acttggntta attaattttt tttttttttt tttttttctg tctcttatac acatctctac 60
tatc 64
<210> 517
<211> 70
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> 替换序列
<400> 517
nacttggcat atgttaatta attttttttt tttttttttt tttagatgtg tataagagac 60
agctactatc 70
<210> 518
<211> 70
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> 替换序列
<400> 518
nacttggcat atgttaatta attttttttt tttttttttt tttctgtctc ttatacacat 60
ctctactatc 70
<210> 519
<211> 63
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (63)..(63)
<223> 替换序列
<400> 519
tattcgtcct gtctcttata cacatctttt tttttttttt tttttattaa ttattacttg 60
tan 63
<210> 520
<211> 63
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (63)..(63)
<223> 替换序列
<400> 520
tattcgtcag atgtgtataa gagacagttt tttttttttt tttttattaa ttattacttg 60
tan 63
<210> 521
<211> 63
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (57)..(57)
<223> 替换序列
<400> 521
tattcgtcct gtctcttata cacatctttt tttttttttt tttttattaa ttattanctt 60
gta 63
<210> 522
<211> 63
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (57)..(57)
<223> 替换序列
<400> 522
tattcgtcag atgtgtataa gagacagttt tttttttttt tttttattaa ttattanctt 60
gta 63
<210> 523
<211> 69
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (69)..(69)
<223> 替换序列
<400> 523
tattcgtcct gtctcttata cacatctttt tttttttttt tttttattaa ttattatccg 60
gacttgtan 69
<210> 524
<211> 69
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (69)..(69)
<223> 替换序列
<400> 524
tattcgtcag atgtgtataa gagacagttt tttttttttt tttttattaa ttattatccg 60
gacttgtan 69
<210> 525
<211> 167
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (84)..(84)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 525
tgcagctgct gactcttata cacaagtttt tttttttttt tttttttttt ttttggcgat 60
cgcttttttt tttttttttt tttntttttt tttttttttt ttttgcgatc gccttttttt 120
tttttttttg atacatgttt acttgtgtat aagagtcagc tgtaagc 167
<210> 526
<211> 167
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (84)..(84)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 526
tgcagctgac ttgtgtataa gagtcagttt tttttttttt tttttttttt ttttggcgat 60
cgcttttttt tttttttttt tttntttttt tttttttttt ttttgcgatc gccttttttt 120
tttttttttg atacatgttt ctgactctta tacacaagtc tgtaagc 167
<210> 527
<211> 161
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (81)..(81)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 527
tgcagctgct gactcttata cacaagtttt tttttttttt tttttttttt ttttggtcgc 60
tttttttttt tttttttttt nttttttttt tttttttttt tgcgaccttt tttttttttt 120
tttgatacat gtttacttgt gtataagagt cagctgtaag c 161
<210> 528
<211> 161
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (81)..(81)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 528
tgcagctgac ttgtgtataa gagtcagttt tttttttttt tttttttttt ttttggtcgc 60
tttttttttt tttttttttt nttttttttt tttttttttt tgcgaccttt tttttttttt 120
tttgatacat gtttctgact cttatacaca agtctgtaag c 161
<210> 529
<211> 173
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (87)..(87)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 529
tgcagctgct gactcttata cacaagtttt tttttttttt tttttttttt ttttgcggcg 60
atcggctttt tttttttttt ttttttnttt tttttttttt tttttttgcc gatcgccgct 120
tttttttttt tttttgatac atgtttactt gtgtataaga gtcagctgta agc 173
<210> 530
<211> 173
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (87)..(87)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 530
tgcagctgac ttgtgtataa gagtcagttt tttttttttt tttttttttt ttttgcggcg 60
atcggctttt tttttttttt ttttttnttt tttttttttt tttttttgcc gatcgccgct 120
tttttttttt tttttgatac atgtttctga ctcttataca caagtctgta agc 173
<210> 531
<211> 161
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (81)..(81)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 531
gtgcccagct gactcttata cacaagtttt ctcgatcatt tttttttttt ttttggtcgc 60
tttttttttt tttttttttt nttttttttt tttttttttt tgcgaccttt tttttttttt 120
tttttttttt ttttacttgt gtataagagt cagctgctta t 161
<210> 532
<211> 161
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (81)..(81)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 532
gtgcccagac ttgtgtataa gagtcagttt ctcgatcatt tttttttttt ttttggtcgc 60
tttttttttt tttttttttt nttttttttt tttttttttt tgcgaccttt tttttttttt 120
tttttttttt ttttctgact cttatacaca agtctgctta t 161
<210> 533
<211> 189
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (117)..(117)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 533
atcatcctga ctcttataca caagtttttt tttttttttt ttgatagtag ctgactctta 60
tacacaagtt tttttttttt tttttttttt tggcgatcgc tttttttttt ttttttnttt 120
tttttttttt tttgcgatcg cctttttttt tttttgatac atttacttgt gtataagagt 180
caggatgat 189
<210> 534
<211> 189
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (117)..(117)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 534
atcatcactt gtgtataaga gtcagttttt tttttttttt ttgatagtag acttgtgtat 60
aagagtcagt tttttttttt tttttttttt tggcgatcgc tttttttttt ttttttnttt 120
tttttttttt tttgcgatcg cctttttttt tttttgatac atttctgact cttatacaca 180
agtgatgat 189
<210> 535
<211> 183
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (114)..(114)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 535
atcatcctga ctcttataca caagtttttt tttttttttt ttgatagtag ctgactctta 60
tacacaagtt tttttttttt tttttttttt tggtcgcttt tttttttttt tttntttttt 120
tttttttttt gcgacctttt tttttttttg atacatttac ttgtgtataa gagtcaggat 180
gat 183
<210> 536
<211> 183
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (114)..(114)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 536
atcatcactt gtgtataaga gtcagttttt tttttttttt ttgatagtag acttgtgtat 60
aagagtcagt tttttttttt tttttttttt tggtcgcttt tttttttttt tttntttttt 120
tttttttttt gcgacctttt tttttttttg atacatttct gactcttata cacaagtgat 180
gat 183
<210> 537
<211> 195
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (120)..(120)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 537
atcatcctga ctcttataca caagtttttt tttttttttt ttgatagtag ctgactctta 60
tacacaagtt tttttttttt tttttttttt tgcggcgatc ggcttttttt tttttttttn 120
tttttttttt ttttttgccg atcgccgctt tttttttttt tgatacattt acttgtgtat 180
aagagtcagg atgat 195
<210> 538
<211> 195
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (120)..(120)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 538
atcatcactt gtgtataaga gtcagttttt tttttttttt ttgatagtag acttgtgtat 60
aagagtcagt tttttttttt tttttttttt tgcggcgatc ggcttttttt tttttttttn 120
tttttttttt ttttttgccg atcgccgctt tttttttttt tgatacattt ctgactctta 180
tacacaagtg atgat 195
<210> 539
<211> 189
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (75)..(75)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 539
gatagtagct gactcttata cacaagtttt tttttttttt tttttttttg gcgatcgctt 60
tttttttttt ttttnttttt tttttttttt tgcgatcgcc tttttttttt tttgatacat 120
ttacttgtgt ataagagtca ggatgatttt tttttttttt ttttatcatc ctgactctta 180
tacacaagt 189
<210> 540
<211> 189
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (75)..(75)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 540
gatagtagac ttgtgtataa gagtcagttt tttttttttt tttttttttg gcgatcgctt 60
tttttttttt ttttnttttt tttttttttt tgcgatcgcc tttttttttt tttgatacat 120
ttctgactct tatacacaag tgatgatttt tttttttttt ttttatcatc acttgtgtat 180
aagagtcag 189
<210> 541
<211> 183
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (72)..(72)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 541
gatagtagct gactcttata cacaagtttt tttttttttt tttttttttg gtcgcttttt 60
tttttttttt tntttttttt ttttttttgc gacctttttt tttttttgat acatttactt 120
gtgtataaga gtcaggatga tttttttttt ttttttttat catcctgact cttatacaca 180
agt 183
<210> 542
<211> 183
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (72)..(72)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 542
gatagtagac ttgtgtataa gagtcagttt tttttttttt tttttttttg gtcgcttttt 60
tttttttttt tntttttttt ttttttttgc gacctttttt tttttttgat acatttctga 120
ctcttataca caagtgatga tttttttttt ttttttttat catcacttgt gtataagagt 180
cag 183
<210> 543
<211> 195
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (78)..(78)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 543
gatagtagct gactcttata cacaagtttt tttttttttt tttttttttg cggcgatcgg 60
cttttttttt tttttttntt tttttttttt ttttgccgat cgccgctttt tttttttttg 120
atacatttac ttgtgtataa gagtcaggat gatttttttt tttttttttt atcatcctga 180
ctcttataca caagt 195
<210> 544
<211> 195
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (78)..(78)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 544
gatagtagac ttgtgtataa gagtcagttt tttttttttt tttttttttg cggcgatcgg 60
cttttttttt tttttttntt tttttttttt ttttgccgat cgccgctttt tttttttttg 120
atacatttct gactcttata cacaagtgat gatttttttt tttttttttt atcatcactt 180
gtgtataaga gtcag 195
<210> 545
<211> 192
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (74)..(74)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 545
cacgtgctga ctcttataca caagttttct cgatcattat tattttttgg cgatcgcttt 60
tttttttttt tttntttttt tttttttttt gcgatcgcct tttttttttt tttttttttt 120
acttgtgtat aagagtcagg acgaatattt tttttttttt tttttttact tgtgtataag 180
agtcagcacg tg 192
<210> 546
<211> 192
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (74)..(74)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 546
cacgtgactt gtgtataaga gtcagtttct cgatcattat tattttttgg cgatcgcttt 60
tttttttttt tttntttttt tttttttttt gcgatcgcct tttttttttt tttttttttt 120
ctgactctta tacacaagtg acgaatattt tttttttttt tttttttctg actcttatac 180
acaagtcacg tg 192
<210> 547
<211> 186
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (71)..(71)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 547
cacgtgctga ctcttataca caagttttct cgatcattat tattttttgg tcgctttttt 60
tttttttttt nttttttttt tttttttgcg accttttttt tttttttttt ttttacttgt 120
gtataagagt caggacgaat attttttttt tttttttttt tacttgtgta taagagtcag 180
cacgtg 186
<210> 548
<211> 186
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (71)..(71)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 548
cacgtgactt gtgtataaga gtcagtttct cgatcattat tattttttgg tcgctttttt 60
tttttttttt nttttttttt tttttttgcg accttttttt tttttttttt ttttctgact 120
cttatacaca agtgacgaat attttttttt tttttttttt tctgactctt atacacaagt 180
cacgtg 186
<210> 549
<211> 198
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (77)..(77)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 549
cacgtgctga ctcttataca caagttttct cgatcattat tattttttgc ggcgatcggc 60
tttttttttt ttttttnttt tttttttttt tttgccgatc gccgcttttt tttttttttt 120
ttttttactt gtgtataaga gtcaggacga atattttttt tttttttttt tttacttgtg 180
tataagagtc agcacgtg 198
<210> 550
<211> 198
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (77)..(77)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 550
cacgtgactt gtgtataaga gtcagtttct cgatcattat tattttttgc ggcgatcggc 60
tttttttttt ttttttnttt tttttttttt tttgccgatc gccgcttttt tttttttttt 120
ttttttctga ctcttataca caagtgacga atattttttt tttttttttt tttctgactc 180
ttatacacaa gtcacgtg 198
<210> 551
<211> 192
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (119)..(119)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 551
acttgtgtat aagagtcagc acgtgttttt tttttttttt tttttcacgt gctgactctt 60
atacacaagt tttctcgatc attattattt tttggcgatc gctttttttt ttttttttnt 120
tttttttttt tttttgcgat cgcctttttt tttttttttt tttttacttg tgtataagag 180
tcaggacgaa ta 192
<210> 552
<211> 192
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (119)..(119)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 552
ctgactctta tacacaagtc acgtgttttt tttttttttt tttttcacgt gacttgtgta 60
taagagtcag tttctcgatc attattattt tttggcgatc gctttttttt ttttttttnt 120
tttttttttt tttttgcgat cgcctttttt tttttttttt tttttctgac tcttatacac 180
aagtgacgaa ta 192
<210> 553
<211> 186
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (116)..(116)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 553
acttgtgtat aagagtcagc acgtgttttt tttttttttt tttttcacgt gctgactctt 60
atacacaagt tttctcgatc attattattt tttggtcgct tttttttttt tttttntttt 120
tttttttttt ttgcgacctt tttttttttt ttttttttta cttgtgtata agagtcagga 180
cgaata 186
<210> 554
<211> 186
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (116)..(116)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 554
ctgactctta tacacaagtc acgtgttttt tttttttttt tttttcacgt gacttgtgta 60
taagagtcag tttctcgatc attattattt tttggtcgct tttttttttt tttttntttt 120
tttttttttt ttgcgacctt tttttttttt tttttttttc tgactcttat acacaagtga 180
cgaata 186
<210> 555
<211> 198
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (122)..(122)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 555
acttgtgtat aagagtcagc acgtgttttt tttttttttt tttttcacgt gctgactctt 60
atacacaagt tttctcgatc attattattt tttgcggcga tcggcttttt tttttttttt 120
tntttttttt ttttttttgc cgatcgccgc tttttttttt tttttttttt tacttgtgta 180
taagagtcag gacgaata 198
<210> 556
<211> 198
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (122)..(122)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 556
ctgactctta tacacaagtc acgtgttttt tttttttttt tttttcacgt gacttgtgta 60
taagagtcag tttctcgatc attattattt tttgcggcga tcggcttttt tttttttttt 120
tntttttttt ttttttttgc cgatcgccgc tttttttttt tttttttttt tctgactctt 180
atacacaagt gacgaata 198
<210> 557
<211> 95
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (95)..(95)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 557
acttgtgtat aagagtcagc agctgcagac aaagcttaca gctgactctt atacacaagt 60
tttttttttt tttttttttt ttcatatgcc aagtn 95
<210> 558
<211> 95
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (95)..(95)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 558
ctgactctta tacacaagtc agctgcagac aaagcttaca gacttgtgta taagagtcag 60
tttttttttt tttttttttt ttcatatgcc aagtn 95
<210> 559
<211> 89
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (83)..(83)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 559
acttgtgtat aagagtcagc agctgcagac aaagcttaca gctgactctt atacacaagt 60
tttttttttt tttttttttt ttnccaagt 89
<210> 560
<211> 89
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (83)..(83)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 560
ctgactctta tacacaagtc agctgcagac aaagcttaca gacttgtgta taagagtcag 60
tttttttttt tttttttttt ttnccaagt 89
<210> 561
<211> 99
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> 替换序列
<400> 561
ntacaagtcc ggataataat tttttttttt tttttttttt tacttgtgta taagagtcag 60
ctgggcacgc gtataagcag ctgactctta tacacaagt 99
<210> 562
<211> 99
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> 替换序列
<400> 562
ntacaagtcc ggataataat tttttttttt tttttttttt tctgactctt atacacaagt 60
ctgggcacgc gtataagcag acttgtgtat aagagtcag 99
<210> 563
<211> 93
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (7)..(7)
<223> 替换序列
<400> 563
tacaagntaa taattttttt tttttttttt tttttacttg tgtataagag tcagctgggc 60
acgcgtataa gcagctgact cttatacaca agt 93
<210> 564
<211> 93
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (7)..(7)
<223> 替换序列
<400> 564
tacaagntaa taattttttt tttttttttt tttttctgac tcttatacac aagtctgggc 60
acgcgtataa gcagacttgt gtataagagt cag 93
<210> 565
<211> 93
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> 替换序列
<400> 565
ntacaagtaa taattttttt tttttttttt tttttacttg tgtataagag tcagctgggc 60
acgcgtataa gcagctgact cttatacaca agt 93
<210> 566
<211> 93
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> 替换序列
<400> 566
ntacaagtaa taattttttt tttttttttt tttttctgac tcttatacac aagtctgggc 60
acgcgtataa gcagacttgt gtataagagt cag 93
<210> 567
<211> 64
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> 替换序列
<400> 567
nacttggtta attaattttt tttttttttt tttttttact tgtgtataag agtcagctac 60
tatc 64
<210> 568
<211> 64
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> 替换序列
<400> 568
nacttggtta attaattttt tttttttttt tttttttctg actcttatac acaagtctac 60
tatc 64
<210> 569
<211> 64
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (7)..(7)
<223> 替换序列
<400> 569
acttggntta attaattttt tttttttttt tttttttact tgtgtataag agtcagctac 60
tatc 64
<210> 570
<211> 64
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (7)..(7)
<223> 替换序列
<400> 570
acttggntta attaattttt tttttttttt tttttttctg actcttatac acaagtctac 60
tatc 64
<210> 571
<211> 70
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> 替换序列
<400> 571
nacttggcat atgttaatta attttttttt tttttttttt tttacttgtg tataagagtc 60
agctactatc 70
<210> 572
<211> 70
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> 替换序列
<400> 572
nacttggcat atgttaatta attttttttt tttttttttt tttctgactc ttatacacaa 60
gtctactatc 70
<210> 573
<211> 63
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (63)..(63)
<223> 替换序列
<400> 573
tattcgtcct gactcttata cacaagtttt tttttttttt tttttattaa ttattacttg 60
tan 63
<210> 574
<211> 63
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (63)..(63)
<223> 替换序列
<400> 574
tattcgtcac ttgtgtataa gagtcagttt tttttttttt tttttattaa ttattacttg 60
tan 63
<210> 575
<211> 63
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (57)..(57)
<223> 替换序列
<400> 575
tattcgtcct gactcttata cacaagtttt tttttttttt tttttattaa ttattanctt 60
gta 63
<210> 576
<211> 63
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (57)..(57)
<223> 替换序列
<400> 576
tattcgtcac ttgtgtataa gagtcagttt tttttttttt tttttattaa ttattanctt 60
gta 63
<210> 577
<211> 69
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (69)..(69)
<223> 替换序列
<400> 577
tattcgtcct gactcttata cacaagtttt tttttttttt tttttattaa ttattatccg 60
gacttgtan 69
<210> 578
<211> 69
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (69)..(69)
<223> 替换序列
<400> 578
tattcgtcac ttgtgtataa gagtcagttt tttttttttt tttttattaa ttattatccg 60
gacttgtan 69
<210> 579
<211> 167
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (84)..(84)
<223> 替换序列
<400> 579
tgcagctgct gtctcttgat cagatctttt tttttttttt tttttttttt ttttggcgat 60
cgcttttttt tttttttttt tttntttttt tttttttttt ttttgcgatc gccttttttt 120
tttttttttg atacatgttt agatctgatc aagagacagc tgtaagc 167
<210> 580
<211> 167
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (84)..(84)
<223> 替换序列
<400> 580
tgcagctgag atctgatcaa gagacagttt tttttttttt tttttttttt ttttggcgat 60
cgcttttttt tttttttttt tttntttttt tttttttttt ttttgcgatc gccttttttt 120
tttttttttg atacatgttt ctgtctcttg atcagatctc tgtaagc 167
<210> 581
<211> 161
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (81)..(81)
<223> 替换序列
<400> 581
tgcagctgct gtctcttgat cagatctttt tttttttttt tttttttttt ttttggtcgc 60
tttttttttt tttttttttt nttttttttt tttttttttt tgcgaccttt tttttttttt 120
tttgatacat gtttagatct gatcaagaga cagctgtaag c 161
<210> 582
<211> 161
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (81)..(81)
<223> 替换序列
<400> 582
tgcagctgag atctgatcaa gagacagttt tttttttttt tttttttttt ttttggtcgc 60
tttttttttt tttttttttt nttttttttt tttttttttt tgcgaccttt tttttttttt 120
tttgatacat gtttctgtct cttgatcaga tctctgtaag c 161
<210> 583
<211> 173
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (87)..(87)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 583
tgcagctgct gtctcttgat cagatctttt tttttttttt tttttttttt ttttgcggcg 60
atcggctttt tttttttttt ttttttnttt tttttttttt tttttttgcc gatcgccgct 120
tttttttttt tttttgatac atgtttagat ctgatcaaga gacagctgta agc 173
<210> 584
<211> 173
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (87)..(87)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 584
tgcagctgag atctgatcaa gagacagttt tttttttttt tttttttttt ttttgcggcg 60
atcggctttt tttttttttt ttttttnttt tttttttttt tttttttgcc gatcgccgct 120
tttttttttt tttttgatac atgtttctgt ctcttgatca gatctctgta agc 173
<210> 585
<211> 161
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (81)..(81)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 585
gtgcccagct gtctcttgat cagatctttt ctcgatcatt tttttttttt ttttggtcgc 60
tttttttttt tttttttttt nttttttttt tttttttttt tgcgaccttt tttttttttt 120
tttttttttt ttttagatct gatcaagaga cagctgctta t 161
<210> 586
<211> 161
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (81)..(81)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 586
gtgcccagag atctgatcaa gagacagttt ctcgatcatt tttttttttt ttttggtcgc 60
tttttttttt tttttttttt nttttttttt tttttttttt tgcgaccttt tttttttttt 120
tttttttttt ttttctgtct cttgatcaga tctctgctta t 161
<210> 587
<211> 167
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (84)..(84)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 587
gtgcccagct gtctcttgat cagatctttt ctcgatcatt tttttttttt ttttggcgat 60
cgcttttttt tttttttttt tttntttttt tttttttttt ttttgcgatc gccttttttt 120
tttttttttt tttttttttt agatctgatc aagagacagc tgcttat 167
<210> 588
<211> 167
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (84)..(84)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 588
gtgcccagag atctgatcaa gagacagttt ctcgatcatt tttttttttt ttttggcgat 60
cgcttttttt tttttttttt tttntttttt tttttttttt ttttgcgatc gccttttttt 120
tttttttttt tttttttttt ctgtctcttg atcagatctc tgcttat 167
<210> 589
<211> 173
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (87)..(87)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 589
gtgcccagct gtctcttgat cagatctttt ctcgatcatt tttttttttt ttttgcggcg 60
atcggctttt tttttttttt ttttttnttt tttttttttt tttttttgcc gatcgccgct 120
tttttttttt tttttttttt ttttttagat ctgatcaaga gacagctgct tat 173
<210> 590
<211> 173
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (87)..(87)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 590
gtgcccagag atctgatcaa gagacagttt ctcgatcatt tttttttttt ttttgcggcg 60
atcggctttt tttttttttt ttttttnttt tttttttttt tttttttgcc gatcgccgct 120
tttttttttt tttttttttt ttttttctgt ctcttgatca gatctctgct tat 173
<210> 591
<211> 189
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (117)..(117)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 591
atcatcctgt ctcttgatca gatctttttt tttttttttt ttgatagtag ctgtctcttg 60
atcagatctt tttttttttt tttttttttt tggcgatcgc tttttttttt ttttttnttt 120
tttttttttt tttgcgatcg cctttttttt tttttgatac atttagatct gatcaagaga 180
caggatgat 189
<210> 592
<211> 189
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (117)..(117)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 592
atcatcagat ctgatcaaga gacagttttt tttttttttt ttgatagtag agatctgatc 60
aagagacagt tttttttttt tttttttttt tggcgatcgc tttttttttt ttttttnttt 120
tttttttttt tttgcgatcg cctttttttt tttttgatac atttctgtct cttgatcaga 180
tctgatgat 189
<210> 593
<211> 183
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (114)..(114)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 593
atcatcctgt ctcttgatca gatctttttt tttttttttt ttgatagtag ctgtctcttg 60
atcagatctt tttttttttt tttttttttt tggtcgcttt tttttttttt tttntttttt 120
tttttttttt gcgacctttt tttttttttg atacatttag atctgatcaa gagacaggat 180
gat 183
<210> 594
<211> 183
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (114)..(114)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 594
atcatcagat ctgatcaaga gacagttttt tttttttttt ttgatagtag agatctgatc 60
aagagacagt tttttttttt tttttttttt tggtcgcttt tttttttttt tttntttttt 120
tttttttttt gcgacctttt tttttttttg atacatttct gtctcttgat cagatctgat 180
gat 183
<210> 595
<211> 195
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (120)..(120)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 595
atcatcctgt ctcttgatca gatctttttt tttttttttt ttgatagtag ctgtctcttg 60
atcagatctt tttttttttt tttttttttt tgcggcgatc ggcttttttt tttttttttn 120
tttttttttt ttttttgccg atcgccgctt tttttttttt tgatacattt agatctgatc 180
aagagacagg atgat 195
<210> 596
<211> 195
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (120)..(120)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 596
atcatcagat ctgatcaaga gacagttttt tttttttttt ttgatagtag agatctgatc 60
aagagacagt tttttttttt tttttttttt tgcggcgatc ggcttttttt tttttttttn 120
tttttttttt ttttttgccg atcgccgctt tttttttttt tgatacattt ctgtctcttg 180
atcagatctg atgat 195
<210> 597
<211> 189
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (75)..(75)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 597
gatagtagct gtctcttgat cagatctttt tttttttttt tttttttttg gcgatcgctt 60
tttttttttt ttttnttttt tttttttttt tgcgatcgcc tttttttttt tttgatacat 120
ttagatctga tcaagagaca ggatgatttt tttttttttt ttttatcatc ctgtctcttg 180
atcagatct 189
<210> 598
<211> 189
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (75)..(75)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 598
gatagtagag atctgatcaa gagacagttt tttttttttt tttttttttg gcgatcgctt 60
tttttttttt ttttnttttt tttttttttt tgcgatcgcc tttttttttt tttgatacat 120
ttctgtctct tgatcagatc tgatgatttt tttttttttt ttttatcatc agatctgatc 180
aagagacag 189
<210> 599
<211> 183
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (72)..(72)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 599
gatagtagct gtctcttgat cagatctttt tttttttttt tttttttttg gtcgcttttt 60
tttttttttt tntttttttt ttttttttgc gacctttttt tttttttgat acatttagat 120
ctgatcaaga gacaggatga tttttttttt ttttttttat catcctgtct cttgatcaga 180
tct 183
<210> 600
<211> 183
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (72)..(72)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 600
gatagtagag atctgatcaa gagacagttt tttttttttt tttttttttg gtcgcttttt 60
tttttttttt tntttttttt ttttttttgc gacctttttt tttttttgat acatttctgt 120
ctcttgatca gatctgatga tttttttttt ttttttttat catcagatct gatcaagaga 180
cag 183
<210> 601
<211> 195
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (78)..(78)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 601
gatagtagct gtctcttgat cagatctttt tttttttttt tttttttttg cggcgatcgg 60
cttttttttt tttttttntt tttttttttt ttttgccgat cgccgctttt tttttttttg 120
atacatttag atctgatcaa gagacaggat gatttttttt tttttttttt atcatcctgt 180
ctcttgatca gatct 195
<210> 602
<211> 195
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (78)..(78)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 602
gatagtagag atctgatcaa gagacagttt tttttttttt tttttttttg cggcgatcgg 60
cttttttttt tttttttntt tttttttttt ttttgccgat cgccgctttt tttttttttg 120
atacatttct gtctcttgat cagatctgat gatttttttt tttttttttt atcatcagat 180
ctgatcaaga gacag 195
<210> 603
<211> 192
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (74)..(74)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 603
cacgtgctgt ctcttgatca gatcttttct cgatcattat tattttttgg cgatcgcttt 60
tttttttttt tttntttttt tttttttttt gcgatcgcct tttttttttt tttttttttt 120
agatctgatc aagagacagg acgaatattt tttttttttt tttttttaga tctgatcaag 180
agacagcacg tg 192
<210> 604
<211> 192
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (74)..(74)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 604
cacgtgagat ctgatcaaga gacagtttct cgatcattat tattttttgg cgatcgcttt 60
tttttttttt tttntttttt tttttttttt gcgatcgcct tttttttttt tttttttttt 120
ctgtctcttg atcagatctg acgaatattt tttttttttt tttttttctg tctcttgatc 180
agatctcacg tg 192
<210> 605
<211> 186
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (71)..(71)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 605
cacgtgctgt ctcttgatca gatcttttct cgatcattat tattttttgg tcgctttttt 60
tttttttttt nttttttttt tttttttgcg accttttttt tttttttttt ttttagatct 120
gatcaagaga caggacgaat attttttttt tttttttttt tagatctgat caagagacag 180
cacgtg 186
<210> 606
<211> 186
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (71)..(71)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 606
cacgtgagat ctgatcaaga gacagtttct cgatcattat tattttttgg tcgctttttt 60
tttttttttt nttttttttt tttttttgcg accttttttt tttttttttt ttttctgtct 120
cttgatcaga tctgacgaat attttttttt tttttttttt tctgtctctt gatcagatct 180
cacgtg 186
<210> 607
<211> 198
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (77)..(77)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 607
cacgtgctgt ctcttgatca gatcttttct cgatcattat tattttttgc ggcgatcggc 60
tttttttttt ttttttnttt tttttttttt tttgccgatc gccgcttttt tttttttttt 120
ttttttagat ctgatcaaga gacaggacga atattttttt tttttttttt tttagatctg 180
atcaagagac agcacgtg 198
<210> 608
<211> 198
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (77)..(77)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 608
cacgtgagat ctgatcaaga gacagtttct cgatcattat tattttttgc ggcgatcggc 60
tttttttttt ttttttnttt tttttttttt tttgccgatc gccgcttttt tttttttttt 120
ttttttctgt ctcttgatca gatctgacga atattttttt tttttttttt tttctgtctc 180
ttgatcagat ctcacgtg 198
<210> 609
<211> 192
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (119)..(119)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 609
agatctgatc aagagacagc acgtgttttt tttttttttt tttttcacgt gctgtctctt 60
gatcagatct tttctcgatc attattattt tttggcgatc gctttttttt ttttttttnt 120
tttttttttt tttttgcgat cgcctttttt tttttttttt tttttagatc tgatcaagag 180
acaggacgaa ta 192
<210> 610
<211> 192
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (119)..(119)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 610
ctgtctcttg atcagatctc acgtgttttt tttttttttt tttttcacgt gagatctgat 60
caagagacag tttctcgatc attattattt tttggcgatc gctttttttt ttttttttnt 120
tttttttttt tttttgcgat cgcctttttt tttttttttt tttttctgtc tcttgatcag 180
atctgacgaa ta 192
<210> 611
<211> 186
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (116)..(116)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 611
agatctgatc aagagacagc acgtgttttt tttttttttt tttttcacgt gctgtctctt 60
gatcagatct tttctcgatc attattattt tttggtcgct tttttttttt tttttntttt 120
tttttttttt ttgcgacctt tttttttttt ttttttttta gatctgatca agagacagga 180
cgaata 186
<210> 612
<211> 186
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (116)..(116)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 612
ctgtctcttg atcagatctc acgtgttttt tttttttttt tttttcacgt gagatctgat 60
caagagacag tttctcgatc attattattt tttggtcgct tttttttttt tttttntttt 120
tttttttttt ttgcgacctt tttttttttt tttttttttc tgtctcttga tcagatctga 180
cgaata 186
<210> 613
<211> 198
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (122)..(122)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 613
agatctgatc aagagacagc acgtgttttt tttttttttt tttttcacgt gctgtctctt 60
gatcagatct tttctcgatc attattattt tttgcggcga tcggcttttt tttttttttt 120
tntttttttt ttttttttgc cgatcgccgc tttttttttt tttttttttt tagatctgat 180
caagagacag gacgaata 198
<210> 614
<211> 198
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (122)..(122)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 614
ctgtctcttg atcagatctc acgtgttttt tttttttttt tttttcacgt gagatctgat 60
caagagacag tttctcgatc attattattt tttgcggcga tcggcttttt tttttttttt 120
tntttttttt ttttttttgc cgatcgccgc tttttttttt tttttttttt tctgtctctt 180
gatcagatct gacgaata 198
<210> 615
<211> 95
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (95)..(95)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 615
agatctgatc aagagacagc agctgcagac aaagcttaca gctgtctctt gatcagatct 60
tttttttttt tttttttttt ttcatatgcc aagtn 95
<210> 616
<211> 95
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (95)..(95)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 616
ctgtctcttg atcagatctc agctgcagac aaagcttaca gagatctgat caagagacag 60
tttttttttt tttttttttt ttcatatgcc aagtn 95
<210> 617
<211> 89
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (83)..(83)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 617
agatctgatc aagagacagc agctgcagac aaagcttaca gctgtctctt gatcagatct 60
tttttttttt tttttttttt ttnccaagt 89
<210> 618
<211> 89
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (83)..(83)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入的序列
<400> 618
ctgtctcttg atcagatctc agctgcagac aaagcttaca gagatctgat caagagacag 60
tttttttttt tttttttttt ttnccaagt 89
<210> 619
<211> 99
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> 替换序列
<400> 619
ntacaagtcc ggataataat tttttttttt tttttttttt tagatctgat caagagacag 60
ctgggcacgc gtataagcag ctgtctcttg atcagatct 99
<210> 620
<211> 99
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> 替换序列
<400> 620
ntacaagtcc ggataataat tttttttttt tttttttttt tctgtctctt gatcagatct 60
ctgggcacgc gtataagcag agatctgatc aagagacag 99
<210> 621
<211> 93
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (7)..(7)
<223> 替换序列
<400> 621
tacaagntaa taattttttt tttttttttt tttttagatc tgatcaagag acagctgggc 60
acgcgtataa gcagctgtct cttgatcaga tct 93
<210> 622
<211> 93
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (7)..(7)
<223> 替换序列
<400> 622
tacaagntaa taattttttt tttttttttt tttttctgtc tcttgatcag atctctgggc 60
acgcgtataa gcagagatct gatcaagaga cag 93
<210> 623
<211> 93
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> 替换序列
<400> 623
ntacaagtaa taattttttt tttttttttt tttttagatc tgatcaagag acagctgggc 60
acgcgtataa gcagctgtct cttgatcaga tct 93
<210> 624
<211> 93
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> 替换序列
<400> 624
ntacaagtaa taattttttt tttttttttt tttttctgtc tcttgatcag atctctgggc 60
acgcgtataa gcagagatct gatcaagaga cag 93
<210> 625
<211> 64
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> 替换序列
<400> 625
nacttggtta attaattttt tttttttttt tttttttaga tctgatcaag agacagctac 60
tatc 64
<210> 626
<211> 64
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> 替换序列
<400> 626
nacttggtta attaattttt tttttttttt tttttttctg tctcttgatc agatctctac 60
tatc 64
<210> 627
<211> 64
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (7)..(7)
<223> 替换序列
<400> 627
acttggntta attaattttt tttttttttt tttttttaga tctgatcaag agacagctac 60
tatc 64
<210> 628
<211> 64
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (7)..(7)
<223> 替换序列
<400> 628
acttggntta attaattttt tttttttttt tttttttctg tctcttgatc agatctctac 60
tatc 64
<210> 629
<211> 70
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> 替换序列
<400> 629
nacttggcat atgttaatta attttttttt tttttttttt tttagatctg atcaagagac 60
agctactatc 70
<210> 630
<211> 70
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> 替换序列
<400> 630
nacttggcat atgttaatta attttttttt tttttttttt tttctgtctc ttgatcagat 60
ctctactatc 70
<210> 631
<211> 63
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (63)..(63)
<223> 替换序列
<400> 631
tattcgtcct gtctcttgat cagatctttt tttttttttt tttttattaa ttattacttg 60
tan 63
<210> 632
<211> 63
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (63)..(63)
<223> 替换序列
<400> 632
tattcgtcag atctgatcaa gagacagttt tttttttttt tttttattaa ttattacttg 60
tan 63
<210> 633
<211> 63
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (57)..(57)
<223> 替换序列
<400> 633
tattcgtcct gtctcttgat cagatctttt tttttttttt tttttattaa ttattanctt 60
gta 63
<210> 634
<211> 63
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (57)..(57)
<223> 替换序列
<400> 634
tattcgtcag atctgatcaa gagacagttt tttttttttt tttttattaa ttattanctt 60
gta 63
<210> 635
<211> 69
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (69)..(69)
<223> 替换序列
<400> 635
tattcgtcct gtctcttgat cagatctttt tttttttttt tttttattaa ttattatccg 60
gacttgtan 69
<210> 636
<211> 69
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (69)..(69)
<223> 替换序列
<400> 636
tattcgtcag atctgatcaa gagacagttt tttttttttt tttttattaa ttattatccg 60
gacttgtan 69
<210> 637
<211> 63
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (57)..(57)
<223> 替换序列
<400> 637
TATTCGTCCT GtCTCTTgat CAgATCTTTT TTTTTTTTTT TTTTTATTAA TTATTANctt 60
gta 63
<210> 638
<211> 63
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (57)..(57)
<223> 替换序列
<400> 638
TATTCGTCAG ATcTGatcAA GAGaCAGTTT TTTTTTTTTT TTTTTATTAA TTATTANctt 60
gta 63
<210> 639
<211> 69
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (69)..(69)
<223> 替换序列
<400> 639
TATTCGTCCT GtCTCTTgat CAgATCTTTT TTTTTTTTTT TTTTTATTAA TTATTATCCG 60
GActtgtaN 69
<210> 640
<211> 69
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (69)..(69)
<223> 替换序列
<400> 640
TATTCGTCAG ATcTGatcAA GAGaCAGTTT TTTTTTTTTT TTTTTATTAA TTATTATCCG 60
GActtgtaN 69
<210> 641
<211> 135
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (7)..(7)
<223> 转座酶结合位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (33)..(33)
<223> 转座酶结合位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (82)..(82)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入
的序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (130)..(130)
<223> 转座酶结合位点
<400> 641
atcatcnttt tttttttttt ttttgatagt agnttttttt tttttttttt ttttttggcg 60
atcgcttttt tttttttttt tntttttttt ttttttttgc gatcgccttt tttttttttt 120
gatacatttn gatgat 135
<210> 642
<211> 46
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> 替换序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (38)..(38)
<223> 转座酶结合位点
<400> 642
nacttggtta attaattttt tttttttttt tttttttnct actatc 46
<210> 643
<211> 131
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (9)..(9)
<223> 转座酶结合位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (66)..(66)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入
的序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (123)..(123)
<223> 转座酶结合位点
<400> 643
tgcagctgnt tttttttttt tttttttttt ttttttggcg atcgcttttt tttttttttt 60
tttttntttt tttttttttt ttttttgcga tcgccttttt tttttttttt tgatacatgt 120
ttnctgtaag c 131
<210> 644
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> 转座酶结合位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (24)..(24)
<223> 转座酶结合位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (59)..(59)
<223> 替换序列
<400> 644
ncagctgcag acaaagctta cagntttttt tttttttttt ttttttcata tgccaagtn 59
<210> 645
<211> 135
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (7)..(7)
<223> 转座酶结合位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (33)..(33)
<223> 转座酶结合位点
<220>
<221> misc_feature
<222> (82)..(82)
<223> 允许将所关注核酸的互补序列插入
的序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (130)..(130)
<223> 转座酶结合位点
<400> 645
atcatcnttt tttttttttt ttttgatagt agnttttttt tttttttttt ttttttggcg 60
atcgcttttt tttttttttt tntttttttt ttttttttgc gatcgccttt tttttttttt 120
gatacatttn gatgat 135
<210> 646
<211> 46
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 复合物的分子
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> 替换序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (38)..(38)
<223> 转座酶结合位点
<400> 646
nacttggtta attaattttt tttttttttt tttttttnct actatc 46
Claims (15)
1.一种复合物，包含
-第一单链核酸分子，所述第一单链核酸分子包含允许将所关注核酸的互补序列插入的A序列或基本上由所述A序列组成，
所述A序列在5’处与长度为40个至60个核苷酸的第一富A/T尤其是富T序列结合，并且在3’处与长度为40个至60个核苷酸的第二富A/T尤其是富T序列结合，所述第一富A/T尤其是富T序列和第二富A/T尤其是富T序列分别包含6个至12个富G/C核苷酸的第一结构域和第二结构域，所述第一结构域的序列与所述第二结构域的序列互补，所述第一结构域和第二结构域定位在距所述A序列15个至52个核苷酸处，所述第一分子在其5’末端处包含用于识别转座酶的5’至3’定向的第一序列，并且在其3’末端处包含用于识别所述转座酶的至少一个第二序列；以及
-第二单链核酸分子，所述第二单链核酸分子在其5’末端处包含用于识别所述转座酶的所述第二序列的至少一个互补序列或基本上由所述至少一个互补序列组成，
所述复合物使得所述第一单链核酸分子和第二单链核酸分子根据由沃森和克里克定义的碱基互补性来配对，以便限定所述转座酶的两个双链结合位点。
2.根据权利要求1所述的复合物，其中所述A序列包含所关注核酸的互补序列。
3.根据权利要求1至2中任一项所述的复合物，其中所述第一分子在其5’末端处包含用于识别转座酶的5’至3’定向的第一序列，并且在其3’末端处包含用于识别所述转座酶的5’至3’定向的第二序列，并且其中所述第二分子在其5’末端处包含用于识别所述转座酶的所述第一序列的第一互补序列，随后是用于识别所述转座酶的所述第二序列的第二互补序列。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的复合物，其中所述第一分子在其5’末端处包含用于识别转座酶的5’至3’定向的第一序列，并且在其3’末端处包含用于识别所述转座酶的第二序列，随后是用于识别所述转座酶的所述第一序列的第一互补序列，并且
其中所述第二分子在其5’末端处包含用于识别所述转座酶的所述第二序列的互补序列。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的复合物，其中所述转座酶是细菌转座酶，尤其是选自Tn5、Tn9、Tn10或Tc1/mariner的转座酶。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的复合物，其中所述第一分子与酶偶联，尤其是经由经修饰的核苷酸而偶联。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的复合物，其中所述第一分子包含下列序列之一：SEQ ID NO:436、SEQ ID NO:440、SEQ ID NO:443、SEQ ID NO:444、SEQ ID NO:448、SEQ IDNO:449、SEQ ID NO:450、SEQ ID NO:454、SEQ ID NO:455、SEQ ID NO:456、SEQ ID NO:457、SEQ ID NO:458、SEQ ID NO:462、SEQ ID NO:463、SEQID NO:464、SEQ ID NO:465、SEQ IDNO:466和SEQ ID NO:641。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的复合物，所述复合物包含一对第一分子和第二分子，所述第一分子和第二分子包含如表2中所定义的序列。
9.根据权利要求1至6中任一项所述的复合物，所述复合物包含如表4中所定义的300对第一分子和第二分子中的一对。
10.一种集合体，包含
-第一单链核酸分子，所述第一单链核酸分子包含允许将所关注核酸的互补序列插入的A序列或基本上由所述A序列组成，或者包含所关注核酸的互补序列，所述互补序列在5’处与长度为40个至60个核苷酸的第一富T序列结合，并且在3’处与长度为40个至60个核苷酸的第二富T序列结合，所述第一富T序列和第二富T序列分别包含6个至12个富G/C核苷酸的第一结构域和第二结构域，所述第一结构域的序列与所述第二结构域的序列互补，所述第一结构域和第二结构域定位在距所述A序列15个至52个核苷酸处，所述第一分子在其5’末端处包含用于识别转座酶的5’至3’定向的至少一个第一序列，并且在其3’末端处包含用于识别所述转座酶的第二序列，
-第二单链核酸分子，所述第二单链核酸分子包含允许将所关注核酸的互补序列插入的B序列或基本上由所述B序列组成，或者包含所关注核酸的互补序列，所述互补B序列在5’处与长度为40个至60个核苷酸的第三富T序列结合，并且在3’处与长度为40个至60个核苷酸的第四富T序列结合，所述第三富T序列和第四富T序列分别包含6个至12个富G/C核苷酸的第三结构域和第四结构域，所述第三结构域的序列与所述第四结构域的序列互补，所述第三结构域和第四结构域定位在距所述B序列15个至52个核苷酸处，所述第二分子在其5’末端处包含用于识别所述转座酶的5’至3’定向的至少一个第一序列，并且在其3’末端处包含用于识别所述转座酶的第二序列，
所述B序列是所述所关注核酸的互补序列，所述A序列定位在所述所关注核酸的所关注区域的5’处，并且所述B序列定位在所述所关注核酸的所述所关注区域的3’处，以及
-第三单链分子，所述第三单链分子包含：
在其5’部分中，所述第一分子的用于识别所述转座酶的所述第二序列的至少一个互补序列，
在其3’部分中，所述第二分子的用于识别所述转座酶的所述第一序列的至少一个互补序列，以及
-位于所述第一分子的用于识别所述转座酶的所述第二序列的互补序列与所述第二分子的用于识别所述转座酶的所述第一序列的所述互补序列之间的区域，所述区域允许将单链替换核酸分子插入，所述第一单链核酸分子和第三单链核酸分子根据由沃森和克里克定义的碱基互补性来配对，以便限定所述转座酶的两个双链结合位点，并且所述第二单链核酸分子和第三单链核酸分子根据由沃森和克里克定义的碱基互补性来配对，以便限定所述转座酶的两个双链结合位点。
11.根据权利要求10所述的集合体，所述集合体包含如表5中所定义的300对第一分子和第三分子中的一对。
12.一种试剂盒，包含至少一种允许表达重组酶和根据权利要求10所述的集合体的所述第一分子、第二分子和第三分子的载体。
13.根据权利要求10所述的集合体的用途，其用于将核酸工程化，尤其用于用所关注的序列替换靶序列，前提是所述用途不包括用于修改人类种系遗传同一性的方法，并且所述用途不是用于通过手术或疗法治疗人类或动物体的方法。
14.一种用于将核酸分子的靶区域用另一核酸分子的所关注区域体外替换以便获得杂合核酸分子的方法，所述方法包括：
-使根据权利要求10所述的集合体与包含所述靶区域的所述核酸接触，
所述集合体使得
所述第一分子的所述A序列包含紧接在所述靶区域的5’处的区域的互补序列，
所述第一分子的所述B序列包含紧接在所述靶区域的3’处的区域的互补序列，并且
所述第三分子在位于所述第一分子的用于识别所述转座酶的所述第二序列的互补序列与所述第二分子的用于识别所述转座酶的所述第一序列的所述互补序列之间的区域中包含所述所关注区域，以便获得替换复合物，
-在识别所述集合体中包含的所述转座酶的所述双链结合位点的转座酶的存在下放置所述替换复合物，以获得重组复合物，以及
-重组所述组合复合物，以便获得包含所述所关注区域而不是所述靶区域的所述杂合核酸分子，
前提是所述方法不是用于修改人类种系遗传同一性的方法，并且所述方法不是用于通过手术或疗法治疗人类或动物体的方法。
15.一种用于编辑细胞的基因组的体外或离体方法，所述方法使得可以将所述细胞的所述基因组的双链DNA的特定片段用另一个所关注的双链DNA片段替换，以便获得包含所述另一个所关注的双链DNA片段而不是所述双链DNA的特定片段的重组杂合基因组，所述方法包括：
-制备根据权利要求10所述的第一集合体，
其中所述第一分子的所述A序列包含所述特定片段的5’处的相邻区域的互补序列；
其中所述第二分子的所述B序列包含所述特定片段的3’处的相邻区域的互补序列；并且
其中所述第三分子在位于所述第一分子的用于识别所述转座酶的所述第二序列的互补序列与所述第二分子的用于识别所述转座酶的所述第一序列的所述互补序列之间的区域之间包含所述特定片段的一条链的序列；
-以及任选地制备根据权利要求10所述的第二集合体，
其中所述第二集合体的所述第一分子的所述互补区的所述A序列包含所述特定片段的5’处的相邻区域的互补序列；
其中所述第二集合体的所述第二分子的所述互补区的所述B序列包含所述特定片段的3’处的相邻区域的互补序列；并且
其中所述第二集合体的所述第三分子在位于所述第二集合体的所述第一分子的用于识别所述转座酶的所述第二序列的互补序列与所述第二集合体的所述第二分子的用于识别所述转座酶的所述第一序列的所述互补序列之间的区域之间包含所述第一集合体的所述第三序列中包含的所述特定片段的互补链的序列；
其中所述第一集合体的所述第一分子的所述A区中包含的所述特定片段的5’处的相邻区域的互补序列与所述第二集合体的所述第一分子的所述A区中包含的所述特定片段的5’处的相邻区域的互补序列最多95％互补；并且
其中所述第一集合体的所述第一分子的所述B区中包含的所述特定片段的3’处的相邻区域的互补序列与所述第二集合体的所述第一分子的所述B区中包含的所述特定片段的3’处的相邻区域的互补序列最多95％互补；
以便获得重组复合物；
-使所述细胞与所述重组复合物接触，以便获得准备好进行编辑的细胞，
-在所述准备好进行编辑的细胞中表达所述转座酶，以便获得经编辑的细胞，
-选择所述经编辑的细胞，其中所述经编辑的细胞的所述基因组包含所述另一个所关注的双链DNA片段而不是特定的双链DNA片段，
前提是所述方法不是用于修改人类种系遗传同一性的方法，并且所述方法不是用于通过手术或疗法治疗人类或动物体的方法。
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