CN117701674A - 抗黄芩素干扰的高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒及其应用 - Google Patents
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Landscapes
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Abstract
本发明公开了一种抗黄芩素干扰的高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒及其应用，属于中医临床检测技术领域；所述试剂盒由第一试剂和第二试剂组成，通过在第一试剂添加哌啶醇氧化物以消除黄芩素对高密度脂蛋白胆固醇的干扰。其中试剂盒的主要成分包括胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化氢酶、缓冲液、高密度脂蛋白胆固醇检测试剂、表面活性剂。使用本发明试剂盒对血清中的高密度脂蛋白胆固醇进行检测，无需对血清进行前处理，即可消除黄芩素对于高密度脂蛋白胆固醇检测的干扰影响。
Description
技术领域
本发明属于中医临床检测技术领域，特别是涉及一种抗黄芩素干扰的高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒及其应用。
背景技术
高密度脂蛋白是从包括动脉壁在内的各种组织中接收胆固醇，与清除细胞中积累的胆固醇有关，是包括冠状动脉粥样硬化在内的各种动脉粥样硬化的风险预防因素，已知其血液水平是预测动脉粥样硬化疾病发病的有效指标。
高密度脂蛋白胆固醇的检测方法主要有磷钨酸还原法和高密度脂蛋白胆固醇酶比色法；然而在临床工作中，时常会出现由于所用药物在体内与血液共存，导致药物干扰该检测系统的化学反应，进而出现负干扰的现象，致使患者在进行某项生化指标检测后，被检目标项目的测定值低于给药前的检测值。这对临床治疗对患者病情的诊断或治疗都会产生误导作用。
在现代医学科技的推动下，中医药学正在经历不断的创新与发展。其应用范围已经远远超出了传统的临床实践，深入到了广泛的健康相关领域。然而，尽管中医药具有丰富的天然资源和复杂的药理作用，但许多药物成分的作用机制尚未得到充分的理解。中药主要来源于植物、动物和矿物，这些来源的药物往往含有多种化学成分，这些成分可能具有复杂的相互作用，对人体产生影响。这种复杂性使得医生或研究人员在分析特定的人体指标时面临困难，因为中药中的某些成分可能会干扰检测结果，导致难以准确评估各项指标的真实水平。此外，市场上还存在大量以中药有效成分为基础生产的保健品。这些保健品在使用过程中可能会影响使用者的部分身体指标。但是，目前尚不清楚这些被改变的身体指标是由于药物产生了正面效果，还是因为中药中的某些成分对医学检测产生了干扰。因此，对于这些保健品的实际效果及其对医学检测的影响，还需要进一步的研究和探讨。
黄芩素是常用中药黄芩提取物中具有较强活性的黄酮类化合物，其具有较强的抗氧化作用，能够对体内或体外发生的一些氧化反应将产生一定的影响，是能够引起检测高密度脂蛋白胆固醇发生负干扰的物质之一。如何避免此类药物对高密度脂蛋白胆固醇检测的干扰是本领域亟须解决的问题。
发明内容
本发明实施例的目的在于提供一种抗黄芩素干扰的高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒及其应用，以消除黄芩素对高密度脂蛋白胆固醇检测产生负干扰的影响。
为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是一种抗黄芩素干扰的高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒，所述第一试剂包括哌啶醇氧化物；
所述检测试剂盒还包括胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化氢酶、缓冲液、检测剂、表面活性剂。
进一步的，所述哌啶醇氧化物添加量为0.01～50mmol/L。
进一步的，所述检测剂包括显色剂、防腐剂、盐类、酶稳定剂、色素稳定剂、抗坏血酸氧化酶的一种或多种组合物。
进一步的，所述胆固醇酯酶下限为200~1000U/L，上限为20KU/L；
所述胆固醇氧化酶下限为200~1000U/L，上限为20KU/L；
所述过氧化氢酶下限为40KU/L，上限为200KU/L。
进一步的，所述显色剂包括氢供体；显色剂的最终反应浓度为0.01～10mmol/L。
进一步的，氢供体与偶联剂结合使用，其中偶联剂包括4-氨基安替比林、MBTH、NCP的任意一种或多种的组合物。
进一步的，所述第一试剂和第二试剂分别使用不同的表面活性剂，其中第一试剂中的表面活性剂包括胆酸衍生物和糖苷；所述胆酸衍生物包括CHAPS、CHAPSO；
糖苷包括正十二烷基-α-D-麦芽糖苷、正十二烷基-β-D-麦芽糖苷；
所述胆酸衍生物的浓度为0.001%～0.2%w/v，所述糖苷的浓度为0.001%～0.2%w/v；
第二试剂中的表面活性剂包括Emulgen120；
所述缓冲液包括三羟甲基氨基甲烷缓冲液、磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液或GOOD缓冲液中任意一种。
进一步的，所述防腐剂包括叠氮化物、螯合剂、抗生素和抗菌剂的一种或多种组合物；其中，螯合剂包括乙二胺四乙酸及其盐类的一种或多种组合物，抗生素包括庆大霉素、卡那霉素和氯霉素中任意一种或多种组合物，抗菌剂包括甲基异噻唑啉酮和咪唑烷基脲的一种或多种组合物。
进一步的，所述盐类包括氯化钙、氯化镁中任意一种或多种组合物；
酶稳定剂包括蔗糖、海藻糖、环糊精、葡萄糖酸盐和氨基酸中任意一种或多种组合物，色素稳定剂包括乙二胺四乙酸及其盐类、环糊精中任意一种或多种组合物。
上述试剂盒在制备检测血清样本中高密度脂蛋白胆固醇含量的试剂盒中的应用，所述血清样本源自服用或注射了含有黄芩素的药物、保健品或食品的患者。
本发明的有益效果是：使用本发明试剂盒可以消除黄芩素对检测高密度脂蛋白胆固醇产生的负干扰；在临床医学或药物实验中，能够帮助医生或者研究人员确定含有黄芩素的降胆固醇药物或保健食品的真实疗效；此外，真实反映出血清中高密度脂蛋白胆固醇的含量能够帮助医生对患者体征做出更准确判断。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整的描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
在本实施方式中涉及抗黄芩素干扰的高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒，将抗黄芩素干扰的高密度脂蛋白胆固醇（以下也简称为HDL-C）的测定试剂配制成双试剂，即第一试剂（R1）和第二试剂（R2）。R1试剂中含有哌啶醇氧化物(CAS:2226-96-2)。
在本实施方式中，抗黄芩素干扰的HDL-C的测定方法可分两个阶段进行：第一阶段，通过哌啶醇氧化物(CAS:2226-96-2)消除样本中黄芩素对HDL-C测定的干扰。第二阶段，除去黄芩素干扰的样本与检测试剂发生化学反应，进而测出样本中HDL-C的含量。
在本实施方式中，利用哌啶醇氧化物(CAS:2226-96-2)降低样本中黄芩素的影响。该试剂盒可以在不预处理样品的情况下测量可能含有黄芩素的生物样品时降低黄芩素的影响。作为待测样品的种类，优选为血液来源的待测样品，特别优选为血清和血浆；但本发明不限于此。
在本实施方式中，HDL-C测定用试剂包括（1）用于测定可能含有黄芩素的样本的高密度脂蛋白胆固醇的试剂；（2）只要含有下述的（A）、（B）成分，就没有特别限定。本发明的可测定含有黄芩素的生物样品的高密度脂蛋白胆固醇的测量试剂，不限于含有以下（A）、（B）的试剂成分。上述的成分可以组成各种形式的试剂，只要是本领域技术人员，均可以根据本说明书的记载，完成检测试剂的组成。
（A）本发明的测定高密度脂蛋白胆固醇的试剂包括以下内容：
1、用胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化氢酶及R1中表面活性剂，除去样本中所含的低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C），极低密度脂蛋白胆固醇（VLDL-C）及乳糜微粒（CM）中所含的胆固醇，所述R1中表面活性剂能够保护HDL-C不受氧化酶及酯酶影响，只在R1试剂中添加。
2、除含有缓冲液及检测高密度脂蛋白胆固醇的试剂外，还包括叠氮钠及表面活性剂。所述表面活性剂只在R2试剂中添加，其作用是加入R2后，R2中的表面活性剂解除掉R1中表面活性剂保护HDL-C不被氧化的作用，使HDL-C正常进行氧化反应，以达到检测HDL-C的目的。
（B）哌啶醇氧化物(2226-96-2)
在本实施方式中，上述所有成分并不具体限定为R1或R2的成分之一，只要是本领域技术人员就可以确定上述成分具体属于R1试剂还是R2试剂。
在本实施方式中，胆固醇酯酶（能够水解胆固醇酯的酶）的来源并不受限制，例如，可以来自Suehirotake属、念珠菌属和假单胞菌属的微生物，或来自牛胰腺等动物器官。上述来源均可以通过商业途径获得。胆固醇酯酶的用量没有特别限制，但首选下限通常是第一试剂中的200~1000U/L，优选为1KU/L，首选的上限通常是20KU/L，最好是8KU/L。
在本实施方式中，胆固醇氧化酶来源不限，但可以来自包括微生物，如诺卡氏菌和假单胞菌属，或动物器官，如牛胰腺；上述药品均通过商业途径获得。胆固醇氧化酶的用量不作特别限制，但优选的下限是第一试剂中的200~1000U/L，优选为1KU/L，优选的上限通常是20KU/L，最优选为8KU/L。
在本实施方式中，过氧化氢酶来源不限，但可以来自微生物或动物器官，如牛肝等。这些都可以通过商业途径获得。过氧化氢酶的用量没有特别限制，但优选的下限通常是第一试剂中的40KU/L，优选是80KU/L，上限通常是200KU/L，优选是100KU/L。
在本实施方式中，显色剂不受限制，但包括氢供体、无色显色剂和四唑盐任意一种。
在一些可能的实施方式中，这些氢供体与偶联剂结合使用。其中偶联剂包括4-氨基安替比林、MBTH和NCP。
考虑到溶解性，显色剂的最终反应浓度优选为0.01～10mmol/L。
在本实施方式中，所述R1试剂中表面活性剂为作用于高密度脂蛋白的表面活性剂；所述特殊表面活性剂包括但不限于胆酸衍生物和糖苷。所述R2中的表面活性剂包括Emulgen120。
在所述表面活性剂存在的情况下，保护高密度脂蛋白中的胆固醇不与胆固醇酯酶和胆固醇氧化酶发生反应。进而可以除去样本中所含的低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C），极低密度脂蛋白胆固醇（VLDL-C）及乳糜微粒（CM）中所含的胆固醇。
在本实施方式中胆酸衍生物包括CHAPS、CHAPSO，但在具体应用中不限于此，可作为表面活性剂的胆碱衍生物均可应用于本实施方式；胆酸衍生物的浓度在0.001%-0.2%w/v之间。
在本实施方式中糖苷包括正十二烷基-α-D-麦芽糖苷、正十二烷基-β-D-麦芽糖苷，但在具体应用中不限于此，可作为表面活性剂的糖苷均可应用于本实施方式；糖苷的浓度在0.001%~0.2%w/v之间。
在本实施方式中，哌啶醇氧化物(CAS:2226-96-2)可以从商业途径获得，本实施方式中哌啶醇氧化物(CAS:2226-96-2)购买于梯希爱公司。哌啶醇氧化物(CAS:2226-96-2)的含量不受限制，但优选下限为0.01mmol/L，更优选下限为3.0mmol/L。优选上限为50mmol/L，更优选上限为10mmol/L。如果是双试剂系统，哌啶醇氧化物(CAS:2226-96-2)应添加到第一种试剂中。
在本实施方式中，缓冲溶液主要包括三羟甲基氨基甲烷缓冲液、磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液和GOOD缓冲液中任意一种。对使用量、设定pH值或添加形式没有限制。所有这些缓冲溶液均可从商业途径获得。
在本实施方式中，高密度脂蛋白胆固醇检测试剂中抗坏血酸氧化酶、防腐剂、盐类、酶稳定剂和色素稳定剂的添加量以不影响反应为限。使用量或添加形式不受限制。所有这些都可以从市场或其他渠道获得。防腐剂包括叠氮化物、螯合剂、抗生素和抗菌剂中任意一种或多种组合物。螯合剂包括乙二胺四乙酸及其盐类。抗生素包括庆大霉素、卡那霉素和氯霉素中任意一种或多种组合物。抗菌剂包括甲基异噻唑啉酮和咪唑烷基脲的一种或多种组合物。盐类包括氯化钙、氯化镁中任意一种或多种组合物。酶稳定剂包括蔗糖、海藻糖、环糊精、葡萄糖酸盐和氨基酸中任意一种或多种组合物。色素稳定剂包括乙二胺四乙酸及其盐类、环糊精中任意一种或多种组合物。
接下来，由实施例详细地说明本发明，但本发明不限于这些实施例。
实施例1 黄芩素（Baicalein）对酶法测定高密度脂蛋白胆固醇的影响
通过在待测样本（BIO质控血清）中加入一定量的黄芩素，并以不加黄芩素的相同样本（BIO质控血清）作为对照，用同一高密度脂蛋白胆固醇检测试剂分别对其进行高密度脂蛋白胆固醇测定，通过测定数据，评价黄芩素对酶法测定高密度脂蛋白胆固醇的影响。
作为样品，将不同浓度的黄芩素添加BIO质控血清中，使得样品中黄芩素的最终浓度为10μg/mL、20μg/mL、30μg/mL、40μg/mL、60μg/mL、80μg/mL、100μg/mL、150μg/mL、200μg/mL；并使用不含黄芩素的液体的血清作为对照来确认影响程度。本实施例中高密度脂蛋白胆固醇检测试剂的组成如表1所示：
表1高密度脂蛋白胆固醇检测试剂的组成
标准操作方法仅作为参考举例，由于自动分析仪的种类不同，操作方法及参数不仅限于此。使用日立-7600-010型自动分析仪。将150μLR1试剂加入2.4μL样品中，37°C孵育5分钟，进行第一反应。然后加入50μLR2试剂，孵育5分钟，进行第二反应。在主波长546nm和副波长700nm处通过2点终点法测量吸光度，并获取第一反应与第二反应吸光度之间的差值。样本中HDL-C的含量由仪器电脑自动计算出。（试剂空白、检测定标、结果的算出均由仪器自动进行，HDL-C标准液浓度为：1.41mmol/l）
检测黄芩素对酶法测定HDL-C所产生的干扰：配制前述含有不同浓度黄芩素的检测样本，使用未加抗干扰剂哌啶醇氧化物(CAS:2226-96-2)的检测试剂进行HDL-C测定。其上机参数同前。
计算出干扰度：干扰度%=[（测定值-对照值）/对照值]×100%。
其测定数据如表2。
表2黄芩素对酶法测定HDL-C的干扰
从上表可以得出，本实验中得出结论，血清中黄芩素含量在10μg/ml时，对HDL-C检测产生的负干扰为-3.2%，随着黄芩素浓度的增加，其负干扰明显增强。在含量达到200μg/ml时其负干扰可达到-35.5%。所以，样本中含有黄芩素时，可对酶法测定HDL-C产生明显的负干扰。
实施例2 本实施例中高密度脂蛋白胆固醇检测试剂的组成如表3所示：
表3高密度脂蛋白胆固醇检测试剂的组成
实施例3哌啶醇氧化物(CAS:2226-96-2)对高密度脂蛋白胆固醇检测试剂的影响
在实施例1中的高密度脂蛋白胆固醇检测试剂中加入哌啶醇氧化物(CAS:2226-96-2)，配成含哌啶醇氧化物(CAS:2226-96-2)的高密度脂蛋白胆固醇检测试剂；再用高密度脂蛋白胆固醇检测试剂液稀释成不同浓度的含有哌啶醇氧化物(CAS:2226-96-2)的高密度脂蛋白胆固醇检测试剂。稀释后其含哌啶醇氧化物(CAS:2226-96-2)的浓度为0.01、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、10.0、50、100、150mmol/l。将上述含不同浓度哌啶醇氧化物的试剂分别设定在日立-7600-010型全自动生化分析仪中待用。将前述不含哌啶醇氧化物的HDL-C测定试剂作为对照试剂设定在日立-7600-010型全自动生化分析仪中待用。对照试剂R1中不加入哌啶醇氧化物(CAS:2226-96-2)，哌啶醇氧化物(CAS:2226-96-2)浓度为0。
将含有不同浓度哌啶醇氧化物(CAS:2226-96-2)的高密度脂蛋白胆固醇检测试剂，设置在日立-7600-010全自动生化分析仪中，其测定参数同实施例1。将BIO质控血清作为样本，上机进行测定，计算出干扰度：干扰度%=[（测定值-对照值）/对照值]×100%。其结果如表4。
表4哌啶醇氧化物(CAS:2226-96-2)对高密度脂蛋白胆固醇检测试剂的影响
从上表可以看出，酶法测定HDL-C试剂中，以哌啶醇氧化物(CAS:2226-96-2)添加量0mmol/L为对照，哌啶醇氧化物(CAS:2226-96-2)添加量在0.01-150mmol/L范围，测定值呈上升趋势，故哌啶醇氧化物的添加浓度要掌握在试剂标准的允许范围内。哌啶醇氧化物(CAS:2226-96-2)添加量在0-50mmol/L范围内，对HDL-C检测的干扰小于3%，符合HDL-C试剂盒的技术要求。故哌啶醇氧化物(CAS:2226-96-2)的添加量优选为小于50mmol/L。
实施例4哌啶醇氧化物(CAS:2226-96-2)对黄芩素的抗干扰作用
S1、配制抗黄芩素干扰的高密度脂蛋白胆固醇检测试剂：在实施例1中高密度脂蛋白胆固醇检测试剂的R1中加入不同浓度的哌啶醇氧化物(CAS:2226-96-2)，其浓度分别为：0.01、0.1、0.3、0.5、1.0、5.0、10、50、100、150mmol/L。
S2、配制对照试剂：除R1试剂中不添加哌啶醇氧化物(CAS:2226-96-2)外，其余同前述试剂相同。
S3、配制含有不同浓度黄芩素的混合血清：配制含有黄芩素为10、20、30、40、60、80、100、150、200μg/ml浓度的混合血清。
S4、配制对照血清：除不含黄芩素外，其余同前述混合血清相同，对照组测定数据如表4。
S5、依次检测各不同浓度的实验组，其结果与对照组比较，计算出干扰度（干扰度ER%=[(测定值-对照值)/对照值]×100%）；结果如表5-1~5-9。
表5-1哌啶醇氧化物(CAS:2226-96-2)对黄芩素的抗干扰作用（黄芩素添加量10μg/ml）
表5-2哌啶醇氧化物(CAS:2226-96-2)对黄芩素的抗干扰作用（黄芩素添加量20μg/ml）
表5-3哌啶醇氧化物(CAS:2226-96-2)对黄芩素的抗干扰作用（黄芩素添加量30μg/ml）
表5-4哌啶醇氧化物(CAS:2226-96-2)对黄芩素的抗干扰作用（黄芩素添加量40μg/ml）
表5-5哌啶醇氧化物(CAS:2226-96-2)对黄芩素的抗干扰作用（黄芩素添加量60μg/ml）
表5-6哌啶醇氧化物(CAS:2226-96-2)对黄芩素的抗干扰作用（黄芩素添加量80μg/ml）
表5-7哌啶醇氧化物(CAS:2226-96-2)对黄芩素的抗干扰作用（黄芩素添加量100μg/ml）
表5-8哌啶醇氧化物(CAS:2226-96-2)对黄芩素的抗干扰作用（黄芩素添加量150μg/ml）
表5-9哌啶醇氧化物(CAS:2226-96-2)对黄芩素的抗干扰作用（黄芩素添加量200μg/ml）
由上述结果表明，本实施例的所有浓度的哌啶醇氧化物与对照例相比，黄芩素对HDL-C检测产生的负干扰均有减低。样本中黄芩素含量小于0-30μg/ml，HDL-C试剂中，哌啶醇氧化物的添加量在0.01mmol/L-0.3mmol/L范围内，黄芩素对HDL-C测定的负干扰小于-2.7%，哌啶醇氧化物的添加量0.5-5mmol/L范围内，黄芩素对HDL-C测定的负干扰小于-3.4%。样本中黄芩素含量在0-80μg/ml，HDL-C试剂中，哌啶醇氧化物的添加量10mmol/L，黄芩素对HDL-C测定的负干扰小于-4.78%。样本中黄芩素含量在0-200μg/ml，HDL-C试剂中，哌啶醇氧化物的添加量50mmol/L，黄芩素对HDL-C测定的负干扰小于-4.79%。基于上述结果及结合人血清或血浆样本中黄芩素的含量，HDL-C试剂中哌啶醇氧化物（CAS:2226-96-2）的添加量以10mmol/L为宜。
实施例5试剂稳定性
将实施例1的试剂在35℃环境下保存2周，检测试剂的试剂空白、灵敏度及其对黄芩素抗干扰的情况：测定试剂的制备：实施例1记载的高密度脂蛋白胆固醇试剂的第一试剂中加入哌啶醇氧化物(CAS:2226-96-2)使其终浓度为10mmol/l，用作测定试剂。对照试剂：除不添加哌啶醇氧化物(CAS:2226-96-2)外，余同前测定试剂。
S1、将刚刚配制后、35°C保存7天后、35°C保存14天后的试剂，在以下测定条件下测定试剂。
S2、试剂空白的测定：用精制水作为样本测定吸光度（仪器自动测定）。
S3、灵敏度测定：用1.41μmol/L的HDL-C标准液作为样本，测定的吸光度。再减去精制水测定的吸光度。
S4、干扰度的测定：用与实施例1相同的血清样本中，加入黄芩素，使其浓度达到40μg/ml。分别使用测定用试剂及对照试剂对样本进行测定，计算出干扰度，结果如表6所示。
表6试剂稳定性测试结果
结果如表6，其中ABS表示吸光度，在添加哌啶醇氧化物(CAS:2226-96-2)的情况下，黄芩素对检测高密度脂蛋白胆固醇的负干扰可以减轻。同时，试剂在35℃条件下，经过7天及14天的保存，测定其试剂空白值及灵敏度，符合技术要求。
实施例6本发明试剂与现有试剂的抗干扰对比
S1、样本制备
S101、配置检测血清样本：配制含有不同黄芩素浓度的混合血清，配制含有黄芩素为10、20、30、40、60、80μg/ml浓度的混合血清。
S102、配置对照样本：除不含黄芩素外，其余同前S101检测血清样本。
S2、配置本发明试剂：向实施例1的高密度脂蛋白胆固醇试剂的第一试剂中加入哌啶醇氧化物(CAS:2226-96-2)使其终浓度为10mmol/L。
S3、对两种现有试剂与本发明试剂使用日立-7600-110型全自动生化分析仪进行测试，测试结果如下表7，两种试剂均为市场购得。
表7抗干扰比较结果
从表7可以看出，样本中黄芩素含量在（10-80mg/L）范围内，本发明试剂可以避免或减轻对高密度脂蛋白胆固醇检测的负干扰。而现有试剂在该范围内发生明显的对HDL-C检测产生负干扰。
本实施方式在对高密度脂蛋白胆固醇检测抗干扰的一系列实验中，发现黄芩素对于高密度脂蛋白胆固醇检测具有明显的干扰作用，本实施方式进行了大量的研究及实验工作。在研究工作中出人意料的发现哌啶醇氧化物(CAS:2226-96-2)具有减轻或避免黄芩素对高密度脂蛋白胆固醇检测的干扰现象。经过进一步的研究发现，哌啶醇氧化物(CAS:2226-96-2)确有可减轻或避免黄芩素对高密度脂蛋白胆固醇检测的干扰作用。
本说明书中的各个实施例均采用相关的方式描述，各个实施例之间相同相似的部分互相参见即可，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并非用于限定本发明的保护范围。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换、改进等，均包含在本发明的保护范围内。
Claims (10)
1.一种抗黄芩素干扰的高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒，包括第一试剂和第二试剂，其特征在于，所述第一试剂包括哌啶醇氧化物；
所述检测试剂盒还包括胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化氢酶、缓冲液、检测剂、表面活性剂。
2.根据权利要求1所述的一种抗黄芩素干扰的高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒，其特征在于，所述哌啶醇氧化物添加量为0.01～50mmol/L。
3.根据权利要求1所述的一种抗黄芩素干扰的高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒，其特征在于，所述检测剂包括显色剂、防腐剂、盐类、酶稳定剂、色素稳定剂、抗坏血酸氧化酶的一种或多种组合物。
4.根据权利要求1所述的一种抗黄芩素干扰的高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒，其特征在于，所述胆固醇酯酶下限为200~1000U/L，上限为20KU/L；
所述胆固醇氧化酶下限为200~1000U/L，上限为20KU/L；
所述过氧化氢酶下限为40KU/L，上限为200KU/L。
5.根据权利要求3所述的一种抗黄芩素干扰的高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒，其特征在于，所述显色剂包括氢供体；显色剂的最终反应浓度为0.01～10mmol/L。
6.根据权利要求5所述的一种抗黄芩素干扰的高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒，其特征在于，氢供体与偶联剂结合使用，其中偶联剂包括4-氨基安替比林、MBTH、NCP的任意一种或多种的组合物。
7.根据权利要求1所述的一种抗黄芩素干扰的高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒，其特征在于，所述第一试剂和第二试剂分别使用不同的表面活性剂，其中第一试剂中的表面活性剂包括胆酸衍生物和糖苷；所述胆酸衍生物包括CHAPS、CHAPSO；
糖苷包括正十二烷基-α-D-麦芽糖苷、正十二烷基-β-D-麦芽糖苷；
所述胆酸衍生物的浓度为0.001%～0.2%w/v，所述糖苷的浓度为0.001%～0.2%w/v；
第二试剂中的表面活性剂包括Emulgen120；
所述缓冲液包括三羟甲基氨基甲烷缓冲液、磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液或GOOD缓冲液中任意一种。
8.根据权利要求3所述的一种抗黄芩素干扰的高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒，其特征在于，所述防腐剂包括叠氮化物、螯合剂、抗生素和抗菌剂的一种或多种组合物；其中，螯合剂包括乙二胺四乙酸及其盐类的一种或多种组合物，抗生素包括庆大霉素、卡那霉素和氯霉素中任意一种或多种组合物，抗菌剂包括甲基异噻唑啉酮和咪唑烷基脲的一种或多种组合物。
9.根据权利要求3所述的一种抗黄芩素干扰的高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒，其特征在于，所述盐类包括氯化钙、氯化镁中任意一种或多种组合物；
酶稳定剂包括蔗糖、海藻糖、环糊精、葡萄糖酸盐和氨基酸中任意一种或多种组合物，色素稳定剂包括乙二胺四乙酸及其盐类、环糊精中任意一种或多种组合物。
10.如权利要求1~9任一所述试剂盒在制备检测血清样本中高密度脂蛋白胆固醇含量的试剂盒中的应用，所述血清样本源自服用或注射了含有黄芩素的药物、保健品或食品的患者。
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|---|
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