CN117695304A - 雪燕多糖在制备预防或治疗炎症性肠病的药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了雪燕多糖在制备预防或治疗炎症性肠病的药物中的应用。本发明提供了GUM在制备预防或治疗炎症性肠病药物中的新用途,其制备方法简单,产率高。通过建立葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的IBD小鼠模型,结果显示,GUM对DSS诱导的结肠炎有显著的治疗作用,能明显改善IBD症状,为临床防治IBD的新药物提供理论依据和临床基础。
Description
技术领域
本发明涉及雪燕多糖在制备预防或治疗炎症性肠病的药物中的应用,属于制药技术领域。
背景技术
炎症性肠病(IBD)是一组病因尚不十分清楚的慢性非特异性肠道炎症性疾病,包括溃疡性结肠炎(UC)和克罗恩病(CD),对人们的健康和生活质量构成严重威胁。其主要症状包括腹痛、腹泻、血便和体重减轻。IBD的发病机理涉及多种因素,如外界环境、肠道微生物、黏膜免疫和遗传。目前,临床上治疗IBD主要采用药物疗法,包括氨基水杨酸类、糖皮质激素类、免疫调节剂和生物制剂等。然而,这些药物常常伴有多种不良反应,降低了患者的依从性,从而影响治疗效果。
雪燕又名刺梧桐胶,是一种名贵的植物木髓分泌物。雪燕含有黄酮类、氨基酸和多糖类等多种活性成分,具有养血止血、涩肠固精、生津止渴、提高免疫力等功效。研究表明,雪燕中的多糖物质能够调节肠道菌群的比例,促进肠黏膜修复,并增强肠黏膜分泌型免疫球蛋白的表达。然而,尽管雪燕在食用和药用方面有着悠久的传统,但目前对雪燕的研究报道相对较少,仍需要更多的科学研究来探索其潜在的健康益处和药用价值。
发明内容
本发明的目的是提供雪燕多糖(GUM)在制备预防或治疗炎症性肠病的药物中的应用。
本发明的目的通过以下技术方案实现:
雪燕多糖在制备预防或治疗炎症性肠病的药物中的应用。
优选的,所述炎症性肠病为溃疡性结肠炎或克罗恩病。
优选的,所述雪燕多糖采用水提醇沉的方法制得。
优选的,所述雪燕多糖的具体制备方法为:
(1)将雪燕粉末加入超纯水中,水浴超声处理一段时间后,过滤;
(2)将上述过滤产物旋蒸浓缩后,离心取上清液,加无水乙醇,4℃下静置一段时间,分离得到沉淀;
(3)将沉淀溶于超纯水中,离心取上清液,在上清液中加入Sevage试剂除蛋白,再浓缩,用透析袋流水透析,最后冻干得雪燕多糖。
制得的雪燕多糖富含属于植物多糖的特征官能团,表面带有负电荷,在A560几乎没有吸收峰。
根据权利要求4所述的应用,其特征在于步骤(1)中水浴温度为50-60℃,超声处理2h。
优选的,步骤(1)中采用双层无菌纱布进行过滤处理。
优选的,步骤(2)中以60℃旋蒸,浓缩至原体积的1/20,加无水乙醇至乙醇终浓度为90%,乙醇沉淀时间为48h。
优选的,步骤(3)中浓缩至原体积的1/4,采用分子量2000Da的透析袋。
优选的,步骤(2)和(3)中离心的条件为6000r/min离心10min。
优选的,所述药物的剂型为口服液,或者为胶囊剂、片剂、颗粒剂、缓释剂或滴丸剂。
本发明以C57BL/6小鼠为试验动物,通过葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导炎症性肠病(IBD)小鼠模型。研究结果显示,不同剂量的GUM(1mg/mL、5mg/mL、20mg/mL)均表现出对由炎症性肠病引起的体重减轻有显著的逆转作用。通过每日观察小鼠的粪便黏稠度和出血情况,并计算疾病活动指数(DAI),发现GUM组的DAI评分显著降低。结肠长度的测量结果显示,雪燕多糖能够显著延长IBD小鼠的结肠长度。总体而言,GUM在不同剂量下(1、5、20)均表现出显著的治疗作用,明显改善了IBD小鼠的症状。
相对于现有技术而言,本申请的有益效果是:
本发明提取的雪燕多糖以鼠李糖和半乳糖为主,调节肠道微生物组成、维持肠上皮屏障完整性、调节肠道免疫反应、抑制氧化应激。本发明提取的雪燕多糖分子量较大,口服可有效减免胃酸的腐蚀,GUM为阴离子多糖,表面带负电荷,能靶向正电荷的炎症部位,有助于在炎症部位的滞留与粘附。且表面官能团丰富易于修饰,可以作为一些临床药物及纳米材料的载体,适用于临床给药形式。
本发明首次发现并提出雪燕多糖类提取物能够应用于防治溃疡性结肠炎及制备防治溃疡性结肠炎的药物。动物实验说明,雪燕多糖类提取物能保护结肠粘膜屏障及修复DSS诱导的结肠粘膜细胞损伤,缓解溃疡性结肠炎患者结肠缩短、稀便、血便的症状,有效改善溃疡性结肠炎导致的体重减轻、腹泻和血便,改善结肠长度,调节脏器指数,改善溃疡性结肠炎造成的结肠损伤;HE染色证明,雪燕多糖类提取物可以保护结肠黏膜上皮组织,有效缓解DSS诱导引起的严重性结肠炎。
附图说明
图1为本发明的GUM测定的傅里叶红外光谱图(FT-IR)。
图2为本发明的GUM测定的紫外可见光谱图(UV-vis)。
图3为本发明的GUM测定的Zeta电位。
图4为本发明的GUM的多糖组成成分。
图5为不同实验组小鼠体重变化。(n=5;*,P<0.05;**,P<0.01;***,P<0.001,mean±S.E.M.)。
图6为不同实验组小鼠结肠长度变化。(n=5;*,P<0.05;**,P<0.01;***,P<0.001,mean±S.E.M.)。
图7为不同实验组小鼠结肠的病理结构H&E图。
图8为不同实验组小鼠DAI评分。(n=5;*,P<0.05;**,P<0.01;***,P<0.001,mean±S.E.M.)。
图9为不同实验组小鼠生存曲线。
具体实施方法:
下面结合实施例对本发明作进一步的说明,但实施例的描述不对本发明的保护范围产生任何限制。
除非另有定义,本文所使用的所有的技术术语和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同,本文在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的,不是旨在于限制本发明。
下列实施例中所用的物质或仪器,如果未进行特殊说明的话,均可以从常规的商用渠道获取。
实施例1GUM的提取
本发明采用水提醇沉法制备GUM的步骤如下:首先,取5g雪燕,在60℃条件下进行为期3小时的提取,提取液料比为,料液比1:1g·L,共提取3次,然后合并提取液,将其浓缩至原体积的1/100。接着,以6000rpm的速度进行离心10分钟,取上清液并加入无水乙醇进行醇沉,醇沉的终浓度为90%,在4℃下静置48小时后,分离沉淀和醇沉上清,得到粗雪燕多糖。随后,取得的醇沉沉淀溶于去离子水中,进行离心去蛋白。取上清液并使用Sevage试剂(正丁醇:氯仿=1:4)按照体积比例1:4的比例进行除蛋白,此步骤重复5次。然后,取除蛋白液进行浓缩,经过48小时的流水透析后,进行冷冻干燥,最终得到冻干的雪燕多糖,命名为GUM。使用傅里叶红外光谱仪测定红外图谱(图1),紫外分光光度计测得紫外-可见光谱(图2),通过Zeta电位测得其电位(图3)及单糖组成成分(图4)。
实施例2IBD模型的建立及GUM的治疗作用
首先对25只实验用小鼠进行适应性饲养一周,然后随机分成5组,每组5只小鼠。这六组分别为空白对照组、模型组以及三个不同剂量组(低、中、高,分别为1、5、20mg/kg)的GUM组。在实验过程中,空白对照组小鼠自由饮用无菌水,并且每天通过灌胃方式给予无菌水。而其余各组小鼠自由饮用2.5%的DSS(葡聚糖硫酸钠)溶液,持续7天,从而建立炎症性肠病(IBD)小鼠模型。模型组在此期间通过灌胃方式给予等体积的无菌水。治疗组则分别在模型建立后的第8天开始灌胃给予不同剂量(1、5、20mg/kg)的百合多糖溶液,持续给药3天。在治疗期间,每天检查小鼠的发病率并记录体重变化,同时评分每只小鼠的病理特征,包括粪便稠度、血便和体重。通过将这些评分结合,生成每天的疾病活动指数(DAI)。实验结束后,比较每组小鼠的结肠形态及长度,同时进行病理组织学的观察,以明确GUM对IBD小鼠的治疗作用。
使用C57BL/6小鼠(野生型),雄性,8-10周龄,体重18-22g。在整个适应和研究期间,所有动物在特定的无病原体条件下保持12小时的明暗循环(21±2℃,相对恒定的湿度为45±10%),并且可以随意获取食物和水。所有动物实验均按照美国国立卫生研究院实验动物护理和使用指南进行,并经南京大学实验动物伦理委员会批准。
结果:使用不同浓度的精制GUM溶液(高剂量20mg/kg、中剂量5mg/kg、低剂量1mg/kg对DSS诱导的结肠炎进行干预,同时设置空白对照,评估GUM对DSS诱导的结肠炎的治疗。结果表明经GUM治疗后,小鼠的体重(图5)、结肠长度(图6)、病理结果(图7)和DAI评分(图8)均有不同程度的缓解,并一定程度上减少死亡率(图9)。
上述实施例只为说明本发明的技术构思及特点,其目的在于让熟悉此项技术的人士能够了解本发明的内容并据以实施,并不能以此限制本发明的保护范围,凡根据本发明精神实质所作的等效变化或修饰,都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.雪燕多糖在制备预防或治疗炎症性肠病的药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于所述炎症性肠病为溃疡性结肠炎或克罗恩病。
3.根据权利要求1所述的应用,其特征在于所述雪燕多糖采用水提醇沉的方法制得。
4.根据权利要求3所述的应用,其特征在于所述雪燕多糖的具体制备方法为:
(1)将雪燕粉末加入超纯水中,水浴超声处理一段时间后,过滤;
(2)将上述过滤产物旋蒸浓缩后,离心取上清液,加无水乙醇,4℃下静置一段时间,分离得到沉淀;
(3)将沉淀溶于超纯水中,离心取上清液,在上清液中加入Sevage试剂除蛋白,再浓缩,用透析袋流水透析,最后冻干得雪燕多糖。
5.根据权利要求4所述的应用,其特征在于步骤(1)中水浴温度为50-60℃,超声处理2h。
6.根据权利要求4所述的应用,其特征在于步骤(1)中采用双层无菌纱布进行过滤处理。
7.根据权利要求4所述的应用,其特征在于步骤(2)中以60℃旋蒸,浓缩至原体积的1/20,加无水乙醇至乙醇终浓度为90%,乙醇沉淀时间为48h。
8.根据权利要求4所述的应用,其特征在于步骤(3)中浓缩至原体积的1/4,采用分子量2000Da的透析袋。
9.根据权利要求4所述的应用,其特征在于步骤(2)和(3)中离心的条件为6000r/min离心10min。
10.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述药物的剂型为口服液,或者为胶囊剂、片剂、颗粒剂、缓释剂或滴丸剂。
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