CN117693579A - 源自母乳的新型格氏乳杆菌lm1065菌株，以及包含所述菌株或其培养物的用于缓解经前期综合征的组合物 - Google Patents

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Abstract

本申请涉及一种格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)LM1065菌株(KCCM13018P)，以及包含其的用于缓解月经痛的组合物。根据本申请的一体现例的格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)LM1065菌株(KCCM13018P)，通过抑制血液中一氧化氮(NO)、白细胞介素‑6(IL‑6)基因的表达，增加前列腺素E1/前列腺素E2的产生比，增加血液中二高‑γ‑亚麻酸(DGLA)的水平，可以缓解经前期综合征，且上述菌株可应用于食品组合物、保健功能食品组合物、药物组合物等。

Description

源自母乳的新型格氏乳杆菌LM1065菌株，以及包含所述菌株 或其培养物的用于缓解经前期综合征的组合物
技术领域
本申请涉及一种源自母乳的格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)LM1065菌株(KCCM13018P)，以及包含其的用于缓解经前期综合征的组合物。
背景技术
经前期综合征(premenspengel syndrome，PMS)是将月经前反复发生的情绪性、行为性、身体性症状作为特征的一系列症状，伴随着月经痛等各种身体症状和情绪波动、抑郁感、焦虑、攻击性等心理变化等。这些症状在排卵后逐渐加重，并在月经前一周最为严重，然后在月经开始后几天内消失。
在具有代表性身体症状的特征中，月经痛作为一种育龄妇女在到达闭经期为止，每个人每月都会定期经历的普通妇科症状，是女性生理周期中非常常见的症状。
根据将韩国女性作为对象的研究结果，显示77～94％呼诉月经痛。显示出，其中，47％的人每月都忍受月经痛，53.2％的人忍受严重的月经痛，46％的生产职业女性表示因月经痛活动受到限制。国外的情况，显示月经痛的患病率高达60～93％，42％的人忍受着严重的月经痛。女学生中有10～50％的人表示，因为月经痛，学校生活等日常活动受到制约，工业领域的情况，推算因月经痛造成的损害的结果，称每年有6亿小时的工作损失和20亿美元的生产性损失。
因此，对与月经痛相关因素的变化或机制的研究结果，可以作为开发成经前期综合征相关食品素材、保健功能食品素材和医药品等的充分的证据资料。
作为通过催乳素(prolactin)的变化来缓解经前期综合征而开发的组合物的例子，有包含从麦芽提取物中分离的化合物作为有效成分的用于改善经前期综合征症状的组合物(韩国授权专利第10-2187335号)等。然而，关于缓解经前期综合征，仍需要对表现出优异效果的组合物进行深入开发以及多样的研究。
因此，本发明人为了开发能够缓解经前期综合征的优异的组合物，为此而努力的结果，开发了降低一氧化氮(NO)、白细胞介素-6(IL-6)基因表达，并增加血液中前列腺素E1/前列腺素E2的产生比以及二高-γ-亚麻酸(DGLA)水平的新型菌株，由此完成了本发明。
发明内容
发明所要解决的问题
本申请的目的在于，提供一种源自母乳的新型格氏乳杆菌(Lactobacillusgasseri)LM1065菌株(KCCM13018P)，以及包含所述菌株的用于缓解经前期综合征的组合物。
然而，本申请所要解决的问题并不局限于以上所提及的问题，本领域技术人员可通过以下描述明确理解未提及的其他问题。
用于解决问题的方案
本申请的第一方面，提供一种格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)LM1065菌株(KCCM13018P)。
本申请的第二方面，提供一种用于缓解月经痛的食品组合物，其包含格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)LM1065菌株(KCCM13018P)、上述菌株的培养物、裂解物、提取物中的一种以上作为有效成分。
本申请的第三方面，提供一种用于预防或治疗经前期综合征的药物组合物，其包含格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)LM1065菌株(KCCM13018P)、上述菌株的培养物、裂解物、提取物中的一种以上作为有效成分。
发明效果
根据本申请的一体现例的格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)LM1065菌株(KCCM13018P)，通过降低血液中一氧化氮(NO)、白细胞介素-6(IL-6)基因的表达，增加血液中前列腺素E1/前列腺素E2的产生比以及二高-γ-亚麻酸(DGLA)的水平，可以缓解经前期综合征，且上述菌株可应用于食品组合物、保健功能食品组合物、药物组合物等。
附图说明
图1为示出在确认根据本申请一实施例的针对经前期综合征的格氏乳杆菌LM1065的症状缓解效果的实验中，比较测定本申请的菌株处理组和阳性对照组(PositiveControl，PC)之间的NO生成能力的结果的图。
图2为示出在确认根据本申请一实施例的针对经前期综合征的格氏乳杆菌LM1065的症状缓解效果的实验中，比较测定本申请的菌株处理组和阳性对照组(PositiveControl，PC)之间的IL-6基因表达能力的结果的图。
图3为示出在确认根据本申请一实施例的针对经前期综合征的格氏乳杆菌LM1065的症状缓解效果的实验中，通过对最后施用实验物质的3天前从大鼠采集的血液进行酶联免疫吸附实验(ELISA)分析来分析PGE1/PGE2值的结果的图。
图4为示出在确认根据本申请一实施例的针对经前期综合征的格氏乳杆菌LM1065的症状缓解效果的实验中，对于在实验物质的最后施用日采集血液而获得的血清，利用液相色谱-串联质谱(Liquid Chromatograph-Tandem Mass Spectrometer，LC-MS/MS)方法分析DGLA的浓度的结果的图。
具体实施方式
以下，将参照附图对本申请的实施例进行详细说明，以便本领域技术人员能够容易地实施。但本申请能够以多种不同的形式实现，并且不限于本文描述的实施例。另外，为了在附图中清楚地描述本申请，省略了与描述无关的部分，并且贯穿本申请说明书，对于类似的部分使用了类似的附图标记。
贯穿本申请说明书，当称一个构件位于另一个构件“上”时，其不仅包括一个构件与另一个构件接触的情况，还包括其他构件存在于两个构件之间的情况。
贯穿本申请说明书，当称一个部分“包括”一个组成要素时，除非另有说明，其意味着还可以包括其他组成要素，而不是排除其他组成要素。
如贯穿本申请说明书所使用的术语“大约”、“实质上”等在呈现所述含义中固有的制造和材料公差时以等于或接近该数值的意义所使用，并且用于防止不道德的侵权者不当使用为了帮助理解本申请而描述的精确或绝对数值的公开内容。如贯穿本说明书所使用的，表示程度的术语“～(的)步骤”或“～的步骤”并不意味着“为～的步骤”。
贯穿本申请说明书，包括在马库什形式的表达中的术语“它们的组合(们)”是指一种选自根据马库什形式表达的组成要素构成的组中的一个以上的混合或组合，其意味着包括选自上述组成要素构成的组中的一个以上。
贯穿本申请说明书，描述“A和/或B”是指“A或B，或者A和B”。
以下，将参照附图对本申请的体现例以及实施例进行详细说明。然而，本申请可以不限于这些体现例、实施例以及附图。
本申请的第一方面，提供一种格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)LM1065菌株(KCCM13018P)。
本申请的一体现例中，上述菌株可以是降低血液中的NO生成量的菌株。
贯穿本申请说明书所使用的术语“NO(nitric oxide)”被称为“氧化氮”或“一氧化氮”，是指氮被氧化的形态的化合物。它由细胞中作为氨基酸的精氨酸形成，作为一种信号转导物质，参与免疫作用、血管舒张和信号转导等多种生理活性。此外，还已知通过促进炎症细胞因子，如TNF-α和IL-6的分泌来诱发炎症和疼痛(Hu等，2020)。
本申请的格氏乳杆菌LM1065菌株使NO生成量降低，从而可以显示出缓解月经痛的效果。
贯穿本申请说明书所使用的术语“格里斯试剂(Griess reagent)”是指亚硝酸离子用于确认NO2 -是否存在的格里斯实验(Griess test)中所使用的试剂。通常，通过混合将0.5g的对氨基苯磺酸(Sulfanilic Acid)溶解于150ml的稀乙酸的溶液和将0.1g的α-萘胺溶解于20ml的水和150ml的乙酸的溶液来制备。NO生成能力测定实验为使用上述格里斯试剂的实验，由此可测定NO的表达量。
本申请的一体现例中，上述菌株可以是抑制IL-6基因的表达的菌株。
贯穿本申请说明书所使用的术语“IL-6(InterLeukin-6)”是指与TNF-α(肿瘤坏死因子-α(Tumor Necrosis Factor-α))一同称为细胞因子(cytokine)的生理活性蛋白。IL-6由T淋巴细胞或巨噬细胞等多种细胞分泌，促进免疫反应，尤其，参与炎症反应，在调节高热或急性时相蛋白(Acute phase proteins)的过程中诱发炎症及疼痛。
本申请的格氏乳杆菌LM1065菌株使IL-6基因的表达降低，从而可以显示出缓解月经痛的效果。
贯穿本申请说明书所使用的术语“脂多糖(lipopolysaccaharide，LPS)”是指诱发巨噬细胞介导炎症反应的代表性致病物质。LPS与在巨噬细胞表面表达的Toll样受体4(Toll-like receptor 4，TLR4)结合，并通过分泌炎症细胞因子及物质来诱导炎症反应。这种炎症反应还由细胞内存在的炎性体(inflammasome)诱导，若炎性体被激活，则增加作为炎症反应引起的细胞死亡的炎症坏死(pyroptosis)及作为炎症性细胞因子的白细胞介素-1β(interleukin-1β，IL-1β)和白细胞介素-18(IL-18)的分泌。在巨噬细胞介导炎症反应中，小鼠半胱天冬酶-11(caspase-11)及其人类同族体(homologues)半胱天冬酶-4/5(caspase-4/5)也以诱导炎症坏死和IL-1β及IL-18的分泌而周知，经查明，它们直接识别来源于革兰氏阴性菌的细胞内LPS(intracellular LPS)来诱导炎症反应(李英洙，2017)。
贯穿本申请说明书所使用的术语“前列腺素(prostaglandin)”作为经期分泌的一种激素，是指起到使子宫收缩，将子宫内膜剥离时的经血，顺利推出体外的作用。
前列腺素是利用环氧化酶(cyclooxygenase，COX)系统由花生四烯酸转化为前列腺素，随着花生四烯酸转化为前列腺素G2，然后转化为前列腺素H2，可以产生具有各种生理活性的前列腺素。此外，有报道称，前列腺素是引起炎症和疼痛的物质(Jayesh等，2020年)。
贯穿本申请说明书所使用的术语“PGE2(前列腺素E2)”也被称为“地诺前列酮”，是指具有催产素(oxytocin)特性的天然前列腺素。
PGE2根据与PGE2受体结合的G蛋白介导受损组织或细胞中的炎症来诱发疼痛(Treutlein等，2018)，并刺激中枢神经系统(central nervous system)和周围神经系统(peripheral nervous system)(Grosch等，2017)。
本申请的一体现例中，上述菌株可以是增加血液中前列腺素E1/前列腺素E2的比例的菌株，具体地，上述菌株可以是相对于前列腺素E2，增加前列腺素E1的产生比的菌株。
贯穿本申请说明书所使用的术语“PGE1(前列腺素E1)”也被称为“前列地尔(Alprostadil)”，是指一种在体内可以起到扩张血管作用的天然前列腺素，众所周知，其通过平滑肌松弛和减少炎症细胞因子分泌，起到缓解疼痛的效果(Gezginci-Oktayoglu等，2016)。
PGE1/PGE2(PGE1比PGE2)产生比是女性经前期综合征相关食品药品安全部指南中的主要指标，如果该比率增加，则判断包含与治疗经前期综合征相关的功能。
因此，可以看出本申请的格氏乳杆菌LM1065菌株增加血液中前列腺素E1/前列腺素E2的产生比，由此可以显示出缓解月经痛和对于经前期综合征的效果。
本申请的一体现例中，上述菌株可以是增加血液中γ-亚麻酸(GLA)或DGLA水平的菌株。
贯穿本申请说明书所使用的术语“γ-亚麻酸(Gamma-linolenic acid，GLA)”是指主要在植物油中发现的脂肪酸。
经前期综合征女性中，发现前例腺素的代谢障碍。前列腺素参与中枢神经系统功能、体液平衡、子宫收缩性调节，若具有前列腺素代谢障碍，则可能会发生经前期综合征。因此众所周知，在前列腺素合成过程中，针对将亚油酸转换为γ-亚麻酸的过程中有缺陷的女性，如果能让她们摄取GLA，就可以直接合成前列腺素，从而有助于缓解经前期综合征的症状。
贯穿本申请说明书所使用的术语“二高-γ-亚麻酸(Dihomo-Gamma-linolenicacid，DGLA)”是指由20个碳组成的欧米茄-6脂肪酸，其主要存在于植物的种子油中。若摄取必需脂肪酸亚麻酸，则缓慢合成GLA，之后，GLA快速转换为DGLA。
DGLA通过代谢生成PGE1和5-OH-DGLA。PGE1具有如上所述的炎症抑制效果，15-OH-DGL通过抑制5-脂肪氧合酶(5-lipoxygenase)及12-脂肪氧合酶(12-lipoxygenase)来妨碍由花生四烯酸生成的如PGE2和LTB4的炎症促进代谢物质的生成。
本申请的格氏乳杆菌LM1065菌株提高GLA及DGLA的产生，从而可以显示出缓解月经痛的效果。
本申请的一体现例中，上述菌株可以是缓解月经痛的菌株，具体地，上述菌株可以包含在用于缓解月经痛的食品组合物、保健功能食品组合物、药物组合物等多种组合物中。
本申请的第二方面，提供一种用于缓解月经痛的食品组合物，其包含格氏乳杆菌LM1065菌株(KCCM13018P)、上述菌株的培养物、裂解物、提取物中的一种以上作为有效成分。与第一方面重复的内容同样适用于第二方面的食品组合物。
贯穿本申请说明书所使用的术语“缓解”是指通过施用上述组合物，月经痛得到减轻或相关症状得到好转的所有行为。
本申请的一体现例中，上述组合物可以是缓解月经痛的组合物，具体地，可通过降低血液中NO、前列腺素E2，增加血液中前列腺素E1/前列腺素E2的产生比来缓解月经痛。
本申请的一体现例中，上述组合物可以是包括格氏乳杆菌LM1065菌株、其活菌体、其死菌体、其培养物、其裂解物和/或其提取物的组合物。
贯穿本申请说明书所使用的术语“死菌体”作为活菌体的相反概念，是指通过热处理等，使通过发酵获得的活菌和代谢产物无法发生菌生长的形态。死菌体可以包括细胞质(cytoplasm)、细胞壁(cell wall)、细菌素(bacteriocin)等抗菌活性物质、多糖(polysaccharide)、有机酸等。使用上述死菌体的产品与活菌产品相比具有高稳定性，尤其耐热性优秀，由于其对外界环境的稳定性高，因此具有比现有的活菌产品更容易储存和可以延长保质期的优点。此外，由于对抗生素使用的限制正在加强，作为替代剂的活用性和正式投入死菌体产品生产的企业屈指可数，因此市场性和增长可能性很大。
贯穿本申请说明书所使用的术语“培养物”是指通过在已知的液体培养基或固体培养基中培养本申请的菌株而获得的物质，且可以与“培养液”混用。
贯穿本申请说明书所使用的术语“食品”是指肉类、香肠、面包、巧克力、糖果类、快餐类、饼干类、披萨、拉面、其他面类、口香糖类、包括冰淇淋类在内的乳制品、各种汤、饮料、茶、口服剂、酒精饮料、维生素复合剂、保健功能食品以及保健食品等，包括常规意义上的所有食品。
贯穿本申请说明书所使用的术语“保健功能食品”是指根据保健功能食品相关的法律第6727号，使用具有对人体有用功能性的原料或成分制备以及加工的食品，“功能性”是指对人体的结构及功能调节营养素或对生理学作用等保健用途取得有用的效果。
本申请的食品可以采用本领域常规方法制备，在上述制备过程中，可通过添加本领域通常添加的原料以及成分来制备。此外，上述食品的剂型只要是被认定为是食品的剂型，可以不受限制的制备。本发明的食品用组合物可以制备成各种形态，与一般的药品不同，将食品作为原料，因此具有没有长期服用药品时产生的副作用等的优点，且携带性优异，因此本发明的食品可以作为增进肠道环境改善效果的辅助剂摄取。
上述保健食品(health food)是指与一般食品相比，具有积极维持或增进健康作用的食品，保健辅助食品(health supplement food)是指以健康辅助为目的的食品。根据情况，保健功能食品、保健食品和保健辅助食品的术语可以混用。具体地，上述保健功能食品是指将本申请的格氏乳杆菌LM1065菌株添加到饮料、茶类、香辛料、口香糖、饼干类等食品材料中，或者以胶囊化、粉末化、悬浊液等制备的食品，将其摄取时，虽然意味着对健康带来一定的效果，但与一般的药品不同，将食品作为原料，因此具有没有长期服用药品时产生的副作用等的优点。
由于本申请的食品组合物可以日常摄取，因此可以期待对改善抑郁症的高效果，故可以非常有用地使用。
上述食品组合物还可以含有生理学上可接受的载体，载体的种类没有特别限制，可以使用本领域通常使用的任何载体。
此外，上述食品组合物可以包括通常用于食品组合物以改善气味、味道、视觉等的附加成分。例如，可以包括维生素A、C、D、E、B1、B2、B6、B12、烟酸(niacin)、生物素(biotin)、叶酸(folate)、泛酸(panthotenic acid)等。此外，可以包括锌(Zn)、铁(Fe)、钙(Ca)、铬(Cr)、镁(Mg)、锰(Mn)、铜(Cu)、铬(Cr)等矿物质。此外，还可以包括赖氨酸(Lysine)、色氨酸(Tryptophan)、半胱氨酸(Cysteine)、缬氨酸(Valine)等氨基酸。
此外，上述食品组合物还包括防腐剂(山梨酸钾、苯甲酸钠、水杨酸、脱氢乙酸钠等)、杀菌剂(漂白粉和高度漂白粉、次氯酸钠等)、抗氧化剂(丁基羟基茴香醚(BHA)、丁基羟基甲苯(BHT)等)、着色剂(焦油色素等)、显色剂(亚硝酸钠、亚硝酸钠等)、漂白剂(亚硫酸钠)、调味剂(MSG谷氨酸钠等)、甜味剂(甘素(dulcin)、甜蜜素、糖精、钠等)、香料(香草醛、内酯类等)、膨胀剂(明矾、D-酒石酸氢钾等)、强化剂、乳化剂、增稠剂(糊料)、成膜剂、胶姆糖基础剂、抑泡剂、溶剂、改良剂等食品添加剂(food additives)。上述添加剂可以根据食品种类选择并适量使用。
本申请的格氏乳杆菌LM1065菌株可以直接添加，也可以与其他食品或食品成分一起使用，并可以根据常规方法适当使用。有效成分的混合量可以根据其使用目的(预防、保健或治疗性处置)适当确定。通常，在食品或饮料的制备中，相对于食品或饮料，本发明的食品组合物的添加量可以为50重量份以下，具体为20重量份以下。但以保健和卫生为目的长期摄取时，可以包括上述范围以下的含量，且由于在安全性方面没有任何问题，因此有效成分也可以按上述范围以上的量使用。
作为本申请的食品组合物的一例，可以作为保健饮料组合物使用，在此情况下，可以与常规的饮料相似地，含有各种香味剂或天然碳水化合物等作为附加成分。上述天然碳水化合物可以是如葡萄糖、果糖的单糖类；如麦芽糖、蔗糖的二糖类；如糊精、环糊精的多糖类；如木糖醇、山梨糖醇、赤藓糖醇等的糖醇类。甜味剂可以使用如索马甜、甜菊糖苷提取物的天然甜味剂；如糖精、阿斯巴甜的合成甜味剂等。上述天然碳水化合物的比例通常可以为每100mL本发明的保健饮料组合物约0.01～0.04g，具体为约0.02～0.03g。
除上述以外，保健饮料组合物还可以含有各种营养素、维生素、电解质、风味剂、着色剂、果胶酸、果胶酸盐、海藻酸、海藻酸盐、有机酸、保护胶体增稠剂、pH调节剂、稳定剂、防腐剂、甘油、酒精或碳酸剂等。此外，可以含有用于制备天然果汁、果汁饮料或蔬菜饮料的果肉。这些成分可以单独使用或组合使用。这些添加剂的比例虽然不是很重要，但通常每100重量份本发明的保健饮料组合物，在0.01重量份～0.1重量份的范围内选择。
如果本申请的食品组合物能够表现出改善肠道环境的效果，那么其可以按各种重量％包含本申请的格氏乳杆菌LM1065菌株，具体地，相对于食品组合物的总重量，本申请的格氏乳杆菌LM1065菌株的含量可以为0.00001重量％～100重量％或0.01重量％～80重量％，但不限于此。
本申请的一体现例中，上述食品组合物可以是保健功能食品组合物。
本申请的第三方面，提供一种用于预防或治疗经前期综合征的药物组合物，其包含格氏乳杆菌LM1065菌株(KCCM13018P)、上述菌株的培养物、裂解物、提取物中的一种以上作为有效成分。与第一方面和第二方面重复的内容同样适用于第三方面的药物组合物。
本申请的一体现例中，上述组合物可以是包括格氏乳杆菌LM1065菌株、其活菌体、其死菌体、其培养物、其裂解物和/或其提取物的组合物。
贯穿本申请说明书所使用的术语“治疗”是指将包含本申请的格氏乳杆菌LM1065菌株作为有效成分的药物组合物施用于经前期综合征发病的个体，使经前期综合征的症状得到好转或得到改善的任何行为。
本申请的一体现例中，上述组合物可以是治疗或预防经前期综合征的组合物，具体地，其通过降低血液中前列腺素E2，增加前列腺素E1/前列腺素E2的产生比，从而治疗或预防经前期综合征。
贯穿本申请说明书所使用的术语“经前期综合征”是指将月经前反复发生的情绪性、行为性、身体性症状作为特征的一系列症状群，有水肿、乳房痛、消化障碍、头痛、腰痛、下腹痛、腹胀、便秘、腹泻、抑郁症以及失眠症等。
本申请的一体现例中，上述药物组合物可以分别根据常规的方法，配成如散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、悬浊液、乳剂、糖浆剂、气雾剂等口服剂型、外用剂、栓剂或灭菌注射液的形态制剂来使用，但不限于此。
本申请的一体现例中，在制剂化上述药物组合物时，可以使用稀释剂或赋形剂，如常用的填充剂、增量剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂或表面活性剂等来制备，但不限于此。
本申请的一体现例中，用于口服施用的固体制剂包括片剂、丸剂、散剂、颗粒剂或胶囊剂等，并且此类固体制剂在制备时，可以在上述菌株的死菌体中掺入至少一种以上的赋形剂，例如，淀粉、碳酸钙(calcium carbonate)、蔗糖(sucrose)、乳糖(lactose)或明胶等。此外，例如，除了简单的赋形剂以外，还可以使用如硬脂酸镁、滑石等润滑剂，但不限于此。
本申请的一体现例中，用于口服施用的液体制剂对应于悬浊剂、内服溶液、乳剂、糖浆剂等，除了常用的作为常规稀释剂的水、液体石蜡外，还可以包括各种赋形剂，例如润湿剂、甜味剂、芳香剂、保存剂等，但不限于此。
本申请的一体现例中，用于肠胃外施用的制剂可以包括灭菌水溶液、非水溶剂、悬浊剂、乳剂、冻结干燥制剂以及栓剂，但不限于此。例如，作为上述非水溶剂或悬浊剂，可以使用丙二醇(propylene glycol)、聚乙二醇、如橄榄油的植物油、如油酸乙酯的可注射酯等，但不限于此。例如，作为上述栓剂，可以使用半合成脂肪酸酯(witepsol)、聚乙二醇、吐温(tween)61、可可脂、月桂油、甘油明胶等，但不限于此。
根据本申请的一体现例的药物组合物可以是医药品组合物或准药品组合物。
贯穿本申请说明书所使用的术语“准药品”是指在用于将诊断、治疗、改善、减轻、处置或预防人类或动物疾病为目的的物品中，作用比医药品微弱的物品，例如，根据药事法，准药品为除了以医药品的用途使用的产品以外的物品，包括用于治疗或预防人类和动物疾病的产品，以及对人体有轻微或没有直接作用的产品。
本申请的上述准药品组合物可以制成选自身体清洁剂、消毒清洁剂、清洁剂、厨房清洁剂、清扫清洁剂、牙膏、漱口水、湿纸巾、洗剂、肥皂、洗手液、头发清洁剂、头发柔软剂、加湿器填充剂、面膜、软膏剂以及过滤器填充剂组成的组中的剂型，但不限于此。
本申请的一体现例中，上述药物组合物能够以药学有效量给药，本申请的术语“药学有效量”是指足以以适用于医学治疗或预防的合理的受惠/风险比例治疗或预防疾病的量，有效用量标准可以根据疾病的严重程度、药物的活性、患者的年龄、体重、健康、性别、患者对药物的敏感度、所使用的本发明组合物的给药时间、给药途径以及排泄率、治疗时间、将与所使用的本发明组合物配合或同时使用的药物包括在内的因素以及医学领域中众所周知的其他因素来确定。本申请的药物组合物可以单独给药或与众所周知的对已知肠道疾病表现出治疗效果的成分组合给药。将上述因素都考虑在内，在没有副作用的情况下，重要的是以最小的量获得最大效果的量给药。
本申请的一体现例中，本领域技术人员可以考虑使用目的、疾患的成瘾程度、患者的年龄、体重、性别、病史，或用作有效成分的物质的种类等来决定上述药物组合物的给药量。例如，本发明的药物组合物能够以每名成人约0.1ng至约1000mg/kg，优选1ng至约100mg/kg的量给药，并且本申请组合物的给药频率不特别限于此，可以1日1次给药，或也可以将容量进行分多次给药。上述给药量或给药频率，无论在何种方面，均不限定本申请的范围。
本申请的药物组合物不特别限于此，但根据目的，可以通过腹腔内给药、静脉内给药、肌肉内给药、皮下给药、皮内给药、透皮贴剂给药、口服给药、鼻内给药、肺内给药、直肠内给药等途径给药。然而，当口服给药时，其能够以非制剂形式给药，并且由于上述格氏乳杆菌LM1065菌株可能会因为胃酸变性或降解，因此，对于口服用组合物，可以将活性药剂进行包衣或以防止在胃中降解的制剂形态或以口服用贴剂的形态口腔内给药。此外，上述组合物可以根据活性物质能够移动至靶细胞的任意装置给药。
以下，将通过本申请的实施例对本发明进行更详细的描述，下列实施例仅用于帮助理解本申请，本申请的内容不限于下列实施例。
实施例1：LPS处理后的NO生成能力测定实验(NO assay)
为了确认免疫反应中重要的生物标志物的NO的生成能力，进行了以下实验。
将作为小鼠巨噬细胞的RAW 264.7细胞以1×105个细胞/孔的浓度接种在96孔板(well plate)中。将上述培养板在37℃、5％ CO2的环境下培养24小时。
之后，去除培养完成的培养板的上清液后，将格氏乳杆菌菌株以1E+8CFU/ml浓度处理，并在培养箱中培养2小时。
并且，处理1ug/ml浓度的LPS，并追加培养24小时。
最后，将100ul的培养板的上清液接种在新的培养板后，进行格里斯试剂(Griessreagent)反应，并使用ELISA平板读数仪(ELISA reader)在540nm处测定吸光度。
结果确认了，相比于仅处理LPS的阳性对照组(Positive Control，PC)，在追加培养格氏乳杆菌LM1065的情况下，1E+8CFU/ml浓度中的NO生成量显著减少(参照图1)。
因此，本申请的菌株格氏乳杆菌LM1065通过抑制NO的生成来帮助缓解月经痛。
实施例2：利用实时聚合酶链式反应(Real-time PCR)的抗炎症相关基因表达能力 测定实验
为了确认抗炎症相关基因IL-6的表达程度，进行了以下实验。
将作为小鼠巨噬细胞的RAW 264.7细胞以1×105个细胞/孔的浓度接种在96孔板(well plate)中。将上述培养板在37℃、5％ CO2的环境下培养24小时。
之后，去除培养完成的培养板的上清液后，将格氏乳杆菌菌株以1E+8CFU/ml浓度处理，并在培养箱中培养2小时。
并且，处理1ug/ml浓度的LPS，并追加培养24小时。
之后，使用RNA提取试剂盒(RNA extraction kit[TaKaRa公司])提取RNA，对于所提取的RNA，使用高容量cDNA逆转试剂盒(High-capacity cDNA Reverse Transcriptionkit[美国应用生物系统公司(Applied Biosystems)])合成cDNA并稀释至5ng/ul的最终浓度。
最后，使用SYBR Green PCR Master Mix[美国应用生物系统公司]进行实时PCR(Real-time PCR)来比较确认IL-6基因的表达量。
结果确认了，相比于仅处理LPS的阳性对照组(Positive Control，PC)，在追加培养格氏乳杆菌LM1065的情况下，1E+8CFU/ml浓度中的IL-6基因表达量显著减少(参照图2)。
因此，本申请的菌株格氏乳杆菌LM1065通过抑制IL-6基因表达来帮助缓解月经痛。
实施例3：利用SD大鼠进行PMS改善效果评估实验
为了评估当向诱发经前期综合征(premenstrual syndrome，PMS)的斯普拉格·道利(Sprague Dawley，SD)大鼠模型，在4周的时间内每天反复施用本申请的菌株时出现的改善效果，执行以下实验。
在本实施例中使用的大鼠为由(株)KOATECH生产及供应的无特定病原体(SPF)大鼠。对于63只6周龄的雌鼠，在设定为温度23±3℃、相对湿度55±15％、通风次数10次/hr～20次/hr、照明时间1小时(上午8点开灯～下午点灯～下午8点熄灯)及照度150～300Lux的实验室中进行实验。
在施用实验物质时，称量适当的实验物质后，稀释在无菌注射液，并配置成规定浓度。在施用方法上，以口服施用方法施用1次/天，共施用4周，以在最近体重测量日测量的体重为基准，所算出的施用量为10mL/kg。
在开始施用实验物质的第4周，进行了阴道涂抹(Vaginal cornification，Smearcytology)检查。从实验物质最后一次施用前3天开始，以1次/天的频率采血3天(第26天、第27天、第28天)。通过颈静脉采血，将所采血的血液注入至含有凝固诱导物质(clotactivator)的真空采血管(vacutainer tub)，在室温放置约15分钟并凝固后，以3000rpm的转速进行离心分离10分钟，从而分离血清。将血清在分析前保存在设为-70℃以下的超低温冰箱(Deep freezer)中，并用于ELISA分析。在每个采血时刻，利用ELISA试剂盒，使用通过离心分析获得的血清的一部分，分析了PGE1及PGE2浓度和PGE1/PGE2浓度。分析利用了商用化的ELISA试剂盒。
使用实验物质最后施用日采血的血清，利用LC-MS/MS方法分析了血液中DGLA的浓度。
对于本实施例的结果，假设了资料的正规性，并采用参数多重比较(prametricmultiple comparison procedures)或非参数多重比较(non-parametric multiplecomparison procedures)进行分析。在参数单因素方差分析(One-way ANOVA)结果显著的情况下，利用邓尼特多重比较测验(Dunnett's multiple comparison test)来进行事后检验，在非参数克鲁斯卡尔-沃利斯H检验(Kruskal-Wallis'H-test)分析结果显著的情况下，利用曼惠特尼U检验(Mann-whitney test)来进行事后检验。统计学分析利用Prism 7.04(美国加利福尼亚州圣地亚哥格拉帕德软件公司(GraphPad Software INC.，San Diego，CA，USA))来进行，在p值小于0.05的情况下，判定为统计学上显著。
采用阴道涂抹(Vaginal Cornification)的检查结果，在所有实验组中，未观察到在发情期(Estrus)观察到的角化细胞变化情况差异。
ELISA分析结果显示，在第28天，相比于正常对照组(Vehicle)，格氏乳杆菌菌株LM1065施用组的前列腺素E1/前列腺素E2比例显著高(p<0.05，参照图3)。DGLA分析结果，观察到相比于正常对照组(Vehicle)，DGLA水平也与显著高(p<0.05，参照图4)。
在本实验条件下，当向诱发PMS的SD大鼠模型反复施用实验物质4周时，观察到格氏乳杆菌LM1065施用组的前列腺素E1/前列腺素E2比的增加及DGLA的血液中浓度的增加。施用实验物质诱导了PGE1的增加及PGE2的减少，并诱导了PMS模型中的症状改善，因此，包含本申请的菌株或其培养物的组合物对PMS改善是有效的。
如上所述，确认了本申请的菌株格氏乳杆菌LM1065增加PGE1/PGE2比，促进作为炎症缓解物质的DGLA的生成，并有助于缓解月经痛。
前述的本申请的说明用于例示，本申请所属技术领域的普通技术人员可以理解，在不改变本申请的技术思想或必要特征的情况下，可以很容易地修改为其他具体形态。因此，应当理解，以上所描述的实施例在所有方面都是例示性的，而不是限定性的。例如，描述为单一类型的每个组成要素可以分散实施，同样描述为分散型的组成要素也能够以组合的形式实施。
本申请的范围由所附权利要求来表示，而非上述详细说明，应理解为，凡由权利要求的含义和范围以及其等同概念导出的所有改动或修改，均包含在本申请的范围内。
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Claims (8)

1.一种格氏乳杆菌LM1065菌株(KCCM13018P)。
2.根据权利要求1中所述的菌株，其中，
所述菌株是降低血液中一氧化氮生成量的菌株。
3.根据权利要求1中所述的菌株，其中，
所述菌株是抑制白细胞介素-6基因的表达的菌株。
4.根据权利要求1中所述的菌株，其中，
所述菌株是增加血液中前列腺素E1/前列腺素E2(PGE1/PGE2)的比例的菌株。
5.根据权利要求1中所述的菌株，其中，
所述菌株是增加血液中二高-γ-亚麻酸(DGLA)水平的菌株。
6.一种用于缓解月经痛的食品组合物，其包含格氏乳杆菌LM1065菌株(KCCM13018P)、所述菌株的培养物、裂解物、提取物中的一种以上作为有效成分。
7.一种用于预防或治疗经前期综合征的药物组合物，其包含格氏乳杆菌LM1065菌株(KCCM13018P)、所述菌株的培养物、裂解物、提取物中的一种以上作为有效成分。
8.根据权利要求7中所述的用于预防或治疗经前期综合征的药物组合物，其中，
所述经前期综合征为选自水肿、乳房痛、消化障碍、头痛、腰痛、下腹痛、腹胀、便秘、腹泻、抑郁症以及失眠症组成的组中的一种以上的经前期综合征。
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