CN117625420B - 一种复合微生物液态发酵烟草烟叶制备香精香料的方法及酿酒酵母 - Google Patents
一种复合微生物液态发酵烟草烟叶制备香精香料的方法及酿酒酵母 Download PDFInfo
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Abstract
本发明属于微生物、发酵技术领域，公开了一种复合微生物液态发酵烟草烟叶制备香精香料的方法及酿酒酵母，所述方法以黑曲霉、红曲霉和酿酒酵母为发酵菌种混合发酵次级烟叶。本发明方法以红曲霉、黑曲霉和酿酒酵母为发酵菌种，基于混菌协同发酵及代谢控制技术，以烟草烟叶、烟梗、碎末等为发酵原料，生产的香精香料具有典型香气特征，增香效果显著，可吸性高。采用本发明方法制备的香精香料，其致香成分物质含量显著提高，醇类和酯类物质相对增加50%以上。
Description
技术领域
本发明属于微生物、发酵技术领域，尤其是一种复合微生物液态发酵烟草烟叶制备香精香料的方法及酿酒酵母。
背景技术
近年来，随着国民健康意识不断提升及控烟力度的加强，尤其是在烟草行业实施“减害降焦”工程后，目前卷烟出现了烟味变淡，香气不足，劲头变小等现象，致使烟草行业愈发重视“香精香料技术”在烟草加工中的应用，以不增加焦油产生量的同时弥补低焦卷烟香气的不足。
同时，随着全球生物制造行业飞速发展，微生物发酵技术已贯穿各行各业，在烟草行业同样具有重要的应用前景。将微生物组、代谢控制、生物合成等知识理论应用于香精香料及健康卷烟产品研发和提质增香中，以进一步助推我国烟草行业技术进步。
红曲霉和黑曲霉作为乌衣红曲中的特征性菌种，具有酶活性高、代谢产物风味独特、营养功能强等特点，其在酿酒等传统发酵过程中往往能够发挥重要的作用。
烟用香精香料是烟草制品必不可少的添加剂，对塑造烟草风格和稳定烟草质量十分重要。
随着人民生活水平的不断提高，人们对卷烟风味和质量也提出了更高的要求。
市场上烟用香精香料种类繁多，主要有烟草源、非烟草来源的天然香精香料和人工合成香料。天然香精香料的提取技术不成熟且受天然因素影响较大，而合成香料也存在产品单一和制备条件苛刻，很多优质香气成分尚不能人工合成，或合成成本太高，使得常规香精香料的应用受到限制。
随着微生物发酵技术的不断发展，利用微生物发酵技术制备烟用香料成为行业内的研究热点。该方法制备的烟用香精香料具有不受气候条件限制、生产周期短、对环境友好等特点，是制备烟用香精香科的重要途径。微生物发酵技术在筛选产香菌株、提取处理烟草等植物原料、研发烟用香精香料等方面效果显著，是当前的研究重点。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足之处，提供一种复合微生物液态发酵烟草烟叶制备香精香料的方法及酿酒酵母。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：
一株能够发酵烟草烟叶制备香精香料的酿酒酵母，所述酿酒酵母的名称为：HQY20190930-1，分类名称为：酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae），保藏编号：CGMCCNo. 18665，保藏日期为：2019年10月11日，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
利用如上所述的酿酒酵母的复合微生物液态发酵烟草烟叶制备香精香料的方法，所述方法以黑曲霉、红曲霉和酿酒酵母为发酵菌种混合发酵次级烟叶。
进一步地，包括如下步骤：
（1）烟草烟叶、烟梗、碎末等为发酵原料，添加发酵原料重量110-140%的蒸馏水，高压灭菌，115℃灭菌15 min；
（2）第一段发酵：灭菌完成后，接入红曲霉，液态发酵18-24h；
（3）第二段发酵：发酵18-24h后，接入黑曲霉，继续发酵46-50h；
（4）第三段发酵：发酵46-50h后，补加发酵营养盐，继续发酵20-24h；
（5）第四段发酵：发酵20-24h后，接入酿酒酵母，继续发酵78-84h；
（6）发酵结束后，80-90℃回流蒸煮2-4h，过滤，上清液40-50℃浓缩至相对密度1.15-1.25g/mL，所得浸膏即为香精香料。
进一步地，在步骤（2）中，所述红曲霉的接种量为(1～5)× (108~109) cFu/1000mL发酵液；
在步骤（2）中，所述发酵条件为：温度38-42℃，搅拌速度90-110转/分钟、通气量150-200 L/h。
进一步地，在步骤（3）中，所述黑曲霉的接种量为(1～5)× (107~108) cFu/1000mL发酵液；
在步骤（3）中，所述发酵条件为：温度35-37℃，搅拌速度80-100转/分钟、通气量130-160 L/h。
进一步地，在步骤（4）中，所述发酵营养盐为：维生素B12 0.01-0.08g/1000mL发酵液、NaCl 0.1-0.2g/1000mL发酵液；
在步骤（4）中，所述发酵条件为：添加营养盐后，调节pH值至6.5，温度33-35℃，搅拌速度80-100转/分钟、通气量110-140 L/h。
进一步地，在步骤（5）中，所述酿酒酵母的接种量为(1～5)× (109~1010) cFu/1000mL发酵液；
在步骤（5）中，所述发酵条件为：温度28-32℃，搅拌速度30-50转/分钟、通气量10-20 L/h。
本发明取得的优点和积极效果为：
1、本发明方法以红曲霉、黑曲霉和酿酒酵母为发酵菌种，基于混菌协同发酵及代谢控制技术，以烟草烟叶、烟梗、碎末等为发酵原料，生产的香精香料具有典型香气特征，增香效果显著，可吸性高。采用本发明方法制备的香精香料，其致香成分物质含量显著提高，醇类和酯类物质相对增加50%以上。
2、本发明选用红曲霉、黑曲霉和酿酒酵母混合发酵，其中酿酒酵母经多次选育筛选，该菌株能满足不同红曲霉和黑曲霉菌株的搭配，作为产香微生物，该酿酒酵母利用烟叶基质可以产生多种香气物质，具有安全性好、生长速度快等诸多优点。红曲霉和黑曲霉作为乌衣红曲中的特征性菌种，具有酶活性高、代谢产物风味独特等特点，对烟叶中大分子物质如纤维素等也有较好的降解作用，红曲霉、黑曲霉和酿酒酵母协同增效，发酵增香效果显著，尤其产醇和产酯能力较强。
3、本发明方法中的发酵营养盐及发酵条件，均是在明确红曲霉、黑曲霉和酿酒酵母协同代谢网络及互作机制的基础上优化确定的。
4、本发明检测方法采用气质联用法。气相色谱法根据物质的沸点、极性和吸附性质的不同对目标混合物进行分离，它具有较高的选择性和灵敏度，常用于分析烟用香精香料中的醇、烃、酯、萜等挥发性和半挥发性成分。在气相色谱基础上发展的气质联用法常用于烟用香精香料的分析。气质联用法结合了色谱和质谱的优势，具有较高的分离能力和鉴别特性，可实现复杂化合物定性、定量分析的一次完成。
附图说明
图1为本发明实施例1中制备得到的香精香料的GC-MS图；
图2为本发明实施例2中制备得到的香精香料的GC-MS图；
图3为本发明对比例1中制备得到的香精香料的GC-MS图；
图4为本发明对比例2中制备得到的香精香料的GC-MS图；
图5为本发明对比例3中制备得到的香精香料的GC-MS图；
图6为本发明对比例4中制备得到的香精香料的GC-MS图；
图7为本发明中酿酒酵母HQY20190930-1的平板菌落形态图；
图8为本发明中酿酒酵母HQY20190930-1的显微镜下形态图。
一株能够发酵烟草烟叶制备香精香料的酿酒酵母，所述酿酒酵母的名称为：HQY20190930-1，分类名称为：酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae），保藏编号：CGMCCNo. 18665，保藏日期为：2019年10月11日，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明进一步说明，下属实施例是叙述性的，不是限定性的，不能以下述实施例来限定本发明的保护范围。
具体实施例中所涉及的各种实验操作，均为本领域的常规技术，本文中没有特别注释的部分，本领域的普通技术人员可以参照本发明申请日之前的各种常用工具书、科技文献或相关的说明书、手册等予以实施。
一株能够发酵烟草烟叶制备香精香料的酿酒酵母，所述酿酒酵母的名称为：HQY20190930-1，分类名称为：酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae），保藏编号：CGMCCNo. 18665，保藏日期为：2019年10月11日，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，北京市朝阳区北辰西路1号院3号。如图7、图8所示，其菌落表面光滑、湿润、粘稠，容易挑起，菌落质地均匀，正反面和边缘、中央部位的颜色都很均一，菌落为乳白色。
利用如上所述的酿酒酵母的复合微生物液态发酵烟草烟叶制备香精香料的方法，所述方法以黑曲霉、红曲霉和酿酒酵母为发酵菌种混合发酵次级烟叶。
较优地，包括如下步骤：
（1）烟草烟叶、烟梗、碎末等为发酵原料，添加发酵原料重量110-140%的蒸馏水，高压灭菌，115℃灭菌15 min；
（2）第一段发酵：灭菌完成后，接入红曲霉，液态发酵18-24h；
（3）第二段发酵：发酵18-24h后，接入黑曲霉，继续发酵46-50h；
（4）第三段发酵：发酵46-50h后，补加发酵营养盐，继续发酵20-24h；
（5）第四段发酵：发酵20-24h后，接入酿酒酵母，继续发酵78-84h；
（6）发酵结束后，80-90℃回流蒸煮2-4h，过滤，上清液40-50℃浓缩至相对密度1.15-1.25g/mL，所得浸膏即为香精香料。
较优地，在步骤（2）中，所述红曲霉的接种量为(1～5)× (108~109) cFu/1000mL发酵液；
在步骤（2）中，所述发酵条件为：温度38-42℃，搅拌速度90-110转/分钟、通气量150-200 L/h。
较优地，在步骤（3）中，所述黑曲霉的接种量为(1～5)× (107~108) cFu/1000mL发酵液；
在步骤（3）中，所述发酵条件为：温度35-37℃，搅拌速度80-100转/分钟、通气量130-160 L/h。
较优地，在步骤（4）中，所述发酵营养盐为：维生素B12 0.01-0.08g/1000mL发酵液、NaCl 0.1-0.2g/1000mL发酵液；
在步骤（4）中，所述发酵条件为：添加营养盐后，调节pH值至6.5，温度33-35℃，搅拌速度80-100转/分钟、通气量110-140 L/h。
较优地，在步骤（5）中，所述酿酒酵母的接种量为(1～5)× (109~1010) cFu/1000mL发酵液；
在步骤（5）中，所述发酵条件为：温度28-32℃，搅拌速度30-50转/分钟、通气量10-20 L/h。
具体地，相关的制备及检测如下：
本发明酿酒酵母HQY20190930-1的分离纯化步骤如下：
样品来源：玫瑰香葡萄，天津市汉沽产区
称取1 g葡萄到9 m L无菌生理盐水中，30℃、200 r/min条件下富集培养20 min，吸取100µL上清液至900µL无菌生理盐水中，按10倍梯度稀释至10-3，然后分别吸取稀释度为10-2、10-3的菌液100µL涂布于YPD固体培养基（含50mg/L氯霉素)，于30℃条件下培养24 h。挑取具有典型酵母菌菌落特征（如表面光滑、湿润粘稠等）且形态差异较为明显的单个菌落，以平板划线法反复分离纯化，直至得到纯菌落，菌株保藏于-80℃，备用。
所述酿酒酵母HQY20190930-1具有以下生物学特征：
（1）菌体特征：显微镜下形态呈圆形或是椭圆形。
（2）菌落特征：菌落表面光滑、湿润、粘稠，容易挑起，菌落质地均匀，正反面和边缘、中央部位的颜色都很均一，菌落为乳白色。
（3）生长特征：30℃恒温，摇床转速200r/min的条件下，在YPD液体培养基培养18h到达对数生长期末期。
（4）该酿酒酵母发酵液具有浓郁的果香味，并略带酒香气息，可用于发酵食品。
如图7、图8所示。
实施例1
此实施例为多次优化后获得的最佳条件。
利用酿酒酵母HQY20190930-1的复合微生物液态发酵烟草烟叶制备香精香料的方法，步骤如下：
称取烟草烟叶2000g，添加2700mL蒸馏水，选用5L发酵罐，115℃灭菌15 min；灭菌完成后，接入为2 × 109 cFu 红曲霉，控制温度41℃，搅拌速度110转/分钟、通气量170 L/h，液态发酵20 h；接入为7 × 107 cFu 黑曲霉，控制温度36℃，搅拌速度80转/分钟、通气量140 L/h，继续发酵48 h；补加发酵营养盐：维生素B12 0.18g、NaCl 0.4g，调节pH值至6.5，温度33℃，搅拌速度80转/分钟、通气量120 L/h，继续发酵24 h；接入3 ×1010 cFu酿酒酵母，控制温度30℃，搅拌速度30转/分钟、通气量15 L/h，继续发酵82 h，累计发酵172 h。发酵结束后，80℃回流蒸煮4 h，冷却至室温后过滤，上清液40℃减压浓缩至相对密度1.15g/mL，即得香精香料。
所制备得到的香精香料的GC-MS图如图1所示，采用NIST17谱库检索定性和内标法定量，共检测到挥发性致香成分107种，包含27种酯类和内酯类、20种醇类、14种羰基类、2种酚类、23种烃类、9种杂环类和12种其他风味化合物。总体来说，实施例1的混菌发酵的烟草烟叶样品风味物质的种类和含量都明显高于其他实施例，发酵酯类和醇类相对含量明显增加，其中三甲基硅乙酸酯、亚麻酸甲酯、十六酸乙酯、邻苯二甲酸二丁酯、2,3-丁二醇、桉油烯醇、羊毛甾醇、丙二醇等的相对含量分别增加了1386.22%、187.77%、42.65%、20.48%、224.15%、63.17%、38.91%、162.56%，对于增加发酵液的醇度和和风味具有明显的效果。
实施例2
此实施例为边缘参数，效果较好。
称取烟草烟叶2200 g，添加3000 mL蒸馏水，选用5L发酵罐，115℃灭菌15 min；灭菌完成后，接入为8 × 108 cFu 红曲霉，控制温度38℃，搅拌速度100转/分钟、通气量160L/h，液态发酵18 h；接入为6 × 107 cFu 黑曲霉，控制温度35℃，搅拌速度80转/分钟、通气量130 L/h，继续发酵46 h；补加发酵营养盐：维生素B12 0.05g、NaCl 0.3g，调节pH值至6.5，温度33℃，搅拌速度90转/分钟、通气量130 L/h，继续发酵20 h；接入5 ×109 cFu酿酒酵母，控制温度28℃，搅拌速度40转/分钟、通气量20 L/h，继续发酵78 h，累计发酵162 h。发酵结束后，85℃回流蒸煮3 h，冷却至室温后过滤，上清液44℃减压浓缩至相对密度1.20g/mL，即得香精香料。
所制备得到的香精香料的GC-MS图如图2所示，采用NIST17谱库检索定性和内标法定量，共检测到挥发性致香成分87种，包含18种酯类和内酯类、15种醇类、7种羰基类、1种酚类、4种烃类、8种杂环类和34种其他风味化合物。其中三甲基硅乙酸酯、乙酸环阿屯酯、DL-泛酰内酯、植物醇、丙二醇、(2R,3R)-(-)-2,3-丁二醇的相对含量分别增加了723.96%、36.79%、22.03%、91.17%、49.76%、64.18%。
对比例1
此对比例未接种红曲霉，其他条件与实施例1相同。
称取烟草烟叶2000g，添加2700mL蒸馏水，选用5L发酵罐，115℃灭菌15 min；灭菌完成后，控制温度41℃，搅拌速度110转/分钟、通气量170 L/h，液态发酵20 h；接入为7 ×107 cFu 黑曲霉，控制温度36℃，搅拌速度80转/分钟、通气量140 L/h，继续发酵48 h；补加发酵营养盐：维生素B12 0.18g、NaCl 0.4g，调节pH值至6.5，温度33℃，搅拌速度80转/分钟、通气量120 L/h，继续发酵24 h；接入3 ×1010 cFu酿酒酵母，控制温度30℃，搅拌速度30转/分钟、通气量15 L/h，继续发酵82 h，累计发酵172 h。发酵结束后，80℃回流蒸煮4 h，冷却至室温后过滤，上清液40℃减压浓缩至相对密度1.15g/mL，即得香精香料。
所制备得到的香精香料的GC-MS图如图3所示，采用NIST17谱库检索定性和内标法定量，共检测到挥发性致香成分72种，包含12种酯类和内酯类、12种醇类、9种羰基类、15种烃类、7种杂环类和17种其他风味化合物。其中十六酸乙酯、戊酸乙酯、一缩二丙二醇、(-)-愈创醇、羊毛甾醇的相对含量分别增加了210.54%、202.36%、32.64%、116.60%、71.08%。
对比例2
此对比例未接种黑曲霉，其他条件与实施例1相同。
称取烟草烟叶2000g，添加2700mL蒸馏水，选用5L发酵罐，115℃灭菌15 min；灭菌完成后，接入为2 × 109 cFu 红曲霉，控制温度41℃，搅拌速度110转/分钟、通气量170 L/h，液态发酵20 h；控制温度36℃，搅拌速度80转/分钟、通气量140 L/h，继续发酵48 h；补加发酵营养盐：维生素B12 0.18g、NaCl 0.4g，调节pH值至6.5，温度33℃，搅拌速度80转/分钟、通气量120 L/h，继续发酵24 h；接入3 ×1010 cFu酿酒酵母，控制温度30℃，搅拌速度30转/分钟、通气量15 L/h，继续发酵82 h，累计发酵172 h。发酵结束后，80℃回流蒸煮4 h，冷却至室温后过滤，上清液40℃减压浓缩至相对密度1.15g/mL，即得香精香料。
所制备得到的香精香料的GC-MS图如图4所示，采用NIST17谱库检索定性和内标法定量，共检测到挥发性致香成分71种，包含10种酯类和内酯类、10种醇类、9种羰基类、14种烃类、6种杂环类和22种其他风味化合物。其中3-巯基己基乙酸酯、己酸戊酯、异丁酸癸酯、L-薄荷醇、(-)-愈创醇的相对含量分别增加了170.29%、62.48%、76.76%、212.91%、139.91%。
对比例3
此对比例未接种酿酒酵母，其他条件与实施例1相同。
称取烟草烟叶2000g，添加2700mL蒸馏水，选用5L发酵罐，115℃灭菌15 min；灭菌完成后，接入为2 × 109 cFu 红曲霉，控制温度41℃，搅拌速度110转/分钟、通气量170 L/h，液态发酵20 h；接入为7 × 107 cFu 黑曲霉，控制温度36℃，搅拌速度80转/分钟、通气量140 L/h，继续发酵48 h；补加发酵营养盐：维生素B12 0.18g、NaCl 0.4g，调节pH值至6.5，温度33℃，搅拌速度80转/分钟、通气量120 L/h，继续发酵24 h；控制温度30℃，搅拌速度30转/分钟、通气量15 L/h，继续发酵82 h，累计发酵172 h。发酵结束后，80℃回流蒸煮4 h，冷却至室温后过滤，上清液40℃减压浓缩至相对密度1.15g/mL，即得香精香料。
所制备得到的香精香料的GC-MS图如图5所示，采用NIST17谱库检索定性和内标法定量，共检测到挥发性致香成分62种，包含11种酯类和内酯类、7种醇类、8种羰基类、1种酚类、15种烃类、6种杂环类和14种其他风味化合物。其中硼酸三乙酯、2-(三甲基硅氧基)丁二酸二甲酯、(三甲基硅基)乙酸乙酯、六甘醇、五甘醇、1-溴-2-丙醇的相对含量分别增加了59.40%、45.74%、39.78%、15.93%、57.16%、8.50%。
对比例4
此对比例未加发酵营养盐，其他条件与实施例1相同。
称取烟草烟叶2000g，添加2700mL蒸馏水，选用5L发酵罐，115℃灭菌15 min；灭菌完成后，接入为2 × 109 cFu 红曲霉，控制温度41℃，搅拌速度110转/分钟、通气量170 L/h，液态发酵20 h；接入为7 × 107 cFu 黑曲霉，控制温度36℃，搅拌速度80转/分钟、通气量140 L/h，继续发酵48 h；调节pH值至6.5，温度33℃，搅拌速度80转/分钟、通气量120 L/h，继续发酵24 h；接入3 ×1010 cFu酿酒酵母，控制温度30℃，搅拌速度30转/分钟、通气量15 L/h，继续发酵82 h，累计发酵172 h。发酵结束后，80℃回流蒸煮4 h，冷却至室温后过滤，上清液40℃减压浓缩至相对密度1.15g/mL，即得香精香料。
所制备得到的香精香料的GC-MS图如图6所示，采用NIST17谱库检索定性和内标法定量，共检测到挥发性致香成分77种，包含10种酯类和内酯类、16种醇类、13种羰基类、1种酚类、8种烃类、8种杂环类和21种其他风味化合物。其中三甲基硅乙酸酯、乙酸正十七烷基酯、十六酸乙酯、7-(三甲基硅烷基)-4,6-庚二炔-2-醇、2-丁基-1-辛醇、羊角拗醇的相对含量分别增加了318.33%、41.71%、14.06%、102.42%、45.01%、60.18%。
效果评价实验例：
各实施例及对比例发酵终止后，采用二氯甲烷溶剂萃取并减压浓缩制备样品浓缩液，进一步用GC-MS（气相色谱质谱联用仪）检测分析各样品致香成分，并采用人工品吸的方式，评价各样品效果。结果如表1和表2所示。
表1结果显示，实施例1品吸效果最佳，实施例2次之，对比例1-4品吸效果均远低于实施例1，对比例1-4虽然品吸效果略高于原始烟叶，但难以达到实施例1的效果。同时，表2结果显示次级烟叶发酵前后致香成分含量变化对比，结果同样证实，实施例1效果最佳。
综合各实施例及对比例结果证实，实施例1效果最佳，且两种微生物黑曲霉、红曲霉和该酿酒酵母可较好协同增效，提高次级烟叶致香成分的含量，同时，发酵营养盐在其中起了关键作用。
同时，也可以看出，本发明方法中黑曲霉、红曲霉、酿酒酵母HQY20190930-1和发酵营养盐之间具有协同作用，能够协同提高所制得的香精香料的相关特性。
尽管为说明目的公开了本发明的实施例，但是本领域的技术人员可以理解：在不脱离本发明及所附权利要求的精神和范围内，各种替换、变化和修改都是可能的，因此，本发明的范围不局限于实施例所公开的内容。
Claims (2)
1.利用酿酒酵母的复合微生物液态发酵烟草烟叶制备香精香料的方法，特征在于：所述方法以黑曲霉、红曲霉和酿酒酵母为发酵菌种混合发酵次级烟叶；
所述酿酒酵母的名称为：HQY20190930-1，分类名称为：酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae），保藏编号：CGMCC No. 18665，保藏日期为：2019年10月11日，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，北京市朝阳区北辰西路1号院3号；
所述方法包括如下步骤：
（1）烟草烟叶、烟梗、碎末为发酵原料，添加发酵原料重量110-140%的蒸馏水，高压灭菌，115℃灭菌15 min；
（2）第一段发酵：灭菌完成后，接入红曲霉，液态发酵18-24h；
（3）第二段发酵：发酵18-24h后，接入黑曲霉，继续发酵46-50h；
（4）第三段发酵：发酵46-50h后，补加发酵营养盐，继续发酵20-24h；
（5）第四段发酵：发酵20-24h后，接入酿酒酵母，继续发酵78-84h；
（6）发酵结束后，80-90℃回流蒸煮2-4h，过滤，上清液40-50℃浓缩至相对密度1.15-1.25g/mL，所得浸膏即为香精香料；
在步骤（2）中，所述红曲霉的接种量为(1～5)× (108~109) cFu/1000mL发酵液；
在步骤（2）中，所述发酵条件为：温度38-42℃，搅拌速度90-110转/分钟、通气量150-200 L/h；
所述黑曲霉的接种量为(1～5)× (107~108) cFu/1000mL发酵液；
在步骤（3）中，所述发酵条件为：温度35-37℃，搅拌速度80-100转/分钟、通气量130-160 L/h；
在步骤（4）中，所述发酵营养盐为：维生素B12 0.01-0.08g/1000mL发酵液、NaCl 0.1-0.2g/1000mL发酵液；
在步骤（4）中，所述发酵条件为：添加营养盐后，调节pH值至6.5，温度33-35℃，搅拌速度80-100转/分钟、通气量110-140 L/h；
在步骤（5）中，所述酿酒酵母的接种量为(1～5)× (109~1010) cFu/1000mL发酵液；
在步骤（5）中，所述发酵条件为：温度28-32℃，搅拌速度30-50转/分钟、通气量10-20L/h。
2.一株能够发酵烟草烟叶制备香精香料的酿酒酵母，其特征在于：所述酿酒酵母的名称为：HQY20190930-1，分类名称为：酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae），保藏编号：CGMCC No. 18665，保藏日期为：2019年10月11日，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
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