CN117598965A - 一种珍珠发酵物的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种珍珠发酵物的应用，属于化妆品技术领域。该珍珠发酵物用于增强表皮厚度，该珍珠发酵物为酵母菌珍珠发酵溶胞产物滤液。本发明首次提出了上述珍珠发酵物的新应用，即将其用于增强表皮厚度，通过该方式可进一步达到修护皮肤屏障的效果。
Description
技术领域
本发明涉及化妆品技术领域，具体而言，涉及一种珍珠发酵物的应用。
背景技术
平衡的皮肤屏障是保持身体完整性和健康的先决条件。皮肤屏障最外层是一层亲水性皮脂膜，紧挨着的是一层层呈“砖墙结构”排列整齐的角质细胞，角质细胞之间存在细胞间脂质，紧密连接的三者共同构成了皮肤屏障。皮肤屏障既可以防止机体内各种营养物质、水分、电解质的丧失，也可以防止外界有害物质的入侵。皮肤屏障受损后，容易导致皮肤干燥、皮肤老化、皮肤敏感和皮肤炎症等问题。
由于近些年环境的恶化，皮肤经常暴露于多种外源性刺激，如紫外线、微生物、毒物、微粒等刺激，这些刺激导致皮肤角质层完整性的破坏，最终导致皮肤屏障受损。随着人们对自身健康的关注，越来越多的人在意自身形象及脸部护理，长期口罩佩戴导致的皮肤敏感、泛红、毛孔粗大等皮肤屏障受损问题得到了人们的高度重视。修护及改善皮肤屏障，是目前化妆品研发的持续热点。
鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明的目的在于提供一种珍珠发酵物的应用，具体的，首次提出了上述珍珠发酵物在增强表皮厚度方向的应用，通过该方式可进一步达到修护皮肤屏障的效果。
本申请可这样实现：
本申请提供一种珍珠发酵物的应用，该珍珠发酵物用于增强表皮厚度，珍珠发酵物为酵母菌珍珠发酵溶胞产物滤液。
在可选的实施方式中，珍珠发酵物还用于促进屏障相关蛋白的表达。
在可选的实施方式中，珍珠发酵物还用于抑制炎症相关介质的表达。
在可选的实施方式中，珍珠发酵物还用于抑制糖基化终产物的表达。
在可选的实施方式中，珍珠发酵物还用于促进弹性蛋白和胶原蛋白的表达。
在可选的实施方式中，珍珠发酵物还用于抗氧化。
在可选的实施方式中，珍珠发酵物用于通过增强表皮厚度、促进屏障相关蛋白的表达、抑制炎症相关介质的表达、抑制糖基化终产物的表达、促进弹性蛋白和胶原蛋白的表达以及抗氧化，共同修护皮肤屏障。
在可选的实施方式中，上述屏障相关蛋白包括FLG、LOR、ZO-1和Claudin-1中的至少一种。
在可选的实施方式中，上述炎症相关介质包括MCP-1、ICAM-1、PEG2、IL-1α、MMP-1和IL-6中的至少一种。
在可选的实施方式中，上述胶原蛋白包括Ⅰ型胶原和XVII型胶原蛋白中的至少一种。
本申请的有益效果包括：
本申请首次提出了上述珍珠发酵物的新应用，即将其用于增强表皮厚度。在此基础上，该珍珠发酵物还可结合其所能起到的促进屏障相关蛋白的表达、抑制炎症相关介质的表达、抑制糖基化终产物的表达、促进弹性蛋白和胶原蛋白的表达以及抗氧化的作用，从多靶点共同修护皮肤屏障。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
图1为测试例1的结果图；
图2为测试例2的结果图；
图3和图4为测试例3的结果图；
图5为测试例4的结果图；
图6和图7为测试例5的结果图；
图8和图9为测试例6的结果图；
图10至图13为测试例7的结果图；
图14为测试例8的结果图；
图15和图16为测试例9的结果图；
图17和图18为测试例10的结果图；
图19和图20为测试例11的结果图；
图21为测试例12的结果图；
图22和图23为测试例13的结果图。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
下面对本申请提供的珍珠发酵物的应用进行具体说明。
本申请提出了一种珍珠发酵物的新应用，该珍珠发酵物为酵母菌珍珠发酵溶胞产物滤液，其可用于增强表皮厚度。
上述酵母菌珍珠发酵溶胞产物滤液为SACCHAROMYCES/PEARL FERMENT LYSATEFILTRATE，缩写为FPL。其可通过直接购买的方式获得，如购自德清欧诗漫生物科技有限公司。此外，也可通过自行制备的方式获得。
作为参考地，上述FPL的制备方法可以参照：先将珍珠粉与水混合，随后与乳酸水溶液混合，第一次固液分离，干燥分离后的固体，将干燥后的固体与酵母菌液混合并发酵；将发酵产物破碎后第二次固液分离，将第二次固液分离所得的液体进行过滤，收集滤液。
其中，珍珠粉的粒径可以为1-3μm(如1μm、1.5μm、2μm、2.5μm或3μm等)；珍珠粉与水的重量比可以为1:5-50(如1:5、1:10、1:20、1:30、1:40或1:50等)；乳酸水溶液的浓度可以为15-25wt％(如15wt％、20wt％或25wt％等)，珍珠粉与乳酸的重量比可以为1:0.5-5(如1:0.5、1:1、1:2、1:3、1:4或1:5等)。
珍珠粉与酵母菌液的重量比可以为0.01-5:100(如0.01:100、0.05:100、0.1:100、0.5:100、1:100、2:100、3:100、4:100或5:100等)。上述酵母菌液可以为含5wt％的酵母粉(购自安琪酵母，葡萄酒活性干酵母BV171)的PDB培养基溶液。
发酵条件包括：pH值6.5-7.5(如6.5、6.8、7.0、7.2或7.5等)、发酵温度为15-35℃(如15℃、20℃、25℃、30℃或35℃等)、发酵时间为1-7天(如1天、2天、5天或7天等)。
上述珍珠发酵物能够起到增加表皮厚度的作用，避免角质层剥脱，可较好地修护表皮。在一些实施方式中，上述珍珠发酵物能增加角质层厚度以及颗粒层颗粒数量。
此外，上述珍珠发酵物还可用于以下方面中的至少一方面：
①、促进屏障相关蛋白的表达；
②、抑制炎症相关介质的表达；
③、抑制糖基化终产物的表达；
④、促进弹性蛋白和胶原蛋白的表达；
⑤、抗氧化。
也即，上述珍珠发酵物可用于制备单独需要具有上述任意方面作用的产品中，也可用于制备需要同时含有上述至少两方面作用的相关产品中。
在一些较为典型的实施方式中，上述珍珠发酵物用于通过增强表皮厚度、促进屏障相关蛋白的表达、抑制炎症相关介质的表达、抑制糖基化终产物的表达、促进弹性蛋白和胶原蛋白的表达以及抗氧化，共同修护皮肤屏障。
其中，上述屏障相关蛋白包括FLG、LOR、ZO-1和Claudin-1中的至少一种。上述炎症相关介质包括MCP-1、ICAM-1、PEG2、IL-1α、MMP-1和IL-6中的至少一种。上述胶原蛋白包括Ⅰ型胶原和XVII型胶原蛋白中的至少一种。
换而言之，上述珍珠发酵物可通过促进FLG、LOR、ZO-1和Claudin-1的表达；抑制MCP-1、ICAM-1、PEG2、IL-1α、MMP-1和IL-6的表达；抑制糖基化终产物AGEs的表达；抗氧化；促进弹性蛋白、Ⅰ型胶原和XVII型胶原蛋白的合成；增加表皮厚度等多方面共同修护皮肤屏障。
此外，本申请还提供了一种化妆品，其成分包括上述酵母菌珍珠发酵溶胞产物滤液。
在一些实施方式中，酵母菌珍珠发酵溶胞产物滤液在化妆品中的含量可为100％；在另一些实施方式中，酵母菌珍珠发酵溶胞产物滤液在化妆品中的含量可为80％(含)-100％(不含)，如80％、82％、85％、88％、90％、92％、95％、98％或99％等，也可以为80％(含)-100％(不含)范围内的其它任意值；在另一些实施方式中，酵母菌珍珠发酵溶胞产物滤液在化妆品中的含量还可以小于80％，如70％、60％、50％、40％、30％、20％、10％或5％等，也可以为小于80％范围内的其它任意值。
当酵母菌珍珠发酵溶胞产物滤液在化妆品中的含量小于100％时，化妆品的成分还包括辅料，辅料包括防腐剂，此外也可包括保湿剂、抗氧化剂、祛斑美白剂、防晒剂、皮肤调理剂、乳化剂、pH调节剂、酸碱缓冲剂、螯合剂、增稠剂、增溶剂及香精中的至少一种。
需说明的是，上述辅料可采用化妆品领域中可用的任何辅料成分，在此不做一一列举。
作为参考地，本申请中化妆品的剂型例如可包括膏霜乳、液体、凝胶、粉剂、泥、蜡基、喷雾剂、气雾剂、贴或膜(含基材)，还可以为化妆品的其它任何直接或间接作用于皮肤的适用剂型。示例性地，可以为例如可以为美白精华、保湿精华、防晒精华、除皱精华、柔肤水、爽肤水、保湿乳液、卸妆液、卸妆乳、润肤霜、防晒隔离、防晒乳、防晒霜、身体乳、雪花膏、保湿乳膏、早霜、晚霜、保湿凝胶、面膜、洁面乳、洁面泡沫、洗面奶、粉底、护手霜、沐浴露、化妆皂、香皂、定妆喷雾或保湿喷雾等。
以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。
实施例1
本实施例提供一种酵母菌珍珠发酵溶胞产物滤液，其制备方法如下：
将市售亚微米珍珠粉(德清欧诗漫生物科技有限公司)与去离子水，按1:10的重量比，搅拌混合均匀，添加浓度为20wt％乳酸水溶液(珍珠粉与乳酸的重量比为1:3)，搅拌溶解，过滤冻干后，按珍珠粉与酵母菌液的重量比为0.5:100的比例加入至酵母菌液中(酵母菌液为含5wt％的酵母粉的PDB培养基溶液，酵母粉为购自安琪酵母的葡萄酒活性干酵母BV171)，调节pH＝7.0，28℃发酵3天，超声破碎，8000rpm离心去除沉淀，上清液过滤除菌，滤液用0.22μm的滤膜再次过滤，获得酵母菌珍珠发酵溶胞产物滤液，缩写为FPL1。
实施例2
本实施例提供一种酵母菌珍珠发酵溶胞产物滤液，其制备方法与实施例1的区别在于：发酵过程的pH值为6.8。
实施例3
本实施例提供一种皮肤屏障修护组合物。
其制备方法如下：在89.1g酵母菌珍珠发酵溶胞产物滤液(购自德清欧诗漫生物科技有限公司)中，加入0.3g乳酸菌发酵产物(购自北京皓尔生物科技有限公司)、10g丁二醇、0.5g 1,2-己二醇和0.1g乙基己基甘油，100rpm搅拌均匀获得淡黄色透明液体，即皮肤屏障修护组合物。
实施例4
本实施例提供一种皮肤屏障修护组合物。
其制备方法如下：在89.3g酵母菌珍珠发酵溶胞产物滤液(由实施例1制备而得)中，加入10.1g丁二醇、0.5g苯氧乙醇和0.1g乙基己基甘油，200rpm搅拌均匀即可。
该皮肤屏障修护组合物含有1.6mg/L的总蛋白，75mg/L的总糖以及0.07μmol/L的游离氨基酸，pH值为6.5。
以下各测试例均以实施例1所提供的酵母菌珍珠发酵溶胞产物滤液为例进行测试。
测试例1
细胞活性测试
将生长于完全KSFM培养基且处于对数生长期的人原代角质细胞，以5000个细胞/孔接种于96孔板，置于37℃，CO2浓度为5％的CO2培养箱孵育至细胞贴壁。培养6天后，进行饥饿处理，然后更换用完全培养基配制的不同浓度活性物(浓度分别为0.1％、0.5％、1％、5％、10％的FPL1)，继续置培养箱孵育24h。待暴露结束后，弃掉上述活性物，加0.5mg/mL的MTT到96孔板置培养箱孵育3h后，加入DMSO，振荡溶解后检测OD560nm，得到吸光值进行统计学分析，其结果如图1所示。其中，NT代表正常对照组。
由图1可以看出：酵母菌珍珠发酵溶胞产物滤液对人原代角质细胞无细胞毒性。
测试例2
FLG的表达
将EpiSkin体外重建表层皮肤模型培养2天后，设置正常对照组，SDS造模对照组及实验组(SDS造模+样品)，其中正常对照组对模型不做处理，SDS造模对照组使用0.3％SDS对模型进行处理，实验组使用0.3％SDS对模型进行处理后加入相关样品，实验组所用的样品包括浓度为1％的FPL1以及浓度为0.1％的FPL1。继续置培养箱孵育48h，培养结束后，将组织固定于OCT固定液中，-80℃保存形成冰冻组织块；之后将冰冻组织块使用冷冻切片机进行组织切片；切好的组织片加入Filaggrin一抗及二抗进行免疫荧光染色，染色后使用Zeiss荧光显微镜在同一曝光及背景条件下对各组进行拍照，并使用软件对照片进行荧光强度计算及分析，其结果如图2所示。
由图2可以看出：DS造模后加入浓度为1％、0.1％的酵母菌珍珠发酵溶胞产物滤液均能够促进对皮肤屏障有重要作用的FLG蛋白的表达，使其含量增加。
测试例3
LOR的表达
将EpiSkin体外重建表层皮肤模型培养2天后，设置正常对照组，SDS造模对照组及实验组(SDS造模+样品)，其中正常对照组对模型不做处理，SDS造模对照组使用0.3％SDS对模型进行处理，实验组使用0.3％SDS对模型进行处理后加入浓度为1％的FPL1样品，继续置培养箱孵育48h，培养结束后，将组织固定于OCT固定液中，-80℃保存形成冰冻组织块；之后将冰冻组织块使用冷冻切片机进行组织切片；切好的组织片加入LOR一抗及二抗进行免疫荧光染色，染色后使用Zeiss荧光显微镜在同一曝光及背景条件下对各组进行拍照，并使用软件对照片进行荧光强度计算及分析，其结果如图3和图4所示。
由图3可以看出：与SDS造模对照组相比，使用浓度为1％的酵母菌珍珠发酵溶胞产物滤液处理后，能够使LOR荧光强度有所增强。
由图4可以看出：使用浓度为1％的酵母菌珍珠发酵溶胞产物滤液处理后，能够促进LOR蛋白含量的表达(约+83％)。
测试例4
Claudin-1的表达
将EpiSkin体外重建表层皮肤模型培养2天后，设置正常对照组，SDS造模对照组及实验组(SDS造模+样品)，其中正常对照组对模型不做处理，SDS造模对照组使用0.3％SDS对模型进行处理，实验组使用0.3％SDS对模型进行处理后加入浓度为1％的FPL1样品，继续置培养箱孵育48h，培养结束后，将组织固定于OCT固定液中，-80℃保存形成冰冻组织块；之后将冰冻组织块使用冷冻切片机进行组织切片；切好的组织片加入Claudin-1一抗及二抗进行免疫荧光染色，染色后使用Zeiss荧光显微镜在同一曝光及背景条件下对各组进行拍照，并使用软件对照片进行荧光强度计算及分析，其结果如图5所示。
由图5可以看出：与SDS造模对照组相比，加入浓度为1％的酵母菌珍珠发酵溶胞产物滤液，能够促进对皮肤屏障有重要作用的Claudin-1蛋白表达的增加。
测试例5
ZO-1的表达
将EpiSkin体外重建表层皮肤模型培养2天后，设置正常对照组，SDS造模对照组及实验组(SDS造模+样品)，其中正常对照组对模型不做处理，SDS造模对照组使用0.3％SDS对模型进行处理，实验组使用0.3％SDS对模型进行处理后加入相关样品，实验组所用的样品包括浓度为1％的FPL1以及浓度为0.1％的FPL1。继续置培养箱孵育48h，培养结束后，将组织固定于OCT固定液中，-80℃保存形成冰冻组织块；之后将冰冻组织块使用冷冻切片机进行组织切片；切好的组织片加入ZO-1一抗及二抗进行免疫荧光染色，染色后使用Zeiss荧光显微镜在同一曝光及背景条件下对各组进行拍照，并使用软件对照片进行荧光强度计算及分析，其结果如图6和图7所示。
由图6可以看出：与SDS造模对照组相比，使用浓度0.1％、1％的酵母菌珍珠发酵溶胞产物滤液处理后，均能够使ZO-1荧光强度有所增强。
由图7可以看出：使用浓度为0.1％、1％的酵母菌珍珠发酵溶胞产物滤液处理后，均能够促进ZO-1蛋白含量的表达。其中浓度为1％的酵母菌珍珠发酵溶胞产物滤液促ZO-1的表达效果更好(约+327％)。
测试例6
炎症因子IL-1α、PEG2的表达
将EpiSkin体外重建表层皮肤模型培养2天后，设置正常对照组，SDS造模对照组及实验组(SDS造模+样品)，其中正常对照组对模型不做处理，SDS造模对照组使用0.3％SDS对模型进行处理，实验组使用0.3％SDS对模型进行处理后加入相关样品，实验组所用的样品包括浓度为1％的FPL1以及浓度为0.1％的FPL1。继续置培养箱孵育24-48h，培养结束后，收取孔板中培养基，离心收集上清，用ELISA试剂盒检测上清液中IL-1α及PGE2含量，其结果如图8和图9所示。
由图8可以看出：酵母菌珍珠发酵溶胞产物滤液可以抑制SDS造模损伤下IL-1α炎症水平，并且在1％浓度下效果最好，抑制率为40.71％。
由图9可以看出：酵母菌珍珠发酵溶胞产物滤液可以抑制SDS造模损伤下PGE2炎症水平，并且在1％浓度下效果最好，抑制率为22.86％。
测试例7
炎症因子IL-6、MCP-1、MMP-1、ICAM-1的表达
复苏人原代成纤维细胞，以一定细胞数量接种于24孔板，置37℃，5％CO2浓度CO2培养箱孵育，待24孔板中细胞铺板率达到50-60％时，进行分组刺激及给药，每孔给药量为1mL，空白对照组每孔加入1mL培养液，阴性对照组每孔加入1mL含TNF-α的培养液(5ng/mL)，阳性对照组每孔加入2mL含有TNF-α(5ng/mL)和地塞米松(0.01％)的培养液，样品组每孔加入1mL含有TNF-α(5ng/mL)和相应浓度待测样品(浓度为1％的FPL1)的培养液。给药完成后将24孔板放置在CO2培养箱(37℃、5％CO2)中继续培养24h。孵育结束后，收取孔板中培养基，离心收集上清，用ELISA试剂盒检测上清液中IL-6、MCP-1、MMP-1、ICAM-1的含量，其结果如图10至图13所示。
由图10至图13可以看出：与NC组相比，浓度为1％的酵母菌珍珠发酵溶胞产物滤液能够显著降低IL-6、MCP-1、MMP-1和ICAM-1的含量。
测试例8
糖基化终产物的表达
将FulKutis全层皮肤模型转移到6孔板上，每孔加入2mL的3D全层皮肤模型培养液进行培养，设置空白对照组(BC)、阴性对照组(NC)、阳性对照组(PC)和样品组。其中BC和NC组不做任何处理，PC组每孔添加0.9mL含有7μg/m LVE的模型培养液。样品组以相应样品(6％FPL1)进行处理。给药结束后，将模型转移至培养皿，NC组、PC和样品组加入2mmol/L甲基乙二醛处理后，进行UVA辐照(15J/cm2)。继续置于CO2培养箱(37℃、5％CO2)中孵育。其中模型刺激、辐照和给药频次均为1次/天，共计4次。清洗模型表面残留受试物后切取模型，冷冻切片；切好的组织片采用荧光抗猝灭剂进行封片，使用荧光显微镜在同一曝光及背景条件下对各组进行拍照，并使用软件对照片进行荧光强度计算及分析，其结果如图14所示。
由图14可以看出：与NC组相比，酵母菌珍珠发酵溶胞产物滤液在6％(v/v)浓度下的羧甲基赖氨酸(AGEs)含量显著下降，抑制率为54.18％。
测试例9
抗氧化
①、ROS：将FulKutis全层皮肤模型转移到6孔板上，每孔加入2mL的3D全层皮肤模型培养液进行培养，设置空白对照组(BC)、阴性对照组(NC)、阳性对照组(PC)和样品组。其中BC和NC组不做任何处理，PC组每孔添加0.9mL含有7μg/mL VE的模型培养液。样品组以相应样品(浓度为6％的FPL1)进行处理。给药结束后，将模型转移至培养皿，NC组、PC和样品组加入2mM甲基乙二醛处理后，进行UVA辐照(15J/cm2)。继续置于CO2培养箱(37℃、5％CO2)中孵育。其中模型刺激、辐照和给药频次均为1次/天，共计4次。清洗模型表面残留受试物后切取模型，冷冻切片；切好的组织片采用荧光抗猝灭剂进行封片，使用荧光显微镜在同一曝光及背景条件下对各组进行拍照，并使用软件对照片进行荧光强度计算及分析，其结果如图15所示。
由图15可以看出：酵母菌珍珠发酵产物溶胞滤液在6％(v/v)浓度下的活性氧(ROS)含量显著下降，抑制率为85.00％，说明酵母菌珍珠发酵产物溶胞滤液能够通过降低活性氧(ROS)含量，达到抗氧化作用。
②、DNPH：将DermiKutis真皮皮肤模型转移到6孔板上，每孔加入2mL的模型培养液。同时将模型随机分为空白对照组(BC)、阴性对照组(NC)、阳性对照组(PC)和样品组。其中BC组和NC组不做任何处理，PC组加入含氨基胍硫酸盐(3mmol/L)的阳性对照工作液，样品组加入含相应浓度的样品(浓度为1％的FPL1)工作液。给药结束后，将模型转移至培养皿，NC组、PC组和样品组加入含甲基乙二醛的皮肤模型培养液，置于CO2培养箱(37℃、5％CO2)中孵育培养。其中甲基乙二醛刺激为连续7天，给药频次为1次/天，共计7次。最后一次给药结束后，模型继续培养24h。培养结束后，用无菌PBS溶液清洗模型表面残留的受试物，滴加BSA室温封闭60min。PBS缓冲液清洗3次，5min/次。滴加DNPH溶液，室温刺激1h，PBS缓冲液清洗3次，5min/次。滴加一抗工作液(1:250)，4℃孵育过夜。PBS缓冲液清洗清洗3次，5min/次。滴加二抗(兔源)工作液(1:80)，室温孵育2h。PBS缓冲液清洗清洗3次，5min/次。用吸水纸擦去PBS溶液，用一滴抗淬灭剂封片。24h内荧光显微镜拍照。应用GraphPadPrism作图，结果表示为Mean±SD。各组间比较采用t-test统计分析。
由图16可以看出：与NC组相比，酵母菌珍珠发酵产物溶胞滤液在浓度为1％的条件下，DNPH含量显著下降。
测试例10
Ⅰ型胶原蛋白表达
复苏人原代成纤维细胞，以一定细胞数量接种于12孔板，置37℃，5％CO2浓度CO2培养箱孵育至细胞贴壁。培养4天后，用完全培养基配制的活性物(浓度分别为0.1％和1％的FPL1)处理细胞(浓度为0.1mg/mL的VC作为阳性对照)，置培养箱孵育24h。待暴露结束后，弃掉上述活性物，用1×PBS清洗，随后用冷丙酮固定细胞15min。将细胞爬片取出，用BSA封闭30min，加COL I抗体孵育过夜，弃一抗，用1×PBS清洗，分别加相应的二抗和DAPI避光孵育，最后加封片剂，使用Zeiss Axio Scope 5荧光显微镜在同一曝光下进行拍照，同时使用ZenPro软件分析COL I蛋白在平均荧光强度(平均光密度)情况，其结果如图17和图18所示。
结合图17和图18可以看出：在相同暴露时间下，与对照相比，使用浓度为0.1％和1％的酵母菌珍珠发酵溶胞产物滤液均能不同程度的促进Ⅰ型胶原蛋白的表达。浓度为1％的酵母菌珍珠发酵溶胞产物滤液能使Ⅰ型胶原蛋白的表达明显升高，增加11％。
测试例11
胶原蛋白XVII表达
将离体皮肤(exvivo)放入培养基进行培养，然后加入样品(浓度为0.1％和1％的FPL1)，继续置培养箱孵育48h，培养结束后，将组织固定于OCT固定液中，-80℃保存形成冰冻组织块；之后将冰冻组织块使用冷冻切片机进行组织切片；切好的组织片加入COL XVII一抗及二抗进行免疫荧光染色，染色后使用Zeiss荧光显微镜在同一曝光及背景条件下对各组进行拍照，并使用软件对照片进行荧光强度计算及分析，其结果如图19和图20所示。
结合图19和图20可以看出：与NT组相比，酵母菌珍珠发酵溶胞产物滤液能够增强COL XVII蛋白的表达(47％)。
测试例12
弹性蛋白
将离体皮肤(exvivo)放入培养基进行培养，然后加入样品(浓度为0.1％和1％的FPL1)，继续置培养箱孵育48h，培养结束后，将组织固定于OCT固定液中，-80℃保存形成冰冻组织块；之后将冰冻组织块使用冷冻切片机进行组织切片；切好的组织片加入弹性蛋白一抗及二抗进行免疫荧光染色，染色后使用Zeiss荧光显微镜在同一曝光及背景条件下对各组进行拍照，并使用软件对照片进行荧光强度计算及分析，其结果如图21所示。
由图21可以看出：与NT组相比，加入浓度为0.1％和1％的酵母菌珍珠发酵溶胞产物滤液均能够使弹性蛋白的表达明显增强。且浓度为0.1％的效果更优，能增加约84.32％。
测试例13
细胞厚度
将EpiSkin体外重建表层皮肤模型按说明书进行培养，培养2天后，设置正常对照组，SDS造模对照组及实验组(SDS造模+样品)，其中正常对照组对模型不做处理，SDS造模对照组使用0.3％ SDS对模型进行处理，实验组使用0.3％ SDS对模型进行处理后加入样品(浓度为1％的FPL1)，继续置培养箱孵育48h，培养结束后，将组织固定于福尔马林溶液中，待固定成功后放入包埋盒覆水；之后用石蜡包埋，待冷却凝固成块后使用石蜡切片机进行组织切片；切好的组织片用苏木精(Hematoxylin，H)和伊红(Eosin，E)染料进行染色，染色后使用Zeiss荧光显微镜对各组进行观察拍照，其结果如图22和图23所示。
结合图22和图23可以看出：SDS造模组对比NT组皮肤模型的表皮明显变薄，角质层被剥脱，且颗粒层无颗粒；FPL在浓度为1％的条件下与SDS造模组相比，表皮厚度明显增厚，颗粒层颗粒增加。说明酵母菌珍珠发酵溶胞产物滤液能促进机体屏障恢复，有较好的修护表皮的作用。
综上所述，本申请首次提出了上述珍珠发酵物的新应用，即将其用于增强表皮厚度。在此基础上，该珍珠发酵物还可结合其所能起到的促进屏障相关蛋白的表达、抑制炎症相关介质的表达、抑制糖基化终产物的表达、促进弹性蛋白和胶原蛋白的表达以及抗氧化的作用，从多靶点共同修护皮肤屏障。
以上仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种珍珠发酵物的应用，其特征在于，所述珍珠发酵物用于增强表皮厚度，所述珍珠发酵物为酵母菌珍珠发酵溶胞产物滤液。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述珍珠发酵物还用于促进屏障相关蛋白的表达。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述珍珠发酵物还用于抑制炎症相关介质的表达。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述珍珠发酵物还用于抑制糖基化终产物的表达。
5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述珍珠发酵物还用于促进弹性蛋白和胶原蛋白的表达。
6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述珍珠发酵物还用于抗氧化。
7.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述珍珠发酵物用于通过增强表皮厚度、促进屏障相关蛋白的表达、抑制炎症相关介质的表达、抑制糖基化终产物的表达、促进弹性蛋白和胶原蛋白的表达以及抗氧化，共同修护皮肤屏障。
8.根据权利要求2或7所述的应用，其特征在于，所述屏障相关蛋白包括FLG、LOR、ZO-1和Claudin-1中的至少一种。
9.根据权利要求3或7所述的应用，其特征在于，所述炎症相关介质包括MCP-1、ICAM-1、PEG2、IL-1α、MMP-1和IL-6中的至少一种。
10.根据权利要求5或7所述的应用，其特征在于，所述胶原蛋白包括Ⅰ型胶原和XVII型胶原蛋白中的至少一种。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202311723699.XA CN117598965A (zh) | 2023-12-14 | 2023-12-14 | 一种珍珠发酵物的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202311723699.XA CN117598965A (zh) | 2023-12-14 | 2023-12-14 | 一种珍珠发酵物的应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN117598965A true CN117598965A (zh) | 2024-02-27 |
Family
ID=89957938
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202311723699.XA Pending CN117598965A (zh) | 2023-12-14 | 2023-12-14 | 一种珍珠发酵物的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN117598965A (zh) |
-
2023
- 2023-12-14 CN CN202311723699.XA patent/CN117598965A/zh active Pending
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