CN117586385B - 抗人4型腺病毒中和抗体及其制备方法和应用 - Google Patents

抗人4型腺病毒中和抗体及其制备方法和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN117586385B
CN117586385B CN202311568702.5A CN202311568702A CN117586385B CN 117586385 B CN117586385 B CN 117586385B CN 202311568702 A CN202311568702 A CN 202311568702A CN 117586385 B CN117586385 B CN 117586385B
Authority
CN
China
Prior art keywords
seq
neutralizing antibody
antibody
cell
human
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202311568702.5A
Other languages
English (en)
Other versions
CN117586385A (zh
Inventor
田新贵
杨玉洁
周志超
周荣
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
First Affiliated Hospital of Guangzhou Medical University
Original Assignee
First Affiliated Hospital of Guangzhou Medical University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by First Affiliated Hospital of Guangzhou Medical University filed Critical First Affiliated Hospital of Guangzhou Medical University
Priority to CN202311568702.5A priority Critical patent/CN117586385B/zh
Publication of CN117586385A publication Critical patent/CN117586385A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN117586385B publication Critical patent/CN117586385B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
    • C07K16/081—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56983—Viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/567—Framework region [FR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2800/00—Nucleic acids vectors
    • C12N2800/10—Plasmid DNA
    • C12N2800/106—Plasmid DNA for vertebrates
    • C12N2800/107—Plasmid DNA for vertebrates for mammalian
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2800/00—Nucleic acids vectors
    • C12N2800/22—Vectors comprising a coding region that has been codon optimised for expression in a respective host
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
    • G01N2333/01—DNA viruses
    • G01N2333/075—Adenoviridae
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2469/00—Immunoassays for the detection of microorganisms
    • G01N2469/10—Detection of antigens from microorganism in sample from host

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)

Abstract

本申请涉及生物技术领域，特别涉及一种抗人4型腺病毒中和抗体及其制备方法和应用。中和抗体，其重链可变区包含如下所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3：HCDR1如SEQ ID NO.3所示，HCDR2如SEQ ID NO.4所示，HCDR3如SEQ ID NO.5所示；以及，其轻链可变区包含如下所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3：LCDR1如SEQ ID NO.6所示，LCDR2如SEQ ID NO.7所示，LCDR3如SEQ ID NO.8所示。本申请为人4型腺病毒感染的防治提供新方案。

Description

抗人4型腺病毒中和抗体及其制备方法和应用
技术领域
本申请涉及生物技术领域，特别涉及一种抗人4型腺病毒中和抗体及其制备方法和应用。
背景技术
人腺病毒(human Adenovirus,HAdV)可以感染多种粘膜组织，如胃肠道、呼吸道、泌尿生殖道及眼角结膜等，导致急性呼吸道感染(ARI)、急性胃肠炎、肾炎、眼角膜结膜炎、膀胱炎等自限性的粘膜感染甚至严重的致死性感染。腺病毒流行广泛、传播快。各个年龄段人群均能被腺病毒感染。HAdV暴发感染多发生封闭或拥挤的场所，大规模流行中其所致的重症肺炎病死率较高，甚至未经治疗的重症HAdV肺炎或弥散性疾病的死亡率可能超过50％。腺病毒引起的肺炎尤为严重，不仅可以引起心力衰竭、呼吸衰竭，还可以引起肺外受累，如脑炎、肝损害、心肌炎或心肌损害等，甚至导致死亡，而且通常预后较差。腺病毒是致病毒性肺炎的主要病原体之一，B组、C组、E组腺病毒都可以引起呼吸道感染，其中E组4型腺病毒是儿童和成人发热性呼吸道疾病的重要病原体，传染性强，常导致爆发流行，引起重症肺炎。对此，目前还没有用于预防和治疗HAdV肺炎特别是E组4型腺病毒所致肺炎的有效疫苗和药物。
发明内容
基于此，本申请一个或者多个实施例提供了一种抗人4型腺病毒中和抗体。
在本申请实施例的第一方面，提供一种抗人4型腺病毒中和抗体，其重链可变区包含如下所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3：
HCDR1如SEQ ID NO.3所示，
HCDR2如SEQ ID NO.4所示，
HCDR3如SEQ ID NO.5所示；
以及，其轻链可变区包含如下所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3：
LCDR1如SEQ ID NO.6所示，
LCDR2如SEQ ID NO.7所示，
LCDR3如SEQ ID NO.8所示。
在本申请实施例的一些实施方式中，其重链骨架区和所述轻链骨架区的序列独立地包含来源于人的抗体骨架区序列以及鼠的抗体骨架区序列其中之一；可选地，所述重链骨架区和所述轻链骨架区的序列全部为来源于人的抗体骨架区序列。
在本申请实施例的一些实施方式中，其重链可变区和轻链可变区分别如SEQ IDNO.1和SEQ ID NO.2所示；或者，其重链可变区如SEQ ID NO.11至SEQ ID NO.15之一所示，其轻链可变区如SEQ ID NO.16至SEQ ID NO.20之一所示。
在本申请实施例的一些实施方式中，其恒定区满足如下条件中的一个或者多个：
(1)其恒定区的序列选自IgG、IgA、IgM、IgE及IgD任何其中之一恒定区的序列；可选地，所述恒定区的序列为IgG的恒定区的序列；以及，
(2)其恒定区的种属来源为牛、马、猪、羊、大鼠、小鼠、豚鼠、狗、猫、兔、骆驼、驴、鹿、貂、鸡、鸭、鹅或者人；可选地，所述恒定区来源于人。
在本申请实施例的第二方面，提供一种核酸，其编码第一方面中所述的中和抗体。
在本申请实施例的第三方面，提供一种重组载体，其含有第二方面中所述的核酸；可选地，所述重组载体选自细菌质粒、噬菌体、酵母质粒、植物细胞病毒或者哺乳动物细胞病毒。
在本申请实施例的第四方面，提供一种宿主细胞，其包含第二方面中所述的核酸或者第三方面中所述的重组载体。
在本申请实施例的一些实施方式中，所述宿主细胞为CHO细胞、COS细胞、NSO细胞、HeLa细胞、BHK细胞或HEK293细胞。
在本申请实施例的第五方面，提供一种抗人4型腺病毒中和抗体的生产方法，其采用第四方面中所述的宿主细胞生产抗人腺病毒中和抗体。
在本申请实施例的第六方面，提供一种药物，其包含第一方面中所述的中和抗体、第二方面中所述的核酸或者第三方面中所述的重组载体。
在本申请实施例的第七方面，提供一种检测试剂盒，其包括第一方面中所述的中和抗体。
本申请的一个或多个实施例细节在下面的描述中提出，本申请的其他特征、目的和优点将从说明书及其权利要求书变得明显。
附图说明
为了更清楚地说明本申请实施例中的技术方案、更完整地理解本申请及其有益效果，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单的介绍。显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本申请的一些实施例，对本领域技术人员来说，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为单克隆抗体A4H的轻链可变区和重链可变区序列分析图；
图2为ELISA检测17株人源化单抗及对照人-鼠嵌合抗体(HWT-LWT)，与抗原(Ad4病毒)的反应；
图3为抗体与Ad4病毒颗粒的结合曲线图；
图4为人源化单抗对Ad4荧光病毒的抑制曲线；
图5为人源化抗体的SDS-PAGE图；
图6为单克隆抗体预防保护STAT1-/-小鼠抗Ad4攻毒实验计划；
图7为STAT1-/-小鼠H3L4抗体腹腔给药后血清中和抗体检测；
图8为H3L4单抗预防保护STAT1-/-小鼠Ad4攻毒后体重和腺病毒基因组DNA载量变化；
图9为H3L4单抗预防保护STAT1-/-小鼠攻毒后肺组织病理特征。
具体实施方式
下面结合附图、实施方式和实施例，对本发明作进一步详细的说明。应理解，这些实施方式和实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，提供这些实施方式和实施例的目的是使对本发明公开内容理解更加透彻全面。还应理解，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施方式和实施例，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下作各种改动或修改，得到的等价形式同样落于本申请的保护范围。此外，在下文的描述中，给出了大量具体的细节以便提供对本发明更为充分地理解，应理解，本发明可以无需一个或多个这些细节而得以实施。
除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述实施方式和实施例的目的，不是旨在于限制本发明。
术语
除非另外说明或存在矛盾之处，本文中使用的术语或短语具有以下含义：
本文所使用的术语“和/或”、“或/和”、“及/或”的选择范围包括两个或两个以上相关所列项目中任一个项目，也包括相关所列项目的任意的和所有的组合，所述任意的和所有的组合包括任意的两个相关所列项目、任意的更多个相关所列项目、或者全部相关所列项目的组合。需要说明的是，当用至少两个选自“和/或”、“或/和”、“及/或”的连词组合连接至少三个项目时，应当理解，在本申请中，该技术方案毫无疑问地包括均用“逻辑与”连接的技术方案，还毫无疑问地包括均用“逻辑或”连接的技术方案。比如，“A及/或B”包括A、B和A+B三种并列方案。又比如，“A，及/或，B，及/或，C，及/或，D”的技术方案，包括A、B、C、D中任一项(也即均用“逻辑或”连接的技术方案)，也包括A、B、C、D的任意的和所有的组合，也即包括A、B、C、D中任两项或任三项的组合，还包括A、B、C、D的四项组合(也即均用“逻辑与”连接的技术方案)。
本发明中涉及“多个”、“多种”、“多次”、“多元”等，如无特别限定，指在数量上大于2或等于2。例如，“一种或多种”表示一种或大于等于两种。
本文中所使用的“其组合”、“其任意组合”、“其任意组合方式”等中包括所列项目中任两个或任两个以上项目的所有合适的组合方式。
本文中，“合适的组合方式”、“合适的方式”、“任意合适的方式”等中所述“合适”，以能够实施本发明的技术方案、解决本发明的技术问题、实现本发明预期的技术效果为准。
本文中，“优选”、“更好”、“更佳”、“为宜”仅为描述效果更好的实施方式或实施例，应当理解，并不构成对本发明保护范围的限制。
本发明中，“进一步”、“更进一步”、“特别”等用于描述目的，表示内容上的差异，但并不应理解为对本发明保护范围的限制。
本发明中，“可选地”、“可选的”、“可选”，指可有可无，也即指选自“有”或“无”两种并列方案中的任一种。如果一个技术方案中出现多处“可选”，如无特别说明，且无矛盾之处或相互制约关系，则每项“可选”各自独立。
本发明中，“第一方面”、“第二方面”、“第三方面”、“第四方面”等中，术语“第一”、“第二”、“第三”、“第四”等仅用于描述目的，不能理解为指示或暗示相对重要性或数量，也不能理解为隐含指明所指示的技术特征的重要性或数量。而且“第一”、“第二”、“第三”、“第四”等仅起到非穷举式的列举描述目的，应当理解并不构成对数量的封闭式限定。
本发明中，以开放式描述的技术特征中，包括所列举特征组成的封闭式技术方案，也包括包含所列举特征的开放式技术方案。
本发明中，涉及到数值区间(也即数值范围)，如无特别说明，可选的数值分布在上述数值区间内视为连续，且包括该数值范围的两个数值端点(即最小值及最大值)，以及这两个数值端点之间的每一个数值。如无特别说明，当数值区间仅仅指向该数值区间内的整数时，包括该数值范围的两个端点整数，以及两个端点之间的每一个整数，在本文中，相当于直接列举了每一个整数，比如t为选自1～10的整数，表示t为选自由1、2、3、4、5、6、7、8、9和10构成的整数组的任一个整数。此外，当提供多个范围描述特征或特性时，可以合并这些范围。换言之，除非另有指明，否则本文中所公开之范围应理解为包括其中所归入的任何及所有的子范围。
本发明中的温度参数，如无特别限定，既允许为恒温处理，也允许在一定温度区间内存在变动。应当理解的是，所述的恒温处理允许温度在仪器控制的精度范围内进行波动。允许在如±5℃、±4℃、±3℃、±2℃、±1℃的范围内波动。
本发明中，％(w/w)与wt％均表示重量百分比，％(v/v)指体积百分比，％(w/v)指质量体积百分数。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。除非和本申请的发明目的和/或技术方案相冲突，否则，本发明涉及的引用文献以全部内容、全部目的被引用。本发明中涉及引用文献时，相关技术特征、术语、名词、短语等在引用文献中的定义也一并被引用。本发明中涉及引用文献时，被引用的相关技术特征的举例、优选方式也可作为参考纳入本申请中，但以能够实施本发明为限。应当理解，当引用内容与本申请中的描述相冲突时，以本申请为准或者适应性地根据本申请的描述进行修正。
抗病毒单克隆中和抗体具有高特异性，在病毒的预防和治疗方面发挥着重要的作用，抗腺病毒中和抗体为HAdV感染防治带来了希望。但鼠源抗体进入人体后，会引起机体免疫系统的免疫排斥反应，产生人抗鼠抗体(human anti-mouse antibody，HAMA)反应，使鼠源抗体被加速清除，甚至引起过敏性反应。对高活性鼠源单抗进行人源化改造是解决HAMA反应的重要方法，本研究提供了一种高中和活性的人源化抗HAdV-E4单克隆抗体。
在本申请实施例的第一方面，提供一种抗人4型腺病毒中和抗体，其重链可变区包含如下所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3：
HCDR1如SEQ ID NO.3所示，
HCDR2如SEQ ID NO.4所示，
HCDR3如SEQ ID NO.5所示；
以及，其轻链可变区包含如下所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3：
LCDR1如SEQ ID NO.6所示，
LCDR2如SEQ ID NO.7所示，
LCDR3如SEQ ID NO.8所示。
在本申请实施例的一些实施方式中，其重链骨架区和所述轻链骨架区的序列独立地包含来源于人的抗体骨架区序列以及鼠的抗体骨架区序列其中之一；可选地，所述重链骨架区和所述轻链骨架区的序列全部为来源于人的抗体骨架区序列。
在本申请实施例的一些实施方式中，其重链可变区和轻链可变区分别如SEQ IDNO.1和SEQ ID NO.2所示；或者，其重链可变区如SEQ ID NO.11至SEQ ID NO.15之一所示，其轻链可变区如SEQ ID NO.16至SEQ ID NO.20之一所示。
在本申请实施例的一些实施方式中，其恒定区满足如下条件中的一个或者多个：
(1)其恒定区的序列选自IgG、IgA、IgM、IgE及IgD任何其中之一恒定区的序列；可选地，所述恒定区的序列为IgG的恒定区的序列；以及，
(2)其恒定区的种属来源为牛、马、猪、羊、大鼠、小鼠、豚鼠、狗、猫、兔、骆驼、驴、鹿、貂、鸡、鸭、鹅或者人；可选地，所述恒定区来源于人。
在本申请实施例的第二方面，提供一种核酸，其编码第一方面中所述的中和抗体。
在本申请实施例的第三方面，提供一种重组载体，其含有第二方面中所述的核酸；可选地，所述重组载体选自细菌质粒、噬菌体、酵母质粒、植物细胞病毒或者哺乳动物细胞病毒。
在本申请实施例的第四方面，提供一种宿主细胞，其包含第二方面中所述的核酸或者第三方面中所述的重组载体。
在本申请实施例的一些实施方式中，所述宿主细胞为CHO细胞、COS细胞、NSO细胞、HeLa细胞、BHK细胞或HEK293细胞。
在本申请实施例的第五方面，提供一种抗人4型腺病毒中和抗体的生产方法，其采用第四方面中所述的宿主细胞生产抗人腺病毒中和抗体。
在本申请实施例的第六方面，提供一种药物，其包含第一方面中所述的中和抗体、第二方面中所述的核酸或者第三方面中所述的重组载体。
在本申请实施例的第七方面，提供一种检测试剂盒，其包括第一方面中所述的中和抗体。
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，优先参考本发明中给出的指引，还可以按照本领域的实验手册或常规条件，还可以按照制造厂商所建议的条件，或者参考本领域已知的实验方法。
下述的具体实施例中，涉及原料组分的量度参数，如无特别说明，可能存在称量精度范围内的细微偏差。涉及温度和时间参数，允许仪器测试精度或操作精度导致的可接受的偏差。
实施例1、鼠源单抗重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因扩增测序
纯化人4型腺病毒(HAdV-E4)GZ01株(序列见GenBank：KF006344.1)(Tian X,ChenY,Li H,et al.Characterization of a replication-competent vector encodingDsRed based on a human adenovirus type 4a-like strain.Virus research.2019；270:197662.)，加等体积弗氏完全佐剂乳化后，按每只小鼠10μg抗原的剂量免疫BALB/c小鼠(BALB/c小鼠购自广东省医学实验动物中心)，采用杂交瘤技术筛选制备分泌鼠源抗HAdV-E4单克隆中和抗体的杂交瘤细胞(A4H)，液氮冷冻保存细胞。
提取杂交瘤细胞株A4H的mRNA，采用5’RACE反转录cDNA，PCR获得抗体重链/轻链可变区基因(如SEQ ID NO.21和SEQ ID NO.22所示)，重链及轻链可变区(V)和铰链区(J)基因克隆测序，IMGT/V-QUEST生物信息学分析测序结果，剔除非功能抗体基因，确定可能的CDR区序列。生物信息学分析结果显示，单克隆抗体A4H的轻链为κ型，重链为IgG型。分别将轻链的基因序列、氨基酸序列、重链的基因序列及氨基酸序列在抗体数据库中比对，对比结果如图1所示。
单克隆抗体A4H序列信息：
重链VH(A4H-H-WT)(SEQ ID NO.1)：
MNFGLSLIFLALILKGVQCEVQLVESGGDLVKPGGSLKLSCAASGLTFSSYGMSWVRQTPDKRLEWVATISSSSIYTYYPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLKSEDTAMYYCARHYYYGGGSHYYAMDNWGQGTSVTVSS。
轻链VL(KAPPA)(A4H-L-WT)(SEQ ID NO.2)：
MMSSAQFLGLLLLCFQGTRCDIQMTQPTSSLSASLGDRVTISCRASQDISNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSELHSGVPSRFSGSGSGTAYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFGGGTKLEIK。
HCDR1(SEQ ID NO.3)：GLTFSSYG。
HCDR2(SEQ ID NO.4)：ISSSSIYT。
HCDR3(SEQ ID NO.5)：ARHYYYGGGSHYYAMDN。
LCDR1(SEQ ID NO.6)：QDISNY。
LCDR2(SEQ ID NO.7)：YTS。
LCDR3(SEQ ID NO.8)：QQGNTLPWT。
轻链(SEQ ID NO.21)：
ATGATGTCCTCTGCTCAGTTCCTTGGTCTCCTGTTGCTCTGTTTTCAAGGTACCAGATGTGATATCCAG
ATGACACAGCCTACATCCTCCCTGTCTGCCTCTCTGGGAGACAGAGTCACCATCAGTTGCAGGGCAA
GTCAGGACATTAGCAATTATTTAAACTGGTATCAGCAGAAACCAGATGGAACTGTTAAACTCCTGATCT
ACTACACATCAGAATTACACTCAGGAGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGAACAGCTTAT
TCTCTCACCATTAGCAACCTGGAACAAGAGGATATTGCCACTTACTTTTGCCAACAGGGTAATACGCTT
CCGTGGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAAGCGGGCTGATGCTGCACCAACTGTATCCAGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGT。
重链(SEQ ID NO.22)：
ATGAACTTCGGGCTCAGCTTGATTTTCCTTGCCCTCATTTTAAAAGGTGTCCAGTGTGAGGTGCAGCT
GGTGGAGTCTGGGGGAGACTTAGTGAAGCCTGGAGGGTCCCTGAAACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGA
TTAACTTTCAGTAGCTATGGCATGTCTTGGGTTCGCCAGACTCCAGACAAGAGGCTGGAGTGGGTCGC
AACCATTAGTAGTAGTAGTATTTACACCTACTATCCAGACAGTGTGAAGGGGCGATTCACCATCTCCAG
AGACAATGCCAAGAACACCCTGTACCTGCAAATGAGCAGTCTGAAGTCTGAGGACACAGCCATGTAT
TACTGTGCAAGACATTATTACTACGGTGGTGGCTCACATTACTATGCTATGGACAACTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCCTC。
图1单克隆抗体A4H的轻链可变区和重链可变区序列分析图；上图为轻链可变区，下图为重链可变区分析图。
单克隆抗体A4H轻链V区基因及等位基因与Musmus IGKV10-96*01F相似性最高，达97.85％(273/279nt)；J区基因Musmus IGKJ1*01F相似性最高，达97.37％(37/38nt)，无氨基酸差异。4个FR区(FR-IMGT)分别为[26.17.36.10]个氨基酸，3个CDR区(FR-IMGT)分别为[6.3.9]个氨基酸，AA JUNCTION序列为CQQGNTLPWTF(SEQ ID NO.9)。重链V区基因及等位基因与Musmus IGHV5-6*01F相似度最高，达98.61％(284/288nt)，有4个氨基酸差异；J区基因与Musmus IGHJ4*01F相似度最高，达98.08％
(51/52nt)，1个氨基酸差异；D区为第三阅读框(Musmus IGHD1-1*01F)。4个FR区(FR-IMGT)分别有[25.17.38.10]个氨基酸，3个CDR区(FR-IMGT)分别有[8.8.17]个氨基酸，AA JUNCTION序列为CARHYYYGGGSHYYAMDNW(SEQ ID NO.10)。
(3)鼠源抗体VH基因片段连接到pAb20-hCHIgG1载体(AscI酶切位点)上，转化DH5α感受态细菌，涂布Amp抗性LB琼脂板，过夜培养。挑单菌落接种于Amp抗性LB培养基中摇培过夜，用Plasmid Mini Kit(Omega)提取质粒，并进行基因测序，确定VH嵌合表达载体。回收的鼠源抗体VL基因片段连接到pAb20-hCK载体上，同样方法制备质粒，进行基因测序，确定VL嵌合表达载体。
实施例2、人-鼠嵌合抗体的表达及中和活性分析
使用Endo-Free Plasmid Mini Kit(Omega)分别提取人-鼠嵌合抗体轻、重链表达质粒后，用转染试剂共转染HEK293F细胞，7天后收集细胞培养上清，用带荧光蛋白重组腺病毒rAd4-EGFP检测嵌合抗体抗HAdV-E4中和活性。
使用Endo-Free Plasmid Maxi Kit(Omega)分别提取人-鼠嵌合抗体轻、重链表达质粒后，用转染试剂共转染HEK293F细胞，隔天补料，7天后收集细胞培养上清，用Protein G纯化介质分离纯化，用50kDa超滤管浓缩，测定嵌合抗体浓度。
检测嵌合抗体(HWT-LWT)抗HAdV-E4中和活性IC50为15.6ng/mL。
实施例3、鼠单抗的人源化改造及表达
采用CDR移植方法进行人源化。搜索抗体基因数据库，采用最适匹配原则选择人源胚系基因框架区(FR)模板；分析可变区序列，包括确定各个CDR区和FR区、分析规范残基、VH和VL的接触面残基、特殊FR区残基、可变区空间结构的模建；将CDR插入到模板人胚系基因FR框架上，确定FR区鼠、人序列之间不同的氨基酸残基，根据可变区序列分析结果，确定重要残基，对不重要的鼠源氨基酸直接人源化替换，重要残基的鼠源、人源副本同时作为候选。按照CHO细胞密码子合成人源化抗体VH和VL基因，将人源化抗体VH基因片段连接到pAb20-hCHIgG1载体，构建人源化抗体重链可变区基因表达载体，将人源化抗体κ轻链VL基因连接到pAb20-hCK载体表达载体上，构建人源化抗体轻链可变区基因表达载体。使用Endo-Free Plasmid Maxi Kit(Omega)分别提取人源化抗体轻、重链表达质粒后，用转染试剂共转染HEK293F细胞，隔天补料，7天后收集细胞培养上清，用Protein G纯化介质分离纯化，用50kDa超滤管浓缩，测定人源化抗体浓度，抗体浓度0.5-1.2mg/mL。
表1
实施例4、人源化抗体的体外抗病毒活性检测
一、对纯化的人源化抗体进行ELISA检测
包被抗原丙内酯灭活的Ad4病毒5μg/mL，抗体起始浓度0.1mg/mL，10倍梯度稀释，稀释8个梯度。结果见图2。图2为ELISA检测17株人源化单抗及对照人-鼠嵌合抗体(HWTLWT)，与抗原(Ad4病毒)的反应。根据图2可知H2序列单抗效价较低，而H1、H3、H4序列单抗效价均较高(0.1-1μg/mL)。
选取HWTLWT、H2L1、H3L3、H3L4、H4L4、H5L5进一步进行Gator亲和力检测(表2及图3)。H2L1相对嵌合体单抗HWTLWT亲和力下降明显，H3L4和H5L5相对嵌合体单抗HWTLWT亲和力相当，而H3L3和H4L4未给出具体KD值。
表2、人源化抗体的Gator亲和力检测
抗体 FullR2 Koff(1/s) Kon(1/Ms) KD
HWTLWT 0.923 4.73E-004 1.91E+005 2.48E-009
H3L4 0.995 1.21E-004 3.03E+004 4.00E-009
H2L1 0.922 1.06E-002 3.92E+004 2.71E-007
H3L3 0.992 NA 1.77E+004 NA
H4L4 0.995 NA 2.16E+004 NA
H5L5 0.989 1.42E-004 2.60E+004 5.44E-009
图3为抗体与Ad4病毒颗粒的结合曲线图；抗体浓度，CH1：500nM，CH2：166.67nM，CH3：55.56nM，CH4：18.52nM。
二、细胞微量中和实验检测人源化抗体抗HAdV-E4中和活性
步骤如下：抗体稀释到0.4mg/mL后，在96孔板上梯度稀释待测抗体，以1:100作为起始浓度，4倍梯度稀释人源化抗HAdV-A4单克隆中和抗体至1:102400，共设6个稀释度，每个稀释度等体积加入的带绿色荧光蛋白的重组人4型腺病毒(200TCID50/0.1mL)，混匀，室温孵育1h，病毒-抗体混合液100μL加入单层培养的293T细胞中，设3个复孔，设病毒对照和细胞对照，在37℃含5％ CO2培养箱内培养2-3天，观察CPE及荧光，计数荧光细胞数。
计算抗体抑制率＝(PBS对照病毒孔荧光细胞数-待测抗体病毒孔荧光细胞数)/PBS对照病毒孔荧光细胞数*100％。结果见图4。
根据抗体抑制率曲线计算抗体半数抑制浓度(IC50)(表3)，其中H3L4的IC50最低，为2.0ng/mL，相较嵌合抗体HWTLWT(IC50＝15.6ng/mL)中和效价有提高。而H1L2、H3L2未检测到中和作用。
表3、人源化抗体的IC50
抗体 IC50(ng/mL)
H1L1 2618.2
H1L2 \
H1L3 5382.7
H1L4 82.0
H2L1 14.8
H2L2 314.8
H2L3 203.2
H2L4 24.5
H3L1 57942.9
H3L2 \
H3L3 17.3
H3L4 2.0
H4L1 59.4
H4L2 408.3
H4L3 416.9
H4L4 5.6
HWTLWT 15.6
H5L5 3.4
表中，“\”表示未检测到中和作用。
选取IC50最低、亲和力较强的一株H3L4人源化抗体进行了大量表达，并进行电泳检测纯化的蛋白(图5)。图5为人源化抗体的SDS-PAGE图。
实施例5、人源化抗体的动物体内抗病毒活性检测
将STAT1-/-基因缺陷C57小鼠(购自赛业(苏州)生物科技有限公司)分为3组，设未给药对照组和未攻毒对照组(表4)，H3L4抗体给药组在滴鼻攻毒前一天腹腔注射50μg/只人源化单抗H3L4(图6)。另设一组野生C57小鼠攻毒对照组。在抗体注射后1天(Day 0)和4天(Day 3)分别进行尾静脉采血，细胞微量中和实验检测血清抗Ad4中和效价，结果表明中和效价均大于128，而未注射抗体组小鼠均未检测到中和抗体(图7)。
各组小鼠在滴鼻攻毒Ad4或滴鼻PBS处理后，体重均处于缓慢上升的趋势，可见腺病毒感染对其生理代谢无明显影响。攻毒后第3天，通过检测小鼠肺组织中腺病毒滴度时发现，STAT1-/-小鼠对照组(group1)肺组织病毒载量明显高于野生C57小鼠对照组(group 4)。而STAT1-/-小鼠H3L4抗体预防组(group 2)，有3只小鼠肺部检测不到病毒基因组(图8)。结果表明，腹腔给予人源化单抗H3L4可有效保护STAT1-/-小鼠降低肺部病毒载量。STAT1-/-小鼠，攻毒后第3天肺部可见炎症细胞浸润以及肺泡壁增厚的中度间质性肺炎症状；而预防给药H3L4后攻毒组(group 2)在攻毒后也仅出现轻微炎症细胞浸润，与攻毒对照组(group 1)比较炎症病理显著减轻，表明H3L4在腺病毒暴露前预防性给药可以为STAT1-/-小鼠提供部分保护作用；未攻毒对照组STAT1-/-小鼠(group 3)肺组织未出现炎症细胞浸润，没有明显的肺损伤(图9)。
表4、STAT1-/-基因缺陷C57小鼠体内抗体预防保护实验分组
分组 小鼠 动物数 Day-1 Day 0
Group 1 C57-STAT1-/- 6 PBS Ad4
Group 2 C57-STAT1-/- 6 H3L4 Ad4
Group 3 C57-STAT1-/- 3 H3L4 PBS
Group 4 C57-wt 6 PBS Ad4
上述实施例中，本申请的发明人前期获得了一株分泌高效价抗Ad4中和抗体的杂交瘤细胞，通过扩增重链可变区基因和轻链可变区基因片段，克隆到抗体表达质粒上，制备了人-鼠嵌合抗体，再通过人源化改造，克隆到抗体表达质量上，转染真核细胞进行表达和纯化，获得了人源化单抗，经亲和力检测、细胞微量中和实验分析，获得具有高亲和力、高中和活性的人源化单抗。鼠源抗体的人源化改造提高了抗体的中和活性和与抗原的亲和力，并且将原本的鼠源成分绝大部分被替换成人源成分，从而降低甚至避免HAMA反应的发生，因此，本发明的人源化抗HAdV-E4单克隆中和抗体具有更强的中和活性、在使用上更加安全。
以上所述实施方式和实施例的各技术特征可以进行任意合适方式的组合，为使描述简洁，未对上述实施方式和实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为在本说明书记载的范围中。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，便于具体和详细地理解本发明的技术方案，但并不能因此而理解为对发明专利保护范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，得到的等价形式同样落于本申请的保护范围。还应当理解，本领域技术人员在本发明提供的技术方案的基础上，通过合乎逻辑的分析、推理或者有限的试验得到的技术方案，均在本发明所附权利要求的保护范围内。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求的内容为准，说明书及附图可以用于解释权利要求的内容。

Claims (15)

1.一种抗人4型腺病毒中和抗体，其重链可变区包含如下所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3：
HCDR1如SEQ ID NO.3所示，
HCDR2如SEQ ID NO.4所示，
HCDR3如SEQ ID NO.5所示；
以及，其轻链可变区包含如下所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3：
LCDR1如SEQ ID NO.6所示，
LCDR2如SEQ ID NO.7所示，
LCDR3如SEQ ID NO.8所示。
2.根据权利要求1所述的抗人4型腺病毒中和抗体，其重链骨架区和所述轻链骨架区的序列独立地包含来源于人的抗体骨架区序列以及鼠的抗体骨架区序列其中之一。
3.根据权利要求2所述的抗人4型腺病毒中和抗体，其中，所述重链骨架区和所述轻链骨架区的序列全部为来源于人的抗体骨架区序列。
4.根据权利要求2所述的抗人4型腺病毒中和抗体，其重链可变区和轻链可变区分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示；或者，其重链可变区如SEQ ID NO.11至SEQ ID NO.15之一所示，其轻链可变区如SEQ ID NO.16至SEQ ID NO.20之一所示。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的抗人4型腺病毒中和抗体，其恒定区满足如下条件中的一个或者多个：
(1)其恒定区的序列选自IgG、IgA、IgM、IgE及IgD任何其中之一恒定区的序列；以及，
(2)其恒定区的种属来源为牛、马、猪、羊、大鼠、小鼠、豚鼠、狗、猫、兔、骆驼、驴、鹿、貂、鸡、鸭、鹅或者人。
6.根据权利要求5所述的抗人4型腺病毒中和抗体，其中，所述恒定区的序列为IgG的恒定区的序列。
7.根据权利要求5所述的抗人4型腺病毒中和抗体，其中，所述恒定区来源于人。
8.一种核酸，其编码权利要求1至7任一项所述的中和抗体。
9.一种重组载体，其含有权利要求8所述的核酸。
10.根据权利要求9所述的重组载体，其中，所述重组载体选自细菌质粒、噬菌体、酵母质粒、植物细胞病毒或者哺乳动物细胞病毒。
11.一种宿主细胞，其包含权利要求8所述的核酸、权利要求9或者10所述的重组载体。
12.根据权利要求11所述的宿主细胞，其中，所述宿主细胞为CHO细胞、COS细胞、NSO细胞、HeLa细胞、BHK细胞或HEK293细胞。
13.一种抗人4型腺病毒中和抗体的生产方法，其采用权利要求11或者12所述的宿主细胞生产抗人腺病毒中和抗体。
14.一种药物，其包含权利要求1至7任一项所述的中和抗体、权利要求8所述的核酸、权利要求9或者10所述的重组载体。
15.一种检测试剂盒，其包括权利要求1至7任一项所述的中和抗体。
CN202311568702.5A 2023-11-23 2023-11-23 抗人4型腺病毒中和抗体及其制备方法和应用 Active CN117586385B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202311568702.5A CN117586385B (zh) 2023-11-23 2023-11-23 抗人4型腺病毒中和抗体及其制备方法和应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202311568702.5A CN117586385B (zh) 2023-11-23 2023-11-23 抗人4型腺病毒中和抗体及其制备方法和应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN117586385A CN117586385A (zh) 2024-02-23
CN117586385B true CN117586385B (zh) 2024-05-17

Family

ID=89914619

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202311568702.5A Active CN117586385B (zh) 2023-11-23 2023-11-23 抗人4型腺病毒中和抗体及其制备方法和应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN117586385B (zh)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108697796A (zh) * 2016-01-21 2018-10-23 智利天主教教皇大学 对于ADV感染的检测和诊断有用的由细胞杂交瘤产生和分泌的对人腺病毒（ADV）的pIII抗原具有特异性的单克隆抗体
CN116023474A (zh) * 2023-02-03 2023-04-28 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 抗腺病毒的单克隆抗体或其抗原结合片段及其核酸分子与应用

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108697796A (zh) * 2016-01-21 2018-10-23 智利天主教教皇大学 对于ADV感染的检测和诊断有用的由细胞杂交瘤产生和分泌的对人腺病毒（ADV）的pIII抗原具有特异性的单克隆抗体
CN116023474A (zh) * 2023-02-03 2023-04-28 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 抗腺病毒的单克隆抗体或其抗原结合片段及其核酸分子与应用

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Identification of a Critical and Conformational Neutralizing Epitope in Human Adenovirus Type 4 Hexon;TIAN, X.G.等;JOURNAL OF VIROLOGY;20180131;第92卷(第2期);e01643-17 *
Replication of adenovirus type 4 DNA by a purified fraction from infected cells;TEMPERLEY, S.M.等;NUCLEIC ACIDS RESEARCH;19910630;第19卷(第12期);3243-3249 *
WHITE,K.D.等.AAB42151.1：immunoglobulin light chain precursor, partial [Mus musculus].NCBI GenBank.1997,1-2. *

Also Published As

Publication number Publication date
CN117586385A (zh) 2024-02-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN111690058A (zh) 针对冠状病毒的具有中和活性的抗体及其用途
US10030069B2 (en) High affinity human antibodies to human cytomegalovirus (CMV) gB protein
US20230073067A1 (en) Humanized monoclonal antibody for 2019 novel coronavirus and use thereof
CN114989267A (zh) 经修饰的病毒颗粒和其用途
Hamilton et al. A humanized antibody against human cytomegalovirus (CMV) gpUL75 (gH) for prophylaxis or treatment of CMV infections
CN117586385B (zh) 抗人4型腺病毒中和抗体及其制备方法和应用
Balcioğlu et al. SARS-CoV-2 neutralizing antibody development strategies
JP5791047B2 (ja) コイヘルペスウイルス特異的抗体及びその抗原
CN116041494B (zh) 一种针对SARS-CoV或SARS-CoV-2的单克隆抗体、其制备方法及应用
López-Bueno et al. Enhanced cytoplasmic sequestration of the nuclear export receptor CRM1 by NS2 mutations developed in the host regulates parvovirus fitness
CN107880117A (zh) 识别人乙型肝炎病毒x蛋白的单克隆抗体及用途
WO2023159187A2 (en) Anti-sars-cov2 spike (s) antibodies and uses thereof
CN117186213B (zh) 抗人腺病毒中和抗体及其制备方法和应用
CN118085065B (zh) 人博卡病毒HBoV1非结构蛋白NP1单链抗体制备及应用
CN115960218B (zh) 一种抗新型冠状病毒的抗体及其用途
CN118027183B (zh) 一种抗SARS-like冠状病毒及新型冠状病毒突变株的中和抗体及其应用
CN116574178A (zh) 尼帕病毒的中和性人源单克隆抗体及应用
CN116621975A (zh) 针对尼帕病毒g蛋白的人源单克隆抗体及应用
JP5996437B2 (ja) 抗原特異的モノクローナル抗体産生ハイブリドーマの作製方法及び抗原特異的モノクローナル抗体の製造方法
CN113651882A (zh) 人源化抗HAdV-B3单克隆中和抗体、制备方法及其应用
CN117603348A (zh) 抗新型冠状病毒s蛋白的全人源化抗体及其应用
CN118652327A (zh) 一种中和犬细小病毒的全犬源单克隆抗体及其应用
WO2023108936A1 (zh) 一种可结合SARS-CoV-2病毒的中和抗体及其应用
CN118063600A (zh) 一种抗HIV-1gp120的抗体或其抗原结合片段及其应用
CN118085065A (zh) 人博卡病毒HBoV1非结构蛋白NP1单链抗体制备及应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant