CN117534717A - 5′-(e)-乙烯基磷酸酯的合成方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种5′‑(E)‑乙烯基磷酸酯的合成方法。该合成方法包括以下步骤：使用moffatt氧化后连投Wittig反应，纯化后产物脱TBS保护，再投最后一步亚磷酰胺反应，制备得到产物。应用本发明的技术方案，使用moffatt氧化（二环己基碳二亚胺和二甲亚砜氧化）后连投Wittig反应（省略了后处理过程，避免了加水后醛的水合以及产品醛的浓缩），两步连投得到Wittig反应产物。因为Wittig反应产物稳定性好，可以使用柱层析方法可以70%收率得到95%纯度以上的目标化合物。相较于现有方法，整个过程经济，环保，适合于放大生产。
Description
技术领域
本发明涉及化学合成技术领域，具体而言，涉及一种5′-(E)-乙烯基磷酸酯的合成方法。
背景技术
RNA干扰是一种对双链RNA的生物学反应，介导对内源性寄生和外源性致病核酸的抗性，并调节蛋白质编码基因的表达。近年来，RNA干扰取得了一系列进展，基于RNAi的治疗方法已经进入临床研究。然而，RNAi疗法最大的影响因素是如何将siRNA传送到目标细胞以及siRNA在人体内的分解。
对siRNA的修饰来改善其传递和稳定性成为目前研究的热点。报道使用5’-乙烯基磷酸盐修饰siRNA能有效提高其稳定性。但是将乙烯基磷酸盐引入5’位羟基的合成方法却不多。
目前常见的5’-乙烯基亚磷酰胺单体合成路线如下（文献：J. Med. Chem. 2018,61, 3, 734–744. Facile Synthesis, Geometry, and 2’-Substituent-Dependent inVivo Activity of 5’-(E)- and 5’-(Z)-Vinylphosphonate-Modified siRNAConjugates）：
目前该路线主要问题为化合物3的稳定性，该醛类化合物不稳定，后处理过程中遇水容易形成水合物，对后续反应有影响。且浓缩破坏反应发现该化合物浓缩过程中不稳定，容易变质导致放大收率明显降低。
发明内容
本发明旨在提供一种5′-(E)-乙烯基磷酸酯的合成方法，以解决现有技术中5′-(E)-乙烯基磷酸酯制备收率较低的技术问题。
为了实现上述目的，根据本发明的一个方面，提供了一种5′-(E)-乙烯基磷酸酯的合成方法。该合成方法包括以下步骤：使用moffatt氧化到后连投Wittig反应，纯化后得到，脱TBS保护后得到，再投最后一步亚磷酰胺反应，制备得到，其中，B=A、T、G或C核酸碱基。
进一步地，使用moffatt氧化到的反应式为：
。
进一步地，使用moffatt氧化到包括：
第一反应釜中加入DMSO和搅拌至全溶，降温至10~20℃，加入吡啶和三氟乙酸，随后加入二环己基碳二亚胺，保温反应；
第二反应釜中加入四氢呋喃和，搅拌至全溶后降温至-20~-10℃，加入碱，保温反应；
将第一反应釜中物料滴加到第二反应釜中，保温反应；
向第二反应釜中加入氯化铵水溶液淬灭反应；
采用MTBE对第二反应釜中的物料进行萃取，得到有机相。
进一步地，合成方法还包括对有机相进行纯化的步骤；
优选的，采用柱层析纯化有机相。
进一步地，第一反应釜中的DMSO加入量为的体积的5~15倍，优选8~10倍，15~25℃搅拌至全溶；
优选的，吡啶的加入量为0.8~1.5当量，优选1当量，三氟乙酸的加入量为吡啶当量的一半；
优选的，加入吡啶和三氟乙酸，搅拌0.5~1h后，加入二环己基碳二亚胺；更优选的，二环己基碳二亚胺的加入量为1.5~2.0当量，进一步优选为1.6当量；
优选的，加入二环己基碳二亚胺后，第一反应釜的反应温度保持在0~25℃；更优选的，HPLC跟踪至原料≤5%。
进一步地，第二反应釜中四氢呋喃的加入量为8~15V，优选10V，的加入量为1当量；
优选的，第二反应釜中的反应温度为-20~0℃℃；
优选的，第二反应釜中加入的碱为氢化钠、叔丁醇钾或叔丁醇钠中的一种或多种，优选为氢化钠；
更优选的，氢化钠的加入量为1.3 eq. 60%氢化钠；更优选的，加入氢化钠后保温反应的时间为0.5~1h；
优选的，将第一反应釜中物料滴加到第二反应釜中保温反应后取样跟踪HPLC，每1~4h取样一次直至HPLC跟踪至原料≤5%。
进一步地，第二反应釜中氯化铵水溶液的加入量为8~25V V，优选20 V，淬灭后搅拌0.5~1h；
优选的，采用MTBE对第二反应釜中的物料进行萃取包括：控温0~25℃，向第二反应釜中加入5~20 V，优选10V MTBE, 搅拌1~2h后静置分层后分液，水相再次使用5~20 V，优选10 V MTBE萃取，将得到的有机相合并后，使用5~10 V，优选5V饱和氯化钠水溶液反洗有机相；
优选的，有机相合并后，浓缩至1~2V，柱层析纯化有机相；更优选的，柱层析的流动相为庚烷/IPAc，体积比10/1~1/1。
进一步地，脱保护基反应的反应式为：
。
进一步地，脱保护基反应包括：
向第三反应釜中加入甲酸、纯化水和有机相，将体系升温至45~55℃进行反应；
采用DCM对第三反应釜中的物料进行萃取，得到有机相。进一步地，第三反应釜中保持温度15~30℃，将5~15 V，优选12.5 V甲酸和5~15 V，优选12.5 V纯化水混匀，加入包含1当量的有机相；将体系升温至45~55℃，优选升温速度为5~15℃/h；其中，甲酸和纯化水的体积比为1:1，甲酸和纯化水的体积之和为15~30V；
保温45~55℃跟踪反应，HPLC跟踪至≤2%且异构体≤1%；
将第三反应釜中体系温度降温至0~10℃，优选降温速度10~30℃/h；
控温0~10℃，向第三反应釜中加入氨水调pH~7；
控温0~20℃，加入5~15 V，优选10V DCM萃取，静置分液后再次使用5~15 V，优选10V DCM萃取后静置分液；
将有机相合并后控温T≤45℃，浓缩至1~2V；
柱层析过柱纯化得到。
可选的， 中的TBS基团替换为TBDPS保护基。
应用本发明的技术方案，使用moffatt氧化（二环己基碳二亚胺和二甲亚砜氧化）到后连投Wittig反应（省略了后处理过程，避免了加水后醛的水合以及产品醛的浓缩），两步连投得到Wittig反应产物。因为Wittig反应产物稳定性好，可以使用柱层析方法可以70%收率得到95%纯度以上的目标化合物。相较于现有方法（使用Dess-Martin试剂或者其他Moffatt氧化方法），整个过程经济，环保，适合于放大生产。
附图说明
构成本申请的一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。在附图中：
图1示出了实施例1中化合物4的色谱检测图；
图2示出了实施例2中化合物5的色谱检测图；以及
图3示出了实施例3中终产物的色谱检测图。
具体实施方式
需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。下面将参考附图并结合实施例来详细说明本发明。
针对背景技术中提到的5’-乙烯基亚磷酰胺单体合成技术路线存在的问题，本申请对5’-乙烯基亚磷酰胺单体的合成方法进行了优化，为研究5’-乙烯基-siRNA的合成提供原料单体的优化合成方案。即在本发明中没有具体描述的步骤，可以参考背景技术中Facile Synthesis, Geometry, and 2’-Substituent-Dependent in Vivo Activity of5’-(E)- and 5’-(Z)-Vinylphosphonate-Modified siRNA Conjugates的技术方案完成。
根据本发明一种典型的实施方式，提供5′-(E)-乙烯基磷酸酯的合成方法。该方法包括以下步骤：使用moffatt氧化到后连投Wittig反应，纯化后得到，脱TBS保护后得到，再投最后一步亚磷酰胺反应，制备得到，其中，B=A、T、G或C核酸碱基。
应用本发明的技术方案，使用moffatt氧化（二环己基碳二亚胺和二甲亚砜氧化）到后连投Wittig反应（省略了后处理过程，避免了加水后醛的水合以及产品醛的浓缩），两步连投得到Wittig反应产物。因为Wittig反应产物稳定性好，可以使用柱层析方法可以70%收率得到95%纯度以上的目标化合物。相较于现有方法（使用Dess-Martin试剂或者其他Moffat氧化方法），整个过程经济，环保，适合于放大生产。
典型的，使用moffatt氧化到的反应式为：
。
在本发明一实施例中，使用moffatt氧化到包括：第一反应釜中加入DMSO和搅拌至全溶，降温至10~20℃，加入吡啶和三氟乙酸，随后加入二环己基碳二亚胺，保温反应；第二反应釜中加入四氢呋喃和，搅拌至全溶后降温至-20~-10℃，加入碱，保温反应；将第一反应釜中物料滴加到第二反应釜中，保温反应；向第二反应釜中加入氯化铵水溶液淬灭反应；采用MTBE对第二反应釜中的物料进行萃取，得到有机相。第二反应釜中需要磷试剂和碱先反应生成中间态，然后将第一反应釜中物料加入，因为反应是放热反应，所以优选降温滴加；并且温度对于反应杂质控制也有影响，因此，优选温度低于-10℃反应。
合成方法还包括对有机相进行纯化的步骤；
优选的，采用柱层析纯化有机相。
为了保证反应充分有效的进行，第一反应釜中的DMSO加入量为的体积的5~15倍，优选8~10倍，15~25℃搅拌至全溶；优选的，吡啶的加入量为0.8~1.5当量，优选1当量，三氟乙酸的加入量为吡啶当量的一半；优选的，加入吡啶和三氟乙酸，搅拌0.5~1h后，加入二环己基碳二亚胺；更优选的，二环己基碳二亚胺的加入量为1.5~2.0当量，进一步优选为1.6当量；优选的，加入二环己基碳二亚胺后，第一反应釜的反应温度保持在0~25℃；更优选的，HPLC跟踪至原料≤5%。
为了充分的利用反应原料，保证反应效率，第二反应釜中四氢呋喃的加入量为8~15V，优选10V，的加入量为1当量；优选的，第二反应釜中的反应温度为-20~-10℃；优选的，第二反应釜中加入的碱为氢化钠、叔丁醇钾或叔丁醇钠中的一种或多种，优选为氢化钠；更优选的，氢化钠的加入量为1.5 eq. 60%氢化钠；更优选的，加入氢化钠后保温反应的时间为0.5~1h；优选的，将第一反应釜中物料滴加到第二反应釜中保温反应后取样跟踪HPLC，每1~4h取样一次直至HPLC跟踪至原料≤5%。
第二反应釜中氯化铵水溶液的加入量为8~25V，优选10V，淬灭后搅拌0.5~1h；优选的，采用IPAc或者MTBE（甲基叔丁基醚，优选甲基叔丁基醚）对第二反应釜中的物料进行萃取包括：控温0~25℃，向第二反应釜中加入5~20 V，优选10V IPAc或者MTBE（甲基叔丁基醚，优选甲基叔丁基醚）, 搅拌1~2h后静置分层后分液，水相再次使用5~20 V，优选10 V IPAc或者MTBE（甲基叔丁基醚，优选甲基叔丁基醚）萃取，将得到的有机相合并后，使用5~10 V饱和氯化钠水溶液反洗有机相；优选的，有机相合并后，浓缩至1~2V，柱层析纯化有机相；更优选的，柱层析的流动相为庚烷/IPAc，体积比10/1~1/1。
脱保护基反应的反应式为：
。
脱保护基反应包括：
向第三反应釜中加入甲酸、纯化水和有机相，将体系升温至45~55℃进行反应；
采用DCM对第三反应釜中的物料进行萃取，得到有机相。
第三反应釜中保持温度15~30℃，将5~15 V，优选12.5 V甲酸和5~15 V，优选12.5V纯化水混匀，加入包含1当量的有机相；将体系升温至45~55℃，优选升温速度为5~15℃/h；其中，甲酸和纯化水的体积比为1:1，甲酸和纯化水的体积之和为15~30V；
保温45~55℃跟踪反应，HPLC跟踪至≤2%且异构体≤1%；
将第三反应釜中体系温度降温至0~10℃，优选降温速度10~30℃/h；控温0~10℃，向第三反应釜中加入氨水调pH~7；控温0~20℃，加入5~15 V，优选DCM萃取，静置分液后再次使用5~15 V，优选DCM萃取后静置分液；将有机相合并后控温T≤45℃，浓缩至1~2V；柱层析过柱纯化得到，从而确保反应整体的高效的进行。
在本发明一种典型的实施方式中，中的TBS基团可以替换为TBDPS保护基，也是可以实现本发明的技术方案。
下面将结合实施例进一步说明本发明的有益效果。
本发明中化合物编号见背景技术中的描述。
实施例1
车间投料1Kg/80L反应化合物2到化合物4，反应IPC正常，2步连投收率~70%，产品（化合物4）过柱纯度~90%（产品：异构体~8：1）。
具体步骤：
1. 反应釜1中加入10 L DMSO(10 V)和原料2，15~25℃搅拌至全溶。
2. 降温至10~20℃。
3. 10~20℃加入158.44 g吡啶（1当量）和114.18 g三氟乙酸（0.5当量），搅拌0.5~1h后10~20℃缓慢加入661.27 g二环己基碳二亚胺（DCC）（1.5当量）。
4. 保温15~25℃反应，HPLC跟踪至原料≤5%area。
5. 反应釜2中加入10 L四氢呋喃（10 V）和1393.82 g原料7（1当量），搅拌至全溶后反应釜2降温至-20~-10℃。
6. -20~-10℃反应釜2中加入120 g氢化钠（60%）（1.5当量），保温-20~-10℃反应0.5~1h。
7. 控温0~10℃，将反应釜1中物料通过管路缓慢滴加到反应釜2中，保温反应2h后取样跟踪HPLC，每1~4h取样一次直至原料3HPLC≤5%area。
8. 控温0~10℃，向反应釜2中加入20 V氯化铵水溶液淬灭反应。淬灭后搅拌0.5~1h。
9. 控温0~25℃，向反应釜2中加入10 V MTBE, 搅拌1~2h后静置分层后分液。水相再次使用10 V MTBE萃取。将有机相合并后，使用5 V盐水反洗有机相。
10. 有机相合并后，浓缩至1~2V。柱层析纯化（庚烷/IPAc=10/1~1/1）得到产品有机相。有机相浓缩得到1221.32 g淡黄色油状产品HPLC纯度为92.11%，内标含量为83%，直接用于下一步反应（Wittig反应反式产物：顺式异构体~15：1）。
化合物4的核磁检测结果：1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 9.21 (s, 1H),8.80 (s, 1H), 8.63 – 8.57 (m, 1H), 8.15 (s, 1H), 8.07 – 8.00 (m, 2H), 7.56 –7.48 (m, 2H), 7.07 – 6.91 (m, 1H), 6.13 (dd, J = 5.5, 3.9 Hz, 1H), 5.74 –5.63 (m, 6H), 5.52 (d, J = 10.8 Hz, 2H), 4.63 (tq, J = 5.3, 2.4 Hz, 2H), 3.76– 3.70 (m, 10H), 3.43 (s, 3H), 3.21 (s, 4H), 2.60 (s, 8H), 1.88 – 1.80 (m,4H), 1.29 – 1.14 (m, 57H), 1.00 – 0.91 (m, 10H), 0.16 (d, J = 2.5 Hz, 6H)。
化合物4的色谱检测图见图1。
实施例2
根据专利方法，车间投料1Kg/80L，将~90%HPLC纯度化合物4投水解反应至化合物5，反应IPC跟踪至原料反应HPLC≤5%area，产品过柱后收率~60%，产品（化合物5）95%HPLC纯度。
1.15~30℃，反应釜1中将12.5 L甲酸（12.5 V）和12.5 L纯化水（12.5 V）混匀，加入1 Kg原料。
2.将体系升温至45~55℃，参考升温速度5~15℃/h。
3.保温45~55℃跟踪反应，跟踪至原料4≤2%area且原料4异构体≤1%area。
4.将体系温度降温至0~10℃，参考降温速度10~30℃/h。
5.控温0~10℃，向反应釜1中加入氨水调pH~7。
6.控温0~20℃，加入10V MTBE萃取产品。静置分液后再次使用10V MTBE萃取后静置分液。
7.将有机相合并后控温T≤45℃，浓缩至1~2V。
8.柱层析过柱纯化（庚烷/IPAc=10/1~1/1）得到纯品溶液，浓缩后得到606.70 g产品，HPLC纯度为99.04%，内表含量为84.85%，用于下一步。
化合物5的核磁检测结果：1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 9.25 (s, 1H),8.76 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 8.01 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.58 (t, J = 7.4 Hz,1H), 7.49 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.02 (ddd, J = 23.0, 17.5, 4.4 Hz, 1H), 6.16(d, J = 3.4 Hz, 1H), 5.65 (dd, J = 13.1, 8.1 Hz, 4H), 5.26 (d, J = 1.8 Hz,2H), 4.59 (s, 1H), 4.52 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 4.42 (s, 1H), 3.51 (s, 3H), 1.18(dd, J = 5.6, 1.9 Hz, 19H)。
化合物5的色谱检测图见图2。
实施例3
车间投料0.5 Kg/80L反应化合物5到化合物6，反应IPC跟踪至原料反应HPLC≤1%area，经过反向制备后得到产品纯度为100%，纯化后收率为80%。
1.在反应釜中加入2.50 L二氯甲烷（5 V），再加入327.98 g磷试剂（1.5当量）和68.54 g 4，5-二氰基咪唑（0.8当量），15~25℃搅拌至溶解。
2.使用2.50 L二氯甲烷（5 V）溶解原料，加入反应釜中。
3.保温15~25℃反应1~3 h，直至原料检测≤1%area。
4.控温15~25℃，使用5 L饱和氯化钠水溶液（10 V）搅洗两次，分液。
5.使用分子筛进行干燥有机相，直至KF≤1%。
6.将有机相控温T≤45℃，浓缩至1~2V。
7.进行反向制备，产品体系冻干即得到516.13 g白色固体产品，HPLC纯度为100%，内标含量为97%。
终产物的核磁膦谱检测结果：31P NMR (162 MHz, Chloroform-d) δ 151.22,150.42, 17.26, 16.98。
终产物的核磁检测结果：1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 9.37 (s, 1H),8.77 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 8.14 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 8.05 – 7.98 (m, 2H), 7.61– 7.52 (m, 1H), 7.52 – 7.43 (m, 2H), 7.04 (dddd, J = 38.7, 23.6, 17.1, 4.3Hz, 1H), 6.21 – 6.08 (m, 2H), 5.72 – 5.59 (m, 4H), 4.79 (dddd, J = 19.9,14.2, 5.4, 3.7 Hz, 2H), 4.70 – 4.52 (m, 2H), 3.66 (ddd, J = 8.9, 5.7, 1.6 Hz,2H), 3.45 (d, J = 5.9 Hz, 3H), 2.77 – 2.58 (m, 3H), 1.27 – 1.12 (m, 31H)。
终产物的色谱检测图见图3。
上述检测结果表明本发明成功的合成了各中间产物及终产物。
从以上的描述中，可以看出，本发明上述的实施例实现了如下技术效果：
应用本发明的技术方案，使用moffatt氧化（二环己基碳二亚胺和二甲亚砜氧化）到后连投Wittig反应（省略了后处理过程，避免了加水后醛的水合以及产品醛的浓缩），两步连投得到Wittig反应产物。因为Wittig反应产物稳定性好，可以使用柱层析方法可以70%收率得到95%纯度以上的目标化合物。相较于现有方法（使用Dess-Martin试剂或者其他Moffatt氧化方法），整个过程经济，环保，适合于放大生产。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (16)
1.一种5′-(E)-乙烯基磷酸酯的合成方法，其特征在于，包括以下步骤：使用moffatt氧化到后连投Wittig反应，纯化后得到，脱TBS保护后得到，再投最后一步亚磷酰胺反应，制备得到，其中，B=A、T、G或C核酸碱基。
2.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，所述使用moffatt氧化到的反应式为：
。
3.根据权利要求2所述的合成方法，其特征在于，所述使用moffatt氧化到包括：
第一反应釜中加入DMSO和搅拌至全溶，降温至10~20℃，加入吡啶和三氟乙酸，随后加入二环己基碳二亚胺，保温反应；
第二反应釜中加入四氢呋喃和，搅拌至全溶后降温至-20~-10℃，加入碱，保温反应；
将所述第一反应釜中物料滴加到所述第二反应釜中，保温反应；
向所述第二反应釜中加入氯化铵水溶液淬灭反应；
采用MTBE对所述第二反应釜中的物料进行萃取，得到有机相。
4.根据权利要求3所述的合成方法，其特征在于，所述合成方法还包括对所述有机相进行纯化的步骤。
5.根据权利要求4所述的合成方法，其特征在于，采用柱层析纯化所述有机相。
6.根据权利要求3所述的合成方法，其特征在于，所述第一反应釜中的DMSO加入量为的体积的5~15倍，15~25℃搅拌至全溶；和/或
所述吡啶的加入量为0.8~1.5当量，三氟乙酸的加入量为吡啶当量的一半；和/或
加入所述吡啶和所述三氟乙酸，搅拌0.5~1h后，加入所述二环己基碳二亚胺；所述二环己基碳二亚胺的加入量为1.5~2.0当量；和/或
加入所述二环己基碳二亚胺后，所述第一反应釜的反应温度保持在0~25℃； HPLC跟踪至原料≤5%。
7.根据权利要求6所述的合成方法，其特征在于，所述第一反应釜中的DMSO加入量为的体积的8~10倍；和/或
所述吡啶的加入量为1当量；和/或
所述二环己基碳二亚胺的加入量为1.6当量。
8.根据权利要求3所述的合成方法，其特征在于，所述第二反应釜中四氢呋喃的加入量为8~15V，的加入量为1当量；和/或
所述第二反应釜中的反应温度为-20~-10℃；和/或
所述第二反应釜中加入的碱为氢化钠、叔丁醇钾或叔丁醇钠中的一种或多种；和/或
氢化钠的加入量为1.5 eq. 60%氢化钠；加入氢化钠后保温反应的时间为0.5~1 h；和/或
将所述第一反应釜中物料滴加到所述第二反应釜中保温反应后取样跟踪HPLC，每1~4h取样一次直至HPLC跟踪至原料≤5%。
9.根据权利要求8所述的合成方法，其特征在于，所述第二反应釜中四氢呋喃的加入量为10V；和/或
所述第二反应釜中加入的碱为氢化钠。
10.根据权利要求3所述的合成方法，其特征在于，所述第二反应釜中氯化铵水溶液的加入量为8~25V，淬灭后搅拌0.5~1h；和/或
所述采用MTBE对所述第二反应釜中的物料进行萃取包括：控温0~25℃，向所述第二反应釜中加入5~20 V MTBE, 搅拌1~2h后静置分层后分液，水相再次使用5~20 V MTBE萃取，将得到的有机相合并后，使用5~10 V饱和氯化钠水溶液反洗所述有机相；和/或
所述有机相合并后，浓缩至1~2V，柱层析纯化所述有机相；所述柱层析的流动相为庚烷/IPAc，体积比10/1~1/1。
11.根据权利要求10所述的合成方法，其特征在于，所述第二反应釜中氯化铵水溶液的加入量为20 V；和/或
向所述第二反应釜中加入10 V MTBE, 搅拌1~2h后静置分层后分液，水相再次使用10V MTBE萃取，将得到的有机相合并后，使用5V饱和氯化钠水溶液反洗所述有机相。
12.根据权利要求3所述的合成方法，其特征在于，所述脱TBS保护的反应式为：
。
13.根据权利要求12所述的合成方法，其特征在于，所述TBS脱保护的反应式包括：
向第三反应釜中加入甲酸、纯化水和所述有机相，将体系升温至45~55℃进行反应；
采用DCM对所述第三反应釜中的物料进行萃取，得到有机相。
14.根据权利要求13所述的合成方法，其特征在于，所述第三反应釜中保持温度15~30℃，将5~15 V甲酸和5~15 V纯化水混匀，加入包含1当量的所述有机相；将体系升温至45~55℃，升温速度为5~15℃/h；其中，所述甲酸和所述纯化水的体积比为1:1，所述甲酸和所述纯化水的体积之和为15~30V；保温45~55℃跟踪反应，HPLC跟踪至≤2%且异构体≤1%；
将所述第三反应釜中体系温度降温至0~10℃，降温速度10~30℃/h；
控温0~10℃，向所述第三反应釜中加入氨水调pH~7；
控温0~20℃，加入5~15 V DCM萃取，静置分液后再次使用5~15 V DCM萃取后静置分液；
将有机相合并后控温T≤45℃，浓缩至1~2V；
柱层析过柱纯化得到。
15.根据权利要求14所述的合成方法，其特征在于，所述第三反应釜中保持温度15~30℃，将12.5 V甲酸和12.5 V纯化水混匀，加入包含1当量的所述有机相；和/或
向所述第三反应釜中加入氨水后，加入10 V DCM萃取，静置分液后再次使用10 V DCM萃取后静置分液。
16.根据权利要求1至15中任一项所述的合成方法，其特征在于，所述中的TBS基团替换为TBDPS保护基。
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