CN117510592A - 一种生物活性肽及其在制备皮肤创伤修复化妆品的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种生物活性肽及其在制备皮肤创伤修复化妆品的应用，所述生物活性肽的氨基酸序列为ELGDCSRALKIYFPVTWNCYGMAHR。本发明通过实验发现一种生物活性肽在制备用于治疗慢性荨麻疹药物的用途，该生物活性肽可以刺激胶原蛋白的合成，有助于增加细胞增殖，加速受损组织的修复和再生，能够促进皮肤伤口的愈合。
Description
技术领域
本发明涉及化妆品技术领域，具体是涉及一种生物活性肽及其在制备皮肤创伤修复化妆品的应用。
背景技术
皮肤是人体最大的器官之一，其完整性对于保持生理功能和抵御外部环境的侵害至关重要。然而，由于各种原因导致的皮肤创伤是一种常见而严重的健康问题，对患者的生活质量和身体健康造成了不可忽视的影响。皮肤创伤是指皮肤或皮下组织遭受物理损伤、刺激或外部因素造成的损害或损伤。这种损伤可以包括切割、撕裂、擦伤、烧伤、瘀伤、刺伤、溃疡等不同类型。不同类型的皮肤创伤会导致不同程度的损害，从轻微的擦伤到严重的烧伤或深创伤。创伤后，皮肤通常会通过自身的修复机制来尽可能迅速地恢复。
因此，寻找有效的方法促进皮肤创伤的修复和愈合一直是临床医学和生物医学研究的重要课题之一。
发明内容
本发明目的是克服现有技术的不足，提供一种生物活性肽在制备用于治疗慢性荨麻疹药物中的用途。为实现上述目的，本发明提供了以下技术方案：
第一方面，本发明提供了一种生物活性肽，所述生物活性肽的氨基酸序列为ELGDCSRALKIYFPVTWNCYGMAHR。。
第二方面，本发明提供了一种生物活性肽在制备皮肤创伤修复化妆品中的用途，其中生物活性肽的氨基酸序列为ELGDCSRALKIYFPVTWNCYGMAHR。
第三方面，本发明还提供了一种化妆品，包括上述生物活性肽。
其中，所述化妆品为面霜、乳液、或面膜。
第四方面，本发明还提供了一种生物活性肽在制备用于修复皮肤创伤药物中的用途，其中生物活性肽的氨基酸序列为ELGDCSRALKIYFPVTWNCYGMAHR。
其中，上述药物包括：治疗上有效剂量的所述生物活性肽以及药学上可接受的辅料。
本发明与现有技术不同之处在于本发明取得了如下技术效果：
本发明通过实验发现一种生物活性肽在制备用于治疗慢性荨麻疹药物的用途，该生物活性肽可以刺激胶原蛋白的合成，有助于增加细胞增殖，加速受损组织的修复和再生，能够促进皮肤伤口的愈合。
附图说明
图1是本发明治疗组与对照组两组伤口愈合率对比图；
图2是本发明治疗组与对照组两组HGF、VEGF、TGF-β1转录水平对比图；
图3是本发明治疗组与对照组两组创口微血管密度对比图。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用材料、试剂等，如无特别说明，均可从商业途径获得。
一、实验材料
本申请的生物活性肽(氨基酸序列为ELGDCSRALKIYFPVTWNCYGMAHR)由申请人采用固相合成法合成，序列:Glu-Leu-Gly-Asp-Cys-Ser-Arg-Ala-Lys-Ile-Tyr-His-Phe-Pro-Thr-Val-Gln-Trp-Asn-Cys-Gly-Met-His-Asn-Arg，生物活性肽的分子式为C120H179N37O36S2，分子量为2900Da，质谱检测到分子离子峰[M+H]+的质荷比为2901.5m/z，HPLC纯度＞99％。
申请人采用固相合成法如下：
步骤1:使用Rink Amide MBHA树脂等固相载体，将第一个氨基酸(Glu)连接到载体上，将载体上的活性位点用Fmoc保护；
步骤2:使用20％piperidine/DMF(二甲基甲酰胺)溶液进行Fmoc去保护，得到N-端自由的氨基酸，然后，使用DIC/HOBt(1-羟基苯并三唑酮)活化剂体系进行氨基酸的活化；
步骤3:将活化的氨基酸溶解在DMF中，加入DIPEA(N,N-二异丙基乙胺)作为碱催化剂，与固相载体上的氨基酸耦合，生成氨基酸链；
步骤4:重复步骤2和步骤3，依次加入剩余的氨基酸，每次加入后使用20％piperidine/DMF溶液进行Fmoc去保护，然后进行洗脱，去除未反应的氨基酸；
步骤5:使用5％acetic anhydride/DMF溶液进行硬化，保护未反应的活性位点，以避免产生不纯物；
步骤6:将最后一个氨基酸(Arg)进行Fmoc去保护和活化，然后与固相载体上的氨基酸耦合；
步骤7:将合成的多肽固定在载体上，进行洗脱步骤，去除剩余的保护基团和未反应的氨基酸；
步骤8:使用逆流层析、高效液相色谱等方法进行多肽的纯化，然后使用质谱等技术进行结构表征。
需要说明的是，根据不同情况，本申请的生物活性肽也可以采用其他常规固相合成法合成。
选择体质量240-260g的雄性SD大鼠40只，体温、呼吸、脉搏均无异常。
二、实验方法
1.1分组
造模成功后随机分为两组，一组接受本申请的生物活性肽治疗为治疗组(20只)，另一组作为模型对照组即对照组(20只)。
1.2动物造模
于标准动物实验室环境适应性伺养一周后开始实验，即将40只大鼠用自制打孔器在大鼠第二腰椎背部皮肤左右两侧做两个直径为10mm的圆形皮肤缺损创，然后采用随机数字表法将所有大鼠随机分为两组。
1.3.给药方法
两组均于每天固定时间进行两次伤口给药。治疗组接受本申请的生物活性肽治疗，具体如下：将480毫克的生物活性肽溶解在200微升的DMSO中，搅拌均匀，以获得均匀稳定的溶液，取出20微升的溶液，与16克的白色凡士林加热至融化混合，然后冷却成为蓝色、半透明、粘稠的膏状物，最终每克软膏含有3毫克的生物活性肽，将调配好的软膏涂抹在伤口上，使膏剂覆盖创口。对照组用含DMSO的凡士林软膏涂抹在伤口上。
1.4测定指标
分别在造模成功当天和第3、7、14、21天进行拍照、取样。使用ImageJ软件来测量创伤部位的面积，计算愈合速率，公式为(拍照时创面面积)/创面面积X 100％。通过qRT-PCR技术来检测HGF、VEGF和TGF-β1的转录水平，即将样品处理后，放入反应体系中并进行振荡混匀，随后离心。然后，将处理后的样品置于荧光定量PCR仪中进行检测，设置以下循环步骤的温度和时间：94-95℃，1-2分钟，进行起始模板变性1次；94-95℃，10-20秒，进行循环中的模板变性；50-60℃，10-30秒，进行退火；68℃，延伸10-60秒，共进行35-45个循环；反应完成后记录循环Ct值。使用免疫组织化学方法来检测无CD34标记的血管，即根据脱蜡、脱水、抗体孵育、染色、透明等工序的流程，制备石蜡切片，然后在显微镜下观察这些切片，并从每组切片中随机选择至少3个200倍视野进行拍照，随后计算这3个视野下的血管数量平均值，作为MVD值(每个高倍视野内的血管数，通常以个数/每个高倍视野)。
1.5数据分析
本次研究图表采用GraphPad Prism 8处理。数据采用SPSS21.0进行整理和分析。计量资料则采用表示，组间比较行t检验；计数资料采用[n(％)]表示，组间比较行X2检验；用P＜0.05表示差异有统计学意义。
2.实验结果
2.1皮肤创伤修复的生物活性
通过实验观察，在第3、7、14、21天治疗组促进皮肤伤口的愈合效果都明显好于对照组，因此，本申请的生物活性肽能够促进皮肤伤口的愈合。它可以刺激胶原蛋白的合成，加速受损组织的修复和再生。此外，本申请的生物活性肽还有助于增加细胞增殖，从而有助于伤口尽快恢复。
这些特性使其在皮肤健康和创伤愈合领域备受关注，可被广泛用于皮肤护理产品和医疗治疗中。
2.2愈合速率
第7、14天时治疗组大鼠的创伤愈合率高于对照组(P<0.05)。见图1。
其中，图1：*表示组间对比差异具有统计学意义(P<0.05)。
2.3相关生长因子转录水平
治疗组大鼠在第3天时HGF、VEGF转录水平高于对照组，在第7天时TGF-β1转录水平高于对照组(P<0.05)。见图2。
其中，图2：*表示组间对比差异具有统计学意义(P<0.05)。
2.4创口微血管密度
治疗组大鼠在第3、7天时微血管密度(MVD)高于对照组，第14天低于对照组，但差异均不显著(P>0.05)。见图3。
3.结论
治疗组大鼠的创伤愈合率高于对照组。治疗组大鼠在第3、7、14天时HGF、VEGF转录水平高于对照组，在第7、14天时TGF-β1转录水平高于对照组。治疗组大鼠在第3、7天时微血管密度(MVD)高于对照组。
本申请的生物活性肽具有显著的生物活性，有助于促进皮肤创伤的愈合。本申请的生物活性肽治疗组中，创伤愈合率显著高于对照组，证明了本申请的生物活性肽在创伤愈合中的积极作用。
需要说明的是，本发明通过使用CD34抗体进行免疫组织化学标记，将褐色的环形或条状结构识别为新生成的血管，并进行了计数和比较。研究发现，在第3和第7天时，实验组大鼠中VEGF的mRNA和蛋白表达量均高于对照组，这与微血管密度的变化趋势一致。实验结果提示生物活性肽促进了创口毛细血管的生成。然而，在第14天时，实验组的微血管密度小于对照组。这是因为实验组的伤口愈合速度较快，早期进入了肉芽组织填充创口的阶段，此时毛细血管停止再生。而对照组的伤口愈合速度较慢，仍在快速生成新血管的阶段。因此，微血管密度的差异与愈合阶段的不同有关。
以上所述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案作出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。
Claims (6)
1.一种生物活性肽，其特征在于：所述生物活性肽的氨基酸序列为ELGDCSRALKIYFPVTWNCYGMAHR。
2.一种生物活性肽在制备皮肤创伤修复化妆品中的用途，其中生物活性肽的氨基酸序列为ELGDCSRALKIYFPVTWNCYGMAHR。
3.一种化妆品，其特征在于，包括如权利要求1中所述生物活性肽。
4.如权利要求3所述的化妆品，其特征在于，所述化妆品为面霜、乳液、或面膜。
5.一种生物活性肽在制备用于修复皮肤创伤药物中的用途，其中生物活性肽的氨基酸序列为ELGDCSRALKIYFPVTWNCYGMAHR。
6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于，所述的药物包括：治疗上有效剂量的所述生物活性肽以及药学上可接受的辅料。
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