CN117503743A

CN117503743A - 一种nlrp3炎症小体抑制剂及其在制备预防或治疗细胞焦亡的药物中的应用

Info

Publication number: CN117503743A
Application number: CN202311676448.0A
Authority: CN
Inventors: 徐运; 纪森林; 陈佩佩
Original assignee: Nanjing Drum Tower Hospital
Current assignee: Nanjing Drum Tower Hospital
Priority date: 2023-12-08
Filing date: 2023-12-08
Publication date: 2024-02-06
Anticipated expiration: 2043-12-08
Also published as: CN117503743B

Abstract

本发明公开了一种NLRP3炎症小体抑制剂及其在制备预防或治疗细胞焦亡的药物中的应用，属于医药技术领域，NLRP3炎症小体抑制剂是洛莫司汀或洛莫司汀药学上可接受的盐。洛莫司汀对ATP/Nig/MSU等刺激剂诱导的细胞NLRP3炎症小体激活有显著的抑制作用，在小鼠、人巨噬细胞系以及小鼠原代巨噬细胞中均能降低细胞乳酸脱氢酶和炎症因子IL‑1β分泌。同时可以预防及治疗EAE小鼠疾病进展，降低MOG免疫后的EAE小鼠临床评分；提高sepsis模型小鼠的存活率；改善MSU诱导的腹膜炎以及痛风关节炎小鼠炎症进程。洛莫司汀通过影响细胞焦亡和炎症因子的释放，缓解NLRP3炎症小体相关疾病症状。

Description

一种NLRP3炎症小体抑制剂及其在制备预防或治疗细胞焦亡的药物中的应用

技术领域

本发明属于医药技术领域，涉及一种药物，尤其涉及一种NLRP3炎症小体抑制剂及其在制备预防或治疗细胞焦亡的药物中的应用。

背景技术

细胞焦亡是一种特殊形式的细胞死亡，与其他常见的细胞死亡方式(如凋亡和坏死)不同。它被认为是一种高度调节和可逆的细胞死亡过程，具有重要的生理和病理生理学意义。在细胞焦亡的过程中，细胞会通过多种信号通路受到损伤或刺激，导致细胞内的一系列变化，包括细胞器失衡、线粒体功能异常、氧化应激等。这些变化最终导致细胞内发生特定的分子事件，如释放细胞内含物(例如DNA、蛋白酶等)和形成焦亡小体(necrosome)。最终，这些事件导致细胞膜破裂，引发炎性反应和自噬过程，最终导致细胞的死亡。NLRP3(NOD-like receptor protein 3)炎症小体是一种细胞内的多蛋白复合物，它在调控炎症反应和免疫应答中发挥重要作用。它由NLRP3感受器、ASC适配器蛋白和半乳糖苷酶(Caspase-1的前体形式)组成。NLRP3炎症小体的激活是一种炎症反应的重要机制。当细胞受到损伤、感染或其他刺激时，激活的NLRP3感受器将促使ASC聚集并招募半乳糖苷酶进入炎症小体。随后，激活的半乳糖苷酶开始切割并活化Caspase-1，从而引发一系列炎症反应。激活后的Caspase-1会引发促炎性细胞因子的产生，如IL-1β(白细胞介素-1β)和IL-18(白细胞介素-18)。这些细胞因子在炎症和免疫应答中起着重要作用，并参与多种疾病的发展过程，包括风湿性关节炎、糖尿病、心血管疾病等。

洛莫司汀是一种化疗药物，主要用于治疗恶性脑肿瘤，如胶质母细胞瘤和脑转移瘤等。洛莫司汀可以在短时间内达到较高浓度，可以透过血脑屏障，并且可以在体内持续释放，具有较强的治疗效果。洛莫司汀已经被广泛应用于临床，并在临床治疗中证明了它的良好药效，但洛莫司汀是否会抑制NLRP3炎症小体从而抑制细胞焦亡的机制尚不明确，目前该药物正在不断地研发完善中。

发明内容

本发明提供一种NLRP3炎症小体抑制剂及其在制备预防或治疗细胞焦亡的药物中的应用，以克服现有技术的缺陷。

为实现上述目的，本发明提供一种NLRP3炎症小体抑制剂，具有这样的特征：所述NLRP3炎症小体抑制剂是洛莫司汀或洛莫司汀药学上可接受的盐。洛莫司汀的结构式为：

进一步，本发明提供一种NLRP3炎症小体抑制剂，还可以具有这样的特征：其中，所述洛莫司汀药学上可接受的盐为洛莫司汀与生物素形成的盐。

本发明还提供上述NLRP3炎症小体抑制剂在制备预防或治疗细胞焦亡的药物中的应用，具有这样的特征：所述细胞焦亡为NLRP3炎症小体诱导的细胞焦亡。

进一步，本发明提供一种NLRP3炎症小体抑制剂在制备预防或治疗细胞焦亡的药物中的应用，还可以具有这样的特征：其中，所述NLRP3炎症小体抑制剂在制备预防或治疗细胞焦亡相关疾病的药物中的应用。细胞焦亡相关疾病指的是细胞焦亡引起的或参与发展的疾病。

进一步，本发明提供一种NLRP3炎症小体抑制剂在制备预防或治疗细胞焦亡的药物中的应用，还可以具有这样的特征：其中，所述细胞焦亡相关疾病包括感染性炎症性疾病和自身免疫性疾病。

进一步，本发明提供一种NLRP3炎症小体抑制剂在制备预防或治疗细胞焦亡的药物中的应用，还可以具有这样的特征：其中，所述感染性炎症性疾病包括脓毒症、腹膜炎、痛风性关节炎。

进一步，本发明提供一种NLRP3炎症小体抑制剂在制备预防或治疗细胞焦亡的药物中的应用，还可以具有这样的特征：其中，所述自身免疫性疾病包括多发性硬化症。

进一步，本发明提供一种NLRP3炎症小体抑制剂在制备预防或治疗细胞焦亡的药物中的应用，还可以具有这样的特征：其中，所述NLRP3炎症小体抑制剂通过与NLRP3炎症小体直接结合抑制细胞焦亡并减少炎症相关细胞和细胞因子的释放。

进一步，本发明提供一种NLRP3炎症小体抑制剂在制备预防或治疗细胞焦亡的药物中的应用，还可以具有这样的特征：其中，所述药物包括药学上可接受的载体或辅料。

进一步，本发明提供一种NLRP3炎症小体抑制剂在制备预防或治疗细胞焦亡的药物中的应用，还可以具有这样的特征：其中，所述药物粉剂、片剂、颗粒剂、胶囊、丸剂或其他与给药途径相应的制剂。所述药物的给药方式为口服或其他临床可接受的方式。

本发明的有益效果在于：本发明提供一种NLRP3炎症小体抑制剂及其在制备预防或治疗细胞焦亡的药物中的应用，NLRP3炎症小体相关疾病包若感染性炎症性疾病和免疫性疾病，其中感染性疾病包括脓毒症、腹膜炎、痛风性关节炎，免疫性疾病包括多发性硬化症，洛莫司汀通过与NLRP3炎症小体直接结合抑制细胞焦亡，并减少免疫细胞的死亡以及炎症因子的释放实现药物功能。

实验表明，洛莫司汀与NLRP3有极强的结合力，是一种以NLRP3炎症小体为靶点的药物，与对照组相比，洛莫司汀给药组可以显著降低腹膜炎和痛风性关节炎模型小鼠炎症因子及炎性细胞的水平；同时，洛莫司汀给药组可以预防EAE模型小鼠的发病情况，降低临床评分，减少炎症细胞，表明洛莫司汀可以预防和治疗多发性硬化；此外，与对照组相比，洛莫司汀给药组可以提高脓毒症模型小鼠的存活率、中性粒细胞数以及单核细胞数，同时降低炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的水平。

洛莫司汀对多种炎性疾病有明显的缓解和治疗作用，无明显毒副作用，有望应用于临床NLRP3炎症小体相关疾病的治疗，为临床提供新的药物选择，并解决现有药物存在的毒副作用问题，具有广阔的开发前景和应用价值。

附图说明

图1是caspase-1活性测定中的pNA标准曲线的参考图；

图2是洛莫司汀对NLRP3炎症小体激活的影响，其中A是iBMDM细胞中细胞乳酸脱氢酶的测定结果，B是iBMDM细胞中白细胞介素1β的测定结果，C是THP-1细胞中细胞乳酸脱氢酶的测定结果，D是THP-1细胞中白细胞介素1β的测定结果，E是BMDM细胞中细胞乳酸脱氢酶的测定结果，F是BMDM细胞中白细胞介素1β的测定结果，其中洛莫司汀的给药浓度单位为uM；

图3是洛莫司汀对AIM2和NLRC4炎症小体激活的影响，其中A是BMDM细胞中poly(dA:dT)刺激后细胞乳酸脱氢酶的测定结果，B是BMDM细胞中BMDM细胞中poly(dA:dT)刺激后白细胞介素1β的测定结果，C是BMDM细胞中flagellin刺激后细胞乳酸脱氢酶的测定结果，D是BMDM细胞中BMDM细胞中polyflagellin刺激后白细胞介素1β的测定结果，其中洛莫司汀的给药浓度单位为uM；

图4是洛莫司汀对脓毒症模型小鼠的治疗效果，其中A代表各个组别存活率的对比图，B代表小鼠血液上清中炎症因子白细胞介素1β的ELISA测定结果，C代表小鼠血液上清中炎症因子白细胞介素6的ELISA测定结果，D代表小鼠血液上清中炎症因子肿瘤坏死因子-α的ELISA测定结果，E代表流式细胞术检测小鼠血液中中性粒细胞百分比的结果，F代表流式细胞术检测小鼠血液中单核细胞百分比的结果。其中UN代表未处理过的小鼠组、control代表只注射细菌脂多糖的小鼠组、5mg代表按照5mg/kg剂量注射洛莫司汀的小鼠组、10mg代表按照10mg/kg剂量注射洛莫司汀的小鼠组；

图5是洛莫司汀对腹膜炎和痛风性关节炎小鼠的治疗效果，其中A代表腹膜炎小鼠腹腔灌洗液上清中炎症因子白细胞介素1β的ELISA测定结果，B代表流式细胞术检测腹腔灌洗液沉淀的细胞中中性粒细胞浸润的结果，C代表腹膜炎小鼠腹腔灌洗液上清中炎症因子白细胞介素6的ELISA测定结果，D代表流式细胞术检测腹腔灌洗液沉淀的细胞中单核细胞浸润的结果，E代表痛风性关节炎不同组别小鼠不同时间测量的脚垫厚度，F代表脚垫组织培养物中Caspase-1活性测定结果，G代表脚垫组织培养物中炎症因子白细胞介素1β的ELISA测定结果，其中UN代表未处理过的小鼠组、control代表只注射尿酸晶钠的小鼠组、5mg代表按照5mg/kg剂量注射洛莫司汀的小鼠组、10mg代表按照10mg/kg剂量注射洛莫司汀的小鼠组；

图6是洛莫司汀对EAE模型小鼠的防治作用，其中A代表不同组别小鼠的EAE发病情况临床评分对比，B代表不同组别小鼠出现临床症状后体重变化对比，其中对照组代表未经洛莫司汀处理的小鼠组，洛莫司汀组的小鼠给药浓度为10mg/kg。

具体实施方式

以下结合具体实施例对本发明作进一步说明。

本实施例提供一种NLRP3炎症小体抑制剂，该NLRP3炎症小体抑制剂是洛莫司汀或洛莫司汀药学上可接受的盐。洛莫司汀药学上可接受的盐为洛莫司汀与生物素形成的盐。

本NLRP3炎症小体抑制剂可用于预防或治疗NLRP3炎症小体诱导的细胞焦亡。进一步地，本NLRP3炎症小体抑制剂可用于预防或治疗细胞焦亡相关疾病，包括感染性炎症性疾病和自身免疫性疾病。其中，感染性炎症性疾病包括脓毒症、腹膜炎、痛风性关节炎；自身免疫性疾病包括多发性硬化症。具体的，NLRP3炎症小体抑制剂通过与NLRP3炎症小体直接结合抑制细胞焦亡并减少炎症相关细胞和细胞因子的释放。

药效实验：

本实验所提到的体外/体内细胞实验：利用LPS和ATP/Nigericin/MSU刺激永生化人巨噬细胞系THP-1、小鼠巨噬细胞iBMDM和小鼠原代巨噬细胞BMDM，再用不同浓度的洛莫司汀处理细胞，观察并记录NLRP3炎症小体的激活情况，并从不同指标对细胞焦亡、炎症因子的产生进行分析。

本实验所用到的动物模型实验：分别建造用MOG诱导的实验性自身免疫性脑脊髓炎EAE、LPS诱导的感染性休克、MSU诱导的腹膜炎和MSU诱导的痛风关节炎小鼠模型，在四种模型中分别研究洛莫司汀对疾病的保护或减缓作用，并从多个指标判断是否可以减轻炎症反应。

(一)、细胞来源及培养方案

永生化小鼠骨髓来源巨噬细胞(iBMDM)细胞系在添加10％胎牛血清(购买于Gibco)和1％青霉素/链霉素(P/S)的DMEM-高糖培养基中培养；人外周血单核巨噬细胞系(THP-1)在RPMI 1640培养基中培养，培养基中添加10％胎牛血清(购买于Gibco)和1％的P/S。从小鼠骨髓中分离骨髓源性巨噬细胞(BMDM)，在添加30％L929培养上清、10％热灭活胎牛血清和1％ P/S的DMEM高糖培养基中培养七天。所有细胞均在37℃和5％CO₂的细胞培养箱中培养生长。

(二)、实验步骤

2.1经典及非经典炎症小体的激活

将BMDMs(iBMDMs或THP-1)接种于6孔板上，BMDM用500ng/mL脂多糖处理3小时(iBMDM或THP-1所用浓度为100ng/mL)。随后，用不同剂量的洛莫司汀处理细胞1.5小时，然后用尼日利亚菌素(10mmol/L)刺激1小时以激活NLRP3炎症小体。

为了刺激AIM2和NLRC4炎症小体，细胞用脂多糖处理3小时后，用不同剂量的洛莫司汀处理细胞1-1.5小时，之后用poly(dA:dT)刺激6小时或鞭毛蛋白刺激2小时。

2.2细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放的测定

细胞处理方法与(一)所述相同。为了评估细胞毒性，对(一)处理后的细胞离心并收集细胞上清液，然后将收集的上清分别加入新的96孔板中，细胞乳酸脱氢酶购于碧云天公司，按照试剂商说明书所述方法进行细胞乳酸脱氢酶的测定，使用软件GraphPad Prism7.0对检测数据统计分析。具体实施步骤如下：

(1)将适量细胞提前一夜接种到6孔孔细胞培养孔板中，使待检测时细胞密度不超过80-90％满。

(2)第二天，待细胞完全贴壁后，使用完全DMEM培养基换液，用100ng/ml浓度的细菌脂多糖处理细胞3小时。

(3)将上述(2)所述细菌脂多糖继续留在孔板中孵育1小时，同时按照实验浓度加入所需洛莫司汀加入进行处理，并设置适当对照。

(4)药物刺激完毕后，使用完全DMEM培养基换液，按照2.1所述浓度配置尼日利亚菌素和DMEM完全培养基混合液刺激1小时。

(5)收集细胞培养板上清，用于LDH释放检测。

(6)分别取各孔的上清液60μl，每组设置4个副孔，加入到一新的96孔板相应孔中，随即进行样品测定。

(7)INT溶液(1X)的配制：根据所需的INT溶液(1X)的量，取适量INT溶液(10X)用INT稀释液稀释至1X。例如，取20μl INT溶液(10X)，加入180μlINT稀释液，混匀后即配制为200μl INT溶液(1X)。INT溶液(1X)宜现配现用，配制后4℃保存可于当天使用，不宜配制后冻存。

(8)LDH检测工作液的配制：根据待测定的样品数(含对照)，参考产品说明书临检测前新鲜配制适量的检测工作液。

(9)各孔分别加入30μl LDH检测工作液。

(10)混匀，室温(37℃)避光孵育30min(可用铝箔包裹后置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动)。然后在490nm处测定吸光度。

(11)计算(测得的各组吸光度均应减去背景空白对照孔吸光度)。

(12)细胞毒性或死亡率(％)＝(处理样品吸光度－样品对照孔吸光度)/(细胞最大酶活性的吸光度－样品对照孔吸光度)×100。

(13)根据计算结果可以比较不同样品处理组间有无统计学差异等。

2.3ELISA测定

采用购于巴傲得生物公司的ELISA试剂盒(Bioworld)，按照试剂商说明书所述方法评估小鼠白介素1β、白介素6、肿瘤坏死因子(TNF-α)在细胞培养、足垫组织培养、腹腔灌洗液和血清中提取的上清液中的炎症因子水平。具体实施步骤如下：

(1)根据待测样品数量和标准品的数量决定所需的孔数，用样品稀释液/标准品稀释液稀释样品/标准品，加入相应孔中，每孔100uL，用封板胶纸封住反应孔，放置于37℃烘箱中孵育1.5小时。

(2)按照说明书1:20配置洗涤液，每孔加入300uL洗涤液，静置1-2分钟，将板子剧烈拍打置吸水纸上，重复上述步骤洗涤抗体包被板三次。

(3)按照说明书1:100配置生物素化抗体工作液，每孔加入100uL。用封板胶纸封住反应孔，放置于37℃烘箱中孵育1小时。

(4)重复(2)步骤洗涤抗体包被板三次。

(5)按照说明书1:100配置酶结合物工作液，每孔加入100uL。用封板胶纸封住反应孔，放置于37℃烘箱中孵育45分钟。

(6)重复(2)步骤洗涤抗体包被板五次。

(7)加入显色剂，每孔100uL，放置于37℃烘箱中避光孵育30分钟。

(8)加入终止工作液，每孔100uL，即刻于酶标仪测量OD450值(30分钟内)。

2.4小鼠骨髓源性巨噬细胞的提取

将C57BL/6J小鼠脱臼处死，浸泡于75％乙醇5分钟消毒。取小鼠股骨后和胫骨的骨髓细胞放置在特殊配置的DMEM培养基中(由80％的DMEM、10％的胎牛血清、1％的青霉素-链霉素以及20％含有L929细胞的M-CSF组成)，放入5％CO₂的加湿细胞培养箱中，于37℃培养。七天后，骨髓细胞分化为骨髓源性巨噬细胞，用细胞刮板小心收集骨髓细胞，将离心后的细胞转移到六孔板上。使用完全DMEM培养基，以6×10⁶个细胞每孔的浓度铺板。经过一夜孵育后用于2.1所述实验。

2.5caspase-1活性测定

本试验所用caspase-1活性测定盒购于碧云天公司。具体实施步骤如下：

(1)裂解液溶解后混匀并置于冰浴上备用。

(2)检测缓冲液溶解后混匀并置于冰浴上备用。

(3)测定pNA标准曲线：

a.标准品稀释液的配制：按照每0.9ml检测缓冲液加入0.1ml裂解液的比例配制适量的标准品稀释液。

b.把试剂盒提供的pNA(10mM)用标准品稀释液稀释为0、10、20、50、100和200μM，作为标准品。

c.每个浓度取100μl用酶标仪进行检测，或取适当量用容量不超过100μl的分光光度检测杯进行检测，测定A405。

d.每一个标准品的A405减去不含pNA的空白对照的A405计算出实际的因pNA而导致的吸光度，并制作出pNA浓度相对于A405的标准曲线。pNA标准曲线可以参考图1，在0-200μM范围内存在良好的线性关系。

(4)样品的收集：将取下的小鼠脚垫组织浸泡于DMEM高糖培养基中一小时，13,000转速离心15分钟，取上清液进行测定。

(5)Caspase 1酶活性的检测：

a.取出适量的Ac-YVAD-pNA(2mM)，置于冰浴上备用。

b.如下设置反应体系：

c.加入Ac-YVAD-pNA(2mM)后混匀，37℃孵育30-120分钟。发现颜色变化比较明显时即测定A405。

d.制作标准曲线，计算样品孔caspase-1活力单位。

(三)、动物模型造模过程

3.1MSU诱导的腹膜炎小鼠模型

选取8-10周龄的C57BL/6雄性小鼠。按照10mg/kg的浓度给小鼠提前腹腔注射洛莫司汀两次，两次给药间隔12小时。第二次给药一小时后，给小鼠腹腔注射尿酸晶钠溶液(1mg尿酸晶钠晶体溶于0.2ml PBS)，六小时后，用5ml预冷的PBS(含0.5mM EDTA)灌洗小鼠腹腔，腹腔灌洗液2000rpm离心5分钟，上清液用于ELISA分析。

3.2诱导的痛风关节炎小鼠模型

选取8-10周龄的C57BL/6雄性小鼠。按照10mg/kg的浓度给小鼠提前腹腔注射洛莫司汀两次，两次给药间隔12小时。第二次给药一小时后，给小鼠足部关节处注射MSU溶液(0.8mg尿酸晶钠晶体溶于40uL PBS)。六小时内每隔一小时用游标卡尺测量小鼠脚垫厚度并拍照记录。六小时后，摘取小鼠足部，用于caspase-1活性测定试剂盒(购于碧云天公司)测定caspase-1活性程度、IL-1bELISA分析。

3.3细菌脂多糖诱导的脓毒症小鼠模型

8-10周雌性C57BL/6小鼠提前腹腔给药两次(间隔12h)，第二次给药1小时后腹腔注射LPS溶液(15mg/kg,购于阿拉丁公司)，12小时后分别取小鼠全血做流式细胞术、血清做ELISA分析。

3.4MOG诱导的EAE小鼠模型

采用8周龄C57BL/6雌性小鼠，背部皮下注射含有MOG35-55(250μg/只)、M.tuberculosis(400μg/只)和CFA(50μl/只)的乳剂，诱导小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型。此外，百日咳毒素(PTX)(每只小鼠500ng)溶解于PBS中，于造模后0h和48h腹腔注射。每日使用EAE小鼠临床评分5分法评估EAE模型小鼠疾病的进展情况，在EAE疾病的高峰期，对实验小鼠实施安乐死，心脏灌注PBS。取灌注后的脑组织进行流式细胞术分析。

(四)、实验结果

4.1图2是洛莫司汀对NLRP3炎症小体激活的影响，从图2可以看出，洛莫司汀对细菌脂多糖和尼日利亚菌素联合刺激的经典NLRP3炎症小体通路有明显的抑制作用，在iBMDM、THP-1和BMDM细胞中，与没有经过洛莫司汀处理的组别相比，不同剂量的洛莫司汀处理均表现出细胞乳酸脱氢酶和炎性因子白细胞介素1β下降。表明洛莫司汀对NLRP3炎症小体有很好的抑制作用。

4.2图3是洛莫司汀对AIM2和NLRC4炎症小体激活的影响，从图3可以看出，对于poly(dA：dT)刺激的AIM2非经典通路和flagellin刺激的NLRP4非经典通路，未经洛莫司汀处理的组别和不同剂量洛莫司汀处理的组别在细胞乳酸脱氢酶和炎性因子白细胞介素1β上并未有明显的变化。说明洛莫司汀特异性抑制经典NLRP3炎症小体通路，对AIM2和NLRC4非经典通路没有明显影响。

4.3图4是洛莫司汀对脓毒症模型小鼠的治疗效果，从图4可以看出，与没有经过洛莫司汀提前腹腔注射的小鼠组别相比，没有注射洛莫司汀的小鼠组别平均存活率明显较短；同时对血液上清中炎性因子白细胞介素1β、白细胞介素6和肿瘤坏死因子-α进行ELISA测定，经过洛莫司汀处理的小鼠组别平均炎性因子数量明显降低；同时，脓毒症小鼠出现的感染性休克会导致小鼠免疫抑制现象的出现，具体表现为流式细胞术测定中炎性细胞数量和百分比的下降，结果显示经过洛莫司汀处理的小鼠中性粒细胞和单核细胞数量显著增加，这表明洛莫司汀可以保护脓毒症模型小鼠出现感染性休克的免疫抑制现象。

4.4图5是洛莫司汀对腹膜炎和痛风性关节炎小鼠的治疗效果，从图5可以看出，经过洛莫司汀处理过的腹膜炎小鼠组别腹腔灌洗液上清中的白细胞介素1β和白细胞介素6明显降低；同时，在痛风性关节炎中，洛莫司汀处理过的小鼠组别脚垫厚度低于未处理过的小鼠组别，脚垫组织培养物中caspase-1活性单位和炎性因子白细胞介素1β的数量也明显降低；以上说明洛莫司汀在腹膜炎和痛风性关节炎中也表现出良好的预防和治疗效果。

4.5图6是洛莫司汀对EAE模型小鼠的防治作用，从图6可以看出，经过洛莫司汀处理过的EAE小鼠组别临床评分明显低于未经过洛莫司汀处理过的小鼠组别，同时，在临床症状出现后进行小鼠体重记录，经过洛莫司汀处理过的小鼠组别体重没有明显下降趋势，而未经洛莫司汀处理的小鼠组别体重有下降趋势；以上结果说明在EAE小鼠模型中，洛莫司汀对EAE小鼠的发病进展有较好的预防作用，有望应用于临床多发性硬化的治疗和相关药物的开发中。

在本发明中，除非另有说明，否则本文中使用的科学和技术名词具有本领域技术人员所通常理解的含义。并且，本文中所用的试剂、材料和操作步骤均为相应领域内广泛使用的试剂、材料和常规步骤。

最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种NLRP3炎症小体抑制剂，其特征在于：

所述NLRP3炎症小体抑制剂是洛莫司汀或洛莫司汀药学上可接受的盐。

2.根据权利要求1所述的NLRP3炎症小体抑制剂，其特征在于：

其中，所述洛莫司汀药学上可接受的盐为洛莫司汀与生物素形成的盐。

3.如权利要求1或2所述的NLRP3炎症小体抑制剂在制备预防或治疗细胞焦亡的药物中的应用，其特征在于：

所述细胞焦亡为NLRP3炎症小体诱导的细胞焦亡。

4.根据权利要求3所述的NLRP3炎症小体抑制剂在制备预防或治疗细胞焦亡的药物中的应用，其特征在于：

其中，所述NLRP3炎症小体抑制剂在制备预防或治疗细胞焦亡相关疾病的药物中的应用。

5.根据权利要求4所述的NLRP3炎症小体抑制剂在制备预防或治疗细胞焦亡的药物中的应用，其特征在于：

其中，所述细胞焦亡相关疾病包括感染性炎症性疾病和自身免疫性疾病。

6.根据权利要求5所述的NLRP3炎症小体抑制剂在制备预防或治疗细胞焦亡的药物中的应用，其特征在于：

其中，所述感染性炎症性疾病包括脓毒症、腹膜炎、痛风性关节炎。

7.根据权利要求5所述的NLRP3炎症小体抑制剂在制备预防或治疗细胞焦亡的药物中的应用，其特征在于：

其中，所述自身免疫性疾病包括多发性硬化症。

8.根据权利要求3所述的NLRP3炎症小体抑制剂在制备预防或治疗细胞焦亡的药物中的应用，其特征在于：

其中，所述NLRP3炎症小体抑制剂通过与NLRP3炎症小体直接结合抑制细胞焦亡并减少炎症相关细胞和细胞因子的释放。

9.根据权利要求3所述的NLRP3炎症小体抑制剂在制备预防或治疗细胞焦亡的药物中的应用，其特征在于：

其中，所述药物包括药学上可接受的载体或辅料。

10.根据权利要求3所述的NLRP3炎症小体抑制剂在制备预防或治疗细胞焦亡的药物中的应用，其特征在于：

其中，所述药物粉剂、片剂、颗粒剂、胶囊、丸剂或其他与给药途径相应的制剂。