CN112057447A

CN112057447A - 维生素c在制备预防脑型疟疾药物中的应用

Info

Publication number: CN112057447A
Application number: CN202011143080.8A
Authority: CN
Inventors: 王倩; 胡俊杰; 史小雨; 徐子豪; 刘影
Original assignee: Institute of Biophysics of CAS; Tianjin Medical University
Current assignee: Institute of Biophysics of CAS; Tianjin Medical University
Priority date: 2020-10-23
Filing date: 2020-10-23
Publication date: 2020-12-11

Abstract

本发明公开了维生素C在制备预防脑型疟疾药物中的应用，其维生素C的用量为（4g/kg）。本发明主要考察了高剂量维生素C在预防患疟小鼠发生脑型疟疾中的作用，重点是解决如何预防脑型疟疾这一严重的疟疾并发症的发生，发明的难点在于寻找能够用于预防脑型疟疾的药物。本发明的创新点在于调整已知药物的用量及使用途径，用于脑型疟疾的预防。

Description

维生素C在制备预防脑型疟疾药物中的应用

技术领域

本发明属于医药开发技术领域，特别是涉及一种维生素C在制备预防脑型疟疾药物中的应用。

背景技术

疟疾是由疟原虫感染人体导致的一种传染性寄生虫病，主要由受疟原虫感染的雌性按蚊叮咬人体所致。根据世界卫生组织发布的《2019年世界疟疾报告》，2018年全球共发生2.28亿疟疾病例，其中40.5万人死于该疾病。随着近年国际交流和对外贸易的增加，境外感染疟疾再输入到我国的疫情呈逐年上升趋势。疟疾的临床表现根据疾病进程表现不一，包括发热、寒颤和头疼等较为普通的症状，也可表现为更严重的症状，包括严重贫血、与代谢性酸中毒相关的呼吸窘迫、多脏器功能衰竭以及脑型疟疾，这些严重的改变统称为重症疟疾。其中，脑型疟疾是疟原虫感染引起的一种最为严重的神经系统并发症，死亡率可达10%-20%，且多为儿童；在患脑型疟疾存活并恢复的病人中，仍有约26%的病人遗留长期的生理、神经和认知等方面的功能障碍，这都使得脑型疟疾成为一个亟待解决的严峻临床问题和社会问题。青蒿素为基础的联合疗法是当前最有效的抗疟疾药物，对无并发症的疟疾治疗效果较好。然而，脑型疟疾进展迅速，上述疗法并不能预防或延缓脑型疟疾的发生，且仍缺乏有效的早期诊断方法和治疗药物。因此，寻找预防疟疾严重并发症即脑型疟疾的药物显得尤为重要。已有研究报道尝试应用维生素C治疗疟疾，但应用剂量最高仅为100mg/kg，且尚无研究提出应用维生素C预防脑型疟疾。

发明内容

本发明克服了常用疟疾治疗药物在预防疟疾严重并发症——脑型疟疾中的技术的缺陷，提供一种应用高剂量维生素C预防脑型疟疾发生的治疗手段。本发明的目的是解决目前尚无有效药物能够预防疟疾感染后严重并发症脑型疟疾发生的问题。

为实现上述目的，本发明公开了的技术内容如下：

维生素C在制备预防脑型疟疾药物中的应用。其维生素C的用量为4g/kg腹腔注射。本发明更加详细的说明如下：

（1）由于伦理的限制，无法在人体内进行脑型疟疾的研究，小鼠脑型疟疾模型是目前研究脑型疟疾唯一有利的工具。因此，我们利用人脑型疟疾动物模型—小鼠实验性脑型疟疾模型来研究高剂量维生素C在预防脑型疟疾发病中的作用。

（2）构建小鼠脑型疟疾模型（通常在疟原虫感染后的5-9天小鼠会发生脑型疟疾并迅速死亡），从感染疟原虫当天起每日腹腔注射1次高剂量维生素C（4g/kg）可预防小鼠脑型疟疾的发生，而生理盐水注射组的小鼠则在感染疟原虫后的5-9天因发生脑型疟疾而死亡。

（3）应用过高剂量的维生素C可能会导致溶血等副反应，但本发明所提出的维生素C给药剂量和途径对正常未感染小鼠无明显副作用。

本发明主要考察了高剂量维生素C在预防患疟小鼠发生脑型疟疾中的作用，重点是解决如何预防脑型疟疾这一严重的疟疾并发症的发生，发明的难点在于寻找能够用于预防脑型疟疾的药物，本发明的创新点在于调整已知药物的用量及使用途径，用于脑型疟疾的预防。

本发明的实验试验结论如下：

（1）高剂量维生素C可预防脑型疟疾的发生。高剂量VC显著抑制疟原虫感染的C57BL/6小鼠脑型疟疾的发生（NS, 0.9%氯化钠；VC，维生素C）（Kaplan-Meier方法绘制生存曲线，Log-rank test进行统计分析，*** P < 0.001），见图1。

（2）连续应用高剂量维生素C对正常小鼠无明显副作用，小鼠一般状况良好，未出现溶血及肝损伤等副作用，见图2。

附图说明

图1为高剂量维生素C预防脑型疟疾的发生情况说明；

图2为高剂量维生素C的应用对正常小鼠无明显副作用情况说明；

A. 高剂量维生素C连续应用11天对正常小鼠的体重无显著影响（双因素方差分析）；B.高剂量维生素C连续应用11天不影响正常小鼠的外周血红细胞总数（双因素方差分析）；C.高剂量维生素C连续应用11天后正常小鼠的肝脾无肿大（非配对t检验进行统计分析）；D.高剂量维生素C连续应用11天后正常小鼠的血清总胆红素和间接胆红素无显著变化（非配对t检验进行统计分析）；E. 高剂量维生素C连续应用11天后正常小鼠的肝功能（谷丙转氨酶和谷草转氨酶）未受损（t检验进行统计分析）。NS, 生理盐水（对照组）；VC, 维生素C（实验组）；ns, P> 0.05。

具体实施方式

下面通过具体的实施方案叙述本发明。除非特别说明，本发明中所用的技术手段均为本领域技术人员所公知的方法。另外，实施方案应理解为说明性的，而非限制本发明的范围，本发明的实质和范围仅由权利要求书所限定。对于本领域技术人员而言，在不背离本发明实质和范围的前提下，对这些实施方案中的物料成分和用量进行的各种改变或改动也属于本发明的保护范围。本发明所用原料及试剂均有市售。

实施例1

维生素C在制备预防脑型疟疾药物中的应用的实验方法及结果如下：

一、试验方法：

（1）由于伦理的限制，无法在人体内进行脑型疟疾的研究，小鼠脑型疟疾模型是目前研究脑型疟疾唯一有利的工具。因此，我们利用人脑型疟疾动物模型——小鼠实验性脑型疟疾模型来研究高剂量维生素C在预防脑型疟疾发病中的作用。根据文献报道，采用6至8周龄雌性C57BL/6小鼠，经尾静脉注射1×10⁴个伯氏疟原虫ANKA株感染的红细胞(体积200μl)，使小鼠感染疟疾。通常感染后5至9天为脑型疟疾的发病时间，患脑型疟疾的小鼠会在出现典型脑型疟疾症状后1天内迅速死亡。由此构建小鼠的脑型疟疾模型，建模成功率可达100%。采用临床症状评分法对患疟小鼠是否发生脑型疟疾进行评估。脑型疟疾的典型症状包括毛发竖起、弓背、共济失调、偏瘫、抽搐和昏迷，具有一个症状积1分，评分≥4分即可诊断为脑型疟疾。

（2）维生素C，即L-抗坏血酸（购自Sigma-Aldrich公司，货号33034）于0.9%氯化钠溶液中配制成1M储存液（氢氧化钠调pH至7.0），经0.9%氯化钠溶液稀释后配制为工作液。

（3）按照（1）所述方法构建小鼠脑型疟疾模型，随机分为实验组和对照组（N = 9只/组）。从感染疟原虫当天起，分别对实验组和对照组的感染小鼠经腹腔注射4g/kg体重的维生素C工作液（体积200μl）和0.9%氯化钠溶液（体积200μl），每日相同时间注射1次。根据临床症状评分法每日对两组小鼠是否发生脑型疟疾进行评估，并记录小鼠死亡情况。

（4）评估应用高剂量维生素C对正常未感染小鼠一般状况的影响。采用4至6周龄雌性BALB/C小鼠，随机分为实验组和对照组，每日分别对两组小鼠经腹腔注射4g/kg体重的维生素C工作液（体积200μl）和0.9%氯化钠溶液（体积200μl），每日相同时间注射1次，连续应用11天。用药期间每日称量小鼠体重；隔日鼠尾取血10μl检测红细胞计数；至用药第11天经眼球取血收集血清，检测肝功能和胆红素等生化指标；并解剖小鼠取出肝和脾进行称重。

二、实验结果表明：

（1）对于C57BL/6小鼠构建的脑型疟疾模型，生理盐水注射组（对照组）小鼠于感染疟原虫后5-9天出现脑型疟疾症状并迅速死亡，死亡率达100%；而维生素C注射组（实验组）的感染小鼠大部分均未出现脑型疟疾的症状，因脑型疟疾导致的死亡率仅为22%。两组的生存率差异具有统计学意义，说明高剂量维生素C的应用可预防脑型疟疾的发生，详见图1。

（2）对正常小鼠连续应用上述相同剂量的维生素C或生理盐水发现，4g/kgVC的应用并不会影响小鼠的一般健康状况，小鼠体重无显著变化（见图2A）。由于过量应用维生素C的常见副作用是溶血，我们通过检测小鼠外周血红细胞计数、肝脾肿大情况及血胆红素水平进行评估。结果提示本发明所提出的维生素C应用剂量并不会引起小鼠发生溶血，其红细胞计数、肝脾重量和血胆红素水平与生理盐水注射组相比均无显著差异（见图2B, C, D）。此外，对小鼠血清进行谷丙转氨酶和谷草转氨酶的检测，也提示应用高剂量维生素C不会造成肝损伤（见图2E）。

在详细说明的较佳实施例之后，熟悉该项技术人士可清楚地了解，在不脱离上述申请专利范围与精神下可进行各种变化与修改，凡依据本发明的技术实质对以上实施例所作任何简单修改、等同变化与修饰，均属于本发明技术方案的范围。且本发明亦不受说明书中所举实例实施方式的限制。

Claims

1.维生素C在制备预防脑型疟疾药物中的应用。

2.权利要求1所述的应用，其维生素C的用量为4g/kg，腹腔注射，每日1次。