CN117482292A - 一种胶原蛋白多孔微球及其制备方法和应用 - Google Patents

一种胶原蛋白多孔微球及其制备方法和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN117482292A
CN117482292A CN202311524550.9A CN202311524550A CN117482292A CN 117482292 A CN117482292 A CN 117482292A CN 202311524550 A CN202311524550 A CN 202311524550A CN 117482292 A CN117482292 A CN 117482292A
Authority
CN
China
Prior art keywords
collagen
mass
crosslinking
degreasing
solution
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202311524550.9A
Other languages
English (en)
Inventor
饶义伟
王海滨
郭杰
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Beijing Taikang Pharmaceutical Technology Development Co ltd
Original Assignee
Beijing Dikang Pharmaceutical Investment Management Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Beijing Dikang Pharmaceutical Investment Management Co ltd filed Critical Beijing Dikang Pharmaceutical Investment Management Co ltd
Publication of CN117482292A publication Critical patent/CN117482292A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • D—TEXTILES; PAPER
    • D01—NATURAL OR MAN-MADE THREADS OR FIBRES; SPINNING
    • D01D—MECHANICAL METHODS OR APPARATUS IN THE MANUFACTURE OF ARTIFICIAL FILAMENTS, THREADS, FIBRES, BRISTLES OR RIBBONS
    • D01D5/00—Formation of filaments, threads, or the like
    • D01D5/0007—Electro-spinning
    • D01D5/0015—Electro-spinning characterised by the initial state of the material
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/16—Agglomerates; Granulates; Microbeadlets ; Microspheres; Pellets; Solid products obtained by spray drying, spray freeze drying, spray congealing,(multiple) emulsion solvent evaporation or extraction
    • A61K9/1605—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/1629—Organic macromolecular compounds
    • A61K9/1658—Proteins, e.g. albumin, gelatin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L24/00—Surgical adhesives or cements; Adhesives for colostomy devices
    • A61L24/001—Use of materials characterised by their function or physical properties
    • A61L24/0015—Medicaments; Biocides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L24/00—Surgical adhesives or cements; Adhesives for colostomy devices
    • A61L24/001—Use of materials characterised by their function or physical properties
    • A61L24/0036—Porous materials, e.g. foams or sponges
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L24/00—Surgical adhesives or cements; Adhesives for colostomy devices
    • A61L24/04—Surgical adhesives or cements; Adhesives for colostomy devices containing macromolecular materials
    • A61L24/10—Polypeptides; Proteins
    • A61L24/102—Collagen
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/14—Macromolecular materials
    • A61L27/22—Polypeptides or derivatives thereof, e.g. degradation products
    • A61L27/24—Collagen
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/50—Materials characterised by their function or physical properties, e.g. injectable or lubricating compositions, shape-memory materials, surface modified materials
    • A61L27/54—Biologically active materials, e.g. therapeutic substances
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/50—Materials characterised by their function or physical properties, e.g. injectable or lubricating compositions, shape-memory materials, surface modified materials
    • A61L27/56—Porous materials, e.g. foams or sponges
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/50—Materials characterised by their function or physical properties, e.g. injectable or lubricating compositions, shape-memory materials, surface modified materials
    • A61L27/58—Materials at least partially resorbable by the body
    • D—TEXTILES; PAPER
    • D01—NATURAL OR MAN-MADE THREADS OR FIBRES; SPINNING
    • D01D—MECHANICAL METHODS OR APPARATUS IN THE MANUFACTURE OF ARTIFICIAL FILAMENTS, THREADS, FIBRES, BRISTLES OR RIBBONS
    • D01D5/00—Formation of filaments, threads, or the like
    • D01D5/0007—Electro-spinning
    • D01D5/0061—Electro-spinning characterised by the electro-spinning apparatus
    • D01D5/0069—Electro-spinning characterised by the electro-spinning apparatus characterised by the spinning section, e.g. capillary tube, protrusion or pin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
    • A61L2300/60—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices characterised by a special physical form
    • A61L2300/602—Type of release, e.g. controlled, sustained, slow
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
    • A61L2300/60—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices characterised by a special physical form
    • A61L2300/602—Type of release, e.g. controlled, sustained, slow
    • A61L2300/604—Biodegradation
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2420/00—Materials or methods for coatings medical devices
    • A61L2420/06—Coatings containing a mixture of two or more compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2430/00—Materials or treatment for tissue regeneration
    • A61L2430/02—Materials or treatment for tissue regeneration for reconstruction of bones; weight-bearing implants

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Surgery (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Textile Engineering (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Mechanical Engineering (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Materials For Medical Uses (AREA)

Abstract

本申请公开一种胶原蛋白多孔微球及其制备方法和应用。胶原蛋白多孔微球制备方法如下：胶原蛋白和酸性溶液混合，经静电纺丝滴加到戊二醛水溶液中，经交联，即可；其中，胶原蛋白中I型胶原蛋白的质量百分比为90％以上；胶原蛋白占酸性溶液的质量百分比为0.1％～2％；静电纺丝的电压为10～20kV；交联包括化学交联和辐射交联；戊二醛水溶液中戊二醛的质量百分比为0.08％～0.7％。本申请制得的胶原蛋白多孔微球有相互连通的外、内孔，极低的质量密度和巨大的比表面积，保证胶原蛋白生物活性，机械性能优异，为组织细胞提供良好再生修复微环境，细胞毒性小；还具有优异的吸附性能，粒径均一，流动性佳，可用于复杂创面的局部止血。

Description

一种胶原蛋白多孔微球及其制备方法和应用
技术领域
本申请涉及组织工程技术领域，具体涉及一种胶原蛋白多孔微球及其制备方法和应用。
背景技术
组织工程是20世纪80年代末由Langer等提出概念，随后逐步发展起来的一门新兴学科，细胞培养技术是组织工程最基础、最重要的环节。组织工程的目的旨在建立细胞与生物材料的三维空间复合体，对病损组织进行形态、结构与功能的重建并达到永久性替代。支架材料作为组织工程的三大要素之一，其性能对移植治疗效果起直接作用。良好的支架不仅具有良好的生物相容性，还要能够吸附种子细胞，使其在支架上增殖分化，并且能够分泌生长因子或者吸附外源生长因子。相比一般的生物材料，组织工程中要求的支架材料在性能上要求更高，除了具备生物可降解性，还要保证其降解产物对机体无毒无害，且机械性能优异。
低免疫原性的脱细胞基质材料(ECM)具有优良的组织修复能力，其修复缺损、促进组织再生的机制是“内源性诱导再生”，胶原纤维形成三维多孔连通网络结构，为细胞迁移、长入、合成新生胶原蛋白提供物理微环境，可促进组织修复，重塑血管化、功能化的组织与器官，实现归巢的细胞进一步对材料进行改造、降解和塑形，实现组织的形成和结构重塑。但现有技术中，由纯胶原蛋白制得的支架机械性能较差，不足以支撑起一定形状的组织。也有研究采用化学交联剂提高支架机械性能，但会存在支架中交联剂残留等问题，进而导致制得的生物支架具有细胞毒性，限制其实际应用。
因此，本领域亟需研发一种具有良好生物相容性和生物可降解性，交联剂残留量少，便于成型，且机械性能优异的生物支架材料。
发明内容
本申请所要解决的技术问题是克服现有技术中生物支架力学性能差，有交联剂残留，导致细胞毒性大等缺陷，而提供一种胶原蛋白多孔微球及其制备方法和应用。本申请以胶原蛋白为原料，经复合交联法制得胶原蛋白多孔微球。胶原蛋白多孔微球的生物相容性和生物降解性均较理想，具有相互连通的外孔和内孔、极低的质量密度以及巨大的比表面积，可保证胶原蛋白的生物活性，还具有多种用途，一方面机械性能优异，足以支撑一定形状的组织，为组织细胞提供良好的再生修复微环境，且交联剂的残留量少，细胞毒性小，使用安全性高；另一方面还具有优异的吸附性能，可作为负载核酸、蛋白质及生长因子等活性成分的载体，冻干后还可制成止血粉，粒径均一，流动性佳，可用于复杂创面局部止血，表现出良好的止血效果。
本申请采用以下技术方案解决上述技术问题：
本申请提供一种胶原蛋白多孔微球的制备方法，其包括如下步骤：将胶原蛋白和酸性溶液混合，经静电纺丝滴加到戊二醛水溶液中，经交联，制得所述胶原蛋白多孔微球；
其中，所述胶原蛋白中I型胶原蛋白的质量百分比为90％以上；所述胶原蛋白占所述酸性溶液的质量百分比为0.1％～2％；所述静电纺丝的电压为10～20kV；所述交联包括化学交联和辐射交联；所述戊二醛水溶液中戊二醛的质量百分比为0.08％～0.7％。
在一些实施方案中，所述胶原蛋白中I型胶原蛋白的质量百分比为95％以上。在一些具体的实施方案中，所述胶原蛋白中I型胶原蛋白的质量百分比为91％、92％、93％、94％、95.8％、96.7％、97.2％或99.2％。
在一些实施方案中，所述胶原蛋白占所述酸性溶液的质量百分比为0.8％～1.7％。在一些具体的实施方案中，所述胶原蛋白占所述酸性溶液的质量百分比为1％～1.5％。当胶原蛋白占所述酸性溶液的质量百分比大于2％时，胶原蛋白在所述酸性溶液中无法完全溶解，所述静电纺丝过程中难以从注射器中推出。
在一些具体的实施方案中，所述胶原蛋白占所述酸性溶液的质量百分比为0.1％、0.3％、0.5％、0.7％、0.9％、1.1％、1.3％、1.6％或1.9％。
在一些实施方案中，所述静电纺丝的电压为10～18kV。在一些具体的实施方案中，所述静电纺丝的电压为11～16kV。在一些更具体的实施方案中，所述静电纺丝的电压为12～15kV。
在一些具体的实施方案中，所述静电纺丝的电压为10kV、11kV、12kV、13kV、14kV、15kV、16kV、17kV、18kV、19kV或20kV。
在一些实施方案中，所述酸性溶液可包括乙酸水溶液和/或盐酸。
在一些实施方案中，所述酸性溶液的pH值可为1.8～5。在一些更具体的实施方案中，所述酸性溶液的pH值为1.8～2.5。
在一些具体的实施方案中，所述酸性溶液的pH值为2、3或4。
在一些实施方案中，所述胶原蛋白和所述酸性溶液的总质量与所述戊二醛水溶液质量的质量比为1：(5～15)。在一些具体的实施方案中，所述胶原蛋白和所述酸性溶液的总质量与所述戊二醛水溶液质量的质量比为1：(8～12)。
在一些更具体的实施方案中，所述胶原蛋白和所述酸性溶液的总质量与所述戊二醛水溶液质量的质量比为1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:11、1:12、1:13、1:14。
在一些实施方案中，所述胶原蛋白和所述酸性溶液在所述混合的过程中，还可进一步添加活性成分。
其中，所述活性成分的种类可根据实际需要进行选择，例如可包括止血因子。所述止血因子可包括凝血酶。
在一些实施方案中，所述静电纺丝过程中使用的针头的内径可为0.06～1.7mm。在一些具体的实施方案中，所述静电纺丝过程中使用的针头的内径为0.1～1.6mm。在一些具体的实施方案中，所述静电纺丝过程中使用的针头的内径为0.16～1.54mm。在一些具体的实施方案中，所述静电纺丝过程中使用的针头的内径为0.16～0.21mm。
在一些具体的实施方案中，所述静电纺丝过程中使用的针头的内径为0.15mm、0.26mm、0.34mm、0.5mm、0.7mm、0.9mm、1.1mm、1.3mm或1.5mm。
在一些实施方案中，所述静电纺丝的接收距离可为18～22cm。按照本领域常规，所述接收距离一般指针头出口端到接收液之间的距离，本申请中指针头出口端到所述戊二醛水溶液之间的距离。
在一些具体的实施方案中，所述静电纺丝的接收距离为18cm、19cm、20cm、21cm或22cm。
在一些实施方案中，所述静电纺丝的推速可为0.5～1.5mL/min。在一些具体的实施方案中，所述静电纺丝的推速为0.8～1.2mL/min。按照本领域常规，所述静电纺丝的推速一般指静电纺丝液从针头中流出时的速度。
在一些具体的实施方案中，所述静电纺丝的推速为0.5mL/min、0.6mL/min、0.7mL/min、0.8mL/min、0.9mL/min、1.0mL/min、1.1mL/min、1.2mL/min、1.3mL/min、1.4mL/min或1.5mL/min。
在一些实施方案中，所述戊二醛水溶液中戊二醛的质量百分比为0.3％～0.7％。当所述戊二醛水溶液中所述戊二醛的质量百分比高于0.7％时，会导致终产品中戊二醛的残留量过高，降低使用安全性。
在一些具体的实施方案中，所述戊二醛水溶液中戊二醛的质量百分比为0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％或0.6％。
在一些实施方案中，所述化学交联和所述辐射交联可同时开始进行。
在一些实施方案中，所述化学交联的时间可为3～24h。在一些具体的实施方案中，所述化学交联的时间为4～8h。
在一些具体的实施方案中，所述化学交联的时间为3h、4h、5h、6h、7h、8h、9h、10h、11h、12h、13h、14h、15h、16h、17h、18h、19h、20h、21h或22h。
在一些实施方案中，所述辐射交联包括核辐射交联。在一些具体的实施方案中，所述核辐射交联的过程中采用的核辐射包括电子束、γ射线、中子束、粒子束中至少一种。在一些更具体的实施方案中，所述核辐射交联的过程中采用的核辐射包括电子束和/或γ射线。在一些更具体的实施方案中，所述γ射线包括基于钴60放射源的γ射线。
在一些实施方案中，所述辐射交联的时间可为10～60min。在一些具体的实施方案中，所述辐射交联的时间为20～40min。
在一些具体的实施方案中，所述辐射交联的时间为15min、20min、25min、30min、35min、40min、45min、50min、55min或60min。
在一些实施方案中，所述辐射交联的吸收剂量单位可为8～25kGy。在一些具体的实施方案中，所述辐射交联的吸收剂量单位为8～15kGy。
在一些具体的实施方案中，所述辐射交联的吸收剂量单位为10kGy、12kGy、14kGy、16kGy、18kGy、20kGy、22kGy或24kGy。
在一些实施方案中，所述交联的操作后还可进一步包括清洗和/或冻干的操作。
其中，所述清洗过程中采用的清洗剂可包括磷酸盐缓冲液、生理盐水和纯化水中至少一种。
其中，所述清洗的次数可为2～5次。在一些具体的实施方案中，所述清洗的次数为3次或4次。
其中，所述清洗的时间可为3～5h/每次。在一些具体的实施方案中，所述清洗的次数为4h/每次。
在一些实施方案中，所述胶原蛋白可包括猪肠膜胶原蛋白和/或牛跟腱胶原蛋白。
在一些实施方案中，所述胶原蛋白的制备方法可包括如下步骤：猪大肠膜和/或牛跟腱经灭活、脱脂、脱细胞、冻干和酶解，制得所述胶原蛋白。
其中，所述灭活的条件和方法可为本领域常规，一般采用灭活溶剂浸泡，即可；
所述灭活的过程中，所述灭活溶剂可包括乙醇和/或乙醇水溶液。
当所述灭活溶剂包括所述乙醇水溶液时，所述乙醇占所述乙醇水溶液的质量百分比可为大于等于45％，小于100％。在一些具体实施方案中，所述乙醇占所述乙醇水溶液的质量百分比为50％～90％。在一些具体实施方案中，所述乙醇占所述乙醇水溶液的质量百分比为60％、70％、75％、80％、85％或95％。
当所述灭活溶剂包括所述乙醇和所述乙醇水溶液时，所述灭活溶剂至少包括4个浓度，且采用每个浓度的所述灭活溶剂时的浸泡时间可为1～3h。在一些具体实施方案中，当所述灭活溶剂包括所述乙醇和所述乙醇水溶液时，所述灭活溶剂至少包括4个浓度，且采用每个浓度的所述灭活溶剂时的浸泡时间为2h。
其中，所述脱脂的条件和方法可为本领域常规，一般采用脱脂液浸泡所述灭活后的物料，即可。
所述脱脂的过程中，所述灭活后的物料与所述脱脂液的质量体积比可为0.1～0.5g/mL。在一些具体实施方案中，所述灭活后的物料与所述脱脂液的质量体积比为0.1～0.3g/mL。在一些具体实施方案中，所述灭活后的物料与所述脱脂液的质量体积比为0.2g/mL或0.4g/mL。
所述脱脂的过程中，所述脱脂液可包括本领域常规使用的溶剂脱脂液，一般可包括烷烃类溶剂脱脂液和/或酮类溶剂脱脂液。在一些具体实施方案中，所述脱脂液包括正己烷和/或丙酮。
所述脱脂的过程中，所述脱脂的次数可为2～4次。在一些具体实施方案中，所述脱脂的次数为3次。
所述脱脂的过程中，所述脱脂的时间可为6～30h/每次。在一些具体实施方案中，所述脱脂的时间为20～26h/每次。在一些具体实施方案中，所述脱脂的时间为10h/每次、15h/每次、24h/每次或28h/每次。
所述脱脂的操作后还可进一步包括清洗的操作。
所述脱脂后的所述清洗的次数可为3～7次。在一些具体实施方案中，所述脱脂后的所述清洗的次数为4～6次。在一些具体实施方案中，所述脱脂后的所述清洗的次数为5次。
所述脱脂后的所述清洗的时间可为不少于20min/每次。在一些具体实施方案中，所述脱脂后的所述清洗的时间不少于30min/每次。
所述脱脂后的所述清洗使用的清洗剂可包括水。
其中，所述脱细胞的条件和方法可为本领域常规，一般采用表面活性剂浸泡所述脱脂后物料，即可。
所述脱细胞过程中，所述表面活性剂可包括非离子表面活性剂和/或阴离子表面活性剂。在一些具体实施方案中，所述非离子表面活性剂可包括醚类非离子表面活性剂。在一些具体实施方案中，所述非离子表面活性剂包括聚乙二醇辛基苯基醚。在一些具体实施方案中，所述阴离子表面活性剂可包括C12～C18脂肪醇硫酸盐类表面活性剂。在一些具体实施方案中，所述阴离子表面活性剂包括十二烷基硫酸钠。
在一较佳实施方案的所述脱细胞过程中，将所述脱脂后的物料依次浸泡在质量百分比为0.5％～2％的聚乙二醇辛基苯基醚水溶液中、浸泡在质量百分比为0.5％～2％的十二烷基硫酸钠水溶液中和浸泡在水中。
在一更佳实施方案的所述脱细胞过程中，具体包括如下步骤：
(A)将25～35g所述脱脂后的物料浸泡在140～160mL质量百分比为0.5％～2％的聚乙二醇辛基苯基醚水溶液中0.5～3h，所述浸泡在摇动的条件下进行；
(B)将步骤(A)制得的物料浸泡在150～200mL质量百分比为0.5％～2％的十二烷基硫酸钠水溶液中6～24h，所述浸泡在摇动的条件下进行；
(C)将步骤(B)制得的物料浸泡在150～200mL质量百分比为0.8％～1.2％的十二烷基硫酸钠水溶液中5～10h，所述浸泡在摇动的条件下进行；
(D)将步骤(C)制得的物料浸泡在水中，所述浸泡的次数至少为5次，所述浸泡的时间不少于30min/每次。
上述步骤(A)、步骤(B)和步骤(C)中，所述摇动的转速可各自独立的为100～300rpm。
其中，所述冻干的条件和方法可为本领域常规，一般可在冻干机中进行。
其中，所述冻干的操作后还可进一步包括粉碎的操作。
其中，所述酶解的条件和方法可为本领域常规，一般将所述冻干后的物料溶解在盐酸乙醇溶液中，再与胃蛋白酶混合，即可。
所述酶解过程中，所述盐酸乙醇溶液中盐酸的浓度为0.005～0.015mol/L，乙醇的质量百分比为4％～10％；在一些具体实施方案中，所述盐酸乙醇溶液中，盐酸的浓度为0.01mol/L，乙醇的质量百分比为5％。
所述酶解过程中，所述冻干后的物料与所述盐酸乙醇溶液的质量体积比为0.005～0.05g/mL。在一些具体实施方案中，所述冻干后的物料与所述盐酸乙醇溶液的质量体积比为0.005～0.02g/mL。在一些具体实施方案中，所述冻干后的物料与所述盐酸乙醇溶液的质量体积比为0.01g/mL、0.03g/mL或0.04g/mL。
所述酶解过程中，所述冻干后的物料与所述胃蛋白酶的质量比可为(8～15)：1。一些具体实施方案中，所述冻干后的物料与所述胃蛋白酶的质量比为(9～12)：1。一些具体实施方案中，所述冻干后的物料与所述胃蛋白酶的质量比为10：1或11：1。
所述酶解过程中，所述酶解的时间可为70～80h。一些具体实施方案中，所述酶解的时间为72h、74h、76h或78h。
其中，所述酶解的操作后还可进一步包括透析和/或二次冻干的操作。所述透析的目的是去除端肽。
在一些实施方案中，所述透析采用的透析袋的截留分子量为40～60kD。在一些具体实施方案中，所述透析采用的透析袋的截留分子量为45kD、50kD或55kD。
在一些实施方案中，所述透析的时间为40～100h。在一些具体实施方案中，所述透析的时间为48～96h。在一些更具体的实施方案中，所述透析的时间为50h、60h、70h、72h、80h或90h。
本申请还提供一种胶原蛋白多孔微球，其由如上所述的胶原蛋白多孔微球的制备方法制得。
本申请还提供一种如上所述的胶原蛋白多孔微球作为原料在制备止血材料或生物支架材料中的应用。
一些实施方案中，所述生物支架材料包括细胞增长支持材料、组织再生促进材料、组织修复促进材料、用于整容手术的植入物和组织置换物。
一具体实施方案中，所述组织包括皮肤、骨、脊髓、肌肉、神经、血管、口腔或角膜。
一更具体实施方案中，所述组织修复促进材料包括骨填充材料。
本申请还提供一种止血材料，其包括如上所述的胶原蛋白多孔微球，还包括被包覆于所述胶原蛋白多孔微球内的止血因子和/或吸附于所述胶原蛋白多孔微球表面的止血因子。
所述止血材料的剂型可为本领域常规使用的粉剂。
本申请还提供一种如上所述的胶原蛋白多孔微球在止血治疗、支持细胞增长、促进组织再生、促进组织修复、植入整容手术和组织置换中的应用。
一些实施方案中，所述组织包括皮肤、骨、脊髓、肌肉、神经、血管、口腔或角膜。
在一具体实施方案中，所述胶原蛋白多孔微球在骨组织修复中的应用。
本申请还提供一种止血治疗方法，其包括将如上所述的胶原蛋白多孔微球施用于有此需要的个体的出血部位。
本申请还提供一种支持细胞增长的方法，其包括将如上所述的胶原蛋白多孔微球施用于有此需要的个体的体内或体外的细胞或细胞群。
本申请还提供一种促进组织再生的方法，其包括将如上所述的胶原蛋白多孔微球施用于有此需要的个体的组织部位。
本申请还提供一种促进组织修复的方法，其包括将如上所述的胶原蛋白多孔微球施用于有此需要的个体的受损组织部位。本申请还提供一种植入整容手术方法，其包括将如上所述的胶原蛋白多孔微球施用于有此需要的个体的缺陷部位。
本申请还提供一种组织置换方法，其包括将如上所述的胶原蛋白多孔微球施用于有此需要的个体的组织部位。
本申请还提供一种骨组织修复方法，其包括将如上所述的胶原蛋白多孔微球施用于有此需要的个体的骨组织部位。
在本发明中，“个体”包括任何人类或非人类动物。术语“非人类动物”包括但不限于脊椎动物例如非人类灵长类、羊、狗和啮齿类，例如小鼠、大鼠和豚鼠。在优选的实施方案中，所述个体是人。当个体是人类时，所述个体在本文中可称为患者。
在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本申请各较佳实例。
本申请的有益效果在于：本申请以胶原蛋白为原料，经复合交联法制得胶原蛋白多孔微球。胶原蛋白多孔微球的生物相容性和生物降解性均较理想，具有相互连通的外孔和内孔、极低的质量密度以及巨大的比表面积，可保证胶原蛋白的生物活性，还具有多种用途，一方面机械性能优异，足以支撑一定形状的组织，为组织细胞提供良好的再生修复微环境，且交联剂的残留量少，细胞毒性小，使用安全性高；另一方面还具有优异的吸附性能，可作为负载核酸、蛋白质及生长因子等活性成分的载体，冻干后还可制成止血粉，粒径均一，流动性佳，可用于复杂创面局部止血，并表现出良好的止血效果。
附图说明
本申请可以通过参考下文中结合附图所给出的描述而得到更好的理解。所述附图连同下面的详细说明一起包含在本说明书中并且形成本说明书的一部分，而且用来进一步举例说明本申请的优选实施例和解释本申请的原理和优点。
其中：
图1为实施例1制得的胶原蛋白多孔微球的光镜图；
图2为实施例1制得的胶原蛋白多孔微球的截面扫描电镜图；
图3为对比例2制得的胶原蛋白多孔微球的光镜图。
具体实施方式
下面通过实施例的方式进一步说明本申请，但并不因此将本申请限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。
下述实施例中所用试剂和原料均市售可得，所用试剂的纯度均为分析纯，在其他实施例中也可用色谱纯试剂。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中的猪大肠膜购自宜宾五尺道集团有限公司。
下述实施例和效果实施例中采用的光镜的厂家为尼康株式会社，设备型号为E200LED。
下述实施例和效果实施例中采用的热场发射扫描电子显微镜的厂家为美国FEI公司，设备型号为FEIQuanta 650FEG。
下述实施例和对比例中胶原蛋白的制备工艺如下：
(1)猪大肠膜预处理和清洗：取猪大肠膜，去除表面脂肪和异物杂质，选光泽度好、韧性强的部位，不锈钢钉耙打孔，随后对其进行清洗；
(2)灭活：采用质量百分比分别为50％、75％、90％的乙醇水溶液和乙醇浸泡步骤(1)制得的物质，每个浓度浸泡的时间为2h；
(3)脱脂：将30g步骤(2)制得的灭活后的物料加入150mL脱脂液中，脱脂液为正己烷，脱脂3次，每次24h，脱脂后用纯化水清洗5次，每次30min；
(4)脱细胞：将30g步骤(3)中脱脂后的物料浸泡在150mL浓度为1wt％的Triton-100(聚乙二醇辛基苯基醚，表面活性剂)溶液中，浸泡1h；再浸泡在150mL浓度为1wt％的SDS(十二烷基硫酸钠)溶液中，摇动浸泡18h；再浸泡在150mL浓度为1wt％的SDS溶液中，摇动浸泡6h；浸泡后用纯化水清洗5次，每次30min；
(5)冻干、酶解：将步骤(4)制得的脱细胞后物料冻干、粉碎；取2g粉碎后的物料加入200mL含盐酸0.01mol/L和含乙醇5wt％的混合溶液，加入200mg胃蛋白酶进行酶解72h，采用截留分子量为50kD的透析袋透析纯化去除端肽，得到胶原蛋白溶液，并冻干，制得胶原蛋白。
步骤(5)中，当透析时间为48h时，制得的胶原蛋白中I型胶原蛋白的浓度为95.8％。
步骤(5)中，当透析时间为60h时，制得的胶原蛋白中I型胶原蛋白的浓度为96.7％。
步骤(5)中，当透析时间为72h时，制得的胶原蛋白中I型胶原蛋白的浓度为97.2％。
步骤(5)中，当透析时间为96h时，制得的胶原蛋白中I型胶原蛋白的浓度为99.2％。
本申请中，胶原蛋白中I型胶原蛋白的浓度的测试方法参照《YY/T1453-2016组织工程医疗器械产品I型胶原蛋白表征方法》中附录A。
实施例1
胶原蛋白多孔微球的制备：将上述制得的胶原蛋白溶解在质量百分比为5％的乙酸水溶液(pH值为2)中，溶解后的体系中胶原蛋白的质量百分比为1％，胶原蛋白中I型胶原蛋白的质量百分比浓度为95.8％，将溶解后物料转移到静电纺丝设备中，采用30号针头(内径为0.16mm)，在电压为12kV，接收距离为20cm，推速为1mL/min的条件下进行静电纺丝，滴入质量百分比为0.5％的戊二醛水溶液中，胶原蛋白和乙酸水溶液的总质量与戊二醛水溶液质量的质量比为1：10，化学交联6h，并同时开始进行辐射交联，核辐射交联的过程中采用的核辐射为电子束(核辐射装置为BFT-II型辐照装置，厂家北京核二院比尼新技术有限公司)，吸收剂量单位为10kGy，辐射交联的时间为30min，采用PBS溶剂清洗4次，每次4h，并冻干，得到冻干的胶原蛋白多孔微球，胶原蛋白多孔微球在热场发射扫描电子显微镜(FEIQuanta 650FEG)下测得的表观粒径为180～232μm。
实施例2～4
与实施例1相比，区别仅在于电压、针头内径或接收距离不同，导致制得的胶原蛋白多孔微球的粒径不同，其他条件参数同实施例1，具体参数变化和在热场发射扫描电子显微镜(FEIQuanta 650FEG)下测得的表观粒径请见下方表1。
表1
实施例5～6
与实施例1相比，区别仅在于胶原蛋白中I型胶原蛋白的质量百分比浓度不同，其他条件参数同实施例1，具体参数变化请见下方表2。
表2
编号 胶原蛋白中I型胶原蛋白的浓度
实施例5 97.2wt％
实施例6 99.2wt％
实施例7
胶原蛋白多孔微球的制备：将实施例1制得的胶原蛋白溶解在质量百分比为5％的乙酸水溶液(pH值为2)中，溶解后的体系中胶原蛋白的质量百分比为1.5％，胶原蛋白中I型胶原蛋白的浓度为96.7wt％，将溶解后物料转移到静电纺丝设备中，采用14号针头(内径为1.54mm)，在电压为12kV，接收距离为20cm，推速为1mL/min的条件下进行静电纺丝，滴入质量百分比为0.1％的戊二醛水溶液中，胶原蛋白和乙酸水溶液的总质量与戊二醛水溶液质量的质量比为1：10，化学交联6h，并进行辐射交联，核辐射交联的过程中采用的核辐射为电子束(核辐射装置为BFT-II型辐照装置，厂家北京核二院比尼新技术有限公司)，吸收剂量单位为10kgy，辐射交联的时间为30min，采用PBS溶剂清洗3次，每次4h，并冻干，得到冻干的胶原蛋白多孔微球。
对比例1
与实施例1相比，区别仅在于将胶原蛋白的浓度调整为0.01％，戊二醛水溶液的浓度为0.1wt％，其他条件参数同实施例1。
对比例2
与实施例1相比，区别仅在于将静电纺丝过程中的电压调整为25kV，其他条件参数同实施例1。
对比例3
与实施例1相比，区别仅在于将戊二醛水溶液的浓度调整为0.8wt％，其他条件参数同实施例1。
对比例4
与实施例1相比，区别仅在于交联的方法仅采用化学交联，不采用辐射交联的方法，其他条件参数同实施例1。
对比例5
与实施例1相比，区别仅在于将静电纺丝过程中的电压调整为9kV，其他条件参数同实施例1。
对比例6
与实施例1相比，区别仅在于将静电纺丝过程中的电压调整为9kV，针头的内径调整为0.21mm，其他条件参数同实施例1。
效果实施例1
对上述实施例和对比例在制备过程中的成球性、微球形状和表观粒径进行观察，结果见表3，实施例1制得胶原蛋白多孔微球的光镜图见图1，胶原蛋白多孔微球的横截面扫描电子显微镜图见图2；对比例2制得胶原蛋白多孔微球的光镜图见图3。本效果实施例中，光镜的厂家为尼康株式会社，设备型号为E200LED；热场发射扫描电子显微镜的厂家为美国FEI公司，设备型号为FEI Quanta 650FEG。
表3
结果表明，根据对比例1的结果可知，当戊二醛和胶原蛋白的浓度过低时，交联度低，不易成球；根据对比例2的结果可知，静电纺丝时的电压过大，制得产品会出现拖尾和形成大小球现象，当制成粉剂后流动性差，作为止血粉使用时，不易从容器嘴喷出，喷出后分散面积较大，不能均匀分布在目标位置；根据对比例5和6的结果可知，静电纺丝时的电压太小时，制备速度低，粒径较大，制得球体呈椭圆形，制成粉剂后流动性差，作为止血粉使用时，不易从容器嘴喷出。
效果实施例2
戊二醛属于易致毒交联剂，药典规定疫苗中戊二醛残留含量不超过0.01mg/mL。采用液相色谱法对上述实施例和对比例制得的产品中戊二醛的残留量进行测定，结果见表4。
表4
结果表明，对比例3中当戊二醛添加量过高时，终产品中戊二醛含量超标，产品毒性大。
效果实施例3
止血材料的制备方法包括如下步骤：与上述实施例和对比例的制备工艺相比，区别仅在于胶原蛋白和乙酸水溶液混合的过程中添加凝血酶，溶解后的体系中凝血酶的质量百分比为10mg/mL，其他条件参数与上述实施例和对比例相同，制得止血材料，测试上述制得的止血材料的吸水性(质量溶胀率)和止血因子包覆率，结果见表5。
质量溶胀率的测试方法包括：称量止血材料初始质量G1，加入纯化水直至止血材料不再吸水，称量吸水后产品的质量为G2，质量溶胀率＝(G2-G1)/G1×100％。
止血因子包覆率的测试方法包括：止血材料制备过程中，凝血酶的添加量为m1；交联后，收集清洗微球的清洗液，采用ELISA法测量收集的清洗液中凝血酶的含量为m2，差量法计算包覆率＝(m1-m2)/m1×100％。
表5
表5中“--”代表未测试，部分对比例由于产品未成球或成球形状不理想，无应用价值，因此未测试上述数据。
结果表明，采用上述实施例方法制得的止血材料的吸水性能均较好，质量溶胀率可高达到130倍以上，一般粒径越小越均匀，吸水性越强；止血因子包覆率均高于80％。
效果实施例4
按GB 23101.1-2008《外科植入物羟基磷灰石第1部分：羟基磷灰石陶瓷》4.4中规定的方法，测试上述实施例和对比例所制得产品的机械性能，结果见表6。
待测样的制备工艺和测试方法包括如下步骤：采用各实施例和对比例的配方，放入底圆直径为1cm，高1.8cm的圆柱体模具中，交联后冻干，制得待测样。
以实施例2为例，待测样的制备工艺为：将胶原蛋白溶解在质量百分比为5％的乙酸水溶液(pH值为2)中，溶解后的体系中胶原蛋白的质量百分比为1％，胶原蛋白中I型胶原蛋白的浓度为95.8wt％，将溶解后物料转移到底圆直径为1cm，高1.8cm的圆柱体模具中，向模具中滴加质量百分比为0.5％的戊二醛水溶液，溶解后物料与戊二醛水溶液的质量比为20：1，化学交联6h，并同时开始进行辐射交联，核辐射交联的过程中采用的核辐射为电子束(核辐射装置为BFT-II型辐照装置，厂家北京核二院比尼新技术有限公司)，吸收剂量单位为10kGy，辐射交联的时间为30min，采用PBS溶剂清洗4次，每次4h，并冻干，得到实施例2待测样。
采用微机控制电子试验机(UTM4204，三思纵横科技股份有限公司)进行抗压强度测试，使用圆柱形样品轴向加载，压缩速率为0.5mm/min，测量开始破裂瞬间记录的加载力的平均值。
表6
编号 抗压强度(MPa)
实施例2 0.148
实施例5 0.152
实施例6 0.156
实施例7 0.169
对比例1 0.052
对比例4 0.118
结果表明，采用上述实施例方法制得的圆柱体，抗压强度均较理想。根据对比例4结果可知，单纯的化学交联制得产品的机械性能较差，轻微受力易破碎，不适合作为骨填充材料。
最后，还需要说明的是，在本申请中术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。
尽管上面已经通过本申请的具体实施例的描述对本申请进行了披露，但是，应该理解，本领域技术人员可在所附方案的精神和范围内设计对本申请的各种修改、改进或者等同物。这些修改、改进或者等同物也应当被认为包括在本申请所要求保护的范围内。

Claims (10)

1.一种胶原蛋白多孔微球的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将胶原蛋白和酸性溶液混合，经静电纺丝滴加到戊二醛水溶液中，经交联，制得所述胶原蛋白多孔微球；
其中，所述胶原蛋白中I型胶原蛋白的质量百分比为90％以上；所述胶原蛋白占所述酸性溶液的质量百分比为0.1％～2％；所述静电纺丝的电压为10～20kV；所述交联包括化学交联和辐射交联；所述戊二醛水溶液中戊二醛的质量百分比为0.08％～0.7％。
2.如权利要求1所述的胶原蛋白多孔微球的制备方法，其特征在于，所述制备方法满足下述条件中至少一种：
所述胶原蛋白中I型胶原蛋白的质量百分比为95％以上；
所述胶原蛋白占所述酸性溶液的质量百分比为0.8％～1.7％；
所述静电纺丝的电压为10～18kV；
所述酸性溶液包括乙酸水溶液和/或盐酸；
所述酸性溶液的pH值为1.8～5；
所述胶原蛋白和所述酸性溶液的总质量与所述戊二醛水溶液质量的质量比为1：(5～15)；
所述胶原蛋白和所述酸性溶液在所述混合的过程中还进一步添加活性成分；
所述静电纺丝过程中使用的针头的内径为0.06～1.7mm；
所述静电纺丝的接收距离为18～22cm；
所述静电纺丝的推速为0.5～1.5mL/min；
所述戊二醛水溶液中戊二醛的质量百分比为0.3％～0.7％；
所述化学交联和所述辐射交联同时开始进行；
所述化学交联的时间为3～24h；
所述辐射交联包括核辐射交联；
所述辐射交联的时间为10～60min；
所述辐射交联的吸收剂量单位为8～25kGy；
所述交联的操作后还进一步包括清洗和/或冻干的操作；以及
所述胶原蛋白包括猪肠膜胶原蛋白和/或牛跟腱胶原蛋白。
3.如权利要求2所述的胶原蛋白多孔微球的制备方法，其特征在于，所述制备方法满足下述条件中至少一种：
所述胶原蛋白占所述酸性溶液的质量百分比为1％～1.5％；
所述静电纺丝的电压为11～16kV；
所述酸性溶液的pH值为1.8～2.5；
所述胶原蛋白和所述酸性溶液的总质量与所述戊二醛水溶液质量的质量比为1：(8～12)；
所述活性成分包括止血因子；较佳地，所述止血因子包括凝血酶；
所述静电纺丝过程中使用的针头的内径为0.1～1.6mm，较佳地为0.16～1.54mm，更佳地为0.16～0.21mm；
所述静电纺丝的推速为0.8～1.2mL/min；
所述化学交联的时间为4～8h；
所述核辐射交联的过程中采用的核辐射包括电子束、γ射线、中子束、粒子束中至少一种，较佳地包括电子束和/或γ射线；较佳地，所述γ射线包括基于钴60放射源的γ射线；
所述辐射交联的时间为20～40min；以及
所述辐射交联的吸收剂量单位为8～15kGy。
4.如权利要求1～3中任意一项所述的胶原蛋白多孔微球的制备方法，其特征在于，所述胶原蛋白的制备方法包括如下步骤：猪大肠膜和/或牛跟腱经灭活、脱脂、脱细胞、冻干和酶解，制得所述胶原蛋白。
5.如权利要求4所述的胶原蛋白多孔微球的制备方法，其特征在于，所述胶原蛋白的制备方法满足下述条件中至少一种：
所述灭活的方法包括如下步骤：采用灭活溶剂浸泡所述猪大肠膜和/或所述牛跟腱；
所述脱脂的方法包括如下步骤：采用脱脂液浸泡所述灭活后的物料；
所述脱脂的次数为2～4次；
所述脱脂的时间为6～30h/每次；
所述脱脂的操作后还进一步包括清洗的操作；
所述脱细胞的方法包括如下步骤：采用表面活性剂浸泡所述脱脂后物料；
所述冻干的操作后还进一步包括粉碎的操作；
所述酶解的方法包括如下步骤：将所述冻干后的物料溶解在盐酸乙醇溶液中，再与胃蛋白酶混合；以及
所述酶解的操作后还进一步包括透析和/或二次冻干的操作。
6.如权利要求5所述的胶原蛋白多孔微球的制备方法，其特征在于，所述胶原蛋白的制备方法满足下述条件中至少一种：
所述灭活过程中，所述灭活溶剂包括乙醇和/或乙醇水溶液；
所述脱脂过程中，所述灭活后的物料与所述脱脂液的质量体积比为0.1～0.5g/mL；
所述脱脂过程中，所述脱脂液包括烷烃类溶剂和/或酮类溶剂，较佳地包括正己烷和/或丙酮；
所述脱细胞过程中，所述表面活性剂包括非离子表面活性剂和/或阴离子表面活性剂；较佳地，所述非离子表面活性剂包括醚类非离子表面活性剂，更佳地包括聚乙二醇辛基苯基醚；较佳地，所述阴离子表面活性剂包括C12～C18脂肪醇硫酸盐类表面活性剂，更佳地包括十二烷基硫酸钠；
所述酶解过程中，所述盐酸乙醇溶液中盐酸的浓度为0.005～0.015mol/L，乙醇的质量百分比为4％～10％；
所述酶解过程中，所述冻干后的物料与所述盐酸乙醇溶液的质量体积比为0.005～0.05g/mL，较佳地为0.005～0.02g/mL；
所述酶解过程中，所述冻干后的物料与所述胃蛋白酶的质量比为(8～15)：1，较佳地为(9～12)：1；
所述酶解的时间为70～80h；
所述酶解后的所述透析过程中，所述透析采用的透析袋的截留分子量为40～60kD；以及
所述酶解后的所述透析过程中，所述透析的时间为40～100h。
7.一种胶原蛋白多孔微球，其特征在于，由如权利要求1～6中任意一项所述的胶原蛋白多孔微球的制备方法制得。
8.一种如权利要求7所述的胶原蛋白多孔微球作为原料在制备止血材料或骨填充材料中的应用。
9.一种止血材料，其特征在于，包括如权利要求7所述的胶原蛋白多孔微球，还包括被包覆于所述胶原蛋白多孔微球内的止血因子和/或吸附于所述胶原蛋白多孔微球表面的止血因子。
10.如权利要求9所述的止血材料，其特征在于，所述止血材料的剂型为粉剂。
CN202311524550.9A 2023-09-15 2023-11-15 一种胶原蛋白多孔微球及其制备方法和应用 Pending CN117482292A (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202311196035 2023-09-15
CN2023111960352 2023-09-15

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN117482292A true CN117482292A (zh) 2024-02-02

Family

ID=89667230

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202311524550.9A Pending CN117482292A (zh) 2023-09-15 2023-11-15 一种胶原蛋白多孔微球及其制备方法和应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN117482292A (zh)

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002040242A1 (en) * 2000-11-17 2002-05-23 Virginia Commonwealth University Intellectual Property Foundation Electroprocessed collagen
US20060204539A1 (en) * 2005-03-11 2006-09-14 Anthony Atala Electrospun cell matrices
US20070160653A1 (en) * 2006-01-11 2007-07-12 Fischer Thomas H Hemostatic textile
EP2021035A2 (en) * 2006-05-19 2009-02-11 The University of Hong Kong Cell-matrix microspheres, methods for preparation and applications
CN103276472A (zh) * 2013-06-03 2013-09-04 郑州大学 胶原蛋白/聚乙烯醇复合微球及其制备方法和用途
CN105597144A (zh) * 2015-12-31 2016-05-25 北京湃生生物科技有限公司 一种可吸收胶原止血粉及其制备方法
US20170247430A1 (en) * 2014-09-26 2017-08-31 University Of South Carolina Novel biofabrication techniques for the implementation of intrinsic tissue geometries to an in vitro collagen hydrogel

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002040242A1 (en) * 2000-11-17 2002-05-23 Virginia Commonwealth University Intellectual Property Foundation Electroprocessed collagen
US20060204539A1 (en) * 2005-03-11 2006-09-14 Anthony Atala Electrospun cell matrices
US20070160653A1 (en) * 2006-01-11 2007-07-12 Fischer Thomas H Hemostatic textile
EP2021035A2 (en) * 2006-05-19 2009-02-11 The University of Hong Kong Cell-matrix microspheres, methods for preparation and applications
CN103276472A (zh) * 2013-06-03 2013-09-04 郑州大学 胶原蛋白/聚乙烯醇复合微球及其制备方法和用途
US20170247430A1 (en) * 2014-09-26 2017-08-31 University Of South Carolina Novel biofabrication techniques for the implementation of intrinsic tissue geometries to an in vitro collagen hydrogel
CN105597144A (zh) * 2015-12-31 2016-05-25 北京湃生生物科技有限公司 一种可吸收胶原止血粉及其制备方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CA2733273C (en) Porous sponge-like tissue repair implant comprising a connective tissue homogenate
Xu et al. Accurately shaped tooth bud cell–derived mineralized tissue formation on silk scaffolds
JP7297739B2 (ja) 脂肪組織製品および製造方法
CN108478868B (zh) 可注射型同种异体脂肪脱细胞基质微粒的制备方法及应用
CN101020082B (zh) 一种骨修复材料及其制备方法和用途
Guo et al. Hyaluronic acid-based interpenetrating network hydrogel as a cell carrier for nucleus pulposus repair
CA2715288A1 (en) Compositions and methods for implantation of adipose tissue and adipose tissue products
JP7463273B2 (ja) 流動性無細胞組織マトリックス製品および製造方法
CN114949359B (zh) 一种脱细胞基质微粒填充剂及其制备方法
US11246994B2 (en) Methods for introduction of flowable acellular tissue matrix products into a hand
Wu et al. A new bone repair scaffold combined with chitosan/hydroxyapatite and sustained releasing icariin
JP2022017214A (ja) 生体材料インプラントおよびそれを作製する方法
Zhang et al. Self-assembling peptide and nHA/CTS composite scaffolds promote bone regeneration through increasing seed cell adhesion
KR20120010506A (ko) 골재생재 및 그 제조방법
JP7467509B2 (ja) アスコルビン酸を含有する注入可能な水性インプラント製剤
CN117482292A (zh) 一种胶原蛋白多孔微球及其制备方法和应用
CN115137883B (zh) 一种仿生复合矿化支架及其制备方法
US10994052B2 (en) Method for producing suspended form of ground decellularized extracellular matrix
CN113679889B (zh) 一种脱细胞基质复合材料及其制备方法和应用
KR101650414B1 (ko) 가교 결합된 히알루론산을 포함하는 치과용 골 충전재의 제조방법
CN111359020A (zh) 软组织修复材料及其制备方法和应用
CN114569787B (zh) 骨修复材料及其制备方法、应用
CN115837095B (zh) 用于组织工程的支架及其在促进细胞分布中的应用
CN117618671A (zh) 胶原蛋白填充剂、制备方法及其应用
CN117752856A (zh) 一种植骨材料及其制备方法与应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
TA01 Transfer of patent application right
TA01 Transfer of patent application right

Effective date of registration: 20240322

Address after: Room 06, 7th Floor, Building 2, Zone 2, No. 186 South Fourth Ring West Road, Fengtai District, Beijing, 100160

Applicant after: Beijing Taikang Pharmaceutical Technology Development Co.,Ltd.

Country or region after: China

Address before: Room 310, Building 6, No. 26 Yongwang West Road, Daxing Biomedical Industry Base, Zhongguancun Science and Technology Park, Daxing District, Beijing, 102629

Applicant before: Beijing Dikang pharmaceutical investment management Co.,Ltd.

Country or region before: China