CN1174681C - 长川霉素农用杀菌剂及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种以长川霉素为有效成分的农用杀菌剂及其制备方法和应用。该杀菌剂的制备方法包括先培养生黑孢链霉菌长川变种SPRI 98520 CGMCC No.0638;再将发酵培养物进行分离提取,用丙酮或乙醇将菌丝体破壁后与发酵液合并,经树脂交换分离,并用丙酮或乙醇解吸,解吸液浓缩或进而纯化得长川霉素;再添加助剂配制而得。试验结果表明,该杀菌剂特别对防治作物灰霉病、玉米小斑病等多种病害有卓越的效果。与现有药剂相比,具有用量少,农民使用成本低、使用范围广等优点,而且稳定性好,安全低毒。
Description
技术领域
本发明是关于以长川霉素为有效成份的农业园艺杀菌剂和其制备方法,以及该杀菌剂的应用。
背景技术
近年来,利用微生物代谢产物研究开发成为药物(包括医药、农药、兽药)的技术正在被广泛应用,如用作医用抗生素的青霉素、链霉素等,在农用、兽用方面有防治水稻纹枯病的井冈霉素、防治多种螨虫和夜蛾的阿维菌素等。尽管如此,目前国内用于防治农业病虫害的真正具有应用价值的微生物源农药并不太多,在农用杀菌剂方面,主要有:井冈霉素(防治水稻纹枯病、小麦纹枯病以及棉花、黄瓜立枯病)、春雷霉素(防治水稻稻瘟病和高梁炭疽病)、灭瘟素(防治水稻稻瘟病)、多抗霉素(防治小麦白粉病、烟草黑星病、黄瓜霜霉病、人参和三七的黑斑病、瓜类枯萎病等)、公主岭霉素(防治高梁散黑穗病)、农抗120(防治白粉病、炭疽病、枯萎病、纹枯病等)、梧宁霉素(防治苹果、梨的腐烂病)等约10个品种。总体来说,除井冈霉素已形成大规模生产外,其他品种的生产量都较小,故目前国内在防治作物病害时仍然以化学合成农药为主(除防治水稻纹枯病用井冈霉素外)。由于长期使用这些药剂,许多病害已产生了相当严重的抗性,如由于长期使用多菌灵,灰霉病抗性已十分普遍,农民在防治灰霉病时不得不几十倍的加大用药量,而效果却越来越差,相反抗性却越来越严重,进入了一个恶性循环之中;而且由于一些化学药剂大量使用以及较高的残留,对环境造成了很大的压力。所以,亟需一些新型的高效、低毒、对环境友好的药剂来替代这些老产品。
发明内容
本发明是提供一种有效成份为长川霉素的新农用杀菌剂,并提供一种从链霉菌属的微生物中分离、提取长川霉素,再添加适当助剂制备成农用杀菌剂产品的方法,以及利用该产品进行防治作物病害的应用,从而开发出一种稳定性好、高效、安全低毒的新农药。
本发明人为了寻找比以往更有效的杀菌剂,从多种土壤中分离出微生物来制取微生物代谢产物,然后对这些代谢产物分别进行精制、鉴定和开发应用。在此过程中,本发明人发现由属于链霉菌属的一种菌种所产生的代谢产物对多种作物病害有优良的防治效果,经对有效成份的精制、鉴定,命名为长川霉素。经鉴定对照发现长川霉素平面结构与文献报道的子囊霉素(Ascomycin)相同,图谱分析及数据比较见图3-10。据1964年的Journal of antibiotic第15期第231页报道,子囊霉素由链霉菌KKS317(S.Sp.)经发酵产生,是一个大环内酯类抗生素,具有防治分枝杆菌607、黑根霉、米曲霉、白色假丝酵母、趾间发癣霉、须发癣霉等皮肤真菌病的作用。
长川霉素农用杀菌剂的制备方法
一.使用的微生物
用来得到本发明所述的长川霉素的微生物是一种属于链霉菌属的菌种,具有生产该抗生素的能力。1987年7月从我国广西梧州地区的土壤中分离而得的生黑孢链霉菌广西变种SPRI 98520菌株就具有上述特性,适用于生产本发明所述的长川霉素。SPRI 98520菌株于2001年9月27日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏,保藏编号为(CGMCC NO.0638)。该菌株的形态特征、培养特征、生理生化特征及菌种分类结果如下:
1.形态特征在高氏合成一号琼脂,葡萄糖天门冬素琼脂上插片培养7-15天后,SPRI 98520菌种的基内菌丝体无横隔、不断裂、无分生孢子,气生菌丝体分支较多,孢子丝波曲至初级螺旋(1-2圈)时常形成吸水斑,孢子似形成横隔分裂,表面粗糙,有疣状突起物(见图1和图2)。
2.培养特征SPRI 98520菌株在八种培养基上的生长结果(见表1)
表1.SPRI 98520菌株的培养特征
培养基 | 气生菌丝 | 基内菌丝 | 可溶性色素 |
高氏合成一号琼脂 | 鼠灰、黑色吸水斑 | 无色 | 无 |
葡萄糖天门冬素琼脂 | 灰色、黑色吸水斑 | 无色 | 无 |
甘油察氏琼脂 | 浅黄色吸水斑 | 浅黄 | 无 |
无机盐淀粉琼脂 | 灰白色少量吸水斑 | 微黄 | 无 |
酵母麦牙浸汁琼脂 | 浅黄灰湿黑吸水斑 | 无色 | 无 |
马铃薯浸汁琼脂 | 灰色黑色吸水斑 | 黄褐色 | 无 |
营养琼脂 | 浅黄黑色吸水斑 | 微黄 | 无 |
燕麦粉琼脂 | 浅灰黑色吸水斑 | 黄褐色 | 无 |
3.生理生化特征(见表2)
生长温度范围 17-36℃
最适生长温度 24-36℃
PH生长范围 PH5~10
最适PH PH5~9
表2.SPRI 98520菌株的生理生化特征
生理生化特征 | 结果 | 生理生化特征 | 结果 |
D-葡萄糖 | + | 明胶液化 | + |
D-木糖 | + | 牛奶凝固 | - |
D-甘露醇 | + | 牛奶胨化 | + |
D-果糖 | + | 淀粉水解 | - |
L-阿拉伯糖 | - | 纤维素上生长 | + |
L-肌醇 | - | 硝酸盐还原 | - |
L-鼠李糖 | - | H2S产生 | - |
绵子糖 | + | 类黑色素产生 | - |
蔗糖 | - | 酪氨酸酶产生 | - |
4.化学分类
(1)菌株SPRI 98520含有LL-DAP(LL-Diaminopimelic acid二氨基
庚二酸)、甘氨酸、糖型C(无特征性糖),细胞壁化学组份属于I型。
(2)SPRI 98520菌株含有磷脂酰乙醇胺(PE),磷酸类脂属于II型。
(3)醌的测定:醌是位于细胞膜上的电子传递体,放线菌细胞膜上的醌主要为甲基奈醌(MK)。SPRI 98520菌株含有MK9(H4、6、8),其中MK9(H6)含量少。
5.菌种鉴定结果
根据形态与化学分类定属原则,SPRI 98520菌株基内菌丝体无横格、不断裂、无分生孢子,气生菌丝体生长良好,分支好,孢子丝有波曲至初级螺旋,生长15天后形成湿黑吸水斑,孢子表面有疣状物,细胞壁化学组份为I型,磷酸类脂为II型,甲基奈醌MK9(H4、6、8),属于链霉菌属(Streptomyces)。
根据多项分类结合培养特征和生理生化特性定种的原则,SPRI-250菌株的气生菌丝体及孢子丝均有湿黑吸水斑,基内菌丝体无色或黄褐色,无可溶性色素,属于链霉菌吸水类群(StreptomycesHygroscopicus)。我们与已知子囊霉素产生菌比较,结果见表3、表4,从比较结果可看出,SPRI 98520菌株与子囊霉素产生菌差异很大,虽然同属链霉菌属吸水类群,但从形态特征、培养特征及生理生化特征比较有很大差异。但是SPRI 98520菌株的形态特征、培养特征及生理生化特征均与已知种生黑孢链霉菌很相似(表5),因此SPRI98520菌株定名为生黑孢链霉菌广西变种(Streptomycesmelanosporofaciens var.guangxicus)。
表3.SPRI 98520菌株和子囊霉素产生菌种形态及培养特征比较
菌种 | SPRI 98520菌株 | 子囊霉素产生菌 | |
形态特征 | 孢子丝波曲至初级螺旋,孢子呈短柱形,表面粗糙,有疣状突起物 | 气生菌丝为3-5紧螺旋,孢子椭圆或短柱形,表面光滑 | |
营养特征 | 葡萄糖天门冬琼脂 | 气丝:灰色、黑色吸水斑基丝:无色可溶性色素:无 | 气丝:灰色丰满基丝:淡黄绿色可溶性色素:黄色 |
葡萄糖察氏琼脂 | 气丝:灰色、黑色吸水斑基丝:乳黄色可溶性色素:无 | 气丝:白色至灰色,黑色吸水斑基丝:淡柠檬色至棕色可溶性色素:淡棕绿色 | |
营养琼脂 | 气丝:淡黄黑色吸水斑基丝:微黄可溶性色素:无 | 气丝:灰色基丝:淡棕绿色可溶性色素:无 | |
淀粉琼脂 | 气丝:灰白色少量吸水斑基丝:微黄可溶性色素:无 | 气丝:鼠灰粉状表面镶嵌黑色基丝:淡黄色可溶性色素:无 | |
酵母麦芽琼脂 | 气丝:浅黄湿黑吸水斑基丝:无色可溶性色素:无 | 气丝:白色贫乏基丝:黄棕色皱折表面有裂隙可溶性色素:无 | |
所产活性物质 | 长川霉素 | 子囊霉素 |
表4.SPRI 98520与菌株和子囊霉素产生菌生理生化特征比较
菌种 | SPRI 98520菌株 | 子囊霉素产生菌 |
明胶液化 | + | + |
淀粉水解 | - | + |
硝酸盐还原 | - | - |
牛奶胨化 | + | - |
牛奶凝固 | - | + |
纤维素利用 | + | + |
温度试验 | 生长范围为17-36℃最适温度24-36℃ | 生长范围为18-40℃最适24-36℃ |
PH试验 | 生长范围为PH5-10最适PH5-9 | 生长范围为PH5-12,最适PH6-8 |
表5.SPRI 98520菌株与生黑孢链霉菌(S.melanosporus)
形态特征、培养特征及生理生化特征比较
菌种 | SPRI 98520菌株 | 生黑孢链霉菌 | |
形态特征 | 孢子丝波曲至初级螺旋,孢子呈短柱形,表面粗糙,有疣状突起物。 | 孢子丝圈环至螺旋形,时常呈吸水斑,孢子似横隔分裂,表面带疣。 | |
培养特征 | 淀粉琼脂 | 气丝:灰白色少量吸水斑基丝:微黄可溶性色素:无 | 气丝:初呈灰色,后变湿黑基丝:无色至黄色可溶性色素:无 |
甘油天门冬琼脂 | 气丝:灰色、黑色吸水斑基丝:无色可溶性色素:无 | 气丝:初呈灰色,后变湿黑基丝:无色至黄色可溶性色素:无 | |
酵母麦芽琼脂 | 气丝:浅黄湿黑吸水斑基丝:无色可溶性色素:无 | 气丝:灰色变湿黑基丝:暗灰黄至橙黄可溶性色素:无 | |
燕麦琼脂 | 气丝:浅灰黑色吸水斑基丝:黄褐色可溶性色素:无 | 气丝:灰色变湿黑基丝:浅黄至浅灰橄榄可溶性色素:无 | |
生理生化特征 | 类黑色素 | - | - |
H2S | - | - | |
D-葡萄糖 | + | + | |
L-阿拉伯糖 | - | + | |
D-木糖 | + | + | |
D-果糖 | + | + | |
鼠李糖 | - | + | |
棉子糖 | + | + | |
肌醇 | - | + | |
D-甘露糖 | + | + | |
蔗糖 | - | - |
二.微生物培养及长川霉素制备
用链菌属的上述产生菌,通过常规的抗生素生产方法,可以经菌种及种子培养得SPRI 98520菌株,在玻璃瓶中在24-30℃振荡培养36-40小时,作为种子,又通过发酵培养及分离培养及分离提取制得本发明所述的长川霉素。培养方法既可为深层液体培养,也可为固体培养。为了有利于工业性的培养,宜将上述生产菌的孢子悬浮液接种到培养基上,并进行通气搅拌。
对培养基中的营养源并无特殊的规定,可使培养基中含有常用于微生物培养的碳源、氮源及其他营养源。其中碳源可为淀粉、糊精、葡萄糖、甘油、蔗糖、甘露醇等,氮源可为肉胨、黄豆饼粉、花生粉、酵母、肉膏、米糠、玉米浆、麦皮、铵盐、尿素、硝酸盐以及其他有机或无机含氮化合物。其他营养源可适当添加一些无机盐类,例如食盐、磷酸盐及钾、钙、锰、铁等金属盐。必要时可添加一些动、植、矿物油等作为消泡剂。
培养的种子以5-20%的比例接种于培养基组成的发酵培养液中,对温度、PH、时间等发酵培养条件并无严格的限制,以适于产生菌的生产为准,并以选择长川霉素产量最高的条件为好。例如,培养基的PH范围可为6-8,以接近中性为好;培养温度在24-30℃,培养时间90-96小时,通气比(每分钟通过培养液的空气体积与培养液体积之比)可采用1∶0.3-4,并保证罐压为0.02-0.1Mpa。这些培养基的组份、PH、培养温度、培养时间、通气条件等均应根据实际情况进行适当的调整,以获得最好的效果。
由上述所得的培养物出发,通过一些适当的方法就能制得长川霉素。例如,可利用长川霉素与杂质在溶解度、离子结合力、分配系数、吸附亲和力及分子量等方面的差异进行提取精制。这些方法可单独使用,也可适当配合或反复使用。具体地讲,长川霉素同时存在于发酵液和菌丝体中,将菌丝体丙酮、乙醇等有机溶剂破壁提取,所用有机溶剂与菌丝体重量比为2-3∶1,与发酵液合并后,通过大孔吸附树脂吸附,然后用丙酮或乙醇等有机溶剂解吸,解吸液经浓缩后得到粗提物(含长川霉素20%左右);粗提物再经过硅胶层析,就可得到淡黄色的半精制品(含长川霉素85%左右)。最后利用长川霉素与少量杂质在不同溶剂中的溶解度不同,进行重结晶,即可得到长川霉素纯品,纯度可达98-99%。得到的长川霉素纯品具有如下理化性质:
1.外观:无色至淡黄色粉末状结晶;
2.熔点:148-152℃;
3.溶解性:可溶于甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿、乙腈等,微溶于正己烷、汽油等,不溶于水;
4.紫外吸收:末端吸收,图谱见图3;
5.质谱(MS,FAB+):表明分子量为791,图谱见图4;
6.氢谱(1HNMR):图谱见图5,
7.碳谱(13CNMR):δ(ppm,CDCl3)
213.04(s) 196.21(s) 169.07(s) 164.92(s) 138.67(s) 132.46(s)
193.23(s) 168.85(s) 165.97(s) 139.53(s) 131.96(s)
130.20(d) 123.42(d) 97.28(s) 84.37(d) 77.80(d) 75.53(d)
130.08(d) 123.59(d) 98.75(s) 78.24(d) 76.98(d)
73.92(d) 73.69(d) 73.11(d) 70.11(d) 57.02(q) 56.60(q)
72.72(d) 69.21(d) 57.43(q)
56.23(d) 56.72(d) 55.10(d) 48.90(d) 40.19(d) 27.67(t)
55.98(d) 52.92(d) 54.98(d) 48.57(d) 40.63(d) 26.32(t)
26.51(d) 24.60(t) 21.19(t) 20.47(q) 16.21(q) 15.83(q)
26.44(d) 20.86(t) 19.75(q) 15.97(q) 15.94(q)
14.04(q) 11.68(q) 9.64(q)
14.16(q) 9.93(q)
图谱见图6;
根据紫外光谱(UV)、质谱(MS)、氢谱(1HNMR)、碳谱(13CNMR)以及其他数据及谱图,确定该化合物分子式为:C43H69NO12,推定该化合物平面结构如下:
经检索,与文献报道的子囊霉素平面结构相同。子囊霉素的紫外、质谱、氢谱、碳谱分别见图7到图10。
三.农业园艺杀菌剂制备
本发明所述的长川霉素农用杀菌剂是一种对因病原菌引起的植物病害,特别是各类灰霉病、玉米小斑病、水稻稻瘟病、瓜类炭疽病等有效的杀菌剂。它对作物的病害具有预防和治疗作用,而且还具有低毒、安全、对光稳定等性能。在制造本发明所述的以长川霉素为有效成份的农用杀菌剂时,可同样使用该技术领域已知农药所通用的固相、液相及乳化分散剂等各种载体和助剂,并能配制成颗粒剂、粉剂、乳剂、可湿性粉剂、片剂、微胶囊剂、油剂、喷雾剂、胶悬剂等任意的剂型。同时,在各种制剂中一般可适当添加一些辅助剂,如分散剂、乳化剂、润湿剂、渗透剂、展着剂、粘着剂、消泡剂、发泡剂、增粘剂、稳定剂等,但不能加入碱性辅助剂。
各种制剂中有效成份的含量,可根据不同的使用目的而适当增减。一般来说,粉剂、可湿性粉剂、颗粒剂、片剂的有效成份范围通常在1-70重量%,乳剂、油剂、胶悬剂、喷雾剂的有效成份范围在0.2-30重量%,微胶囊剂在10-80重量%。
本发明长川霉素农用杀菌剂的使用方法是将其各种制剂按对不同作物病害和作物的防治要求稀释成一定浓度,采用喷雾器均匀喷洒在作物上即可。
长川霉素农用杀菌剂可防治多种植物病害,具体来说,可防治灰霉病(Botrytis cinerea)、抗性灰霉病(Botrytis cinerea resistance)、玉米小斑病(Helminthosporium maydis)、瓜类炭疽病(Colletotrichumlagenarium)、水稻白叶枯病(Xanthomonas oryzae)、棉花枯萎病(Fusarium oxysporum,f.vasinfectum)、水稻稻瘟病(Pyriculariaoryzae)、水稻胡麻斑病(Helminthosporium oryzae)、小麦赤霉病(Gibberella zeae)、水稻纹枯病(Rhizoctonia solani)、油菜菌核病(Sclerotinia sclerotiorum)、马铃薯晚疫病菌(Phytophthora infestans)、黄瓜霜霉病(Pseudo Peronosporacubensis)、瓜白粉病(Sphaerotheca fuliginea)、早疫病菌(Alternaria solani)、梨轮纹病(Physalospora piricoraNose)、蜡叶枝孢霉(Cladosporium herbarum M-44)、土曲霉(Aspergillus terreus)、棕曲霉(Aspergillus ochraceus M-130)、出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans M-266)、变色曲霉(Aspergillus versicolor M-41)、球毛壳霉(Chaetomiumglobosum M-70)、拟青霉(Paecilomyces sp.M-43)、绳状青霉(Penicillum funiculosum M-184)、根霉(Rhizopus sp.M-59)、毛霉(Actinomucor elegans M-211)、绿色木霉(Trichoderma viride)、交链孢霉(Alternaria sp)、小球藻(Chlorella vulgaris)、大肠杆菌(Eshchcrichia coli)、枯草杆菌(Bacillus subtilis)。
下面实施例7至实施例13的结果表明,以本发明所述的以长川霉素为有效成份的药剂是一种新型的农用杀菌剂,该药剂特别对防治作物灰霉病、玉米小斑病等多种病害有卓越的效果。与现有药剂相比,本发明所述的长川霉素具有高效用量少(在同等防治效果时,每亩用量长川霉素仅为3-12.5克,而其它现有药剂需20-500克)、农民使用成本低(长川霉素每亩使用成本为4元左右,而其它现有药剂需8元左右)、使用范围广(长川霉素可防治灰霉病抗性菌和敏感菌以及其它31种病害,而目前常用药剂往往只能防治少数几个病害)等优点,而且稳定性好,安全低毒。此外,利用本发明制备长川霉素农用杀菌剂时,可充分利用黄豆饼粉、玉米粉、羽毛粉等农副产品,变废为宝,使长川霉素杀霉菌剂生产成本降低。
通过以下附图及实施例将对本发明作进一步阐明,但并不限制本发明内容。
附图说明
图1是SPRI 98520菌株的菌丝体及孢子丝的形态,光学显微镜照片(800x)。
图2是SPRI 98520菌株的孢子表面特征,电子显微镜照片(100,000x)。
图3是长川霉素的紫外光谱图。
图4是长川霉素的质谱图(FAB-MS)。
图5是长川霉素的1HNMR谱图。
图6是长川霉素的13CNMR谱图。
图7是子囊霉素的紫外光谱图。
图8是子囊霉素的质谱图(FAB-MS)
m/z:830(M+K)、814(M+Na)、714(M-OH)、756(M-OH-H2O)。
图9是子囊霉素的1HNMR谱图。
图10是子囊霉素的13CNMR谱图。
具体实施方式
实施例1 长川霉素制造
以葡萄糖3%、淀粉5%、花生饼粉1%、黄豆饼粉2%、蛋白胨0.1%、酵母膏0.4%、氯化钠0.2%、硫酸镁0.5%、硝酸胺0.2%、磷酸氢二钾0.05%的比例制成培养基,PH调节到7.2,消毒灭菌。将上述SPRI 98520菌种接种于该培养基中,在250ml三角摇瓶中装50ml,在28℃下振荡培养40小时;以此培养物为种子,以20%的比例接种于上述100公斤培养基组成的发酵培养液中,28℃通气搅拌培养90小时。取该发酵培养液,过滤,得滤渣20公斤,用60公斤80%含水丙酮搅拌浸泡8小时,将菌丝体破壁后,再与80公斤滤液合并,通过5公斤HP20型大孔吸附树脂;然后用5公斤40%丙酮洗涤树脂,再用10公斤80%丙酮解吸。解吸液10公斤浓缩后得500克黄色油状物I(含长川霉素20%)。取I100克通过硅胶层析,用正己烷∶甲醇以20∶1的比例展开,收集活性组份,浓缩该组份得22克淡黄色粉末II(含长川霉素85%)。取II10克,用甲醇溶解、结晶,得淡黄色结晶III约8克(含长川霉素99%)。对所得长川霉素通过紫外、核磁共振、质谱分子量测定,证实其结构与已知的子囊霉素相同(见图3-10)。
实施例2 长川霉素可湿性粉剂制备
取实施例1中得到的I或II、或III40份与2份木质素磺酸钠、4份拉开粉、2份浸润剂LS以及52份硅藻土混合、粉碎,即得100份所需含量的可湿性粉剂。
实施例3 长川霉素乳剂制备
将实施例1中得到的I或II、或III28份与10份乙二醇、20份二甲基甲酰胺、10份二甲苯及32份乙醇混合,即得100份所需含量的乳剂。
实施例4 长川霉素粉剂制备
将实施例1中得到的I或II、或III2份与5份硬脂酸钙、50份滑石粉及43份陶土混合粉碎,即得100份所需含量的粉剂。
实施例5 长川霉素胶悬剂制备
将实施例1中得到的I或II、或III20份与0.15份拉开粉、0.15份苯酚、1.2份十八烷基硫酸钠、1.2份司盘、0.1份吐温、0.6份乙二醇以及76.6份水混合均匀,即得100份所需含量的胶悬剂。
实施例6 长川霉素颗粒剂制备
根据所需要的含量,取实施例1中得到的I或II、或III10份与15份淀粉、72份皂土粉及3份硫酸十二烷基酯的钠盐混合、粉碎,即得100份所需含量的颗粒剂。
实施例7 应用长川霉素预防灰霉病
将按实施例1所制备的I、II、III或实施例2、3、4、5、6所制备的长川霉素制剂稀释至所预定浓度,均匀喷洒在一张真叶期黄瓜苗上,待药液干后在黄瓜叶片中央接种灰霉病病菌,在20℃下保湿72小时,检查发病情况,计算预防效果。试验结果表明24毫克/升的长川霉素就可达到100%的预防效果。试验结果见表6。
表6.长川霉素预防黄瓜灰霉病效果
处理药剂及浓度 | 预防效果(%) |
长川霉素 12毫克/升 | 0 |
长川霉素 14毫克/升 | 27.37 |
长川霉素 16毫克/升 | 81.05 |
长川霉素 18毫克/升 | 87.89 |
长川霉素 20毫克/升 | 92.91 |
长川霉素 22毫克/升 | 97.54 |
长川霉素 24毫克/升 | 100 |
清水对照 | -- |
实施例8 应用于防治番茄灰霉病
将按实施例2、3、4、5、6所制备的长川霉素制剂稀释至所预定的浓度(有效成份分别为25、50、100毫克/升),同时以50%速克灵可湿粉300毫克/升作对照药剂,清水作空白对照。采用喷雾器均匀喷雾,药液量每亩50升。试验结果表明,每亩用长川霉素有效成分2.5克左右,就可达到70%以上的防治效果,而目前常用药剂每亩需150克以上才能达到相似防治效果。试验结果如表7。
表7.长川霉素防治番茄灰霉病试验结果
处理 | 重复 | 防治效果 | |
长川霉素25毫克/升 | 1 | 63.2 | 62.7 |
2 | 58.4 | ||
3 | 64.1 | ||
4 | 65.2 | ||
长川霉素50毫克/升 | 1 | 70.6 | 70.3 |
2 | 72.9 | ||
3 | 67.7 | ||
4 | 71.0 | ||
长川霉素100毫克/升 | 1 | 76.5 | 76.2 |
2 | 79.2 | ||
3 | 73.1 | ||
4 | 76.8 | ||
50%速克灵可湿粉300毫克/升 | 1 | 64.3 | 62.7 |
2 | 63.8 | ||
3 | 61.5 | ||
4 | 61.3 | ||
空白对照 | - | - |
实施例9 应用于防治玉米小斑病
在玉米苗长到大喇叭期(13叶1心)时,用玉米小斑病菌孢子悬浮液进行喷雾接种,接种后1小时,将按实施例2、3、4、5、6所制备的长川霉素制剂稀释至所预定浓度,分别进行喷雾处理,将叶片正反面喷湿,叶片上形成水层,直到叶面上有多余的液体下滴为止。以甲基托布津做对照药剂,清水做空白对照,每个处理设3个重复,15天后调查防治结果。试验结果表明,防治玉米小斑病时亩用长川霉素12.5克,就可达到80%以上的防治效果,可显著优于对照药剂50克/亩的防效。试验结果见表8。
表8.长川霉素防治玉米小斑病结果
处理药剂 | 浓度(毫克/升) | 平均防治效果 |
长川霉素 | 125 | 68.2 |
长川霉素 | 250 | 84.4 |
长川霉素 | 500 | 88.8 |
甲基托布津 | 1000 | 8.6 |
水 | - | - |
实施例10 应用于防治草莓、茄子灰霉病
将按实施例2、3、4、5、6所制备的长川霉素制剂稀释至所预定浓度,用进口药剂速克灵做对照药剂,清水做空白对照,在草莓和茄子灰霉病发病初期喷药,每隔7天喷1次,共喷3次,亩用药液量70公斤。最后一次喷药后7天调查发病率、病情指数及防治效果。试验结果表明亩用长川霉素7克左右,就可有效防治草莓和茄子的灰霉病。试验结果见表9。
表9.应用长川霉素防治草莓、茄子灰霉病
处理药剂 | 使用浓度(毫克/升) | 草莓防效(%) | 茄子防效(%) |
长川霉素 | 50 | 66.4 | 73.4 |
长川霉素 | 100 | 70.0 | 79.4 |
长川霉素 | 200 | 86.2 | 81.6 |
速克灵 | 334 | 69.6 | 72.2 |
清水对照 | - | - | - |
实施例11 防治其他作物病害
将按实施例1所制备的I、II、III或实施例2、3、4、5、6所制备的长川霉素制剂稀释至所预定浓度,在室内采用培养皿法(除水稻白叶枯病、黄瓜霜霉病、瓜类白粉病用盆栽法外)作试验,同时以清水作空白对照,结果如表10。
表10.长川霉素可的防治病害
青霉) | |||||||
Rhizopus sp.M-59(根霉) | 100 | 100 | 100 | 98 | 94 | 90 | 88 |
Actinomucor elegans M-211(毛霉) | 90 | 90 | 88 | 88 | 80 | 80 | 55 |
Trichoderma viride(绿色木霉) | 100 | 100 | 100 | 100 | 92 | 88 | 54 |
Alternaria sp(交链孢霉) | 98 | 92 | 90 | 85 | 80 | 72 | 35 |
Eshchcrichia coli(大肠杆菌) | 90 | 80 | 80 | 60 | 45 | 45 | 45 |
Bacillus subtilis(枯草杆菌) | 100 | 100 | 100 | 92 | 81 | 64 | 0 |
实施例12 长川霉素对多菌灵抗性菌株、敏感菌株的作用
在长川霉素处理过的黄瓜苗上,分别接种灰霉病菌、多菌灵抗性菌和敏感菌,一周后调查发病情况。试验结果表明,长川霉素对多菌灵抗性菌和敏感菌都有良好的防治效果。试验结果见表11。
表11,长川霉素对多菌灵抗性菌株、敏感菌株的作用
处理 | 病原菌 | 防治效果(%) |
长川霉素25毫克/升 | 敏感菌 | 70 |
抗性菌 | 70 | |
长川霉素50毫克/升 | 敏感菌 | 100 |
抗性菌 | 100 | |
多菌灵250毫克/升 | 敏感菌 | 100 |
抗性菌 | 30 | |
乙霉威250毫克/升 | 敏感菌 | 30 |
抗性菌 | 100 | |
空白对照 | 敏感菌 | 0 |
抗性菌 | 0 |
实施例13 太阳光照射稳定性试验
用100、50、25毫克/升的长川霉素药液在一张真叶期的盆栽黄瓜苗上分别喷药,置于太阳光下直接照射6小时(光照强度为800-1000烛光/平方米),然后用灰霉病菌接种,20℃下保湿72小时,检查发病情况,计算防治效果。试验结果表明,长川霉素对光照稳定,太阳光照6小时后,防效仍达到100%。结果见表12。
表12.太阳光照射对长川霉素药效的影响
处理 | 浓度(毫克/升) | 效果(%) |
长川霉素 | 100 | 100 |
长川霉素 | 50 | 100 |
长川霉素 | 25 | 100 |
乙霉威 | 250 | 100 |
空白对照 | - | - |
Claims (7)
2.按权利要求1所述的农用杀菌剂,其特征在于所述杀菌剂的剂型是乳剂、油剂、胶悬剂、喷雾剂时,则其中长川霉素有效成份的含量为0.2-30重量%。
3.按权利要求1所述的农用杀菌剂,其特征在于所述杀菌剂的剂型是粉剂、可湿性粉剂、颗粒剂、片剂时,则其中长川霉素有效成份的含量为1-70重量%。
4.按权利要求1所述的农用杀菌剂,其特征在于所述杀菌剂的剂型是微胶囊剂时,则其中长川霉素有效成分的含量为10-80重量%。
5.权利要求1所述农用杀菌剂的制备方法,其特征在于包括先培养生黑孢链霉菌广西变种SPRI 98520,再将发酵培养物进行分离提取,用丙酮或乙醇将菌丝体破壁后,与发酵液合并,经树脂交换分离,并用丙酮或乙醇解吸,解吸液浓缩或进而纯化得长川霉素,再添加载体和助剂配制而得。
6.按权利要求5所述农用杀菌剂的制备方法,其特征在于所述杀菌剂可配制成颗粒剂、粉剂、乳剂、可湿性粉剂、片剂、微胶囊剂、油剂、喷雾剂、胶悬剂的剂型。
7.按权利要求1所述农用杀菌剂的应用,其特征在于所述杀菌剂可防治下列作物病害:灰霉病、抗性灰霉病、玉米小斑病、瓜类炭疽病、水稻白叶枯病、棉花枯萎病、水稻稻瘟病、水稻胡麻斑病、小麦赤霉病、水稻纹枯病、油菜菌核病、马铃薯晚疫病菌(Phytophthora infestans)、黄瓜霜霉病、瓜白粉病、早疫病菌(Alternaria solani)、梨轮纹病、蜡叶枝孢霉(Cladosporium herbarum M-44)、土曲霉(Aspergillus terreus)、棕曲霉(Aspergillus ochraceus M-130)、出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans M-266)、变色曲霉(Aspergillus versicolor M-41)、黑曲霉(Aspergillus niger)、球毛壳霉(Chaetomium globosum M-70)、拟青霉(Paecilomyces sp.M-43)、绳状青霉(Penicillum funiculosum M-184)、根霉(Rhizopussp.M-59)、毛霉(Actinomucor elegans M-211)、绿色木霉(Trichoderma viride)、交链孢霉(Alternaria sp)、小球藻(Chlorellavulgaris)、大肠杆菌(Eshchcrichia coli)、枯草杆菌(Bacillussubtilis)。
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