CN117462476A - 一种口腔护理组合物及其制备方法、预防儿童龋齿的牙膏 - Google Patents
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Abstract
本发明提出了一种口腔护理组合物及其制备方法、预防儿童龋齿的牙膏,属于口腔健康技术领域。由以下原料制备而成:溶菌酶、纤维素酶、胰蛋白酶、右旋糖酐酶、抗菌肽、β‑葡聚糖、透明质酸钠、绿茶发酵提取物、蜂胶提取物、甘草酸二钾、山梨酸钾、山梨醇、甘油、氟化钠、甜味剂、泊洛沙姆407、磨擦剂0.01‑70%、润湿剂、发泡剂、粘合剂,去离子水余量。本发明口腔护理组合物采用多种生物活性物质组合,可高效抑制/杀死口腔致病菌、维护口腔健康微生态稳态、减少酸类物质对牙釉质侵蚀,在护龈、抗炎、预防牙周疾病、抗龋齿方面具有优良效果,并保持持久效力。
Description
技术领域
本发明涉及口腔健康技术领域,具体涉及一种口腔护理组合物及其制备方法、预防儿童龋齿的牙膏。
背景技术
调查研究表明,我国5岁儿童龋齿患病率为70.9%。龋齿的发生主要是由于儿童喜食甜食、进食频繁,喝碳酸饮料等;儿童刷牙不应时或刷牙不足2分钟,导致食物残渣清理不净、残留较多成为口腔病原菌大量滋生,初期病原菌在牙齿表面定植聚集,其后转化食物残渣中的糖类物质,形成自身的胞外多糖,这些胞外多糖是生物膜形成的重要组成成分。随着细菌繁殖增多,生物膜增厚,包裹着细菌及其他细菌沉积物,逐渐形成牙菌斑,而牙菌斑特别容易沉积在由于长期横向刷牙或外力造成的牙釉质细微损伤处。在形成的菌斑生物膜内,细菌进一步发酵食物残渣中的糖类物质,产生的短链酸类物质,能引起牙齿表面和菌斑界面间pH下降,引发牙齿表面矿物质丧失,经过一定的时间,引起牙齿有机物溶解、无机物脱矿,逐渐牙体破坏,龋洞形成。最终使得牙齿硬组织溶解,形成龋齿。儿童乳牙矿化度较低,龋齿发展速度快。
根据龋齿形成机理,预防龋齿形成主要集中在以下几个方面:(1)抑菌口腔致病菌繁殖,从源头上减少细菌代谢引起产酸;(2)减少细菌生物膜的形成,避免牙菌斑的产生;(3)减少牙齿表面脱矿。
目前已有一些专利针对上述三个环节进行研究。中国专利CN113576942B在牙膏中添加以葡萄糖氧化酶、益生菌和氯化钠为芯材的双层微胶囊结构,酶制剂分解口腔中的糖类,降低口腔中糖类物质的含量。中国专利CN101264046B公布了一种含酶牙膏及其制备方法,用于去除牙齿附着的葡聚糖和蛋白质物质,防止细菌滋生,从而达到美白牙齿的目的。中国专利CN113025447B公开清除生物膜的组合物,包括右旋糖酐酶、抗右旋糖酐单克隆抗体以及缓冲液,应用于清除制糖工业设备表面细菌生物被膜。中国专利CN107693392B公开一种去垢酶和抑/杀菌酶构成的酶制剂组合物,以分解牙垢中的水溶性葡聚糖,预防牙垢的形成,以及去除牙垢。专利文献CN104666112B、CN103462847A、CN105250332B、CN105213298A、CN106176690B、CN106344450A均采用透明质酸为主要活性成分,用于牙龈炎和口咽腔粘膜炎的抗炎、抑制口腔溃疡与消除口腔异味、防治牙齿敏感和牙龈出血、消除红肿、促进口腔黏膜和组织的修复和再生,减低发炎和伤口渗出的效果。这些专利在抵抗糖酵解产酸对牙齿酸蚀研究中,多从单一路径出发,防龋手段有限。中国专利申请CN115252459A增加了酶制剂、生物多糖的应用,分解菌斑生物膜,去除已生成生物膜,防止菌斑生物膜形成,减少代谢产酸。但以上这些专利中,作用维持时间有限,使用效果不佳,一旦停止使用该产品,口腔生态环境仍然受到威胁。而关于生物酶、口腔益生菌、抗菌肽、生物多糖的联合应用在维护口腔微生态、减少酸类物质对牙釉质侵蚀方面的研究,尚无相关专利。
发明内容
本发明的目的在于提出一种口腔护理组合物及其制备方法、预防儿童龋齿的牙膏,可高效抑制/杀死口腔致病菌、维护口腔健康微生态稳态、减少酸类物质对牙釉质侵蚀,在护龈、抗炎、预防牙周疾病、抗龋齿方面具有优良效果,并保持持久效力。
本发明的技术方案是这样实现的:
本发明提供一种口腔护理组合物,由以下原料按照质量百分比制备而成:溶菌酶3-7%、纤维素酶0.001-2%、胰蛋白酶0.001-2%、右旋糖酐酶0.001-2%、抗菌肽0.01-5%、β-葡聚糖0.01-5%、透明质酸钠0.01-5%、绿茶发酵提取物3-10%、蜂胶提取物0.05-5%、甘草酸二钾0.05-5%、山梨酸钾0.05-5%、山梨醇1-30%、甘油0.1-15%、氟化钠0.05-1%、甜味剂0.1-5%、泊洛沙姆407 0.05-5%、磨擦剂0.01-70%、润湿剂0.01-50%、发泡剂0.01-5%、粘合剂0.01-5%,去离子水余量。
进一步地,甜味剂为糖精钠。
进一步地,磨擦剂为碳酸钙、沉淀二氧化硅、水不溶性偏磷酸钠、纳米羟基磷灰石中的一种或多种。
进一步地,发泡剂为月桂醇硫酸钠。
进一步地,粘合剂为羧甲基纤维素、羟乙基纤维素中的一种或多种。
进一步地,润湿剂为甘油、丙二醇、山梨醇、木糖醇中的一种或多种。
作为本发明的进一步改进,所述溶菌酶由改性溶菌酶替代,所述改性溶菌酶的制备方法如下:
S1.热处理:将鸡卵白溶菌酶加入无菌水中,调节溶液pH值,加热处理,冷却至室温,制得热处理鸡卵白溶菌酶体系;
S2.超高压微波处理:将步骤S1中的热处理鸡卵白溶菌酶体系进行微波处理后,进行超高压处理,制得处理后鸡卵白溶菌酶体系;
S3.化学修饰:向步骤S2中的处理后鸡卵白溶菌酶体系中加入二硫苏糖醇和肉桂酸,调节溶液pH值,加入催化剂和改性剂,加热搅拌反应,离心,洗涤,干燥,制得改性溶菌酶。
作为本发明的进一步改进,步骤S1中所述鸡卵白溶菌酶和无菌水的质量比为10-12:1000,所述调节溶液pH值为6-6.5,所述加热处理的温度为60-70℃,时间为20-30min;步骤S2中所述微波处理的功率为400-500W,时间为2-4min,所述超高压处理的压力为400-450MPa,温度为20-25℃,时间为10-15min;步骤S3中所述处理后鸡卵白溶菌酶体系、二硫苏糖醇、肉桂酸、催化剂和改性剂的质量比为1000:2-4:4-7:16-40:1-2,所述催化剂为1-乙基(3-二甲氨基丙基)-3-碳二亚胺,所述改性剂为可溶性锌盐,选自氯化锌、硫酸锌、硝酸锌、柠檬酸锌、葡萄糖酸锌中的至少一种,所述调节溶液pH值为7.5-8,所述加热搅拌反应的温度为40-45℃,时间为3-5h。
作为本发明的进一步改进,所述绿茶发酵提取物的制备方法如下:
T1.绿茶的预酶解:将绿茶茶叶粉碎制得茶粉,加入水中,加入复合酶,加热预酶解,制得茶酶解体系;
T2.绿茶的发酵:将步骤T1制得的茶酶解体系灭菌,接种活化的副干酪乳杆菌和鼠李糖乳杆菌菌种种子液,酶助发酵培养,过滤,滤液干燥,制得发酵提取物,滤渣经过水洗获得益生菌菌液,剩余固渣干燥留用;将益生菌菌液中加入海藻酸钠和乳化剂,加入鱼油中,乳化,滴加氯化钙溶液,常温固化,离心,洗涤,干燥,制得益生菌颗粒;
T3.水提取:将步骤T2中的固渣加入水中,加热至沸提取,过滤,滤液干燥,固渣干燥留用,制得水提取物;
T4.醇提取:将步骤T3中的固渣加入乙醇水溶液中,加热提取,过滤,滤液回收乙醇,干燥,制得醇提取物;
T5.绿茶发酵提取物的制备:将步骤T2中的发酵提取物和益生菌颗粒、步骤T3中的水提取物、步骤T4中的醇提取物混合均匀,制得绿茶发酵提取物。
作为本发明的进一步改进,步骤T1中所述茶粉、水、复合酶的质量比为15-20:150-200:1-2,所述复合酶包括纤维素酶和果胶酶,质量比为5-7:4,所述加热预酶解的温度为40-45℃,时间为0.5-1h;步骤T2中所述活化的副干酪乳杆菌和鼠李糖乳杆菌菌种种子液的接种量分别为1-2v/v%和2-3v/v%,所述酶助发酵培养的条件为36-38℃,70-100r/min,酶助发酵培养48-56h,所述菌种种子液的含菌量为108-109cfu/mL,所述滤渣经过3-4倍体积的水洗,所述益生菌菌液、海藻酸钠、乳化剂和鱼油的质量比为100-120:12-15:0.5-1:200-250,所述乳化剂选自甜菜碱、卵磷脂、吐温-20、吐温-40、吐温-60、吐温-80中的至少一种,所述常温固化的时间为20-30min。
作为本发明的进一步改进,步骤T3中所述固渣和水的质量比为10-15:100,所述加热至沸提取的时间为2-4h;步骤T4中所述固渣和乙醇水溶液的质量比为15-20:100,所述乙醇水溶液的浓度为70-80wt%,所述加热提取的温度为60-70℃,时间为1-2h;步骤T5中所述发酵提取物、益生菌颗粒、水提取物、醇提取物的质量比为10-12:5-7:3-5:2-4。
本发明进一步保护一种上述口腔护理组合物在制备预防儿童龋齿的口腔护理产品中的应用。
作为本发明的进一步改进,所述口腔护理产品包括牙膏、漱口水、牙粉。
本发明进一步保护一种预防儿童龋齿的牙膏的制备方法,包括以下步骤:
(1)将山梨醇和泊洛沙姆407加入4/5的去离子水中,搅拌至完全溶解;加入甜味剂、氟化钠搅拌至完全溶解;加入甘油,搅拌均匀后再加入溶菌酶或改性溶菌酶、纤维素酶、胰蛋白酶、右旋糖酐酶、抗菌肽、β-葡聚糖、绿茶发酵提取物、蜂胶提取物、甘草酸二钾、山梨酸钾,搅拌30-40min制成水相;
(2)将磨擦剂、润湿剂、发泡剂、粘合剂和剩余的去离子水,按比例混匀,混合时间为60-70min,混合搅拌速度设置为80-100r/min,混合完成后,加入(1)步骤产物,制得牙膏所需膏体;
(3)搅拌条件下,将牙膏所需膏体中加入透明质酸钠,搅拌混合15-20min制得预防儿童龋齿的牙膏。
作为本发明的进一步改进,所述甜味剂为糖精钠,所述磨擦剂为碳酸钙,所述发泡剂为月桂醇硫酸钠,所述粘合剂为羧甲基纤维素、所述润湿剂为丙二醇。
本发明进一步保护一种牙粉的制备方法,包括以下步骤:
(1)将糖精钠、氟化钠、碳酸钙搅拌均匀;加入甘油,搅拌均匀后再加入溶菌酶、纤维素酶、胰蛋白酶、右旋糖酐酶、抗菌肽、β-葡聚糖、绿茶提取物、蜂胶提取物、甘草酸二钾、山梨酸钾,搅拌30min,过筛,慢慢地加入水,加入月桂醇硫酸钠、羧甲基纤维素,搅拌均匀。在真空干燥器中50℃干燥2-3h至完全干燥后,粉碎成至混合物成为一种颜色均匀、质地细腻的牙粉。
(2)将制作好的牙粉倒入干净的容器中,封闭保存,使用时取适量涂在牙刷上即可。
本发明进一步保护一种漱口水的制备方法,包括以下步骤:
(1)将山梨醇和泊洛沙姆407加入去离子水中,搅拌至完全溶解;加入糖精钠、氟化钠搅拌至完全溶解;加入甘油,搅拌均匀后再加入溶菌酶、纤维素酶、胰蛋白酶、右旋糖酐酶、抗菌肽、β-葡聚糖、绿茶提取物、蜂胶提取物、甘草酸二钾、三梨酸钾,搅拌30min制成水相,过滤得清液;
(2)将香精加入丙二醇中搅拌均匀,制成油相;
(3)搅拌条件下,将油相加入水相,搅拌15min。最后加入透明质酸钠,搅拌15min至完全溶解,过滤得清液。
本发明具有如下有益效果:本发明口腔护理组合物采用多种生物活性物质组合,可高效抑制/杀死口腔致病菌、维护口腔健康微生态稳态、减少酸类物质对牙釉质侵蚀,在护龈、抗炎、预防牙周疾病、抗龋齿方面具有优良效果,并保持持久效力。
口腔中有几百种细菌,包括有害菌和有益菌,有害菌是对我们口腔造成危害的细菌,主要以变异链球菌、远缘链球菌以及具核梭杆菌为代表,它们将口腔中残留的食物残渣分解成酸、有害的物质,腐蚀我们的牙齿和牙龈的同时还会释放硫化氢气体,从而带来口臭;有益菌如本发明绿茶发酵提取物中添加的副干酪乳杆菌和鼠李糖乳杆菌,通过竞争性抑制,来阻碍有害菌的生长,达到口腔菌群平衡,从而解决口臭等口腔问题。
在口腔细菌中的革兰氏阳性细菌细胞壁主要由肽聚糖等多糖和小分子肽蛋白组成,在细胞壁的网状结构中糖苷键和肽键是其主要的连接键。本发明通过添加溶菌酶可通过水解细胞壁和外膜层中肽聚糖的糖苷键(N-乙酰胞壁酸C-1与N-乙酰葡萄糖胺C-4之间的β-1-糖苷键、肽键如D-Ala与Lys间肽键等)和酰胺键(如N-乙酰壁酸与Ala间酰胺键等),使细菌细胞壁网状结构破坏,细胞壁溶解而死亡。但是,一般鸡卵白溶菌酶对革兰氏阳性菌有很好的消杀效果,而对革兰氏阴性菌的杀灭效果较弱,因此,为了提高了对革兰氏阴性细菌的杀灭能力,本发明制备了一种改性溶菌酶。
本发明改性溶菌酶首先将溶菌酶经过热处理,热处理后的溶菌酶形成的二聚体形式插入到革兰氏阴性菌的细胞膜内,造成细胞破裂,从而对革兰氏阴性菌的杀菌效果增强。
进一步,本发明对热处理后的溶菌酶进行微波和超高压处理,经过微波协同超高压处理后,溶菌酶的分子三维构象结构发生轻微变化,蛋白质疏水基团的暴露,从而使得其的抑菌活性的增强。
最后,本发明采用化学修饰对溶菌酶的分子结构进行改性,改性剂包括二硫苏糖醇和肉桂酸,其中,二硫苏糖醇使溶菌酶二硫键还原或与胱氨酸中的二硫键反应形成一个含分子内二硫键的稳定六元环,导致蛋白质分子暴露了更多的表面疏水域,改变了它的圆二特性,从而增强了和细胞膜结合的亲和力,更利于杀灭革兰氏阴性菌。而溶菌酶中的赖氨酸与肉桂酸共价结合,改变其化学分子结构,增强对细菌外壳蛋白的溶解作用,使得其对杀灭大肠杆菌等革兰氏阴性菌的消杀作用明显增强。
在最后改性过程中,还添加了可溶性锌盐,由于溶菌酶的二硫键以及其他氨基酸能够很好的络合Zn离子,使得溶菌酶上负载有一定量的Zn,明显增强了制得的产品修复破损黏膜的作用,同时,提高了血清Zn浓度,提高机体免疫力;血清中有微量锌离子存在时,不利于念珠菌菌丝形成。
而经过本发明系列改性后,溶菌酶的活性并没有发生明显改变,而对革兰氏阴性细菌的消杀作用显著增强,对革兰氏阳性细菌的消杀作用也有一定程度的增强,对破损黏膜有很好的修复作用。
另外,生物溶菌酶还可以参与机体的免疫反应,从而保持机体生理平衡。它还可改善和增强巨噬细胞吞噬和消化功能,激活白细胞吞噬功能,从而增强机体的免疫力,还具有激活血小板的功能,可以改善组织局部血液循环,增强局部防御功能。
另外,本发明还添加了绿茶发酵提取物,首先通过添加复合酶,包括纤维素酶和果胶酶,能够明显提高绿茶粉植物细胞壁的酶解破裂,促进茶活性成分的溶出,进一步,在益生菌,包括副干酪乳杆菌和鼠李糖乳杆菌的酶促发酵作用下,一方面能大大提高了对绿茶粉植物细胞壁的破坏作用,另一方面,也能促进益生菌的增殖和有益组分的生成。
随后提取得到的发酵提取物,水提取得到的水提取物和醇提取得到的醇提取物中含有丰富的茶活性成分,包括茶多酚、茶生物碱、茶色素、茶皂素、茶氨酸、茶多糖、维生素、氟等。茶多酚、茶生物碱等可以抑制细菌滋生,通过消炎、清热解毒等功能治疗修复,使得口腔恢复健康卫生状态。一方面茶多酚够发挥抗菌功能抑制菌落繁殖,为牙齿营造更好的空间环境,避免牙釉质被腐蚀破坏,维持其应有的牙齿保护功能;另一方面氟类物质会参与到牙釉质再矿化过程中,使被破坏的牙釉质由最初的羟基磷灰石变为更加坚硬的氟磷灰石,进而更好地防止腐蚀。咖啡碱能够通过加快人体代谢促进烟毒更快排出体外。茶氨酸、维生素等营养物质可以补充身体营养与调节内部循环,进而传导至舌苔毛细血管修复被破坏或者萎缩的味蕾粘膜,使其机能得到恢复,茶多酚、茶色素、茶多糖等具有的抗氧化、抗菌等功能可以为味蕾恢复营造良好条件,加快受损味蕾愈合与消除炎症速度,从而更有助于口腔健康。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
鸡卵白溶菌酶,50万U/g,含量>99%,购于金华文盛生物科技有限公司。
纤维素酶,1万U/g,果胶酶,1万U/g,购于南宁东恒华道生物科技有限责任公司。胰蛋白酶,25万U/g,购于上海源叶生物科技有限公司;右旋糖酐酶,10万U/g,购于山东微研生物科技有限公司。
蜂胶提取物,购于陕西蓝泰生物工程有限公司。
抗菌肽,含量>98%,购于连云港广源生物科技有限公司。
副干酪乳杆菌,100亿cfu/g,购于深圳乐芙生物科技有限公司;鼠李糖乳杆菌,100亿cfu/g,购于山东凤凰生物科技股份有限公司。
活化的副干酪乳杆菌和鼠李糖乳杆菌菌种种子液的制备:将副干酪乳杆菌和鼠李糖乳杆菌分别接种至高氏培养基中,37℃,100r/min,活化发酵培养24h,获得含菌量为108-109cfu/mL的菌种种子液。
制备例1改性溶菌酶的制备
方法如下:
S1.热处理:将10重量份鸡卵白溶菌酶加入1000重量份无菌水中,调节溶液pH值为6,加热至60℃,处理20min,冷却至室温,制得热处理鸡卵白溶菌酶体系;
S2.超高压微波处理:将步骤S1中的热处理鸡卵白溶菌酶体系进行400W微波处理2min后,在400MPa超高压,20℃下,处理10min,制得处理后鸡卵白溶菌酶体系;
S3.化学修饰:向1000重量份步骤S2中的处理后鸡卵白溶菌酶体系中加入2重量份二硫苏糖醇和4重量份肉桂酸,调节溶液pH值为7.5,加入16重量份1-乙基(3-二甲氨基丙基)-3-碳二亚胺和1重量份硝酸锌,加热至40℃,搅拌反应3h,离心,洗涤,干燥,制得改性溶菌酶。
制备例2改性溶菌酶的制备
方法如下:
S1.热处理:将12重量份鸡卵白溶菌酶加入1000重量份无菌水中,调节溶液pH值为6.5,加热至70℃,处理30min,冷却至室温,制得热处理鸡卵白溶菌酶体系;
S2.超高压微波处理:将步骤S1中的热处理鸡卵白溶菌酶体系进行500W微波处理4min后,在450MPa超高压,25℃下,处理15min,制得处理后鸡卵白溶菌酶体系;
S3.化学修饰:向1000重量份步骤S2中的处理后鸡卵白溶菌酶体系中加入4重量份二硫苏糖醇和7重量份肉桂酸,调节溶液pH值为8,加入40重量份1-乙基(3-二甲氨基丙基)-3-碳二亚胺和2重量份柠檬酸锌,加热至45℃,搅拌反应5h,离心,洗涤,干燥,制得改性溶菌酶。
制备例3改性溶菌酶的制备
方法如下:
S1.热处理:将11重量份鸡卵白溶菌酶加入1000重量份无菌水中,调节溶液pH值为6.2,加热至65℃,处理25min,冷却至室温,制得热处理鸡卵白溶菌酶体系;
S2.超高压微波处理:将步骤S1中的热处理鸡卵白溶菌酶体系进行450W微波处理3min后,在420MPa超高压,22℃下,处理12min,制得处理后鸡卵白溶菌酶体系;
S3.化学修饰:向1000重量份步骤S2中的处理后鸡卵白溶菌酶体系中加入3重量份二硫苏糖醇和5重量份肉桂酸,调节溶液pH值为7.7,加入27重量份1-乙基(3-二甲氨基丙基)-3-碳二亚胺和1.5重量份葡萄糖酸锌,加热至42℃,搅拌反应4h,离心,洗涤,干燥,制得改性溶菌酶。
对比制备例1
与制备例3相比,不同之处在于,未进行步骤S1。
具体如下:
S1.超高压微波处理:将11重量份鸡卵白溶菌酶加入1000重量份无菌水中,在450W微波处理3min后,在420MPa超高压,22℃下,处理12min,制得处理后鸡卵白溶菌酶体系;
S2.化学修饰:向1000重量份步骤S1中的处理后鸡卵白溶菌酶体系中加入3重量份二硫苏糖醇和5重量份肉桂酸,调节溶液pH值为7.7,加入27重量份1-乙基(3-二甲氨基丙基)-3-碳二亚胺和1.5重量份葡萄糖酸锌,加热至42℃,搅拌反应4h,离心,洗涤,干燥,制得改性溶菌酶。
对比制备例2
与制备例3相比,不同之处在于,步骤S2中未进行微波处理。
具体如下:
S2.超高压处理:将步骤S1中的热处理鸡卵白溶菌酶体系在420MPa超高压,22℃下,处理12min,制得处理后鸡卵白溶菌酶体系。
对比制备例3
与制备例3相比,不同之处在于,步骤S2中未进行超高压处理。
具体如下:
S2.微波处理:将步骤S1中的热处理鸡卵白溶菌酶体系进行450W微波处理3min,制得处理后鸡卵白溶菌酶体系。
对比制备例4
与制备例3相比,不同之处在于,未进行步骤S2。
具体如下:
S1.热处理:将11重量份鸡卵白溶菌酶加入1000重量份无菌水中,调节溶液pH值为6.2,加热至65℃,处理25min,冷却至室温,制得热处理鸡卵白溶菌酶体系;
S2.化学修饰:向1000重量份步骤S1中的热处理鸡卵白溶菌酶体系中加入3重量份二硫苏糖醇和5重量份肉桂酸,调节溶液pH值为7.7,加入27重量份1-乙基(3-二甲氨基丙基)-3-碳二亚胺和1.5重量份葡萄糖酸锌,加热至42℃,搅拌反应4h,离心,洗涤,干燥,制得改性溶菌酶。
对比制备例5
与制备例3相比,不同之处在于,步骤S3中未添加二硫苏糖醇。
具体如下:
S3.化学修饰:向1000重量份步骤S2中的处理后鸡卵白溶菌酶体系中加入8重量份肉桂酸,调节溶液pH值为7.7,加入40重量份1-乙基(3-二甲氨基丙基)-3-碳二亚胺和1.5重量份葡萄糖酸锌,加热至42℃,搅拌反应4h,离心,洗涤,干燥,制得改性溶菌酶。
对比制备例6
与制备例3相比,不同之处在于,步骤S3中未添加肉桂酸。
具体如下:
S3.化学修饰:向1000重量份步骤S2中的处理后鸡卵白溶菌酶体系中加入8重量份二硫苏糖醇,调节溶液pH值为7.7,加入27重量份1-乙基(3-二甲氨基丙基)-3-碳二亚胺和1.5重量份葡萄糖酸锌,加热至42℃,搅拌反应4h,离心,洗涤,干燥,制得改性溶菌酶。
对比制备例7
与制备例3相比,不同之处在于,步骤S3中未添加二硫苏糖醇和肉桂酸。
具体如下:
S3.化学修饰:向1000重量份步骤S2中的处理后鸡卵白溶菌酶体系调节溶液pH值为7.7,加入1.5重量份葡萄糖酸锌,加热至42℃,搅拌反应4h,离心,洗涤,干燥,制得改性溶菌酶。
对比制备例8
与制备例3相比,不同之处在于,步骤S3中未添加葡萄糖酸锌。
具体如下:
S3.化学修饰:向1000重量份步骤S2中的处理后鸡卵白溶菌酶体系中加入3重量份二硫苏糖醇和5重量份肉桂酸,调节溶液pH值为7.7,加入27重量份1-乙基(3-二甲氨基丙基)-3-碳二亚胺,加热至42℃,搅拌反应4h,离心,洗涤,干燥,制得改性溶菌酶。
对比制备例9
与制备例3相比,不同之处在于,未进行步骤S3。
具体如下:
S1.热处理:将11重量份鸡卵白溶菌酶加入1000重量份无菌水中,调节溶液pH值为6.2,加热至65℃,处理25min,冷却至室温,制得热处理鸡卵白溶菌酶体系;
S2.超高压微波处理:将步骤S1中的热处理鸡卵白溶菌酶体系进行450W微波处理3min后,在420MPa超高压,22℃下,处理12min,冷冻干燥,制得改性溶菌酶。
测试例1抑菌能力的测定
1、菌悬液的制备
挑取少量大肠杆菌ATCC25922、金黄色葡萄球菌ATCC29213、溶壁微球菌ATCC4698和铜绿假单胞菌ATCC27853分别接种于灭菌的斜面,37℃恒温培养24h。挑取少量各个菌体,接种到已灭菌的液体培养基中,37℃恒温水浴摇床,培养24h。所得菌液稀释至106-107CFU/mL。
2、最小抑菌浓度的测定
称取一定量的制备例1-3及对比制备例1-9制得的改性溶菌酶以及天然鸡卵白溶菌酶用50mmol/L pH=7.0磷酸盐缓冲液溶解配制成不同浓度的溶液,分别接种金黄色葡萄球菌、溶壁微球菌、大肠杆菌和铜绿假单胞菌,每个浓度重复3次,置37℃生化培养箱中恒温培养24h,计菌落数。以50mmol/L pH=7.0磷酸盐缓冲液代替样品液,作空白对照。观察平板上菌落生长情况,以无菌落生长的平板中样品的浓度为最小抑菌浓度MIC。
结果见表1。
表1
由上表可知,本发明制备例1-3制得的改性溶菌酶对革兰氏阴性细菌和革兰氏阳性细菌均有很好的抑菌效果。
制备例4绿茶发酵提取物的制备
方法如下:
T1.绿茶的预酶解:将15重量份绿茶茶叶粉碎制得茶粉,加入150重量份水中,加入1重量份复合酶,加热至40℃,预酶解0.5h,制得茶酶解体系;
所述复合酶包括纤维素酶和果胶酶,质量比为5:4;
T2.绿茶的发酵:将步骤T1制得的茶酶解体系灭菌,接种活化的副干酪乳杆菌和鼠李糖乳杆菌菌种种子液,接种量分别为1v/v%和2v/v%,36℃,70r/min,酶助发酵培养48h,过滤,滤液干燥,制得发酵提取物,滤渣经过3倍体积水洗获得益生菌菌液,剩余固渣干燥留用;将100重量份益生菌菌液中加入12重量份海藻酸钠和0.5重量份吐温-80,加入200重量份鱼油中,10000r/min乳化10min,滴加20重量份10wt%氯化钙溶液,常温固化20min,离心,洗涤,干燥,制得益生菌颗粒;
T3.水提取:将10重量份步骤T2中的固渣加入100重量份水中,加热至沸提取2h,过滤,滤液干燥,固渣干燥留用,制得水提取物;
T4.醇提取:将15重量份步骤T3中的固渣加入100重量份70wt%的乙醇水溶液中,加热至60℃,提取1h,过滤,滤液回收乙醇,干燥,制得醇提取物;
T5.绿茶发酵提取物的制备:将10重量份步骤T2中的发酵提取物和5重量份益生菌颗粒、3重量份步骤T3中的水提取物、2重量份步骤T4中的醇提取物混合均匀,制得绿茶发酵提取物。
制备例5绿茶发酵提取物的制备
方法如下:
T1.绿茶的预酶解:将20重量份绿茶茶叶粉碎制得茶粉,加入200重量份水中,加入2重量份复合酶,加热至45℃,预酶解1h,制得茶酶解体系;
所述复合酶包括纤维素酶和果胶酶,质量比为7:4;
T2.绿茶的发酵:将步骤T1制得的茶酶解体系灭菌,接种活化的副干酪乳杆菌和鼠李糖乳杆菌菌种种子液,接种量分别为2v/v%和3v/v%,38℃,100r/min,酶助发酵培养56h,过滤,滤液干燥,制得发酵提取物,滤渣经过4倍体积水洗获得益生菌菌液,剩余固渣干燥留用;将120重量份益生菌菌液中加入15重量份海藻酸钠和1重量份甜菜碱,加入250重量份鱼油中,10000r/min乳化10min,滴加20重量份10wt%氯化钙溶液,常温固化30min,离心,洗涤,干燥,制得益生菌颗粒;
T3.水提取:将15重量份步骤T2中的固渣加入100重量份水中,加热至沸提取4h,过滤,滤液干燥,固渣干燥留用,制得水提取物;
T4.醇提取:将20重量份步骤T3中的固渣加入100重量份80wt%的乙醇水溶液中,加热至70℃,提取2h,过滤,滤液回收乙醇,干燥,制得醇提取物;
T5.绿茶发酵提取物的制备:将12重量份步骤T2中的发酵提取物和7重量份益生菌颗粒、5重量份步骤T3中的水提取物、4重量份步骤T4中的醇提取物混合均匀,制得绿茶发酵提取物。
制备例6绿茶发酵提取物的制备
方法如下:
T1.绿茶的预酶解:将17重量份绿茶茶叶粉碎制得茶粉,加入170重量份水中,加入1.5重量份复合酶,加热至42℃,预酶解1h,制得茶酶解体系;
所述复合酶包括纤维素酶和果胶酶,质量比为6:4;
T2.绿茶的发酵:将步骤T1制得的茶酶解体系灭菌,接种活化的副干酪乳杆菌和鼠李糖乳杆菌菌种种子液,接种量分别为1.5v/v%和2.5v/v%,37℃,85r/min,酶助发酵培养52h,过滤,滤液干燥,制得发酵提取物,滤渣经过3.5倍体积水洗获得益生菌菌液,剩余固渣干燥留用;将110重量份益生菌菌液中加入13.5重量份海藻酸钠和0.7重量份卵磷脂,加入220重量份鱼油中,10000r/min乳化10min,滴加20重量份10wt%氯化钙溶液,常温固化25min,离心,洗涤,干燥,制得益生菌颗粒;
T3.水提取:将12重量份步骤T2中的固渣加入100重量份水中,加热至沸提取3h,过滤,滤液干燥,固渣干燥留用,制得水提取物;
T4.醇提取:将17重量份步骤T3中的固渣加入100重量份75wt%的乙醇水溶液中,加热至65℃,提取1.5h,过滤,滤液回收乙醇,干燥,制得醇提取物;
T5.绿茶发酵提取物的制备:将11重量份步骤T2中的发酵提取物和6重量份益生菌颗粒、4重量份步骤T3中的水提取物、3重量份步骤T4中的醇提取物混合均匀,制得绿茶发酵提取物。
对比制备例10
与制备例6相比,不同之处在于,未进行步骤T1。
具体如下:
T1.绿茶的发酵:将17重量份绿茶茶叶粉碎制得茶粉,加入170重量份水中,接种活化的副干酪乳杆菌和鼠李糖乳杆菌菌种种子液,接种量分别为1.5v/v%和2.5v/v%,37℃,85r/min,发酵培养52h,过滤,滤液干燥,制得发酵提取物,滤渣经过3.5倍体积水洗获得益生菌菌液,剩余固渣干燥留用;将110重量份益生菌菌液中加入13.5重量份海藻酸钠和0.7重量份卵磷脂,加入220重量份鱼油中,10000r/min乳化10min,滴加20重量份10wt%氯化钙溶液,常温固化25min,离心,洗涤,干燥,制得益生菌颗粒;
T2.水提取:将12重量份步骤T1中的固渣加入100重量份水中,加热至沸提取3h,过滤,滤液干燥,固渣干燥留用,制得水提取物;
T3.醇提取:将17重量份步骤T2中的固渣加入100重量份75wt%的乙醇水溶液中,加热至65℃,提取1.5h,过滤,滤液回收乙醇,干燥,制得醇提取物;
T4.绿茶发酵提取物的制备:将11重量份步骤T1中的发酵提取物和6重量份益生菌颗粒、4重量份步骤T2中的水提取物、3重量份步骤T3中的醇提取物混合均匀,制得绿茶发酵提取物。
对比制备例11
与制备例6相比,不同之处在于,步骤T2中未接种副干酪乳杆菌菌种种子液。
具体如下:
T2.绿茶的发酵:将步骤T1制得的茶酶解体系灭菌,接种活化的鼠李糖乳杆菌菌种种子液,接种量为4v/v%,37℃,85r/min,酶助发酵培养52h,过滤,滤液干燥,制得发酵提取物,滤渣经过3.5倍体积水洗获得益生菌菌液,剩余固渣干燥留用;将110重量份益生菌菌液中加入13.5重量份海藻酸钠和0.7重量份卵磷脂,加入220重量份鱼油中,10000r/min乳化10min,滴加20重量份10wt%氯化钙溶液,常温固化25min,离心,洗涤,干燥,制得益生菌颗粒。
对比制备例12
与制备例6相比,不同之处在于,步骤T2中未接种鼠李糖乳杆菌菌种种子液。
具体如下:
T2.绿茶的发酵:将步骤T1制得的茶酶解体系灭菌,接种活化的副干酪乳杆菌菌种种子液,接种量为4v/v%,37℃,85r/min,酶助发酵培养52h,过滤,滤液干燥,制得发酵提取物,滤渣经过3.5倍体积水洗获得益生菌菌液,剩余固渣干燥留用;将110重量份益生菌菌液中加入13.5重量份海藻酸钠和0.7重量份卵磷脂,加入220重量份鱼油中,10000r/min乳化10min,滴加20重量份10wt%氯化钙溶液,常温固化25min,离心,洗涤,干燥,制得益生菌颗粒。
对比制备例13
与制备例6相比,不同之处在于,未进行步骤T2。
具体如下:
T1.绿茶的预酶解:将17重量份绿茶茶叶粉碎制得茶粉,加入170重量份水中,加入1.5重量份复合酶,加热至42℃,预酶解1h,制得茶酶解体系;
所述复合酶包括纤维素酶和果胶酶,质量比为6:4;
T2.水提取:将步骤T2中的茶酶解体系加热至沸提取3h,过滤,滤液干燥,固渣干燥留用,制得水提取物;
T3.醇提取:将17重量份步骤T2中的固渣加入100重量份75wt%的乙醇水溶液中,加热至65℃,提取1.5h,过滤,滤液回收乙醇,干燥,制得醇提取物;
T4.绿茶发酵提取物的制备:将4重量份步骤T3中的水提取物、3重量份步骤T4中的醇提取物混合均匀,制得绿茶发酵提取物。
对比制备例14
与制备例6相比,不同之处在于,未进行步骤T3。
具体如下:
T1.绿茶的预酶解:将17重量份绿茶茶叶粉碎制得茶粉,加入170重量份水中,加入1.5重量份复合酶,加热至42℃,预酶解1h,制得茶酶解体系;
所述复合酶包括纤维素酶和果胶酶,质量比为6:4;
T2.绿茶的发酵:将步骤T1制得的茶酶解体系灭菌,接种活化的副干酪乳杆菌和鼠李糖乳杆菌菌种种子液,接种量分别为1.5v/v%和2.5v/v%,37℃,85r/min,酶助发酵培养52h,过滤,滤液干燥,制得发酵提取物,滤渣经过3.5倍体积水洗获得益生菌菌液,剩余固渣干燥留用;将110重量份益生菌菌液中加入13.5重量份海藻酸钠和0.7重量份卵磷脂,加入220重量份鱼油中,10000r/min乳化10min,滴加20重量份10wt%氯化钙溶液,常温固化25min,离心,洗涤,干燥,制得益生菌颗粒;
T3.醇提取:将17重量份步骤T2中的固渣加入100重量份75wt%的乙醇水溶液中,加热至65℃,提取1.5h,过滤,滤液回收乙醇,干燥,制得醇提取物;
T4.绿茶发酵提取物的制备:将11重量份步骤T2中的发酵提取物和6重量份益生菌颗粒、3重量份步骤T3中的醇提取物混合均匀,制得绿茶发酵提取物。
对比制备例15
与制备例6相比,不同之处在于,未进行步骤T4。
具体如下:
T1.绿茶的预酶解:将17重量份绿茶茶叶粉碎制得茶粉,加入170重量份水中,加入1.5重量份复合酶,加热至42℃,预酶解1h,制得茶酶解体系;
所述复合酶包括纤维素酶和果胶酶,质量比为6:4;
T2.绿茶的发酵:将步骤T1制得的茶酶解体系灭菌,接种活化的副干酪乳杆菌和鼠李糖乳杆菌菌种种子液,接种量分别为1.5v/v%和2.5v/v%,37℃,85r/min,酶助发酵培养52h,过滤,滤液干燥,制得发酵提取物,滤渣经过3.5倍体积水洗获得益生菌菌液,剩余固渣干燥留用;将110重量份益生菌菌液中加入13.5重量份海藻酸钠和0.7重量份卵磷脂,加入220重量份鱼油中,10000r/min乳化10min,滴加20重量份10wt%氯化钙溶液,常温固化25min,离心,洗涤,干燥,制得益生菌颗粒;
T3.水提取:将12重量份步骤T2中的固渣加入100重量份水中,加热至沸提取3h,过滤,滤液干燥,固渣干燥留用,制得水提取物;
T4.绿茶发酵提取物的制备:将11重量份步骤T2中的发酵提取物和6重量份益生菌颗粒、4重量份步骤T3中的水提取物混合均匀,制得绿茶发酵提取物。
实施例1
本实施例提供一种预防儿童龋齿的牙膏。
由以下原料按照质量百分比制备而成:鸡卵白溶菌酶3%、纤维素酶0.5%、胰蛋白酶0.5%、右旋糖酐酶0.5%、抗菌肽1%、β-葡聚糖1%、透明质酸钠1%、制备例4制得的绿茶发酵提取物3%、蜂胶提取物1%、甘草酸二钾1%、山梨酸钾1%、山梨醇10%、甘油5%、氟化钠0.05%、糖精钠1%、泊洛沙姆407 1%、碳酸钙20%、丙二醇10%、月桂醇硫酸钠1%、羧甲基纤维素1%,去离子水余量。
制备方法包括以下步骤:
(1)将山梨醇和泊洛沙姆407加入4/5的去离子水中,搅拌至完全溶解;加入糖精钠、氟化钠搅拌至完全溶解;加入甘油,搅拌均匀后再加入鸡卵白溶菌酶、纤维素酶、胰蛋白酶、右旋糖酐酶、抗菌肽、β-葡聚糖、绿茶发酵提取物、蜂胶提取物、甘草酸二钾、山梨酸钾,搅拌30min制成水相;
(2)将碳酸钙、丙二醇、月桂醇硫酸钠、羧甲基纤维素和剩余的去离子水,按比例混匀,混合时间为60min,混合搅拌速度设置为80r/min,混合完成后,加入(1)步骤产物,制得牙膏所需膏体;
(3)搅拌条件下,将牙膏所需膏体中加入透明质酸钠,搅拌混合15min制得预防儿童龋齿的牙膏。
实施例2
本实施例提供一种预防儿童龋齿的牙膏。
由以下原料按照质量百分比制备而成:制备例1制得改性溶菌酶3%、纤维素酶0.5%、胰蛋白酶0.5%、右旋糖酐酶0.5%、抗菌肽1%、β-葡聚糖1%、透明质酸钠1%、制备例4制得的绿茶发酵提取物3%、蜂胶提取物1%、甘草酸二钾1%、山梨酸钾1%、山梨醇10%、甘油5%、氟化钠0.05%、糖精钠1%、泊洛沙姆407 1%、碳酸钙20%、丙二醇10%、月桂醇硫酸钠1%、羧甲基纤维素1%,去离子水余量。
制备方法包括以下步骤:
(1)将山梨醇和泊洛沙姆407加入4/5的去离子水中,搅拌至完全溶解;加入糖精钠、氟化钠搅拌至完全溶解;加入甘油,搅拌均匀后再加入改性溶菌酶、纤维素酶、胰蛋白酶、右旋糖酐酶、抗菌肽、β-葡聚糖、绿茶发酵提取物、蜂胶提取物、甘草酸二钾、山梨酸钾,搅拌30min制成水相;
(2)将碳酸钙、丙二醇、月桂醇硫酸钠、羧甲基纤维素和剩余的去离子水,按比例混匀,混合时间为60min,混合搅拌速度设置为80r/min,混合完成后,加入(1)步骤产物,制得牙膏所需膏体;
(3)搅拌条件下,将牙膏所需膏体中加入透明质酸钠,搅拌混合15min制得预防儿童龋齿的牙膏。
实施例3
本实施例提供一种预防儿童龋齿的牙膏。
由以下原料按照质量百分比制备而成:制备例2制得的改性溶菌酶7%、纤维素酶2%、胰蛋白酶2%、右旋糖酐酶2%、抗菌肽5%、β-葡聚糖5%、透明质酸钠5%、制备例5制得的绿茶发酵提取物10%、蜂胶提取物5%、甘草酸二钾3%、山梨酸钾2%、山梨醇15%、甘油10%、氟化钠0.1%、糖精钠1%、泊洛沙姆4073%、碳酸钙20%、丙二醇10%、月桂醇硫酸钠3%、羧甲基纤维素2%,去离子水余量。
制备方法包括以下步骤:
(1)将山梨醇和泊洛沙姆407加入4/5的去离子水中,搅拌至完全溶解;加入糖精钠、氟化钠搅拌至完全溶解;加入甘油,搅拌均匀后再加入改性溶菌酶、纤维素酶、胰蛋白酶、右旋糖酐酶、抗菌肽、β-葡聚糖、绿茶发酵提取物、蜂胶提取物、甘草酸二钾、山梨酸钾,搅拌40min制成水相;
(2)将碳酸钙、丙二醇、月桂醇硫酸钠、羧甲基纤维素和剩余的去离子水,按比例混匀,混合时间为70min,混合搅拌速度设置为100r/min,混合完成后,加入(1)步骤产物,制得牙膏所需膏体;
(3)搅拌条件下,将牙膏所需膏体中加入透明质酸钠,搅拌混20min制得预防儿童龋齿的牙膏。
实施例4
本实施例提供一种预防儿童龋齿的牙膏。
由以下原料按照质量百分比制备而成:制备例3制得的改性溶菌酶5%、纤维素酶1%、胰蛋白酶1%、右旋糖酐酶1%、抗菌肽2%、β-葡聚糖2%、透明质酸钠2%、制备例6制得的绿茶发酵提取物6%、蜂胶提取物2%、甘草酸二钾2%、山梨酸钾2%、山梨醇15%、甘油10%、氟化钠0.2%、糖精钠1%、泊洛沙姆407 2%、碳酸钙20%、丙二醇10%、月桂醇硫酸钠2%、羧甲基纤维素2%,去离子水余量。
制备方法包括以下步骤:
(1)将山梨醇和泊洛沙姆407加入4/5的去离子水中,搅拌至完全溶解;加入糖精钠、氟化钠搅拌至完全溶解;加入甘油,搅拌均匀后再加入改性溶菌酶、纤维素酶、胰蛋白酶、右旋糖酐酶、抗菌肽、β-葡聚糖、绿茶发酵提取物、蜂胶提取物、甘草酸二钾、山梨酸钾,搅拌35min制成水相;
(2)将碳酸钙、丙二醇、月桂醇硫酸钠、羧甲基纤维素和剩余的去离子水,按比例混匀,混合时间为65min,混合搅拌速度设置为90r/min,混合完成后,加入(1)步骤产物,制得牙膏所需膏体;
(3)搅拌条件下,将牙膏所需膏体中加入透明质酸钠,搅拌混合17min制得预防儿童龋齿的牙膏。
对比例1-9
与实施例4相比,不同之处在于,改性溶菌酶由对比制备例1-9制得。
对比例10-15
与实施例4相比,不同之处在于,绿茶发酵提取物由对比制备例10-15制得。
对比例16
与实施例4相比,不同之处在于,未添加改性溶菌酶。
对比例17
与实施例4相比,不同之处在于,未添加绿茶发酵提取物。
测试例2生物膜去除能力测试
将本发明实施例和对比例制得的预防儿童龋齿的牙膏及市售同类产品配制成1g/L的实验液。
将变异链球菌CMCC32400、牙龈卟啉单胞菌ATCC33277接入BHI液体培养基中37℃恒温培养24h。取24孔板,每孔加入1.8mL已灭菌的含5%蔗糖BHI液体培养基,再每孔加入0.2mL的变异链球菌CMCC32400、牙龈卟啉单胞菌ATCC33277的菌液,培养24h,生成牙菌斑生物膜模型。去除每孔上清液,洗去浮游菌。每孔加入0.5mL上述实验液,空白对照组为0.5mL无菌水,再加入1.5mL液体培养基,空白对照组加入无菌水,37℃培养24h。培养完成后,吸取上清液,每孔采用无菌水清洗三次,洗去残留液。每孔加入0.5mol/L的氢氧化钠溶液2mL溶解生物膜,用枪头轻轻吹散混匀后在0D600下测量吸光值。实验各组重复3次,OD值测试结果取平均值,根据以下公式计算漱口水对牙菌斑生物膜去除率:
生物膜去除率(%)=[(空白对照OD值-实验组OD值)/空白对照OD值]×100%
结果见表2。
表2
组别 | 变异链球菌生物膜去除率(%) | 牙龈卟啉单胞菌生物膜去除率(%) |
市售同类产品 | 45 | 49 |
实施例1 | 74 | 77 |
实施例2 | 90 | 93 |
实施例3 | 94 | 97 |
实施例4 | 92 | 95 |
对比例1 | 87 | 90 |
对比例2 | 88 | 91 |
对比例3 | 87 | 89 |
对比例4 | 85 | 87 |
对比例5 | 83 | 85 |
对比例6 | 84 | 87 |
对比例7 | 81 | 83 |
对比例8 | 89 | 91 |
对比例9 | 79 | 82 |
对比例10 | 88 | 91 |
对比例11 | 85 | 88 |
对比例12 | 84 | 87 |
对比例13 | 82 | 85 |
对比例14 | 87 | 89 |
对比例15 | 85 | 88 |
对比例16 | 70 | 73 |
对比例17 | 77 | 80 |
由上表可知,本发明实施例制得的预防儿童龋齿的牙膏具有较好的生物膜去除能力。
测试例3抑制生物膜能力测试
将本发明实施例和对比例制得的预防儿童龋齿的牙膏及市售同类产品配制成1g/L的实验液。
将变异链球菌CMCC32400、牙龈卟啉单胞菌ATCC33277接入BHI液体培养基中37℃恒温培养24h。取24孔板,每孔加入BHI培养液1.4mL、0.1mL变异链球菌菌液(或牙龈卟啉单胞菌ATCC33277)以及0.5mL样品,每个样品平行3孔。空白对照组为1.4mL含5%蔗糖BHI培养液+0.1mL菌液+0.5mL生理盐水,好氧状态下37℃培养24h。培养完成后,移取孔中培养液并测试pH值,培养孔用无菌水清洗三次,最后加入0.5mol/L的氢氧化钠溶液2mL溶解生物膜,用枪头轻轻吹散混匀后在0D600下测量吸光值。实验各组OD值测试结果取平均值,根据以下公式计算漱口水对牙菌斑生物膜抑制率:
生物膜抑制率(%)[(空白对照OD值-实验组OD值)/空白对照OD值]×100%
结果见表3。
表3
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由上表可知,本发明实施例制得的预防儿童龋齿的牙膏具有较好的生物膜抑制能力。
测试例4增强牙釉质抵抗细菌产酸腐蚀牙釉质蚀的能力
将本发明实施例和对比例制得的预防儿童龋齿的牙膏及市售同类产品进行测试。
1.测试方法
模拟糖酵解酸液制备:取25g蔗糖、6g胰酪大豆肉胨,溶于35℃左右的180g去离子水中,搅拌均匀,110℃灭菌15min,冷却。收集新鲜唾液加入培养基,将已加入唾液的培养基放入37℃培养箱(人工唾液),培养18h,测定pH值在4-5,高温高压灭菌备用。
2.牙釉质样本处理
分组:取牙釉质样品,分为23组,每组10份牙釉质样品。分别为:空白对照组(不处理)、实施例1-4组、对比例1-17组和市售组。
实验方法:牙膏涂抹浸泡(1mL/牙块)处理,37℃,5min;自来水充分清洗,吸干水分;人工唾液浸泡(5mL/牙块)处理,37℃,60min。循环处理8次,之后,人工唾液浸泡(5mL/牙块)过夜。
3.测试结果
取出经处理后的各组牙釉质样品,用清水充分清洗,用吸水纸吸干牙块表面的水,进行牙釉质酸腐蚀测试,在pH=5的盐酸中浸泡10min后,测试硬度值SMH,每组测试结果取平均值。
ΔHV=HV酸蚀10min的值-HV基线
牙釉质样SMH测试结果采用独立样本t检验。如果样品组的ΔHV值小于对照组ΔHV值,且两组ΔHV值比较有统计学意义(P<0.05),可以认为样品组能够抵抗口腔中糖产酸引起的牙釉质侵蚀。
结果见表4。
表4
组别 | ΔHV值 | 显著性分析P |
空白组 | 41.2±10.1 | / |
市售同类产品 | 99.6±9.8 | <0.05 |
实施例1 | 37.8±9.4 | <0.05 |
实施例2 | 35.6±11.4 | <0.05 |
实施例3 | 34.5±9.2 | <0.05 |
实施例4 | 35.2±10.6 | <0.05 |
对比例1 | 38.5±8.9 | <0.05 |
对比例2 | 38.8±10.4 | <0.05 |
对比例3 | 38.9±9.2 | <0.05 |
对比例4 | 39.4±9.9 | <0.05 |
对比例5 | 39.9±10.9 | <0.05 |
对比例6 | 39.8±11.1 | <0.05 |
对比例7 | 40.5±10.5 | <0.05 |
对比例8 | 37.4±9.3 | <0.05 |
对比例9 | 41.9±10.8 | >0.05 |
对比例10 | 40.2±9.4 | <0.05 |
对比例11 | 42.1±8.5 | >0.05 |
对比例12 | 42.7±8.8 | <0.05 |
对比例13 | 44.9±8.3 | >0.05 |
对比例14 | 46.8±10.3 | >0.05 |
对比例15 | 47.2±11.4 | >0.05 |
对比例16 | 43.7±11.7 | >0.05 |
对比例17 | 54.6±10.2 | >0.05 |
由上表可知,本发明实施例制得的预防儿童龋齿的牙膏具有较好的中和酸性物质能力、提升牙齿硬度和抗酸腐蚀的能力。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种口腔护理组合物,其特征在于,由以下原料按照质量百分比制备而成:溶菌酶3-7%、纤维素酶0.001-2%、胰蛋白酶0.001-2%、右旋糖酐酶0.001-2%、抗菌肽0.01-5%、β-葡聚糖0.01-5%、透明质酸钠0.01-5%、绿茶发酵提取物3-10%、蜂胶提取物0.05-5%、甘草酸二钾0.05-5%、山梨酸钾0.05-5%、山梨醇1-30%、甘油0.1-15%、氟化钠0.05-1%、甜味剂0.1-5%、泊洛沙姆407 0.05-5%、磨擦剂0.01-70%、润湿剂0.01-50%、发泡剂0.01-5%、粘合剂0.01-5%,去离子水余量。
2.根据权利要求1所述口腔护理组合物,其特征在于,所述溶菌酶由改性溶菌酶替代,所述改性溶菌酶的制备方法如下:
S1.热处理:将鸡卵白溶菌酶加入无菌水中,调节溶液pH值,加热处理,冷却至室温,制得热处理鸡卵白溶菌酶体系;
S2.超高压微波处理:将步骤S1中的热处理鸡卵白溶菌酶体系进行微波处理后,进行超高压处理,制得处理后鸡卵白溶菌酶体系;
S3.化学修饰:向步骤S2中的处理后鸡卵白溶菌酶体系中加入二硫苏糖醇和肉桂酸,调节溶液pH值,加入催化剂和改性剂,加热搅拌反应,离心,洗涤,干燥,制得改性溶菌酶。
3.根据权利要求2所述口腔护理组合物,其特征在于,步骤S1中所述鸡卵白溶菌酶和无菌水的质量比为10-12:1000,所述调节溶液pH值为6-6.5,所述加热处理的温度为60-70℃,时间为20-30min;步骤S2中所述微波处理的功率为400-500W,时间为2-4min,所述超高压处理的压力为400-450MPa,温度为20-25℃,时间为10-15min;步骤S3中所述处理后鸡卵白溶菌酶体系、二硫苏糖醇、肉桂酸、催化剂和改性剂的质量比为1000:2-4:4-7:16-40:1-2,所述催化剂为1-乙基(3-二甲氨基丙基)-3-碳二亚胺,所述改性剂为可溶性锌盐,选自氯化锌、硫酸锌、硝酸锌、柠檬酸锌、葡萄糖酸锌中的至少一种,所述调节溶液pH值为7.5-8,所述加热搅拌反应的温度为40-45℃,时间为3-5h。
4.根据权利要求1所述口腔护理组合物,其特征在于,所述绿茶发酵提取物的制备方法如下:
T1.绿茶的预酶解:将绿茶茶叶粉碎制得茶粉,加入水中,加入复合酶,加热预酶解,制得茶酶解体系;
T2.绿茶的发酵:将步骤T1制得的茶酶解体系灭菌,接种活化的副干酪乳杆菌和鼠李糖乳杆菌菌种种子液,酶助发酵培养,过滤,滤液干燥,制得发酵提取物,滤渣经过水洗获得益生菌菌液,剩余固渣干燥留用;将益生菌菌液中加入海藻酸钠和乳化剂,加入鱼油中,乳化,滴加氯化钙溶液,常温固化,离心,洗涤,干燥,制得益生菌颗粒;
T3.水提取:将步骤T2中的固渣加入水中,加热至沸提取,过滤,滤液干燥,固渣干燥留用,制得水提取物;
T4.醇提取:将步骤T3中的固渣加入乙醇水溶液中,加热提取,过滤,滤液回收乙醇,干燥,制得醇提取物;
T5.绿茶发酵提取物的制备:将步骤T2中的发酵提取物和益生菌颗粒、步骤T3中的水提取物、步骤T4中的醇提取物混合均匀,制得绿茶发酵提取物。
5.根据权利要求4所述口腔护理组合物,其特征在于,步骤T1中所述茶粉、水、复合酶的质量比为15-20:150-200:1-2,所述复合酶包括纤维素酶和果胶酶,质量比为5-7:4,所述加热预酶解的温度为40-45℃,时间为0.5-1h;步骤T2中所述活化的副干酪乳杆菌和鼠李糖乳杆菌菌种种子液的接种量分别为1-2v/v%和2-3v/v%,所述酶助发酵培养的条件为36-38℃,70-100r/min,酶助发酵培养48-56h,所述菌种种子液的含菌量为108-109cfu/mL,所述滤渣经过3-4倍体积的水洗,所述益生菌菌液、海藻酸钠、乳化剂和鱼油的质量比为100-120:12-15:0.5-1:200-250,所述乳化剂选自甜菜碱、卵磷脂、吐温-20、吐温-40、吐温-60、吐温-80中的至少一种,所述常温固化的时间为20-30min。
6.根据权利要求4所述口腔护理组合物,其特征在于,步骤T3中所述固渣和水的质量比为10-15:100,所述加热至沸提取的时间为2-4h;步骤T4中所述固渣和乙醇水溶液的质量比为15-20:100,所述乙醇水溶液的浓度为70-80wt%,所述加热提取的温度为60-70℃,时间为1-2h;步骤T5中所述发酵提取物、益生菌颗粒、水提取物、醇提取物的质量比为10-12:5-7:3-5:2-4。
7.一种如权利要求1-6任一项所述口腔护理组合物在制备预防儿童龋齿的口腔护理产品中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用,其特征在于,所述口腔护理产品包括牙膏、漱口水、牙粉。
9.一种预防儿童龋齿的牙膏的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)将山梨醇和泊洛沙姆407加入4/5的去离子水中,搅拌至完全溶解;加入甜味剂、氟化钠搅拌至完全溶解;加入甘油,搅拌均匀后再加入溶菌酶或改性溶菌酶、纤维素酶、胰蛋白酶、右旋糖酐酶、抗菌肽、β-葡聚糖、绿茶发酵提取物、蜂胶提取物、甘草酸二钾、山梨酸钾,搅拌30-40min制成水相;
(2)将磨擦剂、润湿剂、发泡剂、粘合剂和剩余的去离子水,按比例混匀,混合时间为60-70min,混合搅拌速度设置为80-100r/min,混合完成后,加入(1)步骤产物,制得牙膏所需膏体;
(3)搅拌条件下,将牙膏所需膏体中加入透明质酸钠,搅拌混合15-20min制得预防儿童龋齿的牙膏。
10.根据权利要求9所述的制备方法,其特征在于,所述甜味剂为糖精钠,所述磨擦剂为碳酸钙,所述发泡剂为月桂醇硫酸钠,所述粘合剂为羧甲基纤维素、所述润湿剂为丙二醇。
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