CN117447385B

CN117447385B - 氘代的3-氨甲基-4-苯基哌啶-4-醇类化合物的制备及其用途

Info

Publication number: CN117447385B
Application number: CN202211518639.XA
Authority: CN
Inventors: 曹正洪; 范玫玫; 吴九妹
Original assignee: Nanchang Double Angel Biotechnology Development Co ltd
Current assignee: Nanchang Double Angel Biotechnology Development Co ltd
Priority date: 2022-11-30
Filing date: 2022-11-30
Publication date: 2024-05-10
Anticipated expiration: 2042-11-30
Also published as: CN117447385A

Abstract

本发明公开了一种氘代的3‑氨甲基‑4‑苯基哌啶‑4‑醇类化合物的制备及其用途，该化合物的结构通式为式（I）或者式（II），同时公开了该化合物的药学上可接受的盐及其药物组合物。本发明的化合物可用于疼痛的治疗。

Description

氘代的3-氨甲基-4-苯基哌啶-4-醇类化合物的制备及其用途

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种氘代的3-氨甲基-4-苯基哌啶-4-醇类化合物的制备及其用途。

背景技术

疼痛是一种复杂的生理心理活动，是临床上最常见的症状之一，也是人体五大生命体征之一，包括伤害性刺激作用于机体所引起的痛觉，以及机体对伤害性刺激的痛反应。疾病或手术后的顽固性疼痛，神经性疼痛以及各种慢性疼痛综合症都极大地危害人体健康，影响人们的生活质量。

目前临床使用的镇痛药物主要分为两类：非阿片类镇痛药(以NSAIDs为主)和阿片类镇痛药。其中，非甾体抗炎药具有解热、镇痛和抗炎作用，例如，对乙酰氨基酚、塞来昔布、美洛昔康和萘普生等。该类药物主要用于轻、中度疼痛和重度疼痛的协同治疗，对炎症性疼痛和运动痛疗效更优，但是存在剂量封顶效应(超过常用剂量，仅增加不良反应，却不提高镇痛效果)。常见的副作用包括心血管风险、出血风险、胃肠道、肾脏和肝脏损伤，其中胃肠道损伤最为常见。阿片类镇痛药物主要有吗啡、羟考酮、芬太尼、曲马多等，其特点是镇痛作用强，常用于急性疼痛、术后疼痛、癌痛以及中度至重度慢性疼痛的治疗，不存在剂量封顶效应，但长期使用会导致成瘾等副作用。目前，阿片类镇痛药物在疼痛治疗中有着不可替代的作用，但长期使用会出现的耐药性、致幻、成瘾性、戒断反应，以及呼吸抑制等不良反应。因此，需要开发镇痛作用更强、副作用更低的镇痛药以满足临床需求，此为研发新型镇痛药的重要方向。

专利CN201911076305.X中公开了一类3-(二甲氨基甲基)哌啶-4-醇类的衍生物，为阿片受体激动剂。该系列化合物以上市药物曲马多为先导化合物，通过电子等排设计，在位码区域引入酰胺或磺酰胺取代。其中，优选化合物(3R,4S)-1-(苄磺酰基)-3-((二甲基氨基)甲基)-4-(3-甲氧基苯基)哌啶-4-醇盐酸盐对MOR的亲和力为314.6nM，在小鼠热板实验中镇痛活性的ED₅₀为0.49mg/kg。在复旦大学的研究论文(新型氨甲基哌啶类阿片镇痛分子的设计、开发及分子机制研究[D].,2022)中，亦报道了该化合物的初步成药性研究结果。经分析，发现专利CN201911076305.X中的优选化合物(3R,4S)-1-(苄磺酰基)-3-((二甲基氨基)甲基)-4-(3-甲氧基苯基)哌啶-4-醇盐酸盐存在如下缺陷：

(1)化合物(3R,4S)-1-(苄磺酰基)-3-((二甲基氨基)甲基)-4-(3-甲氧基苯基)哌啶-4-醇盐酸盐的hERG IC₅₀为4.89μM，略强于上市药物TRV-130[hERG IC₅₀为6.2μM，J MedChem.2013 24；56(20):8019-31]，TRV-130说明书中提及其具有一定的心脏毒性，会引起QT间隔延长。鉴于化合物(3R,4S)-1-(苄磺酰基)-3-((二甲基氨基)甲基)-4-(3-甲氧基苯基)哌啶-4-醇盐酸盐对hERG的抑制能力大于TRV-130，提示该化合物可能具有较大的心脏安全风险；

(2)化合物(3R,4S)-1-(苄磺酰基)-3-((二甲基氨基)甲基)-4-(3-甲氧基苯基)哌啶-4-醇盐酸盐能够引起实验动物的便秘反应，且具有剂量依赖性，显示该化合物具有较大的副作用。

先导化合物的结构优化是发现高效、低毒活性化合物的常规途径。其中，化合物的氘代为近年药物修饰的一种策略。氘为氢在自然界中的一种稳定形态的非放射性同位素，由于其具有比氢更大的原子质量，使得C-D键比C-H键更加稳定(6-9倍)。如将药物分子中的氢原子用氘取代后，可能封闭代谢位点、减少有毒代谢物的生成。此外，氘代后亦可减缓系统清除速率从而延长药物在体内的半衰期。因此，可以通过降低单次给药剂量，同时在不影响药物的药理活性情况下实现降低药物的毒副作用的目标。氘代技术已经在多个药物结构改造中获得成功，例如治疗中枢神经系统障碍药氘代丁苯那嗪(丁苯那嗪氘代物)和抗肿瘤药多纳非尼(索拉非尼氘代物)。然而，不同化合物或者药物结构中被氘代所产生的效应是未知的，需要进行相应生物及安全性试验才能晓之利弊。此外，由于化合物结构中可被氘取代的氢原子较多，且可进行氘代的位置较多，使药物氘代结构修饰具有不确定性和较大的挑战性。

针对专利CN201911076305.X中公开的优选化合物(3R,4S)-1-(苄磺酰基)-3-((二甲基氨基)甲基)-4-(3-甲氧基苯基)哌啶-4-醇盐酸盐存在的潜在心脏毒性和便秘副作用等问题，本发明进行了技术改进和研究，公开了一类氘代的3-氨甲基-4-苯基哌啶-4-醇类化合物，试验结果发现，相比专利CN201911076305.X中优选化合物，具有更低的心脏毒性风险和较弱的便秘作用。此外，本发明的化合物亦显示出相比(3R,4S)-1-(苄磺酰基)-3-((二甲基氨基)甲基)-4-(3-甲氧基苯基)哌啶-4-醇盐酸盐和TRV-130更弱的CYP酶抑制作用和更高的肝微粒体稳定性，可克服现有技术的诸多缺点，具有更好的成药性和技术效果。

发明内容

本发明的目的在于提供一种氘代的3-氨甲基-4-苯基哌啶-4-醇类化合物的制备及其用途，以克服现有技术的缺陷，满足临床应用的需要，可用于制备疼痛药物。

本发明的技术方案如下：

一种氘代的3-氨甲基-4-苯基哌啶-4-醇类化合物，所述化合物的结构通式如下式(I)或式(II)：

其中，R₁和R₃为全氘代或者部分氘代的C₁～C₃烷基，

R₂和R₄为取代或者未取代的芳基、杂芳基，取代基可选自芳基、杂芳基、卤素、C₁～C₃链状烷基、C₃～C₇环烷基、氰基、烷氧基、烷磺酰基、砜基、亚砜基、三氟甲基、三氟甲氧基，

X为

n₁和n₂为0、1或2，优选的，n₁和n₂为1。

优选的，R₁和R₃为氘代的甲基-CD₃。

优选的，R₂和R₄为取代或者未取代的芳基，更优选的为苯基或2,4,5-三氟苯基。

优选的，本发明的3-氨甲基-4-苯基哌啶-4-醇类化合物可包括，但不限于下面所述优选的化合物：

I-1：1-(苄磺酰基)-3-((二甲氨基)甲基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)哌啶-4-醇；

I-2：1-((3-氯苯基)磺酰基)-3-((二甲氨基)甲基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)哌啶-4-醇；

I-3：3-((二甲氨基)甲基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)-1-(苯基磺酰基)哌啶-4-醇；

I-4：1-(3-((二甲氨基)甲基-4-羟基-4-(3-(甲氧基-d3)苯基)哌啶-1-基)-2-(2,4,5-三氟苯基)乙基-1-酮；

I-5：3-((二甲氨基)甲基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)-1-(苯乙基磺酰基)哌啶-4-醇；

I-6：3-((二甲氨基)甲基)-1-((4-氟苄基)磺酰基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)哌啶-4-醇；

I-7：3-((二甲氨基)甲基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)-1-((4-(三氟甲基)苄基)磺酰基)哌啶-4-醇；

I-8：3-((二甲氨基)甲基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)-1-((3-(三氟甲基)苄基)磺酰基)哌啶-4-醇；

I-9：1-(3-((二甲氨基)甲基)-4-羟基-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)哌啶-1-基)-2-苯乙基-1-酮；

I-10：1-(3-((二甲氨基)甲基)-4-羟基-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)哌啶-1-基)-2-(4-氟苯基)乙基-1-酮；

I-11：1-(3-((二甲氨基)甲基)-4-羟基-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)哌啶-1-基)-2-(4-(三氟甲基)苯基)乙基-1-酮；

I-12：1-(3-((二甲氨基)甲基)-4-羟基-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)哌啶-1-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)乙基-1-酮；

I-13：3-((二甲氨基)甲基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)-1-((噻吩-2-基甲基)磺酰基)哌啶-4-醇；

I-14：1-(3-((二甲氨基)甲基)-4-羟基-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)哌啶-1-基)-2-(噻吩-2-基)乙基-1-酮；

II-1：(3R,4S)-1-(苄磺酰基)-3-((二甲氨基)甲基)-4-(3-(甲氧基-d3)苯基)哌啶-4-醇；

II-2：1-((3R,4S)-3-((二甲氨基)甲基-4-羟基-4-(3-(甲氧基-d3)苯基)哌啶-1-基)-2-(2,4,5-三氟苯基)乙基-1-酮。

以上化合物的结构式为如下：

本发明的式(I)化合物的合成步骤依次包括Mannich反应、格式反应、上苯甲酰基保护、脱保护基Boc、与磺酰氯或羧酸缩合脱苯甲酰基保护基以及成盐。

当X为时，本发明的化合物(I-1、I-2、I-3、I-4、I-5、I-6、I-7、I-8、I-13)及其盐的合成通法一如下：

当X为时，本发明的化合物(I-4、I-9、I-10、I-11、I-12、I-14)及其盐的合成通法二如下：

本发明的式(II)化合物的合成步骤依次包括Mannich反应、格式试剂亲核加成、拆分剂拆分、上苯甲酰基保护、脱保护基Boc、与磺酰氯或者取代羧酸缩合、脱苯甲酰保护、脱甲氧基、上双苯甲酰基保护、N苄基化、选择性脱酚羟基苯甲酰基保护、与氘代碘甲烷缩合、加氢脱苄基保护、脱苯甲酰基保护基以及成盐。

所述拆分剂可选择L-DBTA、D-DBTA、左旋扁桃酸、右旋扁桃酸、左旋酒石酸、右旋酒石酸、左旋樟脑磺酸、右旋樟脑磺酸中的一种。拆分溶剂可选择甲醇、乙醇、异丙醇、乙酸乙酯、乙酸异丙酯中的一种或几种。拆分反应温度可为室温到100℃，优选60～90℃。拆分剂与底物比例可为0.8当量到1.2当量。

化合物II-1及其盐的合成路线为：

化合物II-2及其盐的合成路线为：

本发明还提供了一种所述的3-氨甲基-4-苯基哌啶-4-醇类化合物的游离碱、盐或水合物。

优选的，所述化合物的药学上可接受的盐为盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、富马酸、甲磺酸盐、马来酸盐、酒石酸盐或草酸盐。

优选的，所述药学上可接受的盐为盐酸盐。

本发明还提供了一种药物组合物，包含治疗有效量的所述的氘代的3-氨甲基-4-苯基哌啶-4-醇类化合物或其游离碱、盐或水合物，以及医学上可接受的载体。本发明的化合物可通过口服、注射等方式施用于需要这种治疗的患者。

本发明还提供了一种所述的氘代的3-氨甲基-4-苯基哌啶-4-醇类化合物或其游离碱、盐或水合物在制备镇痛药物中的应用。

本发明有益效果：

1、本发明所述氘代的3-氨甲基-4-苯基哌啶-4-醇类化合物体外对hERG的抑制能力弱于现有技术CN201911076305.X中的化合物(3R,4S)-1-(苄磺酰基)-3-((二甲基氨基)甲基)-4-(3-甲氧基苯基)哌啶-4-醇盐酸盐(hERG IC₅₀为4.89μM)和上市药物TRV-130(hERGIC₅₀为6.2μM)，如化合物II-1，hERG IC₅₀为12.1μM，对hERG具有较弱的抑制作用，提示本发明所述化合物潜在的心脏风险较低，详见本发明具体实施方式第五部分心脏安全性评价。；

2、本发明所述氘代的3-氨甲基-4-苯基哌啶-4-醇类化合物在动物体内表现出相比于现有技术CN201911076305.X中优选化合物(3R,4S)-1-(苄磺酰基)-3-((二甲基氨基)甲基)-4-(3-甲氧基苯基)哌啶-4-醇盐酸盐，具有更低的便秘副作用。通过对给药后动物排便时间和排便重量的比较，本发明所述化合物在动物排便时间和排便的重量上显著优于现有技术化合物(3R,4S)-1-(苄磺酰基)-3-((二甲基氨基)甲基)-4-(3-甲氧基苯基)哌啶-4-醇盐酸盐，显示较小的便秘副作用，详见本发明具体实施方式第六部分便秘副作用评价；

3、本发明所述氘代的3-氨甲基-4-苯基哌啶-4-醇类化合物在CYP酶抑制能力测试中显示出相比于现有技术CN201911076305.X中优选化合物和TRV-130更弱的CYP酶抑制作用，产生药物-药物相互作用的风险弱于现有技术CN201911076305.X中优选化合物和上市药物TRV-130，详见本发明具体实施方式第七部分化合物对人肝微粒体中细胞色素P450酶的抑制作用评价；

4、在体外肝微粒体稳定性实验中，本发明所述氘代的3-氨甲基-4-苯基哌啶-4-醇类化合物与现有技术CN201911076305.X中优选化合物和上市药物TRV-130相比具有更高的肝微粒体稳定性和较低的清除率，药代特性较好，详见本发明具体实施方式第八部分化合物在肝微粒体中代谢稳定性的检测。

上述研究结果显示本发明所述化合物具有以下特点：

1、具有较弱的hERG抑制能力，产生心脏毒性的风险低；

2、具有较低的便秘作用；

3、具有较弱的CYP酶抑制作用，产生药物-药物相互作用的风险低；

4、相比于现有技术CN201911076305.X和上市药物TRV-130具有更高的代谢稳定性和更低的清除率，表现出良好的药代特性。

综上，本发明所述氘代的3-氨甲基-4-苯基哌啶-4-醇类化合物在体外靶点作用和体内镇痛活性方面虽与现有技术CN201911076305.X中化合物相当，但本发明所述化合物在安全性、副作用、药代特性及成药性方面均明显优于现有技术CN201911076305.X，体现创造性和实质的科学进步。

具体实施方式

为了进一步理解本发明，下面将结合本发明实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

一、化合物的制备

各化合物的结构式如下：

实施例1

化合物I-1及其盐的合成路线参照以下合成通法一，依次包括Mannich反应、格式反应、上苯甲酰基保护、脱保护基Boc、与磺酰氯或羧酸缩合、脱苯甲酰基保护基以及成盐。

本实施例提供了1-(苄磺酰基)-3-((二甲氨基)甲基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)哌啶-4-醇(化合物I-1)及其盐的制备方法，从中间体7开始的合成步骤如下：

1)、1-(苄基磺酰基)-3-((二甲基氨基)甲基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)哌啶-4-基苯甲酸酯(中间体8)的制备

参考通法一，100ml单口瓶加入3-((二甲基氨基)甲基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)哌啶-4-基苯甲酸酯盐酸盐(中间体7)0.5g(1.23mmol，1eq.)、二氯甲烷(50ml)、三乙胺0.25g(2.45mmol，2eq.)，冰水浴下搅拌，加入苄磺酰氯0.23g(1.23mmol，1eq.)。30℃下搅拌过夜。加水(50ml)，混合、静置、分层、分液。水相用二氯甲烷(50ml)萃取两次。合并有机相，水洗、饱和食盐水洗、有机相无水硫酸镁干燥，过滤，减压蒸除，得浅黄色液体，硅胶柱分离纯化(DCM：MeOH＝100：1～50：1)得无色油状物376mg，收率58.4％。LCMS-ESI⁺:[M+H]⁺526.5.¹H NMR(400MHz,CD₃OD),δ8.00～8.06(m,2H)，7.51～7.58(m,1H),7.42～7.49(m,2H),7.34～7.42(m,4H),7.25～7.32(m,1H),7.15～7.22(m,1H),7.07～7.12(m,1H),6.89～6.95(m,2H),4.24～4.36(q,2H),3.40～3.48(m,2H),3.24～3.32(m,1H),3.08～3.15(m,1H),2.66～2.85(m,3H),2.55～2.63(m,1H),2.54(s,6H),2.44～2.53(m,1H)。

2)、1-(苄磺酰基)-3-((二甲氨基)甲基)-4-(3-(甲氧基-d3)苯基)哌啶-4-醇(化合物I-1)的制备1-(苄基磺酰基)-3-((二甲基氨基)甲基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)哌啶-4-基苯甲酸酯376mg(0.72mmol,1eq)溶于30ml无水乙醇，加入氢氧化钠86mg(2.15mmol,3eq)加热回流至原料反应完全，减压浓缩蒸除乙醇，加入20ml水和20ml乙酸乙酯萃取分液，水相用20ml乙酸乙酯萃取两次，合并有机相用无水硫酸镁干燥，滤除干燥剂，减压浓缩，残留物硅胶柱分离纯化，二氯甲烷～二氯甲烷：甲醇＝50：1洗脱，得无色油状物295mg，收率97.8％。

LCMS-ESI⁺:[M+H]⁺421.6.¹H NMR(400MHz,CD₃OD),δ7.40～7.45(m,1H),7.35～7.40(m,1H),7.30～7.35(m,1H),7.25～7.30(m,1H),7.14～7.22(m,2H),6.87～6.95(m,1H),6.83～6.87(m,1H),4.35(s,2H),3.99(s,1H),3.39～3.55(m,2H),3.24～3.33(m,1H),3.06～3.13(m,1H),2.72～2.80(m,3H),2.57(s,6H),2.11～2.20(m,1H),2.00～2.09(m,1H)。

3)、化合物I-1盐酸盐的制备

将化合物I-1 295mg(0.7mmol,1eq.)加入到50ml单口瓶中，加入20ml甲基叔丁基醚，搅拌溶解，加HCl的1,4-二氧六环溶液调节pH小于3，析出固体，搅拌30min，抽滤，滤饼甲基叔丁基醚淋洗，过滤，固体置于减压烘箱中干燥，得白色粉末状固体302mg，收率94.4％，m.p.:200.1～203.2℃。

4)、化合物I-1富马酸盐的制备

将化合物I-1 290mg(0.69mmol)溶于20ml甲基叔丁基醚中，向其缓慢滴加溶于5ml丙酮的富马酸(0.76mmol,1.1eq.)丙酮溶液，室温搅拌析出白色固体，抽滤，得350mg白色固体，收率94.6％。

5)、化合物I-1草酸盐的制备

将化合物I-1 285mg(0.68mmol)溶于20ml甲基叔丁基醚中，向其缓慢滴加溶于5ml丙酮的草酸(0.74mmol,1.1eq.)丙酮溶液，室温搅拌析出白色固体，抽滤，得290mg白色固体，收率83.8％。

实施例2

化合物I-2及其盐的合成路线参照合成通法一，本实施例提供了1-((3-氯苯基)磺酰基)-3-((二甲氨基)甲基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)哌啶-4-醇(化合物I-2)及其盐的制备方法，化合物I-2从中间体7开始的合成步骤如下：

1)、1-((3-氯苄基)磺酰基)--3-((二甲基氨基)甲基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)哌啶-4-基苯甲酸酯(中间体8)的制备

100ml单口瓶加入3-((二甲基氨基)甲基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)哌啶-4-基苯甲酸酯盐酸盐(中间体7)0.5g(1.23mmol，1eq.)、二氯甲烷(50ml)、三乙胺0.25g(2.45mmol，2eq.)，冰水浴下搅拌，加入3-氯苄磺酰氯0.28g(1.23mmol，1eq.)。参考通法一，得无色油状物352mg，收率51.1％。

LCMS-ESI⁺:[M+H]⁺561.2.¹H NMR(400MHz,CD₃OD),δ8.01～8.05(m,2H)，7.50～7.58(m,1H),7.40～7.49(m,3H),7.31～7.40(m,2H),7.25～7.31(m,1H),7.15～7.20(m,1H),7.08～7.11(m,1H),6.90～6.95(m,2H),4.25～4.35(q,2H),3.41～3.47(m,2H),3.25～3.30(m,1H),3.08～3.15(m,1H),2.67～2.84(m,3H),2.55～2.63(m,1H),2.55(s,6H),2.45～2.52(m,1H)。

2)、1-((3-氯苯基)磺酰基)-3-((二甲氨基)甲基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)哌啶-4-醇(I-2)的制备1-(苄基磺酰基)-3-((二甲基氨基)甲基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)哌啶-4-基苯甲酸酯350mg(0.97mmol,1eq)溶于30ml无水乙醇，加入氢氧化钠116mg(2.9mmol,3eq)，参考实施例1步骤2)，得无色油状物279mg，收率97.9％。

LCMS-ESI⁺:[M+H]⁺456.1.¹H NMR(400MHz,CD₃OD),δ7.45～7.52(d,J＝4Hz,2H),

7.36～7.46(m,3H),7.28～7.34(t,J＝8Hz,1H),7.03～7.08(m,2H),6.83～6.87(m,1H),5.56(s,1H),4.51～4.62(m,2H),4.05～4.11(m,1H),3.78(s,3H),3.08(s,6H),2.35～2.39(m,4H),1.88～1.97(m,1H),1.58～1.64(m,1H),1.11(s,2H)。

3)、I-2盐酸盐的制备

化合物I-2 250mg，溶于20ml甲基叔丁基醚中，搅拌溶解，缓慢滴加HCl的1,4-二氧六环溶液，调节pH小于3，析出固体，搅拌30min，抽滤，滤饼甲基叔丁基醚淋洗，过滤，固体置于减压烘箱中干燥，得白色粉末状固体246mg，收率91.1％，m.p.:200.1～203.2℃。

4)、I-2马来酸的制备

将化合物I-2 245mg(0.54mmol)溶于20ml甲基叔丁基醚中，向其缓慢滴加溶于5ml丙酮的富马酸(0.59mmol,1.1eq.)丙酮溶液，室温搅拌析出白色固体，抽滤，得289mg白色固体，收率94.2％。

5)、I-2草酸盐的制备

将化合物I-2 252mg(0.55mmol)溶于20ml甲基叔丁基醚中，向其缓慢滴加溶于5ml丙酮的草酸(0.61mmol,1.1eq.)丙酮溶液，室温搅拌析出白色固体，抽滤，得296mg白色固体，收率98.1％。

实施例3

化合物I-3及其盐的合成路线参照合成通法一，本实施例提供了3-((二甲氨基)甲基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)-1-(苯基磺酰基)哌啶-4-醇(化合物I-3)及其盐的制备方法，化合物I-3从中间体7开始的合成步骤如下：

1)、3-((二甲氨基)甲基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)-1-(苯基磺酰基)哌啶-4-基苯甲酸酯(中间体8)的制备

100ml单口瓶加入3-((二甲基氨基)甲基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)哌啶-4-基苯甲酸酯盐酸盐(中间体7)0.5g(1.23mmol，1eq.)、二氯甲烷(50ml)、三乙胺0.25g(2.45mmol，2eq.)，冰水浴下搅拌，加入苯磺酰氯0.22g(1.23mmol，1eq.)。参考通法一，得无色油状物316mg，收率50.2％。

LCMS-ESI⁺:[M+H]⁺512.7.¹H NMR(400MHz,CD₃OD),δ8.01～8.06(m,2H)，7.77～7.82(m,3H),7.59～7.67(m,2H),7.51～7.58(m,1H),7.41～7.49(m,2H),7.15～7.22(m,1H),7.07～7.11(m,1H),6.89～6.94(m,2H),3.53～3.60(m,1H),3.30～3.44(m,2H),3.14～3.21(m,1H),3.01～3.09(m,1H),2.59～2.78(m,3H),2.54(s,6H),2.44～2.52(m,1H)。

2)、3-((二甲氨基)甲基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)-1-(苯基磺酰基)哌啶-4-醇(I-3)的制备

3-((二甲氨基)甲基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)-1-(苯基磺酰基)哌啶-4-基苯甲酸酯316mg(0.62mmol,1eq)溶于30ml无水乙醇，加入氢氧化钠74mg(1.85mmol,3eq)，参考实施例1步骤2)，得无色油状物245mg，收率97.3％。

LCMS-ESI⁺:[M+H]⁺408.5.¹H NMR(400MHz,CD₃OD),δ7.77～7.82(m,2H),

7.73～7.77(m,1H),7.59～7.67(m,2H),7.14～7.22(m,2H),6.87～6.95(m,1H),6.83～6.87(m,1H),3.97(s,1H),3.55～3.63(m,1H),3.29～3.44(m,2H),2.89～2.97(m,1H),2.75～2.83(m,1H),2.67～2.75(m,2H),2.57(s,6H),2.12～2.20(m,1H),2.00～2.08(m,1H)。

3)、I-3盐酸盐的制备

化合物I-3 240mg，溶于20ml甲基叔丁基醚中，搅拌溶解，缓慢滴加HCl的1,4-二氧六环溶液，调节pH小于3，析出固体，搅拌30min，抽滤，滤饼甲基叔丁基醚淋洗，过滤，固体置于减压烘箱中干燥，得白色粉末状固体232mg，收率81.1％，m.p.:198.5～200.3℃。

实施例4

化合物I-4及其盐的合成路线参照合成通法一，本实施例提供了1-(3-((二甲氨基)甲基-4-羟基-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)哌啶-1-基)-2-(2,4,5-三氟苯基)乙基-1-酮(化合物I-4)及其盐的制备方法，化合物I-4从中间体7开始的合成步骤如下：

1)、3-((二甲氨基)甲基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)-1-(2-(2,4,5-三氟苯基)乙酰基)哌啶-4-基苯甲酸酯(中间体8)的制备

100ml单口瓶加入3-((二甲基氨基)甲基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)哌啶-4-基苯甲酸酯盐酸盐(中间体7)0.5g(1.23mmol，1eq.)2,4,5-三氟苯基乙酸0.23g(1.23mmol,1eq.)、EDCI-HCl0.35 g(1.85mmol,1.5eq.)、HOBT0.25 g(1.85mmol,1.5eq.)、DMF(6ml)、N-甲基吗啉0.50g(4.92mmol,4eq.)，参考通法二，得到无色油状物364mg，收率54.4％。

LCMS-ESI⁺:[M+H]⁺544.6.¹H NMR(400MHz,CD₃OD),δ8.00～8.06(m,2H),7.51～7.58(m,1H),7.42～7.49(m,2H),7.15～7.26(m,2H),7.07～7.12(m,1H),6.89～6.95(m,3H),3.67～3.79(m,3H),3.44～3.59(m,3H),2.81～2.90(m,1H),2.73～2.81(m,2H),2.63～2.70(m,1H),2.54(s,6H),2.42～2.51(m,1H)。

2)、1-(3-((二甲氨基)甲基-4-羟基-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)哌啶-1-基)-2-(2,4,5-三氟苯基)乙基-1-酮(I-4)的制备

3-((二甲氨基)甲基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)-1-(2-(2,4,5-三氟苯基)乙酰基)哌啶-4-基苯甲酸酯364mg(0.67mmol,1eq)溶于30ml无水乙醇，加入氢氧化钠80mg(2.0mmol,3eq)，参考实施例1步骤2)，得无色油状物286mg，收率97.2％。

LCMS-ESI⁺:[M+H]⁺440.6.¹H NMR(400MHz,CD₃OD),δ7.27～7.35(m,2H),7.09～7.20(m,3H),6.89～7.07(m,1H),6.83～6.87(m,1H),4.46～4.64(m,1H),3.84～3.96(m,2H),3.51～3.66(m,1H),3.03～3.14(m,2H),2.67～2.83(m,6H),2.30～2.56(m,2H),2.12～2.20(m,1H),1.71～1.82(m,1H)。

3)、I-4盐酸盐的制备

将化合物I-4 200mg，溶于20ml甲基叔丁基醚中，搅拌溶解，缓慢滴加HCl的1,4-二氧六环溶液，调节pH小于3，析出固体，搅拌30min，抽滤，滤饼甲基叔丁基醚淋洗，过滤，固体置于减压烘箱中干燥，得白色粉末状固体205mg，收率94.6％，m.p.:186.6～189.1℃。

4)、I-4富马酸盐制备

将化合物I-4 186mg(0.42mmol)溶于20ml甲基叔丁基醚中，向其缓慢滴加溶于5ml丙酮的富马酸(0.47mmol,1.1eq.)丙酮溶液，室温搅拌析出白色固体，抽滤，得209mg白色固体，收率88.9％。

实施例5

化合物I-5及其盐的合成路线参照合成通法一，本实施例提供了3-((二甲氨基)甲基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)-1-(苯乙基磺酰基)哌啶-4-醇(化合物I-5)及其盐的制备方法，化合物I-5从中间体7开始的合成步骤如下：

1)、3-((二甲氨基)甲基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)-1-(苯乙基磺酰基)哌啶-4-基苯甲酸酯(中间体8)的制备

100ml单口瓶加入3-((二甲基氨基)甲基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)哌啶-4-基苯甲酸酯盐酸盐(中间体7)0.5g(1.23mmol，1eq.)、二氯甲烷(50ml)、三乙胺0.25g(2.45mmol，2eq.)，冰水浴下搅拌，加入2-苯基-乙烷磺酰氯0.25g(1.23mmol，1eq.)。参考通法一，得无色油状物339mg，收率51.1％。

LCMS-ESI⁺:[M+H]⁺540.7.¹H NMR(400MHz,CD₃OD),δ8.00～8.06(m,2H)，7.51～7.58(m,1H),7.41～7.49(m,2H),7.15～7.29(m,6H),7.07～7.12(m,1H),3.38～3.56(m,4H),3.19～3.28(m,1H),2.97(t,J＝8Hz,2H),2.77～2.91(m,2H),2.66～2.77(m,2H),2.55～2.63(m,1H),2.54(s,6H),2.44～2.53(m,1H)。

2)、3-((二甲氨基)甲基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)-1-(苯乙基磺酰基)哌啶-4-醇(I-5)的制备

3-((二甲氨基)甲基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)-1-(苯乙基磺酰基)哌啶-4-基苯甲酸酯339mg(0.63mmol,1eq)溶于30ml无水乙醇，加入氢氧化钠75mg(1.9mmol,3eq)，参考实施例1步骤2)，得无色油状物258mg，收率94.3％。

LCMS-ESI⁺:[M+H]⁺436.6.¹H NMR(400MHz,CD₃OD),δ7.21～7.29(m,5H),

7.14～7.21(m,2H),6.87～6.95(m,1H),6.83～6.87(m,1H),3.99(s,1H),3.36～3.56(m,4H),3.19～3.28(m,1H),3.07～3.15(m,1H),2.93～3.02(m,2H),2.72～2.80(m,3H),2.57(s,6H),2.11～2.20(m,1H),2.01～2.09(m,1H)。

3)、I-5盐酸盐的制备

将化合物I-5 258mg，溶于20ml甲基叔丁基醚中，搅拌溶解，缓慢滴加HCl的1,4-二氧六环溶液，调节pH小于3，析出固体，搅拌30min，抽滤，滤饼甲基叔丁基醚淋洗，过滤，固体置于减压烘箱中干燥，得白色粉末状固体261mg，收率93.3％，m.p.:180.2～183.0℃。

实施例6

化合物I-6及其盐的合成路线参照合成通法一，本实施例提供了3-((二甲氨基)甲基)-1-((4-氟苄基)磺酰基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)哌啶-4-醇(化合物I-6)及其盐的制备方法，化合物I-6从中间体7开始的合成步骤如下：

1)、3-((二甲氨基)甲基)-1-((4-氟苄基)磺酰基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)哌啶-4-基苯甲酸酯(中间体8)的制备

100ml单口瓶加入3-((二甲基氨基)甲基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)哌啶-4-基苯甲酸酯盐酸盐(中间体7)0.5g(1.23mmol，1eq.)、二氯甲烷(50ml)、三乙胺0.25g(2.45mmol，2eq.)，冰水浴下搅拌，加入4-氟苯基甲磺酰氯0.25g(1.23mmol，1eq.)。参考通法一，得无色油状物298mg，收率44.6％。

LCMS-ESI⁺:[M+H]⁺544.7.¹H NMR(400MHz,CD₃OD),δ8.00～8.06(m,2H)，7.54(t,J＝

8Hz,1H),7.41～7.52(m,4H),7.15～7.22(m,1H),7.02～7.12(m,3H),6.89～6.95(m,2H),4.27～4.37(q,2H),3.40～3.48(m,2H),3.24～3.32(m,1H),3.08～3.15(m,1H),2.66～2.85(m,3H),2.56～2.63(m,1H),2.54(s,6H),2.44～2.53(m,1H)。

2)、3-((二甲氨基)甲基)-1-((4-氟苄基)磺酰基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)哌啶-4-醇(I-6)的制备

3-((二甲氨基)甲基)-1-((4-氟苄基)磺酰基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)哌啶-4-基苯甲酸酯298mg(0.55mmol,1eq)溶于30ml无水乙醇，加入氢氧化钠66mg(1.6mmol,3eq)，参考实施例1步骤2)，得无色油状物229mg，收率95.0％。

LCMS-ESI⁺:[M+H]⁺440.6.¹H NMR(400MHz,CD₃OD),δ7.45～7.52(m,2H),7.14～7.21(m,2H),7.02～7.09(m,2H),6.87～6.95(m,1H),6.83～6.86(m,1H),4.27～4.37(q,2H),4.00(s,1H),3.39～3.55(m,2H),3.24～3.33(m,1H),3.06～3.13(m,1H),2.67～2.80(m,3H),2.57(s,6H),2.11～2.20(m,1H),2.00～2.09(m,1H)。

3)、I-6草酸盐的制备

将化合物I-6 229mg(0.52mmol)溶于20ml甲基叔丁基醚中，向其缓慢滴加溶于5ml丙酮的草酸(0.57mmol,1.1eq.)丙酮溶液，室温搅拌析出白色固体，抽滤，得261mg白色固体，收率94.6％。

实施例7

化合物I-7及其盐的合成路线参照合成通法一，本实施例提供了3-((二甲氨基)甲基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)-1-((4-(三氟甲基)苄基)磺酰基)哌啶-4-醇(化合物I-7)及其盐的制备方法，化合物I-7从中间体7开始的合成步骤如下：

1)、3-((二甲氨基)甲基)-1-((4-(三氟甲基)苄基)磺酰基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)哌啶-4-基苯甲酸酯(中间体8)的制备

100ml单口瓶加入3-((二甲基氨基)甲基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)哌啶-4-基苯甲酸酯盐酸盐(中间体7)0.5g(1.23mmol，1eq.)、二氯甲烷(50ml)、三乙胺0.25g(2.45mmol，2eq.)，冰水浴下搅拌，加入4-(三氟甲基)甲苯磺酰氯0.32g(1.23mmol，1eq.)。参考通法一，得无色油状物365mg，收率50.0％。

LCMS-ESI⁺:[M+H]⁺594.7.¹H NMR(400MHz,CD₃OD),δ8.00～8.06(m,2H)，7.63～7.61(d,J＝8Hz,2H),7.51～7.58(m,1H),7.41～7.51(m,4H),7.18(t,J＝8Hz,1H),7.07～7.12(m,2H),6.89～6.95(m,2H),4.24～4.37(q,2H),3.40～3.48(m,2H),3.24～3.32(m,1H),3.08～3.15(m,1H),2.65～2.85(m,3H),2.55～2.63(m,1H),2.54(s,6H),2.44～2.53(m,1H)。

2)、3-((二甲氨基)甲基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)-1-((4-(三氟甲基)苄基)磺酰基)哌啶-4-醇(I-7)的制备

3-((二甲氨基)甲基)-1-((4-(三氟甲基)苄基)磺酰基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)哌啶-4-基苯甲酸酯365mg(0.61mmol,1eq)溶于30ml无水乙醇，加入氢氧化钠74mg(1.8mmol,3eq)，参考实施例1步骤2)，得无色油状物282mg，收率93.7％。

LCMS-ESI⁺:[M+H]⁺490.6.¹H NMR(400MHz,CD₃OD),δ7.59～7.65(d,J＝8Hz,2H),

7.47～7.53(m,2H),7.14～7.22(m,2H),6.87～6.95(m,1H),6.83～6.87(m,1H),4.24～4.37(q,2H),3.99(s,1H),3.39～3.55(m,2H),3.24～3.33(m,1H),3.06～3.13(m,1H),2.68～2.80(m,3H),2.57(s,6H),2.11～2.20(m,1H),2.00～2.09(m,1H)。

3)、I-7盐酸盐的制备

将化合物I-7 282mg，溶于20ml甲基叔丁基醚中，搅拌溶解，缓慢滴加HCl的1,4-二氧六环溶液，调节pH小于3，析出固体，搅拌30min，抽滤，滤饼甲基叔丁基醚淋洗，过滤，固体置于减压烘箱中干燥，得白色粉末状固体276mg，收率91.1％。

实施例8

化合物I-8及其盐的合成路线参照合成通法一，本实施例提供了3-((二甲氨基)甲基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)-1-((3-(三氟甲基)苄基)磺酰基)哌啶-4-醇(化合物I-8)及其盐的制备方法，化合物I-8从中间体7开始的合成步骤如下：

1)、3-((二甲氨基)甲基)-1-((3-(三氟甲基)苄基)磺酰基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)哌啶-4-基苯甲酸酯(中间体8)的制备

100ml单口瓶加入3-((二甲基氨基)甲基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)哌啶-4-基苯甲酸酯盐酸盐(中间体7)0.5g(1.23mmol，1eq.)、二氯甲烷(50ml)、三乙胺0.25g(2.45mmol，2eq.)，冰水浴下搅拌，加入[3-(三氟甲基)吡啶]甲烷磺酰氯0.32g(1.23mmol，1eq.)。参考通法一，得无色油状物354mg，收率48.5％。

LCMS-ESI⁺:[M+H]⁺594.7.¹H NMR(400MHz,CD₃OD),δ8.00～8.06(m,2H)，7.63～7.68(m,1H),7.50～7.58(m,2H),7.41～7.50(m,4H),7.18(t,J＝8Hz,1H),7.07～7.12(m,2H),6.89～6.95(m,2H),4.35(s,2H),3.40～3.48(m,2H),3.24～3.32(m,1H),3.08～3.15(m,1H),2.65～2.85(m,3H),2.55～2.63(m,1H),2.54(s,6H),2.44～2.53(m,1H)。

2)、3-((二甲氨基)甲基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)-1-((3-(三氟甲基)苄基)磺酰基)哌啶-4-醇(I-8)的制备

3-((二甲氨基)甲基)-1-((3-(三氟甲基)苄基)磺酰基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)哌啶-4-基苯甲酸酯354mg(0.60mmol,1eq)溶于30ml无水乙醇，加入氢氧化钠74mg(1.8mmol,3eq)，参考实施例1步骤2)，得无色油状物278mg，收率95.2％。

LCMS-ESI⁺:[M+H]⁺490.6.¹H NMR(400MHz,CD₃OD),δ7.63～7.68(m,1H),7.50～7.58(m,1H),7.42～7.50(m,2H),7.14～7.22(m,2H),6.87～6.95(m,1H),6.83～6.87(m,1H),4.35(s,2H),3.99(s,1H),3.39～3.55(m,2H),3.24～3.33(m,1H),3.06～3.13(m,1H),2.67～2.80(m,3H),2.57(s,6H),2.11～2.20(m,1H),2.00～2.09(m,1H)。

3)、I-8马来酸盐的制备

将化合物I-8 278mg(0.57mmol)溶于20ml甲基叔丁基醚中，向其缓慢滴加溶于5ml丙酮的富马酸(0.62mmol,1.1eq.)丙酮溶液，室温搅拌析出白色固体，抽滤，得302mg白色固体，收率87.8％。

实施例9

化合物I-9及其盐的合成路线参照以下合成通法二：

本实施例提供了1-(3-((二甲氨基)甲基)-4-羟基-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)哌啶-1-基)-2-苯乙基-1-酮(化合物I-9)及其盐的制备方法，化合物I-9从中间体7开始的合成步骤如下：

1)、3-((二甲氨基)甲基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)-1-(2-苯乙酰基)哌啶-4-基苯甲酸酯(中间体10)的制备

100ml单口瓶加入3-((二甲基氨基)甲基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)哌啶-4-基苯甲酸酯盐酸盐(中间体7)0.5g(1.23mmol，1eq.)苯乙酸0.18g(1.23mmol,1eq.)、EDCI-HCl0.35g(1.85mmol,1.5eq.)、HOBT0.25 g(1.85mmol,1.5eq.)、DMF(6ml)、N-甲基吗啉0.50g(4.92mmol,4eq.)，参考通法二，得到无色油状物342mg，收率56.8％。

LCMS-ESI⁺:[M+H]⁺490.6.¹H NMR(400MHz,CD₃OD),δ8.00～8.06(m,2H),7.54(t,J＝

8Hz,1H),7.45(t,J＝8Hz,2H),7.21～7.32(m,5H),7.18(t,J＝8Hz,1H),7.07～7.12(m,1H),6.89～6.95(m,2H),3.71～3.78(dd,J₁＝4Hz,J₂＝4Hz,1H),3.51～3.62(m,4H),3.45～3.51(dd,J₁＝4Hz,J₂＝4Hz,1H),2.73～2.90(m,3H),2.63～2.70(m,1H),2.63～2.70(m,1H),2.54(s,6H),2.42～2.51(m,1H)。

2)、1-(3-((二甲氨基)甲基)-4-羟基-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)哌啶-1-基)-2-苯乙基-1-酮(I-9)的制备

3-((二甲氨基)甲基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)-1-(2-苯乙酰基)哌啶-4-基苯甲酸酯342mg(0.70mmol,1eq)溶于30ml无水乙醇，加入氢氧化钠84mg(2.1mmol,3eq)，其余步骤参考实施例1步骤2)，得无色油状物251mg，收率93.2％。

LCMS-ESI⁺:[M+H]⁺386.6.¹H NMR(400MHz,CD₃OD),δ7.21～7.32(m,5H),7.15～7.21(m,2H),6.88～6.94(m,1H),6.81～6.86(m,1H),4.06(s,1H),3.66～3.73(dd,J₁＝4Hz,J₂＝4Hz,1H),3.40～3.52(m,5H),2.70～2.80(m,2H),2.56(s,6H),2.40～2.48(m,1H),2.22～2.33(m,2H)。

3)、I-9盐酸盐的制备

将化合物I-9 251mg，溶于20ml甲基叔丁基醚中，搅拌溶解，缓慢滴加HCl的1,4-二氧六环溶液，调节pH小于3，析出固体，搅拌30min，抽滤，滤饼甲基叔丁基醚淋洗，过滤，固体置于减压烘箱中干燥，得白色粉末状固体246mg，收率89.5％。

实施例10

化合物I-10及其盐的合成路线参照合成通法二，本实施例提供了1-(3-((二甲氨基)甲基)-4-羟基-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)哌啶-1-基)-2-(4-氟苯基)乙基-1-酮(化合物I-10)及其盐的制备方法，化合物I-10从中间体7开始的合成步骤如下：

1)、3-((二甲氨基)甲基)-1-(2-(4-氟苯基)乙酰基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)哌啶-4-基苯甲酸酯(中间体10)的制备

100ml单口瓶加入3-((二甲基氨基)甲基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)哌啶-4-基苯甲酸酯盐酸盐(中间体7)0.5g(1.23mmol，1eq.)4-氟苯乙酸0.19g(1.23mmol,1eq.)、EDCI-HCl0.35g(1.85mmol,1.5eq.)、HOBT0.25 g(1.85mmol,1.5eq.)、DMF(6ml)、N-甲基吗啉0.50g(4.92mmol,4eq.)，参考通法二，得到无色油状物396mg，收率63.4％。

LCMS-ESI⁺:[M+H]⁺508.7.¹H NMR(400MHz,CD₃OD),δ8.00～8.06(m,2H),7.54(t,J＝

8Hz,1H),7.45(t,J＝8Hz,2H),7.27～7.33(m,2H),7.15(t,J＝8Hz,1H),7.03～7.12(m,3H),6.89～6.95(m,2H),3.71～3.78(dd,J₁＝4Hz,J₂＝4Hz,1H),3.45～3.62(m,5H),2.81～2.90(m,3H),2.73～2.81(m,1H),2.63～2.70(dd,J₁＝4Hz,J₂＝4Hz,1H),2.55(s,6H),2.42～2.51(m,1H)。2)、1-(3-((二甲氨基)甲基)-4-羟基-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)哌啶-1-基)-2-(4-氟苯基)乙基-1-酮(I-10)的制备

3-((二甲氨基)甲基)-1-(2-(4-氟苯基)乙酰基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)哌啶-4-基苯甲酸酯396mg(0.78mmol,1eq)溶于30ml无水乙醇，加入氢氧化钠94mg(2.3mmol,3eq)，其余步骤参考实施例1步骤2)，得无色油状物273mg，收率86.7％。

LCMS-ESI⁺:[M+H]⁺404.5.¹H NMR(400MHz,CD₃OD),δ7.27～7.33(m,2H),7.15～7.23(m,2H),7.07(t,J＝8Hz,2H),6.88～6.94(m,1H),6.81～6.86(m,1H),4.06(s,1H),3.66～3.73(dd,J₁＝4Hz,J₂＝4Hz,1H),3.40～3.62(m,5H),2.70～2.80(m,2H),2.56(s,6H),2.40～2.48(m,1H),2.22～2.33(m,2H)。

3)、I-10草酸盐的制备

将化合物I-10 273mg(0.68mmol)溶于20ml甲基叔丁基醚中，向其缓慢滴加溶于5ml丙酮的草酸(0.74mmol,1.1eq.)丙酮溶液，室温搅拌析出白色固体，抽滤，得302mg白色固体，收率90.4％。

实施例11

化合物I-11及其盐的合成路线参照合成通法二，本实施例提供了1-(3-((二甲氨基)甲基)-4-羟基-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)哌啶-1-基)-2-(4-(三氟甲基)苯基)乙基-1-酮(化合物I-11)及其盐的制备方法，化合物I-11从中间体7开始的合成步骤如下：

1)、3-((二甲氨基)甲基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)-1-(2-(4-(三氟甲基)苯基)乙酰基)哌啶-4-基苯甲酸酯(中间体10)的制备

100ml单口瓶加入3-((二甲基氨基)甲基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)哌啶-4-基苯甲酸酯盐酸盐(中间体7)0.5g(1.23mmol，1eq.)4-(三氟甲基)苯乙酸0.25g(1.23mmol,1eq.)、EDCI-HCl0.35 g(1.85mmol,1.5eq.)、HOBT0.25 g(1.85mmol,1.5eq.)、DMF(6ml)、N-甲基吗啉0.50g(4.92mmol,4eq.)，参考通法二，得到无色油状物374mg，收率54.5％。

LCMS-ESI⁺:[M+H]⁺558.6.¹H NMR(400MHz,CD₃OD),δ8.00～8.06(m,2H),7.51～7.62(m,3H),7.45(t,J＝8Hz,2H),7.32～7.38(m,2H),7.18(t,J＝8Hz,1H),7.07～7.12(m,1H),

6.89～6.95(m,2H),3.71～3.78(dd,J₁＝4Hz,J₂＝4Hz,1H),3.45～3.64(m,5H),2.81～2.90(m,3H),2.63～2.70(dd,J₁＝4Hz,J₂＝4Hz,1H),2.54(s,6H),2.42～2.51(m,1H)。

2)、1-(3-((二甲氨基)甲基)-4-羟基-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)哌啶-1-基)-2-(4-(三氟甲基)苯基)乙基-1-酮(I-11)的制备

3-((二甲氨基)甲基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)-1-(2-(4-(三氟甲基)苯基)乙酰基)哌啶-4-基苯甲酸酯374mg(0.49mmol,1eq)溶于30ml无水乙醇，加入氢氧化钠59mg(1.5mmol,3eq)，其余步骤参考实施例1步骤2)，得无色油状物203mg，收率91.4％。

LCMS-ESI⁺:[M+H]⁺454.6.¹H NMR(400MHz,CD₃OD),δ7.58～7.59(d,J＝4Hz,2H),

7.32～7.38(m,2H),6.88～6.94(m,1H),6.81～6.86(m,1H),4.06(s,1H),3.66～3.73(dd,J₁＝4Hz,J₂＝4Hz,1H),3.54～3.64(m,2H),3.40～3.54(m,3H),2.70～2.80(m,2H),2.56(s,6H),2.40～2.48(m,1H),2.22～2.33(m,2H)。

3)、I-11草酸盐的制备

将化合物I-11 203mg(0.45mmol)溶于20ml甲基叔丁基醚中，向其缓慢滴加溶于5ml丙酮的草酸(0.74mmol,1.1eq.)丙酮溶液，室温搅拌析出白色固体，抽滤，得207mg白色固体，收率94.5％。

实施例12

化合物I-12及其盐的合成路线参照合成通法二，本实施例提供了1-(3-((二甲氨基)甲基)-4-羟基-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)哌啶-1-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)乙基-1-酮(化合物I-12)及其盐的制备方法，化合物I-12从中间体7开始的合成步骤如下：

1)、3-((二甲氨基)甲基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)-1-(2-(3-(三氟甲基)苯基)乙酰基)哌啶-4-基苯甲酸酯(中间体10)的制备

100ml单口瓶加入3-((二甲基氨基)甲基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)哌啶-4-基苯甲酸酯盐酸盐(中间体7)0.5g(1.23mmol，1eq.)间三氟甲基苯乙酸0.25g(1.23mmol,1eq.)、EDCI-HCl 0.35g(1.85mmol,1.5eq.)、HOBT0.25 g(1.85mmol,1.5eq.)、DMF(6ml)、N-甲基吗啉0.50g(4.92mmol,4eq.)，参考通法二，得到无色油状物359mg，收率52.3％。

LCMS-ESI⁺:[M+H]⁺558.6.¹H NMR(400MHz,CD₃OD),δ8.00～8.06(m,2H),7.59～7.64(m,1H),7.51～7.59(m,2H),7.41～7.51(m,3H),7.22～7.27(m,1H),7.18(t,J＝8Hz,1H),7.07～7.12(m,1H),6.89～6.95(m,2H),3.71～3.78(dd,J₁＝4Hz,J₂＝4Hz,1H),3.55～3.65(d,J＝4Hz,2H),3.45～3.55(m,3H),2.81～2.90(m,1H),2.76～2.81(m,2H),2.63～2.70(dd,J₁＝4Hz,J₂＝4Hz,1H),2.54(s,6H),2.42～2.51(m,1H)。

2)、1-(3-((二甲氨基)甲基)-4-羟基-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)哌啶-1-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)乙基-1-酮(I-12)的制备

3-((二甲氨基)甲基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)-1-(2-(3-(三氟甲基)苯基)乙酰基)哌啶-4-基苯甲酸酯359mg(0.64mmol,1eq)溶于30ml无水乙醇，加入氢氧化钠77mg(1.9mmol,3eq)，其余步骤参考实施例1步骤2)，得无色油状物272mg，收率93.5％。

LCMS-ESI⁺:[M+H]⁺454.6.¹H NMR(400MHz,CD₃OD),δ7.59～7.64(m,1H),7.52～7.59(m,1H),7.44～7.51(m,1H),7.23～7.25(d,J＝8Hz,1H),6.88～6.94(m,1H),6.81～6.86(m,1H),4.06(s,1H),3.66～3.73(dd,J₁＝4Hz,J₂＝4Hz,1H),3.60～3.61(d,J＝8Hz,2H),3.40～3.54(m,3H),2.70～2.80(m,2H),2.56(s,6H),2.40～2.48(m,1H),2.22～2.33(m,2H)。

3)、I-12富马酸盐的制备

将化合物I-12 272mg(0.60mmol)溶于20ml甲基叔丁基醚中，向其缓慢滴加溶于5ml丙酮的富马酸(0.66mmol,1.1eq.)丙酮溶液，室温搅拌析出白色固体，抽滤，得259mg白色固体，收率75.8％。

实施例13

化合物I-13及其盐的合成路线参照合成通法一，本实施例提供了3-((二甲氨基)甲基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)-1-((噻吩-2-基甲基)磺酰基)哌啶-4-醇(化合物I-13)及其盐的制备方法，化合物I-12从中间体7开始的合成步骤如下：

100ml单口瓶加入3-((二甲基氨基)甲基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)哌啶-4-基苯甲酸酯盐酸盐(中间体7)0.5g(1.23mmol，1eq.)、二氯甲烷(50ml)、三乙胺0.25g(2.45mmol，2eq.)，冰水浴下搅拌，加入噻吩-2-基甲磺酰氯0.24g(1.23mmol，1eq.)。参考通法一，得无色油状物336mg，收率51.4％。

LCMS-ESI⁺:[M+H]⁺532.7.¹H NMR(400MHz,CD₃OD),δ8.00～8.06(m,2H)，7.54(t,J＝

8Hz,1H),7.45(t,J＝8Hz,2H),7.28～7.88(m,1H),7.18(t,J＝8Hz,1H),7.05～7.12(m,2H),6.89～6.96(m,3H),4.61～4.64(d,J＝12Hz,1H),4.09～4.12(d,J＝12Hz,1H),3.40～3.49(m,2H),3.24～3.33(m,1H),3.08～3.15(dd,J₁＝4Hz,J₂＝4Hz,1H),2.66～2.85(m,3H),2.55～2.63(m,1H),2.55(s,6H),2.44～2.53(m,1H)。

2)、3-((二甲氨基)甲基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)-1-((噻吩-2-基甲基)磺酰基)哌啶-4-醇(I-13)的制备

3-((二甲氨基)甲基)-1-((3-(三氟甲基)苄基)磺酰基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)哌啶-4-基苯甲酸酯336mg(0.63mmol,1eq)溶于30ml无水乙醇，加入氢氧化钠77mg(1.9mmol,3eq)，其余步骤参考实施例1步骤2)，得无色油状物259mg，收率95.9％。

LCMS-ESI⁺:[M+H]⁺438.6.¹H NMR(400MHz,CD₃OD),δ7.28～7.33(m,1H),7.14～7.22(m,2H),7.05～7.11(dd,J₁＝4Hz,J₂＝4Hz,1H),6.87～6.96(m,3H),6.83～6.87(m,1H),4.61～4.64(d,J＝12Hz,1H),4.09～4.11(d,J＝8Hz,1H),3.99(s,1H),3.9～3.54(m,2H),3.24～3.32(m,1H),3.05～3.13(dd,J₁＝4Hz,J₂＝4Hz,1H),2.67～2.80(m,3H),2.55～2.63(m,1H),2.55(s,6H),2.11～2.20(m,1H),2.00～2.09(m,1H)。

3)、I-13盐酸盐的制备

将化合物I-13 259mg，溶于20ml甲基叔丁基醚中，搅拌溶解，缓慢滴加HCl的1,4-二氧六环溶液，调节pH小于3，析出固体，搅拌30min，抽滤，滤饼甲基叔丁基醚淋洗，过滤，固体置于减压烘箱中干燥，得白色粉末状固体252mg，收率89.7％。

实施例14

化合物I-14及其盐的合成路线参照合成通法二，本实施例提供了1-(3-((二甲氨基)甲基)-4-羟基-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)哌啶-1-基)-2-(噻吩-2-基)乙基-1-酮(化合物I-14)及其盐的制备方法，化合物I-12从中间体7开始的合成步骤如下：

1)、3-((二甲氨基)甲基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)-1-(2-(噻吩-2-基)乙酰基)哌啶-4-基苯甲酸酯(中间体10)的制备

100ml单口瓶加入3-((二甲基氨基)甲基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)哌啶-4-基苯甲酸酯盐酸盐(中间体7)0.5g(1.23mmol，1eq.)2-噻吩乙酸0.17g(1.23mmol,1eq.)、EDCI-HCl0.35g(1.85mmol,1.5eq.)、HOBT0.25 g(1.85mmol,1.5eq.)、DMF(6ml)、N-甲基吗啉0.50g(4.92mmol,4eq.)，参考通法二，得到无色油状物372mg，收率61.0％。

LCMS-ESI⁺:[M+H]⁺496.7.¹H NMR(400MHz,CD₃OD),δ8.00～8.06(m,2H),7.54(t,J＝

8Hz,1H),7.45(t,J＝8Hz,2H),7.28～7.33(m,1H),7.18(t,J＝8Hz,1H),7.07～7.12(m,1H),6.89～7.02(m,3H),6.80～6.85(m,1H),3.74～3.80(dd,J₁＝4Hz,J₂＝4Hz,1H),3.63～3.74(q,2H),3.49～3.58(m,3H),2.81～2.90(m,1H),2.73～2.81(m,2H),2.63～2.70(dd,J₁＝4Hz,J₂＝4Hz,1H),2.54(s,6H),2.42～2.51(m,1H)。

2)、1-(3-((二甲氨基)甲基)-4-羟基-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)哌啶-1-基)-2-(噻吩-2-基)乙基-1-酮(I-14)的制备

3-((二甲氨基)甲基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)-1-(2-(噻吩-2-基)乙酰基)哌啶-4-基苯甲酸酯372mg(0.75mmol,1eq)溶于30ml无水乙醇，加入氢氧化钠90mg(2.3mmol,3eq)，其余步骤参考实施例1步骤2)，得无色油状物270mg，收率91.8％。

LCMS-ESI⁺:[M+H]⁺392.5.¹H NMR(400MHz,CD₃OD),δ7.28～7.33(m,1H),7.15～7.23(m,2H),6.96～7.02(m,1H),6.88～6.94(m,1H),6.80～6.86(m,2H),4.06(s,1H),3.66～3.74(m,3H),3.41～3.53(m,3H),2.70～2.80(m,2H),2.56(s,6H),2.40～2.48(m,1H),2.22～2.33(m,2H)。3)、I-14马来酸盐的制备

将化合物I-14 270mg(0.69mmol)溶于20ml甲基叔丁基醚中，向其缓慢滴加溶于5ml丙酮的马来酸(0.76mmol,1.1eq.)丙酮溶液，室温搅拌析出白色固体，抽滤，得297mg白色固体，收率84.9％。

实施例15

本实施例提供了(3R,4S)-1-(苄基磺酰基)-3-((二甲氨基)甲基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)哌啶-4-醇(化合物II-1)及其盐的制备方法，具体步骤如下：

本实施例中化合物II-1从中间体14开始的合成步骤如下：

1)、(3R,4S)-1-(苄磺酰基)-3-((二甲氨基)甲基)-4-(3-甲氧基苯基)哌啶-4-基苯甲酸酯(中间体15)的制备

将中间体14(3.09g，7.6mmol)加入二氯甲烷(30ml)、苄基磺酰氯(2.18g，11.4mmol，1.5eq.)，滴加三乙胺(3.86g，38.2mmol，5eq.)，DMAP(46.6mg，0.38mmmol，0.05eq.)，四丁基溴化铵(246mg，0.76mmol，0.1eq.)，室温搅拌。24h后TLC(DCM:MeOH＝10:1)基本反应完全。加水(50ml)、二氯甲烷(50ml)，混合、静置、分层、分液。水相二氯甲烷萃取两次(50+50ml)。合并有机相，50ml水洗，50ml饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸镁干燥，过滤，浓缩，得4.8g黄色油状物。硅胶柱层析纯化(二氯甲烷：甲醇＝50：1)，得3.01g无色油状物，2步收率75％。

¹H NMR(400MHz,CD3OD),δ8.10～8.11(m,2H),7.74～7.79(m,1H),7.65(m,2H),7.39(d,J＝8Hz,2H),7.27(m,1H),7.21(m,1H),7.04(m,2H),6.86(d,J＝8Hz,1H),6.78～6.80(m,1H),6.72～6.71(m,1H),4.43(m,2H),3.92～4.01(m,1H),3.75(s,3H),3.53～3.55(m,1H),3.04～3.10(m,2H),2.50～2.56(m,2H),2.30～2.38(m,1H),1.94～2.07(m,8H).LC-MS-ESI⁺:[M+H]⁺523.2.

(c＝1,乙醇)。

2)、(3R,4S)-1-(苄基磺酰基)-3-((二甲氨基)甲基)-4-(3-羟基苯基)哌啶-4-醇(中间体17)的制备

将中间体15(3R,4S)-1-(苄磺酰基)-3-((二甲氨基)甲基)-4-(3-甲氧基苯基)哌啶-4-基苯甲酸酯3.01g(5.8mmol)溶解于50ml无水乙醇，加入氢氧化钠(0.69g，17.3mmol，3eq.)加热回流至原料反应完全。减压蒸除乙醇，加入50ml水和50ml乙酸乙酯搅拌，分层，水相用50ml乙酸乙酯萃取两次，合并有机相，用饱和氯化钠水洗，无水硫酸镁干燥，过滤，滤液减压浓缩得淡黄色油状物，硅胶柱层析纯化(二氯甲烷～二氯甲烷：甲醇＝50：1)，得2.38g无色油状物。将所得油状物溶解于20ml无水二氯甲烷中，反应体系氮气置换三次，将溶液冷却至-40℃，缓慢滴加1mol/L的三溴化硼-二氯甲烷溶液(23ml，22.7mmol，4eq.)，滴加完毕后将反应液升温至-10℃继续搅拌至原料反应完全。将反应液倒入饱和碳酸氢钠水溶液中，搅拌10min后静置分层，水相用30ml二氯甲烷萃取两次，合并有机相，无水硫酸镁干燥，滤除干燥剂，减压浓缩，残留物硅胶柱分离纯化，二氯甲烷～二氯甲烷：甲醇＝30：1，得无色泡沫状固体1.19g，2步收率51.2％。m.p.:208.9～210.8℃。

¹H NMR(400MHz,CD3OD),δ7.48～7.50(m,2H),7.38～7.42(m,3H),7.15～7.20(m,1H),6.88(d,J＝12Hz,2H),6.65～6.70(m,1H),4.40(s,2H),3.51～3.53(d,J＝8Hz,1H),3.12(m,1H),2.98～3.03(m,1H),2.27～2.30(m,1H),1.92～2.07(m,8H),1.77～1.80(m,1H),1.58～1.61(m,1H).LC-MS-ESI⁺:[M+H]⁺405.6.[c＝0.5,氯仿/甲醇(体积比1:1)]。

3)、3-((3R,4S)-4-(苯甲酰氧基)-1-(苄基磺酰基)-3-((二甲氨基)甲基)哌啶-4-基)苯甲酸苯酯(中间体18)的制备

反应体系氮气置换三次，氮气保护下，加入中间体17(3R,4S)-1-(苄基磺酰基)-3-((二甲氨基)甲基)-4-(3-羟基苯基)哌啶-4-醇(1g，2.47mmol，1eq.)的无水二氯甲烷溶液(20ml)，将反应液冷却至-10℃以下(内温)，依次滴加三乙胺(1g，9.89mmol，4eq.)和苯甲酰氯(1.39g，9.89mmol，4eq.)，然后升至室温反应过夜，TLC显示双羟基化合物反应完全。倒入饱和碳酸氢钠水溶液30ml，搅拌10min后静置分层，水相用20ml二氯甲烷萃取两次，合并有机相，饱和食盐水洗一次，有机相无水硫酸镁干燥，滤除干燥剂，减压浓缩得淡黄色油状物，硅胶柱(二氯甲烷：甲醇＝100：1).分离得到1.39g无色油状物(加入甲基叔丁基醚可形成固体)，收率91.8％。

¹H NMR(400MHz,CD3OD),δ8.11～8.17(m,2H),8.00～8.06(m,2H),7.34～7.60(m,10H),7.22～7.32(m,3H),7.12～7.18(m,1H),7.07～7.12(m,1H),4.24～4.36(q,2H),3.46～3.55(m,1H),3.38～3.45(m,1H),3.04～3.16(m,2H),2.90～2.97(m,1H),2.72～2.80(m,1H),2.59～2.68(m,1H),2.54(s,6H),2.42～2.50(m,1H),2.35～2.42(m,1H).LC-MS-ESI⁺:[M+H]⁺613.8。

4)、1-((3R,4S)-4-(苯甲酰氧基)-4-(3-(苯甲酰氧基)苯基)-1-(苄基磺酰基)哌啶-3-基)-N-苄基-N,N-二甲基溴化铵(中间体19)的制备

将中间体183-((3R,4S)-4-(苯甲酰氧基)-1-(苄基磺酰基)-3-((二甲氨基)甲基)哌啶-4-基)苯甲酸苯酯(0.9g，1.47mmol，1eq.)溶解于30ml无水THF中，滴加溴苄(0.38g，2.20mmol，1.5eq.)，室温搅拌1小时后，将反应液加热至50℃继续搅拌24小时(搅拌过程中析出白色固体)，反应液降至室温，减压浓缩，残留物加入甲基叔丁基醚打浆，过滤，减压烘干得白色固体1.0g，收率96.7％。m.p.:222.1～224.6℃。

¹H NMR(400MHz,CD3OD),δ8.11～8.17(m,2H),8.00～8.06(m,2H),7.22～7.60(m,18H),7.14～7.20(m,1H),7.08～7.12(m,1H),4.71～4.85(q,2H),4.24～4.36(q,2H)，3.60～3.69(m,1H),3.53～3.60(m,2H),3.47～3.53(m,1H),3.22(s,6H),3.09～3.18(m,1H),2.90～3.00(m,2H),2.38～2.52(m,2H).LC-MS-ESI⁺:[M+H]⁺704.9。

5)、1-((3R,4S)-4-(苯甲酰氧基)-1-(苄基磺酰基)-4-(3-羟基苯基)哌啶-3-基)-N-苄基-N,N-二甲基季铵盐(中间体20)的制备

将中间体19 1-((3R,4S)-4-(苯甲酰氧基)-4-(3-(苯甲酰氧基)苯基)-1-(苄基磺酰基)哌啶-3-基)-N-苄基-N,N-二甲基溴化铵1.16g(1.65mmol，1eq.)溶解于20ml无水甲醇中，冰浴下加入一水合氢氧化锂(138mg，3.30mmol,2eq.)，搅拌10分钟后，TLC显示原料反应完全(二氯甲烷：甲醇＝10:1)，将反应液减压浓缩得白色固体0.99g，不经纯化直接用于下一步反应。

6)、N-苄基-1-((3R,4S)-1-(苄基磺酰基)-4-羟基-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)哌啶-3-基)-N,N-二甲基季铵盐(中间体22)的制备

将中间体20 1-((3R,4S)-4-(苯甲酰氧基)-1-(苄基磺酰基)-4-(3-羟基苯基)哌啶-3-基)-N-苄基-N,N-二甲基季铵盐0.99g(1.65mmol,1eq.)溶解于20ml丙酮和5ml DMF的混合溶液中，加入无水碳酸钾0.46g(3.30mmol，2eq.)，滴加氘代碘甲烷0.36g(2.48mmol,1.5eq.)，滴加完毕后于室温搅拌，TLC监测至羟基物反应完全。反应完毕后，反应液加热至50℃，TLC检测至水解完成，加入少量甲醇，减压浓缩蒸出丙酮和DMF，所得残留物不经纯化直接用于下一步反应。

7)、(3R,4S)-1-(苄基磺酰基)-3-((二甲氨基)甲基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)哌啶-4-醇(II-1)的制备

将N-苄基-1-((3R,4S)-1-(苄基磺酰基)-4-羟基-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)哌啶-3-基)-N,N-二甲基季铵盐加入20ml甲醇，100mg10％钯碳(干)，反应体系置换氢气三次，氢气袋加氢，TLC监测至原料完全转化。滤除钯碳、滤液减压浓缩，硅胶柱分离纯化(二氯甲烷至二氯甲烷：甲醇＝80:1)，得540mg无色油状物，收率为77.7。

LC-MS-ESI⁺:[M+H]⁺422.6.¹H NMR(400MHz,CD3OD),δ7.48～7.53(m,2H),

7.39～7.45(m,3H),7.23～7.33(m,1H),6.98～7.08(m,2H),6.79～6.87(q,1H),5.55(s,1H),4.51～4.65(q,2H),4.04～4.12(m,1H),3.42～3.48(m,2H),2.97～3.12(m,2H),2.50(s,6H),2.30～2.42(m,2H),1.88～1.96(m,1H),1.57～1.64(m,1H)。

8)、II-1盐酸盐的制备

将化合物II-1 150mg，溶于20ml甲基叔丁基醚中，搅拌溶解，缓慢滴加HCl的1,4-二氧六环溶液，调节pH小于3，析出固体，搅拌30min，抽滤，滤饼甲基叔丁基醚淋洗，过滤，固体置于减压烘箱中干燥，得白色粉末状固体149mg，收率91.4％。

9)、II-1马来酸盐的制备

将化合物II-1 150mg(0.36mmol)溶于20ml甲基叔丁基醚中，向其缓慢滴加溶于5ml丙酮的马来酸(0.39mmol,1.1eq.)丙酮溶液，室温搅拌析出白色固体，抽滤，得179mg白色固体，收率93.7％。10)、II-1草酸盐的制备

将化合物II-1 150mg(0.36mmol)溶于20ml甲基叔丁基醚中，向其缓慢滴加溶于5ml丙酮的草酸(0.79mmol,1.1eq.)丙酮溶液，室温搅拌析出白色固体，抽滤，得168mg白色固体，收率92.3％。

实施例16

本实施例提供了1-((3R,4S)-3-((二甲氨基)甲基)-4-羟基-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)哌啶-1-基)-2-(2,4,5-三氟苯基)乙基-1-酮(化合物II-2)及其盐的制备方法，具体步骤如下：

本实施例中化合物II-2从中间体14开始的合成步骤如下：

1)、(3R,4S)-3-((二甲氨基)甲基)-4-(3-甲氧基苯基)-1-(2-(2,4,5-三氟苯基)乙酰基)哌啶-4-基苯甲酸酯(中间体24)的制备

将2.23g(5.50mmol，1eq.)中间体14溶解于DCM(20ml)，依次加入2,4,5-三氟苯乙酸(1.15g，6.04mmol，1.1eq.)、HOBT(1.11g，8.24mmol，1.5eq.)、EDCI-HCl(1.6g，8.24mmol，1.5eq.)、N-甲基吗啉(2.22g，21.96mmol，4eq.)，25℃搅拌。5.5h后TLC(DCM：MeOH＝10:1)显示反应完全。加水(50ml)，混合、静置、分层、分液。水相用二氯甲烷萃取(50+25ml)。有机相合并，水洗三次(50+50+50ml)，无水硫酸镁干燥，抽滤，滤液减压蒸干，得2.82g浅黄色油状物。硅胶柱层析纯化(二氯甲烷：甲醇＝200：1)，得2.2g无色油状物，收率73.8％。

LCMS-ESI⁺:[M+H]⁺541.6.¹H NMR(400MHz,CD3OD),δ8.00～8.06(m,2H),7.54(t,J＝8Hz,1H),7.45(t,J＝8Hz,2H),7.15～7.26(m,2H),7.07～7.12(m,1H),6.89～6.95(m,3H),3.81(s,3H),3.71～3.79(m,2H),3.69(s,2H),3.35～3.47(m,2H),2.89～2.96(dd,J₁＝8Hz,J₂＝4Hz,1H),2.69～2.76(dd,J₁＝4Hz,J₂＝4Hz,1H),2.61～2.69(m,1H),2.55(s,6H),2.48～2.53(m,1H),2.35～2.43(m,1H)。

2)、1-((3R,4S)-3-((二甲氨基)甲基)-4-羟基-4-(3-羟基苯基)哌啶-1-基)-2-(2,4,5-三氟苯基)乙基-1-酮(中间体26)的制备

中间体24(3R,4S)-3-((二甲氨基)甲基)-4-(3-甲氧基苯基)-1-(2-(2,4,5-三氟苯基)乙酰基)哌啶-4-基苯甲酸酯1.66g(3mmol)，参考实施例15步骤2)，得到0.92g白色泡沫状物质，两步收率71.0％。LCMS-ESI⁺:[M+H]⁺423.5，

¹H NMR(400MHz,CD3OD),δ7.19～7.26(m,2H),7.15～7.19(m,1H),6.93～6.98(m,1H),6.88～6.93(m,1H),6.81～6.86(m,1H),5.58(s,1H),3.94(s,2H),3.62～3.74(m,2H),3.42～3.49(m,1H),3.23～3.31(m,1H),2.90～2.97(m,1H),2.77～2.85(m,1H),2.56(s,6H),2.21～2.33(m,2H),2.05～2.13(m,1H)。

3)、3-((3R,4S)-4-(苯甲酰氧基)-3-((二甲氨基)甲基)-1-(2-(2,4,5-三氟苯基)乙酰基)哌啶-4-基)苯甲酸苯酯(中间体27)的制备

中间体26 1-((3R,4S)-3-((二甲氨基)甲基)-4-羟基-4-(3-羟基苯基)哌啶-1-基)-2-(2,4,5-三氟苯基)乙基-1-酮0.92g(2.2mmol)，无水二氯甲烷溶液(20ml)，三乙胺(0.88g，8.7mmol，4eq.)和苯甲酰氯(1.22g，8.7mmol，4eq.)，参考实施例15步骤3)，得1.17g淡黄色油状物，收率85.4％。

LCMS-ESI⁺:[M+H]⁺631.8，¹H NMR(400MHz,CD3OD),δ8.11～8.17(m,2H),8.00～8.06(m,2H),7.41～7.60(m,6H),7.19～7.29(m,3H),7.12～7.19(m,1H),7.07～7.12(q,1H),6.90～6.98(m,1H),3.71～3.79(m,2H),3.69(s,2H),3.35～3.47(m,2H),2.89～2.96(m,1H),2.69～2.76(m,1H),2.60～2.68(m,1H),2.54(s,6H),2.46～2.53(m,1H),2.35～2.43(m,1H)。

4)、1-((3S,4S)-4-(苯甲酰氧基)-4-(3-(苯甲酰氧基)苯基)-1-(2-(2,4,5-三氟苯基)乙酰基)哌啶-3-基)-N-苄基-N,N-二甲基季铵盐(中间体28)的制备

中间体27 3-((3R,4S)-4-(苯甲酰氧基)-3-((二甲氨基)甲基)-1-(2-(2,4,5-三氟苯基)乙酰基)哌啶-4-基)苯甲酸苯酯1.17g(1.86mmol)、溴苄(0.48g，2.78mmol，1.5eq.)，参考实施例15步骤4)，得类白色固体1.45g，收率为97.8％。

LCMS-ESI⁺:[M+H]⁺721.9，¹H NMR(400MHz,CD3OD),δ8.11～8.17(m,2H),8.00～8.06(m,2H),7.52～7.57(m,4H),7.41～7.52(m,4H),7.31～7.39(m,3H),7.23～7.28(m,3H),7.19～7.23(m,1H),7.13～7.19(m,1H),7.07～7.11(m,1H),6.90～6.98(m,1H),4.70～4.85(q,2H),3.82～3.98(m,1H),3.70～3.79(m,1H),3.69(s,2H),3.55～3.67(m,2H),3.48～3.88(m,1H),3.28～3.42(m,2H),3.22(s,6H),2.46～2.54(m,1H),2.32～2.40(m,1H)。

5)、1-((3S,4S)-4-(苯甲酰氧基)-4-(3-羟基苯基)-1-(2-(2,4,5-三氟苯基)乙酰基)哌啶-3-基)-N-苄基-N,N-二甲基季铵盐(中间体29)的制备

中间体28 1-((3S,4S)-4-(苯甲酰氧基)-4-(3-(苯甲酰氧基)苯基)-1-(2-(2,4,5-三氟苯基)乙酰基)哌啶-3-基)-N-苄基-N,N-二甲基季铵盐1.45g(1.8mol)，悬浮于20ml无水甲醇中，冰浴下加入一水合氢氧化锂(152mg，3.6mmol,2eq.)，参考实施例15步骤5)，将反应液减压浓缩得白色固体0.74g，不经纯化直接用于下一步反应。

6)、N-苄基-1-((3S,4S)-4-羟基-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)-1-(2-(2,4,5-三氟苯基)乙酰基)哌啶-3-基)-N,N-二甲基季铵盐(中间体31)的制备

1-((3S,4S)-4-(苯甲酰氧基)-4-(3-羟基苯基)-1-(2-(2,4,5-三氟苯基)乙酰基)哌啶-3-基)-N-苄基-N,N-二甲基季铵盐0.74g(1.2mmol)，溶解于20ml丙酮和5ml DMF的混合溶液中，加入无水碳酸钾0.33g(2.4mmol，2eq.)，滴加氘代碘甲烷0.26g(1.8mmol,1.5eq.)，参考实施例15步骤6)，得无色油状物590mg，所得残留物不经纯化直接用于下一步反应。

7)、1-((3R,4S)-3-((二甲氨基)甲基)-4-羟基-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)哌啶-1-基)-2-(2,4,5-三氟苯基)乙基-1-酮(II-2)的制备

N-苄基-1-((3S,4S)-4-羟基-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)-1-(2-(2,4,5-三氟苯基)乙酰基)哌啶-3-基)-N,N-二甲基季铵盐590mg(1.1mmol)，加入20ml甲醇，100mg10％钯碳(干)，参考实施例15步骤7)，加氢得无色油状物400mg，收率为76.0％。

LCMS-ESI⁺:[M+H]⁺440.5， ¹H NMR(400MHz,CD3OD),δ7.40～7.55(m,2H),7.27～7.33(m,1H),7.06～7.14(m,2H),6.82～6.87(d,J＝4Hz,1H),5.56～5.66(m,2H),4.55～4.64(m,1H),4.01～4.07(m,1H),2.59～2.66(m,3H),2.50(s,6H),2.37～2.42(m,2H),1.95～2.10(m,1H),1.86～1.95(m,1H),1.59～1.69(m,1H)。

8)、II-2盐酸盐的制备

将化合物II-2 200mg(0.46mmol)，溶于20ml甲基叔丁基醚中，搅拌溶解，缓慢滴加HCl的1,4-二氧六环溶液，调节pH小于3，析出固体，搅拌30min，抽滤，滤饼甲基叔丁基醚淋洗，过滤，固体置于减压烘箱中干燥，得白色粉末状固体191mg，收率88.0％。

9)、II-1富马酸盐的制备

将化合物II-1 200mg(0.46mmol)溶于20ml甲基叔丁基醚中，向其缓慢滴加溶于5ml丙酮的富马酸(0.5mmol,1.1eq.)丙酮溶液，室温搅拌析出白色固体，抽滤，得259mg白色固体，收率93.2％。

二、各中间体的合成

1)、氯化N-甲基-N-亚甲基甲铵(中间体3)的制备

配有温度计和恒压滴液漏斗的1L三口瓶中加入N,N,N',N'-四甲基甲烷二胺(60g，587.2mmol,1eq.)、甲基叔丁基醚(500ml)，将反应体系在氮气保护下冷却至0℃，保持反应液内温小于30℃下滴加乙酰氯(46.1g，587.2mmol，1eq.)。滴加过程中出现白色固体，滴加完毕，反应体系继续搅拌30分钟，抽滤，滤饼用少量甲基叔丁基醚洗，滤饼置于减压烘箱中蒸干(55℃)，得43g类白色固体(极易吸潮)，收率78.3％。

2)、3-((二甲基氨基)甲基)-4-氧代哌啶-1-甲酸叔丁酯(中间体4)的制备：

1L单口瓶加入Boc-4-哌啶酮(76.3g，383.0mmol，1eq.)、乙腈(600ml)，搅拌溶解，加中间体3(43.0g，459.6mmol，1.2eq.)。内温30～35℃反应24h，24h后TLC显示基本反应完全。将乙腈减压蒸除，加DCM(300ml)，再加饱和碳酸氢钠(300ml)，混合、静置、分层、分液。水相DCM(200+200ml)萃取。有机相合并，水洗(100ml)，无水硫酸镁干燥，抽滤，滤液减压蒸除，得95.4g红褐色粘稠液体，收率97.2％，所得产品不经纯化，直接用于下一步反应。

3)、1-溴-3-(甲氧基-d₃)苯的制备

500ml单口瓶中加入3-溴苯酚(60g，0.35mol，1eq.)、d₃-碘甲烷(60.3g，0.42mol，1.2eq.)、无水碳酸钾(96.0g，0.69mol，2eq.)和300ml乙腈，氮气保护下，加热至65℃反应18h，反应完毕后降至室温，过滤，滤液减压浓缩，残留物中加入150ml二氯甲烷和100ml水，萃取分液，水相用100ml二氯甲烷萃取两次，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸镁干燥，过滤，浓缩得黄褐色油状物60.4g，收率91.6％。

4)、3-((二甲基氨基)甲基)-4-羟基-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(中间体5)的制备：

装有恒压滴液漏斗、冷凝管和温度计的1L三颈瓶中加入镁屑(27.8g，1.16mol，3eq.)、1粒碘，反应体系抽真空，置换氮气三次，加入20ml少量1-溴-3-(甲氧基-d₃)苯(213.5g，1.14mol，3eq.)的无水THF(300ml)溶液，升温引发反应，待黄色褪去，停止加热。冰浴下缓慢滴加剩余的1-溴-3-(甲氧基-d₃)苯的无水THF溶液(约1h)，直至滴加完全。滴加完毕，反应液加热至回流1h，然后降至-10℃。0℃下滴加中间体4(95.4g，1eq.)的无水THF(300ml)溶液。滴加完毕，反应液升至室温过夜。冰浴下向反应液中滴加氯化铵的水溶液，反应放热，同时放出气体，滴加完毕后继续搅拌30min。加乙酸乙酯(500ml)，搅拌、静置、分层、分液。水相乙酸乙酯萃取(500ml×2)。合并有机相，水洗(100ml)，饱和食盐水洗，有机相用无水硫酸镁干燥，抽滤，滤液减压蒸除，得191.0g黄褐色油状物，柱层析分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝5:1～1:1)，得56.85g黄色油状物，收率40.7％(两步，以boc-4-哌啶酮计)。

5)、4-(苯甲酰氧基)-3-((二甲基氨基)甲基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(中间体6)的制备

氮气保护下，向250ml单口瓶加中间体5(10.0g，27.4mmol，1eq.)、二氯甲烷(100ml)、三乙胺(8.33g，82.4mmol，3eq.)，冰水浴冷却。0℃下滴加苯甲酰氯(9.65g，68.6mmol，2.5eq.)。滴加完毕，升温至室温继续搅拌过夜。TLC显示反应完全。反应液中加水(100ml)，搅拌10min，混合、静置、分层、分液。水相二氯甲烷萃取(100ml×2)。有机相合并，饱和氯化钠洗一次(100ml)，无水硫酸镁干燥，抽滤，滤液减压蒸干，得16.9g黄色液体。硅胶柱层析纯化(二氯甲烷～二氯甲烷：甲醇＝100：1)，得11.96g无色油状物，收率93.0％。

6)、3-((二甲基氨基)甲基)-4-(3-(甲氧基-d₃)苯基)哌啶-4-基苯甲酸酯盐酸盐(中间体7)的制备

100ml单口瓶加入中间体6(10g，21.3mmol，1eq.)、甲醇(50ml)、HCl/Dioxane(16ml，64.0mmol，3eq.)，室温搅拌。12h后TLC(DCM:MeOH＝10:1)显示原料中间体6反应完全。将溶剂减压蒸干得粘稠物8.59g。产物不经纯化，直接用于下一步反应。

7)、(3R,4S)-3-((二甲胺基)甲基)-4-羟基-4-(3-甲氧基苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(中间体12)的制备

在装有滴液漏斗、冷凝管和温度计的500ml四口瓶加入镁屑(2.75g，114.6mmol，2.5eq.)和1粒碘，然后将体系氮气置换三次，氮气保护下加入少量间溴苯甲醚的无水四氢呋喃溶液，升温回流引发，待黄色退去，停止加热。冰浴冷却下滴加剩余的间溴苯甲醚的无水四氢呋喃溶液(21.4g，114.6mmol，2.5eq.)。滴加完毕，反应液加热回流1h，然后冷却至0℃下，滴加Boc-二甲胺甲基哌啶酮(11.75g，45.84mmol，1eq.)的无水四氢呋喃(50ml)溶液。滴加完毕，于室温搅拌过夜。冰浴下，滴加饱和氯化铵的水溶液100ml，减压蒸除四氢呋喃。残留物加入乙酸乙酯萃取(100+100ml)。合并有机相，水洗(100ml)，饱和氯化钠洗(100ml)，无水硫酸镁干燥，抽滤，滤液减压蒸除，得19.9g黄色液体。所得黄色油状物加异丙醇100ml，搅拌下加L-(-)-二苯甲酰酒石酸(13.14g，36.67mmol，0.8eq.)，升温回流溶解。降温搅拌，至室温加晶种20mg。搅拌过夜，析出固体，冰盐浴搅拌(-10～0℃)1.5h。抽滤，滤饼用冷的异丙醇10ml淋洗，滤饼减压烘干，得8.0g类白色固体。将所得固体倒入120ml异丙醇，升温回流溶解，然后缓慢降温，至室温继续搅拌2h后抽滤，滤饼用冷异丙醇淋洗，减压烘干，得6.10g白色固体。将所得固体用饱和碳酸氢钠溶液和乙酸乙酯游离，得到无色油状物3.58g目标构型异构体，总收率为21.4％。

LCMS-ESI⁺:[M+H]⁺365.3.(c＝1,氯仿).¹H NMR(400MHz,CD3OD),δ

7.32(m,1H),7.05(m,1H),6.99(m,1H),6.81(m,1H),4.21～4.24(m,1H),3.98～4.01(m,1H),3.80(s,3H),3.36(s,1H),3.21(s,1H),3.00～3.09(m,1H),2.32～2.38(m,1H),2.06～2.12(m,1H),2.5(s,6H),1.95～2.03(m,1H),1.82(d,J＝12.8Hz,1H),1.61(m,1H),1.51(s,9H)。

8)、(3R,4S)-4-(苯甲酰氧基)-3-((二甲基氨基)甲基)-4-(3-甲氧基苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(中间体13)的制备

氮气保护下，向250ml单口瓶加中间体12(3.0g，8.2mmol，1eq.)、二氯甲烷(50ml)、三乙胺(2.49g，24.7mmol，3eq.)，冰水浴冷却。0℃下滴加苯甲酰氯(2.89g，20.6mmol，2.5eq.)。滴加完毕，升温至室温继续搅拌过夜。TLC显示反应完全。反应液中加水(100ml)，搅拌10min，混合、静置、分层、分液。水相二氯甲烷萃取(100ml×2)。有机相合并，饱和氯化钠洗一次(100ml)，无水硫酸镁干燥，抽滤，滤液减压蒸干，得5.7g黄色液体。硅胶柱层析纯化(二氯甲烷～二氯甲烷：甲醇＝100：1)，得3.62g无色油状物，收率93.9％。

LCMS-ESI⁺:[M+H]⁺467.78.(c＝1,甲醇).¹H NMR(400MHz,CD3OD),δ

8.09(d,J＝8Hz,2H),7.69(m,1H),7.57(m,2H),7.27(m,1H),6.83～6.86(m,2H),6.78(s,1H),4.41(m,1H),4.09(m,1H),3.75(s,3H),3.13(d,J＝12Hz,2H),2.90(s,1H),2.55～2.61(m,1H),2.36～2.44(m,1H),2.00～2.07(m,8H),1.50(s,9H)。

9)、(3S,4S)-3-((二甲基氨基)甲基)-4-(3-甲氧基苯基)哌啶-4-基苯甲酸酯盐酸盐(中间体14)的制备

100ml单口瓶加入中间体13(3.6g，7.7mmol，1eq.)、甲醇(50ml)、HCl/Dioxane(6ml，23.0mmol，3eq.)，室温搅拌。12h后TLC(二氯甲烷：甲醇＝10：1)显示原料6反应完全。将溶剂减压蒸干得粘稠物3.09g。产物不经纯化，直接用于下一步反应。

此外，本发明除了合成上述化合物和中间体，还参照CN201911076305.X中报道的方法合成(3R,4S)-1-(苄磺酰基)-3-((二甲基氨基)甲基)-4-(3-甲氧基苯基)哌啶-4-醇盐酸盐以及J Med Chem.2013 24；56(20):8019-31中报道的方法合成了上市药物TRV-130，用于体内外活性筛选的对照样品。

三、体外阿片受体亲和力测试

1、膜受体的制备

分别表达有μ阿片受体、δ阿片受体、κ阿片受体的CHO细胞种于10cm²培养皿中培养(F-12培养基+10％新生牛血清)数天，细胞长满皿底后吸去培养液；加PBS/EDTA溶液(0.1MNaCl，0.01M NaH₂PO₄,0.04％EDTA)3ml消化3-5min，用吸管吹打，使细胞完全脱落，收集细胞于40ml离心管，5000rpm离心5min,去上清液；加入冰冷的匀浆液(50mM HEPES PH 7.4，3mMMgCl,1mM EGTA)于离心管，将溶液和沉淀转移到匀浆器中匀浆；然后将匀浆液转移到离心管中，18000rpm离心15min，共离心2次；得到的沉淀加入适量的50mM Tris-HCl，pH 7.4的缓冲液匀浆并分装于离心管，-70℃冰箱保存待用。

2、竞争结合试验

总结合管加相当于20-30μg的表达的膜受体蛋白和[3H]标记的配体(1-2nM)，相对应的非特异性结合管另加1μM的相应配体，样品管加不同浓度的各种筛选的阿片配体类药物(见下表1中的药物化合物)，终体积为100μl，30℃孵育30min，置冰水中终止反应。在Millipore样品收集器上经GF/C(whatman)玻璃纤维滤纸负压抽滤。用4ml 50mM Tris-HCl(pH 7.4)冲洗三次，滤纸烘干后，置于0.5ml Eppendorf管，加0.5ml亲脂闪烁液，PERKINELMER PRI-CARB 2910液体闪烁计数仪测定放射性强度，计算抑制率，实验重复三次以上，每组三复管。

抑制率(或称结合率)＝(总结合率dpm－样品管dpm)/(总结合管dpm－非特异性结合管dpm)×100％

用Prism 5.0软件计算IC₅₀。按下式计算Ki值，Ki＝IC₅₀/(1+[L]/K_d)，[L]为所加标记配体的浓度，K_d为标记配体的平衡解离参数。

表1为代表性化合物对阿片受体的亲和常数Ki值，采用三次独立的测量平均值±标准偏差表示。

表1化合物在10μM浓度下阿片受体结合率或Ki

实验结果表明，本发明化合物与阿片受体的体外亲和力和现有技术

CN201911076305.X中优选化合物相当，可能具有相似的体内镇痛活性。

四、体内热板法镇痛试验

将体重20g左右雌性昆明小鼠放在预热至55℃热板仪上，以小鼠舔后足或抬后足反应的潜伏期为痛阈指标。实验前筛选动物，剔除反应潜伏期小于5s或大于30s的动物。为防止足部烫伤，最长观察时间设为60s。基础痛阈为2次测量值的平均值，两次测量之间相隔5min。分别在腹腔给药后15分钟、30分钟、60分钟和120分钟测定各组小鼠的痛阈值。镇痛有效百分率(％MPE)根据以下公式计算：

根据镇痛有效百分率用Graphpad prism 5.0软件计算ED₅₀值。

表2 10mg/kg剂量下化合物热板最大镇痛有效百分比或ED₅₀值

化合物	10mg/kg剂量下％MPE或ED50
		曲马多	64.5％(50mg/kg剂量)
CN201911076330.8专利对比化合物FWBH6	1.1mg/kg
		CN201911076305.X对比实施例20	0.49mg/kg
化合物I-1盐酸盐	0.95mg/kg
		化合物I-2盐酸盐	1.46mg/kg
化合物I-3盐酸盐	100％
		化合物I-4盐酸盐	0.98mg/kg
化合物II-1盐酸盐	0.52mg/kg
		化合物II-2盐酸盐	0.55mg/kg

注：表2的“％MPE或ED₅₀”一栏中，用百分比表示的数值是指％MPE，以mg/kg为单位的数值是指ED₅₀。

小鼠热板镇痛实验结果显示，本发明的化合物小鼠体内镇痛效果与现有技术CN201911076305.X中优选化合物基本相当。其中，本发明中镇痛活性最好的化合物II-1盐酸盐的ED₅₀为0.52mg/kg，现有技术CN201911076305.X中镇痛活性最好的化合物ED₅₀为0.49mg/kg，体内镇痛效果相当。

五、心脏安全性评价

人类ether-a-go-go-related基因(hERG)编码的快速激活钾通道是参与心肌动作电位3期复极的形成的重要离子通道。药物阻断hERG通道能够导致心脏复极延长，心电图表现为QT间期延长，称为长QT间期综合征。药物引起的心室延迟复极在某些情况下可能引发致命性心律失常-尖端扭转型室性心动过速。据统计，约25-40％的先导化合物都显示出不同程度的hERG相关毒性，而且很多药物由于可能导致QT间期延长风险而被撤出市场。目前，国家药品监督管理局也要求研究中的新药临床试验申请(IND)前需要有hERG/I_Kr安全性评价的数据。

1、全细胞膜片钳技术研究化合物对hERG钾通道的抑制作用：

1)、将待测化合物，用生理盐水配制成10mM储液。用生理盐水将受试物储液依次稀释成为3mM，1mM，0.3mM的稀释液。用细胞外液将受试物储液及稀释液依次稀释，配成30μΜ，10μΜ，3μΜ，1μΜ，0.3μM的工作液，所有浓度超声20min。

2)、hERG钾通道稳定表达的HEK293细胞系在含有10％胎牛血清及0.8mg/mL G418的DMEM培养基中培养，培养温度为37℃，二氧化碳浓度为5％。除去旧培养基并用PBS洗一次，然后加入1mL TrypLE^TM Express溶液，37℃孵育0.5min左右。当细胞从皿底脱离，加入约5mL 37℃预热的完全培养基。将细胞悬液用吸管轻轻吹打使聚集的细胞分离。将细胞悬液转移至无菌的离心管中，1000rpm离心5min收集细胞。扩增或维持培养，将细胞接种于6cm细胞培养皿，每个细胞培养皿接种细胞量为2.5□105cells(最终体积：5mL)。

3)、膜片钳检测，试验之前细胞用TrypLE^TM Express分离，将4×103细胞铺到盖玻片上，在24孔板中培养(最终体积：500μL)，18个小时后，进行试验检测。

4)、电生理记录：

细胞外液：K-007-1

140mM NaCl，3.5mM KCl，1mM MgCl₂·6H₂O，2mM CaCl₂·2H₂O，10mM D-Glucose，10mM HEPES，1.25mM NaH₂PO₄·2H₂O，NaOH调节pH＝7.4。

细胞内液：K-002-2

20mM KCl，115mM K-Aspartic，1mM MgCl₂·6H₂O，5mM EGTA，10mM HEPES，2mM Na₂-ATP，KOH调节pH＝7.2。

5)、膜片钳检测：

全细胞膜片钳记录hERG钾电流的电压刺激方案如下：当形成全细胞封接后细胞膜电压钳制于-80mV。钳制电压由-80mV除极至-50mV维持0.5s(作为漏电流检测)，然后阶跃至30mV维持2.5s，再迅速恢复至-50mV维持4s可以激发出hERG通道的尾电流。每隔10s重复采集数据，观察药物对hERG尾电流的作用。以0.5s的-50mV刺激作为漏电流检测。试验数据由IPA放大器(Sutter Instrument)进行采集并储存于SutterPatch软件中。

用微电极拉制仪将毛细玻璃管拉制成记录电极。在倒置显微镜下操纵微电极操纵仪将记录电极接触到细胞上，给予负压抽吸，形成GΩ封接。形成GΩ封接后进行快速电容补偿，然后继续给予负压，吸破细胞膜，形成全细胞记录模式。然后进行慢速电容的补偿并记录膜电容及串联电阻。不给予漏电补偿。

当全细胞记录的hERG电流稳定后开始给药，每个药物浓度作用至5min(或者电流至稳定)后检测下一个浓度，每一个测试化合物检测多个浓度。将铺有细胞的盖玻片置于倒置显微中的记录浴槽中，测试化合物以及不含化合物的外液利用重力灌流的方法从低浓度到高浓度依次流经记录浴槽从而作用于细胞，在记录中利用真空泵进行液体交换。每一个细胞在不含化合物的外液中检测到的电流作为自己的对照组。每个浓度至少使用两个细胞独立重复检测两次。所有电生理试验在室温下进行。

6)、数据分析：

首先将每一个药物浓度作用后的电流和空白对照电流标准化然后计算每一个药物浓度对应的抑制率对每一个浓度计算平均数和标准差，并用以下的方程计算每种化合物的半抑制浓度：

Y＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+10^((LogIC₅₀-X)*HillSlope))

用以上方程对剂量依赖效应进行非线性拟合，IC₅₀为半抑制浓度。曲线拟合以及IC₅₀的计算利用GraphPad Prism软件完成。

2、测试结果

表3待测化合物对hERG的抑制能力

上市药物TRV-130和专利CN201911076305.X对比实施例20(优选化合物)对hERG具有中等强度的抑制作用，TRV-130药品说明书中指出，该药物可能增加QT间隔延长的风险，累计每日剂量不得超过27mg。由于专利CN201911076305.X对比实施例20对hERG的抑制作用强于TRV-130，所以该专利中优选化合物可能同样增加QT间隔延长的风险。相较于TRV-130和专利CN201911076305.X对比实施例20，本发明实施例所得化合物对hERG均具有较弱的抑制作用，增加QT间隔延长的风险较弱，相较于TRV-130和已有技术化合物(专利CN201911076305.X)具有更高的心脏安全性。

六、便秘副作用评价

便秘副作用为阿片类药物常见的副作用，本专利通过化合物对实验动物排便时间、排便数量和排便重量的影响，评价优选化合物产生便秘副作用的可能性。

1、动物分组

ICR小鼠小鼠适应性饲养后，随机分为6组，每组10只。禁食16-24h，不禁水，空白对照组给予溶媒，期间正常饮食：(1)空白对照组；(2)复方地芬诺酯(7.5mg/kg)组；(3)待测化合物低剂量(1mg/kg)组；(4)待测化合物高剂量(5mg/kg)组。

2、实验步骤

给药30min后灌胃给予墨汁，各组小鼠给药后禁水不禁食，小鼠单笼饲养，记录首粒黑便排出时间。记录给药后5h内每只小鼠排便粒数及质量(湿质量)。将各组小鼠单独放置在铺有干净滤纸的IVC笼盒中，收集每只小鼠的粪便，装入无菌的1.5ml EP管中，置于冰盒中保存，收集期间记录每只小鼠的排便粒数，称量湿重，将收集到的粪便经烘干后，记录粪便的干质量。其烘干条件：将新鲜粪便置于烘箱中100℃恒温烘烤5～10min，直至粪便干重恒重。应用以下的公式计算粪便的含水量，粪便含水量(％)＝(粪便湿质量-粪便干质量)/粪便湿质量×100％。

3、数据采集和分析

本试验所需要测定和观察的数据均记录到相应的表格。所有数据经计算机Microsoft Excel统计处理，以“均数±标准误”表示。各组数据采用SPSS软件包统计分析。

4、实验结果

1)、对实验动物排便时间的影响：

表4待测化合物对小鼠排便时间的作用

注：^#仅对5h内排便动物进行统计，与空白对照组相比，表示P<0.05，表示P<0.01。

2)、对实验动物排便重量的影响：

表5对小鼠粪便重量的作用/>

注：^&仅对5h内排便动物进行统计，与空白对照组相比，^*表示P<0.05，，^**表示P<0.01，^***表示P<0.001。

通过比较化合物对实验动物排便时间和排便重量，现有技术CN201911076305.X中的对比实施例20能够明显延长实验动物排便时间，且时间长于模型组，而本专利化合物对动物排便时间的影响明显小于对比实施例20，略好于模型组。此外，CN201911076305.X对比实施例20在高剂量(5mg/kg)下的实验动物没有排便，而本专利化合物的实验动物在高剂量下有排便行为。除此外，本专利优选化合物的实验动物的排便数量亦明显大于现有技术CN201911076305.X对比实施例20。综合比较本专利化合物产生便秘副作用的可能性要明显低于现有技术CN201911076305.X中对比实施例20的化合物，在产生便秘副作用方面具有优势。

七、化合物对人肝微粒体中细胞色素P450酶的抑制作用评价

1、100mM磷酸盐缓冲液(PBS，pH＝7.4)的配制

称取7.098g Na₂HPO₄(溶液A)溶于500ml超纯水，超声溶解；称取3.40g KH₂PO₄(溶液B)于250ml超纯水，超声溶解。将B溶液缓慢滴加到A中，调节pH至7.40±0.05。

2、待测化合物、对照化合物及底物化合物配制

待测化合物(TRV-130、专利CN201911076305.X对比实施例20制备的化合物、化合物II-1盐酸盐以及II-2盐酸盐)：用生理盐水稀释至所需浓度，具体浓度信息见表6。

表6待测化合物稀释信息

底物化合物【非那西汀、双氯芬酸、(S)-美芬妥英、右美沙芬、咪达唑仑以及睾酮】和对照化合物(呋喃茶碱、磺胺苯吡唑、N-3-苄基尼凡诺、奎尼丁、酮康唑)：用DMSO稀释至所需浓度，具体信息见表7。

表7不同亚型酶的底物浓度和孵育时间汇总

3、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH，Mw＝833.4g/mol)的配制

称取NADPH，用PBS(100mM,pH＝7.4)溶解使其浓度达到8.334mg/mL(10mM)，需现用现配。

4、微粒体溶液配制

微粒体储存于-80℃冰箱中，取出后室温解冻，轻轻混匀后，用PBS(100mM,pH＝7.4)配制浓度为0.2235mg/mL微粒体溶液。微粒体终浓度为0.2mg/mL，NADPH终浓度为1mM。

5、实验流程

向96孔孵育板中靠底部每孔加1μL对照化合物，将配置好的微粒体溶液放入37℃水浴，预孵育10分钟，预孵育后，每孔加入179μL微粒体溶液，涡匀后加入20μL 10mM NADPH溶液启动反应，反应在37℃水浴进行，到达反应时间后每孔加入300μL的内标甲醇溶液，使反应终止，样品混匀后于4℃，3220g离心40分钟，取上清液与一定体积的纯水混匀后，4℃，3220g离心10分钟后用于液质分析。

6、数据分析

采用内标法，特异性底物的代谢产物峰面积与内标峰面积比值用于计算抑制百分数(以DMSO空白样品与内标峰面积比值为100％)；

曲线采用XLfit中201模型进行数据拟合，计算得出IC₅₀值。

fit＝(A+((B-A)/(1+((x/C)^D))))

inv＝(((((B-A)/(y-A))-1)^(1/D))*C)

res＝(y-fit)

7、结果：

表6.化合物对人肝微粒体中细胞色素P450酶的抑制

上市药物TRV-130和专利CN201911076305.X对比实施例20(优选化合物)对CYP2D6具有中等强度的抑制作用(1μM/L<IC₅₀<10μM/L)，如果同时服用主要通过CYP 2D6代谢的药物可能会发生药物-药物相互作用，产生毒性。较之TRV-130和专利CN201911076305.X对比实施例20，本发明优选实施例化合物对CYP 2D6的抑制能力较弱，为弱的CYP2D6抑制剂(IC₅₀>10μM/L)，产生药物-药物相互作用的风险较低，安全性较高。

八、化合物在肝微粒体中代谢稳定性的检测

1、实验流程

1)、100mM磷酸盐缓冲液(PBS，pH＝7.4)的配制

2)、400μM化合物配制对照药：取4μL 10mM Verapamil溶液，加96μL DMSO稀释至400μM；

待测化合物：取4μL 10mM待测化合物，加96μL生理盐水稀释至400μM。

3)、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH，Mw＝833.4g/mol)的配制称取NADPH，用PBS(100mM,pH＝7.4)溶解使其浓度达到8.334mg/mL(10mM)，需现用现配。

4)、微粒体溶液配制

微粒体储存于-80℃冰箱中，取出后室温解冻，轻轻混匀后，用PBS(100mM,pH＝7.4)配制浓度为0.5587mg/mL微粒体溶液。

该反应体系中，微粒体浓度为0.5mg/mL，NADPH浓度为1mM，待测化合物浓度为2μM。5)、实验操作：

a)、向96孔孵育板中每孔加入358μL 0.5587mg/mL微粒体溶液，40μL NADPH溶液，对于阴性样品，加入40μL PBS(100mM,pH＝7.4)溶液，37℃水浴，预孵育10分钟；b)、孵育后，每孔加入2μL 400μM对照药或者待测化合物启动反应，混匀后，分别在0.5,15,30,45,60分钟时，每孔取出50μL反应体系，加入到200μL的内标甲醇溶液中，使反应终止；

c)、混匀，在4℃，3220g离心40分钟；

d)、取上清液与一定体积的纯水混匀后，4℃，3220g离心10分钟后用于液质分析。

2、数据分析

1)、采用内标法，样品峰面积与内标峰面积比值用于计算剩余百分数(以0.5分钟样品与内标峰面积比值为100％)；

2)、剩余百分数的自然对数与孵育时间作图，直线斜率即为消除速率常数k

半衰期invitrot_1/2：

清除率invitroCl_int：

3、检测结果

/>

通过氘原子的引入，本发明优选实施例所得化合物对人、狗、大鼠和小鼠四个种属的肝微粒稳定性均优于CN201911076305.X对比实施例20，对人肝微粒的稳定性与上市药物TRV-130相当及优于TRV-30，其他三个种属均优于TRV-130。

最后应说明的是，以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种氘代的3-氨甲基-4-苯基哌啶-4-醇类化合物，其特征在于：所述化合物的结构通式如下式（I）：

，

其中，R₁为全氘代或者部分氘代的C₁～C₃烷基，R₂为苯基或2,4,5-三氟苯基，

X为或/>，

n₁为 0、1或2。

2.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于：R₁为氘代的甲基-CD₃。

3.一种氘代的3-氨甲基-4-苯基哌啶-4-醇类化合物，其特征在于：所述化合物的结构通式如下式（II）：

，

其中， R₃为全氘代或者部分氘代的C₁～C₃烷基，R₄为苯基或2,4,5-三氟苯基，

X为或/>，

n₂为 0、1或2。

4.根据权利要求3所述的化合物，其特征在于：R₃为氘代的甲基-CD₃。

5.一种氘代的3-氨甲基-4-苯基哌啶-4-醇类化合物，其特征在于：所述化合物为以下结构式中的一种：

。

6.一种氘代的3-氨甲基-4-苯基哌啶-4-醇类化合物，其特征在于：所述化合物为以下结构式中的一种：

。

7.一种根据权利要求1-6任一所述的化合物的药学上可接受的盐，其特征在于：所述化合物的药学上可接受的盐为盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、富马酸、甲磺酸盐、马来酸盐、酒石酸盐或草酸盐。

8.根据权利要求7所述的化合物的药学上可接受的盐，其特征在于：所述药学上可接受的盐为盐酸盐。

9.一种药物组合物，其特征在于：包含治疗有效量的权利要求1～6任一所述的氘代的3-氨甲基-4-苯基哌啶-4-醇类化合物或其药学上可接受的盐，以及医学上可接受的载体。

10.一种根据权利要求1～6任一所述的氘代的3-氨甲基-4-苯基哌啶-4-醇类化合物或其药学上可接受的盐在制备镇痛药物中的应用。