CN117412774A - 抗体和功能性物质的缀合物或其盐、以及其制造中使用的化合物或其盐 - Google Patents

Abstract

本发明提供将抗体与功能性物质的结合比率控制在所需的范围，同时所需性质优异的抗体和功能性物质的缀合物或其盐。更具体而言，本发明提供包含下述式(I)所表示的结构单元，且至少1个亲水性基团存在于所述结构单元中的抗体和功能性物质的缀合物或其盐：式(I)中，Ig表示包含2个重链和2个轻链的免疫球蛋白单元，且经由2个重链中的赖氨酸残基的侧链中的氨基与Ig所邻接的羰基位点选择性地形成酰胺键，L₁和L₂分别表示二价基团，R₁表示可包含亲水性基团的一价基团，X表示规定的二价基团，D表示功能性物质，R_A表示缬氨酸残基的侧链，R_B表示瓜氨酸残基或丙氨酸残基的侧链，n为0或1，每2个重链的所述酰胺键的平均比率r为1.5～2.5。

Description

抗体和功能性物质的缀合物或其盐、以及其制造中使用的化 合物或其盐

技术领域

本发明涉及抗体和功能性物质的缀合物或其盐、以及其制造中使用的化合物或其盐等。

背景技术

近年来，抗体药物复合物(Antibody-Drug Conjugate(抗体药物缀合物)：ADC)的研究开发正在积极地进行。ADC顾名思义是将药物(例如，抗癌药)与抗体缀合(偶联)而成的药剂，对癌细胞等具有直接的杀细胞活性。作为代表性的ADC，有Immunogene公司和Roche公司共同开发的T-DM1(商品名：Kadcyla(注册商标))。

ADC是通过将抗体中存在的特定氨基酸残基的侧链中的官能团与药物结合而制作的。用于制作ADC的这种官能团的例子是抗体中存在的赖氨酸残基的侧链中的氨基。作为对抗体中的赖氨酸基团(例如，246/248位、288/290位或317位的赖氨酸残基)进行位点选择性修饰的技术，报道了几种技术(例如，专利文献1～4)。

在ADC中，抗体和药物经由接头连接。作为ADC中的接头，存在各种各样的接头。例如，在用作抗癌剂的ADC中，作为在人血浆中是稳定的、且为了在癌细胞内释放药物而具有能够用特定酶切割的结构的接头，存在包含由缬氨酸-瓜氨酸构成的二肽(Val-Cit：VC结构)的接头。包含这样的二肽的接头，如下述(A)所示，在人血浆中是稳定的，但如下述(B)所示，通过人癌细胞内的溶酶体中的组织蛋白酶(cathepsin)B识别VC结构，并切割存在于瓜氨酸的羧基末端侧的酰胺键。因此，具有包含这样的二肽的接头的ADC可在人癌细胞内释放药物，从而表达药效。

[化学式1]

(A)在人血浆中稳定

[化学式2]

(B)在人癌细胞内的溶酶体中切割

然而，具有包含这样的二肽的接头的ADC在小鼠血浆中不稳定(非专利文献1和2)。这是由于，在小鼠血浆中存在Ces1c，所述Ces1c是识别VC结构并切割存在于瓜氨酸的羧基末端侧的酰胺键的羧化酶，故包含这样的二肽的接头在血浆中会被Ces1c切割。因此，对于具有包含这样的二肽的接头的ADC，在小鼠和人体中的体内动力学大不相同。因此，存在利用小鼠难以评价人体中的药效的问题。

[化学式3]

C)小鼠加浆中的不希望的反应

如上所述，为了改善具有“抗体-间隔物(spacer)-VC结构-间隔物-药物”这样的结构的ADC在小鼠血浆中的不稳定性，尝试了通过修饰接头(即，间隔物-VC结构-间隔物)来稳定ADC。

例如，专利文献5和非专利文献3公开了：通过在存在于VC结构与药物之间的间隔物中(Ces1c的切割部位附近)引入亲水性基团(PEG)来稳定接头。

另一方面，还报道了通过在存在于抗体与VC结构之间的间隔物中引入特定基团来稳定接头的技术。通过这样的技术稳定的接头的一个例子是下述1)～4)的接头，其特征在于，包含至少1个α-氨基酸残基(即，X或NH-C(R)-CO)通过酰胺键与VC结构的抗体侧的位点(V的氨基)连接的结构(即，X-Val-Cit或NH-C(R)-CO-Val-Cit所表示的结构)：

1)包含谷氨酸残基与Val的N末端连接的三肽结构(Glu-Val-Cit)的接头(专利文献6)；

2)包含天冬氨酸残基与Val的N末端连接的结构(Asp-Val-Cit)的接头(非专利文献4)；

3)包含NH-C(R)-CO-Val-Cit(R表示具有PEG等亲水性基团的侧链)所表示的结构的接头(专利文献7～9)；

4)包含NH-C(R)-CO-Val-Cit(R表示具有磺酸基、糖等亲水性基团的侧链)所表示的结构的接头(专利文献10)；以及

5)包含NH-C(R)-CO-Val-Cit(R表示具有环糊精的侧链)所表示的结构的接头(专利文献11)。

另外，作为在存在于抗体与VC结构之间的间隔物中引入特定基团的接头的其它例子，报道了下述6)～8)的接头：

6)包含C(M)-CO-Val-Cit(在此，C(M)中的C表示碳原子，C(M)中的M表示包含芳族环基等侧链的稳定性调节基团，CO表示与缬氨酸残基的氨基连接而形成酰胺键的羰基)所表示的结构的接头(专利文献12)；

7)在存在于抗体与VC结构之间的间隔物的主链中和侧链中均包含PEG的、被高度地控制的特殊PEG接头(非专利文献5)；以及

8)C(R_i)-NH结构通过酰胺键与VC类似物结构(CO-R_ii-CO-Cit)的抗体侧的位点连接的、包含C(R_i)-NH-CO-R_ii-CO-Cit(在此，R_i表示硫代苯基，R_ii表示环丁基环)所表示的结构的接头(专利文献13)。

然而，非专利文献6中记载了：ADC的疏水度越高，血浆清除率越快，以及可用HIC(疏水作用色谱(Hydrophobic Interaction Chromatography))-HPLC评价ADC的疏水度。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：国际公开第2018/199337号；

专利文献2：国际公开第2019/240288号；

专利文献3：国际公开第2019/240287号；

专利文献4：国际公开第2020/090979号；

专利文献5：美国专利申请公开第2019/0365915号说明书；

专利文献6：国际公开第2018/218004号；

专利文献7：国际公开第2019/094395号；

专利文献8：美国专利申请公开第2016/0310612号说明书；

专利文献9：国际公开第2020/252043号；

专利文献10：国际公开第2020/236841号；

专利文献11：国际公开第2018/213077号；

专利文献12：日本特开2016-050204号公报；

专利文献13：国际公开第2016/090038号；

非专利文献

非专利文献1：Dorywalska等人，Bioconjugate Chem.，2015，26(4)，650-659；

非专利文献2：Dorywalska等人，Mol Cancer Ther.，2016，15(5)，958-70；

非专利文献3：Poudel等人，ACS Med Chem Lett.，2020，11(11)，2190-2194；

非专利文献4：Ratnayake等人，Bioconjug Chem.2019，30(1)，200-209；

非专利文献5：Walker等人，Bioconnjug Chem.2019，30(11)，2982-2988；

非专利文献6：Lyon等人，Nat Biotechnol.，2015，33(7)，733-5。

发明内容

发明所要解决的课题

本发明的目的在于提供抗体和功能性物质的缀合物或其盐，其将抗体与功能性物质的结合比率控制在所需的范围，同时所需性质优异。

用于解决课题的手段

本发明人进行了深入研究，结果发现了：通过选择免疫球蛋白单元中的重链中的赖氨酸残基作为抗体的修饰位点，且将包含特定结构单元[即，后述的CO-(N-R₁)n-X-CONH-CH₂(-R_A)-CONH-CH₂(-R_B)-CO]的接头用于免疫球蛋白单元与功能性物质的连接，可容易地制造将免疫球蛋白单元与功能性物质的结合的平均比率(功能性物质/免疫球蛋白单元)高度地控制在所需的范围(1.5～2.5)，同时所需性质优异的式(I)所表示的缀合物或其盐。例如，这样的缀合物或其盐可具备选自下述的1种以上的所需性质：优异的清除率(即，体内停留时间长)、低凝集率、基于组织蛋白酶B的高切割性、小鼠血浆中的高稳定性。

本发明人还发现：在式(I)所表示的缀合物中，式(I-1)～(I-3)所表示的缀合物在上述的所需性质上可特别优异，从而完成了本发明。

例如，式(I-1)和(I-2)所表示的缀合物在用于连接抗体和功能性物质的接头中具有：具有包含亲水性基团的基团的叔酰胺型结构与VC结构连接的结构单元，但上述现有技术既没有教导也没有暗示包含具有这样的结构单元的接头的本发明的缀合物。

另外，式(I-3)所表示的缀合物在用于连接抗体和功能性物质的接头中具有：γ谷氨酸残基与VC结构连接的结构单元，但上述现有技术既没有教导也没有暗示包含具有这样的结构单元的接头的缀合物。实际上，专利文献6～11虽然公开了包含至少1个α-氨基酸残基(即，α型结构)与VC结构连接的结构单元的接头，但既没有教导也没有暗示包含γ谷氨酸残基与VC结构连接的结构单元的接头。而且，专利文献12、13、非专利文献5既没有教导也没有暗示包含γ谷氨酸残基与VC结构连接的结构单元的接头。

即，本发明如下。

[1]抗体和功能性物质的缀合物或其盐，其包含式(I)所表示的结构单元，且至少1个亲水性基团存在于所述结构单元中。

[2][1]的缀合物或其盐，其中，免疫球蛋白单元为人免疫球蛋白单元。

[3][2]的缀合物或其盐，其中，人免疫球蛋白单元为人IgG抗体。

[4][1]～[3]中任一项的缀合物或其盐，其中，赖氨酸残基存在于依据EU编号的246/248位、288/290位或317位。

[5][1]～[4]中任一项的缀合物或其盐，其中，r为1.9～2.1。

[6][1]～[5]中任一项的缀合物或其盐，其中，亲水性基团为选自羧酸基、磺酸基、羟基、聚乙二醇基、聚肌氨酸基和糖部分的1个以上的基团。

[7][1]～[6]中任一项的缀合物或其盐，其中，L₁表示式(i)所表示的二价基团。

[8][7]的缀合物或其盐，其中，L₃和L₄分别独立地为-(C(R)₂)_m-。

[9][7]或[8]的缀合物或其盐，其中，Y是由下述结构式中的任一个结构式表示的二价基团：

[化学式4]

在此，白圆和黑圆表示结合键，

在白圆的结合键与L₃键合的情况下，黑圆的结合键与L₄键合，

在白圆的结合键与L₄键合的情况下，黑圆的结合键与L₃键合。

[10][1]～[9]中任一项的缀合物或其盐，其中，式(I)所表示的结构单元为式(I-1)、(I-2)、(I-3)或(I-4)所表示的结构单元。

[11][10]的缀合物或其盐，其中，式(I)所表示的结构单元为式(I-1)、(I-2)或(I-3)所表示的结构单元。

[12][10]的缀合物或其盐，其中，式(I-1)、(I-2)、(I-3)或(I-4)所表示的结构单元为式(I-1a’)、(I-1b’)、(I-1c’)、(I-2’)、(I-3a’)、(I-3b’)、(I-4’)、(I-4b’)或(I-4c’)所表示的结构单元。

[13][12]的缀合物或其盐，其中，式(I-1a’)、(I-1b’)、(I-1c’)、(I-2’)、(I-3a’)、(I-3b’)或(I-4’)所表示的结构单元为式(I-1a’-1)、(I-1a’-2)、(I-1b’-1)、(I-1c’-1)、(I-2’-1)、(I-2’-2)、(I-3a’-1)、(I-3a’-2)、(I-3b’-1)、(I-4a’-1)、(I-4b’-1)、(I-4c’-1)或(I-4c’-2)所表示的结构单元。

[14][1]～[13]中任一项的缀合物或其盐，其中，L₂为下述的结构式所表示的二价基团：

[化学式5]

在此，黑圆和白圆表示结合键，

黑圆的结合键与L₂所相邻的羰基键合，

白圆的结合键与D键合，

E表示吸电子基团，

n2为1～4的整数。

[15]化合物或其盐，其由式(II-1)、(II-2)、(II-3)、(II-4b’)或(II-4c’)表示。

[16][15]的化合物或其盐，其中，生物正交性官能团为马来酰亚胺残基、硫醇残基、呋喃残基、卤代羰基残基、烯烃残基、炔烃残基、叠氮残基或四嗪残基。

[17][15]或[16]的化合物或其盐，其中，式(II-1)、(II-2)或(II-3)所表示的化合物由式(II-1a’)、(II-1b’)、(II-1c’)、(II-2’)、(II-3a’)或(II-3b’)表示。

[18][15]～[17]中任一项的化合物或其盐，其中，式(II-1a’)、(II-1b’)、(II-1c’)、(II-2’)、(II-3a’)、(II-3b’)、(II-4b’)或(II-4c’)所表示的化合物由式(II-1a’-1)、(II-1a’-2)、(II-1b’-1)、(II-1c’-1)、(II-2’-1)、(II-2’-2)、(II-3a’-1)、(II-3a’-2)、(II-3b’-1)、(II-4b’-1)、(II-4c’-1)或(II-4c’-2)表示。

[19][15]～[18]中任一项的化合物或其盐，其中，L₂为下述的结构式所表示的二价基团：

[化学式6]

在此，黑圆和白圆表示结合键，

黑圆的结合键与L₂所相邻的羰基键合，

白圆的结合键与D键合，

E表示吸电子基团，

n2为1～4的整数。

[20]抗体的衍生试剂，其包含[15]～[19]中任一项的化合物或其盐。

发明效果

本发明的缀合物或其盐可将免疫球蛋白单元与功能性物质的结合的平均比率(功能性物质/免疫球蛋白单元)高度地控制在所需的范围(1.5～2.5)，同时所需性质优异。

本发明的化合物或其盐和试剂作为上述缀合物的制造中的合成中间体有用。

具体实施方式

1.一般术语的定义

本发明中，术语“抗体”如下所述。另外，术语“免疫球蛋白单元”与作为这种抗体的基本构成要素的二价单体单元对应，是包含2个重链和2个轻链的单元。因此，关于免疫球蛋白单元，其来源、种类(多克隆或单克隆、同种型和全长抗体或抗体片段)、抗原、赖氨酸残基的位点和位点选择性的定义、示例和优选示例与以下说明的抗体相同。

对抗体的来源没有特别限定，例如可以是来源于哺乳动物、鸟类(例如，鸡)等动物的抗体。优选地，免疫球蛋白单元来源于哺乳动物。作为这样的哺乳动物，例如可列举：灵长类(例如，人、猴、黑猩猩)、啮齿类(例如，小鼠、大鼠、豚鼠、仓鼠、兔)、宠物(例如，狗、猫)、家畜(例如，牛、猪、山羊)、役用动物(例如，马、绵羊)，优选为灵长类或啮齿类，更优选为人。

抗体的种类可以是多克隆抗体或单克隆抗体。抗体也可以是二价抗体(例如，IgG、IgD、IgE)或四价以上的抗体(例如，IgA抗体、IgM抗体)。优选地，抗体为单克隆抗体。作为单克隆抗体，例如可列举：嵌合抗体、人源化抗体、人抗体、添加了规定糖链的抗体(例如，修饰成具有N型糖链结合共有序列等的糖链结合共有序列的抗体)、双特异性抗体、Fc区蛋白、Fc融合蛋白。作为单克隆抗体的同种型，例如可列举：IgG(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)、IgM、IgA、IgD、IgE和IgY。本发明中，作为单克隆抗体，可利用全长抗体、或包含可变区以及CH1结构域和CH2结构域的抗体片段，但优选全长抗体。抗体优选为人IgG单克隆抗体，更优选为人IgG全长单克隆抗体。

作为抗体的抗原，可使用任意的抗原。例如，作为这样的抗原，可列举：蛋白[包括寡肽、多肽。可以是用糖等生物分子修饰的蛋白(例如，糖蛋白)]、糖链、核酸、小分子(低分子)化合物。优选地，抗体可以是以蛋白为抗原的抗体。作为蛋白，例如可列举：细胞膜受体、除细胞膜受体以外的细胞膜蛋白(例如，细胞外基质蛋白)、配体、可溶性受体。

更具体而言，作为抗体的抗原的蛋白可以是疾病靶蛋白。作为疾病靶蛋白，例如可列举如下。

(1)癌症领域

PD-L1、GD2、PDGFRα(血小板衍生生长因子受体)、CD22、HER2、磷脂酰丝氨酸(PS)、EpCAM、纤连蛋白、PD-1、VEGFR-2、CD33、HGF、gpNMB、CD27、DEC-205、叶酸受体、CD37、CD19、Trop2、CEACAM5、S1P、HER3、IGF-1R、DLL4、TNT-1/B、CPAAs、PSMA、CD20、CD105(内皮糖蛋白)、ICAM-1、CD30、CD16A、CD38、MUC1、EGFR、KIR2DL1、2、NKG2A、腱生蛋白-C、IGF(胰岛素样生长因子)、CTLA-4、间皮素、CD138、c-Met、Ang2、VEGF-A、CD79b、ENPD3、叶酸受体α、TEM-1、GM2、磷脂酰肌醇蛋白聚糖3、巨噬细胞抑制因子、CD74、Notch1、Notch2、Notch3、CD37、TLR-2、CD3、CSF-1R、FGFR2b、HLA-DR、GM-CSF、EphA3、B7-H3、CD123、gpA33、Frizzled7受体、DLL4、VEGF、RSPO、LIV-1、SLITRK6、Nectin-4、CD70、CD40、CD19、SEMA4D(CD100)、CD25、MET、组织因子、IL-8、EGFR、cMet、KIR3DL2、Bst1(CD157)、P-钙粘着蛋白、CEA、GITR、TAM(肿瘤相关巨噬细胞)、CEA、DLL4、Ang2、CD73、FGFR2、CXCR4、LAG-3、GITR、岩藻糖基GM1、IGF-1、血管生成素2、CSF-1R、FGFR3、OX40、BCMA、ErbB3、CD137(4-1BB)、PTK7、EFNA4、FAP、DR5、CEA、Ly6E、CA6、CEACAM5、LAMP1、组织因子、EPHA2、DR5、B7-H3、FGFR4、FGFR2、α2-PI、A33、GDF15、CAIX、CD166、ROR1、GITR、BCMA、TBA、LAG-3、EphA2、TIM-3、CD-200、EGFRvIII、CD16A、CD32B、PIGF、Axl、MICA/B、Thomsen-Friedenreich、CD39、CD37、CD73、CLEC12A、Lgr3、转铁蛋白受体、TGFβ、IL-17、5T4、RTK、免疫抑制蛋白、NaPi2b、Lewis血型B抗原、A34、赖氨酰氧化酶、DLK-1、TROP-2、α9整联蛋白、TAG-72(CA72-4)、CD70。

(2)自身免疫疾病/炎症性疾病

IL-17、IL-6R、IL-17R、INF-α、IL-5R、IL-13、IL-23、IL-6、ActRIIB、β7-整联蛋白、IL-4αR、HAS、嗜酸性粒细胞趋化因子-1、CD3、CD19、TNF-α、IL-15、CD3ε、纤连蛋白、IL-1β、IL-1α、IL-17、TSLP(胸腺基质淋巴细胞生成素)、LAMP(α4β7整联蛋白)、IL-23、GM-CSFR、TSLP、CD28、CD40、TLR-3、BAFF-R、MAdCAM、IL-31R、IL-33、CD74、CD32B、CD79B、IgE(免疫球蛋白E)、IL-17A、IL-17F、C5、FcRn、CD28、TLR4、MCAM、B7RP1、CXCR1、2配体、IL-21、钙粘着蛋白-11、CX3CL1、CCL20、IL-36R、IL-10R、CD86、TNF-α、IL-7R、Kv1.3、α9整联蛋白、LIFHT。

(3)脑神经疾病

CGRP、CD20、β淀粉样蛋白、β淀粉样蛋白原纤维、降钙素基因相关肽受体、LINGO(包括Ig结构域的1)、α突触核蛋白、细胞外tau、CD52、胰岛素受体、tau蛋白、TDP-43、SOD1、TauC3、JC病毒。

(4)感染症

艰难梭菌(Clostridium Difficile)毒素B、巨细胞病毒、RS病毒、LPS、金黄色葡萄球菌(S.Aureus)α-毒素、M2e蛋白、Psl、PcrV、金黄色葡萄球菌毒素、甲型流感、海藻酸盐、金黄色葡萄球菌、PD-L1、乙型流感、不动杆菌(Acinetobacter)、F-蛋白、Env、CD3、病原性大肠杆菌(Escherichia coli)、克雷伯氏菌(Klebsiella)、肺炎球菌(Pneumococcus)。

(5)遗传病/罕见疾病

淀粉样蛋白AL、SEMA4D(CD100)、胰岛素受体、ANGPTL3、IL4、IL13、FGF23、促肾上腺皮质激素、转甲状腺素蛋白(Transthyretin)、亨廷顿蛋白。

(6)眼病

因子D、IGF-1R、PGDFR、Ang2、VEGF-A、CD-105(内皮糖蛋白)、IGF-1R、β淀粉样蛋白。

(7)骨/整形外科领域

骨硬化蛋白(Sclerostin)、肌肉生长抑制素(Myostatin)、Dickkopf-1、GDF8、RNAKL、HAS、Siglec-15。

(8)血液疾病

vWF、因子IXa、因子X、IFNγ、C5、BMP-6、膜铁转运蛋白(Ferroportin)、TFPI。

(9)其它疾病

BAFF(B细胞活化因子)、IL-1β、PCSK9、NGF、CD45、TLR-2、GLP-1、TNFR1、C5、CD40、LPA、催乳素受体、VEGFR-1、CB1、内皮糖蛋白、PTH1R、CXCL1、CXCL8、IL-1β、AT2-R、IAPP。

作为单克隆抗体的具体例，可列举：特定的嵌合抗体(例如，利妥昔单抗、巴利昔单抗、英夫利西单抗、西妥昔单抗、司妥昔单抗、达妥昔单抗、奥他妥沙西单抗(オルタトキサシマブ))、特定的人源化抗体(例如，达利珠单抗、帕利珠单抗、曲妥珠单抗、阿仑单抗、奥马珠单抗、依法利珠单抗、贝伐珠单抗、那他珠单抗(IgG4)、托珠单抗、依库珠单抗(IgG2)、莫格利珠单抗、帕妥珠单抗、奥妥珠单抗、维得利珠单抗、帕博利珠单抗(IgG4)、美泊利珠单抗、埃罗妥珠单抗、达雷木单抗、依奇珠单抗(IgG4)、瑞替珠单抗(IgG4)、阿替利珠单抗)、特定的人抗体(例如，阿达木单抗(IgG1)、帕尼单抗、戈利木单抗、乌司奴单抗、卡那单抗、奥法妥木单抗、地舒单抗(IgG2)、伊匹单抗、贝利木单抗、雷昔库单抗、雷莫芦单抗、纳武单抗、杜匹鲁单抗(IgG4)、司库奇尤单抗、依洛尤单抗(IgG2)、阿利西尤单抗、耐昔妥珠单抗、柏达鲁单抗(IgG2)、奥拉单抗)(在未提及IgG亚型的情况下，显示为IgG1)。

关于抗体中的氨基酸残基的位点和重链恒定区的位点(例如，CH2结构域)，依据EU编号(参照http：//www.imgt.org/IMGTScientificChart/Numbering/Hu_IGHGnber.html)。例如，在以人IgG为对象的情况下，246位的赖氨酸残基相当于人IgG CH2区的第16位的氨基酸残基，248位的赖氨酸残基相当于人IgG CH2区的第18位的氨基酸残基，288位的赖氨酸残基相当于人IgG CH2区的第58位的氨基酸残基，290位的赖氨酸残基相当于人IgG CH2区的第60位的氨基酸残基，317位的赖氨酸残基相当于人IgG CH2区的第87位的氨基酸残基。246/248位的表述表示246位或248位的赖氨酸残基是对象。288/290位的表述表示288位或290位的赖氨酸残基是对象。

根据本发明，可位点选择性地修饰构成抗体的免疫球蛋白单元中的重链中的特定赖氨酸残基(例如，246/248位、288/290位或317位的赖氨酸残基)(例如，参照国际公开第2018/199337号、国际公开第2019/240288号、国际公开第2019/240287号和国际公开第2020/090979号)。本说明书中，“位点选择性的”或“位点选择性”是指，尽管在抗体中特定的氨基酸残基没有偏向于特定的区域，但可与抗体中的特定氨基酸残基结合的规定的结构单元偏向于抗体中的特定区域。因此，“位点选择性地具有”、“位点选择性的结合”、“以位点选择性的结合”等与位点选择性有关的表述是指，包含1个以上的特定氨基酸残基的靶区域中的规定的结构单元的持有率或结合率以显著水平高于包含与靶区域中的该特定氨基酸残基相同种类的多个氨基酸残基的非靶区域中的该结构单元的持有率或结合率。这样的位点选择性可以是50％以上，优选为60％以上，更优选为70％以上，更进一步优选为80％以上，特别优选为90％以上、95％以上、96％以上、97％以上、98％以上、99％以上、99.5％以上或100％。

本发明中，其它位点的特定氨基酸残基也可进一步被位点选择性地修饰，只要抗体中的重链中的特定赖氨酸残基被位点选择性地修饰即可。例如，关于位点选择性地修饰抗体中的规定位点的特定氨基酸残基的方法，记载于国际公开第2018/199337号、国际公开第2019/240288号、国际公开第2019/240287号和国际公开第2020/090979号中。作为这样的特定氨基酸残基，可利用具有容易修饰的侧链(例如，氨基、羧基、酰胺基、羟基、硫醇基)的氨基酸残基(例如，赖氨酸残基、天冬氨酸残基、谷氨酸残基、天冬酰胺残基、谷氨酰胺残基、苏氨酸残基、丝氨酸残基、酪氨酸残基、半胱氨酸残基)，但优选为具有包含氨基的侧链的赖氨酸残基、具有包含羟基的侧链的酪氨酸残基、丝氨酸残基和苏氨酸残基或具有包含硫醇基的侧链的半胱氨酸残基，可更优选为赖氨酸残基(即，246/248位的赖氨酸残基、288/290位的赖氨酸残基和317位的赖氨酸残基中的2个赖氨酸残基可位点选择性地双重修饰，3个赖氨酸残基可位点选择性地三重修饰)。

(卤原子)

作为卤原子，例如可列举：氟原子、氯原子、溴原子、碘原子。

(一价基团)

作为一价烃基，例如可列举：一价烃基和一价杂环基。

一价基团可被1个以上(例如为1～10个，优选为1～8个，更优选为1～6个，更进一步优选为1～5个，特别优选为1～3个)后述的取代基取代。

(一价烃基及其相关术语)

作为一价烃基，例如可列举：一价链状烃基、一价脂环式烃基和一价芳族烃基。

一价链状烃基是指仅由链状结构构成的烃基，主链不含环状结构。然而，链状结构可以是直链状也可以是支链状。作为一价链状烃基，例如可列举：烷基、烯基、炔基。烷基、烯基和炔基可以是直链状或支链状的任一种。

作为烷基，优选碳原子数为1～12的烷基，更优选碳原子数为1～6的烷基，进一步优选碳原子数为1～4的烷基。在烷基具有取代基的情况下，上述碳原子数中不包括取代基的碳原子数。作为碳原子数为1～12的烷基，例如可列举：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基、十二烷基。

作为烯基，优选碳原子数为2～12的烯基，更优选碳原子数为2～6的烯基，进一步优选碳原子数为2～4的烯基。在烯基具有取代基的情况下，上述碳原子数中不包括取代基的碳原子数。作为碳原子数为2～12的烯基，例如可列举：乙烯基、丙烯基、正丁烯基。

作为炔基，优选碳原子数为2～12的炔基，更优选碳原子数为2～6的炔基，进一步优选碳原子数为2～4的炔基。在炔基具有取代基的情况下，上述碳原子数中不包括取代基的碳原子数。作为碳原子数为2～12的炔基，例如可列举：乙炔基、丙炔基、正丁炔基。

作为一价链状烃基，优选烷基。

一价脂环式烃基是指仅包含脂环式烃作为环结构、而不含芳族环的烃基，脂环式烃可以是单环、多环的任一种。然而，无需仅由脂环式烃构成，其一部分中可包含链状结构。作为一价脂环式烃基，例如可列举：环烷基、环烯基、环炔基，它们可以是单环、多环的任一种。

作为环烷基，优选碳原子数为3～12的环烷基，更优选碳原子数为3～6的环烷基，进一步优选碳原子数为5～6的环烷基。在环烷基具有取代基的情况下，上述碳原子数中不包括取代基的碳原子数。作为碳原子数为3～12的环烷基，例如可列举：环丙基、环丁基、环戊基、环己基。

作为环烯基，优选碳原子数为3～12的环烯基，更优选碳原子数为3～6的环烯基，进一步优选碳原子数为5～6的环烯基。在环烯基具有取代基的情况下，上述碳原子数中不包括取代基的碳原子数。作为碳原子数为3～12的环烯基，例如可列举：环丙烯基、环丁烯基、环戊烯基、环己烯基。

作为环炔基，优选碳原子数为3～12的环炔基，更优选碳原子数为3～6的环炔基，进一步优选碳原子数为5～6的环炔基。在环炔基具有取代基的情况下，上述碳原子数中不包括取代基的碳原子数。作为碳原子数为3～12的环炔基，例如可列举：环丙炔基、环丁炔基、环戊炔基、环己炔基。

作为一价脂环式烃基，优选环烷基。

一价芳族烃基是指包含芳族环结构的烃基。然而，无需仅由芳族环构成，其一部分中可包含链状结构或脂环式烃，芳族环可以是单环、多环的任一种。作为一价芳族烃基，优选碳原子数为6～12的芳基，更优选碳原子数为6～10的芳基，进一步优选碳原子数为6的芳基。在一价芳族烃基具有取代基的情况下，上述碳原子数中不包括取代基的碳原子数。作为碳原子数为6～12的芳基，例如可列举：苯基、萘基。

作为一价芳族烃基，优选苯基。

这些之中，作为一价烃基，优选烷基、环烷基、芳基。

(一价杂环基及其相关术语)

一价杂环基是指从杂环化合物的杂环中去除1个氢原子后的基团。一价杂环基为一价芳族杂环基或一价非芳族杂环基。作为构成杂环基的杂原子，优选包含选自氧原子、硫原子、氮原子、磷原子、硼原子和硅原子的1种以上，更优选包含选自氧原子、硫原子和氮原子的1种以上。

作为一价芳族杂环基，优选碳原子数为1～15的芳族杂环基，更优选碳原子数为1～9的芳族杂环基，进一步优选碳原子数为1～6的芳族杂环基。在一价芳族杂环基具有取代基的情况下，上述碳原子数中不包括取代基的碳原子数。作为一价芳族杂环基，例如可列举：吡咯基、呋喃基、噻吩基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、异噻唑基、唑基、异/>唑基、三唑基、四唑基、吲哚基、嘌呤基、蒽醌基、咔唑基、芴基、喹啉基、异喹啉基、喹唑啉基和酞嗪基。

作为一价非芳族杂环基，优选碳原子数为2～15的非芳族杂环基，更优选碳原子数为2～9的非芳族杂环基，进一步优选碳原子数为2～6的非芳族杂环基。在一价非芳族杂环基具有取代基的情况下，上述碳原子数中不包括取代基的碳原子数。作为一价非芳族杂环基，例如可列举：环氧乙烷基、氮丙啶基、氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、吡咯烷基、二氢呋喃基、四氢呋喃基、二氧戊环基(dioxolanyl)、四氢噻吩基、吡咯啉基、咪唑烷基、唑烷基、哌啶基、二氢吡喃基、四氢吡喃基、四氢噻喃基、吗啉基、硫代吗啉基、哌嗪基、二氢/>嗪基、四氢/>嗪基、二氢嘧啶基和四氢嘧啶基。

这些之中，作为一价杂环基，优选5元或6元的杂环基。

(二价基团)

二价基团是具有包含选自二价直链烃基、二价环状烃基、二价杂环基、-C(＝O)-、-C(＝S)-、-NR₇-、-C(＝O)-NR₇-、-NR₇-C(＝O)-、-C(＝S)-NR₇-、-NR₇-C(＝S)-、-O-、-S-、-(O-R₈)_m-和-(S-R₈)_m1-的1个基团或它们的2个以上(例如为2～10个，优选为2～8个，更优选为2～6个，更进一步优选为2～5个，特别优选为2或3个)基团的主链结构的基团。R₇表示氢原子或后述的取代基。R₈表示二价直链烃基、二价环状烃基或二价杂环基。m1为1～10的整数，优选为1～8的整数，更优选为1～6的整数，更进一步优选为1～5的整数，特别优选为1～3的整数。

二价直链烃基为直链亚烷基、直链亚烯基或直链亚炔基。

直链亚烷基是碳原子数为1～6的直链亚烷基，优选碳原子数为1～4的直链亚烷基。作为直链亚烷基，例如可列举：亚甲基、亚乙基、正亚丙基、正亚丁基、正亚戊基、正亚己基。

直链亚烯基是碳原子数为2～6的直链亚烯基，优选碳原子数为2～4的直链亚烯基。作为直链亚烯基，例如可列举：亚乙烯基、正亚丙烯基、正亚丁烯基、正亚戊烯基、正亚己烯基。

直链亚炔基是碳原子数为2～6的直链亚炔基，优选碳原子数为2～4的直链亚炔基。作为直链亚炔基，例如可列举：亚乙炔基、正亚丙炔基、正亚丁炔基、正亚戊炔基、正亚己炔基。

作为二价直链烃基，优选直链亚烷基。

二价环状烃基为亚芳基或二价非芳族环状烃基。

作为亚芳基，优选碳原子数为6～14的亚芳基，更优选碳原子数为6～10的亚芳基，特别优选碳原子数为6的亚芳基。作为亚芳基，例如可列举：亚苯基、亚萘基、亚蒽基。

作为二价非芳族环状烃基，优选碳原子数为3～12的单环式或多环式的二价非芳族环状烃基，更优选碳原子数为4～10的单环式或多环式的二价非芳族环状烃基，特别优选碳原子数为5～8的单环式的二价非芳族环状烃基。作为二价非芳族环状烃基，例如可列举：亚环丙基、亚环丁基、亚环戊基、亚环己基、亚环庚基、亚环辛基。

作为二价环状烃基，优选亚芳基。

二价杂环基为二价芳族杂环基或二价非芳族杂环基。作为构成杂环的杂原子，优选包含选自氧原子、硫原子、氮原子、磷原子、硼原子和硅原子的1种以上，更优选包含选自氧原子、硫原子和氮原子的1种以上。

作为二价芳族杂环基，优选碳原子数为3～15的二价芳族杂环基，更优选碳原子数为3～9的二价芳族杂环基，特别优选碳原子数为3～6的二价芳族杂环基。作为二价芳族杂环基，例如可列举：吡咯二基、呋喃二基、噻吩二基、吡啶二基、哒嗪二基、嘧啶二基、吡嗪二基、三嗪二基、吡唑二基、咪唑二基、噻唑二基、异噻唑二基、唑二基、异/>唑二基、三唑二基、四唑二基、吲哚二基、嘌呤二基、蒽醌二基、咔唑二基、芴二基、喹啉二基、异喹啉二基、喹唑啉二基和酞嗪二基。

作为二价非芳族杂环基，优选碳原子数为3～15的非芳族杂环基，更优选碳原子数为3～9的非芳族杂环基，特别优选碳原子数为3～6的非芳族杂环基。作为二价非芳族杂环基，例如可列举：吡咯二酮二基、吡咯啉二酮二基、环氧乙烷二基、氮丙啶二基、氮杂环丁烷二基、氧杂环丁烷二基、硫杂环丁烷二基、吡咯烷二基、二氢呋喃二基、四氢呋喃二基、二氧戊环二基、四氢噻吩二基、吡咯啉二基、咪唑啉二基、唑烷二基、哌啶二基、二氢吡喃二基、四氢吡喃二基、四氢噻喃二基、吗啉二基、硫代吗啉二基、哌嗪二基、二氢/>嗪二基、四氢/>嗪二基、二氢嘧啶二基和四氢嘧啶二基。

作为二价杂环基，优选二价芳族杂环基。

优选地，二价基团是具有包含选自亚烷基、亚芳基、-C(＝O)-、-NR₇-、-C(＝O)-NR₇-、-NR₇-C(＝O)-、-O-和-(O-R₈)_m-的1个基团的主链结构的二价基团；或者是具有包含选自亚烷基、亚芳基、-C(＝O)-、-NR₇-、-C(＝O)-NR₇-、-NR₇-C(＝O)-、-O-和-(O-R₈)_m1-的2个以上基团的主链结构的二价基团，

R₇为氢原子或烷基，

R₈为亚烷基或亚芳基，

m1可以是1～5的整数(即，1、2、3、4或5)。

亚烷基、亚芳基、烷基与上述相同。

二价基团中的主链结构可被1个以上(例如为1～10个，优选为1～8个，更优选为1～6个，更进一步优选为1～5个，特别优选为1～3个)后述的取代基取代。

(取代基)

作为取代基，可列举如下：

(i)卤原子；

(ii)一价烃基；

(iii)一价杂环基；

(iv)芳烷基；

(v)R_a-O-、R_a-C(＝O)-、R_a-O-C(＝O)-或R_a-C(＝O)-O-(R_a表示氢原子或一价烃基。)；或

(vi)NR_bR_c-、NR_bR_c-C(＝O)-、NR_bR_c-C(＝O)-O-或R_b-C(＝O)-NR_c-(R_b和R_c相同或不同地表示氢原子或一价烃基。)；

(vii)硝基、硫酸基、磺酸基、氰基和羧基。

上述取代基中的卤原子、一价烃基和一价杂环基的定义、示例和优选示例分别与上述相同。

芳烷基是指芳基烷基。芳基烷基中的芳基和烷基的定义、示例和优选示例如上所述。作为芳烷基，优选碳原子数为3～15的芳烷基。作为这样的芳烷基，例如可列举：苯甲酰基、苯乙基、萘基甲基、萘基乙基。

优选地，取代基可如下：

(i)卤原子；

(ii)碳原子数为1～12的烷基、苯基或萘基；

(iii)碳原子数为3～15的芳烷基；

(iv)5元或6元的杂环；

(v)R_a-O-、R_a-C(＝O)-、R_a-O-C(＝O)-或R_a-C(＝O)-O-(R_a表示氢原子或碳原子数为1～12的烷基。)；

(vi)NR_bR_c-、NR_bR_c-C(＝O)-、NR_bR_c-C(＝O)-O-或R_b-C(＝O)-NR_c-(R_b和R_c相同或不同地表示氢原子或碳原子数为1～12的烷基。)；或

(vii)与上述(vii)中列举的基团相同的基团。

更优选地，取代基可如下：

(i)卤原子；

(ii)碳原子数为1～12的烷基；

(iii)R_a-O-、R_a-C(＝O)-、R_a-O-C(＝O)-或R_a-C(＝O)-O-(R_a表示氢原子或碳原子数为1～12的烷基。)；

(iv)NR_bR_c-、NR_bR_c-C(＝O)-、NR_bR_c-C(＝O)-O-或R_b-C(＝O)-NR_c-(R_b和R_c相同或不同地表示氢原子或碳原子数为1～12的烷基。)；或

(v)与上述(vii)中列举的基团相同的基团。

更进一步优选地，取代基可如下：

(i)卤原子；

(ii)碳原子数为1～6的烷基；

(iii)R_a-O-、R_a-C(＝O)-、R_a-O-C(＝O)-或R_a-C(＝O)-O-(R_a表示氢原子或碳原子数为1～6的烷基。)；

(iv)NR_bR_c-、NR_bR_c-C(＝O)-、NR_bR_c-C(＝O)-O-或R_b-C(＝O)-NR_c-(R_b和R_c相同或不同地表示氢原子或碳原子数为1～6的烷基。)；或

(v)与上述(vii)中列举的基团相同的基团。

特别优选地，取代基可如下：

(i)卤原子；

(ii)碳原子数为1～4的烷基；

(iii)R_a-O-、R_a-C(＝O)-、R_a-O-C(＝O)-或R_a-C(＝O)-O-(R_a表示氢原子或碳原子数为1～4的烷基。)；

(iv)NR_bR_c-、NR_bR_c-C(＝O)-、NR_bR_c-C(＝O)-O-或R_b-C(＝O)-NR_c-(R_b和R_c相同或不同地表示氢原子或碳原子数为1～4的烷基。)；或

(v)与上述(vii)中列举的基团相同的基团。

(亲水性基团)

亲水性基团是可使式(I)或其下位概念的式所表示的结构单元更具亲水性的基团。通过在该结构单元中的规定部位具有亲水性基团，可在小鼠血浆中使缀合物更稳定。作为这样的亲水性基团，例如可举出：羧酸基、磺酸基、羟基、聚乙二醇基、聚肌氨酸基、糖部分。在缀合物中可包含1个以上(例如，1个、2个、3个、4个或5个)亲水性基团。

聚乙二醇基是-(CH₂-CH₂-O-)_k1-所表示的二价基团。在缀合物具有聚乙二醇基的情况下，缀合物可具有聚乙二醇基的一个结合键与氢原子或一价基团(例如，一价烃基)键合的一价基团。k1例如可以是3以上的整数，优选为4以上的整数，更优选为5以上的整数，更进一步优选为6以上的整数。k1还可以是20以下的整数，优选为15以下的整数，更优选为12以下的整数，更进一步优选为10个以下的整数。更具体而言，k1可以是3～20的整数，优选为4～15的整数，更优选为5～12的整数，更进一步优选为6～10的整数。

聚肌氨酸基是-(NCH₃-CH₂-CO-)_k2-所表示的二价基团。聚肌氨酸基可用作PEG的替代物。k2例如可以是3以上的整数，优选为4以上的整数，更优选为5以上的整数，更进一步优选为6以上的整数。k2还可以是20以下的整数，优选为15以下的整数，更优选为12以下的整数，更进一步优选为10个以下的整数。更具体而言，k2可以是3～20的整数，优选为4～15的整数，更优选为5～12的整数，更进一步优选为6～10的整数。

糖部分是单糖、低聚糖(例如，二糖、三糖、四糖、五糖)或多糖。糖部分可包含醛糖或酮糖或它们的组合。糖部分可以是核糖、脱氧核糖、木糖、阿拉伯糖、葡萄糖、甘露糖、半乳糖或果糖、或氨基糖(例如，葡萄糖胺)等单糖或包含这样的单糖的低聚糖或多糖。

在特定的实施方式中，糖部分可以是小分子量的亲水性基团。小分子亲水性基团是指分子量为1500以下的亲水性基团。小分子亲水性基团的分子量可优选为1200以下、1000以下、800以下、700以下、600以下、500以下、400以下、300以下、200以下或100以下。作为小分子亲水性基团，可举出：羧酸基、磺酸基、羟基、以及满足上述分子量的聚乙二醇基、聚肌氨酸基、糖部分(例如，单糖、低聚糖)。

(生物正交性官能团)

生物正交性官能团是指，不与生物构成成分(例如，氨基酸、蛋白、核酸、脂质、糖、磷酸)反应或与生物构成成分的反应速度慢、但选择性地与生物构成成分以外的成分反应的基团。生物正交性官能团在该技术领域中是已知的(例如，参照Sharpless K.B.等人，Angew.Chem.Int.第40版，2004(2015)；Bertozzi C.R.等人，Science 291，2357(2001)；Bertozzi C.R.等人，Nature Chemical Biology 1，13(2005))。

本发明中，作为生物正交性官能团，使用针对蛋白的生物正交性官能团。这是由于适合用本发明的试剂衍生的引入硫醇基的抗体为蛋白。针对蛋白的生物正交性官能团是不与构成蛋白的20种天然氨基酸残基的侧链反应或与该侧链的反应速度慢、但与目标官能团反应的基团。构成蛋白的20种天然氨基酸为丙氨酸(A)、天冬酰胺(N)、半胱氨酸(C)、谷氨酰胺(Q)、甘氨酸(G)、异亮氨酸(I)、亮氨酸(L)、蛋氨酸(M)、苯丙氨酸(F)、脯氨酸(P)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、色氨酸(W)、酪氨酸(Y)、缬氨酸(V)、天冬氨酸(D)、谷氨酸(E)、精氨酸(R)、组氨酸(H)和赖氨酸(L)。在上述20种天然氨基酸中，不具侧链(即，为氢原子)的甘氨酸、以及侧链为烃基(即，在侧链不含选自硫原子、氮原子和氧原子的杂原子)的丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸和缬氨酸对于一般的反应呈惰性。因此，针对蛋白的生物正交性官能团是如下的基团：其不与具有对于一般的反应呈惰性的侧链的这些氨基酸的侧链反应，而且也不与天冬酰胺、谷氨酰胺、蛋氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、精氨酸、组氨酸和赖氨酸的侧链反应或反应速度慢，但与目标官能团反应。

作为这样的生物正交性官能团，例如可列举：叠氮基残基、醛残基、硫醇残基、烯烃残基(换言之，只要具有作为具有碳碳双键的最小单元的亚乙烯基(ethenylene)部分即可。下同)、炔残基(换言之，只要具有作为具有碳碳三键的最小单元的亚乙炔基部分即可。下同)、卤素残基、四嗪残基、硝酮残基、羟胺残基、腈残基、肼残基、酮残基、硼酸残基、氰基苯并噻唑残基、烯丙基残基、膦残基、马来酰亚胺残基、二硫化物残基、硫酯残基、α-卤代羰基残基(例如，在α位具有氟原子、氯原子、溴原子或碘原子的羰基残基。下同)、异腈残基、悉尼酮残基、硒残基。

更具体而言，生物正交性官能团可与选自下述的任一个化学结构对应。

[化学式7]

在此，

R_1a、单个或多个的R_1b和单个或多个的R_1c相同或不同，为上述的取代基或吸电子基团，

·为结合键。

作为吸电子基团，例如可列举：卤原子、被卤原子取代的烷基(例如，三氟甲基)、硼酸残基、甲磺酰基(Mesyl)、甲苯磺酰基(Tosyl)、三氟甲磺酸酯(Triflate)、硝基、氰基、苯基、酮基(例如，酰基)、烷基氧基，优选卤原子、硼酸残基、甲磺酰基、甲苯磺酰基、三氟甲磺酸酯。

生物正交性官能团可受保护。可受保护的生物正交性官能团是指未保护的生物正交性官能团或已受保护的生物正交性官能团。未保护的生物正交性官能团相当于上述的生物正交性官能团。已受保护的生物正交性官能团是通过保护基的切割而生成生物正交性官能团的基团。保护基的切割可在不会引起蛋白的变性/降解(例如，酰胺键的切割)的条件(温和条件)下通过特定处理来进行。作为这样的特定处理，例如可列举：(a)利用选自酸性物质、碱性物质、还原剂、氧化剂、酶的1种以上的物质进行的处理、(b)通过选自光的物理化学刺激进行的处理或(c)在使用了包含自分解的切割性部分的切割性接头的情况下的放置。这样的保护基及其切割条件是该领域中的技术常识(例如，G.Leriche，L.Chisholm，A.Wagner，Bioorganic&Medicinal Chemistry.20，571(2012)；Feng P.等人，Jounal ofAmerican Chemical Society.132，1500(2010)；Bessodes M.等人，Journal ofControlled Release，99，423(2004)；DeSimone，J.M.，Journal of American ChemicalSociety.132，17928(2010)；Thompson，D.H.，Journal of Controlled Release，91，187(2003)；Schoenmarks，R.G.，Journal of Controlled Release，95，291(2004))。

作为已受保护的生物正交性官能团，例如可列举：二硫化物残基、酯残基、缩醛残基、缩酮残基、亚胺残基、邻二醇(Vicinal diol)残基。

更具体而言，已受保护的生物正交性官能团可与选自以下的任一个化学结构对应。

[化学式8]

在此，与键正交的波浪线表示切割部位，

单个或多个的R_2a相同或不同，选自氢原子或上述的取代基，

·为结合键。

优选地，可受保护的生物正交性官能团为未保护的生物正交性官能团。

(功能性物质)

对功能性物质没有特别限定，只要是对抗体赋予任意功能的物质即可，例如可列举：药物、标记物质、稳定剂，优选为药物或标记物质。另外，功能性物质可以是单一的功能性物质，或者可以是连接有2种以上的功能性物质的物质。

作为药物，可以是针对任意疾病的药物。作为这样的疾病，例如可列举：癌症(例如，肺癌、胃癌、大肠癌、胰腺癌、肾癌、肝癌、甲状腺癌、前列腺癌、膀胱癌、卵巢癌、子宫癌、骨癌、皮肤癌、脑瘤、黑色素瘤)、自身免疫疾病/炎症性疾病(例如，过敏性疾病、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮)、脑神经疾病(例如，脑梗塞、阿尔茨海默病、帕金森病、肌萎缩性侧索硬化症)、感染症(例如，细菌感染症、病毒感染症)、遗传病/罕见疾病(例如，遗传性球形红细胞增多症、非营养不良性肌强直病)、眼病(例如，老年性黄斑变性、糖尿病视网膜病变、视网膜色素变性)、骨/整形外科领域的疾病(例如，变形性关节炎)、血液疾病(例如，白血病、紫癜)、其它疾病(例如，糖尿病、高脂血症等代谢异常症、肝脏疾病、肾病、肺病、循环系统疾病、消化系统疾病)。药物可以是疾病的预防或治疗药、副作用的缓解药。

更具体而言，药物可以是抗癌药。作为抗癌药，例如可列举：化疗药、毒素、放射性同位素或包含其的物质。作为化疗药，例如可列举：DNA损伤剂、代谢拮抗剂、酶抑制剂、DNA嵌入剂、DNA切割剂、拓扑异构酶抑制剂、DNA结合抑制剂、微管蛋白结合抑制剂、细胞毒性核苷、铂化合物。作为毒素，例如可列举：细菌毒素(例如，白喉毒素)、植物毒素(例如，蓖麻毒蛋白)。作为放射性同位素，例如可列举：氢原子的放射性同位素(例如，³H)、碳原子的放射性同位素(例如，¹⁴C)、磷原子的放射性同位素(例如，³²P)、硫原子的放射性同位素(例如，35^S)、钇的放射性同位素(例如，⁹⁰Y)、锝的放射性同位素(例如，^99mTc)、铟的放射性同位素(例如，¹¹¹In)、碘原子的放射性同位素(例如，¹²³I、¹²⁵I、¹²⁹I、¹³¹I)、钐的放射性同位素(例如，¹⁵³Sm)、铼的放射性同位素(例如，¹⁸⁶Re)、砹的放射性同位素(例如，²¹¹At)、铋的放射性同位素(例如，²¹²Bi)。更具体而言，作为药物，可列举：澳瑞他汀(MMAE、MMAF)、美登素(DM1、DM4)、PBD(吡咯并苯并二氮杂)、IGN、喜树碱类似物、卡奇霉素(Calicheamicin)、倍癌霉素(Duocarmycin)、艾日布林(Eribulin)、蒽环类抗生素、dmDNA31、Tubulysin。

标记物质是可检测靶(例如，组织、细胞、物质)的物质。作为标记物质，例如可列举：酶(例如，过氧化物酶、碱性磷酸酶、萤光素酶、β-半乳糖苷酶)、亲和性物质(例如，链霉亲和素、生物素、地高辛、适配体)、荧光物质(例如，荧光素、异硫氰酸荧光素、罗丹明、绿色荧光蛋白、红色荧光蛋白)、发光物质(例如，萤光素、水母素、吖啶酯、三(2,2’-联吡啶)钌、鲁米诺)、放射性同位素(例如，上述的同位素)或包含其的物质。

稳定剂是可使抗体稳定的物质。作为稳定剂，例如可列举：二元醇类、甘油、非离子表面活性剂、阴离子表面活性剂、天然系表面活性剂、糖类和多元醇类。

另外，功能性物质可以是肽、蛋白、核酸、小分子有机化合物、糖链、脂质、高分子聚合物、金属(例如，金)、螯合剂。作为肽，例如可列举：细胞穿透肽、血脑屏障穿透肽、肽药物。作为蛋白，例如可列举：酶、细胞因子、片段抗体、凝集素、干扰素、血清白蛋白、抗体。作为核酸，例如可列举：DNA、RNA、人造核酸。另外，作为核酸，例如可列举：RNA干扰诱导性核酸(例如，siRNA)、适配体、反义核酸。作为小分子有机化合物，例如可列举：诱导蛋白降解的嵌合分子、色素、光分解性化合物。

(盐)

本发明中，作为术语“盐”，例如可列举：与无机酸的盐、与有机酸的盐、与无机碱的盐、与有机碱的盐、以及与氨基酸的盐。作为与无机酸的盐，例如可列举：与氯化氢、溴化氢、磷酸、硫酸、硝酸的盐。作为与有机酸的盐，例如可列举：与甲酸、乙酸、三氟乙酸、乳酸、酒石酸、富马酸、草酸、马来酸、柠檬酸、琥珀酸、苹果酸、苯磺酸、对甲苯磺酸的盐。作为与无机碱的盐，例如可列举：与碱金属(例如，钠、钾)、碱土金属(例如，钙、镁)和锌、铝等其它金属、以及铵的盐。作为与有机碱的盐，例如可列举：与三甲胺、三乙胺、丙二胺、乙二胺、吡啶、乙醇胺、单烷基乙醇胺、二烷基乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺的盐。作为与氨基酸的盐，例如可列举：与碱性氨基酸(例如，精氨酸、组氨酸、赖氨酸、鸟氨酸)和酸性氨基酸(例如，天冬氨酸、谷氨酸)的盐。盐优选为与无机酸(例如，氯化氢)的盐或与有机酸(例如，三氟乙酸)的盐。

2.缀合物或其盐

本发明提供包含下述式(I)所表示的结构单元，且至少1个亲水性基团存在于所述结构单元中的抗体和功能性物质的缀合物或其盐。

[化学式9]

式中，

Ig表示包含2个重链和2个轻链的免疫球蛋白单元，且经由2个重链中的赖氨酸残基的侧链中的氨基，与Ig所相邻的羰基位点选择性地形成酰胺键，

L₁和L₂分别表示二价基团，

R₁表示可包含亲水性基团的一价基团，

X表示可具有取代基的二价基团，在此，二价基团中构成连接存在于X的两侧的2个原子的主链部分的碳原子数为1～3个，取代基为可包含亲水性基团的一价基团，

D表示功能性物质，

R_A表示缬氨酸残基的侧链，

R_B表示瓜氨酸残基或丙氨酸残基的侧链，

n为0或1，在此，在n为1的情况下，X中的取代基可与R₁一起形成可包含亲水性基团的环，

每2个重链的所述酰胺键的平均比率r为1.5～2.5。

在与本发明相关联而给出的式(I)和其它式中，-(连字符)表示在其两侧存在的2个单元(例如，原子、基团)共价键合。

抗体包含上述免疫球蛋白单元。作为这样的抗体，例如可列举：IgG抗体、IgD抗体和IgE抗体，其包含：包含2个重链和2个轻链、且在重链间和重链与轻链之间具有二硫键的免疫球蛋白单元；IgA抗体，其包含：包含4个重链和4个轻链、且在重链间和重链与轻链之间具有二硫键的免疫球蛋白单元；IgM抗体，其包含：包含8个重链和8个轻链、且在重链间和重链与轻链之间具有二硫键的免疫球蛋白单元，但优选IgG抗体(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)。抗体优选为人IgG单克隆抗体，更优选为人IgG全长单克隆抗体。

L₁和L₂所示的二价基团与上述相同。

R₁中的亲水性基团和一价基团与上述相同。

X中的二价基团是构成连接存在于X的两侧的2个原子的主链部分的碳原子数为1～3个的二价基团。这样的主链部分由链状结构或环状结构或者包含它们的组合的结构构成。在主链部分是不含环状结构的链状结构的情况下，主链部分的碳原子数可通过计数链状结构中的碳原子数来确定。另一方面，在主链部分是包含环状结构的结构的情况下，可通过将构成环状结构的规定碳原子数作为主链部分的碳原子数计数来确定。具体而言，环状结构中的主链部分的碳原子数可通过计数连接环状结构中的2个结合键的最短路径的碳原子数来确定(例如，参照以下(a)～(d)的粗体路径)。在主链是包含链状结构和环状结构的组合的结构的情况下，主链的原子数可通过将不含环状结构的链状结构中的原子数与连接环状结构中的2个结合键的最短路径的原子数相加来确定。

[化学式10]

·为结合键。

(a)的情况下，由于最短路径为粗体路径，因此作为主链部分的碳原子数而计数的二价环状结构中的原子数为2。

(b)的情况下，由于最短路径为粗体路径，因此作为主链部分的碳原子数而计数的二价环状结构中的原子数为3。

(c)的情况下，由于任一路径均为最短路径(等距离)，因此作为主链部分的碳原子数而计数的二价环状结构中的碳原子数为4(因此，本发明中，这样的结构从X中的2价基团中排除)。

(d)的情况下，由于稠合部位的路径为最短路径，因此作为主链的原子数而计数的二价环状结构中的碳原子数为4(因此，本发明中，这样的结构从X中的2价基团中排除)。

X中的二价基团可从上述的二价基团中选择，以使其主链部分满足上述条件。

优选地，X中的二价基团可以是下述基团：

(1)碳原子数为1～3个的二价直链烃基；

(2)二价环状烃基；和

(3)二价环状烃基和碳原子数为1或2个的二价直链烃基(1个或2个)连接的二价基团。

碳原子数为1～3个的二价直链烃基是碳原子数为1～3个的直链亚烷基(例如，亚甲基、亚乙基、正亚丙基)、碳原子数为2或3个的直链亚烯基(例如，亚乙烯基、亚丙烯基)或碳原子数为2或3个的直链亚炔基(例如，亚乙炔基、正亚丙炔基)。作为碳原子数为1～4个的二价直链烃基，优选碳原子数为1～3个的直链亚烷基。

二价环状烃基为亚芳基或二价非芳族环状烃基。通过在这样的二价环状烃基中适当设定2个结合键，可将构成上述主链的原子数设定为3～5个。

作为亚芳基，优选碳原子数为6～10的亚芳基，更优选碳原子数为6的亚芳基。作为亚芳基，例如可列举：亚苯基、亚萘基。

作为二价非芳族环状烃基，优选碳原子数为3～12的单环式或多环式的二价非芳族环状烃基，更优选碳原子数为4～10的单环式或多环式的二价非芳族环状烃基，特别优选碳原子数为5～8的单环式的二价非芳族环状烃基。作为二价非芳族环状烃基，例如可列举：亚环丙基、亚环丁基、亚环戊基、亚环己基、亚环庚基、亚环辛基。

作为二价环状烃基，优选亚芳基。

碳原子数为1或2个的二价直链烃基是碳原子数为1或2个的直链亚烷基(例如，亚甲基、亚乙基)、碳原子数为2个的直链亚烯基(亚乙烯基)或碳原子数为2个的直链亚炔基(亚乙炔基)。作为碳原子数为1～4个的二价直链烃基，优选碳原子数为1～4个的直链亚烷基。

在上述(1)～(3)中，X中的二价基团优选(1)或(2)，更优选(1)。

对于X中的二价基团可具有的取代基，亲水性基团和一价基团与上述相同。

D所示的功能性物质与上述相同。

R_A表示缬氨酸残基的侧链(即，-CH(CH₃)₂)。

R_B表示瓜氨酸残基的侧链(即，-CH₂CH₂CH₂NHCONH₂)或丙氨酸残基的侧链(即，-CH₃)。

n为0或1。在n为0的情况下，不存在N-R₁的单元，X与2个羰基直接键合。在n为1的情况下，X中的取代基可与R₁一起形成可包含亲水性基团的环。这样的环含有与R₁连接的氮原子作为环构成原子。作为这样的环，优选5元环或6元环。这样的环还可以是非芳族环或芳族环，优选非芳族环(例如，吡咯烷、哌嗪)。

r表示每2个重链的所述酰胺键的平均比率，为1.5～2.5。这样的平均比率可优选为1.6以上，更优选为1.7以上，更进一步优选为1.8以上，特别优选为1.9以上。这样的平均比率还可优选为2.4以下，更优选为2.3以下，更进一步优选为2.2以下，特别优选为2.1以下。更具体而言，这样的平均比率可优选为1.6～2.4，更优选为1.7～2.3，更进一步优选为1.8～2.2，特别优选为1.9～2.1。

在式(I)所表示的结构单元中，存在至少1个(例如，1个、2个或3个)亲水性基团。因此，在R₁所示的“可包含亲水性基团的一价基团”、和关于X所示的“可具有取代基的二价基团”中的“取代基”的“可包含亲水性基团的一价基团”、和X中的取代基与R₁一起的情况下的“可包含亲水性基团的环”中，至少1个包含亲水性基团。

在特定的实施方式中，L₁可表示下述式(i)所表示的二价基团。

-L₄-Y-L₃-(i)

式中，

L₃和L₄分别独立地包含选自-(C(R)₂)_m-、-(O-C(R)₂-C(R)₂)_m-和-(C(R)₂-C(R)₂-O)_m-、以及它们的组合的二价基团，

R分别独立地是氢原子、碳原子数为1～6的烷基、碳原子数为2～6的烯基或碳原子数为2～6的炔基，

m为0～20的整数，

Y是通过可相互反应的2个生物正交性官能团的反应而生成的二价基团。

R所表示的碳原子数为1～6的烷基、碳原子数为2～6的烯基或碳原子数为2～6的炔基与上述相同。

m为0～20的整数。m可优选为1以上的整数，更优选为2以上的整数、3以上的整数、4以上的整数或5以上的整数。m还可优选为15以下的整数，更优选为12以下的整数、10以下的整数或9以下的整数。另外，m可对L₃和L₄所示的二价基团设定不同的整数。

在特定的实施方式中，L₃和L₄可分别独立地包含-(C(R)₂)_m-所示的二价基团。

Y是通过可相互反应的2个生物正交性官能团的反应而生成的二价基团。由于可相互反应的2个生物正交性官能团的组合是公知的，因此本领域技术人员可适当选择这样的组合，从而适当设定通过可相互反应的2个生物正交性官能团的反应而生成的二价基团。作为可相互反应的生物正交性官能团的组合，例如可举出：硫醇残基与马来酰亚胺残基的组合、呋喃残基与马来酰亚胺残基的组合、硫醇残基与卤代羰基残基的组合(通过取代反应，卤素被硫醇取代)、炔烃残基(优选为可被上述取代基取代的具有碳碳三键的环基)与叠氮残基的组合、四嗪残基与烯烃残基的组合、四嗪残基与炔烃残基的组合、硫醇残基与其它硫醇残基的组合(二硫键)。因此，Y可以是通过硫醇残基与马来酰亚胺残基的反应而生成的基团、通过呋喃残基与马来酰亚胺残基的反应而生成的基团、通过硫醇残基与卤代羰基残基的反应而生成的基团、通过炔烃残基与叠氮残基的反应而生成的基团或通过四嗪残基与烯烃残基的反应而生成的基团、通过硫醇残基与其它硫醇残基的组合而生成的二硫基(Disulfide group，二硫化物基)。

在特定的实施方式中，Y可以是由下述结构式中的任一个结构式表示的二价基团。

[化学式11]

在此，白圆和黑圆表示结合键，

在白圆的结合键与L₃键合的情况下，黑圆的结合键与L₄键合，

在白圆的结合键与L₄键合的情况下，黑圆的结合键与L₃键合。

在优选的实施方式中，上述式(I)所表示的结构单元可以是下述式(I-1)、(I-2)、(I-3)或(I-4)所表示的结构单元。这样的结构单元在上述式(I)所表示的结构单元中，作为缀合物的性能也优异(参照实施例)。

[化学式12]

式中，

Ig、L₁、L₂、D、R_A、R_B、r与式(I)相同，

R₁表示包含亲水性基团的一价基团。

[化学式13]

式中，

Ig、L₁、L₂、D、R_A、R_B、r与式(I)相同，

R₂表示包含亲水性基团的一价基团。

[化学式14]

式中，

Ig、L₁、L₂、D、R_A、R_B、r与式(I)相同，

R₃表示氢原子、碳原子数为1～6的烷基或包含亲水性基团的一价基团，

R₄表示包含亲水性基团的一价基团。

[化学式15]

式中，

Ig、L₁、L₂、D、R_A、R_B、r与式(I)相同，

R₁表示氢原子或碳原子数为1～6的烷基，

R₆表示包含亲水性基团的一价基团。

上述式(I-1)、(I-2)、(I-3)或(I-4)中，包含亲水性基团的一价基团和碳原子数为1～6的烷基与上述相同。

在优选的实施方式中，上述式(I)所表示的结构单元可以是上述式(I-1)、(I-2)或(I-3)所表示的结构单元。这样的结构单元在上述式(I)所表示的结构单元中，作为缀合物的性能特别优异(参照实施例)。

在一个实施方式中，上述式(I-3)中，R₃表示氢原子或碳原子数为1～6的烷基，R₄可表示包含亲水性基团的一价基团。

在另一个实施方式中，上述式(I-3)中，R₃和R₄可分别独立地表示包含亲水性基团的一价基团。

在更优选的实施方式中，上述式(I-1)、(I-2)、(I-3)或(I-4)所表示的结构单元可以是下述式(I-1a’)、(I-1b’)、(I-1c’)、(I-2’)、(I-3a’)、(I-3b’)、(I-4a’)、(I-4b’)或(I-4c’)所表示的结构单元。这样的结构单元在上述式(I)所表示的结构单元中，作为缀合物的性能特别优异(参照实施例)。

[化学式16]

式中，

Ig、L₁、L₂、D、R_A、R_B、r与式(I)相同，

L₅表示键或二价基团，

HG表示亲水性基团。

[化学式17]

式中，

Ig、L₁、L₂、D、R_A、R_B、r与式(I)相同，

2个L₅分别独立地表示键或二价基团，

2个HG分别独立地表示亲水性基团。

[化学式18]

式中，

Ig、L₂、D、R_A、R_B、r与式(I)相同，

L₅表示键或二价基团，

HG表示亲水性基团，

L_1a和L_1b分别独立地表示键或二价基团，

HG’表示二价亲水性基团。

[化学式19]

式中，

Ig、L₁、L₂、D、R_A、R_B、r与式(I)相同，

L₅表示键或二价基团，

HG表示亲水性基团。

[化学式20]

式中，

Ig、L₁、L₂、D、R_A、R_B、r与式(I)相同，

L₅表示键或二价基团，

HG表示亲水性基团。

[化学式21]

式中，

Ig、L₁、L₂、D、R_A、R_B、r与式(I)相同，

HG表示亲水性基团。

[化学式22]

式中，

Ig、L₁、L₂、D、R_A、R_B、r与式(I)相同，

L₅表示键或二价基团，

HG表示亲水性基团。

[化学式23]

式中，

Ig、L₂、D、R_A、R_B、r与式(I)相同，

L₅表示键或二价基团，

HG表示亲水性基团，

L_1a和L_1b分别独立地表示键或二价基团，

HG’表示二价亲水性基团。

[化学式24]

式中，

Ig、L₁、D、R_A、R_B、r与式(I)相同，

L₅表示键或二价基团，

HG表示亲水性基团，

L₂’表示键或二价基团，

E表示吸电子基团，

n2为1～4的整数。

式(I-1a’)～(I-4c’)中，二价基团和亲水性基团的定义、示例和优选示例与上述相同。作为二价亲水性基团，可列举：上述亲水性基团中所述的聚乙二醇基、聚肌氨酸基、糖部分，优选聚乙二醇基、聚肌氨酸基，更优选聚乙二醇基。吸电子基团与上述相同。吸电子基团与苯环的键合位点相对于所相邻的氨基(NH)为邻位、间位或对位，优选邻位或对位，优选邻位。n2可优选为1或2。其它式中的二价亲水性基团、吸电子基团及其键合位点、以及n2的定义、示例和优选示例也相同。

在优选的实施方式中，“-L₅-HG”所表示的结构单元可以是选自以下的结构单元。

(a)-OH

(b)-NH(CH₂CH₂O)₈CH₃

(c)-NHCH₂CH₂COOH

在特定的实施方式中，式(I-1a’)所表示的结构单元可以是以下的结构单元。

[化学式25]

/>

式中，

Ig、L₁、L₂、D、R_A、R_B、r与式(I)相同。

[化学式26]

式中，

Ig、L₁、L₂、D、R_A、R_B、r与式(I)相同。

在另一个特定的实施方式中，式(I-1b’)所表示的结构单元可以是以下的结构单元。

[化学式27]

式中，

Ig、L₁、L₂、D、R_A、R_B、r与式(I)相同。

[化学式28]

式中，

Ig、L₂、D、R_A、R_B、r与式(I)相同，

L_1a和L_1b分别独立地表示键或二价基团，

n1为3～20的整数。

式(I-1c’-1)中，二价基团的定义、示例和优选示例与上述相同。n1可以是3以上的整数，优选为4以上的整数，更优选为5以上的整数，更进一步优选为6以上的整数。n1还可以是20以下的整数，优选为15以下的整数，更优选为12以下的整数，更进一步优选为10个以下的整数。更具体而言，n1可以是3～20的整数，优选为4～15的整数，更优选为5～12的整数，更进一步优选为6～10的整数。其它式中的n1的定义、示例和优选示例也相同。

在又一个特定的实施方式中，式(I-2’)所表示的结构单元可以是以下的结构单元。

[化学式29]

式中，

Ig、L₁、L₂、D、R_A、R_B、r与式(I)相同。

[化学式30]

式中，

Ig、L₁、L₂、D、R_A、R_B、r与式(I)相同。

在又一个特定的实施方式中，式(I-3a’)所表示的结构单元可以是以下的结构单元。

[化学式31]

式中，

Ig、L₁、L₂、D、R_A、R_B、r与式(I)相同。

[化学式32]

式中，

Ig、L₁、L₂、D、R_A、R_B、r与式(I)相同。

在又一个特定的实施方式中，式(I-3b’)所表示的结构单元可以是以下的结构单元。

[化学式33]

式中，

Ig、L₁、L₂、D、R_A、R_B、r与式(I)相同。

在又一个特定的实施方式中，式(I-4a’)所表示的结构单元可以是以下的结构单元。

[化学式34]

式中，

Ig、L₁、L₂、D、R_A、R_B、r与式(I)相同。

在又一个特定的实施方式中，式(I-4b’)所表示的结构单元可以是以下的结构单元。

[化学式35]

式中，

Ig、L₂、D、R_A、R_B、r与式(I)相同，

L_1a和L_1b分别独立地表示键或二价基团，

n1表示3～20的整数。]

在又一个特定的实施方式中，式(I-4c’)所表示的结构单元可以是以下的结构单元。

[化学式36]

式中，

Ig、L₁、D、R_A、R_B、r与式(I)相同，

L₂’表示键或二价基团。或者

[化学式37]

式中，

Ig、L₁、D、R_A、R_B、r与式(I)相同，

L₂’表示键或二价基团。

在优选的另一个实施方式中，上述式中，L₂可以是下述的结构式所表示的二价基团。

[化学式38]

在此，黑圆和白圆表示结合键，

黑圆的结合键与L₂所相邻的羰基键合，

白圆的结合键与D键合，

E表示吸电子基团，

n2为1～4的整数。

吸电子基团及其键合位点、以及n2的定义、示例和优选示例与上述相同。

在更优选的实施方式中，上述式(I)所表示的结构单元可以是上述式(I-1a’)、(I-1b’)、(I-2’)、(I-3a’)、(I-3b’)、(I-4b’)或(I-4c’)或相当于这些式的下位概念的式所表示的结构单元。这样的结构单元在上述式(I)所表示的结构单元中，作为缀合物的性能特别优异(参照实施例)。

在特定的实施方式中，本发明的缀合物或其盐具有难以凝集的所需性质，因此可通过凝集率来特定。更具体而言，本发明的缀合物或其盐的凝集率可以是5％以下。这是由于根据本发明容易避免抗体的凝集。凝集率优选为4.8％以下，更优选为4.6％以下，更进一步优选为4.4％以下，特别优选为4.2％以下、4.0％以下、3.8％以下、3.6％以下、3.4％以下、3.2％以下、3.0％以下、2.8％以下、2.6％以下、2.4％以下、2.2％以下或2.0％以下。抗体的凝集率可通过尺寸排阻色谱法(SEC)-HPLC进行测定(参照实施例和ChemistrySelect，2020，5，8435-8439)。

本发明的缀合物或其盐可通过使下述式(II)所表示的化合物或其盐与包含含有2个重链和2个轻链的免疫球蛋白单元的原料抗体(在此，2个重链包含位点选择性地被生物正交性官能团修饰的赖氨酸残基)反应来制造：

[化学式39]

式中，

L₂和L₃分别表示二价基团，

R₁表示可包含亲水性基团的一价基团，

X表示可具有取代基的二价基团，在此，二价基团中构成连接存在于X的两侧的2个原子的主链部分的碳原子数为1～3个，取代基为可包含亲水性基团的一价基团，

B表示生物正交性官能团，

D表示功能性物质，

R_A表示缬氨酸残基的侧链，

R_B表示瓜氨酸残基或丙氨酸残基的侧链，

n为0或1，在此，在n为1的情况下，X中的取代基可与R₁一起形成可包含亲水性基团的环。

关于上述式(II)中的L₂、L₃、R₁、X、D、R_A、R_B和n的定义、示例和优选示例与关于上述式(I)中的上述内容相同。

B所示的生物正交性官能团的定义、示例和优选示例与上述相同。

在特定的实施方式中，B所示的生物正交性官能团可以是马来酰亚胺残基、硫醇残基、呋喃残基、卤代羰基残基、烯烃残基、炔烃残基、叠氮残基或四嗪残基。B所示的生物正交性官能团可选择为：可与后述的原料抗体中的生物正交性官能团(例如，B’所示的生物正交性官能团)相互反应。

在优选的实施方式中，上述式(II)所表示的化合物或其盐可以是下述式(II-1)、(II-2)、(II-3)或(II-4)所表示的化合物或其盐。这样的化合物或其盐在上述式(II)所表示的化合物或其盐中，作为制造性能优异的缀合物的合成中间体特别有用(参照实施例)。

[化学式40]

式中，

L₂和L₃分别表示二价基团，

R₁表示可包含亲水性基团的一价基团，

D表示功能性物质，

R_A表示缬氨酸残基的侧链，

R_B表示瓜氨酸残基或丙氨酸残基的侧链，

B表示生物正交性官能团。

[化学式41]

式中，

L₂、L₃、D、R_A、R_B和B与式(II-1)相同，

R₂表示可包含亲水性基团的一价基团。

[化学式42]

式中，

L₂、L₃、D、R_A、R_B和B与式(II-1)相同，

R₃表示氢原子、碳原子数为1～6的烷基或包含亲水性基团的一价基团，

R₄表示包含亲水性基团的一价基团。

[化学式43]

式中，

L₂、L₃、D、R_A、R_B和B与式(II-1)相同，

R₁表示氢原子或碳原子数为1～6的烷基，

R₆表示包含亲水性基团的一价基团。

上述式(II-1)、(II-2)、(II-3)或(II-4)中，包含亲水性基团的一价基团和碳原子数为1～6的烷基与上述相同。

在一个实施方式中，上述式(II-3)中，R₃表示氢原子或碳原子数为1～6的烷基，R₄可表示包含亲水性基团的一价基团。

在另一个实施方式中，上述式(II-3)中，R₃和R₄可分别独立地表示包含亲水性基团的一价基团。

在优选的实施方式中，上述式(II)所表示的化合物或其盐可以是上述式(II-1)、(II-2)或(II-3)所表示的化合物或其盐。这样的化合物或其盐在上述式(II)所表示的化合物或其盐中，作为制造性能优异的缀合物的合成中间体特别有用(参照实施例)。

在更优选的实施方式中，上述式(II-1)、(II-2)、(II-3)或(II-4)所表示的化合物或其盐可以是下述式(II-1a’)、(II-1b’)、(II-1c’)、(II-2’)、(II-3a’)、(II-3b’)、(II-4a’)、(II-4b’)或(II-4c’)所表示的化合物或其盐。这样的化合物或其盐在上述式(II)所表示的化合物或其盐中，作为制造性能优异的缀合物的合成中间体特别有用(参照实施例)。

[化学式44]

式中，

L₂、L₃、D、R_A、R_B和B与式(II-1)相同，

L₅表示键或二价基团，

HG表示亲水性基团。

[化学式45]

式中，

L₂、L₃、D、R_A、R_B和B与式(II-1)相同，

2个L₅分别独立地表示键或二价基团，

2个HG分别独立地表示亲水性基团。

[化学式46]

式中，

L₂、D、R_A、R_B和B与式(II-1)相同，

L₅表示键或二价基团，

HG表示亲水性基团，

L_3a和L_3b分别独立地表示键或二价基团，

HG’表示二价亲水性基团。

[化学式47]

式中，

L₂、L₃、D、R_A、R_B和B与式(II-1)相同，

L₅表示键或二价基团，

HG表示亲水性基团。

[化学式48]

式中，

L₂、L₃、D、R_A、R_B和B与式(II-1)相同，

L₅表示键或二价基团，

HG表示亲水性基团。

[化学式49]

式中，

L₂、L₃、D、R_A、R_B和B与式(II-1)相同，

HG表示亲水性基团。

[化学式50]

式中，

L₂、L₃、D、R_A、R_B和B与式(II-1)相同，

L₅表示键或二价基团，

HG表示亲水性基团。

[化学式51]

式中，

L₂、D、R_A、R_B和B与式(II-1)相同，

L₅表示键或二价基团，

HG表示亲水性基团，

L_3a和L_3b分别独立地表示键或二价基团，

HG’表示二价亲水性基团。

[化学式52]

式中，

L₃、D、R_A、R_B和B与式(II-1)相同，

L₅表示键或二价基团，

HG表示亲水性基团，

L₂’表示键或二价基团，

E表示吸电子基团，

n2为1～4的整数。

式(II-1a’)～(II-4c’)中，二价基团和亲水性基团所表示的结构单元的定义、示例和优选示例与上述相同。二价亲水性基团、吸电子基团及其键合位点、以及n2的定义、示例和优选示例与上述相同。

在优选的实施方式中，“-L₅-HG”所表示的结构单元可以是选自以下的结构单元。

(a)-OH

(b)-NH(CH₂CH₂O)₈CH₃

(c)-NHCH₂CH₂COOH

在特定的实施方式中，式(II-1a’)所表示的化合物可以是以下的化合物。

[化学式53]

式中，

L₂、L₃、D、R_A、R_B和B与式(II-1)相同。

[化学式54]

式中，

L₂、L₃、D、R_A、R_B和B与式(II-1)相同。

在另一个特定的实施方式中，式(II-1b’)所表示的化合物可以是以下的化合物。

[化学式55]

式中，

L₂、L₃、D、R_A、R_B和B与式(II-1)相同。

在另一个特定的实施方式中，式(II-1c’)所表示的化合物可以是以下的化合物。

[化学式56]

式中，

L₂、D、R_A、R_B和B与式(II-1)相同，

L_3a和L_3b分别独立地表示键或二价基团，

n1为3～20的整数。

L_3a和L_3b所示的二价基团和n1的定义、示例和优选示例与上述相同(下同)。在另一个特定的实施方式中，式(II-2’)所表示的化合物可以是以下的化合物。

[化学式57]

/>

式中，

L₂、L₃、D、R_A、R_B和B与式(II-1)相同。

[化学式58]

式中，

L₂、L₃、D、R_A、R_B和B与式(II-1)相同。

在又一个特定的实施方式中，式(II-3a’)所表示的化合物可以是以下的化合物。

[化学式59]

式中，

L₂、L₃、D、R_A、R_B和B与式(II-1)相同。

[化学式60]

式中，

L₂、L₃、D、R_A、R_B和B与式(II-1)相同。

在又一个特定的实施方式中，式(II-3b’)所表示的化合物可以是以下的化合物。

[化学式61]

式中，

L₂、L₃、D、R_A、R_B和B与式(II-1)相同。

在又一个特定的实施方式中，式(II-4a’)所表示的化合物可以是以下的化合物。

[化学式62]

式中，

L₂、L₃、D、R_A、R_B和B与式(II-1)相同。

在又一个特定的实施方式中，式(II-4b’)所表示的化合物可以是以下的化合物。

[化学式63]

式中，

L₂、D、R_A、R_B和B与式(II-1)相同，

L_3a和L_3b分别独立地表示键或二价基团，

n1为3～20的整数。

在又一个特定的实施方式中，式(II-4c’)所表示的化合物可以是以下的化合物。

[化学式64]

式中，

L₃、D、R_A、R_B和B与式(II-1)相同，

L₂’表示键或二价基团；或者

[化学式65]

式中，

L₃、D、R_A、R_B和B与式(II-1)相同，

L₂’表示键或二价基团。

在优选的实施方式中，上述式中，L₂可以是下述的结构式所表示的二价基团。

[化学式66]

在此，黑圆和白圆表示结合键，

黑圆的结合键与L₂所相邻的羰基键合，

白圆的结合键与D键合，

E表示吸电子基团，

n2为1～4的整数。

吸电子基团及其键合位点、以及n2的定义、示例和优选示例与上述相同。

在更优选的实施方式中，上述式(II)所表示的化合物或其盐可以是上述式(II-1a’)、(II-1b’)、(II-2’)、(II-3a’)、(II-3b’)、(II-4b’)或(II-4c’)或相当于这些式的下位概念的式所表示的结构单元。这样的化合物或其盐在上述式(II)所表示的化合物或其盐中，作为制造性能优异的缀合物的合成中间体特别有用(参照实施例)。

上述原料抗体包含位点选择性地被生物正交性官能团修饰的赖氨酸残基。原料抗体中的生物正交性官能团可以是马来酰亚胺残基、硫醇残基、呋喃残基、卤代羰基残基、烯烃残基、炔烃残基、叠氮残基或四嗪残基。可选择原料抗体中的生物正交性官能团，使其可与上述的化合物或其盐中的生物正交性官能团(例如，B所示的生物正交性官能团)相互反应。

在特定的实施方式中，上述原料抗体可包含下述式(III)所表示的免疫球蛋白单元：

[化学式67]

式中，

Ig表示包含2个重链和2个轻链的免疫球蛋白单元，且经由2个重链中的赖氨酸残基的侧链中的氨基，与Ig所相邻的羰基位点选择性地形成酰胺键，

L₄为选自-(C(R)₂)_m-、-(O-C(R)₂-C(R)₂)_m-和-(C(R)₂-C(R)₂-O)_m-的二价基团，

R分别独立地是氢原子、碳原子数为1～6的烷基、碳原子数为2～6的烯基或碳原子数为2～6的炔基，

m为0～10的整数，

B’为可与B所表示的生物正交性官能团反应的生物正交性官能团，

每2个重链的所述酰胺键的平均比率r为1.5～2.5。

关于上述式(III)中的Ig、L₄、R、m和r的定义、示例和优选示例与上述相同。

B’所示的生物正交性官能团与关于原料抗体的上述的生物正交性官能团相同。

上述反应可在不引起蛋白的变性/降解(例如，酰胺键的切割)的条件(温和的条件)下适当进行。例如，这样的反应可在适当的反应体系例如缓冲液中、在室温(例如，约15～30℃)下进行。缓冲液的pH例如为5～9，优选为5.5～8.5，更优选为6.0～8.0。缓冲液可包含适当的催化剂。反应时间例如为1分钟～20小时，优选为10分钟～15小时，更优选为20分钟～10小时，更进一步优选为30分钟～8小时。关于这样的反应的细节，例如请参照G.J.L.Bernardes等人，Chem.Rev.，115，2174(2015)；G.J.L.Bernardes等人，Chem.Asian.J.，4，630(2009)；B.G.Davies等人，Nat.Commun.，5，4740(2014)；A.Wagner等人，Bioconjugate.Chem.，25，825(2014)。

缀合物或其盐的生成的确认还取决于其具体的原料和产物的分子量，例如，可通过还原条件下的反相HPLC或质谱分析来进行。缀合物或其盐可通过色谱法(例如，亲和色谱法)等任意方法进行适当纯化。

本发明的缀合物或其盐例如可用作药物或试剂(例如，诊断药、研究用试剂)。

本发明的缀合物或其盐可以以药物组合物的形式提供。这样的药物组合物除了包含本发明的缀合物或其盐以外还可包含药学上可接受的载体。作为药学上可接受的载体，例如可列举：蔗糖、淀粉、甘露醇、山梨糖醇、乳糖、葡萄糖、纤维素、滑石、磷酸钙、碳酸钙等赋形剂；纤维素、甲基纤维素、羟丙基纤维素、聚丙基吡咯烷酮、明胶、阿拉伯树胶、聚乙二醇、蔗糖、淀粉等粘合剂；淀粉、羧甲基纤维素、羟丙基淀粉、碳酸氢钠、磷酸钙、柠檬酸钙等崩解剂；硬脂酸镁、AEROSIL、滑石、十二烷基硫酸钠等润滑剂；柠檬酸、薄荷醇、甘草酸铵盐(glycyrrhizic acid ammonium salt)、甘氨酸、橙粉等芳香剂；苯甲酸钠、亚硫酸氢钠、尼泊金甲酯、尼泊金丙酯等保存剂；柠檬酸、柠檬酸钠、乙酸等稳定剂；甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、硬脂酸铝等助悬剂；表面活性剂等分散剂；水、生理盐水、橙汁等稀释剂；可可脂、聚乙二醇、灯用煤油等基础蜡等，但并不限于这些。本发明的缀合物或其盐还可具有实现稳定性的任意修饰(例如，PEG化)。

适合口服给药的制剂为：将有效量的配体溶解于水、生理盐水、橙汁这样的稀释液而得的液体制剂；以固体或颗粒的形式包含有效量的配体的胶囊剂、香囊剂或片剂；在适当的分散介质中悬浮有有效量的有效成分的悬浮液剂；将溶解有有效量的有效成分的溶液在适当的分散介质中分散、乳化而得的乳剂等。

药物组合物适合胃肠外给药(例如，静脉内注射、皮下注射、肌肉注射、局部注入、腹腔内给药)。作为这样的适合胃肠外给药的药物组合物，有水性和非水性的等渗无菌注射液剂，其中可含有抗氧化剂、缓冲液、抑菌剂、等渗剂等。还可列举：水性和非水性的无菌悬浮液剂，其中可含有助悬剂、增溶剂、增稠剂、稳定剂、防腐剂等。

药物组合物的给药量根据有效成分的种类/活性、疾病的严重程度、成为给药对象的动物种类、给药对象的药物耐受性、体重、年龄等而不同，可适当设定。

3.化合物或其盐和包含它们的试剂

本发明还提供上述式(II-1)、(II-2)或(II-3)所表示的化合物或其盐。这些化合物或其盐的细节与上述相同。

在优选的实施方式中，上述式(II-1)、(II-2)或(II-3)所表示的化合物或其盐可以是上述式(II-1a’)、(II-1b’)、(II-2’)、(II-3a’)或(II-3b’)或相当于这些式的下位概念的式所表示的化合物或其盐。这些化合物或其盐的细节与上述相同。

本发明的化合物或其盐可用作制造性能优异的缀合物的合成中间体(参照实施例)。

本发明还提供抗体的衍生试剂，其包含上述式(II-1)、(II-2)、(II-3)、(II-4b’)或(II-4c’)所表示的化合物或其盐。

由本发明的试剂衍生的原料抗体或其盐和通过原料抗体或其盐的衍生反应得到的缀合物或其盐的细节如上所述。

本发明的试剂可以以进一步包含其它成分的组合物的形式提供。作为这样的其它成分，例如可列举：溶液、稳定剂(例如，抗氧化剂、保存剂)。作为溶液，优选水溶液。作为水溶液，例如可列举：水(例如，蒸馏水、灭菌蒸馏水、纯净水、生理盐水)、缓冲液(例如，磷酸水溶液、Tris-盐酸缓冲液、碳酸-碳酸氢盐缓冲液、硼酸水溶液、甘氨酸-氢氧化钠缓冲液、柠檬酸缓冲液)，优选缓冲液。溶液的pH例如为5.0～9.0，优选为5.5～8.5。本发明的试剂可以以液态或粉末状(例如，冷冻干燥粉末)来提供。

实施例

接下来，给出实施例以更详细地说明本发明，但本发明并不限于以下的实施例。

实施例1：接头-有效载荷模拟物(Linker-payload mimic)的合成

(1-1)接头-有效载荷模拟物(1)的合成

接头-有效载荷模拟物(1)如下进行合成。

[化学式68]

(1-1-1)芘(2)的合成

[化学式69]

将Fmoc-Val-Cit-PAB-PNP(CAS No：863971-53-2，121.2mg，0.15mmol)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)，加入已知(WO2018218004A1记载)的肌氨酸-芘(59.2mg，0.196mmol)、N,N-二异丙基乙胺(39μL，0.227mmol)、4-二甲氨基吡啶(3.7mg，0.03mmol)，在室温下搅拌2小时后，加入二乙胺(2mL，18.95mmol)，在室温下搅拌1.5小时。减压下浓缩后，通过反相制备色谱法进行纯化。回收包含产物的馏分，通过减压浓缩去除乙腈，进行冷冻干燥，由此得到了上述芘(2)(73.7mg，0.104mmol)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.21(s，1H)，8.68(s，1H)，8.43-7.93(m，12H)，7.60(t，J＝7.1Hz，2H)，7.31(m，2H)，6.04(s，1H)，5.48(s，2H)，5.02(d，J＝16.1Hz，4H)，4.54(s，1H)，3.96(s，2H)，3.66(s，2H)，2.92(d，J＝6.1Hz，3H)，2.08(q，J＝6.6Hz，1H)，1.80-1.56(m，2H)，1.46(s，2H)，1.21-1.13(m，1H)，0.94(dt，J＝6.8，3.0Hz，6H).

MS(ESI)m/z：708.80[M+H]⁺

(1-1-2)芘(3)的合成

[化学式70]

将Fmoc-Glu(OtBu)-OH·H₂O(11.1mg，0.025mmol)溶解于二甲基甲酰胺(1mL)，加入芘(2)(17.3mg，0.024mmol)、1-羟基-7-氮杂苯并三唑(5.1mg，0.037mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐(7.3mg，0.038mmol)、三乙胺(7.1μL，0.51mmol)，在室温下搅拌2.5小时后，加入二乙胺(0.2mL，1.91mmol)，在室温下搅拌1.5小时。减压下浓缩后，通过反相制备色谱法进行纯化。回收包含产物的馏分，通过减压浓缩去除乙腈，进行冷冻干燥，由此得到了芘(3)(15.6mg，0.017mmol)。

¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δ10.87(s，1H)，8.68(m，1H)，8.41-7.97(m，13H)，7.60-7.58(m，2H)，7.30(m，2H)，6.00(t，J＝6.2Hz，1H)，5.45(s，2H)，5.05-4.99(m，4H)，4.46(m，1H)，4.26(m，1H)，3.96(s，2H)，3.88(m，1H)，3.07(m，1H)，2.96(m，1H)，2.93(d，J＝5.6Hz，3H)，2.68(t，J＝1.8Hz，1H)，2.34-2.30(m，3H)，2.03(m，1H)，1.93-1.90(m，2H)，1.30(s，9H)，1.15(s，1H)，0.92-0.86(m，6H).

MS(ESI)m/z：893.45[M+H]⁺

(1-1-3)芘(4)的合成

[化学式71]

将芘(3)(15.6mg，0.017mmol)溶解于二甲基甲酰胺(1.5mL)，加入6-马来酰亚胺基己酸(3.7mg，0.018mmol)、1-羟基-7-氮杂苯并三唑(3.5mg，0.025mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐(4.8mg，0.025mmol)、三乙胺(4.8μL，0.34mmol)，在室温下搅拌3小时后，加入6-马来酰亚胺基己酸(1.8mg，0.009mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐(2.3mg，0.012mmol)、三乙胺(2.4μL，0.17mmol)，在室温下搅拌1.5小时。之后，加入4-二甲氨基吡啶(0.5mg，0.004mmol)，进一步搅拌2.5小时。减压下浓缩后，通过柱色谱法(二氯甲烷：甲醇＝9：1)进行纯化。回收包含产物的馏分，通过减压浓缩，得到了上述芘(4)(8.0mg，0.007mmol)。

MS(ESI)m/z：1086.60[M+H]⁺

(1-1-4)接头-有效载荷模拟物(1)的合成

[化学式72]

将芘(4)(9.7mg，0.0089mmol)溶解于1,4-二烷(1mL)、氯化氢/1,4-二/>烷溶液(1mL)，在冰水浴中搅拌2小时。加入二甲基甲酰胺(1mL)，上升至室温后，减压下浓缩。之后，通过反相制备色谱法进行纯化。回收包含产物的馏分，通过减压浓缩去除乙腈，进行冷冻干燥，由此得到了接头-有效载荷模拟物(1)(2.0mg，0.002mmol)。

MS(ESI)m/z：1030.50[M+H]⁺

(1-2)接头-有效载荷模拟物(5)的合成

接头-有效载荷模拟物(5)如下进行合成。

[化学式73]

(1-2-1)马来酰亚胺(6)的合成

[化学式74]

将Fmoc-Glu-OtBu(213.0mg，0.50mmol)溶解于二氯甲烷(2mL)，加入N-(5-氨基戊基)马来酰亚胺盐酸盐(108.7mg，0.48mmol)、1-羟基苯并三唑(101.7mg，0.753mmol)、1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(143.6mg，0.749mmol)、三乙胺(155μL，1.12mmol)、4-二甲氨基吡啶(7.2mg，0.0589mmol)，在室温下搅拌2小时。减压下浓缩后，通过柱色谱法(己烷：乙酸乙酯＝4：1)进行纯化。回收包含产物的馏分，通过减压浓缩，得到了上述马来酰亚胺(6)(254.1mg，0.431mmol)。

¹H NMR(400MHz，甲醇-d4)δ7.82(d，J＝7.6Hz，3H)，7.70(t，J＝6.7Hz，2H)，7.41(t，J＝7.5Hz，2H)，7.37-7.29(m，2H)，6.79(s，2H)，4.43(dd，J＝10.4，6.8Hz，1H)，4.34(dd，J＝10.4，7.0Hz，1H)，4.24(t，J＝6.9Hz，1H)，4.18-4.00(m，1H)，3.50(t，J＝7.1Hz，2H)，3.16(td，J＝6.9，2.0Hz，2H)，2.28(t，J＝7.5Hz，2H)，2.24-2.08(m，1H)，1.99-1.83(m，1H)，1.48(s，13H)，1.28(dt，J＝17.1，7.1Hz，2H).

MS(ESI)m/z：590.25[M+H]⁺

(1-2-2)马来酰亚胺(7)的合成

[化学式75]

将马来酰亚胺(6)(253.1mg，0.41mmol)溶解于二氯甲烷(2mL)，加入三氟乙酸(2mL)，在室温下搅拌2小时。减压下浓缩后，加入1M盐酸(2mL)，在室温下搅拌3分钟，减压浓缩后，通过冷冻干燥，得到了上述马来酰亚胺(7)(244.6mg，0.458mmol)。

¹H NMR(400MHz，甲醇-d4)δ7.82(d，J＝7.5Hz，2H)，7.7(dt，J＝9.3，4.7Hz，2H)，7.41(t，J＝7.5Hz，2H)，7.33(t，J＝7.4Hz，2H)，6.79(s，2H)，4.49-4.30(m，2H)，4.30-4.11(m，2H)，3.50(t，J＝7.0Hz，2H)，3.16(t，J＝7.2Hz，2H)，2.36-2.09(m，3H)，2.09-1.86(m，1H)，1.56(dt，J＝25.5，7.5Hz，5H)，1.39-1.23(m，2H).

MS(ESI)m/z：534.20[M+H]⁺

(1-2-3)芘(8)的合成

[化学式76]

将马来酰亚胺(7)(31.5mg，0.052mmol)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)，加入实施例1-1-1中合成的芘(2)(35.5mg，0.50mmol)、1-羟基苯并三唑(10.1mg，0.0747mmol)、1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(15.0mg，0.0782mmol)、三乙胺(14μL，0.10mmol)、4-二甲氨基吡啶(0.7mg，0.00573mmol)，在室温下搅拌2小时后，通过柱色谱法(己烷：乙酸乙酯＝15：85)进行纯化。回收包含产物的馏分，通过减压浓缩，得到了上述芘(8)(7.4mg，6.05nmol)。

MS(ESI)m/z：1223.65[M+H]⁺，612.65[M+2H]²⁺

(1-2-4)接头-有效载荷模拟物(5)的合成

[化学式77]

将芘(8)(6.3mg，0.0051mmol)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(0.6mL)，加入二环己胺(0.12mL，0.6mmol)，在室温下搅拌3小时后，加入琥珀酸酐(1.0mg，0.0095mmol)，在室温下搅拌1.5小时后，通过反相制备色谱法进行纯化。回收包含产物的馏分，通过减压浓缩去除乙腈，进行冷冻干燥，由此得到了接头-有效载荷模拟物(5)(1.10mg，0.991nmol)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.01(s，1H)，8.59(d，J＝6.2Hz，1H)，8.36-7.87(m，10H)，7.67(t，J＝8.7Hz，2H)，7.22(dd，J＝26.1，8.1Hz，3H)，6.91(s，2H)，5.92(s，1H)，4.94(d，J＝18.4Hz，4H)，4.33(d，J＝7.5Hz，1H)，3.88(s，2H)，3.10(s，3H)，3.05-2.78(m，7H)，2.69(d，J＝22.3Hz，1H)，2.38-2.22(m，3H)，2.15-1.89(m，4H)，1.81(d，J＝14.3Hz，1H)，1.72-1.50(m，3H)，1.48-1.22(m，6H)，1.14(dd，J＝35.5，8.5Hz，4H)，0.92(s，1H)，0.85-0.68(m，6H).

MS(ESI)m/z：1101.55[M+H]⁺

(1-3)接头-有效载荷模拟物(9)的合成

接头-有效载荷模拟物(9)如下进行合成。

[化学式78]

(1-3-1)马来酰亚胺(10)的合成

[化学式79]

将6-马来酰亚胺基己酸(300mg，1.420mmol)溶解于二甲基甲酰胺(2mL)，加入1-[双(二甲氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐(647.8mg，1.704mmol)、亚氨基二乙酸(189.0mg，1.420mmol)、N,N-二异丙基乙胺(0.29mL，1.704mmol)、4-二甲氨基吡啶(34.7mg，0.284mmol)，搅拌1小时。减压下浓缩后，通过反相制备色谱法进行纯化。回收包含产物的馏分，通过减压浓缩去除乙腈，进行冷冻干燥，由此得到了马来酰亚胺(10)(65.9mg，0.202mmol)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ6.79(s，2H)，4.25(s，2H)，4.11(s，2H)，3.49(t，J＝7.0Hz，2H)，2.35(t，J＝7.4Hz，2H)，1.16(m，4H)，1.33(m，2H).

MS(ESI)m/z：327.00[M+H]⁺

(1-3-2)接头-有效载荷模拟物(9)的合成

[化学式80]

将马来酰亚胺(10)(46.2mg，0.142mmol)溶解于二甲基甲酰胺(0.3mL)，加入1-[双(二甲氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐(54.0mg，0.142mmol)，搅拌1小时后，加入实施例1-1-1中合成的芘(2)(50.1mg，0.71mmol)、N,N-二异丙基乙胺(0.025mL，0.142mmol)的二甲基甲酰胺溶液(0.3mL)，进一步搅拌3小时。通过反相制备色谱法进行纯化后，回收包含产物的馏分，通过减压浓缩去除乙腈，进行冷冻干燥，由此得到了接头-有效载荷模拟物(9)(24.4mg，0.024mmol)。

MS(ESI)m/z：1016.50[M+H]⁺

实施例2：接头-有效载荷的合成

(2-1)接头-有效载荷(11)的合成

接头-有效载荷(11)依据实施例1-1，使用作为已知物的Val-Cit-PABA-MMAE(Organic&Biomolecular Chemistry，2016，14，9501-9518)进行合成。

[化学式81]

MS(ESI)m/z：1445.8[M+H]⁺

(2-2)接头-有效载荷(12)的合成

接头-有效载荷(12)如下进行合成。

[化学式82]

[化学式83]

将Fmoc-Glu(OMe)-H(56mg，0.15mmol)溶解于二甲基甲酰胺(1mL)，加入1-[双(二甲氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐(56mg，0.15mmol)、N,N-二异丙基乙胺(0.046mL，0.27mmol)，在室温下搅拌1分钟。向反应混合物中加入作为已知物的Val-Cit-PABA-MMAE(Organic&Biomolecular Chemistry，2016，14，9501-9518)(150mg，0.13mmol)的DMF溶液(1mL)，进一步搅拌30分钟。反应完成后，用1：1＝水：乙腈溶液(包含0.05v/v％甲酸)稀释反应溶液，通过反相制备色谱法进行纯化。回收包含产物的馏分，通过减压浓缩去除乙腈，进行冷冻干燥，由此得到了化合物14(180mg，0.12mmol)。

MS(ESI)m/z：1488.2[M+H]⁺

[化学式84]

将氢氧化锂(8.7mg，0.36mmol)和化合物14(180mg，0.12mmol)溶解于1：1＝水：THF(8mL)，在室温下搅拌15分钟。反应完成后，向反应溶液中小心地加入1M盐酸水溶液，将pH调节至5-6。将其通过反相制备色谱法进行纯化。回收包含产物的馏分，通过减压浓缩去除乙腈，进行冷冻干燥，由此得到了化合物15(100mg，0.068mmol)。

MS(ESI)m/z：1474.4[M+H]⁺

[化学式85]

将化合物15(100mg，0.068mmol)溶解于二甲基甲酰胺(2mL)，加入1-[双(二甲氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐(28mg，0.075mmol)、N,N-二异丙基乙胺(0.035mL，0.20mmol)，在室温下搅拌1分钟。向反应混合物中加入N-(5-氨基戊基)马来酰亚胺盐酸盐(30mg，0.10mmol)，进一步搅拌5分钟。反应完成后，用1：1＝水：乙腈溶液(包含0.05v/v％甲酸)稀释反应溶液，通过反相制备色谱法进行纯化。回收包含产物的馏分，通过减压浓缩去除乙腈，进行冷冻干燥，由此得到了化合物16(83mg，0.051mmol)。

MS(ESI)m/z：1638.6[M+H]⁺

[化学式86]

将化合物16(21mg，0.013mmol)溶解于二甲基甲酰胺(1mL)，加入二氮杂双环十一碳烯(0.0042mL，0.028mmol)，在室温下搅拌2分钟。反应完成后，向反应溶液中小心地加入1M盐酸水溶液，将pH调节至5-6。用1：1＝水：乙腈溶液(包含0.05v/v％甲酸)稀释反应溶液，通过反相制备色谱法进行纯化。回收包含产物的馏分，通过减压浓缩去除乙腈，进行冷冻干燥，由此得到了化合物17(10mg，0.0071mmol)。

MS(ESI)m/z：1416.5[M+H]⁺

[化学式87]

在氩气气氛下，将化合物(17)(21mg，0.015mmol)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)，加入4-甲基吗啉(0.082mL，0.074mmol)、琥珀酸酐(7.4mg，0.074mmol)，在室温下搅拌1小时后，用1：1＝水：乙腈溶液(包含0.05v/v％甲酸)稀释反应溶液，通过反相制备色谱法进行纯化。回收包含产物的馏分，通过减压浓缩去除乙腈，进行冷冻干燥，由此得到了接头-有效载荷(12)(17.5mg，0.012nmol)。

¹H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ12.06(br.s，1H)，9.94-10.05(m，1H)，8.26-8.33(m，0.5H)，8.13-8.20(m，1H)，8.10(d，J＝7.8Hz，2H)，8.03-8.07(m，0.5H)，7.86-7.90(m，0.5H)，7.69-7.77(m，2H)，7.60-7.64(m，0.5H)，7.55-7.60(m，2H)，7.29-7.35(m，3H)，7.23-7.29(m，3H)，7.17(s，1H)，6.99(s，2H)，5.94-6.02(m，1H)，5.39-5.44(m，2H)，5.34(d，J＝4.9Hz，1H)，4.94-5.12(m，2H)，4.70-4.77(m，1H)，4.58-4.68(m，1H)，4.49-4.52(m，1H)，4.40-4.45(m，1H)，4.33-4.40(m，1H)，4.21-4.29(m，2H)，4.18-4.21(m，1H)，3.92-4.02(m，2H)，3.76-3.80(m，1H)，3.53-3.61(m，1H)，3.41-3.50(m，1H)，3.36(t，J＝7.1Hz，2H)，3.29-3.31(m，1H)，3.21-3.26(m，4H)，3.20(s，2H)，3.17(s，2H)，3.11(s，2H)，2.90-3.07(m，5H)，2.82-2.89(m，3H)，2.31-2.45(m，5H)，2.22-2.30(m，1H)，2.02-2.17(m，3H)，1.97-2.01(m，2H)，1.83-1.91(m，1H)，1.75-1.82(m，1H)，1.65-1.75(m，2H)，1.50-1.62(m，2H)，1.42-1.50(m，4H)，1.26-1.39(m，3H)，1.13-1.22(m，2H)，0.96-1.06(m，6H)，0.72-0.89(m，24H).

MS(ESI)m/z：1516.4[M+H]⁺

(2-3)接头-有效载荷(18)的合成

接头-有效载荷(18)如下进行合成。

[化学式88]

[化学式89]

将接头-有效载荷(12)(10mg，0.0066mmol)溶解于二甲基甲酰胺(1mL)，加入1-[双(二甲氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐(2.8mg，0.0073mmol)、N,N-二异丙基乙胺(0.0023mL，0.013mmol)，在室温下搅拌1分钟。向反应混合物中加入甲氧基-PEG8-胺(3.8mg，0.0099mmol)，进一步搅拌2分钟。反应完成后，用1：1＝水：乙腈溶液(包含0.05v/v％甲酸)稀释反应溶液，通过反相制备色谱法进行纯化。回收包含产物的馏分，通过减压浓缩去除乙腈，进行冷冻干燥，由此得到了接头-有效载荷(18)(12.1mg，0.064mmol)。

¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)δ9.89-10.00(m，1H)，8.26-8.35(m，1H)，8.10-8.15(m，1H)，8.03-8.10(m，1H)，7.92-7.96(m，1H)，7.86-7.92(m，0.5H)，7.71-7.78(m，2H)，7.60-7.65(m，0.5H)，7.53-7.60(m，2H)，7.23-7.36(m，6H)，7.13-7.20(m，1H)，6.99(s，2H)，5.93-6.00(m，1H)，5.40-5.43(m，2H)，5.32-5.36(m，1H)，4.92-5.14(m，2H)，4.69-4.78(m，1H)，4.58-4.68(m，1H)，4.45-4.51(m，1H)，4.39-4.45(m，1H)，4.31-4.39(m，1H)，4.24-4.30(m，1H)，4.19-4.24(m，1H)，4.13-4.18(m，1H)，3.91-4.05(m，2H)，3.53-3.61(m，1H)，3.46-3.53(m，36H)，3.40-3.44(m，3H)，3.33-3.40(m，3H)，3.21-3.26(m，6H)，3.14-3.21(m，4H)，3.11(s，1H)，2.91-3.06(m，4H)，2.82-2.90(m，2H)，2.22-2.44(m，6H)，2.05-2.16(m，3H)，1.94-2.04(m，2H)，1.84-1.93(m，1H)，1.75-1.83(m，1H)，1.63-1.74(m，2H)，1.50-1.62(m，2H)，1.40-1.50(m，4H)，1.31-1.40(m，4H)，1.13-1.21(m，2H)，0.95-1.07(m，6H)，0.71-0.90(m，24H).

MS(ESI)m/z：1882.6[M+H]⁺

(2-4)接头-有效载荷(19)的合成

接头-有效载荷(19)如下进行合成。

[化学式90]

[化学式91]

将马来酰亚胺(10)(8mg，0.0245mmol)溶解于二甲基甲酰胺(0.2mL)，加入1-[双(二甲氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐(4.7mg，0.0123mmol)、N,N-二异丙基乙胺(0.0085mL，0.0491mmol)，在室温下搅拌5分钟。向反应混合物中加入作为已知物的Val-Cit-PABA-MMAE(Organic&Biomolecular Chemistry，2016，14，9501-9518)(13.8mg，0.0123mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.0086mL，0.0491mmol)，进一步搅拌2小时。反应完成后，向反应溶液中小心地加入1M盐酸水溶液，将pH调节至5-6。用1：1＝水：乙腈溶液(包含0.05v/v％甲酸)稀释反应溶液，通过反相制备色谱法进行纯化。回收包含产物的馏分，通过减压浓缩去除乙腈，进行冷冻干燥，由此得到了接头-有效载荷(19)(12.1mg，0.064mmol)。

1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ9.98(brs，1H)，9.77(brs，1H)，8.40-8.27(m，1H)，8.21(d，J＝7.3Hz，1H)，8.10-8.02(m，1H)，7.88(d，J＝8.8Hz，1H)，7.63-7.57(m，3H)，7.34-7.24(m，6H)，7.21-7.13(m，1H)，6.99(d，J＝2.4Hz，2H)，6.04-5.96(m，1H)，5.46-5.40(m，2H)，5.13-4.93(m，4H)，4.79-4.60(m，2H)，4.53-4.35(m，3H)，4.34-4.23(m，3H)，4.21-3.88(m，4H)，3.78(dd，J＝9.5，2.2Hz，1H)，3.65-3.53(m，1H)，3.51-3.43(m，2H)，3.40-3.34(m，2H)，3.28-3.16(m，8H)，3.14-3.10(m，2H)，3.08-2.81(m，5H)，2.41-1.90(m，8H)，1.87-1.64(m，3H)，1.64-1.41(m，6H)，1.40-1.13(m，5H)，1.11-0.95(m，6H)，0.95-0.65(m，24H).

MS(ESI)m/z：1431.2[M+H]⁺

(2-5)接头-有效载荷(20)的合成

接头-有效载荷(20)如下进行合成。

[化学式92]

[化学式93]

将接头-有效载荷(19)(14.6mg，0.0102mmol)溶解于二甲基甲酰胺(0.12mL)，加入1-[双(二甲氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐(4.7mg，0.0122mmol)、N,N-二异丙基乙胺(0.0035mL，0.0204mmol)，在室温下搅拌5分钟。向反应混合物中加入甲氧基-PEG8-胺(4.7mg，0.0122mmol)、N,N-二异丙基乙胺(0.0035mL，0.0204mmol)，进一步搅拌10分钟。反应完成后，向反应溶液中小心地加入1M盐酸水溶液，将pH调节至5-6。用1：1＝水：乙腈溶液(包含0.05v/v％甲酸)稀释反应溶液，通过反相制备色谱法进行纯化。回收包含产物的馏分，通过减压浓缩去除乙腈，进行冷冻干燥，由此得到了接头-有效载荷(20)(12.9mg，0.072mmol)。

MS(ESI)m/z：1796.9[M+H]⁺

(2-6)接头-有效载荷(21)的合成

接头-有效载荷(21)如下进行合成。

[化学式94]

接头-有效载荷(21)依据下述的方案进行合成。

[化学式95]

接头-有效载荷(21)的MS分析结果如下。

MS(ESI)m/z：1544.8[M+H]⁺

(2-7)接头-有效载荷(32)的合成

接头-有效载荷(32)如下进行合成。

[化学式96]

[化学式97]

将化合物(17)(15mg，0.011mmol)溶解于丙烯酸(1.5mL)，在40℃下搅拌24小时后，用1：1＝水：乙腈溶液(包含0.05v/v％甲酸)稀释反应溶液，通过反相制备色谱法进行纯化。回收包含产物的馏分，通过减压浓缩去除乙腈，进行冷冻干燥，由此得到了接头-有效载荷(32)(2.5mg，0.0016mmol)。

¹H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ10.58(brs，2H)，9.59(brs，1H)，8.99-9.07(m，1H)，7.98-8.04(m，1H)，7.85-7.97(m，2H)，7.72-7.78(m，1H)，7.59-7.68(m，2H)，7.22-7.36(m，8H)，7.11-7.20(m，1H)，6.99(s，2H)，6.80-6.93(m，1H)，5.49-5.89(m，4H)，4.91-5.14(m，2H)，4.69-4.78(m，1H)，4.57-4.67(m，1H)，4.35-4.53(m，3H)，4.18-4.31(m，2H)，3.89-4.08(m，2H)，3.74-3.81(m，1H)，3.51-3.66(m，1H)，3.34-3.39(m，3H)，3.25-3.11(m，10H)，2.91-3.07(m，5H)，2.84-2.90(m，3H)，2.65-2.83(m，4H)，2.37-2.43(m，5H)，2.22-2.33(m，1H)，2.09-2.20(m，4H)，1.96-2.09(m，2H)，1.83-1.96(m，2H)，1.69-1.83(m，2H)，1.59-1.68(m，1H)，1.53-1.58(m，1H)，1.42-1.52(m，4H)，1.26-1.40(m，3H)，1.14-1.25(m，2H)，0.94-1.06(m，6H)，0.71-0.89(m，24H).

MS(ESI)m/z：1560.3[M+H]⁺

(2-8)接头-有效载荷(33)的合成

接头-有效载荷(33)如下进行合成。

[化学式98]

[化学式99]

将亚氨基二乙酸(212mg，1.59mmol)和碳酸氢钠(534mg，6.36mmol)溶解于水(4mL)。在发泡结束后，加入THF(2mL)和Boc2O(416mg，1.91mmol)，在室温下搅拌72小时。通过减压浓缩去除THF后，用1N盐酸将反应溶液调节至约pH1。用乙酸乙酯(15mLx3)萃取水层，用硫酸镁干燥有机层后，浓缩经过滤的有机层，由此得到了化合物(34)(205mg，0.877mmol)。

MS(ESI)m/z：256.0[M+Na]⁺

[化学式100]

将化合物(34)(14.6mg，0.0625mmol)、HATU(26.2mg，0.0689mmol)、DIPEA(21.8μL，0.125mmol)溶解于DMF(1.5mL)，在室温下搅拌5分钟。向上述反应溶液中加入将H2N-PEG8-OMe(52.7mg，0.138mmol)和DIPEA(21.8μL，0.125mmol)溶解于DMF(1mL)而得的溶液，在室温下搅拌1小时。向反应溶液中进一步加入HATU(26.2mg，0.0689mmol)和DIPEA(21.8μL，0.125mmol)，在室温下搅拌2小时。将反应溶液减压浓缩，用1：1＝水：乙腈溶液稀释，通过反相制备色谱法进行纯化。回收包含产物的馏分，通过减压浓缩去除乙腈，进行冷冻干燥，由此得到了化合物(35)(33.2mg，0.0344mmol)。

MS(ESI)m/z：964.4[M+H]⁺

[化学式101]

/>

将化合物(35)(33.2mg，0.0344mmol)溶解于二氯甲烷(2mL)后，加入三氟乙酸(1mL)，在室温下搅拌一夜。将反应溶液减压浓缩，得到了化合物(36)(33.6mg，定量)。

MS(ESI)m/z：864.2[M+H]⁺

[化学式102]

将接头-有效载荷(19)(6.6mg，0.0046mmol)、HATU(4.4mg，0.0046mmol)、DIPEA(1.6μL，0.0092mmol)溶解于DMF(0.15ml)，在室温下搅拌5分钟。向上述反应溶液中加入将化合物(36)(5.0mg，0.0058mmol)和DIPEA(1.6μL，0.0058mmol)溶解于DMF(0.15mL)而得的溶液，在室温下搅拌3小时。用1：1＝水：乙腈溶液稀释反应溶液，通过反相制备色谱法进行纯化。回收包含产物的馏分，通过减压浓缩去除乙腈，进行冷冻干燥，由此得到了接头-有效载荷(33)(2.0mg，0.00088mmol)。

MS(ESI)m/z：2277.8[M+H]⁺

(2-9)接头-有效载荷(37)的合成

接头-有效载荷(37)如下进行合成。

[化学式103]

[化学式104]

将NHS-PEG9-NHS(164mg，0.231mmol)溶解于DMF(1mL)。在另一个烧瓶中将化合物(38)(35.5mg，0.112mmol)溶解于DMF(1.5mL)，将该溶液加入到上述的NHS-PEG9-NHS溶液中。在室温下将反应溶液搅拌30分钟，用水(8mL)稀释，通过反相制备色谱法进行纯化。回收包含产物的馏分，通过减压浓缩去除乙腈，进行冷冻干燥，由此得到了化合物(39)(56.8mg，0.0623mmol)。

MS(ESI)m/z：912.2[M+H]⁺

[化学式105]

将Fmoc-亚氨基二乙酸(13.6mg，0.0382mmol)、HATU(14.5mg，0.0382mmol)、DIPEA(10.0μL，0.057mmol)溶解于DMF(0.75mL)，在室温下搅拌5分钟。在另一个烧瓶中将H2N-VC-PAB-MMAE(42.9mg，0.0382mmol)和DIPEA(10.0μL，0.057mmol)溶解于DMF(0.75mL)，将该所得溶液加入到上述的Fmoc-亚氨基二乙酸溶液中，在室温下搅拌18小时。用1：1＝水：乙腈溶液稀释反应溶液，通过反相制备色谱法进行纯化。回收包含产物的馏分，通过减压浓缩去除乙腈，进行冷冻干燥，由此得到了化合物(40)(21.2mg，0.0143mmol)。

MS(ESI)m/z：1460.4[M+H]⁺

[化学式106]

将化合物(40)(100mg，0.0695mmol)溶解于DMF(2.5mL)，加入DBU(31μL，0.205mmol)，在室温下搅拌5分钟。用1：1＝水：乙腈溶液(包含0.05％甲酸)稀释反应溶液，通过反相制备色谱法进行纯化。回收包含产物的馏分，通过减压浓缩去除乙腈，进行冷冻干燥，由此得到了化合物(41)(86.6mg，0.0674mmol)。

MS(ESI)m/z：1238.4[M+H]⁺

[化学式107]

将化合物(39)(22.9mg，0.0185mmol)和化合物(41)(33.7mg，0.0178mmol)溶解于1：1＝水：乙腈溶液(2mL)，加入碳酸氢钠(1.9mg，0.0222mmol)，在室温下搅拌23小时。用1：1＝水：乙腈溶液稀释反应溶液，通过反相制备色谱法进行纯化。回收包含产物的馏分，通过减压浓缩去除乙腈，进行冷冻干燥，由此得到了接头-有效载荷(37)(7.3mg，0.0036mmol)。

MS(ESI)m/z：2035.5[M+H]⁺

(2-10)接头-有效载荷(42)的合成

接头-有效载荷(42)如下进行合成。

[化学式108]

[化学式109]

将化合物(39)(23.4mg，0.0257mmol)、EVC-PAB-MMAE(21.4mg，0.0171mmol)溶解于1：1＝水：乙腈溶液(3mL)，加入碳酸氢钠(10mg，0.119mmol)，在室温下搅拌1小时。用1N盐酸将反应溶液调节至约pH4，用1：1＝水：乙腈溶液稀释，通过反相制备色谱法进行纯化。回收包含产物的馏分，通过减压浓缩去除乙腈，进行冷冻干燥，由此得到了接头-有效载荷(42)(16.4mg，0.008mmol)。

MS(ESI)m/z：2049.8[M+H]⁺

(2-11)接头-有效载荷(43)的合成

接头-有效载荷(43)如下进行合成。

[化学式110]

[化学式111]

将接头-有效载荷(21)(15.6mg，0.074mmol)、HATU(5.4mg，0.014mmol)、DIPEA(4.5μL，0.026mmol)溶解于DMF(0.5mL)，在室温下搅拌1分钟。向反应溶液中加入m-PEG8-胺(BroadPharm#BP-21111)(7.5mg，0.0194mmol)，在室温下搅拌20分钟。用1：1＝水：乙腈溶液(包含0.05％甲酸)稀释反应溶液，通过反相制备色谱法进行纯化。回收包含产物的馏分，通过减压浓缩去除乙腈，进行冷冻干燥，由此得到了接头-有效载荷(43)(5.2mg，0.0027mmol)。

MS(ESI)m/z：955.2[M+2H]²⁺

(1-4)接头-有效载荷模拟物(44)的合成

接头-有效载荷模拟物(44)如下进行合成。

[化学式112]

[化学式113]

将化合物(45)(20.2mg，0.0293mmol)、HATU(13.4mg，0.0352mmol)、DIPEA(6.0μL，0.035mmol)溶解于DMF(0.3mL)，在室温下搅拌1分钟。加入化合物(46)(5.4mg，0.035mmol)，在室温下搅拌17小时。用1：1＝水：乙腈溶液稀释反应溶液，通过反相制备色谱法进行纯化。回收包含产物的馏分，通过减压浓缩去除乙腈，进行冷冻干燥，由此得到了化合物(47)(23.9mg，定量)。

MS(ESI)m/z：817.4[M+H]⁺

[化学式114]

将化合物(47)(23.9mg，0.0293mmol)溶解于DMF(0.45mL)后，加入碳酸双(4-硝基苯基)酯(27.3mg，0.0879mmol)、DIPEA(11.4μL，0.0657mmol)，在室温下搅拌3小时。向反应溶液中加入肌氨酸-芘(44.3mg，0.147mmol)、HOBt(5.9mg，0.044mmol)、DIPEA(39.4μL，0.227mmol)，在室温下搅拌20小时。向反应溶液中加入二乙胺(93.0μL，0.882mmol)，在室温下搅拌3小时，进行减压浓缩。用1：1＝水：乙腈溶液稀释反应溶液，通过反相制备色谱法进行纯化。回收包含产物的馏分，通过减压浓缩去除乙腈，进行冷冻干燥，由此得到了化合物(48)(1.9mg，0.0021mmol)。

MS(ESI)m/z：923.5[M+H]⁺

[化学式115]

将化合物(48)(1.9mg，0.0021mmol)溶解于DMF(0.4mL)后，加入4-马来酰亚胺基己酸(0.7mg，0.003mmol)、HOAt(0.4mg，0.003mmol)、WSC·HCl(0.9mg，0.005mmol)、三乙胺(0.89μL，0.0063mmol)、DMAP(0.1mg，0.001mmol)，在室温下搅拌5小时。用1：1＝水：乙腈溶液稀释反应溶液，通过反相制备色谱法进行纯化。回收包含产物的馏分，通过减压浓缩去除乙腈，进行冷冻干燥，由此得到了化合物(49)(0.3mg，0.0003mmol)。

MS(ESI)m/z：1116.5[M+H]⁺

[化学式116]

将化合物(49)(0.3mg，0.0003mmol)溶解于1,4-二烷(0.3mL)后，加入4N氯化氢二/>烷溶液(315μL，1.26mmol)，在室温下搅拌5小时。将反应溶液冷却至0℃，加入DIPEA(238μL，1.39mmol)后，在室温下搅拌1分钟。将反应溶液浓缩后，用1：1＝水：乙腈溶液稀释，通过反相制备色谱法进行纯化。回收包含产物的馏分，通过减压浓缩去除乙腈，进行冷冻干燥，由此得到了接头-有效载荷(44)(0.3mg，0.0003mmol)。

MS(ESI)m/z：1060.5[M+H]⁺

(1-5)接头-有效载荷模拟物(50)的合成

接头-有效载荷模拟物(50)如下进行合成。

[化学式117]

[化学式118]

将化合物(45)(24.8mg，0.0367mmol)、HATU(16.7mg，0.0440mmol)、三甲基吡啶(5.8μL，0.044mmol)悬浮于乙腈(0.5mL)中，在室温下搅拌1分钟。加入化合物(51)(6.2mg，0.044mmol)，在室温下搅拌24小时。用1：1＝水：乙腈溶液稀释反应溶液，通过反相制备色谱法进行纯化。回收包含产物的馏分，通过减压浓缩去除乙腈，进行冷冻干燥，由此得到了化合物(52)(11.4mg，0.0142mmol)。

MS(ESI)m/z：805.4[M+H]⁺

[化学式119]

将化合物(52)(11.4mg，0.0142mmol)溶解于DMF(0.3mL)后，加入碳酸双(4-硝基苯基)酯(12.6mg，0.0426mmol)、DIPEA(5.4μL，0.0318mmol)，在室温下搅拌4小时。

进一步加入碳酸双(4-硝基苯基)酯(6.5mg，0.0213mmol)、DIPEA(2.7μL，0.016mmol)，在室温下搅拌3小时。向反应溶液中加入肌氨酸-芘(42.9mg，0.142mmol)、HOBt(2.9mg，0.021mmol)、DIPEA(38.4μL，0.226mmol)，在室温下搅拌16小时。向反应溶液中加入二乙胺(29.7μL，0.284mmol)，在室温下搅拌3小时，进行减压浓缩。用1：1＝水：乙腈溶液稀释反应溶液，通过反相制备色谱法进行纯化。回收包含产物的馏分，通过减压浓缩去除乙腈，进行冷冻干燥，由此得到了化合物(53)(10.0mg，0.0110mmol)。

MS(ESI)m/z：911.4[M+H]⁺

[化学式120]

将化合物(54)(10.0mg，0.0110mmol)溶解于DMF(1mL)后，加入4-马来酰亚胺基己酸(3.5mg，0.017mmol)、HOAt(2.2mg，0.017mmol)、WSC·HCl(4.8mg，0.025mmol)、三乙胺(4.6μL，0.033mmol)、DMAP(0.3mg，0.002mmol)，在室温下搅拌4小时。用1：1＝水：乙腈溶液稀释反应溶液，通过反相制备色谱法进行纯化。回收包含产物的馏分，通过减压浓缩去除乙腈，进行冷冻干燥，由此得到了化合物(55)(1.6mg，0.0014mmol)。

MS(ESI)m/z：1104.5[M+H]⁺

[化学式121]

将化合物(55)(1.6mg，0.0014mmol)悬浮于1,4-二烷(0.2mL)中后，加入4N氯化氢二/>烷溶液(181μL，724mmol)，在室温下搅拌5小时。将反应溶液冷却至0℃，加入DIPEA(136μL，798mmol)后，在室温下搅拌1分钟。将反应溶液浓缩后，用1：1＝水：乙腈溶液稀释，通过反相制备色谱法进行纯化。回收包含产物的馏分，通过减压浓缩去除乙腈，进行冷冻干燥，由此得到了接头-有效载荷(50)(0.81mg，0.00077mmol)。

MS(ESI)m/z：1048.5[M+H]⁺

比较例1：接头-有效载荷模拟物(28)的合成

马来酰亚胺-VC-芘(28)如下进行合成。由市售的MC-VC-PAB-PNP(CAS No：159857-81-5)和已知的肌氨酸-芘(WO2018218004A1)在一个工序中合成。

[化学式122]

[化学式123]

将市售的MC-VC-PAB-PNP(CAS No：159857-81-5)(15.5mg，0.021mmol)溶解于二氯甲烷(1mL)，加入N,N-二异丙基乙胺(0.025mL，0.142mmol)、已知的肌氨酸-芘(WO2018218004A1)(7.6mg，0.025mmol)的二甲基甲酰胺溶液(0.5mL)，搅拌17小时。通过反相制备色谱法进行纯化后，回收包含产物的馏分，通过减压浓缩去除乙腈，进行冷冻干燥，由此得到了接头-有效载荷模拟物(28)(7.3mg，0.008mmol)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.98(s，1H)，8.34(d，J＝9.2Hz，2H)，8.32-8.23(m，4H)，8.16(s，2H)，8.10-8.00(m，4H)，7.80(d，J＝8.8Hz，1H)，7.59(d，J＝8.4Hz，2H)，7.31(d，J＝8.0Hz，2H)，6.99(s，2H)，5.96(m，1H)，5.40(s，2H)，5.01(s，2H)，4.95(d，J＝6.0Hz，2H)，4.38(m，1H)，4.19(m，1H)，3.03-2.92(m，3H)，2.67(m，1H)，2.33(m，1H)，2.20-2.07(m，2H)，1.97(m，1H)，1.67(m，1H)，1.59(m，1H)，1.51-1.45(m，6H)，1.26-1.15(m，3H)，0.83(dd，J＝12.8，6.8Hz，6H).

MS(ESI)m/z：901.45[M+H]⁺

比较例2：接头-有效载荷的合成

(2-1)接头-有效载荷(29)的合成

接头-有效载荷(29)如下进行合成。

[化学式124]

接头-有效载荷(29)依据下述方案来合成。

[化学式125]

接头-有效载荷(29)的MS分析结果如下。

MS(ESI)m/z：1447.8[M+H]⁺

实施例3：ADC模拟物的合成

(3-1)ADC模拟物的合成

在以下的比较例和实施例中，作为引入硫醇基的抗体，使用了国际公开第2019/240287号(WO2019/240287A1)的实施例81-7中记载的抗体衍生物(引入硫醇基的曲妥珠单抗)。该抗体衍生物具有下述结构：硫醇基经由抗体重链的246位或248位的赖氨酸残基的侧链的氨基被位点选择性地引入至曲妥珠单抗(人源化IgG1抗体)中(赖氨酸残基的位点依据EU编号)。

[化学式126]

上述结构中，从抗体重链延伸的NH-CH₂-CH₂-CH₂-CH₂-对应于赖氨酸残基的侧链，作为含硫醇基团的HS-CH₂-CH₂-C(＝O)附加在该赖氨酸残基的侧链中的氨基上。

向引入硫醇基的抗体的缓冲液(pH7.4，PBS缓冲液)溶液(20μM)中加入10当量的比较例1和实施例1中合成的接头-有效载荷模拟物的DMF溶液(1.25mM)，在室温下静置2小时后，使用NAP-5柱(GE Healthcare公司制造)进行纯化，得到了ADC模拟物。

由实施例1-1中合成的接头-有效载荷模拟物(1)和含硫醇的抗体合成了下述结构的ADC模拟物1。进行ESI-TOFMS分析，反应产物为在引入了2个接头-有效载荷模拟物(1)的150641处确认到峰。

[化学式127]

同样地，由实施例1-2的接头-有效载荷模拟物(5)和含硫醇的抗体合成了下述结构的ADC模拟物2。进行ESI-TOFMS分析，反应产物为在引入了2个接头-有效载荷模拟物(5)的150803处确认到峰。

[化学式128]

同样地，由实施例1-3的接头-有效载荷模拟物(9)和含硫醇的抗体合成了下述结构的ADC模拟物3。进行ESI-TOFMS分析，反应产物为在引入了2个接头-有效载荷模拟物(9)的150620处确认到峰。

[化学式129]

同样地，由比较例1的接头-有效载荷模拟物(28)和含硫醇的抗体合成了下述结构的ADC模拟物4。进行ESI-TOFMS分析，反应产物为在引入了2个接头-有效载荷模拟物(28)的150244处确认到峰。

[化学式130]

(3-2)ADC模拟物的DAR分析

依据已有报道(WO2019/240287A1)进行实施例3-1中合成的ADC模拟物的ESI-TOFMS分析，确认到DAR为2。

[表1]

表1.ADC模拟物的DAR

	接头-有效载荷模拟物	实施例/比较例	DAR
				ADC模拟物1	接头-有效载荷模拟物(1)	实施例1-1	2
ADC模拟物2	接头-有效载荷模拟物(5)	实施例1-2	2
				ADC模拟物3	接头-有效载荷模拟物(9)	实施例1-3	2
ADC模拟物4	接头-有效载荷模拟物(28)	比较例1	2

实施例4：ADC的合成

(4-1)ADC的合成

向引入硫醇基的抗体的缓冲液(pH7.4，PBS缓冲液)溶液(20μM)中加入10当量的比较例2和实施例1中合成的接头-有效载荷模拟物的DMF溶液(1.25mM)，在室温下静置2小时后，使用NAP-5柱(GE Healthcare公司制造)进行纯化，得到了ADC。

由实施例2-1中合成的接头-有效载荷(11)和含硫醇的抗体合成了下述结构的ADC1。进行ESI-TOFMS分析，反应产物为在引入了2个接头-有效载荷(11)的151230处确认到峰。

[化学式131]

由实施例2-2中合成的接头-有效载荷(12)和含硫醇的抗体合成了下述结构的ADC2。进行ESI-TOFMS分析，反应产物为在引入了2个接头-有效载荷(12)的151443处确认到峰。

[化学式132]

由实施例2-3中合成的接头-有效载荷(18)和含硫醇的抗体合成了下述结构的ADC3。进行ESI-TOFMS分析，反应产物为在引入了2个接头-有效载荷(18)的152173处确认到峰。

[化学式133]

由实施例2-4中合成的接头-有效载荷(19)和含硫醇的抗体合成了下述结构的ADC4。进行ESI-TOFMS分析，反应产物为在引入了2个接头-有效载荷(19)的151270处确认到峰。

[化学式134]

由实施例2-5中合成的接头-有效载荷(20)和含硫醇的抗体合成了下述结构的ADC5。进行ESI-TOFMS分析，反应产物为在引入了2个接头-有效载荷(20)的152005处确认到峰。

[化学式135]

由实施例2-6中合成的接头-有效载荷(21)和含硫醇的抗体合成了下述结构的ADC6。进行ESI-TOFMS分析，反应产物为在引入了2个接头-有效载荷(21)的151492处确认到峰。

[化学式136]

由比较例2中合成的接头-有效载荷(29)和含硫醇的抗体合成了下述结构的ADC7。进行ESI-TOFMS分析，反应产物为在引入了2个接头-有效载荷(29)的151295处确认到峰。

[化学式137]

由市售的MC-VC-MMAE(CAS No：646502-53-6)和含硫醇的抗体合成了下述结构的ADC 8。进行ESI-TOFMS分析，反应产物为在引入了2个MC-VC-MMAE的151091处确认到峰。

[化学式138]

同样地，由实施例2-7的接头-有效载荷(32)和含硫醇的抗体合成了下述结构的ADC模拟物9。进行ESI-TOFMS分析，反应产物为在引入了2个接头-有效载荷(32)的152261处确认到峰。

[化学式139]

(4-2)ADC的DAR分析

依据已有报道(WO2019/240287A1)进行实施例4-1中合成的ADC的ESI-TOFMS分析，确认到DAR为2。

[表2]

表2.合成的ADC和ADC模拟物一览以及DAR分析结果

实施例5：基于疏水性柱色谱法(HIC-HPLC)来评价ADC和ADC模拟物的疏水度

依据已有报道(Anal.Chem.，2019，91，20，12724-12732)进行了HIC-HPLC分析。采用下述的条件进行测定。可根据HIC色谱图中的ADC的保留时间来评价ADC的疏水度。

测定系统：Chromaster(注册商标)(日立公司制造)；

柱：TOSOH Bioscience公司制造的Tosoh Biobuthyl NPR 2.5μm 4.6×35mm柱；

梯度：洗脱液A/B的线性梯度；

流速：0.8mL/分钟；

洗脱液A：1.1M(NH₄)₂SO₄，25mM Na₂HPO₄/NaH₂PO₄(pH6.0)；

洗脱液B：25mM Na₂HPO₄/NaH₂PO₄(pH6.0、添加25v/v％异丙醇)；

检测器：UV(280nm)。

[表3]

表3.使用HIC-HPLC的ADC和ADC模拟物的疏水度的评价

实施例6：基于尺寸排阻色谱法(SEC-HPLC)来评价ADC和ADC模拟物的凝集率

依据已有报道(ChemistrySelect，2020，5，8435-8439)进行了SEC-HPLC分析。采用下述的条件进行测定。

测定系统：1260HPLC系统(Agilent公司制造)；

柱：Agilent公司制造的AdvanceBio SEC2.7μm、4.6mm×150mm；

流速：0.25mL/分钟；

洗脱液：100mM磷酸二氢钠/磷酸氢钠、250mM氯化钠的水溶液(pH6.8)、10％v/v异丙醇；

检测器：UV(280nm)。

[表4]

表4.使用SEC-HPLC的ADC和ADC模拟物的凝集率的评价

实施例7：使用酶组织蛋白酶B来评价ADC模拟物

如下所述，通过分析从ADC模拟物脱落的荧光分子的量来评价各种ADC模拟物的基于组织蛋白酶B的切割能力。

(7-1)组织蛋白酶B的切割性试验

依据已有报道(Nature Communications 2018，9，2512)如下实施。向180μL的MES缓冲液(10mM MES，40μM DTT，pH5.0)中加入ADC模拟物使浓度为0.1mg/mL，之后向6支微型离心管中分别注入30μL。6支样本中的3支在0℃下立即各加入100μL乙腈，经涡旋搅拌后进行离心，由此得到了沉淀物。回收所产生的上清液，进行了HPLC分析。剩下的3支在37℃下孵育6小时。向各样本中分别加入100μL乙腈，经涡旋搅拌后进行离心，由此得到了沉淀物。回收所产生的上清液，进行了HPLC分析。

(7-2)采用HPLC分析对脱落的荧光分子的量进行分析

测定是利用液相色谱法/荧光检测法，测定了从ADC模拟物脱落的荧光分子的量。以实施例7-1中在0℃下立即加入乙腈的3支样本作为0小时的样本，如实施例7-1中所记载的那样以在37℃下孵育6小时的3支样本作为6小时的样本，分析了6小时样本与0小时样本的荧光强度的差值。

另外，使用芘，算出基于HPLC的荧光强度的区域面积与浓度的相关性。利用该算式将上述各ADC模拟物的荧光强度的差值转换为浓度。将0小时的浓度设为100％时的上述荧光强度的差值的比例作为脱落率算出。

[表5]

表5.ADC模拟物的组织蛋白酶B切割能力的评价

其结果，实施例1中合成的ADC模拟物对组织蛋白酶的反应性高，且立即释放荧光分子。相对于此，比较例1-1、1-2中合成的ADC模拟物对组织蛋白酶的反应性低。

实施例8：使用酶组织蛋白酶B来评价ADC

如下所述，通过分析从ADC脱落的荧光分子的量来评价各种ADC的基于组织蛋白酶B的切割能力。

(8-1)组织蛋白酶B的切割性试验

依据已有报道(Nature Communications 2018，9，2512)实施。

(8-2)采用HPLC分析对脱落的有效载荷的量进行分析

测定是利用液相色谱法质谱分析法(包括串联质谱分析法)，测定了从ADC脱落的有效载荷量。以实施例8-1中在0℃下立即加入乙腈的3支样本作为0小时的样本，以实施例8-1中在37℃下孵育6小时的3支样本作为6小时的样本，通过提取离子色谱图分别算出从6小时样本和0小时样本中检测到的有效载荷的MS强度，并分析了它们的差值。

另外，使用MMAE，算出基于HPLC的TIC的区域面积与浓度的相关性。利用该算式将上述各ADC的荧光强度的TIC转换为浓度。将第0天的浓度设为100％时的上述离子色谱图的差值的比例作为脱落率算出。

[表6]

表6.ADC的组织蛋白酶B切割能力的评价

其结果，明确了实施例2中合成的ADC模拟物对组织蛋白酶的反应性高，且立即释放有效载荷。

实施例9：使用小鼠血浆来评价ADC模拟物

(9-1)ADC模拟物的血浆中稳定性试验

向500μL小鼠血浆(Charles River公司制造)中加入ADC模拟物使浓度为0.1mg/mL，之后进行灭菌过滤。向6支微型离心管中分别注入各50μL的该溶液。6支样本中的3支在设定为37℃的恒温箱中保管4天。剩下的3支在-80℃的冷库中同样地保管4天。向各样本中分别加入100μL乙腈，经涡旋搅拌后进行离心，由此得到了沉淀物。回收所产生的上清液，进行了HPLC分析。

(9-2)采用HPLC分析对脱落的荧光分子的量进行分析

测定是利用液相色谱法/荧光检测法，测定了从ADC模拟物脱落的荧光分子的量。以实施例9-1中冷库保管的3支样本作为第0天的样本，以实施例9-1中37℃保管的3支样本作为第4天的样本，分析第4天与第0天的荧光强度的差值。

根据实施例7-2实施了荧光分子的脱落率的计算。

结果如下表所示，评价了荧光分子的脱落率。

[表7]

表7.使用ADC模拟物的血浆中稳定性试验结果

实施例10：使用小鼠血浆来评价ADC

(10-1)ADC的血浆中稳定性试验

向500μL小鼠血浆(Charles River公司制造)中加入ADC模拟物使浓度为0.1mg/mL，之后进行灭菌过滤。向6支微型离心管中分别注入各50μL的该溶液。6支样本中的3支在设定为37℃的恒温箱中保管4天。剩下的3支在-80℃的冷库中同样地保管4天。向各样本中分别加入100μL乙腈，经涡旋搅拌后进行离心，由此得到了沉淀物。回收所产生的上清液，进行了HPLC分析。

(10-2)采用HPLC分析对脱落的有效载荷的量进行分析

测定是利用液相色谱法质谱分析法(包括串联质谱分析法)，测定了从ADC脱落的有效载荷量。以实施例10-1中在0℃下立即加入乙腈的3支样本作为0小时的样本，以实施例8-1中在37℃下孵育6小时的3支样本作为6小时的样本，通过提取离子色谱图分别算出从6小时样本和0小时样本中检测到的有效载荷的MS强度，并分析了它们的差值。根据实施例8-2实施了有效载荷的脱落率的计算。

[表8]

表8.使用ADC的血浆中稳定性试验结果

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Claims (20)

1.抗体和功能性物质的缀合物或其盐，其包含下述式(I)所表示的结构单元，且至少1个亲水性基团存在于所述结构单元中：

式(I)中，

Ig表示包含2个重链和2个轻链的免疫球蛋白单元，且经由2个重链中的赖氨酸残基的侧链中的氨基与Ig所相邻的羰基位点选择性地形成酰胺键，

L₁和L₂分别表示二价基团，

R₁表示可包含亲水性基团的一价基团，

X表示可具有取代基的二价基团，在此，二价基团中构成连接存在于X的两侧的2个原子的主链部分的碳原子数为1～3个，取代基为可包含亲水性基团的一价基团，

D表示功能性物质，

R_A表示缬氨酸残基的侧链，

R_B表示瓜氨酸残基或丙氨酸残基的侧链，

n为0或1，在此，在n为1的情况下，X中的取代基可与R₁一起形成可包含亲水性基团的环，

每2个重链的所述酰胺键的平均比率r为1.5～2.5。

2.权利要求1所述的缀合物或其盐，其中，免疫球蛋白单元为人免疫球蛋白单元。

3.权利要求2所述的缀合物或其盐，其中，人免疫球蛋白单元为人IgG抗体。

4.权利要求1所述的缀合物或其盐，其中，赖氨酸残基存在于依据EU编号的246/248位、288/290位或317位。

5.权利要求1所述的缀合物或其盐，其中，r为1.9～2.1。

6.权利要求1所述的缀合物或其盐，其中，亲水性基团为选自羧酸基、磺酸基、羟基、聚乙二醇基、聚肌氨酸基和糖部分的1个以上的基团。

7.权利要求1所述的缀合物或其盐，其中，L₁表示下述式(i)所表示的二价基团：

-L₄-Y-L₃- (i)

式(i)中，

L₃和L₄分别独立地包含选自-(C(R)₂)_m-、-(O-C(R)₂-C(R)₂)_m-和-(C(R)₂-C(R)₂-O)_m-、以及它们的组合的二价基团，

R分别独立地是氢原子、碳原子数为1～6的烷基、碳原子数为2～6的烯基或碳原子数为2～6的炔基，

m为0～20的整数，

Y是通过可相互反应的2个生物正交性官能团的反应而生成的二价基团。

8.权利要求7所述的缀合物或其盐，其中，L₃和L₄分别独立地包含-(C(R)₂)_m-。

9.权利要求7所述的缀合物或其盐，其中，Y是由下述结构式中的任一个结构式表示的二价基团：

在此，白圆和黑圆表示结合键，

在白圆的结合键与L₃键合的情况下，黑圆的结合键与L₄键合，

在白圆的结合键与L₄键合的情况下，黑圆的结合键与L₃键合。

10.权利要求1所述的缀合物或其盐，其中，式(I)所表示的结构单元为下述式(I-1)、(I-2)、(I-3)或(I-4)所表示的结构单元：

式(I-1)中，

Ig、L₁、L₂、D、R_A、R_B、r与式(I)相同，

R₁表示包含亲水性基团的一价基团；

式(I-2)中，

Ig、L₁、L₂、D、R_A、R_B、r与式(I)相同，

R₂表示包含亲水性基团的一价基团；

式(I-3)中，

Ig、L₁、L₂、D、R_A、R_B、r与式(I)相同，

R₃表示氢原子、碳原子数为1～6的烷基或包含亲水性基团的一价基团，

R₄表示包含亲水性基团的一价基团；或

式(I-4)中，

Ig、L₁、L₂、D、R_A、R_B、r与式(I)相同，

R₁表示氢原子或碳原子数为1～6的烷基，

R₆表示包含亲水性基团的一价基团。

11.权利要求10所述的缀合物或其盐，其中，式(I)所表示的结构单元为式(I-1)、(I-2)或(I-3)所表示的结构单元。

12.权利要求10所述的缀合物或其盐，其中，式(I-1)、(I-2)、(I-3)或(I-4)所表示的结构单元为下述式(I-1a’)、(I-1b’)、(I-1c’)、(I-2’)、(I-3a’)、(I-3b’)、(I-4a’)、(I-4b’)或(I-4c’)所表示的结构单元：

式(I-1a’)中，

Ig、L₁、L₂、D、R_A、R_B、r与式(I)相同，

L₅表示键或二价基团，

HG表示亲水性基团；

式(I-1b’)中，

Ig、L₁、L₂、D、R_A、R_B、r与式(I)相同，

2个L₅分别独立地表示键或二价基团，

2个HG分别独立地表示亲水性基团；

[式(I-1c’)中，

Ig、L₂、D、R_A、R_B、r与式(I)相同，

L₅表示键或二价基团，

HG表示亲水性基团，

L_1a和L_1b分别独立地表示键或二价基团，

HG’表示二价亲水性基团；

式(I-2’)中，

Ig、L₁、L₂、D、R_A、R_B、r与式(I)相同，

L₅表示键或二价基团，

HG表示亲水性基团；

式(I-3a’)中，

Ig、L₁、L₂、D、R_A、R_B、r与式(I)相同，

L₅表示键或二价基团，

HG表示亲水性基团；

式(I-3b’)中，

Ig、L₁、L₂、D、R_A、R_B、r与式(I)相同，

HG表示亲水性基团；

式(I-4a’)中，

Ig、L₁、L₂、D、R_A、R_B、r与式(I)相同，

L₅表示键或二价基团，

HG表示亲水性基团；

式(I-4b’)中，

Ig、L₂、D、R_A、R_B、r与式(I)相同，

L₅表示键或二价基团，

HG表示亲水性基团，

L_1a和L_1b分别独立地表示键或二价基团，

HG’表示二价亲水性基团；或

式(I-4c’)中，

Ig、L₁、D、R_A、R_B、r与式(I)相同，

L₅表示键或二价基团，

HG表示亲水性基团，

L₂’表示键或二价基团，

E表示吸电子基团，

n2为1～4的整数。

13.权利要求12所述的缀合物或其盐，其中，式(I-1a’)、(I-1b’)、(I-1c’)、(I-2’)、(I-3a’)、(I-3b’)、(I-4a’)、(I-4b’)或(I-4c’)所表示的结构单元为下述式(I-1a’-1)、(I-1a’-2)、(I-1b’-1)、(I-1c’-1)、(I-2’-1)、(I-2’-2)、(I-3a’-1)、(I-3a’-2)、(I-3b’-1)、(I-4a’-1)、(I-4b’-1)、(I-4c’-1)或(I-4c’-2)所表示的结构单元：

式(I-1a’-1)中，

Ig、L₁、L₂、D、R_A、R_B、r与式(I)相同；

式(I-1a’-2)中，

Ig、L₁、L₂、D、R_A、R_B、r与式(I)相同；

式(I-1b’-1)中，

Ig、L₁、L₂、D、R_A、R_B、r与式(I)相同；

式(I-1c’-1)中，

Ig、L₂、D、R_A、R_B、r与式(I)相同，

L_1a和L_1b分别独立地表示键或二价基团，n1为3～20的整数；

式(I-2’-1)中，

Ig、L₁、L₂、D、R_A、R_B、r与式(I)相同；

式(I-2’-2)中，

Ig、L₁、L₂、D、R_A、R_B、r与式(I)相同；

式(I-3a’-1)中，

Ig、L₁、L₂、D、R_A、R_B、r与式(I)相同；

式(I-3a’-2)中，

Ig、L₁、L₂、D、R_A、R_B、r与式(I)相同；

式(I-3b’-1)中，

Ig、L₁、L₂、D、R_A、R_B、r与式(I)相同；或

式(I-4a’-1)中，

Ig、L₁、L₂、D、R_A、R_B、r与式(I)相同；

式(I-4b’-1)中，

Ig、L₂、D、R_A、R_B、r与式(I)相同，

L_1a和L_1b分别独立地表示键或二价基团，

n1表示3～20的整数；

式(I-4c’-1)中，

Ig、L₁、D、R_A、R_B、r与式(I)相同，

L₂’表示键或二价基团；或

式(I-4c’-2)中，

Ig、L₁、D、R_A、R_B、r与式(I)相同，

L₂’表示键或二价基团。

14.权利要求1～13中任一项所述的缀合物或其盐，其中，L₂包含下述的结构式所表示的二价基团：

在此，黑圆和白圆表示结合键，

黑圆的结合键与L₂所相邻的羰基键合，

白圆的结合键与D键合，

E表示吸电子基团，

n2为1～4的整数。

15.化合物或其盐，其由下述式(II-1)、(II-2)、(II-3)、(II-4b’)或(II-4c’)表示：

式(II-1)中，

L₂和L₃分别表示二价基团，

R₁表示可包含亲水性基团的一价基团，

D表示功能性物质，

R_A表示缬氨酸残基的侧链，

R_B表示瓜氨酸残基或丙氨酸残基的侧链，

B表示生物正交性官能团；

式(II-2)中，

L₂、L₃、D、R_A、R_B和B与式(II-1)相同，

R₂表示可包含亲水性基团的一价基团；

式(II-3)中，

L₂、L₃、D、R_A、R_B和B与式(II-1)相同，

R₃表示氢原子、碳原子数为1～6的烷基或包含亲水性基团的一价基团，

R₄表示包含亲水性基团的一价基团；

式(II-4b’)中，

L₂、D、R_A、R_B和B与式(II-1)相同，

L₅表示键或二价基团，

HG表示亲水性基团，

L_3a和L_3b分别独立地表示键或二价基团，

HG’表示二价亲水性基团；或

式(II-4c’)中，

L₃、D、R_A、R_B和B与式(II-1)相同，

L₅表示键或二价基团，

HG表示亲水性基团，

L₂’表示键或二价基团，

E表示吸电子基团，

n2为1～4的整数。

16.权利要求15所述的化合物或其盐，其中，生物正交性官能团为马来酰亚胺残基、硫醇残基、呋喃残基、卤代羰基残基、烯烃残基、炔烃残基、叠氮残基或四嗪残基。

17.权利要求15所述的化合物或其盐，其中，式(II-1)、(II-2)或(II-3)所表示的化合物由下述式(II-1a’)、(II-1b’)、(II-1c’)、(II-2’)、(II-3a’)或(II-3b’)表示：

式(II-1a’)中，

L₂、L₃、D、R_A、R_B和B与式(II-1)相同，

L₅表示键或二价基团，

HG表示亲水性基团；

式(II-1b’)中，

L₂、L₃、D、R_A、R_B和B与式(II-1)相同，

2个L₅分别独立地表示键或二价基团，

2个HG分别独立地表示亲水性基团；

式(II-1c’)中，

L₂、D、R_A、R_B和B与式(II-1)相同，

L₅表示键或二价基团，

HG表示亲水性基团，

L_3a和L_3b分别独立地表示键或二价基团，

HG’表示二价亲水性基团；

式(II-2’)中，

L₂、L₃、D、R_A、R_B和B与式(II-1)相同，

L₅表示键或二价基团，

HG表示亲水性基团；

式(II-3a’)中，

L₂、L₃、D、R_A、R_B和B与式(II-1)相同，

L₅表示键或二价基团，

HG表示亲水性基团；或

式(II-3b’)中，

L₂、L₃、D、R_A、R_B和B与式(II-1)相同，

HG表示亲水性基团。

18.权利要求15所述的化合物或其盐，其中，式(II-1a’)、(II-1b’)、(II-1c’)、(II-2’)、(II-3a’)、(II-3b’)、(II-4b’)或(II-4c’)所表示的化合物由下述式(II-1a’-1)、(II-1a’-2)、(II-1b’-1)、(II-1c’-1)、(II-2’-1)、(II-2’-2)、(II-3a’-1)、(II-3a’-2)、(II-3b’-1)、(II-4b’-1)、(II-4c’-1)或(II-4c’-2)表示：

式(II-1a’-1)中，

L₂、L₃、D、R_A、R_B和B与式(II-1)相同；

式(II-1a’-2)中，

L₂、L₃、D、R_A、R_B和B与式(II-1)相同；

式(II-1b’-1)中，

L₂、L₃、D、R_A、R_B和B与式(II-1)相同；

式(II-1c’-1)中，

L₂、D、R_A、R_B和B与式(II-1)相同，

L_3a和L_3b分别独立地表示键或二价基团，

n1为3～20的整数；

式(II-2’-1)中，

L₂、L₃、D、R_A、R_B和B与式(II-1)相同；

式(II-2’-2)中，

L₂、L₃、D、R_A、R_B和B与式(II-1)相同；

式(II-3a’-1)中，

L₂、L₃、D、R_A、R_B和B与式(II-1)相同；

式(II-3a’-2)中，

L₂、L₃、D、R_A、R_B和B与式(II-1)相同；或

式(II-3b’-1)中，

L₂、L₃、D、R_A、R_B和B与式(II-1)相同；

式(II-4b’-1)中，

L₂、D、R_A、R_B和B与式(II-1)相同，

L_3a和L_3b分别独立地表示键或二价基团，

n1为3～20的整数；

式(II-4c’-1)中，

L₃、D、R_A、R_B和B与式(II-1)相同，

L₂’表示键或二价基团；或

式(II-4c’-2)中，

L₃、D、R_A、R_B和B与式(II-1)相同，

L₂’表示键或二价基团。

19.权利要求15所述的化合物或其盐，其中，L₂包含下述的结构式所表示的二价基团：

在此，黑圆和白圆表示结合键，

黑圆的结合键与L₂所相邻的羰基键合，

白圆的结合键与D键合，

E表示吸电子基团，

n2为1～4的整数。

20.抗体的衍生试剂，其包含权利要求15～19中任一项所述的化合物或其盐。