CN117403010A - 一种疱疹病毒滴度的快速检测方法 - Google Patents
一种疱疹病毒滴度的快速检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN117403010A CN117403010A CN202311723482.9A CN202311723482A CN117403010A CN 117403010 A CN117403010 A CN 117403010A CN 202311723482 A CN202311723482 A CN 202311723482A CN 117403010 A CN117403010 A CN 117403010A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- rna
- herpesvirus
- technology
- steps
- sequence
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 64
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 title claims abstract description 36
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 claims abstract description 46
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims abstract description 38
- 239000013614 RNA sample Substances 0.000 claims abstract description 24
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims abstract description 15
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims abstract description 15
- 108020004518 RNA Probes Proteins 0.000 claims abstract description 13
- 239000003391 RNA probe Substances 0.000 claims abstract description 13
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 claims abstract description 11
- 238000001215 fluorescent labelling Methods 0.000 claims abstract description 11
- 238000004557 single molecule detection Methods 0.000 claims abstract description 9
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 claims abstract description 8
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 claims abstract description 5
- 108020004711 Nucleic Acid Probes Proteins 0.000 claims abstract description 4
- 239000002853 nucleic acid probe Substances 0.000 claims abstract description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 54
- 239000000499 gel Substances 0.000 claims description 27
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 claims description 18
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 17
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 15
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 claims description 13
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 12
- 239000000178 monomer Substances 0.000 claims description 12
- SJPSPCODIPFASV-UHFFFAOYSA-N 5-ethyl-6-phenylphenanthridin-5-ium-3,8-diamine;iodide Chemical compound [I-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 SJPSPCODIPFASV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 claims description 11
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 claims description 10
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims description 10
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims description 10
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 claims description 10
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 10
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 10
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 9
- 238000013461 design Methods 0.000 claims description 9
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 claims description 9
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 8
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 8
- 108020000999 Viral RNA Proteins 0.000 claims description 7
- 230000003321 amplification Effects 0.000 claims description 7
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 7
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 claims description 7
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 6
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 6
- 238000009826 distribution Methods 0.000 claims description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 6
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 claims description 6
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 4
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 4
- 230000005684 electric field Effects 0.000 claims description 4
- 238000001976 enzyme digestion Methods 0.000 claims description 4
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 claims description 4
- 238000013508 migration Methods 0.000 claims description 4
- 230000005012 migration Effects 0.000 claims description 4
- 238000012545 processing Methods 0.000 claims description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 claims description 4
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 claims description 3
- 238000006482 condensation reaction Methods 0.000 claims description 3
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 claims description 3
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims description 3
- 230000009144 enzymatic modification Effects 0.000 claims description 3
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 claims description 3
- 239000000835 fiber Substances 0.000 claims description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims description 3
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 3
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 claims description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims description 3
- 238000010408 sweeping Methods 0.000 claims description 3
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 3
- 238000012800 visualization Methods 0.000 claims description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 11
- 238000011002 quantification Methods 0.000 abstract description 5
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 abstract description 4
- XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N IDUR Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(I)=C1 XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 abstract description 3
- 238000009739 binding Methods 0.000 abstract description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 8
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 6
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 3
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 3
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 238000002123 RNA extraction Methods 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 238000003698 laser cutting Methods 0.000 description 2
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 2
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 2
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 230000007023 DNA restriction-modification system Effects 0.000 description 1
- 241000450599 DNA viruses Species 0.000 description 1
- 102100031780 Endonuclease Human genes 0.000 description 1
- 241000700586 Herpesviridae Species 0.000 description 1
- 208000029433 Herpesviridae infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 241000700588 Human alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 1
- 241000701074 Human alphaherpesvirus 2 Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 238000002944 PCR assay Methods 0.000 description 1
- 230000004570 RNA-binding Effects 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000013473 artificial intelligence Methods 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 210000004087 cornea Anatomy 0.000 description 1
- 238000005336 cracking Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 238000002795 fluorescence method Methods 0.000 description 1
- 210000004392 genitalia Anatomy 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000003125 immunofluorescent labeling Methods 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 239000002052 molecular layer Substances 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000007790 scraping Methods 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/70—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage
- C12Q1/701—Specific hybridization probes
- C12Q1/705—Specific hybridization probes for herpetoviridae, e.g. herpes simplex, varicella zoster
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6806—Preparing nucleic acids for analysis, e.g. for polymerase chain reaction [PCR] assay
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6811—Selection methods for production or design of target specific oligonucleotides or binding molecules
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6813—Hybridisation assays
- C12Q1/6834—Enzymatic or biochemical coupling of nucleic acids to a solid phase
- C12Q1/6837—Enzymatic or biochemical coupling of nucleic acids to a solid phase using probe arrays or probe chips
-
- G—PHYSICS
- G16—INFORMATION AND COMMUNICATION TECHNOLOGY [ICT] SPECIALLY ADAPTED FOR SPECIFIC APPLICATION FIELDS
- G16B—BIOINFORMATICS, i.e. INFORMATION AND COMMUNICATION TECHNOLOGY [ICT] SPECIALLY ADAPTED FOR GENETIC OR PROTEIN-RELATED DATA PROCESSING IN COMPUTATIONAL MOLECULAR BIOLOGY
- G16B25/00—ICT specially adapted for hybridisation; ICT specially adapted for gene or protein expression
- G16B25/20—Polymerase chain reaction [PCR]; Primer or probe design; Probe optimisation
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Virology (AREA)
- Bioinformatics & Computational Biology (AREA)
- Evolutionary Biology (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
- Theoretical Computer Science (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明涉及生物技术领域，公开了一种疱疹病毒滴度的快速检测方法，方法步骤包括如下：首先利用单链RNA抗体技术，设计出能特异结合疱疹病毒RNA的单链核酸探针；然后利用凝胶电泳将血液样本经过胶体精华，取出RNA分子；随后，将RNA样本放入微型流体芯片内，设置了单链RNA探针的流通通道；疱疹病毒RNA分子通过通道，与探针进行结合；利用芯片内固定的单分子荧光标记技术进行荧光标记，并利用单分子探测技术进行计数。该疱疹病毒滴度的快速检测方法，通过分子级别的快速定量，实现非常高灵敏度和特异性的滴度定量检测；检测速度较快，可在1小时内完成，且灵敏度可达到单分子级别，精度可达到99%以上，为临床提供了一种新型高效精确的疱疹检测试剂。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体为一种疱疹病毒滴度的快速检测方法。
背景技术
疱疹病毒是一群有包膜的DNA病毒，生物学特性相似，归类为疱疹病毒科。总共发现了100多种，可以分为α、β、γ三大类（亚科）。其感染宿主广泛，主要侵害皮肤、黏膜以及神经组织，严重影响着人及其他动物的健康。病毒分离培养是当今临床上明确诊断疱疹病毒感染的可靠依据。可采集皮肤、生殖器等病变部位的水疱液、脑脊液、角膜刮取物、唾液等标本，接种人二倍体成纤维细胞株WI38及其它传代细胞株如Vero、BHK等，经24～48小时后，细胞则出现肿胀、变圆、细胞融合等病变。然后用HSV-1和HSV-2的单克隆抗体作免疫荧光染色鉴定或应用DNA限制性内切酶图谱分析来定型。
传统PCR和酶联免疫法检测时间长，需要2-8小时不等，不满足临床急诊检测的实时要求；传统方法灵敏度较低，不能实现单分子级别定量；传统方法检测费时且体现少，难以进行大规模临床检测；传统方法检测结果精度一般在90%左右。为此，需要设计相应的技术方案给予解决。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明提供了一种疱疹病毒滴度的快速检测方法，解决了传统PCR和酶联免疫法检测时间长，不满足临床急诊检测的实时要求，灵敏度较低，不能实现单分子级别定量，检测费时且体现少，难以进行大规模临床检测，检测结果精度低的技术问题。
为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种疱疹病毒滴度的快速检测方法，方法步骤包括如下：
S1、首先利用单链RNA抗体技术，设计出能特异结合疱疹病毒RNA的单链核酸探针；
S2、然后利用凝胶电泳将血液样本经过胶体精华，取出RNA分子；
S3、随后，将RNA样本放入微型流体芯片内，设置了单链RNA探针的流通通道；
S4、疱疹病毒RNA分子通过通道，与探针进行结合；
S5、利用芯片内固定的单分子荧光标记技术进行荧光标记，并利用单分子探测技术进行计数。
优选的，步骤S1中，利用单链RNA抗体技术的具体方法步骤包括如下：
S101、通过计算机计算对疱疹病毒RNA序列进行分析，预测能与其激动区结合的RNA结构；
S102、利用人工定向进化技术，设计出10-15核苷酸长的寡核苷酸序列，与病毒RNA序列特定核苷酸区段发生互补配对；
S103、利用固相合成法合成这类单链RNA序列，即单链RNA抗体；
S104、进一步筛选出对病毒RNA识别特异性和亲和力最强的单链RNA序列作为探针。
优选的，人工定向进化技术是利用计算机算法模拟生物进化的原理，进行定向设计和选择单链RNA序列，人工定向进化技术的具体方法步骤为：
S201、初始生成数万条随机的单链RNA序列库；
S202、根据疱疹病毒RNA结构特征，设计配对规则评估每条序列的匹配程度；
S203、选择匹配程度高的序列进行酶修饰和点突变，生成新的序列库；
S204、反复进行S202和S203，保留每次匹配程度最高的新序列；
S205、经多轮进化，将匹配目标所需结构的几条序列选出作为候选探针；
S206、对候选探针进行实验鉴定，选出识别能力最强的作为单链RNA抗体。
优选的，固相合成法利用材料实体固相表面结合的单体核苷酸按顺序进行酶促反应合成拟定序列的寡核苷酸，固相合成法的具体步骤为：
S301、在玻片固相材料表面固定初基配体；
S302、应用3'-保护基团核苷酸单体依次添加，与初基进行酶促缩合反应连成链；
S303、反应完成后用缓冲液洗去未结合的单体，保留合成产物；
S304、脱保护基团，继续下一次添加不同单体进行延伸式合成；
S305、重复上述步骤直至合成期望序列的寡核苷酸。
优选的，步骤S2中，利用凝胶电泳将血液样本精华取出RNA分子的具体步骤为：
S401、取试验血液样本，加入缓冲溶液处理裂解样本中的细胞，释放出细胞内的RNA分子；
S402、将样本置于含碘化乙锭的琼脂糖凝胶中，并应用垂直向下的电场进行电泳迁移；
S403、电泳结束后，根据RNA分子本身荧光标记或用荧光胶片视化，定位到不同位置的RNA条带；
S405、利用激光或酶切的方法从凝胶中精准割取带状区域，取出目的RNA分子；
S406、采用逆转录及PCR扩增RNA，获得充分的RNA样品供后续检测使用。
优选的，利用激光技术从凝胶中精准取出RNA分子，具体方法步骤包括如下：
S501、通过电泳产生RNA条带分离后，利用含碘化乙锭的琼脂糖凝胶呈现紫色RNA条带分布情况；
S502、根据条带位置与大小，确定RNA标本条带位置；
S503、将凝胶平放在激光切割仪下，利用计算机控制激光光纤对准需要切割的RNA条带位置；
S504、激光按照程序循环快速扫射切割，精确切除带状区域的凝胶块；
S505、将切割取出的凝胶块轻轻放入EP管内，加入缓冲液进行离心萃取，取出其中的RNA样品；
S506、获取的RNA样品直接用于后续的逆转录PCR扩增；
利用酶切技术从凝胶中精准取出RNA分子，具体方法步骤包括如下：
S511、通过电泳产生RNA条带分离后，利用含碘化乙锭的琼脂糖凝胶呈现紫色RNA条带分布情况；
S512、根据条带位置与大小，确定RNA标本条带位置；
S513、将针孔大小的蛋白酶溶于缓冲液中，滴加到需要切割的带状区域内，孵育一段时间，使酶溶解固定RNA的凝胶基质，孵育温度控制在37℃左右，孵育时间控制在30min左右；
S514、将切割取出的凝胶块轻轻放入EP管内，加入缓冲液进行离心萃取，取出其中的RNA样品；
S515、获取的RNA样品直接用于后续的逆转录PCR扩增。
优选的，步骤S5中，利用芯片内固定的单分子荧光标记技术进行荧光标记的具体方法步骤包括如下：
S601、在微流体芯片通道内固定具有荧光标记基团的单链RNA探针；
S602、探针与病毒RNA结合后，单个荧光标记基团发生化学反应即被点亮发出荧光；
利用单分子探测技术进行计数的具体方法步骤包括如下：
S701、利用固定在芯片上的高倍显微镜通过超快闪光灯照亮通道；
S702、高灵敏度CCD相机采集每个荧光点的位置和强度信息；
S703、计算软件对图像进行分析处理，定量计数通道内单次通过期间发光的荧光点个数；
S704、多次探测结果统计，计数出RNA分子通过的总数。
与现有技术相比，本发明的有益效果：采用单分子光学技术检测血样中疱疹病毒的RNA分子，通过分子级别的快速定量，实现非常高灵敏度和特异性的滴度定量检测；与现有PCR及酶联免疫测定等传统检测方法相比，本发明方法检测速度较快，可在1小时内完成，且灵敏度可达到单分子级别，精度可达到99%以上，为临床提供了一种新型高效精确的疱疹检测试剂。
附图说明
图1为本发明的整体检测方法示意图；
图2为本发明的利用单链RNA抗体技术的具体方法步骤示意图；
图3为本发明的人工定向进化技术的具体方法步骤示意图；
图4为本发明的固相合成法的具体方法步骤示意图；
图5为本发明的利用凝胶电泳将血液样本精华取出RNA分子的具体步骤示意图；
图6为本发明的利用激光或酶切技术从凝胶中精准取出RNA分子的两种方法步骤示意图；
图7为本发明的利用芯片内固定的单分子荧光标记技术进行荧光标记的具体方法步骤示意图；
图8为本发明的利用单分子探测技术进行计数的具体方法步骤示意图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
请参阅图1-图8，本发明实施例提供一种技术方案：一种疱疹病毒滴度的快速检测方法，方法步骤包括如下：
S1、首先利用单链RNA抗体技术，设计出能特异结合疱疹病毒RNA的单链核酸探针；
S2、然后利用凝胶电泳将血液样本经过胶体精华，取出RNA分子；
S3、随后，将RNA样本放入微型流体芯片内，设置了单链RNA探针的流通通道；
S4、疱疹病毒RNA分子通过通道，与探针进行结合；
S5、利用芯片内固定的单分子荧光标记技术进行荧光标记，并利用单分子探测技术进行计数。
微型流体芯片是一种微流控集成电子芯片，在玻璃基板上形成微米级流体通道网络；各流体通道内设置有单链RNA探针和其他试剂固定区；通过外加电压方式控制RNA样品和缓冲液的精密流动；实现单分子水平的自动化分析检测；将RNA样品导入微流体芯片后，可以实现流体中的各种化学反应及生物识别过程的高通量自动化检测；与传统宏观检测相比，微型流体芯片具有成本低、灵敏度高、消耗少的优势，适合快速检测应用。
单分子荧光标记技术是利用单个荧光分子进行标记和检测的荧光技术。
进一步改进地，步骤S1中，利用单链RNA抗体技术的具体方法步骤包括如下：
S101、通过计算机计算对疱疹病毒RNA序列进行分析，预测能与其激动区结合的RNA结构；
S102、利用人工定向进化技术，设计出10-15核苷酸长的寡核苷酸序列，能与病毒RNA序列特定核苷酸区段发生互补配对；
S103、利用固相合成法合成这类单链RNA序列，即单链RNA抗体；
S104、进一步筛选出对病毒RNA识别特异性和亲和力最强的单链RNA序列作为探针。
“单链RNA抗体技术”是一种利用人工智能手段，定向设计RNA识别元素的新技术，可以提供高特异单链RNA探针。
进一步改进地，人工定向进化技术的具体是利用计算机算法模拟生物进化的原理，进行定向设计和选择单链RNA序列；
具体方法步骤为：
S201、初始生成数万条随机的单链RNA序列库；
S202、根据疱疹病毒RNA结构特征，设计配对规则评估每条序列的匹配程度；
S203、选择匹配程度高的序列进行酶修饰和点突变，生成新的序列库；
S204、反复进行S202和S203，保留每次匹配程度最高的新序列；
S205、经多轮进化，将匹配目标所需结构的几条序列选出作为候选探针；
S206、对候选探针进行实验鉴定，选出识别能力最强的作为单链RNA抗体。
通过该方法的设计与选择，实现了针对特定RNA序列的人工定向设计。
进一步改进地，固相合成法是一种聚合核苷酸合成方法，利用材料实体固相表面结合的单体核苷酸按顺序进行酶促反应合成拟定序列的寡核苷酸；具体步骤为：
S301、在玻片固相材料表面固定初基配体；
S302、应用3'-保护基团核苷酸单体依次添加，与初基进行酶促缩合反应连成链；
S303、反应完成后用缓冲液洗去未结合的单体，保留合成产物；
S304、脱保护基团，继续下一次添加不同单体进行延伸式合成；
S305、重复上述步骤直至合成期望序列的寡核苷酸。
采用该方法可以生成规定序列表示的单链RNA序列，即“单链RNA抗体”。
进一步改进地，步骤S2中，利用凝胶电泳将血液样本精华取出RNA分子的具体步骤为：
S401、取试验血液样本，加入缓冲溶液处理裂解样本中的细胞，释放出细胞内的RNA分子；缓冲溶液是指能保持pH值恒定的溶液，用于裂解细胞质膜释放RNA分子；
S402、将样本置于含碘化乙锭的琼脂糖凝胶中，并应用垂直向下的电场进行电泳迁移；含碘化乙锭的琼脂糖凝胶指添加了RNA结合染料碘化乙锭的琼脂糖凝胶基质，用于RNA电泳迁移时产生视觉效果；由于不同类型和大小的RNA分子在电场下迁移速率不同，可使RNA分子具有一定程度的分离作用；
S403、电泳结束后，根据RNA分子本身荧光标记或用荧光胶片视化，定位到不同位置的RNA条带；
S405、利用激光或酶切的方法从凝胶中精准割取带状区域，取出目的RNA分子；
S406、采用逆转录及PCR扩增RNA，获得充分的RNA样品供后续检测使用；用逆转录酶对RNA进行反转录为DNA互补链，再用PCR技术对cDNA进行非特异性扩增，获取大量RNA样品。
以上步骤实现了精细胶体分离法提取血液样本中的RNA分子，为下一步检测提供有效样品。
进一步改进地，利用激光技术从凝胶中精准取出RNA分子，具体方法步骤包括如下：
S501、通过电泳产生RNA条带分离后，利用含碘化乙锭的琼脂糖凝胶呈现紫色RNA条带分布情况；
S502、根据条带位置与大小，确定RNA标本条带位置；
S503、将凝胶平放在激光切割仪下，利用计算机控制激光光纤对准需要切割的RNA条带位置；
S504、激光按照程序循环快速扫射切割，精确切除带状区域的凝胶块；
S505、将切割取出的凝胶块轻轻放入EP管内，加入缓冲液进行离心萃取，取出其中的RNA样品；
S506、获取的RNA样品直接用于后续的逆转录PCR扩增；
利用酶切技术从凝胶中精准取出RNA分子，具体方法步骤包括如下：
S511、通过电泳产生RNA条带分离后，利用含碘化乙锭的琼脂糖凝胶呈现紫色RNA条带分布情况；
S512、根据条带位置与大小，确定RNA标本条带位置；
S513、将针孔大小的蛋白酶溶于缓冲液中，滴加到需要切割的带状区域内，孵育一段时间，使酶溶解固定RNA的凝胶基质，孵育温度控制在37℃左右，孵育时间控制在30min左右；
S514、将切割取出的凝胶块轻轻放入EP管内，加入缓冲液进行离心萃取，取出其中的RNA样品；
S515、获取的RNA样品直接用于后续的逆转录PCR扩增。
利用酶切或激光切割技术精确截取凝胶条带区域中的RNA样品。
精准性高：通过计算机控制激光精确切割，或者利用针孔大小的蛋白酶溶解指定区域，能够在条带级别准确取出目的RNA分子；
效率高：通过自动化程序一次取出整块带状凝胶，比手动操作效率高；
不污染：激光切割无污染，酶裂解后清洗去除酶即可，不会带入其他杂质污染RNA样品；
重复性好：通过标准操作步骤，各次实验取得RNA的量与质量更容易控制在一个范围内；
节约时间成本：比依靠手动操作缩短RNA提取时间，提高检测通过量；
提高可靠性：自动化操作降低人为因素，提高实验重复性和可靠性；
适用于高通量检测：该方法提取RNA效率高，更适用于大规模快速检测。
具体改进地，步骤S5中，利用芯片内固定的单分子荧光标记技术进行荧光标记的具体方法步骤包括如下：
S601、在微流体芯片通道内固定具有荧光标记基团的单链RNA探针；
S602、探针与病毒RNA结合后，单个荧光标记基团发生化学反应即被点亮发出荧光；
利用单分子探测技术进行计数的具体方法步骤包括如下：
S701、利用固定在芯片上的高倍显微镜通过超快闪光灯照亮通道；
S702、高灵敏度CCD相机采集每个荧光点的位置和强度信息；
S703、计算软件对图像进行分析处理，定量计数通道内单次通过期间发光的荧光点个数；
S704、多次探测结果统计，计数出RNA分子通过的总数。
计算软件对图像进行分析处理的具体步骤为：将CCD相机获得的荧光点图片导入软件；设定一个适当的亮度阈值；软件扫描图像每个像素，判断其亮度是否大于阈值；亮度大于阈值的像素定为一个荧光点；统计这一轮扫描检测到的荧光点数量；重复多轮扫描和统计，获得多次通过检测期间荧光点总数；将各次检测结果总和，输出RNA分子的平均通过数量。
其中单分子探测技术采用高精度的光学镜头及超快闪光灯，实现单次探测视野内的所有荧光标记，并进行计数算法识别，以此确定通过芯片的病毒RNA分子数，直接反映出血液样本内的病毒滴度数值。
与传统荧光法相比,该技术通过单个分子层面进行定量，精度和灵敏度更高。
疱疹病毒属于RNA病毒，其基因组主要以单链线性RNA形式存在于病毒粒子内，病毒RNA比DNA更易于从病毒体外释放出来，在血液样品中浓度较高，更容易检测到；
相比DNA，RNA分子半衰期较短，且在体外更易降解，这样在检测初期病毒感染时，RNA水平会更高，这有利于提高检测方法的灵敏度；
RNA病毒在初感染期间主要以RNA形式进行增殖与表达，较DNA更直接反应病毒活性，检测RNA可以更好评估病毒滴度浓度和活性水平；
该方法采用的单链RNA探针技术专门设计用于与RNA分子配对，不能与DNA结合，从而保证了检测的特异性；
RNA分子的结构较DNA灵活，对单链RNA探针的特异结合也较为稳定，有利于提高检测方法的精密度；
以RNA为检测目标分子，能够实现该方法提出的快速、敏感、特异的临床检测效果。
“特异性”指的是采用设计精准的单链RNA探针，只能特别地与疱疹病毒RNA发生结合反应，但是无法与其他病原体的RNA(如其它病毒、细菌等)发生结合；单链RNA探针仅对疱疹病毒RNA具有高选择性，不会对其他非目标RNA产生非特异的反应，从而避免假阳性结果；实现了检测方法对疱疹病毒RNA的特异性识别。
“单链RNA抗体技术”是一种新型的核酸裂解技术，可以设计和合成可以特异地识别和结合某种RNA目标的单链寡核苷酸。
综述，采用单分子光学技术检测血样中疱疹病毒的RNA分子，通过分子级别的快速定量，实现非常高灵敏度和特异性的滴度定量检测；与现有PCR及酶联免疫测定等传统检测方法相比，本发明方法检测速度较快，可在1小时内完成，且灵敏度可达到单分子级别，精度可达到99%以上，为临床提供了一种新型高效精确的疱疹检测试剂。
以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点,对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。不应将权利要求中的任何附图标记视为限制所涉及的权利要求。
此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。
Claims (7)
1.一种疱疹病毒滴度的快速检测方法，其特征在于，方法步骤包括如下：
S1、首先利用单链RNA抗体技术，设计出能特异结合疱疹病毒RNA的单链核酸探针；
S2、然后利用凝胶电泳将血液样本经过胶体精华，取出RNA分子；
S3、随后，将RNA样本放入微型流体芯片内，设置了单链RNA探针的流通通道；
S4、疱疹病毒RNA分子通过通道，与探针进行结合；
S5、利用芯片内固定的单分子荧光标记技术进行荧光标记，并利用单分子探测技术进行计数。
2.根据权利要求1所述的一种疱疹病毒滴度的快速检测方法，其特征在于：步骤S1中，利用单链RNA抗体技术的具体方法步骤包括如下：
S101、通过计算机计算对疱疹病毒RNA序列进行分析，预测能与其激动区结合的RNA结构；
S102、利用人工定向进化技术，设计出10-15核苷酸长的寡核苷酸序列，与病毒RNA序列特定核苷酸区段发生互补配对；
S103、利用固相合成法合成这类单链RNA序列，即单链RNA抗体；
S104、进一步筛选出对病毒RNA识别特异性和亲和力最强的单链RNA序列作为探针。
3.根据权利要求2所述的一种疱疹病毒滴度的快速检测方法，其特征在于：人工定向进化技术是利用计算机算法模拟生物进化的原理，进行定向设计和选择单链RNA序列，人工定向进化技术的具体方法步骤为：
S201、初始生成数万条随机的单链RNA序列库；
S202、根据疱疹病毒RNA结构特征，设计配对规则评估每条序列的匹配程度；
S203、选择匹配程度高的序列进行酶修饰和点突变，生成新的序列库；
S204、反复进行S202和S203，保留每次匹配程度最高的新序列；
S205、经多轮进化，将匹配目标所需结构的几条序列选出作为候选探针；
S206、对候选探针进行实验鉴定，选出识别能力最强的作为单链RNA抗体。
4.根据权利要求3所述的一种疱疹病毒滴度的快速检测方法，其特征在于：固相合成法利用材料实体固相表面结合的单体核苷酸按顺序进行酶促反应合成拟定序列的寡核苷酸，固相合成法的具体步骤为：
S301、在玻片固相材料表面固定初基配体；
S302、应用3'-保护基团核苷酸单体依次添加，与初基进行酶促缩合反应连成链；
S303、反应完成后用缓冲液洗去未结合的单体，保留合成产物；
S304、脱保护基团，继续下一次添加不同单体进行延伸式合成；
S305、重复上述步骤直至合成期望序列的寡核苷酸。
5.根据权利要求1所述的一种疱疹病毒滴度的快速检测方法，其特征在于：步骤S2中，利用凝胶电泳将血液样本精华取出RNA分子的具体步骤为：
S401、取试验血液样本，加入缓冲溶液处理裂解样本中的细胞，释放出细胞内的RNA分子；
S402、将样本置于含碘化乙锭的琼脂糖凝胶中，并应用垂直向下的电场进行电泳迁移；
S403、电泳结束后，根据RNA分子本身荧光标记或用荧光胶片视化，定位到不同位置的RNA条带；
S405、利用激光或酶切的方法从凝胶中精准割取带状区域，取出目的RNA分子；
S406、采用逆转录及PCR扩增RNA，获得充分的RNA样品供后续检测使用。
6.根据权利要求5所述的一种疱疹病毒滴度的快速检测方法，其特征在于：利用激光技术从凝胶中精准取出RNA分子，具体方法步骤包括如下：
S501、通过电泳产生RNA条带分离后，利用含碘化乙锭的琼脂糖凝胶呈现紫色RNA条带分布情况；
S502、根据条带位置与大小，确定RNA标本条带位置；
S503、将凝胶平放在激光切割仪下，利用计算机控制激光光纤对准需要切割的RNA条带位置；
S504、激光按照程序循环快速扫射切割，精确切除带状区域的凝胶块；
S505、将切割取出的凝胶块轻轻放入EP管内，加入缓冲液进行离心萃取，取出其中的RNA样品；
S506、获取的RNA样品直接用于后续的逆转录PCR扩增；
利用酶切技术从凝胶中精准取出RNA分子，具体方法步骤包括如下：
S511、通过电泳产生RNA条带分离后，利用含碘化乙锭的琼脂糖凝胶呈现紫色RNA条带分布情况；
S512、根据条带位置与大小，确定RNA标本条带位置；
S513、将针孔大小的蛋白酶溶于缓冲液中，滴加到需要切割的带状区域内，孵育一段时间，使酶溶解固定RNA的凝胶基质，孵育温度控制在37℃左右，孵育时间控制在30min左右；
S514、将切割取出的凝胶块轻轻放入EP管内，加入缓冲液进行离心萃取，取出其中的RNA样品；
S515、获取的RNA样品直接用于后续的逆转录PCR扩增。
7.根据权利要求1所述的一种疱疹病毒滴度的快速检测方法，其特征在于：步骤S5中，利用芯片内固定的单分子荧光标记技术进行荧光标记的具体方法步骤包括如下：
S601、在微流体芯片通道内固定具有荧光标记基团的单链RNA探针；
S602、探针与病毒RNA结合后，单个荧光标记基团发生化学反应即被点亮发出荧光；
利用单分子探测技术进行计数的具体方法步骤包括如下：
S701、利用固定在芯片上的高倍显微镜通过超快闪光灯照亮通道；
S702、高灵敏度CCD相机采集每个荧光点的位置和强度信息；
S703、计算软件对图像进行分析处理，定量计数通道内单次通过期间发光的荧光点个数；
S704、多次探测结果统计，计数出RNA分子通过的总数。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202311723482.9A CN117403010A (zh) | 2023-12-15 | 2023-12-15 | 一种疱疹病毒滴度的快速检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202311723482.9A CN117403010A (zh) | 2023-12-15 | 2023-12-15 | 一种疱疹病毒滴度的快速检测方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN117403010A true CN117403010A (zh) | 2024-01-16 |
Family
ID=89498344
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202311723482.9A Pending CN117403010A (zh) | 2023-12-15 | 2023-12-15 | 一种疱疹病毒滴度的快速检测方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN117403010A (zh) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1814799A (zh) * | 2005-12-09 | 2006-08-09 | 浙江大学 | 疱疹类病毒基因芯片及其应用 |
| CN102102131A (zh) * | 2009-12-17 | 2011-06-22 | 上海裕隆临床检验中心有限公司 | 检测单纯疱疹病毒ⅱ型荧光pcr试剂盒 |
| CN103981289A (zh) * | 2014-06-06 | 2014-08-13 | 山东大学齐鲁儿童医院 | 同时检测人类疱疹病毒及肠道病毒的基因芯片 |
| CN113061665A (zh) * | 2021-04-01 | 2021-07-02 | 深圳市刚竹医疗科技有限公司 | 核酸组合产品、检测试剂盒及微流控芯片 |
-
2023
- 2023-12-15 CN CN202311723482.9A patent/CN117403010A/zh active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1814799A (zh) * | 2005-12-09 | 2006-08-09 | 浙江大学 | 疱疹类病毒基因芯片及其应用 |
| CN102102131A (zh) * | 2009-12-17 | 2011-06-22 | 上海裕隆临床检验中心有限公司 | 检测单纯疱疹病毒ⅱ型荧光pcr试剂盒 |
| CN103981289A (zh) * | 2014-06-06 | 2014-08-13 | 山东大学齐鲁儿童医院 | 同时检测人类疱疹病毒及肠道病毒的基因芯片 |
| CN113061665A (zh) * | 2021-04-01 | 2021-07-02 | 深圳市刚竹医疗科技有限公司 | 核酸组合产品、检测试剂盒及微流控芯片 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 朱艳敏 等: "检测7种疱疹病毒的基因芯片法及其初步应用", 临床检验杂志, vol. 27, no. 5, 15 September 2009 (2009-09-15), pages 363 - 364 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US10030240B2 (en) | Two-dimensional cell array device and apparatus for gene quantification and sequence analysis | |
| JP5878154B2 (ja) | ２次元ｃＤＮＡライブラリを用いた遺伝子発現解析方法 | |
| JP6404714B2 (ja) | 多変量診断アッセイ及びこれを用いるための方法 | |
| US20120088691A1 (en) | Highly multiplexed real-time pcr using encoded microbeads | |
| US20240093291A1 (en) | Spatial genomics with single cell resolution | |
| ES2573092T3 (es) | Detección de repeticiones de multinucleótido | |
| CN111154754A (zh) | 分析dna样品的探针集合和使用所述探针集合的方法 | |
| CN101586149B (zh) | 寡核苷酸芯片及其应用 | |
| WO2006012302A2 (en) | Methods for rna fluorescence in situ hybridization | |
| RU2633692C2 (ru) | Праймер и способ мультиплексного тестирования с помощью суспензионных микрочипов патогенов, передающихся клещами | |
| US11091803B2 (en) | Nucleic acid quantification method | |
| US20160258005A1 (en) | Methods for rapid ribonucleic acid fluorescence in situ hybridization | |
| Goodwin et al. | 1D genome sequencing on the oxford nanopore MinION | |
| Bartlett | Approaches to the analysis of gene expression using mRNA: a technical overview | |
| CN117403010A (zh) | 一种疱疹病毒滴度的快速检测方法 | |
| CN112626215B (zh) | Aml预后相关基因表达检测试剂盒 | |
| JP4262336B2 (ja) | 標的核酸の定量分析方法 | |
| WO2021039777A1 (ja) | 関節リウマチを検査する方法 | |
| CN104087671A (zh) | 一种用于检测人21号染色体数目的试剂盒 | |
| US20170335382A1 (en) | Isothermal Amplification Assay for the Detection of Short Nucleic Acid Sequences | |
| Bartlett et al. | Fundamental approaches in molecular biology for communication sciences and disorders | |
| US20150159224A1 (en) | Ultrasensitive detection and characterization of clustered kras mutations using peptide nucleic acid clamp pcr in drop-based microfluidics | |
| RU2472859C1 (ru) | Способ формирования систем маркеров метилирования днк | |
| Kaoud Hussein | Advanced technology for the diagnosis of fish diseases | |
| US20130196878A1 (en) | Apparatus and method for detecting multiplex target nucleic acids in real time |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |