CN117362375A - 用于合成3d-mpl的中间体、其制备方法及其应用 - Google Patents

用于合成3d-mpl的中间体、其制备方法及其应用 Download PDF

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CN117362375A CN202311606120.1A CN202311606120A CN117362375A CN 117362375 A CN117362375 A CN 117362375A CN 202311606120 A CN202311606120 A CN 202311606120A CN 117362375 A CN117362375 A CN 117362375A
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Abstract

本发明涉及药物化学技术领域，具体而言，涉及用于合成3D‑MPL的中间体、其制备方法及其应用。一种用于合成3D‑MPL的第一中间体选自下述结构式所示化合物：，其中，n1和n2分别选自8~12之间的任意整数。中间体中的保护基团可以高效方便的去除，显著缩短了合成3D‑MPL的路线，显著提升总收率。

Description

用于合成3D-MPL的中间体、其制备方法及其应用
技术领域
本发明涉及药物化学技术领域，具体而言，涉及用于合成3D-MPL的中间体、其制备方法及其应用。
背景技术
免疫佐剂是一类主要改变细胞因子水平来增强疫苗效果，一般通过激活MHC分子，共刺激因子或细胞内相关信号分子等多种模式。一类典型的革兰氏阴性细菌细胞壁中的内毒素脂多糖（LPS），LPS介导免疫激活机制是通过LPS与TLR4（toll-like receptors）和接受子蛋白MyD88，TRIF相互作用，产生炎性因子，比如Th1干扰素，趋化因子等。评价最多的家族分子是单磷酰脂质A（Monophosphoryl Lipid A，以下简称MPL）。Lipid A是一个两亲结构，是一种减毒的LPS衍生物，保留了较好的免疫原性，与LPS作用机制基本相同。相比LPS，MPL的毒性显著的降低，为其0.1%-1%之间，并且被证明显著有效。所以被广泛用作疫苗、过敏药物和免疫疗法的佐剂，用以增强免疫反应。一般来说，减毒活疫苗虽然免疫原性较强，但毒性也较大；而无毒性的灭活疫苗，免疫原性较弱。佐剂的添加，可增强灭活疫苗的免疫原性，且不会带来致病风险。MPL为铝盐之外的首个FDA通过的人用新型免疫佐剂物质。天然提取的MPL来源主要有明尼苏达沙门氏菌提取物，主要成分3D-MPL；大肠杆菌提取物EcML，主要成分MPL-12两类走上临床。并且已有多个采用MPL佐剂系统的新疫苗品种在国内外获得上市，如乙肝疫苗Fendrix，宫颈癌疫苗Cerivix，带状疱疹疫苗Shingrix以及疟疾疫苗Mosquirix。
现有MPL来源大多为生物提取，由于来源于不同细菌或同一细菌不同血清型的MPL其结构不同，基本差别在于脂肪链的数量/连接位置和脂肪链碳链长度，生物提取的MPL大多为混合物，且混合比例浮动较大质量极不稳定，作为佐剂使用有很大的安全隐患。同时通过合成的MPLA较天然提取的MPL相比，对免疫小鼠的细胞因子诱导水平高，CD4+T细胞，CD8+T细胞诱导水平相当，但合成的MPLA可以诱导激活NKT细胞。合成MPL是当前热点，目前已经进入临床前评价的有GLA（MPLA），3D-MPL等多种，但是结构复杂，路线较长，合成难点如下：
1、通常提供磷酸基团的配体一般为焦磷酸苄酯（di-O-benzyloxy(N,N-diisopropylamino)phosphine）或邻亚二甲苯基 N,N-二乙基亚磷酰胺作为磷酸基的来源，使用Bn为保护基。以上这些保护基最后都必须使用氢化条件才能脱除，且纯化复杂，难以实现规模化生产。
2、目前MPL类似物的全合成报道的合成路线均较长；除了使用的苄基保护基在后期脱保护时难以完全除去之外；为避免反应中产生副反应，通常需要一些临时性的保护基，导致涉及多个保护基，需要反复保护脱保护，导致路线冗长、选择性差、收率低、杂质多。
发明人针对这些问题，已经研发了卓有成效的MPLA合成工艺；考虑到3D-MPL较MPLA化学结构更稳定，并且临床前实验显示抗炎，抗病毒等较MPLA更好；也可以显著提高免疫小鼠抗体滴度IgG。所以我们进一步开发了可规模化合成的3D-MPL。基于此，提出本发明。
3D-MPL结构如下所示；
式中，n1~n6独立的为8~12之间的任意整数，优选的，n1，n3和n5独立地为10，12和14，n2，n4和n6独立地为8、10或12。
发明内容
本发明的目的在于提供用于合成3D-MPL的中间体、其制备方法及其应用。本发明实施例提供一系列新的用于合成3D-MPL的中间体，这些中间体中的保护基团可以高效方便的去除，显著缩短了合成3D-MPL的路线，显著提升总收率。
本发明是这样实现的：
第一方面，本发明提供一种用于合成3D-MPL的第一中间体（下文也称为化合物5），所述第一中间体选自下述结构式所示化合物：
，其中，n1和n2分别选自8~12之间的任意整数。
第二方面，本发明提供一种前述实施方式所述的用于合成3D-MPL的第一中间体的制备方法，包括参照下述合成路径进行合成：
，其中，n1和n2分别选自8~12之间的任意整数。
第三方面，本发明提供一种用于合成3D-MPL的第二中间体（下文也称为化合物6），所述第二中间体选自下述结构式所示化合物：
，其中，n1和n2分别选自8~12之间的任意整数。
第四方面，本发明提供一种前述实施方式所述的用于合成3D-MPL的第二中间体的制备方法，包括: 在有机溶剂中，在酸催化剂存在下，将前述实施方式所述的第一中间体与化合物B进行糖苷化反应，得到第二中间体；具体合成路径如下：
，其中，n1和n2分别选自8~12之间的任意整数。
第五方面，本发明提供一种用于合成3D-MPL的第三中间体（下文也称为化合物7），所述第三中间体选自下述结构式所示化合物：
，其中，n1和n2分别选自8~12之间的任意整数。
第六方面，本发明提供一种前述实施方式所述的用于合成3D-MPL的第三中间体的制备方法，包括：在有机溶剂中，在锌粉/酸催化条件下，进行前述实施方式所述的第二中间体2位Troc保护基脱除反应，得到所述第三中间体，具体合成路径如下：
，其中，n1和n2分别选自8~12之间的任意整数。
第七方面，本发明提供一种用于合成3D-MPL的第四中间体（下文也称为化合物8），所述第四中间体选自下述结构式所示化合物：
，其中，n1和n2分别选自8~12之间的任意整数。
第八方面，本发明提供一种前述实施方式所述的一种用于合成3D-MPL的第四中间体的制备方法，在有机溶剂中，在缩合剂催化条件下，将前述实施方式所述的第三中间体与化合物C进行酰胺化缩合反应，得到所述第四中间体；具体合成路径如下：
，其中，n1和n2分别选自8~12之间的任意整数。
第九方面，本发明提供一种用于合成3D-MPL的第五中间体（下文也称为化合物9），所述第五中间体选自下述结构式所示化合物：
，其中，n1和n2分别选自8~12之间的任意整数。
第十方面，本发明提供一种前述实施方式所述的一种用于合成3D-MPL的第五中间体的制备方法，包括：在有机溶剂中，在脱硅醚催化条件下，将前述实施方式所述的第四中间体进行硅醚保护基脱除反应，得到所述第五中间体；具体合成路径如下：
，其中，n1和n2分别选自8~12之间的任意整数。
第十一方面，本发明提供一种用于合成3D-MPL的第六中间体（下文也称为化合物10），所述第六中间体选自下述结构式所示化合物：
，其中，n1至n6分别选自8~12之间的任意整数。
第十二方面，本发明提供一种前述实施方式所述的一种用于合成3D-MPL的第六中间体的制备方法，包括：在有机溶剂中，在钯催化条件下，将前述实施方式所述的第五中间体进行烯丙氧基保护基脱除反应，得到所述第六中间体；具体合成路径如下：
，其中，n1至n6分别选自8~12之间的任意整数。
第十三方面，本发明提供一种3D-MPL的制备方法，包括：利用前述实施方式所述的一种用于合成3D-MPL的第一中间体、前述实施方式所述的一种用于合成3D-MPL的第二中间体、前述实施方式所述的一种用于合成3D-MPL的第三中间体、前述实施方式所述的一种用于合成3D-MPL的第四中间体、前述实施方式所述的一种用于合成3D-MPL的第五中间体或前述实施方式所述的一种用于合成3D-MPL的第六中间体中的任意一种制备3D-MPL。
第十四方面，本发明提供一种前述实施方式所述的一种用于合成3D-MPL的第一中间体、前述实施方式所述的一种用于合成3D-MPL的第二中间体、前述实施方式所述的一种用于合成3D-MPL的第三中间体、前述实施方式所述的一种用于合成3D-MPL的第四中间体、前述实施方式所述的一种用于合成3D-MPL的第五中间体或前述实施方式所述的一种用于合成3D-MPL的第六中间体在制备免疫佐剂3D-MPL中的应用。
本发明具有以下有益效果：本发明实施例提供的系列中间体（化合物5至化合物10）中新化合物5使用烯丙氧羰基（Alloc）选择性保护3位，萘甲基（Nap）为4位保护基；新化合物6，选择萘甲基（Nap），烯丙基（Allyl），烯丙氧羰基（Alloc）硅醚（TBS）作为保护基；新化合物7、8、9和10以烯丙基磷酸配体为3D-MPL中磷酸基团来源，Nap为保护基，在后续操作中均可以方便的除去；合成的上述中间体路线短，总收率明显增加，为3D-MPL的合成和放大提供了基础。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
图1为本发明实施例7提供化合物5的核磁氢谱图；
图2为本发明实施例7提供化合物5的质谱图；
图3为本发明实施例8提供化合物6的核磁氢谱图；
图4为本发明实施例8提供化合物6的核磁碳谱图；
图5为本发明实施例8提供化合物6的质谱图；
图6为本发明实施例9提供化合物7的核磁氢谱图；
图7为本发明实施例9提供化合物7的核磁碳谱图；
图8为本发明实施例9提供化合物7的质谱图；
图9为本发明实施例10提供化合物8的核磁氢谱图；
图10为本发明实施例10提供化合物8的核磁碳谱图；
图11为本发明实施例10提供化合物8的质谱图；
图12为本发明实施例11提供化合物9的核磁氢谱图；
图13为本发明实施例11提供化合物9的核磁碳谱图；
图14为本发明实施例11提供化合物9的质谱图；
图15为本发明实施例12提供化合物10的核磁氢谱图；
图16为本发明实施例12提供化合物10的核磁碳谱图；
图17为本发明实施例12提供化合物10的质谱图。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
第一方面，本发明提供一种用于合成3D-MPL的第一中间体（下文也称为化合物5），所述第一中间体选自下述结构式所示化合物：
，其中，n1和n2分别选自8~12之间的任意整数，优选的，n1为10、12或14，n2为8、10或12。
具体地，化合物5选自其选自下述结构式所示的化合物中的任意一种：
。
本发明实施例特定地采用TBS和Alloc作为保护基，不仅保证后续中间体的形成以及3D-MPL的合成，还能保证有较高的收率。发明人发现若是更改了保护基，例如将Alloc改为三氯乙腈、Nap、苄基或者TBS等保护基可能导致后续反应不能进行，导致反应收率低甚至不能形成3D-MPL。
第二方面，本发明提供一种前述实施方式所述的用于合成3D-MPL的第一中间体的制备方法，包括：
（1）合成化合物2；
在有机溶剂中，在缚酸剂的存在下，将化合物1与氯甲酸烯丙基酯进行反应，得到所述化合物2；具体合成路径如下：
。
其中，有机溶剂为卤代烷烃类溶剂，优选为二氯甲烷和/或三氯甲烷；化合物1与有机溶剂的质量体积比可为50~200 g/L，优选为100 g/L。缚酸剂为吡啶、三乙胺、四甲基乙二胺（TMEDA），优选为TMEDA。缚酸剂与的化合物1的摩尔比为1~3:1，优选为1~2:1。氯甲酸烯丙基酯与化合物1的摩尔比为2~5:1，优选为3~4:1。反应的温度为0~30℃，优选为10~20℃。监控所述反应的进程，以化合物1消失或含量不再减少时为反应终点，优选的，反应的时间优选1-5 h。
反应还包括以下后处理步骤：反应结束后，淬灭，洗涤，干燥，过滤，浓缩，分离纯化；例如，洗涤依次采用饱和碳酸氢钠溶液和饱和氯化钠溶液进行洗涤；分离纯化为柱层析分离，柱层析分离的填料为硅胶，柱层析分离的洗脱剂为石油醚与乙酸乙酯。
需要说明的是，化合物2中的保护基只能采用上述3中保护基，且位置不能变。若更改了上述3中保护基中的任意一种，都可能导致后续反应不能进行，例如化合物6形成化合物7时，可能不仅仅脱除NH上的Troc，还可能脱除TBS或者Alloc，若Alloc改为其他保护基，则可能子在脱除TBS时，Alloc位置的保护基也会脱除，导致反应不能顺利进行或者收率显著降低。
（2）合成化合物3；
在有机溶剂中，在醋酸及锌粉的作用下，将化合物2进行还原反应，得到所述化合物3；具体合成路径如下：
。
其中，所述有机溶剂为卤代烷烃类溶剂，优选为二氯甲烷和/或三氯甲烷；化合物2与有机溶剂的质量体积比为50~200 g/L；优选为100 g/L；醋酸与化合物2的质量比为2~5:1，优选为3.5:1。锌粉与化合物2的质量比为1~3:1，优选为2:1。反应的温度为0~30℃，优选为10-20℃。监控所述反应的进程，以化合物2消失或含量不再减少时为反应终点，优选的，反应的时间优选3-6 h。
操作步骤还包括反应结束后进行以下后处理步骤：反应结束后，过滤，洗涤，干燥，浓缩，分离纯化；例如，所述的洗涤依次采用饱和碳酸氢钠溶液和饱和氯化钠溶液进行洗涤；分离纯化为柱层析分离，柱层析分离的填料为硅胶，洗脱剂为石油醚与乙酸乙酯。
（3）合成化合物4；
在有机溶剂中，在三乙基硅烷（Et3SiH）和二氯苯基硼烷（PhBCl2）存在下，将化合物3进行选择性还原开环反应，得到化合物4；具体合成路径如下：
。
其中，所述有机溶剂为卤代烷烃类溶剂，优选为二氯甲烷和/或三氯甲烷；化合物3与有机溶剂的质量体积比为50~200 g/L； Et3SiH与化合物3的摩尔比为2~5:1，优选为3:1；PhBCl2与化合物3的摩尔比为2~5:1，优选为3:1；反应的温度为-90~40℃，优选为-78℃；监控反应的进程，以化合物消3失或含量不再减少时为反应终点；优选的，反应的时间0.5-2h。
步骤还包括反应结束后进行以下后处理步骤：反应结束后，依次进行淬灭，过滤，洗涤，干燥，浓缩和分离纯化反应产物。例如，淬灭采用吡啶或三乙胺；洗涤可依次采用饱和碳酸氢钠溶液和饱和氯化钠溶液进行洗涤；分离纯化为柱层析分离，柱层析分离的填料为硅胶，洗脱剂为石油醚与乙酸乙酯。
（4）合成化合物5；
在有机溶剂中，在缩合剂存在下，将化合物4与化合物A进行如下所示的酰化反应，得到化合物5即第一中间体；参照下述合成路径进行合成：
，式中，n1和n2分别为8~12之间的任意整数，优选地，n1为10、12或14，n2为8、10或12。
其中，有机溶剂为卤代烷烃类溶剂，优选为二氯甲烷和/或三氯甲烷；缩合剂为1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐（EDC·HCl）、二环己基碳二亚胺（DCC）和N,N'-二异丙基碳二亚胺（DIC）中的一种或多种，优选为1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐；化合物4与有机溶剂的质量体积比为：50~200 g/L；缩合剂与化合物4的摩尔比为1~5:1，优选为1~3:1；化合物A与化合物4的摩尔比为1~3:1，优选为1~2.5:1；反应的温度为-10~50℃，更优选为10~30℃；监控所反应的进程，以化合物4消失或含量不再减少时为反应终点；优选的，反应的时间为2~12h。
操作步骤还包括酰化反应结束后进行以下后处理步骤：反应结束后依次进行洗涤，干燥，过滤，浓缩和分离纯化目的产物。例如，洗涤为依次使用饱和碳酸氢钠溶液和饱和氯化钠溶液洗涤；分离纯化为柱层析分离，柱层析分离的填料为硅胶，洗脱剂为石油醚与乙酸乙酯。
第三方面，本发明提供一种用于合成3D-MPL的第二中间体（下文也称为化合物6），所述第二中间体选自下述结构式所示化合物：
，其中，n1和n2分别选自8~12之间的任意整数，优选地，n1为10、12或14，n2为8、10或12。
例如下任一具体结构的化合物：
。
第四方面，本发明提供一种前述实施方式所述的用于合成3D-MPL的第二中间体的制备方法，包括: 在有机溶剂中，在酸催化剂存在下，将前述实施方式所述的第一中间体与化合物B进行糖苷化反应，得到第二中间体；具体合成路径如下：
/>
，式中，n1和n2分别为8~12之间的任意整数，优选地，n1为10、12或14，n2为8、10或12。
其中，有机溶剂为卤代烷烃类溶剂，更优选为二氯甲烷和/或三氯甲烷；化合物5与有机溶剂的质量体积比为：50~200 g/L；酸催化剂为三氟甲磺酸（TfOH）、三氟甲磺酸三甲基硅酯（TMSOTf）和三氟甲磺酸酐（Tf2O）中的一种或多种；优选为三氟甲磺酸（TfOH）；酸催化剂与化合物5的摩尔比为3~5:1，优选的，酸催化剂与化合物5的摩尔比为4~5:1；化合物B与化合物5的摩尔比为5:8~10，优选的，化合物B与化合物5的摩尔比为5：8；反应的温度为-10℃~-40℃，优选的，反应的温度为-20℃；监控反应的进程，以化合物5消失或含量不再减少时为反应终点，优选的，反应的时间为2h-12h，更优选为2-6h。
该制备方法还包括以下后处理步骤：反应结束后，对反应体系依次进行淬灭，浓缩和分离纯化。淬灭试剂选自吡啶，分离纯化优选柱层析分离，柱层析分离的填料为C18或硅胶，柱层析分离的洗脱剂为石油醚与乙酸乙酯。
第五方面，本发明提供一种用于合成3D-MPL的第三中间体（下文也称为化合物7），所述第三中间体选自下述结构式所示化合物：
，其中，n1和n2分别选自8~12之间的任意整数，优选地，n1为10、12或14，n2为8、10或12。
例如为如下任一具体结构的化合物：
。
第六方面，本发明提供一种前述实施方式所述的用于合成3D-MPL的第三中间体的制备方法，包括：在有机溶剂中，在锌粉/酸催化条件下，进行前述实施方式所述的第二中间体2位Troc保护基脱除反应，得到所述第三中间体，具体合成路径如下：
，其中，n1和n2分别选自8~12之间的任意整数，优选地，n1为10、12或14，n2为8、10或12。
其中，有机溶剂为卤代烷烃类溶剂，更优选为二氯甲烷和/或三氯甲烷；化合物6与有机溶剂的质量体积比为：50~200 g/L；酸可为乙酸、盐酸、硫酸中的一种或多种；更优选为乙酸；酸与化合物6的质量体积比为1~5g/mL；更优选为3g/mL；金属催化剂锌粉与化合物6的摩尔比可20~15:1，更优选为16：1；反应的温度为10℃~30℃，更优选为室温；监控反应的进程，以化合物6消失或含量不再减少时为反应终点；优选的，反应的时间为2h-6h。
所述的制备方法还包括以下后处理步骤：反应结束后，对反应体系进行洗涤和分离纯化。例如，洗涤为依次用水、饱和碳酸氢钠溶液和饱和氯化钠溶液进行洗涤；离纯化为柱层析分离；柱层析分离的填料为硅胶，洗脱剂为石油醚与乙酸乙酯。
第七方面，本发明提供一种用于合成3D-MPL的第四中间体（下文也称为化合物8），所述第四中间体选自下述结构式所示化合物：
，其中，n1和n2分别选自8~12之间的任意整数，优选地，n1为10、12或14，n2为8、10或12。
例如为如下任一具体结构的化合物：
。
第八方面，本发明提供一种前述实施方式所述的一种用于合成3D-MPL的第四中间体的制备方法，在有机溶剂中，在缩合剂催化条件下，将前述实施方式所述的第三中间体与化合物C进行酰胺化缩合反应，得到所述第四中间体；具体合成路径如下：
，其中，n1和n2分别选自8~12之间的任意整数，优选地，n1为10、12或14，n2为8、10或12。
其中，有机溶剂为卤代烷烃类溶剂，更优选为二氯甲烷和/或三氯甲烷；化合物7与有机溶剂的质量体积比为120~200g/L；缩合剂为1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐（EDC·HCl） 、二环己基碳二亚胺（DCC）和N,N'-二异丙基碳二亚胺（DIC）中的一种或多种；优选为1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐；缩合剂与化合物7的摩尔比为5~10:1，更优选为6：1；化合物C与化合物7的摩尔比为5~10:1，更优选为6：1；反应的温度为10℃~30℃，更优选为室温； 监控反应的进程，化合物7消失或含量不再减少时为反应终点；优选的，反应的时间为2h-6h。
所述的制备方法还包括以下后处理步骤：反应结束后，洗涤，旋干后分离纯化。例如，所述的洗涤为用饱和氯化钠溶液洗涤；所述的分离纯化为：旋干后通过C18填料纯化，使用乙腈，甲醇，氯仿依次洗脱，再使用硅胶柱色谱纯化，洗脱剂为石油醚和乙酸乙酯。
第九方面，本发明提供一种用于合成3D-MPL的第五中间体（下文也称为化合物9），所述第五中间体选自下述结构式所示化合物：
，其中，n1和n2分别选自8~12之间的任意整数，优选地，n1为10、12或14，n2为8、10或12。
例如为如下任一具体结构的化合物：
。
第十方面，本发明提供一种前述实施方式所述的一种用于合成3D-MPL的第五中间体的制备方法，包括：在有机溶剂中，在脱硅醚催化条件下，将前述实施方式所述的第四中间体进行硅醚保护基脱除反应，得到所述第五中间体；具体合成路径如下：
，其中，n1和n2分别选自8~12之间的任意整数，优选地，n1为10、12或14，n2为8、10或12。
其中，有机溶剂为呋喃类溶剂，优选为四氢呋喃；化合物8与有机溶剂的质量体积比可为30~40g/L；脱硅醚催化剂为HF/Py，其中Py的质量分数为65-70%；脱硅醚催化剂与所化合物8的质量体积比为50 -150g/L，优选为100g/L；反应的温度可10℃~30℃，优选为室温； 监控反应的进程，化合物8消失或含量不再减少时为反应终点；优选的，反应的时间为8~16h，更优选为8~12h。
所述的制备方法还包括以下后处理步骤：反应结束后，进行淬灭、萃取、浓缩及纯化。例如，淬灭为加入饱和碳酸氢钠水溶液中和，萃取为使用氯仿进行提取，浓缩为有机溶剂通过旋转蒸发仪浓缩至恒重，所纯化为通过C18填料层析纯化，使用乙腈，甲醇，氯仿依次洗脱得目标产物。
第十一方面，本发明提供一种用于合成3D-MPL的第六中间体（下文也称为化合物10），所述第六中间体选自下述结构式所示化合物：
，其中，n1至n6分别选自8~12之间的任意整数，优选的，n1，n3和n5独立地为10，12和14，n2，n4和n6独立地为8、10或12。
例如为如下任一具体结构的化合物：
。
第十二方面，本发明提供一种前述实施方式所述的一种用于合成3D-MPL的第六中间体的制备方法，包括：在有机溶剂中，在钯催化条件下，将前述实施方式所述的第五中间体进行烯丙氧基保护基脱除反应，得到所述第六中间体；具体合成路径如下：
，其中，n1至n6分别选自8~12之间的任意整数，优选的，n1，n3和n5独立地为10，12和14，n2，n4和n6独立地为8、10或12。
其中，有机溶剂为呋喃类溶剂，优选为四氢呋喃；化合物9与有机溶剂的质量体积比为30~40g/L；钯催化剂为四三苯基膦钯，乙酸钯和碳酸钯中的任意一种；优选为四三苯基膦钯；
钯催化剂与化合物9的摩尔比为7：3-5，优选为7：4；反应的温度为10℃~30℃，优选为室温； 监控所述反应的进程，化合物9消失或含量不再减少时为反应终点；优选的，所述反应的时间为2-6h，更优选反应时间为2-4h。
所述的制备方法还包括以下后处理步骤：反应结束后，进行过滤，浓缩及纯化。例如，过滤为过滤除去不溶物，浓缩为通过旋转蒸发仪器浓缩至恒重，纯化为通过C18填料层析纯化，使用乙腈，甲醇，氯仿依次洗脱得目标产物。
第十三方面，本发明提供一种3D-MPL的制备方法，包括：利用前述实施方式所述的一种用于合成3D-MPL的第一中间体、前述实施方式所述的一种用于合成3D-MPL的第二中间体、前述实施方式所述的一种用于合成3D-MPL的第三中间体、前述实施方式所述的一种用于合成3D-MPL的第四中间体、前述实施方式所述的一种用于合成3D-MPL的第五中间体或前述实施方式所述的一种用于合成3D-MPL的第六中间体中的任意一种制备3D-MPL。
例如利用化合物10参照下述合成路径形成3D-MPL：
，其中，n1至n6分别选自8~12之间的任意整数，优选的，n1，n3和n5独立地为10，12和14，n2，n4和n6独立地为8、10或12。
第十四方面，本发明提供一种前述实施方式所述的一种用于合成3D-MPL的第一中间体、前述实施方式所述的一种用于合成3D-MPL的第二中间体、前述实施方式所述的一种用于合成3D-MPL的第三中间体、前述实施方式所述的一种用于合成3D-MPL的第四中间体、前述实施方式所述的一种用于合成3D-MPL的第五中间体或前述实施方式所述的一种用于合成3D-MPL的第六中间体在制备免疫佐剂3D-MPL中的应用。
综上，本发明实施例使用一种化合物4与化合物A进行酰胺缩合反应制备化合物5；再利用化合物5与化合物B（化合物B的合成见中国专利申请CN202010306826.6）进行糖苷化反应，高效制备一种新化合物6；再进行酸脱除Troc保护基，得到新化合物7；同样再与双脂肪链化合物C（与化合物B制法相同）进行酰胺缩合，得到新化合物8；化合物8在HF/Py溶剂下脱除硅醚（TBS），制得化合物物9；化合物9在Pd催化剂条件同时脱除烯丙基（Allyl），烯丙氧羰基（Alloc）制的化合物10；最后在DDQ条件下脱除两个萘甲基Nap即得3D-MPL。新化合物5使用烯丙氧羰基（Alloc）选择性保护3位，萘甲基（Nap）为4位保护基；新化合物6，选择萘甲基（Nap），烯丙基（Allyl），烯丙氧羰基（Alloc），硅醚（TBS）作为保护基；新化合物7、8、9、和10以烯丙基磷酸配体为3D-MPL中磷酸基团来源，Nap为保护基，在后续操作中均可以方便的除去；合成的该中间体路线短，总收率明显增加，为3D-MPL的合成和放大提供了基础。
以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。
实施例1
本实施例提供化合物1的制备方法，参照下述合成路径：
，具体如下：
（1）向加入2-脱氧-1-氧-(1,1-二甲基乙基)二甲基硅烷基-2-[(2,2,2-三氯乙氧基)羰基]氨基-3,4,6-三乙酰基-β-D-葡萄糖(10 g，16.8 mmol)的反应瓶中缓慢加入胍啶盐酸盐缓冲溶液(100 mL, pH=8)，室温搅拌3.5h。
（2）TLC检测原料消耗完后，反应液用阳离子树脂中和，过滤浓缩，用二氯甲烷和饱和碳酸氢钠溶液萃取产物，收集有机层浓缩得到2-脱氧-1-氧-(1,1-二甲基乙基)二甲基硅烷基-2-[(2,2,2-三氯乙氧基)羰基]氨基-β-D-葡萄糖(1-1, 8.23g)。
（3）在反应瓶中将1-1与2-(二甲氧基甲基)-萘(5.1 g，25 mmol，1.5 eq)溶解在50mL乙腈中，加入樟脑磺酸(0.39 g，1.69 mmol，0.1 eq)，室温下搅拌4 h反应，加入三乙胺至中性，反应液用二氯甲烷与饱和碳酸氢钠溶液萃取，分液。有机相干燥旋干后得到黄色固体物。粗品过硅胶砂芯漏斗(PE:EA=5:1)得到化合物1(浅黄色固体，6.97 g)，两步收率为68.3%。
TOF-MS:m/z:607.89[M+H]+。
化合物1：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.96 – 7.50 (m, 7H), 5.72 (s, 1H),5.17 (d,J= 6.3 Hz, 1H), 4.88 (d,J= 7.7 Hz, 1H), 4.73 (q,J= 12.0 Hz, 2H), 4.36(dd,J= 10.5, 5.0 Hz, 1H), 4.13 – 4.01 (m, 1H), 3.86 (t,J= 10.3 Hz, 1H), 3.70– 3.58 (m, 1H), 3.52 (td,J= 9.7, 5.0 Hz, 1H), 3.47 – 3.35 (m, 1H), 2.96 (s,1H), 0.94 (d,J= 8.2 Hz, 9H), 0.20 – 0.08 (m, 6H)。
13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 154.54, 134.52, 133.78, 132.87, 128.41,128.29, 127.75, 126.69, 126.41, 126.07, 123.93, 101.97, 96.33, 95.30, 81.52,74.85, 70.71, 68.68, 66.20, 60.73, 26.94, 25.59, 17.90, -4.14, -5.26。
实施例2
本实施例提供化合物2的制备方法，参照下述合成路径：
/>
将化合物1（10g，16.47mmol）溶于100ml二氯甲烷中，加入TMEDA（3g，25.82mmol），冰浴下加入氯甲酸烯丙基酯（6g，49.78mmol），室温搅拌2小时后化合物1消耗完全。
将反应液倒入冰水（100ml）中淬灭，分液后得反应液，反应液依次使用饱和碳酸氢钠溶液（100ml）和饱和食盐水（100ml）洗涤分液。
旋干硅胶柱色谱纯化（石油醚：乙酸乙酯=10:1）得到化合物2 (11.3g, 90%，无色油状液体)。
TOF-MS:m/z:714.13[M+Na]+。
化合物2：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.99 – 7.44 (m, 7H), 5.95 – 5.80 (m,1H), 5.67 (s, 1H), 5.52 – 5.36 (m, 1H), 5.30 (d,J= 2.7 Hz, 2H), 5.26 – 5.16(m, 2H), 4.79 (dd,J= 16.3, 9.9 Hz, 2H), 4.32 (dd,J= 10.5, 5.0 Hz, 1H), 3.82(dt,J= 13.6, 9.9 Hz, 2H), 3.69 (dd,J= 18.3, 9.4 Hz, 1H), 3.54 (td,J= 9.7, 5.0Hz, 1H), 0.87 (s, 9H), 0.09 – -0.02 (m, 6H)。
13C NMR (151 MHz, CDCl3) δ 134.89 – 132.26 (m), 128.64 – 127.09 (m),126.30 – 125.10 (m), 123.49 (s), 118.41 (s), 101.44 (s), 96.52 (s), 78.96(s), 75.29 (s), 74.40 (s), 68.53 (d,J= 17.1 Hz), 65.91 (s), 58.34 (s), 25.16(s), -5.26 (d,J= 162.0 Hz)。
实施例3
本实施例提供化合物3的制备方法，参照下述合成路径：
将化合物2（11g，15.92mmol）溶于110ml二氯甲烷中，加入锌粉（22g，0.336mol），冰浴下加入乙酸（33ml，3vol），室温搅拌3小时后化合物2消耗完全。
反应液依次使用水（100ml）、饱和碳酸氢钠溶液（100ml）、饱和食盐水（100ml）洗涤分液。旋干硅胶柱色谱纯化（石油醚：乙酸乙酯=8:1）得到化合物3 (8g, 97%，无色油状液体)。
TOF-MS:m/z:538.22[M+Na]+。
化合物3：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.95 (s, 1H), 7.90 – 7.80 (m, 3H),7.53 (ddt,J= 8.6, 6.8, 3.1 Hz, 3H), 5.93 (ddt,J= 16.2, 10.5, 5.7 Hz, 1H),5.68 (s, 1H), 5.45 – 5.28 (m, 1H), 5.21 (dt,J= 7.1, 3.6 Hz, 1H), 5.08 – 4.88(m, 1H), 4.76 – 4.55 (m, 3H), 4.44 – 4.28 (m, 1H), 3.84 (dt,J= 18.9, 9.8 Hz,2H), 3.60 (td,J= 9.8, 5.0 Hz, 1H), 2.96 (dd,J= 10.0, 7.6 Hz, 1H), 0.96 (s,9H), 0.18 (s, 6H)。
13C NMR (151 MHz, CDCl3) δ 134.30 – 132.50 (m), 131.07 (s), 128.24 –127.27 (m), 125.81 (dd,J= 91.4, 25.4 Hz), 123.51 (s), 118.57 (s), 100.31 (d,J= 362.4 Hz), 79.17 (s), 77.54 (s), 68.57 (d,J= 26.0 Hz), 66.33 (s), 58.30(s), 25.33 (s), -5.04 (d,J= 153.6 Hz)。
实施例4
本实施例提供化合物4（原料化合物）的制备方法，参照下述合成路径：
将化合物3（4.3g，8.34mmol）溶于86ml二氯甲烷中，降温至-75℃，依次加入三乙基硅烷（4.85g，25.02mmol）、二氯苯基硼烷（3.3g，20.85mmol），-75℃搅拌1小时后化合物3消耗完全。
反应液加入甲醇（12.9ml，3vol）淬灭，使用三乙胺调节反应液pH至中性。反应液旋干后经硅胶柱色谱纯化得到化合物4 (3.84g, 89%，无色油状液体)。
TOF-MS:m/z:540.24[M+Na]+。
化合物4：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.65 – 7.33 (m, 7H), 5.93 – 5.73 (m,1H), 5.35 – 5.12 (m, 2H), 4.93 – 4.75 (m, 3H), 4.62 – 4.44 (m, 3H), 3.88 (dd,J= 12.0, 2.6 Hz, 1H), 3.81 – 3.60 (m, 2H), 3.48 (ddd,J= 9.6, 4.2, 2.8 Hz,1H), 2.88 – 2.75 (m, 1H), 0.92 (d,J= 2.5 Hz, 9H), 0.15 – -0.06 (m, 6H)。
13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 155.05 (s), 135.28 (d,J= 31.7 Hz), 133.98(s), 133.64 (s), 133.13 (d,J= 20.3 Hz), 131.30 (s), 128.30 – 127.54 (m),126.74 (d,J= 7.7 Hz), 126.27 – 125.63 (m), 119.18 (d,J= 5.9 Hz), 98.94 (s),81.49 (d,J= 13.7 Hz), 76.06 (s), 75.23 (s), 74.92 (s), 68.86 (s), 62.00 (s),58.24 (d,J= 20.9 Hz), 25.71 (s), 18.00 (s), -4.60 (dd,J= 108.8, 13.4 Hz)。
实施例5
本实施例提供化合物A（原料化合物）的制备方法，参照下述合成路径：
将化合物12（10g，0.023mol）溶于100ml二氯甲烷中，依次加入DMAP（0.28g，0.002mol）、吡啶（2.69g，0.034mol），降温至0℃，加入棕榈酰氯（9.32g，0.034mol），反应2小时后化合物12消耗完全。
反应液加入水（200ml，20vol）淬灭，取有机层。反应液依次使用盐酸溶液、碳酸氢钠溶液、氯化钠溶液洗涤。
反应液旋干后经硅胶柱色谱纯化得到化合物12-A（12.9g，84%，白色固体）。
将化合物12-A（13g，0.019mol）溶于130ml二氯甲烷中，加入锌粉（13g，0.199mol），冰浴下加入乙酸（26ml，2vol），室温搅拌3小时后化合物12-A消耗完全。
反应液依次使用水、饱和碳酸氢钠溶液、饱和食盐水洗涤。反应液旋干后经硅胶柱色谱纯化得到化合物A (7.7g, 83%，无色油状液体)。
化合物A：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5.29 – 4.99 (m, 1H), 2.52 (qd,J=15.8, 6.4 Hz, 2H), 2.21 (t,J= 7.5 Hz, 2H), 1.52 (dd,J= 13.9, 7.0 Hz, 4H),1.18 (s, 42H), 0.81 (t,J= 6.9 Hz, 6H)。
13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 176.37 (s), 173.39 (s), 70.04 (s), 38.95(s), 34.86 – 33.54 (m), 31.93 (d,J= 1.2 Hz), 30.13 – 28.69 (m), 25.06 (d,J=10.3 Hz), 22.69 (s), 14.10 (s)。
实施例6
本实施例提供化合物C（原料化合物）的制备方法，参照下述合成路径：
将化合物12（10g，0.023mol）溶于100ml二氯甲烷中，依次加入DMAP（0.28g，0.002mol）、吡啶（2.69g，0.034mol），降温至0℃，加入月桂酰氯（7.44g，0.034mol），反应2小时后化合物12消耗完全。
反应液加入水（200ml，20vol）淬灭，取有机层。反应液依次使用盐酸溶液、碳酸氢钠溶液、氯化钠溶液洗涤。反应液旋干后经硅胶柱色谱纯化得到化合物12-C（12g，85.7%，白色固体）。
将化合物12-C（12g，0.019mol）溶于130ml二氯甲烷中，加入锌粉（12g，0.183mol），冰浴下加入乙酸（24ml，2vol），室温搅拌3小时后化合物12-C消耗完全。
反应液依次使用水、饱和碳酸氢钠溶液、饱和食盐水洗涤。反应液旋干后经硅胶柱色谱纯化得到化合物C (6.5g, 80%，无色油状液体)。
化合物C：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5.20 – 5.07 (m, 1H), 2.53 (qd,J=15.8, 6.4 Hz, 2H), 2.21 (t,J= 7.5 Hz, 2H), 1.68 – 1.43 (m, 4H), 1.19 (s,34H), 0.81 (t,J= 6.8 Hz, 6H)。
13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 176.44 (s), 173.33 (s), 69.99 (s), 38.92(s), 34.23 (d,J= 51.8 Hz), 31.92 (s), 30.11 – 28.76 (m), 25.06 (d,J= 10.3Hz), 22.69 (s), 14.11 (s)。
实施例7
本实施例提供化合物5的制备方法，参照下述合成路径：
将化合物A（6.4g，13.26mmol）溶于43ml二氯甲烷中，冰浴下加入EDCI（2.55g，13.26mmol）。
搅拌0.5小时后加入化合物4（4.3g，8.288mmol）的二氯甲烷（43ml，10vol）溶液。
室温反应4小时后化合物4消耗完全。反应液使用饱和食盐水（100ml）洗涤分液。旋干硅胶柱色谱纯化（石油醚：乙酸乙酯=10:1）得到化合物5 (7g, 85%，无色油状液体)。其核磁氢谱图参见图1，质谱图参见图2。
TOF-MS:m/z1004.67[M+Na]+。
化合物5：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.79 – 7.25 (m, 7H), 5.85 (d,J= 8.9Hz, 1H), 5.72 (ddt,J= 16.2, 10.6, 5.7 Hz, 1H), 5.18 (dd,J= 17.2, 1.4 Hz, 1H),5.09 (dd,J= 10.4, 1.1 Hz, 1H), 5.02 – 4.91 (m, 2H), 4.75 (dt,J= 18.8, 9.7 Hz,3H), 4.50 – 4.32 (m, 2H), 3.88 – 3.70 (m, 2H), 3.71 – 3.60 (m, 2H), 3.41(ddd,J= 9.5, 4.2, 2.8 Hz, 1H), 2.37 (dt,J= 17.5, 8.8 Hz, 1H), 2.32 – 2.16 (m,3H), 1.77 (dt,J= 14.5, 7.3 Hz, 1H), 1.23 – 1.11 (m, 46H), 0.81 – 0.77 (m,15H), 0.08 – -0.03 (m, 6H)。
13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 176.37 (s), 173.39 (s), 155.05 (s), 135.28(d,J= 31.7 Hz), 133.98 (s), 133.64 (s), 133.13 (d,J= 20.3 Hz), 131.30 (s),128.30 – 127.54 (m), 126.74 (d,J= 7.7 Hz), 126.27 – 125.63 (m), 119.18 (d,J=5.9 Hz), 98.94 (s), 81.49 (d,J= 13.7 Hz), 76.06 (s), 75.23 (s), 74.92 (s),70.04 (s), 68.86 (s), 62.00 (s), 58.24 (d,J= 20.9 Hz), 38.95 (s), 34.86 –33.54 (m), 31.93 (d,J= 1.2 Hz), 30.13 – 28.69 (m),25.71 (s), 22.69 (s), 25.06(d,J= 10.3 Hz), 18.00 (s), -4.60 (dd,J= 108.8, 13.4 Hz), 14.10 (s)。
实施例8
本实施例提供化合物6的制备方法，参照下述合成路径：
/>
将化合物5（5g，5.10mmol）和化合物B（10.3g，8.16mmol，合成及制备工艺见中国专利申请CN202010306826.6）溶于100ml二氯甲烷中，加入分子筛活化粉（5g），氮气保护。
反应液降温至-20℃，加入TfOH（0.153g，1.02mmol）。室温反应2小时后化合物5消耗完全，反应液使用吡啶淬灭。
旋干后通过C18填料纯化（CH3CN，MeOH，CHCl3依次洗脱），再使用硅胶柱色谱纯化（石油醚：乙酸乙酯=6:1）得到化合物6(6.2g, 62%，无色油状液体)。其核磁氢谱图参见图3，核磁碳谱图参见图4，质谱图参见图5。
TOF-MS:m/z:2055.25 [M-H]-。
化合物6：1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 7.73 – 7.64 (m, 7H), 7.60 (s, 1H),7.41 – 7.32 (m, 5H), 7.25 (d,J= 7.8 Hz, 1H), 5.75 – 5.64 (m, 3H), 5.23 – 5.09(m, 5H), 5.05 (t,J= 9.6 Hz, 2H), 4.95 (dd,J= 12.6, 6.6 Hz, 2H), 4.81 – 4.71(m, 2H), 4.70 – 4.58 (m, 4H), 4.42 – 4.21 (m, 7H), 4.01 (d,J= 10.0 Hz, 1H),3.72 (dt,J= 14.9, 7.1 Hz, 2H), 3.65 – 3.59 (m, 2H), 3.52 (d,J= 3.3 Hz, 2H),3.30 (dd,J= 17.9, 8.6 Hz, 1H), 2.51 (qd,J= 15.6, 6.2 Hz, 2H), 2.31 (dd,J=14.9, 5.9 Hz, 1H), 2.24 – 2.13 (m, 5H), 1.56 – 1.42 (m, 8H), 1.23 – 1.10 (m,84H), 0.78 (dd,J= 12.7, 5.5 Hz, 21H), 0.02 (d,J= 19.1 Hz, 6H)。
13C NMR (151 MHz, CDCl3) δ 173.61 (s), 170.10 (s), 169.31 (s), 154.97(s), 153.74 (d,J= 82.1 Hz), 135.51 (d,J= 52.3 Hz), 133.11 (d,J= 41.3 Hz),132.46 – 131.84 (m), 131.35 (s), 127.92 (dd,J= 36.8, 32.8 Hz), 127.07 –125.50 (m), 119.09 – 117.85 (m), 100.06 (s), 95.87 (s), 95.33 (s), 78.87 (s),76.33 (s), 74.54 (s), 74.41 – 73.89 (m), 73.67 (s), 72.33 (s), 71.06 (s),70.14 (s), 68.50 (dd,J= 38.1, 6.8 Hz), 56.73 (d,J= 53.5 Hz), 41.77 (s), 39.79(s), 34.49 (d,J= 14.2 Hz), 33.94 (s), 31.93 (s), 29.51 (dt,J= 51.6, 14.7 Hz),25.66 (s), 25.15 (dd,J= 33.4, 15.7 Hz), 22.69 (s), 14.11 (s)。
实施例9
本实施例提供化合物7的制备方法，参照下述合成路径：
/>
将化合物6（6g，2.92mmol）溶于90ml二氯甲烷中，加入锌粉（12g，0.184mol），冰浴下加入乙酸（18ml，3vol），室温搅拌3小时后化合物6消耗完全。
反应液依次使用水（100ml）、饱和碳酸氢钠溶液（100ml）、饱和食盐水（100ml）洗涤分液。
旋干硅胶柱色谱纯化（石油醚：乙酸乙酯=6:1）得到化合物7 (4.5g, 82%，无色油状液体)。其核磁氢谱图参见图6，核磁碳谱图参见图7，质谱图参见图8。
TOF-MS:m/z1903.23[M+Na]+。
化合物7：1H NMR (400 MHz,CDCl3/CD3OD) δ 7.74 – 7.63 (m, 8H), 7.48 –7.36 (m, 6H), 5.88 – 5.65 (m, 3H), 5.32 – 5.24 (m, 1H), 5.24 – 5.15 (m, 4H),5.15 – 5.04 (m, 3H), 4.97 (dd,J= 19.4, 10.4 Hz, 2H), 4.75 (d,J= 8.0 Hz, 1H),4.73 (s, 2H), 4.65 (q,J= 12.2 Hz, 2H), 4.21 (d,J= 8.0 Hz, 1H), 4.15 (d,J= 9.1Hz, 1H), 3.91 – 3.73 (m, 2H), 3.72 – 3.58 (m, 4H), 3.30 (s, 2H), 2.83 (dd,J=10.2, 8.1 Hz, 1H), 2.69 (dd,J= 15.4, 3.9 Hz, 1H), 2.55 (dd,J= 15.3, 8.5 Hz,1H), 2.42 (dd,J= 14.4, 6.2 Hz, 1H), 2.25 (dt,J= 11.3, 6.9 Hz, 5H), 1.21 (s,92H), 0.82 (d,J= 5.1 Hz, 21H), 0.07 (d,J= 6.7 Hz, 6H)。
13C NMR (151 MHz, CDCl3/CD3OD) δ 173.71 (d,J= 21.2 Hz), 170.21 (d,J=31.9 Hz), 154.73 (s), 135.00 (d,J= 55.4 Hz), 131.70 (d,J= 18.0 Hz), 131.06(s), 128.15 – 127.11 (m), 126.49 – 125.13 (m), 118.24 (d,J= 24.4 Hz), 103.22(s), 95.59 (s), 79.00 (s), 74.80 (d,J= 89.5 Hz), 73.58 (d,J= 75.1 Hz), 70.45(d,J= 106.8 Hz), 68.80 – 67.99 (m), 55.64 (d,J= 52.2 Hz), 40.19 (d,J= 198.4Hz), 34.49 – 33.81 (m), 33.42 (s), 31.60 (s), 29.16 (dt,J= 54.2, 17.6 Hz),25.50 – 24.52 (m), 22.33 (s), 17.46 (s), 13.55 (s), -5.17 (d,J= 177.1 Hz)。
实施例10
本实施例提供化合物8的制备方法，参照下述合成路径：
/>
将化合物C（5.8g，13.59mmol）溶于43ml二氯甲烷中，冰浴下加入EDCI（2.6g，13.59mmol）。
搅拌0.5小时后加入化合物7（4.25g，2.26mmol）的二氯甲烷（43ml，10vol）溶液。室温反应4小时后化合物7消耗完全。
反应液使用饱和食盐水（100ml）洗涤分液。
旋干后通过C18填料纯化（CH3CN，MeOH，CHCl3依次洗脱），再使用硅胶柱色谱（石油醚：乙酸乙酯=6:1）纯化得到化合物8(3.7g, 72%，无色油状液体)。其核磁氢谱图参见图9，核磁碳谱图参见图10，质谱图参见图11。
TOF-MS:m/z2311.61[M+Na]+。
化合物8：1H NMR (600 MHz, CDCl3/CD3OD) δ 7.85 – 7.66 (m, 8H), 7.49 –7.32 (m, 6H), 6.19 (d,J= 7.6 Hz, 1H), 5.86 – 5.67 (m, 4H), 5.51 – 5.43 (m,1H), 5.32 – 5.07 (m, 9H), 5.04 (dd,J= 13.1, 5.6 Hz, 1H), 5.00 (dd,J= 10.4,9.0 Hz, 1H), 4.80 (d,J= 7.7 Hz, 1H), 4.78 – 4.73 (m, 2H), 4.72 – 4.65 (m,2H), 4.51 – 4.29 (m, 7H), 4.08 (d,J= 9.5 Hz, 1H), 3.88 – 3.76 (m, 3H), 3.75 –3.65 (m, 3H), 3.60 (ddd,J= 9.5, 4.9, 2.0 Hz, 1H), 3.53 – 3.43 (m, 1H), 2.70 –2.48 (m, 2H), 2.44 – 2.16 (m, 10H), 1.77 – 1.17 (m, 126H), 0.87 (dd,J= 14.6,7.4 Hz, 27H), 0.09 (t,J= 13.1 Hz, 6H)。
13C NMR (151 MHz, CDCl3/CD3OD) δ 174.92 – 168.22 (m), 132.84 (d,J=36.7 Hz), 127.88 – 127.15 (m), 125.73 (dd,J= 52.5, 39.3 Hz), 118.43 – 117.83(m), 97.72 (d,J= 577.7 Hz), 78.76 (s), 76.53 – 76.37 (m), 74.46 (s), 74.25 –74.03 (m), 73.80 (s), 73.31 (s), 72.55 (s), 70.74 (s), 70.28 – 70.26 (m),70.21 (s), 69.77 (s), 68.23 (t,J= 47.3 Hz), 55.76 (s), 54.93 (s), 40.61 (d,J=44.7 Hz), 38.63 (s), 34.56 – 33.16 (m), 31.57 (s), 29.58 – 28.54 (m), 24.88(d,J= 64.8 Hz), 22.29 (s), 17.39 (s), 13.48 (s), -5.19 (d,J= 203.9 Hz)。
实施例11
本实施例提供化合物9的制备方法，参照下述合成路径：
/>
将化合物8（2g，0.874 mmol）溶于THF（40 mL），–40℃下加入溶于吡啶（60 mL）的氢氟酸吡啶（20 mL，浓度65-70％）溶液。升温至室温并搅拌过夜。
反应结束后加入饱和碳酸氢钠水溶液淬灭，加入氯仿萃取多次。
将有机层干燥过滤并浓缩，通过C18填料纯化（CH3CN，MeOH，CHCl3依次洗脱）得到化合物9（1.6g，81%，白色固体）。其核磁氢谱图参见图12，核磁碳谱图参见图13，质谱图参见图14。
TOF-MS:m/z2198.54[M+Na]+。
化合物9：1H NMR (400 MHz, CDCl3/CD3OD) δ 7.70 (dd,J= 21.0, 11.0 Hz,8H), 7.41 (dd,J= 9.7, 6.6 Hz, 6H), 5.85 – 5.61 (m, 3H), 5.36 – 4.99 (m, 12H),4.88 (d,J= 8.3 Hz, 1H), 4.76 – 4.57 (m, 4H), 4.38 – 4.22 (m, 5H), 4.12 (ddd,J= 24.1, 14.3, 7.0 Hz, 3H), 3.78 (d,J= 9.4 Hz, 1H), 3.74 – 3.59 (m, 4H), 3.54(t,J= 9.6 Hz, 1H), 3.30 (s, 2H), 2.59 (d,J= 6.0 Hz, 2H), 2.48 – 2.13 (m,10H), 1.40 (d,J= 16.3 Hz, 6H), 1.17 (d,J= 27.5 Hz, 121H), 0.83 (t,J= 6.7 Hz,18H)。
13C NMR (151 MHz, CDCl3/CD3OD) δ 155.11 (s), 135.04 (d,J= 28.5 Hz),132.93 (d,J= 33.7 Hz), 131.72 (d,J= 19.0 Hz), 131.13 (s), 128.04 – 127.25(m), 126.26 (d,J= 12.6 Hz), 125.68 (dd,J= 33.6, 18.7 Hz), 118.54 – 118.18(m), 99.97 (s), 91.01 (s), 74.65 (s), 74.23 – 73.63 (m), 73.34 (s), 72.54 –72.40 (m), 70.71 (d,J= 52.1 Hz), 69.87 (d,J= 19.4 Hz), 68.84 – 68.16 (m),67.75 (s), 54.49 (s), 52.16 (s), 40.83 (d,J= 16.0 Hz), 38.70 (s), 34.53 –33.56 (m), 31.68 (s), 29.78 – 28.64 (m), 24.87 (dd,J= 23.3, 7.2 Hz), 22.41(s), 13.67 (s)。
实施例12
本实施例提供化合物10的制备方法，参照下述合成路径：
/>
将化合物9（1.6g，0.736 mmol），PPh3(480 mg,1.83 mmol)加入反应瓶中，氮气保护后加入THF（48mL），TEA (2.4mL，1.5vol), HCOOH (1.44mL, 0.9vol), Pd(Ph3P)4(480mg,0.415mmol)。25℃反应3 h后化合物9消耗完全，将有机层干燥过滤并浓缩，通过C18填料纯化（CH3CN，MeOH，CHCl3依次洗脱）得到化合物10（1.53g，97%，淡黄色固体）。其核磁氢谱图参见图15，核磁碳谱图参见图16，质谱图参见图17。
TOF-MS:m/z2009.42[M-H]-。
化合物10：1H NMR (400 MHz, CDCl3/CD3OD) δ 7.61 (dd,J= 21.0, 11.0 Hz,8H), 7.33 (dd,J= 9.7, 6.6 Hz, 6H), 5.32 – 5.03 (m, 6H), 4.81 (d,J= 8.3 Hz,1H), 4.60 (d,J= 10.0 Hz, 2H), 4.30 – 4.15 (m, 5H), 3.96 (ddd,J= 24.1, 14.3,7.0 Hz, 3H), 3.71 (d,J= 9.4 Hz, 1H), 3.67 – 3.49 (m, 4H), 3.37 (t,J= 9.6 Hz,1H), 3.20 (s, 2H), 2.79 (d,J= 6.0 Hz, 2H), 2.48 – 2.10(m, 10H), 1.24 (d,J=16.3 Hz, 6H), 1.06 (d,J= 27.5 Hz, 121H), 0.87 (t,J= 6.7 Hz, 18H)。
13C NMR (151 MHz, CDCl3/CD3OD) δ 135.95 (d,J= 28.2 Hz), 133.83 –132.41 (m), 128.56 – 127.14 (m), 126.59 – 125.03 (m), 91.07 (s), 75.09 (s),74.54 (s), 73.54 (s), 72.26 – 71.93 (m), 71.26 (s), 70.25 (s), 54.31 (d,J=37.3 Hz), 45.46 (s), 41.40 (d,J= 73.1 Hz), 39.34 (s), 34.32 (dd,J= 62.1, 31.7Hz), 31.96 (d,J= 5.5 Hz), 30.66 – 28.62 (m), 26.20 – 24.50 (m), 22.69 (s),14.10 (s)。
实施例13
本实施例提供化合物11（即3D-MPL）的制备方法，参照下述合成路径：
将化合物10（1.53g, 0.761 mmol）与DDQ（2.59g,11.42mmol, 15 eq）加入反应瓶中，加入CHCl3(153mL)。30℃超声60 min后结束反应。将反应液旋干。
向旋干的反应瓶中加入乙腈，倒入C18填料的柱色谱中脱色纯化。待过量DDQ完全除去，氯仿：甲醇（3:1）洗脱得产品，浓缩得到终产品化合物11（1g，76%）。
TOF-MS:m/z1729.31[M-H]-。
化合物11：1H NMR (600 MHz, CDCl3/CD3OD) δ 5.17 – 4.98 (m, 5H), 4.59 (t,J= 7.8 Hz, 1H), 4.04 – 3.96 (m, 1H), 3.90 (d,J= 7.6 Hz, 1H), 3.85 – 3.71 (m,4H), 3.66 – 3.54 (m, 2H), 3.41 – 3.26 (m, 6H), 3.22 (dd,J= 17.4, 8.6 Hz, 1H),2.63 – 2.21 (m, 12H), 1.54 (s, 12H), 1.20 (d,J= 6.1 Hz, 114H), 0.82 (q,J= 6.9Hz, 18H)。
13C NMR (151 MHz, CDCl3/CD3OD) δ 174.05 (d,J= 15.6 Hz), 171.68 –170.88 (m), 170.79 – 169.87 (m), 101.05 (s), 91.26 (s), 75.05 – 74.64 (m),73.26 – 73.04 (m), 72.57 (s), 71.48 (s), 71.29 (s), 71.09 (s), 70.56 (s),70.16 (s), 60.64 – 60.46 (m), 60.46 – 60.26 (m), 60.25 – 60.07 (m), 53.93(s), 41.46 (s), 38.87 (s), 34.45 (s), 34.13 (s), 31.85 (s), 29.37 (dd,J=52.9, 21.5 Hz), 25.05 (d,J= 35.3 Hz), 22.60 (s)。
对比例1：
利用化合物10形成化合物11，具体过程如下：
将化合物10（50 mg, 0.025mmol）与Pd（400 mg）加入氢化釜中，溶于THF：H2O=4:1(20 mL), 1 MPa, 30℃反应24 h。
加入一滴三乙胺淬灭，将反应液过滤旋干。
使用C18填料的柱色谱中脱色纯化得到终产品化合物11（15 mg，32.4%）。
通过TLC板层显示，原料有剩余，杂质点多，延长时间原料未减少。收率和纯度明显差于上述实施例。
对比例2
本对比例提供化合物2的制备方法，参照下述合成路径：
将化合物1（1g，1.65mmol）溶于10ml二氯甲烷中，加入NaH（0.12g，4.95mmol），冰浴下加入萘甲基溴（1.09g，4.95mmol），室温搅拌2小时，升温到45℃回流后化合物1不能完全消耗。
将反应液倒入冰水（10ml）中淬灭，分液后得反应液，反应液依次使用饱和碳酸氢钠溶液（10ml）和饱和食盐水（10ml）洗涤分液。
旋干硅胶柱色谱纯化（石油醚：乙酸乙酯=10:1）得到化合物2 (0.12g, 10%，无色油状液体)。
备注：萘甲基溴换成苄基溴，反应收率13%；位阻较大，难以接上；
TOF-MS:m/z:714.13[M+Na]+。
综上，（1）本发明使用烯丙基配体在后续避免了氢化反应，用四三苯基膦的条件1.5 h即可反应完。同样使用C18填料柱简单脱色后即可得到终产品。避免了现有技术中采用氢化脱苄基保护基带来的杂质多，收率较低，且纯化方式复杂的问题。具有明显更优的效果。
（2）与现有技术需要使用钯碳氢化反应20h以上，再反复过滤过离子柱色谱，收率较低（仅能达到50%左右）相比较，本发明使用Nap保护基的方法简化了操作，优化后，脱保护步骤收率可达到91.5%以上，纯度达到97%。（测定方法参照：HPLC-ELSD法测定BLP25脂质体疫苗中MPL的含量，中国药事2012年第26卷第5期，王明娟，王琰，胡昌勤）。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (41)

1.一种用于合成3D-MPL的第一中间体，其特征在于，所述第一中间体选自下述结构式所示化合物：
，其中，n1和n2分别选自8~12之间的任意整数。
2.根据权利要求1所述的用于合成3D-MPL的第一中间体，其特征在于，其选自下述结构式所示的化合物中的任意一种：
。
3.一种权利要求1所述的用于合成3D-MPL的第一中间体的制备方法，其特征在于，包括参照下述合成路径进行合成：
，其中，n1和n2分别选自8~12之间的任意整数。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，合成条件包括：化合物A和化合物4的摩尔比为1-3:1；酰化反应的温度为-10至50℃；采用的溶剂为卤代烷烃类溶剂，所述化合物4与溶剂的质量体积比为50-200g/L；采用的缩合剂为1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐、二环己基碳二亚胺和N,N'-二异丙基碳二亚胺中的一种或多种，所述缩合剂与所述化合物4的摩尔比为1-5:1;
监控所述的酰化反应的进程，以化合物4消失或含量不再减少时为反应终点，且酰化反应结束后进行后处理。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，合成条件包括：所述化合物A和所述化合物4的摩尔比为1-2.5:1；酰化反应的温度为10至30℃；采用的溶剂为二氯甲烷和/或三氯甲烷，采用的缩合剂为1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐，所述缩合剂与所述化合物4的摩尔比为1-3:1;反应时间为2-12小时；
后处理包括洗涤，干燥，过滤，浓缩和分离纯化目的产物。
6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，包括：在有机溶剂中，在三乙基硅烷和二氯苯基硼烷存在下，将化合物3进行选择性还原开环反应，得到化合物4；具体合成路径如下：
。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，反应条件包括：所述有机溶剂为卤代烷烃类溶剂，化合物3和所述有机溶剂的质量体积比为50-200g/L；
所述三乙基硅烷和所述化合物3的摩尔比为2-5:1；
所述二氯苯基硼烷和所述化合物3的摩尔比为2-5:1；
反应温度为-90至40℃；
监控反应的进程，以所述化合物3消失或含量不再减少时为反应终点；且反应结束后进行后处理。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，反应条件包括：所述有机溶剂为二氯甲烷和/或三氯甲烷；
所述三乙基硅烷和所述化合物3的摩尔比为3:1；
所述二氯苯基硼烷和所述化合物3的摩尔比为3:1；
反应温度为-78℃；反应时间为0.5-2小时；
后处理包括：反应结束后依次对反应体系进行淬灭，过滤，洗涤，干燥，浓缩和分离纯化。
9.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，包括：在有机溶剂中，在醋酸及锌粉的作用下，将化合物2进行还原反应，得到所述化合物3；具体合成路径如下：
。
10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述的有机溶剂为卤代烷烃类溶剂；
化合物2与所述的有机溶剂的质量体积比为50~200 g/L；
所述醋酸与所述化合物2的质量比为2~5:1；
所述的锌粉与所述化合物2的质量比为1~3:1；
所述反应的温度为0~30℃；
监控所述反应的进程，以所述化合物2消失或含量不再减少时为反应终点；且反应结束后进行后处理。
11.根据权利要求10所述的制备方法，其特征在于，所述的有机溶剂为二氯甲烷和/或三氯甲烷；
所述化合物2与所述的有机溶剂的质量体积比为 100 g/L；
所述醋酸与所述化合物2的质量比为3.5:1；
所述锌粉与所述化合物2的质量比为2:1；
所述反应的温度为10-20℃；反应的时间为3-6 h；
后处理包括：反应结束后对反应体系依次进行过滤，洗涤，干燥，浓缩和分离纯化。
12.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，包括：在有机溶剂中，在缚酸剂的存在下，将化合物1与氯甲酸烯丙基酯进行反应，得到所述化合物2；具体合成路径如下：
。
13.根据权利要求12所述的制备方法，其特征在于，所述有机溶剂为卤代烷烃类溶剂；
所述化合物1与所述有机溶剂的质量体积比为50~200 g/L；
所述缚酸剂为吡啶、三乙胺和四甲基乙二胺中的任意一种；
所述缚酸剂与所述化合物1的摩尔比为1~3:1；
所述氯甲酸烯丙基酯与所述化合物1的摩尔比为2~5:1；
所述反应的温度为0~30℃；
监控反应的进程，以所述化合物1消失或含量不再减少时为反应终点，且反应结束后进行后处理。
14.根据权利要求13所述的制备方法，其特征在于，所述有机溶剂为二氯甲烷和/或三氯甲烷；
所述化合物1与所述有机溶剂的质量体积比为100 g/L；
所述缚酸剂为四甲基乙二胺；
所述缚酸剂与所述化合物1的摩尔比为1~2:1；
所述氯甲酸烯丙基酯与所述化合物1的摩尔比为3~4:1；
所述反应的温度为10~20℃；所述反应的时间为1-5 h；
后处理包括：反应结束后对反应体系依次进行淬灭，洗涤，干燥，过滤，浓缩和分离纯化。
15.一种用于合成3D-MPL的第二中间体，其特征在于，所述第二中间体选自下述结构式所示化合物：
，其中，n1和n2分别选自8~12之间的任意整数。
16.根据权利要求15所述的用于合成3D-MPL的第二中间体，其特征在于，所述第二中间体选自下述结构式所示化合物中的任意一种：
。
17.一种权利要求15所述的用于合成3D-MPL的第二中间体的制备方法，其特征在于，包括:在有机溶剂中，在酸催化剂存在下，将权利要求1所述的第一中间体与化合物B进行糖苷化反应，得到第二中间体；具体合成路径如下：
，其中，n1和n2分别选自8~12之间的任意整数。
18.根据权利要求17所述的制备方法，其特征在于，所述有机溶剂为卤代烷烃类溶剂；
所述第一中间体与所述有机溶剂的质量体积比为50~200 g/L；
所述酸催化剂为三氟甲磺酸、三氟甲磺酸三甲基硅酯和三氟甲磺酸酐中的一种或多种；
所述酸催化剂与所述第一中间体的摩尔比为3~5:1；
所述化合物B与所述第一中间体的摩尔比为5:8~10；
反应的温度为-10℃至-40℃；
监控糖苷化反应的进程，以所述第一中间体消失或含量不再减少时为反应终点，反应结束后进行后处理。
19.根据权利要求18所述的制备方法，其特征在于，所述有机溶剂为二氯甲烷和/或三氯甲烷；
所述酸催化剂为三氟甲磺酸；
所述酸催化剂与所述第一中间体的摩尔比为4~5:1；
所述化合物B与所述第一中间体的摩尔比为5：8；
反应温度为-20℃；反应时间为2h-12h；
后处理包括：反应结束后反应体系进行淬灭，浓缩和分离纯化。
20.一种用于合成3D-MPL的第三中间体，其特征在于，所述第三中间体选自下述结构式所示化合物：
，其中，n1和n2分别选自8~12之间的任意整数。
21.根据权利要求20所述的用于合成3D-MPL的第三中间体，其特征在于，所述第三中间体选自下述结构式所示化合物中的任意一种：
。
22.一种权利要求20所述的用于合成3D-MPL的第三中间体的制备方法，其特征在于，包括：在有机溶剂中，在锌粉/酸催化条件下，进行权利要求15所述的第二中间体2位Troc保护基脱除反应，得到所述第三中间体，具体合成路径如下：
，其中，n1和n2分别选自8~12之间的任意整数。
23.根据权利要求22所述的制备方法，其特征在于，所述有机溶剂为卤代烷烃类溶剂；
所述第二中间体与所述有机溶剂的质量体积比为50~200 g/L；
所述酸选自乙酸、盐酸和硫酸中的一种或多种；
所述酸与所述第二中间体的质量体积比为1~5g/mL；
所述锌粉与所述第二中间体的摩尔比为20~15:1；
反应的温度为10℃~30℃；
监控反应的进程，以所述第二中间体消失或含量不再减少时为反应终点，且反应结束后进行后处理。
24.根据权利要求23所述的制备方法，其特征在于，所述有机溶剂为二氯甲烷和/或三氯甲烷；
所述酸为乙酸；
所述酸与所述第二中间体的质量体积比为3g/mL；
所述的锌粉与所述第二中间体的摩尔比为16：1；
反应的温度为室温；反应的时间为2h-6h；
后处理包括：反应结束后对反应体系依次进行洗涤和分离纯化。
25.一种用于合成3D-MPL的第四中间体，其特征在于，所述第四中间体选自下述结构式所示化合物：
，其中，n1和n2分别选自8~12之间的任意整数。
26.根据权利要求25所述的用于合成3D-MPL的第四中间体，其特征在于，所述第四中间体选自下述结构式所示化合物中的任意一种：
。
27.一种权利要求25所述的一种用于合成3D-MPL的第四中间体的制备方法，其特征在于，在有机溶剂中，在缩合剂催化条件下，将权利要求20所述的第三中间体与化合物C进行酰胺化缩合反应，得到所述第四中间体；具体合成路径如下：
，其中，n1和n2分别选自8~12之间的任意整数。
28.根据权利要求27所述的制备方法，其特征在于，所述有机溶剂为卤代烷烃类溶剂；
所述第三中间体与所述的有机溶剂的质量体积比为120~200g/L；
所述缩合剂为1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐、二环己基碳二亚胺和N,N'-二异丙基碳二亚胺中的一种或多种；
所述的缩合剂与所述第三中间体的摩尔比为5~10:1；
所述化合物C与所述第三中间体的摩尔比为5~10:1；
反应的温度为10℃~30℃；
监控反应的进程，以所述第三中间体消失或含量不再减少时为反应终点，且反应结束后进行后处理。
29.根据权利要求27所述的制备方法，其特征在于，所述有机溶剂为二氯甲烷和/或三氯甲烷；
所述的缩合剂为1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐；
所述的缩合剂与所述第三中间体的摩尔比为6：1；
所述化合物C与所述第三中间体的摩尔比为6：1；
反应的温度为室温；反应的时间为2h-6h；
后处理包括：反应结束后对反应体系依次进行洗涤、旋干和分离纯化。
30.一种用于合成3D-MPL的第五中间体，其特征在于，所述第五中间体选自下述结构式所示化合物：
，其中，n1和n2分别选自8~12之间的任意整数。
31.根据权利要求30所述的一种用于合成3D-MPL的第五中间体，其特征在于，所述第五中间体选自下述结构式所示化合物中的任意一种：
。
32.一种权利要求30所述的一种用于合成3D-MPL的第五中间体的制备方法，其特征在于，包括：在有机溶剂中，在脱硅醚催化条件下，将权利要求25所述的第四中间体进行硅醚保护基脱除反应，得到所述第五中间体；具体合成路径如下：
，其中，n1和n2分别选自8~12之间的任意整数。
33.根据权利要求32所述的制备方法，其特征在于，包括：所述有机溶剂为呋喃类溶剂；
所述第四中间体与所述有机溶剂的质量体积比可为30~40g/L；
所述脱硅醚催化剂为HF/Py，其中Py的质量分数为65-70%；
所述脱硅醚催化剂与所述第四中间体的质量体积比为50 -150g/L；
反应的温度为10℃~30℃；
监控反应的进程，以所述第四中间体消失或含量不再减少时为反应终点，且反应结束后进行后处理。
34.根据权利要求33所述的制备方法，其特征在于，包括：所述有机溶剂为四氢呋喃；
所述脱硅醚催化剂与所述第四中间体的质量体积比为100g/L；
反应的温度为室温； 反应的时间为8~16h；
后处理包括：反应结束后对反应体系依次进行淬灭、萃取、浓缩及纯化。
35.一种用于合成3D-MPL的第六中间体，其特征在于，所述第六中间体选自下述结构式所示化合物：
，其中，n1至n6分别选自8~12之间的任意整数。
36.根据权利要求35所述的一种用于合成3D-MPL的第六中间体，其特征在于，所述第六中间体选自下述结构式所示化合物中的任意一种：
。
37.一种权利要求35所述的一种用于合成3D-MPL的第六中间体的制备方法，其特征在于，包括：在有机溶剂中，在钯催化条件下，将权利要求30所述的第五中间体进行烯丙氧基保护基脱除反应，得到所述第六中间体；具体合成路径如下：
/>
其中，其中，n1至n6分别选自8~12之间的任意整数。
38.根据权利要求37所述的制备方法，其特征在于，所述有机溶剂为呋喃类溶剂；
所述第五中间体与所述有机溶剂的质量体积比为30~40g/L；
钯催化剂为四三苯基膦钯，乙酸钯和碳酸钯中的任意一种；
所述钯催化剂与所述第五中间体的摩尔比为7：3-5；
反应的温度为10℃~30℃；
监控反应的进程，以所述第五中间体消失或含量不再减少时为反应终点，且反应结束后进行后处理。
39.根据权利要求38所述的制备方法，其特征在于，所述有机溶剂为四氢呋喃；
所述钯催化剂为四三苯基膦钯；
所述钯催化剂与所述第五中间体的摩尔比为7：4；
反应的温度为室温； 反应的时间为2-6h；
后处理包括：反应结束后对反应体系依次进行过滤，浓缩及纯化。
40.一种3D-MPL的制备方法，其特征在于，包括：利用权利要求1所述的一种用于合成3D-MPL的第一中间体、权利要求15所述的一种用于合成3D-MPL的第二中间体、权利要求20所述的一种用于合成3D-MPL的第三中间体、权利要求25所述的一种用于合成3D-MPL的第四中间体、权利要求30所述的一种用于合成3D-MPL的第五中间体或权利要求35所述的一种用于合成3D-MPL的第六中间体中的任意一种制备3D-MPL。
41.一种权利要求1所述的一种用于合成3D-MPL的第一中间体、权利要求15所述的一种用于合成3D-MPL的第二中间体、权利要求20所述的一种用于合成3D-MPL的第三中间体、权利要求25所述的一种用于合成3D-MPL的第四中间体、权利要求30所述的一种用于合成3D-MPL的第五中间体或权利要求35所述的一种用于合成3D-MPL的第六中间体在制备免疫佐剂3D-MPL中的应用。
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