CN117362370A - 核苷亚磷酰胺单体及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种核苷亚磷酰胺单体及其制备方法和应用，在使用本发明的R2保护基团后，比目前常用的苯甲酰基、异丁酰基、乙酰基等保护基，增加了分子结构中的刚性结构，使分子的易结晶性提高，使所得的核苷亚磷酰胺单体粗品可通过简易析晶的方案进行分离纯化的策略得以实现。本发明核苷亚磷酰胺单体合成的DNA核酸中，脱嘌呤和缺碱基的杂质更少。
Description
技术领域
本发明属于化学合成领域，具体而言，涉及核苷亚磷酰胺单体及其制备方法和应用。
背景技术
用于寡核苷酸合成的核苷亚磷酰胺单体质量要求高，需要通过柱层析来获得最终产品，纯化难度大，不利于放大制备；且现有的固相合成方法中，合成超过60个碱基长度的寡核苷酸就会出现逐渐严重的脱嘌呤和缺碱基的情况，且合成的寡核苷酸粗品纯度低，后续纯化难度较大。本发明的目的是通过调整现有核苷亚磷酰胺单体的化学结构，解决现有用于寡核苷酸合成的核苷亚磷酰胺单体碱基保护基团种类多、难以结晶纯化的问题，进而可通过结晶及过滤的方式获得最终产品，降低核苷亚磷酰胺单体的生产成本，减少寡核苷酸固相合成中脱嘌呤和缺碱基的情况产生，最终达到提高固相合成寡核苷酸纯度的目的。
寡核苷酸由核苷亚磷酰胺单体通过经典的固相合成的方法制备，广泛应用于新型治疗策略开发、基因编辑、核酸药物等领域。而合成寡核苷酸的原辅料成本中，核苷亚磷酰胺单体占主要部分。现有核苷亚磷酰胺单体的碱基保护基包括苯甲酰基、异丁酰基、乙酰基等基团，通过苯甲酰氯、苯甲酸酐、异丁酰氯、乙酸酐等试剂与碱基上的氨基发生反应完成碱基保护。
以下是典型的核苷亚磷酰胺单体合成过程（以DMT-dC(Bz)亚磷酰胺单体的合成为例）：
，
其中，DMT表示4,4'-二甲氧基三苯甲基。
产物核苷亚磷酰胺单体均需要通过柱层析获得高纯度的产品，成本高，工艺复杂。现有核苷亚磷酰胺单体的碱基保护基包括苯甲酰基、异丁酰基、乙酰基等基团，中间体在与双(二异丙基氨基)(2-氰基乙氧基)膦反应后，产品无法通过结晶的方式获得，只能通过柱层析纯化，增加了产品生产成本，且工业化放大难度高。不同的碱基需要对应不同的保护基，合成过程繁琐，成本高。在固相合成寡核苷酸第一步脱除DMT保护基团时，在酸（二氯乙酸或三氯乙酸）的作用下，因保护碱基自身的不稳定性，容易在该步骤发生脱碱基，影响寡核苷酸粗产品的纯度。
核苷亚磷酰胺单体的合成工艺复杂、质量控制指标多、成本高，其质量直接影响了后续通过固相合成得到的寡核苷酸的质量。因此，迫切需要开发一种新型核苷亚磷酰胺单体用于寡核苷酸的合成。
发明内容
为了解决上述技术问题，针对现有的核苷亚磷酰胺单体难以通过结晶纯化、保护基种类多，及其在寡核苷酸合成过程中易产生脱碱基等问题，本发明提供一种简便易得、成本低廉的核苷亚磷酰胺单体化学结构及其合成方法与纯化方法，同时提高在固相合成寡核苷酸过程中脱保护步骤酸性环境下保护碱基的稳定性，最终达到提高寡核苷酸粗产品纯度的目的。为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
在一种实施方式中，本发明提供一种核苷亚磷酰胺单体，所述单体通式结构如下，
，其中，R1是氢、烷氧基、卤素或烷氧基硅烷基团，Base是碱基A（腺嘌呤）、碱基G（鸟嘌呤）或碱基C（胞嘧啶），R2表示A、G、C三种不同碱基上的保护基团，R2是/>或/>。
在一种实施方式中，本发明提供制备上述核苷亚磷酰胺单体方法，包括以下步骤：
，
第一步：式a化合物与式b化合物先经酸胺缩合，再利用成五元环的驱动力，经分子内胺酯交换，得到酰亚胺保护的中间体01；
第二步：将步骤1得到的产物溶解，加入4,4'-二甲氧基三苯基氯甲烷，保温反应，反应结束后加入甲醇淬灭反应，纯化后得到中间体02；
第三步：将中间体02溶解，加入四氮唑作为催化剂，加入双(二异丙基氨基)(2-氰基乙氧基)膦，室温反应，反应结束后经过冰水萃取，收集下层有机相，干燥过滤后减压蒸干得粗品；用二氯甲烷、乙酸乙酯或二者的混合物溶解粗品，缓慢滴加至正庚烷或正己烷中，滴加的过程中因溶液溶解性变化析出固体，在惰性氛围下过滤和烘干得到所述核苷亚磷酰胺单体。
在一种实施方式中，所述步骤2中反应体系水分含量不大于490 ppm。
在一种实施方式中，所述步骤2中加入4,4'-二甲氧基三苯基氯甲烷的物质的量为中间体01物质的量的1.05~1.15倍。
在一种实施方式中，所述步骤2中加入4,4'-二甲氧基三苯基氯甲烷的物质的量为中间体01物质的量的1.05~1.10倍。
在一种实施方式中，所述步骤2中保温反应的反应温度区间为0±5 ℃。
在一种实施方式中，本发明提供上述核苷亚磷酰胺单体在合成核酸中的应用。
在一种实施方式中，在合成核酸中脱除所述核苷亚磷酰胺单体上R2保护基团时，使用水合肼溶液。
在一种实施方式中，使用水合肼乙醇溶液、水合肼水溶液或水合肼乙腈溶液。
在一种实施方式中，使用20%-50%体积浓度的水合肼乙醇溶液。
本发明所述核苷亚磷酰胺单体的化学结构如下：，其中：
R1是氢、烷氧基、卤素或烷氧基硅烷基团；
Base是碱基A（腺嘌呤）、碱基G（鸟嘌呤）或碱基C（胞嘧啶）；
R2表示A、G、C三种不同碱基上的保护基团，组合结构如下所示：
。
在使用本发明的R2保护基团后，比目前常用的苯甲酰基、异丁酰基、乙酰基等保护基，增加了分子结构中的刚性结构，使分子的易结晶性提高，使所得的核苷亚磷酰胺单体粗品可通过简易析晶的方案进行分离纯化的策略得以实现。相比于邻苯二甲酰亚胺类的保护基，2,3-萘二甲酰亚胺类保护基的分子刚性又有所增大。即通过优化核苷碱基的保护基结构，来改善核苷亚磷酰胺单体分子的物理性质，实现了用简单的析晶操作进行分离纯化并得到高品质的产物。
产物核苷亚磷酰胺单体用二氯甲烷、乙酸乙酯或二者的混合物溶解粗品，缓慢滴加至正庚烷或正己烷中，滴加的过程中因溶液溶解性变化析出固体，不需要通过柱层析获得高纯度的产品，因此合成单体的成本降低，工艺简单，工业化放大难度显著减小。
在本发明中，三种不同的碱基A、G和C，都可以使用本发明R2相同的保护基，合成过程简化，成本降低。
在固相合成寡核苷酸第一步脱除DMT保护基团时，本发明的核苷亚磷酰胺单体在酸性（二氯乙酸或三氯乙酸）环境下保护碱基的稳定性提高，减少了在该步骤发生脱碱基，提高了寡核苷酸粗产品的纯度。使用本发明的核苷亚磷酰胺单体合成寡核苷酸，都能够达到减少脱嘌呤和缺碱基的杂质以及提高粗产品纯度的目的。本发明核苷亚磷酰胺单体合成的DNA核酸中，脱嘌呤和缺碱基的杂质更少。
附图说明
为了更清楚地说明本申请实施例中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本申请中记载的一些实施例，对于本领域普通技术人员来说，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。
图1为式1的核磁磷谱；
图2为式3的核磁磷谱；和
图3为式5的核磁磷谱。
具体实施方式
为了使本领域技术人员更好地理解本申请中的技术方案，下面将结合实施例对本发明作进一步说明。显然，所描述的实施例仅仅是本申请一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都应当属于本申请保护的范围。下述实施例中，如无特殊说明，均为本领域常规方法。
实施例一 R2为邻苯二甲酰亚胺类保护基合成dA、dG、dC亚磷酰胺单体
。
第一步，先经酸胺缩合，再利用成五元环的驱动力，经分子内胺酯交换，即可得到酰亚胺保护的中间体01。将25.1 g 2'-脱氧腺苷加入到250 mL N,N-二甲基甲酰胺中，搅拌溶清后备用。在另外的反应容器中，加入125 mL N,N-二甲基甲酰胺和21.4 g 2-(乙氧基羰基)苯甲酸，将28.4 g二异丙基乙胺加入到体系中，搅拌混合均匀，并加入41.8 g 2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐，25 ℃下反应1 h后，将上述溶液滴加到2'-脱氧腺苷与N,N-二甲基甲酰胺的混合溶液中，继续反应3 h。加入10 mL水淬灭反应，将反应液真空蒸馏至油状物，将250 mL二氯甲烷加入到该油状物中，用1000 mL 5%碳酸氢钠水溶液萃取2次，收集有机相，用50 g无水硫酸钠干燥，过滤，收取滤液，将滤液蒸馏至油状物，得到35.2 g中间体01，粗收率92.3%，HPLC纯度97.3%。
第二步，将上一步反应的油状物19.1 g加入到190 mL吡啶中，搅拌溶解，加入4,4'-二甲氧基三苯基氯甲烷（DMT-Cl），保温反应，结束后加入1 mL甲醇淬灭反应，将体系中的溶剂蒸干。加入乙酸乙酯和正己烷，有大量固体析出，将固体过滤，用正己烷漂洗，烘干至恒重，称重，并对得到的产物进行纯度检测。对此步中影响反应转化的因素，即影响产物析晶、收率、纯度的因素，继而影响到下一步产物关键质量指标的因素，如反应体系水分含量、反应温度、DMT-Cl的当量进行了考察，数据汇总于下表（表1）。
表1：DMT保护阶段工艺参数优化实验数据
。
从获取的实验数据中，可得出如下结论：
1. 体系的水分含量对反应转化的影响进行了研究（实验1、2和3），可以看出，随着水分含量的升高，中间体01的剩余量随之增加，且DMT-Cl水解到DMT-OH的量也随之明显增加，收率和纯度随之下降。优选反应体系水分含量不大于490 ppm。
2. DMT-Cl的当量对反应转化的影响进行了研究（实验4、5和6，实验9和10），可以看出，在反应体系水分含量一定时，增加DMT-Cl的当量，可以促进中间体01的彻底转化，但双DMT取代杂质明显增大，收率和纯度也随之下降。DMT-Cl的当量为1.05~1.15，优选DMT-Cl的当量为1.05~1.10。
3. 反应温度对反应转化的影响进行了研究（实验1、7和8），在其他因素平行时，反应温度影响反应速度，直接关联到中间体01的转化率和中间体01分子中两个羟基的反应选择性，特别是温度较高时，选择性明显降低，双DMT杂质增加，造成纯度和收率下降。优选反应温度区间为0±5 ℃。
4. 粗产物中DMT-OMe和DMT-OH相对于残余的中间体01和双DMT杂质，比较容易清除，残余的中间体01和双DMT杂质又属于关键杂质，带入下一步反应，会影响到终产物的纯化和杂质控制。因此，中间体01残余量和双DMT杂质的含量会影响第二步的纯化效果，即影响产物纯度和收率。
第三步，严格无水无氧的操作条件下，称取10 g HPLC纯度在99.0%以上的中间体02（R1 = H）投入单口瓶中，用200 mL二氯甲烷溶解。加入0.5 g四氮唑作为催化剂，加入10g双(二异丙基氨基)(2-氰基乙氧基)膦，室温反应3 h，取样，用HPLC监测反应体系产品纯度大于98.0%。反应结束后，用100 mL冰水萃取2次，收取下层有机相，干燥过滤后减压蒸干得粗品。用二氯甲烷常温下搅拌溶解粗品，缓慢滴加至正庚烷中，滴加的过程中因溶液溶解性变化析出固体，滴加结束后，继续搅拌0.5 h，将混合物在惰性氛围下过滤，烘干，得到7.1 gdA亚磷酰胺单体产品，收率55.0%。对固体取样检测，HPLC纯度99.3%，核磁磷谱纯度大于99.0%，即可用简单的纯化方式得到高品质产物，结构如式1所示。
对于以2'-脱氧鸟苷、2'-脱氧胞苷为起始原料，参照2'-脱氧腺苷的路线策略及工艺参数进行，合成得到式3、式5结构的化合物，数据结果如下表（表2）：
表2：R2为邻苯二甲酰亚胺类保护基合成dA、dG、dC亚磷酰胺单体的实验数据
。
将实施例一中R1 = H更换为OTBDMS、F、OMe、O-MOE、O-NMA等基团可以得到类似结果。使用本发明方法合成式1、式3和式5的化合物核磁磷谱如图1-3所示。
实施例二 R2为2,3-萘二甲酰亚胺类保护基合成dA、dG、dC亚磷酰胺单体
。
参照实施例一的合成策略和优选参数进行，可得到式2、式4和式6结构的化合物，实施结果如下表（表3）：
表3：R2为2,3-萘二甲酰亚胺类保护基合成dA、dG、dC亚磷酰胺单体的实验数据
。
将实施例二中R1 = H更换为OTBDMS、F、OMe、O-MOE、O-NMA等基团可以得到类似结果。
从表2和表3的数据中可以看出，邻苯二甲酰亚胺类的保护基结构，比目前常用的苯甲酰基、异丁酰基、乙酰基等保护基，增加了分子结构中的刚性结构，使分子的易结晶性提高，使所得的核苷亚磷酰胺单体粗品可通过简易析晶的方案进行分离纯化的策略得以实现。相比于邻苯二甲酰亚胺类的保护基，2,3-萘二甲酰亚胺类保护基的分子刚性又有所增大，对应的数据（表3）较邻苯二甲酰亚胺类的保护基（表2）更好，也验证了本方案的分子设计预期。即通过优化核苷碱基的保护基结构，来改善核苷亚磷酰胺单体分子的物理性质，实现了用简单的析晶操作进行分离纯化并得到高品质的产物。
实施例三 本发明的核苷亚磷酰胺单体固相合成寡核苷酸
一. DNA核酸的合成
将合成仪设定为固定程序1，输入所需要合成的80个碱基的寡核苷酸序列（GTGGACCACTCATTGTCATAAATTAGTACAAAATGTTCTGTATAAACCGCATCCTACATGAACACATTCGGTTGTGACAT）。准备合成使用的脱保护剂、活化剂、盖帽剂等相关试剂，其中脱保护剂为3%（W/V）三氯乙酸的二氯甲烷溶液，每次使用量为200 uL；活化剂为0.25 M乙巯基四氮唑的乙腈溶液，每次使用量为75 uL；盖帽剂CAP A为10%（V/V）乙酸酐的四氢呋喃溶液，每次使用量为80 uL；盖帽剂CAP B为16%（V/V）N-甲基咪唑的四氢呋喃溶液，每次使用量为80 uL，盖帽剂CAP A和CAPB由机器自动加入。用无水乙腈溶解10 g核苷亚磷酰胺单体至浓度为0.05 M并用氩气保护，每次使用量为63 uL；将上述所有合成试剂装载至DNA合成仪上。
称取10 mg固相载体CPG，制作合成柱，装载至合成仪的柱座上。
检查设备压力、试剂瓶压力、试剂用量等参数，确认无误后点击“开始”进行合成。
合成过程检查试剂用量、设备运行状态至合成结束。
二. 氨解与脱保护
1. 合成结束后，采用水浴氨解脱保护。将合成结束后连接有DNA核酸的CPG粉末放入5 mL水合肼溶液（具体见如下表格）中加热至45 ℃，反应8 h，反应结束后冷却至室温。
2. 将上述氨解后的浑浊液过滤，得到溶有DNA核酸的水合肼乙醇溶液，并将其浓缩至干粉状态，再加入1 mL二甲基亚砜，将DNA核酸完全溶解。
3. 向得到的DNA核酸粗品中加入10 mL无水乙醇，放入-20 ℃冰箱中，等待2 h取出。经过12000 rpm离心得到DNA核酸固体粗品，取样检测粗品纯度。
。
通过以上数据可以看出，应用本发明2,3-萘二甲酰亚胺类保护的核苷亚磷酰胺单体合成的DNA核酸，其粗品纯度高于试验1中应用常规核苷亚磷酰胺单体合成的结果，且相对于传统化学结构的核苷亚磷酰胺单体，应用本发明核苷亚磷酰胺单体合成的DNA核酸中，脱嘌呤和缺碱基的杂质更少。
。
从以上试验结果可以看出，本专利中所描述的带有邻苯二甲酰亚胺类保护的核苷亚磷酰胺单体，其效果类似，都能够达到减少脱嘌呤和缺碱基的杂质以及提高粗产品纯度的目的。
。
从以上表格中数据可以看出，在氨解脱保护的步骤中，水合肼乙醇溶液、水合肼水溶液、水合肼乙腈溶液均可满足要求，且相对于传统氨解脱保护所用的氨水效果更好。
应该理解到披露的本发明不仅仅限于描述的特定的方法、方案和物质，因为这些均可变化。还应理解这里所用的术语仅仅是为了描述特定的实施方式方案的目的，而不是意欲限制本发明的范围，本发明的范围仅受限于所附的权利要求。
本领域的技术人员还将认识到，或者能够确认使用不超过常规实验，在本文中所述的本发明的具体的实施方案的许多等价物。这些等价物也包含在所附的权利要求中。
Claims (10)
1.一种核苷亚磷酰胺单体，其特征在于，所述单体通式结构如下，
，其中，R1是氢、烷氧基、卤素或烷氧基硅烷基团，Base是碱基A（腺嘌呤）、碱基G（鸟嘌呤）或碱基C（胞嘧啶），R2表示A、G、C三种不同碱基上的保护基团，R2是/>或/>。
2.制备权利要求1所述的核苷亚磷酰胺单体方法，其特征在于，所述方法如下所示，包括以下步骤：
，
第一步：式a化合物与式b化合物先经酸胺缩合，再利用成五元环的驱动力，经分子内胺酯交换，得到酰亚胺保护的中间体01；
第二步：将步骤1得到的产物溶解，加入4,4'-二甲氧基三苯基氯甲烷，保温反应，反应结束后加入甲醇淬灭反应，纯化后得到中间体02；
第三步：将中间体02溶解，加入四氮唑作为催化剂，加入双(二异丙基氨基)(2-氰基乙氧基)膦，室温反应，反应结束后经过冰水萃取，收集下层有机相，干燥过滤后减压蒸干得粗品；用二氯甲烷、乙酸乙酯或二者的混合物溶解粗品，缓慢滴加至正庚烷或正己烷中，滴加的过程中因溶液溶解性变化析出固体，在惰性氛围下过滤和烘干得到所述核苷亚磷酰胺单体。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤2中反应体系水分含量不大于490ppm。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤2中加入4,4'-二甲氧基三苯基氯甲烷的物质的量为中间体01物质的量的1.05~1.15倍。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤2中加入4,4'-二甲氧基三苯基氯甲烷的物质的量为中间体01物质的量的1.05~1.10倍。
6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤2中保温反应的反应温度区间为0±5 ℃。
7.权利要求1所述的核苷亚磷酰胺单体在合成核酸中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，在合成核酸中脱除所述核苷亚磷酰胺单体上R2保护基团时，使用水合肼溶液。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，使用水合肼乙醇溶液、水合肼水溶液或水合肼乙腈溶液。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，使用20%-50%体积浓度的水合肼乙醇溶液。
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Citations (2)
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Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0818460A2 (de) * | 1996-07-11 | 1998-01-14 | Hoechst Aktiengesellschaft | Festphasensynthese von Oligonucleotiden |
| CN111718387A (zh) * | 2019-03-22 | 2020-09-29 | 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 | 一种模块化dna的合成方法 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| HIROSUKE TSUNODA等: ""Synthesis and Properties of DNA Oligomers Containing 2′-Deoxynucleoside N-Oxide Derivatives"", 《J. ORG. CHEM.》, vol. 73, pages 1217 - 1224 * |
| HIROSUKE TSUNODA等: ""Synthesis of Oligodeoxynucleotides Using Fully Protected Deoxynucleoside 3′-Phosphoramidite Building Blocks and Base Recognition of Oligodeoxynucleotides Incorporating N3-Cyano-Ethylthymine"", 《MOLECULES》, vol. 15, pages 7509 - 7531, XP055718723, DOI: 10.3390/molecules15117509 * |
| MARKUS BEIER等: ""Phthaloyl Strategy: A New Concept of Oligonucleotide Synthesis"", 《HELVETICA CHIMICA ACTA》, vol. 82, pages 633 - 644, XP055325884, DOI: 10.1002/(SICI)1522-2675(19990407)82:4<633::AID-HLCA633>3.0.CO;2-U * |
| 张金玉等: "《有机合成反应及路线设计研究》", 31 August 2020, 中国原子能出版社, pages: 101 - 104 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN117362370B (zh) | 2024-03-05 |
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