CN117357515A - 鸦胆子苦素d在制备抑制肿瘤血管生成的药物中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了鸦胆子苦素D在制备抑制肿瘤血管生成的药物中的应用，涉及生物医药技术领域。本发明研究发现，鸦胆子苦素D具有抑制肿瘤相关成纤维细胞的以下能力的作用：(1)促进血管内皮细胞增殖的能力；(2)促进血管内皮细胞出芽的能力；(3)促进血管内皮细胞迁移与侵袭的能力；(4)促进血管内皮细胞小管形成的能力。基于此，鸦胆子苦素D具有抑制肿瘤血管生成的作用，可以减缓肿瘤生长速度，从而达到增强肿瘤治疗效果的目的。

Description

鸦胆子苦素D在制备抑制肿瘤血管生成的药物中的应用
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域，特别是涉及鸦胆子苦素D在制备抑制肿瘤血管生成的药物中的应用。
背景技术
恶性肿瘤是高发的重大疾病，其致死率高，严重危害国民身体健康。肿瘤血管生成，即新生管腔形成，为肿瘤的生长提供源源不断的养分，是实体肿瘤生长和癌细胞远处转移必不可少的过程。血管的形成离不开内皮细胞，血管内皮细胞是覆盖在血管内膜表面纵向排列的单层扁平细胞，其在维持血管张力、调节血压以及新生血管生成等方面具有重要作用。肿瘤血管生成主要包括毛细血管基底膜的降解、内皮细胞增殖、迁移以及管状血管结构的形成、血管融合和周细胞的稳定等步骤。在健康成年人身上，内皮细胞通常沉默；而在缺氧、组织损伤等病理条件下，内皮细胞可迅速协调通过血管出芽的方式形成新的血管。目前已开发的血管生长因子单克隆抗体药物与小分子抑制剂存在一定的副作用，其长时间药物治疗会导致肿瘤的药物敏感性逐渐降低，甚至出现耐药现象，而药物停止使用后肿瘤易复发，并未获得良好的临床疗效。因此，亟需探究更加有效的抑制肿瘤血管生成的治疗途径或药物。
恶性肿瘤是一个由多种细胞协同癌细胞发生恶性转变的复杂组织，在肿瘤组织中癌细胞和肿瘤微环境(Tumor microenvironment，TME)相互影响、共同进化。肿瘤组织中复杂的血管网络不仅受肿瘤细胞自分泌产生的多种因子调控，还受肿瘤微环境中多种基质细胞间的旁分泌影响。肿瘤相关成纤维细胞(Cancer-associated fibroblasts，CAFs)是TME中最主要的基质细胞，也是旁分泌信号的主要来源。研究证实，多数活化形式的CAFs不仅通过分泌血管内皮生长因子、成纤维细胞生长因子、白介素-6、基质金属蛋白酶等促进肿瘤血管新生与肿瘤完整血管循环系统的构建，还能与内皮细胞通过配体-受体结合发生精细的细胞间通讯连接，进而增强促血管生成因子表达，加快内皮细胞的增殖与迁移，促进肿瘤血管生成以及癌细胞浸润与转移。
鸦胆子苦素D(Brucine D，BD)是从传统中草药鸦胆子中提取的三环四萜类化合物，是鸦胆子属植物的标志性次生代谢产物。目前还尚未出现胆子苦素D在抑制肿瘤血管生成中应用的相关报道。
发明内容
本发明的目的是提供鸦胆子苦素D在制备抑制肿瘤血管生成的药物中的应用，以解决上述现有技术存在的问题，本发明研究发现鸦胆子苦素D可以抑制肿瘤微环境中最主要的基质细胞CAFs对肿瘤血管生成的促进能力，进而遏制肿瘤的生长与转移，具有重要的临床应用价值。
为实现上述目的，本发明提供了如下方案：
本发明提供鸦胆子苦素D在制备抑制肿瘤血管生成的药物中的应用。
进一步地，所述药物通过抑制肿瘤相关成纤维细胞促进血管内皮细胞增殖的能力，来抑制肿瘤血管生成。
进一步地，所述药物通过抑制肿瘤相关成纤维细胞促进血管内皮细胞出芽的能力，来抑制肿瘤血管生成。
进一步地，所述药物通过抑制肿瘤相关成纤维细胞促进血管内皮细胞迁移与侵袭的能力，来抑制肿瘤血管生成。
进一步地，所述药物通过抑制肿瘤相关成纤维细胞促进血管内皮细胞小管形成的能力，来抑制肿瘤血管生成。
本发明还提供一种抑制肿瘤血管生成的药物，活性成分包括鸦胆子苦素D。
进一步地，所述药物还包括药学上可接受的辅料。
进一步地，所述药物的剂型包括片剂、颗粒剂、胶囊剂、注射剂、粉剂或丸剂。
本发明公开了以下技术效果：
本发明研究发现，鸦胆子苦素D具有抑制肿瘤相关成纤维细胞的以下能力的作用：(1)促进血管内皮细胞增殖的能力；(2)促进血管内皮细胞出芽的能力；(3)促进血管内皮细胞迁移与侵袭的能力；(4)促进血管内皮细胞小管形成的能力。基于此，鸦胆子苦素D具有抑制肿瘤血管生成的作用，可以减缓肿瘤生长速度，从而达到增强肿瘤的治疗效果的目的。
本发明阐述了鸦胆子苦素D作为抗血管生成药物在恶性肿瘤治疗中的应用价值，其可以抑制肿瘤微环境中最主要的基质细胞CAFs对肿瘤血管生成的促进能力，进而遏制肿瘤的生长与转移，具有重要的临床应用价值。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为鸦胆子苦素D抑制CAFs促血管内皮细胞(HUVECs)增殖能力实验(n＝3)的结果；与HUVECs相比，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001；与共培养模型组比较，*P<0.05，**P<0.01；
图2为鸦胆子苦素D抑制CAFs促HUVECs出芽能力实验(n＝3)的结果；其中，A为显微镜拍照图；B为3D细胞团出芽面积统计结果，与HUVECs比较，***P<0.001，与共培养模型组比较，***P<0.001；
图3为鸦胆子苦素D抑制CAFs促HUVECs迁移与侵袭能力实验(n＝3)的结果；其中，A为BD抑制CAFs促HUVECs迁移与侵袭能力的代表性图像；B和C分别为不同组别相对迁移细胞数和相对侵袭细胞数统计图，与HUVECs相比，**P<0.01，与共培养模型组比较，**P<0.01，***P<0.001；
图4为鸦胆子苦素D抑制CAFs促HUVECs小管形成能力实验(n＝3)的结果；其中，A为BD抑制CAFs促HUVECs小管形成能力的代表性图像；B为小管长度统计结果，与HUVECs比较，**P<0.01，与共培养模型组比较，**P<0.01，***P<0.001；
图5为鸦胆子苦素D抑制荷瘤小鼠肿瘤生长实验(n＝6)的结果；其中A为各组荷瘤小鼠随时间活体成像变化；B为不同组别荷瘤小鼠肿瘤抑制率，与模型组比较，***P<0.001；C为不同组别荷瘤小鼠肿瘤体积增长曲线图，与模型组比较，***P<0.001；D为各组小鼠肿瘤组织病理学分析及Ki-67蛋白的表达变化；
图6为鸦胆子苦素D抑制荷瘤小鼠肿瘤组织中CAFs标志物α-SMA及微血管密度CD31的表达实验(n＝3)的结果；其中，A为免疫组化分析各组小鼠肿瘤组织中CD31的表达的结果；B为多色免疫荧光技术分析各组小鼠肿瘤组织中α-SMA及CD31的表达的结果；
图7为鸦胆子苦素D抑制荷瘤小鼠肺/肝转移实验(n＝6)的结果；其中A和B分别为各组荷瘤小鼠肺组织肿瘤转移灶代表性图片和各组小鼠肺肿瘤转移结节数目统计图，与模型组比较，***P<0.001；C为各组小鼠肺组织与肝组织肿瘤转移灶病理学分析图。
具体实施方式
现详细说明本发明的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本发明的限制，而应理解为是对本发明的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
应理解本发明中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本发明。另外，对于本发明中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值，以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本发明内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。
除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本发明仅描述了优选的方法和材料，但是在本发明的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。
在不背离本发明的范围或精神的情况下，可对本发明说明书的具体实施方式做多种改进和变化，这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本发明的说明书得到的其他实施方式对技术人员而言是显而易见得的。本发明说明书和实施例仅是示例性的。
关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等，均为开放性的用语，即意指包含但不限于。
实施例1
1.实验材料
1.1实验细胞培养
人脐静脉内皮细胞(HUVECs)与荧光素酶标记的鼠源乳腺癌细胞系(4T1-Luciferase)购买于湖南丰晖生物科技有限公司，鼠源乳腺癌细胞系(4T1)购买于中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库，上述细胞均于宁夏医科大学工程技术研究中心药效学研究室液氮罐中保存。将复苏的HUVECs细胞及4T1细胞分别加入内皮细胞专用培养基和RPMI1640培养基，吹打为细胞悬液并分别接种于100mm3培养皿中，于37℃、5％CO2的培养箱中常规培养，按照实验所需密度进行接种，每周更换新鲜培养基3次。
CAFs来源于肿瘤分期为T2期的乳腺癌患者，在无菌环境下剪碎、消化提取获得。具体操作如下：无菌条件下收集乳腺癌原发癌组织，迅速转移至细胞间超净台进行操作，用含0.1％双抗的PBS清洗组织块，剔除坏死组织、脂肪组织及其余结缔组织。将组织于DMED/F12培养基中剪碎至约1mm3大小，离心弃上清。采用混合消化液消化组织块(I型胶原酶：透明质酸酶：胰蛋白酶＝1:1:2)，待有细胞团出现时过200目细胞筛。将细胞接种于DMEM/F12培养基，每日观察，待细胞贴壁伸展、生长近融合时进行酶消化时间差法及反复贴壁法进行纯化。
1.2实验动物
购买80只4～6周龄BALB/C雌性小鼠，体重16～18g，所有动物于宁夏医科大学动物中心SPF级屏障中饲养(伦理号：IACUC-NYLAC-2023-114)。
2.实验方法
2.1鸦胆子苦素D对CAFs促HUVECs增殖能力的影响
CAFs条件培养基(CM)的收集：取对数生长期的CAFs，以密度为3×104/mL接种于6孔板中，待细胞贴壁后，吸走培养基，每孔加入1mL无清血培养基，于37℃、5％CO2的培养箱中培养24h，收集细胞培养上清液并离心获得CAFs条件培养基。
鸦胆子苦素D对CAFs促HUVECs增殖能力的影响：取对数生长期的HUVECs按照3×104/mL的浓度接种于96孔板中，每孔添加细胞悬液100μL，待细胞贴壁后，按照HUVECs组、CAFs(CM)+HUVECs组、CAFs(CM)+HUVECs+BD(0.2μM)和CAFs(CM)+HUVECs+BD(0.5μM)组分组。依据分组不同，除HUVECs组外，其余组分别加入200μL条件培养基和不同浓度的药剂(即0、0.2或0.5μM BD)，给药处理细胞24h、48h和72h，依照CCK-8检测试剂盒操作步骤，测定鸦胆子苦素D对CAFs促HUVECs增殖能力的影响。
2.2鸦胆子苦素D对CAFs促HUVECs出芽能力的影响
96孔板中加入50μL 1％聚甲基丙烯酸2-羟乙脂(Poly-HEMA)于超净工作台过夜，使用前分别用蒸馏水和PBS分别对1％Poly-HEMA的96孔板进行冲洗。取1×103个HUVECs细胞，离心后用0.24％甲基纤维素培养基重悬，加入上述96孔板中，37℃培养过夜，形成单个球体。另取96孔板并在孔中加入50μL matrigel胶，将其放入培养箱中2h使其凝固；吸取成球细胞，400g离心5min，按照HUVECs组、CAFs(CM)+HUVECs组、CAFs(CM)+HUVECs+Apatinib(10nM)、CAFs(CM)+HUVECs+BD(0.2μM)和CAFs(CM)+HUVECs+BD(0.5μM)组分组。依据分组不同，除HUVECs组外，其余组分别加入200μL条件培养基和不同浓度的药剂[即10nMApatinib(阿帕替尼)、0μM BD、0.2μM BD或0.5μMBD]进行混悬，加入已铺胶的96孔板中，37℃孵育培养；分别于24h、36h和48h拍照，观察其出芽情况。
2.3鸦胆子苦素D对CAFs促HUVECs迁移与侵袭能力的影响
取对数生长期的CAFs 600μL，密度为3×104/mL，培养基为含15％FBS的DMEM/F12，接种于24孔板中培养24h，另取对数生长期的HUVECs 200μL，密度为3×104/mL，培养基为含5％FBS的内皮细胞专用培养基，接种于Transwell小室上室培养24h，之后将Transwell小室放置在24孔板上进行共培养以制备CAFs与HUVECs上下室共培养细胞模型。按照HUVECs组、CAFs+HUVECs组、CAFs+HUVECs+Apatinib(10nM)、CAFs+HUVECs+BD(0.2μM)和CAFs+HUVECs+BD(0.5μM)组分组。依据分组不同，除HUVECs组外，其余组分别加入200μL条件培养基和不同浓度的药剂(即10nMApatinib、0μM BD、0.2μM BD或0.5μM BD)，培养24h后，倒去上室培养液，用蓬松棉签擦去小室内的细胞，将小室于4％多聚甲醛中固定20min，PBS清洗3次，结晶紫染15min。染色结束后，用PBS将小室冲干净，于显微镜下拍照小室底部迁移细胞，用ImageJ软件统计迁移细胞数。Transwell侵袭实验中，预先将100μL的matrigel胶(matrigel:培养基＝1:30)包被于Transwell小室上部，于培养箱6h以上，去除未凝固的基质胶，后续操作步骤与Transwell迁移实验相同。
2.4鸦胆子苦素D对CAFs促HUVECs小管形成能力的影响
96孔板中加入50μL matrigel胶，将其放入培养箱中2h使其凝固。取对数生长期的HUVECs细胞100μL，密度为5×105/mL，按照HUVECs组、CAFs(CM)+HUVECs组、CAFs(CM)+HUVECs+Apatinib(10nM)、CAFs(CM)+HUVECs+BD(0.2μM)和CAFs(CM)+HUVECs+BD(0.5μM)组分组，依据分组不同，除HUVECs组外，其余组分别加入100μL条件培养基和不同浓度的药剂(即10nMApatinib、0μM BD、0.2μM BD或0.5μMBD)进行混悬，之后加入已凝固的matrigel胶上，放入培养箱中。每隔1h在显微镜下进行拍照观察。
2.5鸦胆子苦素D抑制荷瘤小鼠原位瘤生长及肺/肝转移作用
本发明研究发现，鸦胆子苦素D可以抑制肿瘤血管生成，从而延缓肿瘤进展，在以下的实验中，本发明以4T1细胞为例(并不仅限于4T1细胞)，对鸦胆子苦素D的上述作用进行说明。
2.5.1荷瘤小鼠模型制备与给药
将生长状态良好的4T1或4T1-Luciferase细胞接种细胞消化后调整细胞悬液浓度为4×106个/mL，取0.1mL接种于BALB/C小鼠第四对乳腺脂肪垫内进行造模。10天后所有小鼠均长出肿瘤并随机分为5组(n＝6)，并按照以下方案给药：
(1)空白组：未接肿瘤，小鼠正常进食进水；
(2)模型组(4T1组)：造模后，给予生理盐水/2d；
(3)阿帕替尼(100mg/kg)：灌胃给予阿帕替尼，100mg/kg/d；
(4)鸦胆子苦素D(1.5mg/kg)：腹腔注射给予鸦胆子苦素D，1.5mg/kg/2d；
(5)鸦胆子苦素D(3mg/kg)：腹腔注射给予鸦胆子苦素D，3mg/kg/2d。
2.5.2鸦胆子苦素D抑制荷瘤小鼠原位瘤生长及肺/肝转移作用
小动物活体成像：对于接种4T1-Luciferase细胞的荷瘤小鼠，给药期间每7天采用小动物活体成像系统监测小鼠肿瘤大小及分布情况。具体实验操作如下：用无菌PBS配置D-荧光素储存液15mg/mL，0.2μm滤膜过滤除菌，于4℃避光保存。成像前先腹腔注射D-荧光素，每10g小鼠注射100μL D-荧光素储备液，5分钟后将小鼠进行麻醉后，置于小动物活体成像仪中进行图像采集。
连续给药21天后，麻醉并处死小鼠，剥离肿瘤组织并计算各组小鼠肿瘤抑瘤率，采用H&E染色、免疫组化技术检测荷瘤小鼠肿瘤病理学变化以及Ki-67蛋白的表达；剥离肺组织与肝组织，拍照观察各组荷瘤小鼠肺组织肿瘤转移病灶结节数量，并采用H&E染色检测各组荷瘤小鼠肺组织与肝组织切片病灶情况。
2.5.3鸦胆子苦素D抑制荷瘤小鼠肿瘤组织α-SMA与CD31的表达
各组小鼠肿瘤组织经固定、切片后，依照检测方案标准流程，采用免疫组化技术检测荷瘤小鼠肿瘤组织中微血管密度CD31的表达，采用多色免疫荧光技术检测CAFs标志物α-SMA及微血管密度CD31的表达。
2.6数据统计分析
全部数据应用SPSS24.0软件进行分析。计量资料结果均以±s表示，多样本间数据比较先进行正态性和方差齐性检验，均符合采用t检验或单因素方差分析。若不符合正态性或方差齐性，采用Kruskal-Wallis秩和检验，以α＝0.05为检验水准，以P＜0.05认为具有统计学差异。
3.实验结果
3.1鸦胆子苦素D抑制CAFs促HUVECs增殖能力
CAFs是肿瘤微环境中重要的基质细胞，其可通过旁分泌促进血管内皮细胞增殖或使内皮细胞外侧出现新的细胞，以维持新生血管的稳定。本发明采用CCK-8法检测鸦胆子苦素D对CAFs促HUVECs增殖能力的影响，结果如图1所示，与CAFs的条件培养基共孵育24h、48h和72h后，HUVECs细胞活力均增高，说明CAFs以时间依赖性促进了HUVECs增殖。给予0.5μM的鸦胆子苦素D后，其可显著降低HUVECs的细胞存活力，表明该剂量可有效抑制CAFs对HUVECs的促增殖能力，差异具有统计学意义。
3.2鸦胆子苦素D抑制CAFs促HUVECs出芽能力
在原有微血管的基础上通过“芽生”的方式形成新生毛细血管是肿瘤血管生成重要方式。出芽实验结果(见图2)表明，与HUVECs相比，“CAFs+HUVECs”细胞共培养后HUVECs细胞出芽能力增强，且差异具有统计学意义；在“CAFs+HUVECs”细胞共培养细胞模型下给予10nM阳性药阿帕替尼以及0.2μM与0.5μM的鸦胆子苦素D后，HUVECs的芽生面积与出芽长度均减小和减短，差异具有统计学意义。以上结果初步表明，鸦胆子苦素D可抑制CAFs促HUVECs出芽能力。
3.3鸦胆子苦素D抑制CAFs促HUVECs迁移与侵袭能力
血管新生的关键环节是内皮细胞的运动和直接迁移。如图3所示，采用Transwell小室培养法制备“CAFs+HUVECs”上下室共培养细胞模型，探究CAFs促HUVECs的迁移与侵袭能力以及鸦胆子苦素D对CAFs促HUVECs迁移与侵袭的抑制作用。迁移实验结果表明，CAFs可促进HUVECs的迁移数量，而给予10nM的阿帕替尼以及0.2μM与0.5μM的鸦胆子苦素D后，穿过上室的HUVECs数量显著减少，且差异具有统计学意义。在侵袭实验中，通过预先铺设的matrigel基质胶可模拟细胞外基质。当内皮细胞与基质的相互作用失衡，将促进血管新生。结果表明，CAFs可促进HUVECs穿过细胞外基质提高其侵袭能力，而鸦胆子苦素D可抑制CAFs促HUVECs的侵袭能力。
3.4鸦胆子苦素D抑制CAFs促HUVECs小管形成
内皮细胞管腔形成是评价肿瘤血管生成金标准。如图4所示，小管形成实验结果表明，与HUVECs相比，“CAFs+HUVECs”细胞共培养后其形成血管样小管的能力增强，且差异具有统计学意义；在“CAFs+HUVECs”细胞共培养细胞模型下，给予10nM的阿帕替尼以及0.2μM与0.5μM的鸦胆子苦素D后，HUVECs的管腔形成能力均减弱，差异具有统计学意义。以上结果初步表明，鸦胆子苦素D可抑制CAFs促HUVECs小管形成能力。
3.5鸦胆子苦素D抑制荷瘤小鼠肿瘤生长
4T1细胞及4T1-Luciferase细胞接种10天后，所有小鼠均可触及到直径超过5mm的肿瘤。连续给药21天，如图5中A所示，与模型组相比，1.5mg/kg和3mg/kg鸦胆子苦素D给药后，肿瘤生长随着给药时间的增加逐渐被抑制；图5中B亦反映上述现象，与模型组相比，给予1.5mg/kg和3mg/kg鸦胆子苦素D后，各组荷瘤小鼠肿瘤生长均出现抑制情况，差异具有统计学意义；图5中C为不同给药时间荷瘤小鼠肿瘤体积的监测情况，模型组小鼠肿瘤体积增长速度较其它各组均快，给予1.5mg/kg和3mg/kg鸦胆子苦素D治疗后，荷瘤小鼠的肿瘤增速降低，且处于停滞状态。如图5中D所示，采用H&E病理学分析小鼠原位瘤组织，发现模型组肿瘤核大而圆，核分裂现象明显，而给予1.5mg/kg及3mg/kg的鸦胆子苦素D后，肿瘤组织出现细胞空泡凋亡，细胞核边缘化明显；免疫组化检测Ki-67蛋白发现，模型组小鼠阳性表达较高，给予1.5mg/kg及3mg/kg的鸦胆子苦素D后，小鼠原位瘤组织Ki-67阳性表达降低。以上结果表明，鸦胆子苦素D可以显著抑制荷瘤小鼠原位肿瘤生长。
3.6鸦胆子苦素D抑制小鼠原位瘤组织中α-SMA以及CD31的表达
CD31的表达是衡量肿瘤微血管密度的重要指标。本发明通过免疫组化检测荷瘤小鼠肿瘤组织中血管内皮细胞标志物CD31的表达情况，结果如图6中A所示，模型组CD31阳性表达较高，说明肿瘤新生血管较多，给予100mg/kg阿帕替尼和1.5mg/kg及3mg/kg的鸦胆子苦素D治疗后，小鼠肿瘤组织CD31阳性表达降低，表明肿瘤微血管密度降低；通过组织多重免疫荧光对荷瘤小鼠肿瘤组织中CAFs标志物α-SMA(绿色)以及CD31(红色)进行双染，结果显示模型组α-SMA以及CD31荧光强度均较高，说明活化状态的CAFs促进血管内皮细胞的增殖，其构建了肿瘤血管系统；给予100mg/kg阿帕替尼和1.5mg/kg及3mg/kg的鸦胆子苦素D治疗后，小鼠肿瘤组织α-SMA与CD31荧光强度均降低(见图6中B)，表明鸦胆子苦素D可同时降低小鼠肿瘤组织中CAFs标志物α-SMA以及内皮细胞标志物CD31的表达，降低肿瘤微血管密度，从而抑制肿瘤血管生成。
3.7鸦胆子苦素D抑制荷瘤小鼠肺/肝转移
实验结束后，通过剥离各组荷瘤小鼠肺脏发现模型组荷瘤小鼠肺转移结节最多，而病理学分析显示该组小鼠肺/肝组织肿瘤转移病灶数量最多且面积最大(如图7中A和B所示)，给予1.5mg/kg及3mg/kg的鸦胆子苦素D治疗后，小鼠肺肿瘤结节数显著减少，并且小鼠的肺/肝转移病灶面积与数量均显著减小(见图7中C)，且呈剂量依赖性。以上结果表明，鸦胆子苦素D可以显著抑制荷瘤小鼠肺/肝转移病灶的形成。
综上所述，鸦胆子苦素D可抑制肿瘤血管生成，进而遏制原位肿瘤的生长及肺/肝肿瘤转移灶的形成。
以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。

Claims (8)

1.鸦胆子苦素D在制备抑制肿瘤血管生成的药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物通过抑制肿瘤相关成纤维细胞促进血管内皮细胞增殖的能力，来抑制肿瘤血管生成。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物通过抑制肿瘤相关成纤维细胞促进血管内皮细胞出芽的能力，来抑制肿瘤血管生成。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物通过抑制肿瘤相关成纤维细胞促进血管内皮细胞迁移与侵袭的能力，来抑制肿瘤血管生成。
5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物通过抑制肿瘤相关成纤维细胞促进血管内皮细胞小管形成的能力，来抑制肿瘤血管生成。
6.一种抑制肿瘤血管生成的药物，其特征在于，活性成分包括鸦胆子苦素D。
7.根据权利要求6所述的药物，其特征在于，所述药物还包括药学上可接受的辅料。
8.根据权利要求7所述的药物，其特征在于，所述药物的剂型包括片剂、颗粒剂、胶囊剂、注射剂、粉剂或丸剂。
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