CN117355336A - 基于SIRP α的嵌合蛋白的联合疗法 - Google Patents

基于SIRP α的嵌合蛋白的联合疗法 Download PDF

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CN117355336A CN202280033222.6A CN202280033222A CN117355336A CN 117355336 A CN117355336 A CN 117355336A CN 202280033222 A CN202280033222 A CN 202280033222A CN 117355336 A CN117355336 A CN 117355336A
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T·施赖伯
S·达西瓦
G·弗罗姆
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Abstract

本公开尤其涉及组合物的组合，其包含可用于治疗疾病的方法例如针对癌症的免疫疗法的嵌合蛋白。

Description

基于SIRP α的嵌合蛋白的联合疗法
技术领域
本公开尤其涉及组合物的组合，其包含可用于治疗疾病的方法例如针对癌症的免疫疗法中的嵌合蛋白。
优先权
本申请要求2022年2月9日提交的美国临时申请号63/308,304；以及2021年3月5日提交的63/157,324的权益和优先权，每一篇的内容均通过引用以其整体并入本文。
以电子方式提交的文本文件的描述
本申请含有序列表。其已经由EFS-Web作为标题为“SHK-045PC_116981-5045_ST25”的ASCII文本文件以电子方式提交。该序列表大小为57,499字节，创建于2022年3月2日。序列表通过引用以其整体并入本文。
背景技术
联合疗法在现代癌症治疗中非常常见。然而，联合疗法是高度不可预测的。例如，即使药物靶点对得到验证，联合疗法也可能无效。联合疗法面临的障碍包括缺乏功效、不良的药物相互作用、组合的药物毒性、常见的潜在耐药机制(例如药物外排泵)的发展、无法预测治疗功效、需要额外的生物标志物等。尽管某些组合显示出治疗益处，但仅在选定的癌症组中并且通常在少数患有这些癌症的患者中观察到疗效。因此，需要更多的工作来寻找新的治疗癌症的联合疗法。
发明概述
因此，在一个方面，本公开提供了一种用于治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物，所述异源嵌合蛋白包含：(a)第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，(b)第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，和(c)连接第一结构域和第二结构域的接头；以及向受试者施用包含抗癌剂的第二药物组合物，所述抗癌剂选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰(neddylation)抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂(reactivator)和抗FOLR1抗体，或其组合。
在实施方案中，第一药物组合物和第二药物组合物同时施用。在实施方案中，在施用第二药物组合物之后施用第一药物组合物。在实施方案中，在施用第二药物组合物之前施用第一药物组合物。在实施方案中，第一药物组合物的剂量小于向尚未接受或未正在接受第二药物组合物治疗的受试者施用的第一药物组合物的剂量。在实施方案中，施用的第二药物组合物的剂量小于向尚未接受或未正在接受第一药物组合物治疗的受试者施用的第二药物组合物的剂量。在实施方案中，与仅已接受或仅正在接受第一药物组合物治疗的受试者相比，受试者的生存机会增加，且没有胃肠道炎症和体重减轻，和/或肿瘤尺寸或癌症患病率降低。在实施方案中，与仅已接受或仅正在接受第二药物组合物治疗的受试者相比，受试者的生存机会增加，且没有胃肠道炎症和体重减轻，和/或肿瘤大小或癌症患病率降低。
在一个方面，本公开提供了用于治疗受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含异源嵌合蛋白的药物组合物，所述异源嵌合蛋白包含：(a)第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，(b)第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体，或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，和(c)连接第一结构域和第二结构域的接头；其中所述受试者已经接受或正在接受包含抗癌剂的第二药物组合物的治疗，所述抗癌剂选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体，或其组合。
在实施方案中，向受试者施用的药物组合物的剂量小于向尚未接受或未正在接受第二药物组合物治疗的受试者施用的药物组合物的剂量。
在一个方面，本公开提供了用于治疗受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含抗癌剂的第二药物组合物，所述抗癌剂选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体，或其组合；其中所述受试者已经接受或正在接受异源嵌合蛋白的治疗，所述异源嵌合蛋白包含：(a)第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，(b)第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，和(c)连接第一结构域和第二结构域的接头。
在实施方案中，提供给受试者的药物组合物的剂量小于提供给尚未接受或未正在接受异源嵌合蛋白治疗的受试者的药物组合物的剂量。
在本文公开的任何实施方案中，第二药物组合物包含降甲基化剂/表观遗传调节剂。在实施方案中，降甲基化剂/表观遗传调节剂选自阿扎胞苷、5-氮杂-2'-脱氧胞苷、辛二酰苯胺异羟肟酸(saha)、罗米地辛、贝利司他、帕比司他和西达本胺。在实施方案中，降甲基化剂/表观遗传调节剂是阿扎胞苷。
另外或可选地，在实施方案中，第二药物组合物包含蛋白酶体抑制剂。在实施方案中，蛋白酶体抑制剂选自硼替佐米、卡非佐米和伊沙佐米。在实施方案中，蛋白酶体抑制剂是硼替佐米。
另外或可选地，在实施方案中，第二药物组合物包含抗代谢物。在实施方案中，抗代谢物选自5-氟尿嘧啶(5-FU)、卡培他滨、氟尿苷、阿糖胞苷(ARA-C)、吉西他滨、地西他滨和维达扎(vidaza)。在实施方案中，抗代谢物是阿糖胞苷(ARA-C)。
另外或可选地，在实施方案中，第二药物组合物包含DNA合成抑制剂。在实施方案中，DNA合成抑制剂选自5-氟尿嘧啶(5-FU)、卡培他滨、氟尿苷、阿糖胞苷(ARA-C)、吉西他滨、地西他滨和维达扎。在实施方案中，DNA合成抑制剂是阿糖胞苷(ARA-C)或5-氟尿嘧啶(5-FU)。
另外或可选地，在实施方案中，第二药物组合物包含免疫检查点抑制剂。在实施方案中，免疫检查点抑制剂包含抑制选自CTLA-4、PD-1和PD-L1的途径的药剂。在实施方案中，免疫检查点抑制剂包含抗PD-L1抗体。在实施方案中，抗PD-L1抗体选自阿特珠单抗(atezolizumab)、度伐鲁单抗(durvalumab)、阿维单抗(avelumab)、恩沃利单抗(envafolimab)、BMS-936559、CK-301、CS-1001、SHR-1316(HTI-1088)、CBT-502(TQB-2450)和BGB-A333。
另外或可选地，在实施方案中，第二药物组合物包含蒽环素。在实施方案中，蒽环素选自柔红霉素、多柔比星、表柔比星、伊达比星、米托蒽醌和戊柔比星。在实施方案中，蒽环素是多柔比星。
另外或可选地，在实施方案中，第二药物组合物包含拓扑异构酶II抑制剂。在实施方案中，拓扑异构酶II抑制剂选自多柔比星、表柔比星、戊柔比星、柔红霉素、伊达比星、pitoxantrone、匹杉琼(pixantrone)、依托泊苷、替尼泊苷和安吖啶。在实施方案中，拓扑异构酶II抑制剂是多柔比星。
另外或可选地，在实施方案中，第二药物组合物包含先天免疫检查点抑制剂。在实施方案中，先天免疫检查点抑制剂包含靶向CD47-SIRPα相互作用的药剂。在实施方案中，先天免疫检查点抑制剂选自莫洛利单抗(magrolimab)、CC-90002(Celgene)、CC-95251(Celgene)、TTI-621(Trillium Therapeutics)、TTI-622(Trillium Therapeutics)、ALX148(ALX Oncology)、SRF231(Surface Oncology)、IBI188(Innovent)、AO-176(ArchOncology)、BI 765063/OSE-172(Boehringer Ingelheim/OSE Immunotherapeutics)、TG-1801/NI_1701(TG Therapeutics/Novimmune)、TJC4(I-Mab)和SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白。
另外或可选地，在实施方案中，第二药物组合物包含Bcl2抑制剂。在实施方案中，Bcl2抑制剂选自奥利默森(oblimersen)、纳维托克(navitoclax)(ABT-263)、维奈托克(venetoclax)(ABT-199)、奥巴克拉甲磺酸盐(obatoclax mesylate)(GX15-070)和AT-101。在实施方案中，Bcl2抑制剂是维奈托克。
另外或可选地，在实施方案中，第二药物组合物包含蛋白类泛素化修饰抑制剂。在实施方案中，蛋白类泛素化修饰抑制剂是pevonedistat(MLN4924)。
另外或可选地，在实施方案中，第二药物组合物包含微管靶向剂。在实施方案中，微管靶向剂选自紫杉醇、埃博霉素、多西他赛、圆皮海绵内酯(discodermolide)、长春花碱、长春新碱、长春瑞滨、长春氟宁、尾海兔素、软海绵素、哈米特林(hemiasterlins)和隐花素(cryptophysin)52。在实施方案中，微管靶向剂是紫杉醇。
另外或可选地，在实施方案中，第二药物组合物包含胸苷酸合酶(TS)抑制剂。在实施方案中，胸苷酸合酶(TS)抑制剂选自5-氟尿嘧啶(5-FU)、6-巯基嘌呤(6-MP)、卡培他滨、阿糖胞苷、氟尿苷、氟达拉滨、吉西他滨、羟基脲、甲氨蝶呤、培美曲塞、光氨蝶呤(phototrexate)、雷替曲塞、诺拉曲塞(nolatrexed)、ZD9331和GS7904L。在实施方案中，胸苷酸合酶(TS)抑制剂是5-氟尿嘧啶(5-FU)。
另外或可选地，在实施方案中，第二药物组合物包含铂类药物。在实施方案中，铂类药物选自顺铂、卡铂、奥沙利铂、奈达铂、庚铂(heptaplatin)和洛铂(lobaplatin)。在实施方案中，铂类药物是顺铂。在实施方案中，铂类药物是奥沙利铂。
另外或可选地，在实施方案中，第二药物组合物包含拓扑异构酶I抑制剂。在实施方案中，拓扑异构酶I抑制剂选自喜树碱、贝洛替康、拓扑替康和伊立替康。在实施方案中，拓扑异构酶I抑制剂是伊立替康。
另外或可选地，在实施方案中，第二药物组合物包含抗BCMA抗体。在实施方案中，抗BCMA抗体是玛贝兰妥单抗(belantamab mafodotin)。在实施方案中，抗BCMA抗体是贝兰妥单抗(belantamab)或C12A3.2。
另外或可选地，在实施方案中，第二药物组合物包含抗CD38抗体。在实施方案中，抗CD38抗体选自达雷木单抗(daratumumab)和伊沙妥昔单抗(isatuximab)。在实施方案中，抗CD38抗体是达雷木单抗。
另外或可选地，在实施方案中，第二药物组合物包含免疫调节酰亚胺药物(IMiD)。在实施方案中，免疫调节酰亚胺药物(IMiD)选自阿普斯特(apremilast)、沙利度胺(thalidomide)、来那度胺(lenalidomide)和泊马度胺(pomalidomide)。在实施方案中，免疫调节酰亚胺药物(IMiD)是来那度胺或泊马度胺。
另外或可选地，在实施方案中，第二药物组合物包含抗SLAMF7抗体。在实施方案中，抗SLAMF7抗体是依托珠单抗(elotuzumab)。
另外或可选地，在实施方案中，第二药物组合物包含抗CD123抗体。在实施方案中，抗CD123抗体是塔妥珠单抗(talacotuzumab)。
另外或可选地，在实施方案中，第二药物组合物包含突变p53的再激活剂。在实施方案中，突变p53的再激活剂是Prima-1或APR-246。在实施方案中，突变p53的再激活剂是APR-246。
另外或可选地，在实施方案中，第二药物组合物包含抗FOLR1抗体。在实施方案中，抗FOLR1抗体是法妥组单抗(farletuzumab)或米妥昔单抗(mirvetuximab)，包括索星-米妥昔单抗(mirvetuximab soravtansine)。在实施方案中，抗FOLR1抗体是法妥组单抗。
另外或可选地，在实施方案中，第二药物组合物包含阿扎胞苷和/或维奈托克，任选地，其中阿扎胞苷和维奈托克包含在两个单独的剂量单位中，它们一起或单独施用。
在一个方面，本公开提供了用于治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物，所述异源嵌合蛋白包含：第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，以及连接第一结构域和第二结构域的接头；以及向受试者施用包含降甲基化剂/表观遗传调节剂的第二药物组合物。在实施方案中，降甲基化剂/表观遗传调节剂选自阿扎胞苷、5-氮杂-2'-脱氧胞苷、辛二酰苯胺异羟肟酸(saha)、罗米地辛、贝利司他、帕比司他和西达本胺。在实施方案中，降甲基化剂/表观遗传调节剂是阿扎胞苷。
在本文公开的任何实施方案中，异源嵌合蛋白包含基本上包含SIRPα(CD172a)的整个胞外结构域的第一结构域和/或基本上包含CD40L、OX40L或LIGHT的整个胞外结构域的第二结构域。在实施方案中，异源嵌合蛋白包含：(a)包含SIRPα(CD172a)的一部分的第一结构域，(b)包含CD40L、OX40L或LIGHT的一部分的第二结构域，和(c)包含铰链-CH2-CH3Fc结构域的接头。
在本文公开的任何实施方案中，接头是选自柔性氨基酸序列、IgG铰链区和抗体序列的多肽。在实施方案中，接头包含至少一个能够形成二硫键的半胱氨酸残基和/或包含铰链-CH2-CH3 Fc结构域。在实施方案中，接头包含源自于IgG1或IgG4，例如人IgG4或人IgG4的铰链-CH2-CH3 Fc结构域。在实施方案中，接头包含与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQID NO:3的氨基酸序列至少95％同一的氨基酸序列。
在实施方案中，第一结构域包含与SEQ ID NO:57的氨基酸序列至少90％、或至少93％、至少95％、或至少96％、或至少98％、或至少99％同一的氨基酸序列。
在实施方案中，第二结构域包含与SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59或SEQ ID NO:62的氨基酸序列至少90％、或至少93％、至少95％、或至少96％、或至少98％、或至少99％同一的氨基酸序列。在实施方案中，第二结构域包含与SEQ ID NO:58的氨基酸序列至少90％、或至少93％、至少95％、或至少96％、或至少98％、或至少99％同一的氨基酸序列。
在实施方案中，异源嵌合蛋白包含与SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61或SEQ ID NO:63的氨基酸序列至少90％、或至少93％、至少95％、或至少96％、或至少98％、或至少99％同一的氨基酸序列。在实施方案中，异源嵌合蛋白包含与SEQ ID NO:60的氨基酸序列至少90％、或至少93％、至少95％、或至少96％、或至少98％、或至少99％同一的氨基酸序列。
在实施方案中，癌症是以下癌症或与之相关：基底细胞癌、胆道癌；膀胱癌；骨癌；脑和中枢神经系统癌症；乳腺癌；腹膜癌；宫颈癌；绒毛膜癌；结肠和直肠癌；结缔组织癌；消化系统癌症；子宫内膜癌；食道癌；眼癌；头颈癌；胃癌(gastric cancer)(包括消化道癌)；胶质母细胞瘤；肝细胞癌(hepatic carcinoma)；肝细胞瘤(hepatoma)；上皮内肿瘤；肾脏癌或肾癌；喉癌；白血病；肝癌(liver cancer)；肺癌(例如，小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌和肺鳞癌)；黑色素瘤；骨髓瘤；成神经细胞瘤；口腔癌(唇、舌、口和咽)；卵巢癌；胰腺癌；前列腺癌；视网膜母细胞瘤；横纹肌肉瘤；直肠癌；呼吸系统癌症；唾液腺癌；肉瘤；皮肤癌；鳞状细胞癌；胃癌(stomach cancer)；睾丸癌；甲状腺癌；子宫癌或子宫内膜癌；泌尿系统癌症；外阴癌；淋巴瘤，包括霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤，以及B细胞淋巴瘤(包括低级/滤泡性非霍奇金淋巴瘤(NHL)；小淋巴细胞(SL)NHL；中级/滤泡性NHL；中级弥漫性NHL；高级免疫母细胞NHL；高级淋巴母细胞NHL；高级小非裂解细胞性NHL；巨大肿块疾病NHL；套细胞淋巴瘤；AIDS相关淋巴瘤；和瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症；慢性淋巴细胞白血病(CLL)；急性成淋巴细胞白血病(ALL)；毛细胞白血病；慢性成髓细胞白血病；以及其他癌和肉瘤；和移植后淋巴增殖性疾病(PTLD)，以及与斑痣性错构瘤病、水肿(例如与脑肿瘤相关的水肿)、梅格斯综合征(Meigs’syndrome)相关的异常血管增生。
附图简要说明
图1A至图1D显示了I型跨膜蛋白(图1A和图1B，左侧蛋白)和II型跨膜蛋白(图1A和图1B，右侧蛋白)的示意图。I型跨膜蛋白和II型跨膜蛋白可被工程化，使得它们的跨膜和胞内结构域被省略，并且使用接头序列邻接跨膜蛋白的胞外结构域以产生单个嵌合蛋白。如图1C和图1D所示，I型跨膜蛋白例如SIRPα(CD172a)的胞外结构域和II型跨膜蛋白例如CD40L和OX40L的胞外结构域组合成单个嵌合蛋白。图1C描绘了I型跨膜蛋白和II型跨膜蛋白通过省略每种蛋白的跨膜和胞内结构域的连接，并且其中从每种蛋白释放的胞外结构域已通过接头序列邻接。该描绘中的胞外结构域可以包含通常位于细胞膜外的I型蛋白(例如，SIRPα(CD172a))和/或II型蛋白(例如，CD40L、OX40L、LIGHT)的整个氨基酸序列或其保留与预期受体或配体结合的任何部分。此外，本公开的方法中使用的嵌合蛋白在结构域之间包含足够的总体柔性和/或物理距离，使得第一胞外结构域(在图1C和图1D中的嵌合蛋白的左端示出)在空间上能够结合其受体/配体和/或第二胞外结构域(在图1C和图1D中的嵌合蛋白的右端示出)在空间上能够结合其受体/配体。图1D描绘了线性嵌合蛋白中邻接的胞外结构域，其中嵌合蛋白的每个胞外结构域的朝向均“向外”。
图2A和图2B显示了阿扎胞苷(降甲基化剂)对SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的体外吞噬刺激活性的影响。显示了通过流式细胞术测量的人巨噬细胞对K652人慢性粒细胞白血病(CML)细胞(图2A)或Kasumi-3人急性髓细胞白血病(AML)细胞(图2B)的吞噬作用程度的条形图。虚线显示仅用缓冲液对照处理的癌细胞的吞噬作用程度。
图3A和图3B显示了硼替佐米(一种蛋白酶体抑制剂(PSI))对SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的体外吞噬刺激活性的影响。显示了通过流式细胞术测量的人巨噬细胞对MM1R人多发性骨髓瘤(MM)细胞(图3A)或ARD1人多发性骨髓瘤(MM)细胞(图3B)的人巨噬细胞的吞噬作用程度的条形图。虚线显示仅用缓冲液对照处理的癌细胞的吞噬作用程度。
图4显示了维奈托克(一种Bcl-2抑制剂)对SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的体外吞噬刺激活性的影响。显示了通过流式细胞术测量的人巨噬细胞对K652人慢性粒细胞白血病(CML)细胞的人巨噬细胞的吞噬作用程度的条形图。虚线显示仅用缓冲液对照处理的癌细胞的吞噬作用程度。
图5A和图5B显示了抗BCMA抗体(克隆C12A3.2)对SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的体外吞噬刺激活性的影响。显示了通过流式细胞术测量的人巨噬细胞对KM28PE人多发性骨髓瘤(MM)细胞(图5A)或KM12B人多发性骨髓瘤(MM)细胞(图5B)的人巨噬细胞的吞噬作用程度的条形图。虚线显示仅用缓冲液对照处理的癌细胞的吞噬作用程度。
图6显示了达雷木单抗(抗CD38抗体)对SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的体外吞噬刺激活性的影响。显示了通过流式细胞术测量的人巨噬细胞对ARD1人多发性骨髓瘤(MM)细胞的人巨噬细胞的吞噬作用程度的条形图。虚线显示仅用缓冲液对照处理的癌细胞的吞噬作用程度。
图7显示了泊马度胺对SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的体外吞噬刺激活性的影响。显示了通过流式细胞术测量的人巨噬细胞对KMS12B人多发性骨髓瘤(MM)细胞的人吞噬细胞的吞噬作用程度的条形图。虚线显示未经活化T细胞处理的癌细胞的吞噬作用程度。
图8显示了依托珠单抗(抗SLAM7抗体)对SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的体外吞噬刺激活性的影响。显示了通过流式细胞术测量的人巨噬细胞对ARD1人多发性骨髓瘤(MM)细胞的人巨噬细胞的吞噬作用程度的条形图。虚线显示仅用缓冲液对照处理的癌细胞的吞噬作用程度。
图9显示了抗FOLR1抗体对SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的体外吞噬刺激活性的影响。显示了通过流式细胞术测量的人巨噬细胞对ARD1人多发性骨髓瘤(MM)细胞的人巨噬细胞的吞噬作用程度的条形图。虚线显示仅用缓冲液对照处理的癌细胞的吞噬作用程度。
图10A至图10F显示了SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白与多种化疗剂的组合在CT26结直肠癌小鼠同种异体移植模型中的体内抗肿瘤功效。图10A显示了SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白、紫杉醇或它们的组合的体内抗肿瘤功效。图10B显示了SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白、5-氟尿嘧啶或它们的组合的体内抗肿瘤功效。图10C显示了SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白、伊立替康或它们的组合的体内抗肿瘤功效。图10D显示了SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白、多柔比星或它们的组合的体内抗肿瘤功效。图10E显示了SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白、顺铂或它们的组合的体内抗肿瘤功效。图10F显示了SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白、奥沙利铂或它们的组合的体内抗肿瘤功效。
图11A至图11D显示了如通过流式细胞术测量的，阿扎胞苷或pevonedistat(MLN4924)对K652人慢性粒细胞白血病(CML)细胞(图11A和图11C)或Kasumi-3人急性髓细胞白血病(AML)细胞(图11B和图11D)中CD47(图11A和图11B)或钙网蛋白(图11C和图11D)表面表达的影响。
图12A和图12B显示了APR-246对p53(图12A)和钙网蛋白(图12B)表面表达的影响。
图13A至图13C显示了SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白与各种药物的组合在A20淋巴瘤细胞同种异体移植小鼠模型中的体内抗肿瘤功效。图13A显示了SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白与抗PD-L1抗体的组合的体内抗肿瘤功效。图13B显示了SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白与阿糖胞苷的组合的体内抗肿瘤功效。图13C显示了SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白与阿扎胞苷和/或pevonedistat(MLN4924)的组合的体内抗肿瘤功效。
图14A显示了阿扎胞苷和维奈托克增加了Kasumi-3 AML细胞中细胞凋亡标志物膜联蛋白-V的表达。图14B显示了阿扎胞苷和维奈托克增加了Kasumi-3 AML细胞中钙网蛋白的表达。图14C显示了与阿扎胞苷和维奈托克组合的SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白增强了巨噬细胞介导的AML细胞的吞噬作用。
发明详述
本公开部分地基于以下发现：包含信号调节蛋白α(SIRPα(CD172a))和CD40配体(CD40L)、OX40配体(OX40L)或LIGHT的胞外或效应子区域的嵌合蛋白与某些特定抗癌药剂联合施用时，在治疗癌症方面表现出协同作用。此外，这些药剂增强本文公开的基于SIRPα的嵌合蛋白的吞噬刺激活性。此外，这些药剂引起CD47和/或促吞噬信号的诱导。引起这些作用的具体抗癌剂包括降甲基化剂/表观遗传调节剂，例如阿扎胞苷；蛋白酶体抑制剂，例如硼替佐米；抗代谢物，例如阿糖胞苷(ARA-C)或5-氟尿嘧啶(5-FU)；DNA合成抑制剂，例如阿糖胞苷(ARA-C)或5-氟尿嘧啶(5-FU)，免疫检查点抑制剂，例如抗PD-L1抗体；蒽环素，例如多柔比星；拓扑异构酶II抑制剂，例如多柔比星；先天免疫检查点抑制剂，例如抗CD47；Bcl2抑制剂，例如维奈托克；蛋白类泛素化修饰抑制剂，例如pevonedistat；微管靶向剂，例如紫杉醇；胸苷酸合成酶(TS)抑制剂，例如5-氟尿嘧啶；铂类药物，例如顺铂或奥沙利铂；拓扑异构酶I抑制剂例如伊立替康；抗BCMA抗体；抗CD38抗体，例如达雷木单抗；免疫调节酰亚胺药物(IMiD)，例如泊马度胺(pomalidamide)或来那度胺(lenolidamide)；抗SLAMF7抗体，例如依托珠单抗；抗CD123抗体；和突变p53的再激活剂，例如APR-246；抗FOLR1抗体或其组合。
因此，在一个方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物，所述异源嵌合蛋白包含：(a)第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，(b)第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，和(c)连接第一结构域和第二结构域的接头；向受试者施用包含抗癌剂的第二药物组合物，所述抗癌剂选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体，或其组合。
在一个方面，本公开提供了用于治疗受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含异源嵌合蛋白的药物组合物，所述异源嵌合蛋白包含：(a)第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，(b)第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，和(c)连接第一结构域和第二结构域的接头；其中所述受试者已经接受或正在接受包含抗癌剂的第二药物组合物的治疗，所述抗癌剂选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体，或其组合。
在一个方面，本公开提供了一种治疗受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含抗癌剂的第二药物组合物，所述抗癌剂选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体，或其组合；其中所述受试者已经接受或正在接受异源嵌合蛋白的治疗，所述异源嵌合蛋白包含：(a)第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，(b)第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，和(c)连接第一结构域和第二结构域的接头。
重要的是，因为本公开的方法中使用的嵌合蛋白破坏、阻断、减少、抑制和/或隔离免疫抑制信号的传递，例如源自试图避免其检测和/或破坏的癌细胞的免疫抑制信号的传递；和/或增强、增加和/或刺激免疫刺激信号向抗癌免疫细胞的传递，该方法可以通过多种不同的途径提供抗肿瘤作用。通过经由多种不同途径治疗癌症，本公开的方法更有可能在患者中提供任何抗肿瘤作用和/或在患者中提供增强的抗肿瘤作用。此外，由于这些方法通过多种不同的途径起作用，因此它们至少对于对靶向其中一种途径的治疗无反应、反应差或产生耐药性的患者是有效的。因此，对经由两种途径之一起作用的治疗反应不佳的患者可以通过靶向多种途径获得治疗益处。
不希望受理论束缚，本公开的SIRPα(CD172a)-Fc-CD40L嵌合蛋白和/或在本公开的方法中使用的SIRPα(CD172a)-Fc-CD40L嵌合蛋白可以根据以下机制进行操作。首先，SIRPα(CD172a)-Fc-CD40L嵌合蛋白可以通过与APC上的CD40结合来直接激活抗原呈递细胞。在这里，一个优势可能是抗原特异性CD8刺激和/或免疫记忆编程。当联合使用时，与检查点分子相关的抗体可能会增加SIRPα(CD172a)-Fc-CD40L共刺激和抗原呈递机制上调的CD40靶标密度。其次，SIRPα(CD172a)-Fc-CD40L嵌合蛋白可以通过肿瘤细胞阻断和隔离肿瘤细胞上的CD47直接阻断CD47抑制。在这里，一个优点可能是增强的肿瘤吞噬作用和增加的抗原交叉呈递。当联合使用时，抗体依赖性细胞毒性相关抗体增加靶向肿瘤吞噬作用、抗原交叉呈递和抗肿瘤反应。
在实施方案中，本公开的嵌合蛋白和/或本公开的方法中使用的嵌合蛋白消除或减少与破坏SIRP1α/CD47信号传导轴相关的副作用。在实施方案中，本发明的嵌合蛋白或利用其的方法消除或减少血液学副作用。在实施方案中，本发明的嵌合蛋白或利用其的方法消除或减少循环红细胞和血小板数量减少、溶血、血凝、血小板减少和/或贫血的程度。在实施方案中，本发明的嵌合蛋白或利用其的方法表现出比抗CD47抗体相对较少的血液学副作用。
第一药物组合物
本公开的方法包括治疗癌症的方法，在实施方案中，该方法包括施用包含能够阻断免疫抑制信号和/或刺激免疫激活信号的嵌合蛋白的药物组合物。
在一个方面，本公开涉及一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：a)第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，(b)第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，和(c)连接第一结构域和第二结构域的接头。
跨膜蛋白通常由胞外结构域、一个或一系列跨膜结构域和胞内结构域组成。不希望受到理论的束缚，跨膜蛋白的胞外结构域负责与胞外环境中的可溶性受体或配体或膜结合受体或配体(即相邻细胞的膜)相互作用。不希望受理论束缚，跨膜结构域负责将跨膜蛋白定位至质膜。不希望受理论束缚，跨膜蛋白的细胞内结构域负责协调与细胞信号传导分子的相互作用，以协调胞内反应与胞外环境(或反之亦然)。
在实施方案中，可用于本文公开的方法中的嵌合蛋白消除或减少与破坏SIRP1α/CD47信号传导轴相关的副作用。在实施方案中，本发明的嵌合蛋白或利用其的方法消除或减少血液学副作用。在实施方案中，本发明的嵌合蛋白或利用其的方法消除或减少循环红细胞和血小板数量减少、溶血、血凝、血小板减少和/或贫血的程度。在实施方案中，本发明的嵌合蛋白或利用其的方法表现出比抗CD47抗体相对较少的血液学副作用。
在实施方案中，胞外结构域是指跨膜蛋白的一部分，该部分足以结合配体或受体并且有效地将信号传递至细胞。在实施方案中，胞外结构域是通常存在于细胞或细胞膜外部的跨膜蛋白的整个氨基酸序列。在实施方案中，胞外结构域是跨膜蛋白的氨基酸序列的部分，该部分在细胞或细胞膜的外部并且是信号转导和/或配体结合所需要的，如可以使用本领域已知的方法测定的(例如，体外配体结合和/或细胞激活测定)。
在实施方案中，胞外结构域是指跨膜蛋白的一部分，该部分足以结合配体或受体并且有效地将信号传递至细胞。在实施方案中，胞外结构域是通常存在于细胞或细胞膜外部的跨膜蛋白的整个氨基酸序列。在实施方案中，胞外结构域是跨膜蛋白的氨基酸序列的一部分，该部分在细胞或细胞膜的外部并且是信号转导和/或配体结合所需要的，如可以使用本领域已知的方法测定的(例如，体外配体结合和/或细胞激活测定)。
一般有两种类型的单次跨膜蛋白：具有胞外氨基末端和胞内羧基末端的I型跨膜蛋白(参见图1A，左侧蛋白)和具有胞外羧基末端和胞内氨基末端的II型跨膜蛋白(参见图1A，右侧蛋白)。I型和II型跨膜蛋白可以是受体或配体。对于I型跨膜蛋白(例如SIRPα(CD172a))，该蛋白的氨基末端面向细胞外，并因此含有负责与胞外环境中的其他结合伴侣(配体或受体)相互作用的功能结构域(参见图1B，左侧蛋白)。对于II型跨膜蛋白(例如CD40LOX40L和LIGHT)，该蛋白的羧基末端面向细胞外，并因此包含负责与胞外环境的其他结合伴侣(配体或受体)相互作用的功能结构域(参见图1B，右侧蛋白)。因此，这两种类型的跨膜蛋白相对于细胞膜具有彼此相反的方向。
本公开的方法中使用的嵌合蛋白包含I型跨膜蛋白例如SIRPα(CD172a)的胞外结构域和选自CD40L、OX40L和LIGHT的II型跨膜蛋白的胞外结构域。因此，本公开的方法中使用的嵌合蛋白至少包含：包含SIRPα(CD172a)胞外结构域的第一结构域，其直接或经由接头连接至第二结构域，该第二结构域包含CD40L、OX40L或LIGHT的胞外结构域。如图1C和图1D所示，当结构域以氨基末端至羧基末端方向连接时，第一结构域位于嵌合蛋白的“左”侧并且“面向外”，第二结构域位于嵌合蛋白的“右”侧并且“面向外”。
主张了第一结构域和第二结构域的其他配置，例如，第一结构域面向内且第二结构域面向外、第一结构域面向外而第二结构域面向内、以及第一结构域和第二结构域均面向内。当两个结构域均“面向内”时，嵌合蛋白将具有氨基端至羧基端的构型，其包含II型跨膜蛋白的胞外结构域、接头和I型跨膜蛋白的胞外结构域。在此类构型中，嵌合蛋白可能需要包括额外的“空间余度”，如本文别处所述，以允许嵌合蛋白的结构域与其受体/配体之一或两者结合。
在实施方案中，异源嵌合蛋白包含：(a)第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，(b)第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分的，其中该部分能够结合CD40L配体，和(c)连接第一结构域和第二结构域的接头。
在实施方案中，异源嵌合蛋白包含：第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的基本上整个胞外结构域；和/或第二结构域，其包含CD40L的基本上整个胞外结构域。在实施方案中，第一结构域包含SIRPα(CD172a)的基本上整个胞外结构域。在实施方案中，第二结构域包含CD40L的基本上整个胞外结构域。
在实施方案中，异源嵌合蛋白包含：(a)第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，(b)第二结构域，其包含OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L配体，和(c)连接第一结构域和第二结构域的接头。
在实施方案中，异源嵌合蛋白包含：第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的基本上整个胞外结构域，和/或第二结构域，其包含OX40L的基本上整个胞外结构域。在实施方案中，第一结构域包含SIRPα(CD172a)的基本上整个胞外结构域。在实施方案中，第二结构域包含OX40L的基本上整个胞外结构域。
在实施方案中，异源嵌合蛋白包含：(a)第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，(b)第二结构域，其包含LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT配体，和(c)连接第一结构域和第二结构域的接头。
在实施方案中，异源嵌合蛋白包含：第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的基本上整个细胞外结构域；和/或第二结构域，其包含LIGHT的基本上整个细胞外结构域。在实施方案中，第一结构域包含SIRPα(CD172a)的基本上整个胞外结构域。在实施方案中，第二结构域包含LIGHT的基本上整个胞外结构域。
第一结构域
在实施方案中，第一结构域包含信号调节蛋白α(SIRPα)的一部分。在实施方案中，第一结构域包含SIRPα的胞外结构域。在实施方案中，第一结构域包含SIRPα的CD47结合部分。
在实施方案中，本公开的方法中使用的嵌合蛋白包含人SIRPα(CD172a)的胞外结构域，其包含以下氨基酸序列：
EEELQVIQPDKSVLVAAGETATLRCTATSLIPVGPIQWFRGAGPGRELIYNQKEGHFPRVTTVSDLTKRNNMDFSIRIGNITPADAGTYYCVKFRKGSPDDVEFKSGAGTELSVRAKPSAPVVSGPAARATPQHTVSFTCESHGFSPRDITLKWFKNGNELSDFQTNVDPVGESVSYSIHSTAKVVLTREDVHSQVICEVAHVTLQGDPLRGTANLSETIRVPPTLEVTQQPVRAENQVNVTCQVRKFYPQRLQLTWLENGNVSRTETASTVTENKDGTYNWMSWLLVNVSAHRDDVKLTCQVEHDGQPAVSKSHDLKVSAHPKEQGSNTAAENTGSNERNIY(SEQ ID NO:57)。
在实施方案中，本公开的方法中使用的嵌合蛋白包含SIRPα(CD172a)胞外结构域的变体。作为实例，变体可与SEQ ID NO:57具有至少约60％、或至少约61％、或至少约62％、或至少约63％、或至少约64％、或至少约65％、或至少约66％、或至少约67％、或至少约68％、或至少约69％、或至少约70％、或至少约71％、或至少约72％、或至少约73％、或至少约74％、或至少约75％、或至少约76％、或至少约77％、或至少约78％、或至少约79％、或至少约80％、或至少约81％、或至少约82％、或至少约83％、或至少约84％、或至少约85％、或至少约86％、或至少约87％、或至少约88％、或至少约89％、或至少约90％、或至少约91％、或至少约92％、或至少约93％、或至少约94％、或至少约95％、或至少约96％、或至少约97％、或至少约98％、或至少约99％的序列同一性。
在实施方案中，SIRPα(CD172a)的胞外结构域的变体与SEQ ID NO:57具有至少约95％的序列同一性。
普通技术人员可以通过查阅文献来选择SIRPα(CD172a)的已知氨基酸序列的变体，例如，LEE等人,"Novel Structural Determinants of SIRPαthat Mediate Bindingof CD47,"The Journal of Immunology,179,7741-7750,2007和HATHERLEY等人,"TheStructure of the Macrophage Signal Regulatory Protein a(SIRPα)InhibitoryReceptor Reveals a Binding Face Reminiscent of That Used by T CellReceptors,"The Journal Of Biological Chemistry,Vol.282,No.19,pp.14567-14575,2007，其每一篇均通过引用以其整体并入。
第二结构域
在实施方案中，本公开的方法中使用的嵌合蛋白包含人CD40L的胞外结构域，其包含以下氨基酸序列：
HRRLDKIEDERNLHEDFVFMKTIQRCNTGERSLSLLNCEEIKSQFEGFVKDIMLNKEETKKENSFEMQKGDQNPQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKL(SEQID NO:58)。
在实施方案中，本公开的方法中使用的嵌合蛋白包含CD40L胞外结构域的变体。作为实例，变体可与SEQ ID NO:58具有至少约60％、或至少约61％、或至少约62％、或至少约63％、或至少约64％、或至少约65％、或至少约66％、或至少约67％、或至少约68％、或至少约69％、或至少约70％、或至少约71％、或至少约72％、或至少约73％、或至少约74％、或至少约75％、或至少约76％、或至少约77％、或至少约78％、或至少约79％、或至少约80％、或至少约81％、或至少约82％、或至少约83％、或至少约84％、或至少约85％、或至少约86％、或至少约87％、或至少约88％、或至少约89％、或至少约90％、或至少约91％、或至少约92％、或至少约93％、或至少约94％、或至少约95％、或至少约96％、或至少约97％、或至少约98％、或至少约99％的序列同一性。
在实施方案中，CD40L胞外结构域的变体与SEQ ID NO:58具有至少约95％的序列同一性。
普通技术人员可以通过查阅文献来选择CD40L的已知氨基酸序列的变体，例如，An等人.“Crystallographic and Mutational Analysis of the CD40-CD154 Complex andIts Implications for Receptor Activation”,The Journal of Biological Chemistry286,11226-11235，该文献通过引用以其整体并入。
在实施方案中，本公开的方法中使用的嵌合蛋白包含人OX40L的胞外结构域，其包含以下氨基酸序列：
QVSHRYPRIQSIKVQFTEYKKEKGFILTSQKEDEIMKVQNNSVIINCD GFYLISLKGYFSQEVNISLHYQKDEEPLFQLKKVRSVNSLMVASLTYKDK VYLNVTTDNTSLDDFHVNGGELILIHQNPGEFCVL(SEQ IDNO:59)。
在实施方案中，嵌合蛋白包含OX40L胞外结构域的变体。作为实例，变体可与SEQID NO:59具有至少约60％、或至少约61％、或至少约62％、或至少约63％、或至少约64％、或至少约65％、或至少约66％、或至少约67％、或至少约68％、或至少约69％、或至少约70％、或至少约71％、或至少约72％、或至少约73％、或至少约74％、或至少约75％、或至少约76％、或至少约77％、或至少约78％、或至少约79％、或至少约80％、或至少约81％、或至少约82％、或至少约83％、或至少约84％、或至少约85％、或至少约86％、或至少约87％、或至少约88％、或至少约89％、或至少约90％、或至少约91％、或至少约92％、或至少约93％、或至少约94％、或至少约95％、或至少约96％、或至少约97％、或至少约98％、或至少约99％的序列同一性。
在实施方案中，OX40L胞外结构域的变体与SEQ ID NO:59具有至少约95％的序列同一性。
普通技术人员可以通过查阅文献来选择OX40L的已知氨基酸序列的变体，例如CROFT等人,"The Significance of OX40 and OX40L to T cell Biology and ImmuneDisease,"Immunol Rev.,229(1),PP.173-191,2009和BAUM等人,"Molecularcharacterization of murine and human OX40/OX40ligand systems:identificationof a human OX40 ligand as the HTL V-1-regulated protein gp34,"The EMBOJournal,Vol.13,No.77,PP.3992-4001,1994，每一篇均通过引用以其整体并入。
在实施方案中，本公开的方法中使用的嵌合蛋白包含人LIGHT的胞外结构域，其包含以下氨基酸序列：
LQLHWRLGEMVTRLPDGPAGSWEQLIQERRSHEVNPAAHLTGANSSLTGSGGPLLWETQLGLAFLRGLSYHDGALVVTKAGYYYIYSKVQLGGVGCPLGLASTITHGLYKRTPRYPEELELLVSQQSPCGRATSSSRVWWDSSFLGGVVHLEAGEKVVVRVLDERLVRLRDGTRSYFGAFMV(SEQ ID NO:62)。
在实施方案中，嵌合蛋白包含LIGHT胞外结构域的变体。作为实例，变体可与SEQID NO:62具有至少约60％、或至少约61％、或至少约62％、或至少约63％、或至少约64％、或至少约65％、或至少约66％、或至少约67％、或至少约68％、或至少约69％、或至少约70％、或至少约71％、或至少约72％、或至少约73％、或至少约74％、或至少约75％、或至少约76％、或至少约77％、或至少约78％、或至少约79％、或至少约80％、或至少约81％、或至少约82％、或至少约83％、或至少约84％、或至少约85％、或至少约86％、或至少约87％、或至少约88％、或至少约89％、或至少约90％、或至少约91％、或至少约92％、或至少约93％、或至少约94％、或至少约95％、或至少约96％、或至少约97％、或至少约98％、或至少约99％的序列同一性。
在实施方案中，LIGHT胞外结构域的变体与SEQ ID NO:62具有至少约95％的序列同一性。
普通技术人员可以通过查阅文献来选择LIGHT的已知氨基酸序列的变体，例如，Mauri等人,“LIGHT,a new member of the TNF superfamily,and lymphotoxin alphaare ligands for herpesvirus entry mediator.”Immunity 8(1),21-30(1998)；Tamada等人,“LIGHT,a TNF-like molecule,costimulates T cell proliferation and isrequired for dendritic cell-mediated allogeneic T cell response.”J.Immunol.164(8),4105-4110(2000)；Liu等人,“Mechanistic basis for functionalpromiscuity in the TNF and TNF receptor superfamilies:structure of the LIGHT:DcR3 assembly”Structure 22 1252-62(2014)；Faustman等人,“Structural principlesof tumor necrosis factor superfamily signaling.”Sci Signal 11(2018)；Sudhamsu等人,“Dimerization of LTβR by LTα1β2is necessary and sufficient for signaltransduction”Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.110 19896-19901(2013)；Savvides等人,“Mechanisms of immunomodulation by mammalian and viral decoy receptors:insights from structures.Felix J,SN.Nat Rev Immunol 17 112-129(2017)”；Ward-Kavanagh等人,“The TNF Receptor Superfamily in Co-stimulating and Co-inhibitory Responses.”Immunity 44 1005-1019(2016)；以及Wajant“Principles ofantibody-mediated TNF receptor activation.”Cell Death Differ 22 1727-1741(2015)，每一篇均通过引用以其整体并入。
在任何本文公开的方面和实施方案中，嵌合蛋白可包含相对于本文公开的任何蛋白序列具有一个或多个氨基酸突变的氨基酸序列。在实施方案中，一个或多个氨基酸突变可以独立地选自取代、插入、缺失和截短。
在实施方案中，氨基酸突变是氨基酸取代，并且可以包括保守和/或非保守取代。例如，可以基于所涉及的氨基酸残基的极性、电荷、大小、溶解度、疏水性、亲水性和/或两亲性质的相似性来进行“保守取代”。20种天然存在的氨基酸可分为以下六种标准氨基酸组：(1)疏水性：Met、Ala、Val、Leu、Ile；(2)中性亲水性：Cys、Ser、Thr；Asn、Gln；(3)酸性：Asp、Glu；(4)碱性：His、Lys、Arg；(5)影响链取向的残基：Gly、Pro；和(6)芳香族：Trp、Tyr、Phe。如本文所用，“保守取代”定义为用在上述六个标准氨基酸组的同一组中列出的一个氨基酸交换另一个氨基酸。例如，用Glu交换Asp在如此修饰的多肽中保留一个负电荷。此外，甘氨酸和脯氨酸可以根据其破坏α-螺旋的能力而相互取代。如本文所用，“非保守取代”定义为用上述六个标准氨基酸组(1)至(6)的不同组中列出的一个氨基酸交换另一个氨基酸。
在实施方案中，取代还可以包括非经典氨基酸(例如，硒代半胱氨酸、吡咯赖氨酸、N-甲酰基甲硫氨酸、β-丙氨酸、GABA和δ-氨基乙酰丙酸、4-氨基苯甲酸(PABA)、常见氨基酸的D-异构体、2,4-二氨基丁酸、α-氨基异丁酸、4-氨基丁酸、Abu、2-氨基丁酸、γ-Abu、ε-Ahx、6-氨基己酸、Aib、2-氨基异丁酸、3-氨基丙酸、鸟氨酸、正亮氨酸、正缬氨酸、羟脯氨酸、肌氨酸、瓜氨酸、高瓜氨酸、磺基丙氨酸、叔丁基甘氨酸、叔丁基丙氨酸、苯基甘氨酸、环己基丙氨酸、β-丙氨酸、氟氨基酸、设计氨基酸例如β甲基氨基酸、Cα-甲基氨基酸、Nα-甲基氨基酸和一般氨基酸类似物)。
还可以通过参考遗传密码，包括考虑密码子简并性，对嵌合蛋白的核苷酸序列进行突变。
在实施方案中，嵌合蛋白能够结合鼠配体/受体。
在实施方案中，嵌合蛋白能够结合人配体/受体。
在实施方案中，嵌合蛋白的每个胞外结构域(或其变体)与其同源受体或配体结合的KD为约1nM至约5nM，例如，约1nM，约1.5nM，约2nM，约2.5nM，约3nM，约3.5nM，约4nM，约4.5nM，或约5nM。在实施方案中，嵌合蛋白与同源受体或配体结合的KD为约5nM至约15nM，例如，约5nM，约5.5nM，约6nM，约6.5nM，约7nM，约7.5nM，约8nM，约8.5nM，约9nM，约9.5nM，约10nM，约10.5nM，约11nM，约11.5nM，约12nM，约12.5nM，约13nM，约13.5nM，约14nM，约14.5nM，或约15nM。
在实施方案中，嵌合蛋白的每个胞外结构域(或其变体)与其同源受体或配体结合的KD为小于约1μM、约900nM、约800nM、约700nM、约600nM、约500nM、约400nM、约300nM、约200nM、约150nM、约130nM、约100nM、约90nM、约80nM、约70nM、约60nM、约55nM、约50nM、约45nM、约40nM、约35nM、约30nM、约25nM、约20nM、约15nM、约10nM、或约5nM、或约1nM(如例如通过表面测量等离子共振或生物层干涉所测量的)。在实施方案中，嵌合蛋白与人CD47和/或CD40结合的KD为少于约1nM、约900pM、约800pM、约700pM、约600pM、约500pM、约400pM、约300pM、约200pM、约100pM、约90pM、约80pM、约70pM、约60pM、约55pM、约50pM、约45pM、约40pM、约35pM、约30pM、约25pM、约20pM、约15pM、或约10pM、或约1pM(如例如通过表面测量等离子共振或生物层干涉所测量的)。
如本文所用，胞外结构域的变体能够结合天然胞外结构域的受体/配体。例如，变体可以包括胞外结构域中的一个或多个突变，这些突变不影响其与其受体/配体的结合亲和力；或者，胞外结构域中的一个或多个突变可以提高对受体/配体的结合亲和力；或者胞外结构域中的一个或多个突变可以降低对受体/配体的结合亲和力，但不会完全消除结合。在实施方案中，一个或多个突变位于胞外结构域与其受体/配体相互作用的结合袋的外部。在实施方案中，一个或多个突变位于胞外结构域与其受体/配体相互作用的结合袋的内部，只要突变不完全消除结合即可。基于技术人员的知识和本领域关于受体-配体结合的知识，她/他将知道哪些突变将允许结合以及哪些突变将消除结合。
在实施方案中，相对于单结构域融合蛋白或抗体对照，嵌合蛋白表现出增强的稳定性、高亲合力结合特性、延长的靶结合解离速率和蛋白半衰期。
本公开的方法中使用的嵌合蛋白可以包含多于两个胞外结构域。例如，嵌合蛋白可包含三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个或更多个胞外结构域。第二胞外结构域可以经由接头与第三胞外结构域分开，如本文所公开的。可选地，第二胞外结构域可以直接连接(例如，经由肽键)至第三胞外结构域。在实施方案中，嵌合蛋白包括直接连接的胞外结构域和经由接头间接连接的胞外结构域，如本文所公开的。
本公开的嵌合蛋白和/或在本公开的方法中使用的嵌合蛋白具有在空间上能够结合其配体/受体的第一结构域和/或在空间上能够结合其配体/受体的第二结构域。这意味着嵌合蛋白中有足够的总体灵活性和/或胞外结构域(或其一部分)与嵌合蛋白的其余部分之间有足够的物理距离，使得胞外结构域的配体/受体结合结构域在空间上不阻碍结合其配体/受体。这种灵活性和/或物理距离(其在本文中称为“空间余度”)通常可以存在于胞外结构域中、通常存在于接头中、和/或通常存在于嵌合蛋白(作为整体)中。可选地或另外地，嵌合蛋白可以通过包括一个或多个另外的氨基酸序列(例如，下文描述的连接接头)或合成接头(例如，聚乙二醇(PEG)接头)来修饰，所述另外的氨基酸序列或合成接头提供为避免空间位阻所需要的额外的空间余度。
接头
在实施方案中，本公开的方法中使用的嵌合蛋白包含接头。
在实施方案中，接头包含能够形成二硫键的至少一个半胱氨酸残基。至少一个半胱氨酸残基能够在一对(或更多的)嵌合蛋白之间形成二硫键。不希望受理论束缚，这种二硫键形成负责维持嵌合蛋白的有用的多聚体状态。这使得嵌合蛋白的高效产生成为可能；它允许在体外和体内实现所需的活性。
尤其重要的是，包括一个或多个二硫键的接头区域的稳定化提供了改进的嵌合蛋白，其可以维持稳定且可产生的多聚体状态。
在本公开的方法中使用的嵌合蛋白中，接头是选自柔性氨基酸序列、IgG铰链区或抗体序列的多肽。
在实施方案中，接头源自于天然存在的多结构域蛋白或者是如例如以下文献中所述的经验接头：Chichili等人,(2013),Protein Sci.22(2):153-167,Chen et al.,(2013),Adv Drug Deliv Rev.65(10):1357-1369，其全部内容通过引用并入本文。在实施方案中，可以使用接头设计数据库和计算机程序来设计接头，例如以下文献中描述的那些：Chen等人,(2013),Adv Drug Deliv Rev.65(10):1357-1369and Crasto et.al.,(2000),Protein Eng.13(5):309-312，其全部内容通过引用并入本文。
在实施方案中，接头包含多肽。在实施方案中，多肽的长度小于约500个氨基酸、约450个氨基酸、约400个氨基酸、约350个氨基酸、约300个氨基酸、约250个氨基酸、约200个氨基酸、约150个氨基酸长、或约100个氨基酸。例如，接头的长度可以小于约100、约95、约90、约85、约80、约75、约70、约65、约60、约55、约50、约45、约40、约35、约30、约25、约20、约19、约18、约17、约16、约15、约14、约13、约12、约11、约10、约9、约8、约7、约6、约5、约4、约3、或约2个氨基酸。
在实施方案中，接头是柔性的。
在实施方案中，接头是刚性的。
在实施方案中，接头基本上由甘氨酸和丝氨酸残基组成(例如，约30％、或约40％、或约50％、或约60％、或约70％、或约80％、或约90％、或约95％、或约97％、或约98％、或约99％、或约100％的甘氨酸和丝氨酸)。
在实施方案中，接头包含抗体(例如，IgG、IgA、IgD和IgE，包括亚类(例如，IgG1、IgG2、IgG3和IgG4，以及IgA1和IgA2))的铰链区。IgG、IgA、IgD和IgE类抗体中的铰链区充当柔性间隔区，允许Fab部分在空间中自由移动。与恒定区相反，铰链结构域结构多样，免疫球蛋白类别和亚类之间的序列和长度各不相同。例如，铰链区的长度和柔性在IgG亚类之间有所不同。IgG1的铰链区包含氨基酸216-231，并且由于它是自由灵活的，Fab片段可以绕其对称轴旋转，并在以两个重链间二硫桥中的第一个桥为中心的球体内移动。IgG2的铰链比IgG1短，有12个氨基酸残基和4个二硫桥。IgG2的铰链区缺乏甘氨酸残基，相对较短，并且包含刚性的聚脯氨酸双螺旋，通过额外的重链间二硫桥稳定。这些性质限制了IgG2分子的灵活性。IgG3与其他亚类的不同之处在于其独特的延伸铰链区(约为IgG1铰链长的四倍)，含有62个氨基酸(包括21个脯氨酸和11个半胱氨酸)，形成非柔性的聚脯氨酸双螺旋。在IgG3中，Fab片段距离Fc片段相对较远，赋予分子更大的灵活性。与其他亚类相比，IgG3中细长的铰链也是其分子量较高的原因。IgG4的铰链区比IgG1的铰链区短，其柔性介于IgG1和IgG2之间。据报道，铰链区的柔性按照IgG3>IgG1>IgG4>IgG2的顺序降低。在实施方案中，接头可源自于人IgG4并含有一个或多个突变以增强二聚化(包括S228P)或FcRn结合。
根据晶体学研究，免疫球蛋白铰链区在功能上可进一步细分为三个区域：上铰链区、核心区和下铰链区。参见Shin等人,1992Immunological Reviews 130:87。上铰链区包括从CH1的羧基端到铰链中限制运动的第一个残基的氨基酸，通常是在两条重链之间形成链间二硫键的第一个半胱氨酸残基。上铰链区的长度与抗体的片段柔性相关。核心铰链区含有重链间二硫桥，下铰链区连接CH2结构域的氨基末端并包含CH2中的残基。如上所述。野生型人IgG1的核心铰链区含有序列CPPC(SEQ ID NO:24)，当其通过二硫键形成二聚化时，产生据信充当枢轴的环状八肽，从而赋予柔性。在实施方案中，本发明的接头包含任何抗体(例如IgG、IgA、IgD和IgE，包括亚类(例如，IgG1、IgG2、IgG3和IgG4，以及IgA1和IgA2)))的上铰链区、核心区和下铰链区中的一个、二个或三个。铰链区还可以含有一个或多个糖基化位点，其包括许多结构上不同类型的用于碳水化合物附着的位点。例如，IgA1在铰链区的17个氨基酸片段内含有5个糖基化位点，赋予铰链区多肽对肠蛋白酶的抗性，这被认为是分泌性免疫球蛋白的有利性质。在实施方案中，本公开的接头包含一个或多个糖基化位点。
在实施方案中，接头包含抗体(例如，IgG、IgA、IgD和IgE，包括亚类(例如，IgG1、IgG2、IgG3和IgG4，以及IgA1和IgA2))的Fc结构域。
在本公开的方法中使用的嵌合蛋白中，接头包含源自IgG4的铰链-CH2-CH3 Fc结构域。在实施方案中，接头包含源自人IgG4的铰链-CH2-CH3 Fc结构域。在实施方案中，接头包含与SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:3中任一项的氨基酸序列至少95％同一的氨基酸序列，例如与SEQ ID NO:2的氨基酸序列至少95％同一的氨基酸序列。在实施方案中，接头包含一个或多个连接接头，此类连接接头独立地选自SEQ ID NO:4至SEQ ID NO:50(或其变体)。在实施方案中，接头包含两个或更多个连接接头，每个连接接头独立地选自SEQ ID NO:4至SEQID NO:50(或其变体)；其中一个连接接头是铰链-CH2-CH3 Fc结构域的N末端，而另一个连接接头是铰链-CH2-CH3 Fc结构域的C末端。
在实施方案中，接头包含源自人IgG1抗体的铰链-CH2-CH3 Fc结构域。在实施方案中，Fc结构域表现出对新生儿Fc受体(FcRn)增加的亲和力和增强的结合。在实施方案中，Fc结构域包括增加对FcRn的亲和力并增强与FcRn的结合的一个或多个突变。不希望受理论束缚，据信对FcRn增加的亲和力和增强的结合增加了本公开的方法中使用的嵌合蛋白的体内半衰期。
在实施方案中，接头中的Fc结构域在氨基酸残基250、252、254、256、308、309、311、416、428、433或434(根据Kabat编号，如Kabat等人,Sequences of Proteins ofImmunological Interest,5th Ed.Public Health Service,National Institutes ofHealth,Bethesda,Md.(1991)中所述，明确通过引用并入本文)或其等同物处含有一个或多个氨基酸取代。在实施方案中，氨基酸残基250处的氨基酸取代是用谷氨酰胺的取代。在实施方案中，氨基酸残基252处的氨基酸取代是用酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸或苏氨酸的取代。在实施方案中，氨基酸残基254处的氨基酸取代是用苏氨酸的取代。在实施方案中，氨基酸残基256处的氨基酸取代是用丝氨酸、精氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、天冬氨酸或苏氨酸的取代。在实施方案中，氨基酸残基308处的氨基酸取代是用苏氨酸的取代。在实施方案中，氨基酸残基309处的氨基酸取代是用脯氨酸的取代。在实施方案中，氨基酸残基311处的氨基酸取代是用丝氨酸的取代。在实施方案中，氨基酸残基385处的氨基酸取代是用精氨酸、天冬氨酸、丝氨酸、苏氨酸、组氨酸、赖氨酸、丙氨酸或甘氨酸的取代。在实施方案中，氨基酸残基386处的氨基酸取代是用苏氨酸、脯氨酸、天冬氨酸、丝氨酸、赖氨酸、精氨酸、异亮氨酸或甲硫氨酸的取代。在实施方案中，氨基酸残基387处的氨基酸取代是用精氨酸、脯氨酸、组氨酸、丝氨酸、苏氨酸或丙氨酸的取代。在实施方案中，氨基酸残基389处的氨基酸取代是用脯氨酸、丝氨酸或天冬酰胺的取代。在实施方案中，氨基酸残基416处的氨基酸取代是用丝氨酸的取代。在实施方案中，氨基酸残基428处的氨基酸取代是用亮氨酸的取代。在实施方案中，氨基酸残基433处的氨基酸取代是用精氨酸、丝氨酸、异亮氨酸、脯氨酸或谷氨酰胺的取代。在实施方案中，氨基酸残基434处的氨基酸取代是用组氨酸、苯丙氨酸或酪氨酸的取代。
在实施方案中，Fc结构域接头(例如，包含IgG恒定区)包含一个或多个突变，例如在氨基酸残基252、254、256、433、434或436(根据Kabat编号，如Kabat等人,Sequences ofProteins of Immunological Interest,5th Ed.Public Health Service,NationalInstitutes of Health,Bethesda,Md.(1991)中所述，明确通过引用并入本文)处的取代。在实施方案中，IgG恒定区包括三重M252Y/S254T/T256E突变或YTE突变。在实施方案中，IgG恒定区包括三重H433K/N434F/Y436H突变或KFH突变。在实施方案中，IgG恒定区包括YTE和KFH突变的组合。
在实施方案中，接头包含IgG恒定区，其在氨基酸残基250、253、307、310、380、428、433、434和435(根据Kabat编号，如Kabat等人,Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest,5th Ed.Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,Md.(1991)中所述，明确通过引用并入本文)处含有一个或多个突变。示例性突变包括T250Q、M428L、T307A、E380A、I253A、H310A、M428L、H433K、N434A、N434F、N434S和H435A。在实施方案中，IgG恒定区包含M428L/N434S突变或LS突变。在实施方案中，IgG恒定区包含T250Q/M428L突变或QL突变。在实施方案中，IgG恒定区包含N434A突变。在实施方案中，IgG恒定区包含T307A/E380A/N434A突变或AAA突变。在实施方案中，IgG恒定区包含I253A/H310A/H435A突变或IHH突变。在实施方案中，IgG恒定区包含H433K/N434F突变。在实施方案中，IgG恒定区包含M252Y/S254T/T256E和H433K/N434F突变的组合。
IgG恒定区中另外的示例性突变描述于例如Robbie等人,Antimicrobial Agentsand Chemotherapy(2013),57(12):6147-6153，Dall’Acqua等人,JBC(2006),281(33):23514-24，Dall’Acqua等人,Journal of Immunology(2002),169:5171-80，Ko等人Nature(2014)514:642-645，Grevys等人Journal of Immunology.(2015),194(11):5497-508，以及美国专利号7,083,784中，所述文献的全部内容通过引用并入本文。
示例性的Fc稳定突变体是S228P。示例性的Fc半衰期延长突变体是T250Q、M428L、V308T、L309P和Q311S，并且本发明的接头可包含这些突变体中的1、或2、或3、或4、或5个。
在实施方案中，嵌合蛋白以高亲和力结合FcRn。在实施方案中，嵌合蛋白可以以约1nM至约80nM的KD结合FcRn。例如，嵌合蛋白与FcRn结合的KD可以为约1nM，约2nM，约3nM，约4nM，约5nM，约6nM，约7nM，约8nM，约9nM，约10nM，约15nM，约20nM，约25nM，约30nM，约35nM，约40nM，约45nM，约50nM，约55nM，约60nM，约65nM，约70nM，约71nM，约72nM，约73nM，约74nM，约75nM，约76nM，约77nM，约78nM，约79nM或约80nM。在实施方案中，嵌合蛋白可以以约9nM的KD结合FcRn。在实施方案中，嵌合蛋白基本上不结合其他具有效应物功能的Fc受体(即，除FcRn之外)。
在实施方案中，接头中的Fc结构域具有SEQ ID NO:1(参见下表1)或与其至少90％、或93％、或95％、或97％、或98％或99％同一性的氨基酸序列。在实施方案中，突变被制成SEQ ID NO:1以增加稳定性和/或半衰期。例如，在实施方案中，接头中的Fc结构域包含SEQ ID NO:2(参见下表1)，或与其具有至少90％、或93％、或95％、或97％、或98％或99％同一性的氨基酸序列。例如，在实施方案中，接头中的Fc结构域包含SEQ ID NO:3(参见下表1)，或与其具有至少90％、或93％、或95％、或97％、或98％或99％同一性的氨基酸序列。
此外，可以采用一个或多个连接接头来连接接头中的Fc结构域(例如，SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3中的一个或与其至少90％、或93％、或95％、或97％、或98％、或99％同一的)和胞外结构域。例如，SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9中的任一个或其变体可以连接如本文所公开的胞外结构域和如本文所公开的接头中的Fc结构域。任选地，SEQ ID NO:4至SEQ ID NO:50中的任一个或其变体位于本文公开的胞外结构域和本文公开的Fc结构域之间。
在实施方案中，本公开的方法中使用的嵌合蛋白可以包含下表1中公开的连接接头的变体。例如，接头可与SEQ ID NO:4至SEQ ID NO:50中任一个的氨基酸序列具有至少约60％、或至少约61％、或至少约62％、或至少约63％、或至少约64％、或至少约65％、或至少约66％、或至少约67％、或至少约68％、或至少约69％、或至少约70％、或至少约71％、或至少约72％、或至少约73％、或至少约74％、或至少约75％、或至少约76％、或至少约77％、或至少约78％、或至少约79％、或至少约80％、或至少约81％、或至少约82％、或至少约83％、或至少约84％、或至少约85％、或至少约86％、或至少约87％、或至少约88％、或至少约89％、或至少约90％、或至少约91％、或至少约92％、或至少约93％、或至少约94％、或至少约95％、或至少约96％、或至少约97％、或至少约98％、或至少约99％的序列同一性。
在实施方案中，第一连接接头和第二连接接头可以不同或者它们可以相同。
不希望受理论的束缚，在嵌合蛋白中包括包含Fc结构域的至少一部分的接头有助于避免形成不溶性且可能无功能的蛋白连接寡聚物和/或聚集体。这部分是由于Fc结构域中存在半胱氨酸导致的，半胱氨酸能够在嵌合蛋白之间形成二硫键。
在实施方案中，嵌合蛋白可包含如本文所公开的一个或多个连接接头，并且缺乏如本文所公开的Fc结构域接头。
在实施方案中，第一和/或第二连接接头独立地选自SEQ ID NO:4至SEQ ID NO:50的氨基酸序列并且在下表1中提供：
表1：示例性接头(Fc结构域接头和连接接头)
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在实施方案中，连接接头基本上包含甘氨酸和丝氨酸残基(例如，约30％、或约40％、或约50％、或约60％、或约70％、或约80％、或约90％、或约95％、或约97％、或约98％、或约99％、或约100％的甘氨酸和丝氨酸)。例如，在实施方案中，连接接头是(Gly4Ser)n，其中n是约1至约8，例如1、2、3、4、5、6、7或8(分别为SEQ ID NO:25至SEQ ID NO:32)。在实施方案中，连接接头序列是GGSGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:33)。另外的示例性连接接头包括但不限于具有以下序列的接头：LE，(EAAAK)n(n＝1-3)(SEQ ID NO:36至SEQ ID NO:38)，A(EAAAK)nA(n＝2-5)(SEQ ID NO:39至SEQ ID NO:42)，A(EAAAK)4ALEA(EAAAK)4A(SEQ IDNO:43)，PAPAP(SEQ ID NO:44)，KESGSVSSEQLAQFRSLD(SEQ ID NO:45)，GSAGSAAGSGEF(SEQID NO:46)，和(XP)n，其中X表示任何氨基酸，例如，Ala、Lys或Glu。在实施方案中，连接接头是GGS。在实施方案中，连接接头具有序列(Gly)n，其中n是1至100的任何数字，例如：(Gly)8(SEQ ID NO:34)和(Gly)6(SEQ ID NO:35)。
在实施方案中，连接接头是以下一个或多个：GGGSE(SEQ ID NO:47)、GSESG(SEQID NO:48)、GSEGS(SEQ ID NO:49)、GEGGSGEGSSGEGSSSEGGGSEGGGSEGGGSEGGS(SEQ ID NO:50)以及每4个氨基酸间隔随机放置G、S和E的连接接头。
在实施方案中，本公开的方法中使用的嵌合蛋白包含第一跨膜蛋白的胞外结构域(ECD)、Fc结构域之前的一个连接接头、Fc结构域之后的第二连接接头以及第二跨膜蛋白的ECD，嵌合蛋白可以包含以下结构：
ECD–连接接头1–Fc结构域–连接接头2-ECD。
第一连接接头、Fc结构域接头和第二连接接头的组合在本文中称为“模块化接头”。在实施方案中，本公开的方法中使用的嵌合蛋白包含如表2中所示的模块化接头：
表2：示例性模块化接头
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在实施方案中，本公开的方法中使用的嵌合蛋白可以包含上表2中公开的模块化接头。例如，接头可具有与SEQ ID NO:51至SEQ ID NO:56中任一个的氨基酸序列至少约60％、或至少约61％、或至少约62％、或至少约63％、或至少约64％、或至少约65％、或至少约66％、或至少约67％、或至少约68％、或至少约69％、或至少约70％、或至少约71％、或至少约72％、或至少约73％、或至少约74％、或至少约75％、或至少约76％、或至少约77％、或至少约78％、或至少约79％、或至少约80％、或至少约81％、或至少约82％、或至少约83％、或至少约84％、或至少约85％、或至少约86％、或至少约87％、或至少约88％、或至少约89％、或至少约90％、或至少约91％、或至少约92％、或至少约93％、或至少约94％、或至少约95％、或至少约96％、或至少约97％、或至少约98％、或至少约99％的序列同一性。
在实施方案中，接头可以是柔性的，包括但不限于高度柔性的。在实施方案中，接头可以是刚性的，包括但不限于刚性α螺旋。示例性连接接头的特征如下表3所示：
表3：示例性连接接头的特征
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在实施方案中，接头可以是有功能的。例如但不限于，接头可以起到改善本公开的方法中使用的嵌合蛋白的折叠和/或稳定性、改善其表达、改善其药代动力学和/或改善其生物活性的作用。在另一个实例中，接头可以起到将嵌合蛋白靶向特定细胞类型或位置的作用。
在实施方案中，本公开的方法中使用的嵌合蛋白仅包含一个连接接头。
在实施方案中，本公开的方法中使用的嵌合蛋白缺乏连接接头。
在实施方案中，接头是合成接头，例如聚乙二醇(PEG)。
在实施方案中，嵌合蛋白具有在空间上能够结合其配体/受体的第一结构域和/或在空间上能够结合其配体/受体的第二结构域。因此，嵌合蛋白中具有足够的整体灵活性和/或胞外结构域(或其部分)与嵌合蛋白的其余部分之间的物理距离，使得胞外结构域的配体/受体结合结构域在空间上不阻碍结合其配体/受体。这种灵活性和/或物理距离(其被称为“空间余度”)通常可以存在于胞外结构域中，通常存在于接头中，和/或通常存在于嵌合蛋白(作为整体)中。可选地，或另外地，可以将氨基酸序列(例如)添加到一个或多个胞外结构域和/或接头上，以提供避免空间位阻所需的空间余度。可以添加提供空间余度的任何氨基酸序列。在实施方案中，添加的氨基酸序列包含序列(Gly)n，其中n是1至100的任何数字。可添加的氨基酸序列的另外的实例包括表1和表3中描述的连接接头。在实施方案中，可以在胞外结构域和接头之间添加聚乙二醇(PEG)接头以提供为避免空间位阻所需的空间余度。此类PEG接头是本领域众所周知的。
在实施方案中，异源嵌合蛋白包含：包含SIRPα(CD172a)的一部分的第一结构域、包含CD40L的一部分的第二结构域和接头。在实施方案中，接头是选自柔性氨基酸序列、IgG铰链区和抗体序列的多肽。在实施方案中，接头包含能够形成二硫键的至少一个半胱氨酸残基和/或包含铰链-CH2-CH3 Fc结构域。在实施方案中，接头包含铰链-CH2-CH3 Fc结构域，例如来自IgG1或来自IgG4(包括人IgG1或IgG4)的铰链-CH2-CH3 Fc结构域。在实施方案中，接头包含与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3的氨基酸序列至少95％同一的氨基酸序列。因此，在实施方案中，当本公开的方法中使用的异源嵌合蛋白包含SIRPα(CD172a)(或其变体)的胞外结构域、包含铰链-CH2-CH3 Fc结构域的接头和CD40L(或其变体)的胞外结构域时，其在本文中可称为“SIRPα(CD172a)-Fc-CD40L”。
在实施方案中，本公开的SIRPα(CD172a)-Fc-CD40L嵌合蛋白和/或在本公开的方法中使用的嵌合蛋白具有以下氨基酸序列：
EEELQVIQPDKSVLVAAGETATLRCTATSLIPVGPIQWFRGAGPGRELIYNQKEGHFPRVTTVSDLTKRNNMDFSIRIGNITPADAGTYYCVKFRKGSPDDVEFKSGAGTELSVRAKPSAPVVSGPAARATPQHTVSFTCESHGFSPRDITLKWFKNGNELSDFQTNVDPVGESVSYSIHSTAKVVLTREDVHSQVICEVAHVTLQGDPLRGTANLSETIRVPPTLEVTQQPVRAENQVNVTCQVRKFYPQRLQLTWLENGNVSRTETASTVTENKDGTYNWMSWLLVNVSAHRDDVKLTCQVEHDGQPAVSKSHDLKVSAHPKEQGSNTAAENTGSNERNIYSKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDQLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLSGKEYKCKVSSKGLPSSIEKTISNATGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVLHEALHNHYTQKSLSLSLGKIEGRMDHRRLDKIEDERNLHEDFVFMKTIQRCNTGERSLSLLNCEEIKSQFEGFVKDIMLNKEETKKENSFEMQKGDQNPQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKL(SEQ ID NO:60)
在实施方案中，嵌合蛋白包含SIRPα(CD172a)-Fc-CD40L嵌合蛋白的变体。作为实例，变体可具有与SEQ ID NO:60至少约60％、或至少约61％、或至少约62％、或至少约63％、或至少约64％、或至少约65％、或至少约66％、或至少约67％、或至少约68％、或至少约69％、或至少约70％、或至少约71％、或至少约72％、或至少约73％、或至少约74％、或至少约75％、或至少约76％、或至少约77％、或至少约78％、或至少约79％、或至少约80％、或至少约81％、或至少约82％、或至少约83％、或至少约84％、或至少约85％、或至少约86％、或至少约87％、或至少约88％、或至少约89％、或至少约90％、或至少约91％、或至少约92％、或至少约93％、或至少约94％、或至少约95％、或至少约96％、或至少约97％、或至少约98％、或至少约99％的序列同一性。
在实施方案中，异源嵌合蛋白包含：包含SIRPα(CD172a)的一部分的第一结构域、含有OX40L的一部分的第二结构域和接头。在实施方案中，接头是选自柔性氨基酸序列、IgG铰链区和抗体序列的多肽。在实施方案中，接头包含能够形成二硫键的至少一个半胱氨酸残基和/或包含铰链-CH2-CH3 Fc结构域。在实施方案中，接头包含铰链-CH2-CH3 Fc结构域，例如来自IgG1或来自IgG4(包括人IgG1或IgG4)的铰链-CH2-CH3 Fc结构域。在实施方案中，接头包含与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3的氨基酸序列至少95％同一的氨基酸序列。因此，在实施方案中，当本公开的方法中使用的异源嵌合蛋白包含SIRPα(CD172a)(或其变体)的胞外结构域、包含铰链-CH2-CH3 Fc结构域的接头和OX40L(或其变体)的胞外结构域时，其在本文中可称为“SIRPα(CD172a)-Fc-OX40L”。
在实施方案中，本公开的SIRPα(CD172a)-Fc-OX40L嵌合蛋白和/或在本公开的方法中使用的嵌合蛋白具有以下氨基酸序列：
EEELQVIQPDKSVLVAAGETATLRCTATSLIPVGPIQWFRGAGPGRELIYNQKEGHFPRVTTVSDLTKRNNMDFSIRIGNITPADAGTYYCVKFRKGSPDDVEFKSGAGTELSVRAKPSAPVVSGPAARATPQHTVSFTCESHGFSPRDITLKWFKNGNELSDFQTNVDPVGESVSYSIHSTAKVVLTREDVHSQVICEVAHVTLQGDPLRGTANLSETIRVPPTLEVTQQPVRAENQVNVTCQVRKFYPQRLQLTWLENGNVSRTETASTVTENKDGTYNWMSWLLVNVSAHRDDVKLTCQVEHDGQPAVSKSHDLKVSAHPKEQGSNTAAENTGSNERNIYSKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDQLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLSGKEYKCKVSSKGLPSSIEKTISNATGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVLHEALHNHYTQKSLSLSLGKIEGRMDQVSHRYPRIQSIKVQFTEYKKEKGFILTSQKEDEIMKVQNNSVIINCDGFYLISLKGYFSQEVNISLHYQKDEEPLFQLKKVRSVNSLMVASLTYKDKVYLNVTTDNTSLDDFHVNGGELILIHQNPGEFCVL(SEQ ID NO:61)
在实施方案中，嵌合蛋白包含SIRPα(CD172a)-Fc-OX40L嵌合蛋白的变体。作为实例，变体可具有与SEQ ID NO:61至少约60％、或至少约61％、或至少约62％、或至少约63％、或至少约64％、或至少约65％、或至少约66％、或至少约67％、或至少约68％、或至少约69％、或至少约70％、或至少约71％、或至少约72％、或至少约73％、或至少约74％、或至少约75％、或至少约76％、或至少约77％、或至少约78％、或至少约79％、或至少约80％、或至少约81％、或至少约82％、或至少约83％、或至少约84％、或至少约85％、或至少约86％、或至少约87％、或至少约88％、或至少约89％、或至少约90％、或至少约91％、或至少约92％、或至少约93％、或至少约94％、或至少约95％、或至少约96％、或至少约97％、或至少约98％、或至少约99％的序列同一性。
在实施方案中，异源嵌合蛋白包含：包含SIRPα(CD172a)的一部分的第一结构域、包含LIGHT的一部分的第二结构域和接头。在实施方案中，接头是选自柔性氨基酸序列、IgG铰链区和抗体序列的多肽。在实施方案中，接头包含能够形成二硫键的至少一个半胱氨酸残基和/或包含铰链-CH2-CH3 Fc结构域。在实施方案中，接头包含铰链-CH2-CH3 Fc结构域，例如来自IgG1或来自IgG4(包括人IgG1或IgG4)的铰链-CH2-CH3 Fc结构域。在实施方案中，接头包含与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3的氨基酸序列至少95％同一的氨基酸序列。因此，在实施方案中，当本公开的方法中使用的异源嵌合蛋白包含SIRPα(CD172a)(或其变体)的胞外结构域、包含铰链-CH2-CH3 Fc结构域的接头和LIGHT(或其变体)的胞外结构域时，其在本文中可称为“SIRPα(CD172a)-Fc-LIGHT”。
在实施方案中，本公开的SIRPα(CD172a)-Fc-LIGHT嵌合蛋白和/或在本公开的方法中使用的嵌合蛋白具有以下氨基酸序列：
EEELQVIQPDKSVLVAAGETATLRCTATSLIPVGPIQWFRGAGPGRELIYNQKEGHFPRVTTVSDLTKRNNMDFSIRIGNITPADAGTYYCVKFRKGSPDDVEFKSGAGTELSVRAKPSAPVVSGPAARATPQHTVSFTCESHGFSPRDITLKWFKNGNELSDFQTNVDPVGESVSYSIHSTAKVVLTREDVHSQVICEVAHVTLQGDPLRGTANLSETIRVPPTLEVTQQPVRAENQVNVTCQVRKFYPQRLQLTWLENGNVSRTETASTVTENKDGTYNWMSWLLVNVSAHRDDVKLTCQVEHDGQPAVSKSHDLKVSAHPKEQGSNTAAENTGSNERNIYSKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDQLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLSGKEYKCKVSSKGLPSSIEKTISNATGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVLHEALHNHYTQKSLSLSLGKIEGRMDLQLHWRLGEMVTRLPDGPAGSWEQLIQERRSHEVNPAAHLTGANSSLTGSGGPLLWETQLGLAFLRGLSYHDGALVVTKAGYYYIYSKVQLGGVGCPLGLASTITHGLYKRTPRYPEELELLVSQQSPCGRATSSSRVWWDSSFLGGVVHLEAGEKVVVRVLDERLVRLRDGTRSYFGAFMV(SEQ ID NO:63)
在实施方案中，嵌合蛋白包含SIRPα(CD172a)-Fc-LIGHT嵌合蛋白的变体。作为实例，变体可具有与SEQ ID NO:63至少约60％、或至少约61％、或至少约62％、或至少约63％、或至少约64％、或至少约65％、或至少约66％、或至少约67％、或至少约68％、或至少约69％、或至少约70％、或至少约71％、或至少约72％、或至少约73％、或至少约74％、或至少约75％、或至少约76％、或至少约77％、或至少约78％、或至少约79％、或至少约80％、或至少约81％、或至少约82％、或至少约83％、或至少约84％、或至少约85％、或至少约86％、或至少约87％、或至少约88％、或至少约89％、或至少约90％、或至少约91％、或至少约92％、或至少约93％、或至少约94％、或至少约95％、或至少约96％、或至少约97％、或至少约98％、或至少约99％的序列同一性。
第二药物组合物
在一个方面，本公开涉及一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：(i)向受试者施用本文公开的任何实施方案的第一药物组合物；(ii)向受试者施用第二药物组合物。在实施方案中，第二药物组合物包含抗癌剂，所述抗癌剂选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体，或其组合。
适用于本文公开的方法的降甲基化剂/表观遗传调节剂
在实施方案中，第二药物组合物包含降甲基化剂/表观遗传调节剂。表观遗传改变涉及调节基因活性的组蛋白变化或DNA修饰，例如DNA甲基化、组蛋白乙酰化和组蛋白甲基化。表观遗传失调与人类疾病包括癌症相关。由以下文献所综述：Cheng等人,Targetingepigenetic regulators for cancer therapy:mechanisms and advances in clinicaltrials,Signal Transduction and Targeted Therapy 4:62(2019)，其全部内容通过引用并入本文。在实施方案中，降甲基化剂/表观遗传调节剂是选自以下的酶的调节剂：DNA甲基转移酶(DNMT，例如DNMT1、DNMT2、DNMT3a、DNMT3b和DNMT3L)、组蛋白甲基转移酶、组蛋白乙酰化酶、组蛋白脱乙酰酶(HDAC)(例如，HDAC1至HDNAC11和Sirt1-7中的一种或多种)、DNA去甲基化酶和组蛋白去甲基化酶。在实施方案中，调节剂是抑制剂。在实施方案中，降甲基化剂/表观遗传调节剂选自阿扎胞苷、5-氮杂-2'-脱氧胞苷、辛二酰苯胺异羟肟酸(saha)、罗米地辛、贝利司他、帕比司他和西达本胺。在实施方案中，降甲基化剂/表观遗传调节剂是阿扎胞苷。阿扎胞苷的各种合适的形式和制剂公开于美国专利号4,684,630；6,887,855；6,943,249；7,078,518；7,772,199；9,393,255；9,765,108中，其每篇的全部内容通过引用并入本文。
适用于本文公开的方法的蛋白酶体抑制剂
泛素介导的蛋白酶体途径是细胞蛋白质降解机制的核心组成部分，在体内平衡中具有重要功能，其包括防止有害蛋白的积累。癌细胞产生促进细胞存活和增殖和/或抑制细胞死亡机制的蛋白。毫不奇怪，研究表明蛋白酶体抑制剂有效诱导多种类型的癌细胞凋亡。因此，在实施方案中，第二药物组合物包含蛋白酶体抑制剂。在实施方案中，蛋白酶体抑制剂抑制蛋白酶体的20S核心亚基中存在的胰凝乳蛋白酶样活性、胰蛋白酶样活性和肽基谷氨酰基水解活性中的一种或多种。在实施方案中，蛋白酶体抑制剂选自硼替佐米、卡非佐米和伊沙佐米。在实施方案中，蛋白酶体抑制剂是硼替佐米。硼替佐米和硼替佐米的制剂公开于美国专利号5,780,454；6,958,319；6,713,446；8,962,572中，其每一篇的全部内容均通过引用并入本文。
适用于本文公开的方法的抗代谢物
抗代谢物常用于癌症治疗。因此，在实施方案中，第二药物组合物包含抗代谢物。在实施方案中，抗代谢物干扰代谢物的代谢。在实施方案中，抗代谢物干扰DNA复制并由此抑制细胞分裂和肿瘤生长。在实施方案中，抗代谢物抑制选自胸苷酸合酶、DNA聚合酶、RNA聚合酶和核苷酸还原酶的一种或多种酶。在实施方案中，抗代谢物选自5-氟尿嘧啶(5-FU)、卡培他滨、氟尿苷、阿糖胞苷(ARA-C)、吉西他滨、地西他滨和维达扎。在实施方案中，抗代谢物是5-氟尿嘧啶(5-FU)或阿糖胞苷(ARA-C)。5-氟尿嘧啶(5-FU)及其制剂公开于美国专利号2,802,005；4,481,203；4,622,325；6,670,335中，其每一篇的全部内容通过引用并入本文。阿糖胞苷及其制剂公开于美国专利号3,116,282；和8,431,806中，其全部内容通过引用并入本文。
适用于本文公开的方法的DNA合成抑制剂
在实施方案中，第二药物组合物包含DNA合成抑制剂。在实施方案中，DNA合成抑制剂干扰DNA复制并由此抑制细胞分裂和肿瘤生长。在实施方案中，DNA合成抑制剂抑制选自胸苷酸合酶、DNA聚合酶和核苷酸还原酶的一种或多种酶。在实施方案中，DNA合成抑制剂选自5-氟尿嘧啶(5-FU)、卡培他滨、氟尿苷、阿糖胞苷(ARA-C)、吉西他滨、地西他滨和维达扎。在实施方案中，DNA合成抑制剂是5-氟尿嘧啶(5-FU)或阿糖胞苷(ARA-C)。5-氟尿嘧啶(5-FU)及其制剂公开于美国专利号2,802,005；4,481,203；4,622,325；6,670,335中，其每一篇的全部内容通过引用并入本文。阿糖胞苷及其制剂公开于美国专利号3,116,282；和8,431,806中，其每一篇的全部内容通过引用并入本文。
适用于本文公开的方法的免疫检查点抑制剂
在实施方案中，第二药物组合物包含免疫检查点抑制剂。在实施方案中，免疫检查点抑制剂包含能够结合免疫检查点分子的抗体。在实施方案中，抗体可以选自单克隆抗体、多克隆抗体、抗体片段、Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2、Fv、单链Fv、双抗体、线性抗体、双特异性抗体、多特异性抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人抗体和包含抗体的抗原结合部分的融合蛋白中的一种或多种。在实施方案中，抗体是单克隆抗体，例如人源化单克隆抗体。在实施方案中，免疫检查点抑制剂包含抑制选自CTLA-4、PD-1和PD-L1的途径的药剂。在实施方案中，免疫检查点抑制剂包含抗PD-L1抗体。在实施方案中，抗PD-L1抗体选自阿特珠单抗、度伐鲁单抗、阿维单抗、恩沃利单抗、BMS-936559、CK-301、CS-1001、SHR-1316(HTI-1088)、CBT-502(TQB-2450)和BGB-A333。在实施方案中，免疫检查点抑制剂包含抗CTLA-4抗体。在实施方案中，抗CTLA-4抗体是易普利姆玛(ipilimumab)。在实施方案中，免疫检查点抑制剂包含选自派姆单抗(pembrolizumab)、纳武单抗(nivulomab)和西米普利单抗(Cemiplimab)的抗PD-1抗体。
适用于本文公开的方法的蒽环素
在实施方案中，第二药物组合物包含蒽环素。在实施方案中，蒽环素通过嵌入与DNA相互作用并抑制大分子生物合成。在实施方案中，蒽环素抑制拓扑异构酶II。在实施方案中，蒽环素在拓扑异构酶II复合物发生DNA链裂解后稳定拓扑异构酶II复合物。在实施方案中，蒽环素增加醌型自由基的产生，从而有助于其细胞毒性。在实施方案中，蒽环素诱导组蛋白从转录活性染色质中驱逐。在实施方案中，蒽环素诱导DNA损伤反应和/或表观基因组和转录组的失调。在实施方案中，蒽环素选自柔红霉素、多柔比星、表柔比星、伊达比星、米托蒽醌和戊柔比星。在实施方案中，蒽环素是多柔比星。
适用于本文公开的方法的拓扑异构酶II抑制剂
核酶DNA拓扑异构酶II是用于治疗多种癌症的抗肿瘤剂的主要靶标。因此，在实施方案中，第二药物组合物包含拓扑异构酶II抑制剂。在实施方案中，拓扑异构酶II抑制剂选自多柔比星、表柔比星、戊柔比星、柔红霉素、伊达比星、pitoxantrone、匹杉琼、依托泊苷、替尼泊苷和安吖啶。在实施方案中，拓扑异构酶II抑制剂是多柔比星。在实施方案中，多柔比星通过嵌入与DNA相互作用并抑制大分子生物合成。在实施方案中，多柔比星在拓扑异构酶II复合物发生DNA链裂解后稳定拓扑异构酶II复合物。在实施方案中，多柔比星增加醌型自由基的产生，从而有助于其细胞毒性。在实施方案中，多柔比星诱导组蛋白从转录活性染色质驱逐。在实施方案中，多柔比星诱导DNA损伤反应和/或表观基因组和转录组的失调。
适用于本文公开的方法的先天免疫检查点抑制剂
在实施方案中，第二药物组合物包含先天免疫检查点抑制剂。在实施方案中，先天免疫检查点抑制剂包含靶向CD47-SIRPα相互作用的药剂。在实施方案中，先天免疫检查点抑制剂选自莫洛利单抗、CC-90002(Celgene)、CC-95251(Celgene)、TTI-621(TrilliumTherapeutics)、TTI-622(Trillium Therapeutics)、ALX148(ALX Oncology)、SRF231(Surface Oncology)、IBI188(Innovent)、AO-176(Arch Oncology)、BI 765063/OSE-172(Boehringer Ingelheim/OSE Immunotherapeutics)、TG-1801/NI_1701(TGTherapeutics/Novimmune)、TJC4(I-Mab)和SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白。
适用于本文公开的方法的Bcl2抑制剂
Bcl2抑制剂已被证明选择性诱导恶性细胞凋亡，并且作为单一药剂以及与其他药物联合治疗多种恶性肿瘤已得到广泛研究。因此，在实施方案中，第二药物组合物包含Bcl2抑制剂。在实施方案中，Bcl2抑制剂选自奥利默森、纳维托克(ABT-263)、维奈托克(ABT-199)、奥巴克拉甲磺酸盐(GX15-070)和AT-101。在实施方案中，Bcl2抑制剂是维奈托克。其他合适的Bcl2抑制剂描述于美国专利号8,546,399；8,722,657；9,174,982；9,238,649；9,539,251；9,840,502；和10,730,873中，其每一篇的全部内容通过引用并入本文。
适用于本文公开的方法的蛋白类泛素化修饰抑制剂
NEDD8是一种类泛素蛋白(ULP)，与有限数量的细胞蛋白共价缀合，并改变其稳定性、亚细胞定位和功能。NEDD8激活酶(NAE)在NEDD8缀合(“类泛素化修饰”)中发挥重要作用。类泛素化修饰驱动肿瘤细胞，还影响肿瘤微环境(TME)的多个重要组成部分的功能。在实施方案中，第二药物组合物包含蛋白类泛素化修饰抑制剂。在实施方案中，蛋白类泛素化修饰抑制剂控制泛素连接酶的cullin-RING亚型的活性。在实施方案中，蛋白类泛素化修饰抑制剂调节蛋白酶体上游蛋白子集的周转。在实施方案中，蛋白类泛素化修饰抑制剂诱导癌细胞中的细胞凋亡、衰老和/或自噬。合适的蛋白类泛素化修饰抑制剂公开于美国专利号8,207,177中，其全部内容通过引用并入本文。在实施方案中，蛋白类泛素化修饰抑制剂是pevonedistat。
适用于本文公开的方法的微管靶向剂
微管靶向剂(MTA)是一类非常成功的癌症药物，对造血系统肿瘤和实体瘤都有治疗益处。在实施方案中，第二药物组合物包含微管靶向剂。在实施方案中，微管靶向剂是微管稳定剂。在实施方案中，微管靶向剂是微管去稳定剂。在实施方案中，微管靶向剂阻断纺锤体的功能。在实施方案中，微管靶向剂主要通过阻断有丝分裂来发挥其对细胞增殖的抑制作用。在实施方案中，微管靶向剂引起AKT/mTOR信号传导途径的抑制并因此抑制癌细胞增殖。在实施方案中，微管靶向剂选自紫杉醇、埃博霉素、多西他赛、圆皮海绵内酯、长春花碱、长春新碱、长春瑞滨、长春氟宁、尾海兔素、软海绵素、哈米特林和隐花素52。在实施方案中，微管靶向剂是紫杉醇。
适用于本文公开的方法的胸苷酸合酶(TS)抑制剂
在实施方案中，第二药物组合物包含胸苷酸合酶(TS)抑制剂。在实施方案中，胸苷酸合酶(TS)抑制剂干扰DNA复制，从而抑制细胞分裂和肿瘤生长。在实施方案中，胸苷酸合酶(TS)抑制剂选自5-氟尿嘧啶(5-FU)、6-巯基嘌呤(6-MP)、卡培他滨、阿糖胞苷、氟尿苷、氟达拉滨、吉西他滨、羟基脲、甲氨蝶呤、培美曲塞、光氨蝶呤、雷替曲塞、诺拉曲塞(nolatrexed)、ZD9331和GS7904L。在实施方案中，DNA合成抑制剂是5-氟尿嘧啶(5-FU)或阿糖胞苷(ARA-C)。5-氟尿嘧啶(5-FU)及其制剂公开于美国专利号2,802,005；4,481,203；4,622,325；6,670,335中，其每一篇的全部内容通过引用并入本文。阿糖胞苷及其制剂公开于美国专利号3,116,282；和8,431,806中，其每一篇的全部内容通过引用并入本文。
适用于本文公开的方法的铂类药物
铂类药物广泛用于治疗各种癌症。在实施方案中，第二药物组合物包含铂类药物。在实施方案中，铂类药物选自顺铂、卡铂、奥沙利铂、奈达铂、庚铂和洛铂。在实施方案中，铂类药物是顺铂。在实施方案中，铂类药物是奥沙利铂。合适的铂类药物及其制剂描述于美国专利号4,322,391；4,915,956；5,290,961；5,338,874；5,420,319；5,716,988；6,306,902；和10,383,823中，其每一篇的全部内容通过引用并入本文。
适用于本文公开的方法的拓扑异构酶I抑制剂
在实施方案中，第二药物组合物包含拓扑异构酶I抑制剂。在实施方案中，拓扑异构酶I抑制剂选自喜树碱、贝洛替康、拓扑替康和伊立替康。在实施方案中，拓扑异构酶I抑制剂是伊立替康。
适用于本文公开的方法的抗BCMA抗体
在实施方案中，第二药物组合物包含抗BCMA抗体。在实施方案中，抗BCMA抗体能够进行抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)。在实施方案中，抗BCMA抗体可以选自单克隆抗体、多克隆抗体、抗体片段、Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2、Fv、单链Fv、双抗体、线性抗体、双特异性抗体、多特异性抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人抗体和包含抗体的抗原结合部分的融合蛋白中的一种或多种。在实施方案中，抗BCMA抗体是单克隆抗体，例如人源化单克隆抗体。合适的抗BCMA抗体公开于WO 2010/104949中，其每一篇的全部内容通过引用并入本文。在实施方案中，抗BCMA抗体是C12A3.2、贝兰妥单抗(包括玛贝兰妥单抗)。在实施方案中，抗BCMA抗体是C12A3.2。
适用于本文公开的方法的抗CD38抗体
在实施方案中，第二药物组合物包含抗CD38抗体。在实施方案中，抗CD38抗体能够进行抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)。在实施方案中，抗CD38抗体可以选自单克隆抗体、多克隆抗体、抗体片段、Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2、Fv、单链Fv、双抗体、线性抗体、双特异性抗体、多特异性抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人抗体和包含抗体的抗原结合部分的融合蛋白中的一种或多种。在实施方案中，抗CD38抗体是单克隆抗体，例如人源化单克隆抗体。在实施方案中，抗CD38抗体选自达雷木单抗和伊沙妥昔单抗。在实施方案中，抗CD38抗体是达雷木单抗。
适用于本文公开的方法的免疫调节酰亚胺药物(IMiD)
在实施方案中，第二药物组合物包含免疫调节酰亚胺药物(IMiD)。在实施方案中，免疫调节酰亚胺药物(IMiD)抑制肿瘤坏死因子、白细胞介素6和免疫球蛋白G和VEGF的产生。在实施方案中，免疫调节酰亚胺药物(IMiD)共刺激T细胞和NK细胞。在实施方案中，免疫调节酰亚胺药物(IMiD)增加干扰素γ和白细胞介素2的产生。在实施方案中，免疫调节酰亚胺药物(IMiD)选自阿普斯特、沙利度胺、来那度胺和泊马度胺。在实施方案中，免疫调节酰亚胺药物(IMiD)是来那度胺或泊马度胺。
适用于本文公开的方法的抗SLAMF7抗体
在实施方案中，第二药物组合物包含抗SLAMF7抗体。在实施方案中，抗SLAMF7抗体能够进行抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)。在实施方案中，抗SLAMF7抗体可以选自单克隆抗体、多克隆抗体、抗体片段、Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2、Fv、单链Fv、双抗体、线性抗体、双特异性抗体、多特异性抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人抗体和包含抗体的抗原结合部分的融合蛋白中的一种或多种。在实施方案中，抗SLAMF7抗体是单克隆抗体，例如人源化单克隆抗体。在实施方案中，抗SLAMF7抗体是依托珠单抗。
适用于本文公开的方法的突变p53的再激活剂
肿瘤抑制基因TP53的突变在癌症中非常常见。许多TP53突变导致产生无活性的p53蛋白。在实施方案中，第二药物组合物包含突变p53的再激活剂。在实施方案中，突变p53的再激活剂是Prima-1或APR-246。在实施方案中，APR-246自发转化为活性物质亚甲基奎宁环酮(MQ)，其与突变体p53中的半胱氨酸残基共价结合。在实施方案中，APR-246产生突变体p53的热力学稳定。在实施方案中，APR-246将平衡转向功能构象。
适用于本文公开的方法的抗CD123抗体
在实施方案中，第二药物组合物包含抗CD123抗体。在实施方案中，抗CD123抗体能够进行抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)。在实施方案中，抗CD123抗体可以选自单克隆抗体、多克隆抗体、抗体片段、Fab、Fab’、Fab’-SH、F(ab’)2、Fv、单链Fv、双抗体、线性抗体、双特异性抗体、多特异性抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人抗体和包含抗体的抗原结合部分的融合蛋白中的一种或多种。在实施方案中，抗CD123抗体是单克隆抗体，例如人源化单克隆抗体。在实施方案中，抗CD123抗体是塔妥珠单抗。
适用于本文公开的方法的抗FOLR1抗体
在实施方案中，第二药物组合物包含抗FOLR1抗体。在实施方案中，抗FOLR1抗体能够进行抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)。在实施方案中，抗FOLR1抗体可以选自单克隆抗体、多克隆抗体、抗体片段、Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2、Fv、单链Fv、双抗体、线性抗体、双特异性抗体、多特异性抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人抗体和包含抗体的抗原结合部分的融合蛋白中的一种或多种。在实施方案中，抗FOLR1抗体是单克隆抗体，例如人源化单克隆抗体。在实施方案中，抗FOLR1抗体是法妥组单抗或索星-米妥昔单抗。在实施方案中，抗FOLR1抗体是法妥组单抗。
阿扎胞苷和维奈托克
在实施方案中，第二药物组合物包含阿扎胞苷和/或维奈托克，任选地，其中阿扎胞苷和维奈托克包含在两个单独的剂量单位中，它们一起或分开、任选地顺序施用。
疾病、治疗方法和患者选择
所述方法包括向有需要的受试者施用(同时或顺序)有效量的抗癌剂和/或一种或多种嵌合蛋白的步骤，所述抗癌剂选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体，或其组合；其中每种嵌合蛋白均能够阻断免疫抑制信号和/或刺激免疫激活信号。
通常期望破坏、阻断、减少、抑制和/或隔离免疫抑制信号的传递，并且同时或同时期地增强、增加和/或刺激免疫刺激信号向抗癌免疫细胞的传递，以增强免疫反应，例如增强患者的抗肿瘤免疫反应。
在实施方案中，抗癌剂和/或本公开的方法中使用的嵌合蛋白能够或可以用于包括调节免疫反应的幅度(例如调节效应物输出的水平)的方法中，所述抗癌剂选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体，或其组合。
在实施方案中，例如当用于治疗癌症时，抗癌剂和/或本公开的方法中使用的嵌合蛋白改变与免疫抑制相比免疫刺激的程度，以增加T细胞应答的幅度，包括但不限于刺激细胞因子产生、增殖或靶标杀伤潜力水平的增加，所述抗癌剂选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体，或其组合。在实施方案中，患者的T细胞被抗癌剂和/或在本公开的方法中使用的嵌合蛋白激活和/或刺激，且活化的T细胞能够分裂和/或分泌细胞因子，所述抗癌剂选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体，或其组合。
癌症或肿瘤是指细胞不受控制的生长和/或细胞存活的异常增加和/或细胞凋亡的抑制，其干扰身体器官和系统的正常功能。包括良性和恶性癌症、息肉、增生以及休眠肿瘤或微转移。此外，还包括具有不受免疫系统阻碍的异常增殖的细胞(例如，病毒感染的细胞)。癌症可以是原发性癌症或转移性癌症。原发性癌症可以是在临床上可检测到的起始位点处的癌细胞区域，并且可以是原发性肿瘤。相比之下，转移性癌症可以是疾病从一个器官或部分扩散到另一非邻近器官或部分。转移癌可以是由癌细胞引起的，所述癌细胞获得了在局部区域中穿透和浸润周围正常组织的能力，形成新的肿瘤，这可能是局部转移。癌症也可以是由癌细胞引起的，所述癌细胞获得穿透淋巴管壁和/或血管壁的能力，此后癌细胞能够通过血流循环(从而成为循环肿瘤细胞)到身体的其他部位和组织。癌症可以是由淋巴或血行播散等过程引起的。癌症也可以是由肿瘤细胞引起的，所述肿瘤细胞在另一个部位停留，重新穿透血管或壁，继续繁殖，并最终形成另一个临床可检测到的肿瘤。癌症可以是这种新肿瘤，其可以是转移性(或继发性)肿瘤。
癌症可以是由已转移的肿瘤细胞引起的，其可以是继发性或转移性肿瘤。肿瘤的细胞可以与原始肿瘤中的细胞相似。作为一个实例，如果乳腺癌或结肠癌转移至肝脏，则继发性肿瘤虽然存在于肝脏中，但是由异常乳腺或结肠细胞组成，而不是由异常肝细胞组成。因此，肝脏中的肿瘤可以是转移性乳腺癌或转移性结肠癌，而不是肝癌。
癌症可以具有来自任何组织的起源。癌症可以起源于黑色素瘤、结肠、乳腺或前列腺；因此，癌症可以包含最初分别是皮肤、结肠、乳房或前列腺组织的细胞。癌症还可以是血液恶性肿瘤，其可以是白血病或淋巴瘤。癌症可以侵入肝、肺、膀胱或肠等组织。
本公开的代表性癌症和/或肿瘤包括但不限于基底细胞癌、胆道癌；膀胱癌；骨癌；脑和中枢神经系统癌症；乳腺癌；腹膜癌；宫颈癌；绒毛膜癌；结肠和直肠癌；结缔组织癌；消化系统癌症；子宫内膜癌；食道癌；眼癌；头颈癌；胃癌(包括消化道癌)；胶质母细胞瘤；肝细胞癌(hepatic carcinoma)；肝细胞瘤(hepatoma)；上皮内肿瘤；肾脏癌或肾癌；喉癌；白血病；肝癌；肺癌(例如，小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌和肺鳞癌)；黑色素瘤；骨髓瘤；成神经细胞瘤；口腔癌(唇、舌、口和咽)；卵巢癌；胰腺癌；前列腺癌；视网膜母细胞瘤；横纹肌肉瘤；直肠癌；呼吸系统癌症；唾液腺癌；肉瘤；皮肤癌；鳞状细胞癌；胃癌；睾丸癌；甲状腺癌；子宫癌或子宫内膜癌；泌尿系统癌症；外阴癌；淋巴瘤，包括霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤，以及B细胞淋巴瘤(包括低级/滤泡性非霍奇金淋巴瘤(NHL)；小淋巴细胞(SL)NHL；中级/滤泡性NHL；中级弥漫性NHL；高级免疫母细胞NHL；高级淋巴母细胞NHL；高级小非裂解细胞性NHL；巨大肿块疾病NHL；套细胞淋巴瘤；AIDS相关淋巴瘤；和瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症；慢性淋巴细胞白血病(CLL)；急性成淋巴细胞白血病(ALL)；毛细胞白血病；慢性成髓细胞白血病；以及其他癌和肉瘤；和移植后淋巴增殖性疾病(PTLD)，以及与斑痣性错构瘤病、水肿(例如与脑肿瘤相关的水肿)和梅格斯综合征相关的异常血管增生。
在实施方案中，在本公开的方法中使用的抗癌剂治疗患有难治性癌症(treatment-refractory cancer)的受试者，所述抗癌剂选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体，或其组合。在实施方案中，选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体或其组合的抗癌剂和/或本公开的方法中使用的嵌合蛋白治疗对于一种或多种免疫调节剂为难治性的受试者。例如，在实施方案中，选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体或其组合的抗癌剂和/或本公开的方法中使用的嵌合蛋白治疗在12周左右的治疗后对治疗没有反应或甚至进展的受试者。例如，在实施方案中，受试者对PD-1和/或PD-L1和/或PD-L2剂为难治性的，包括例如纳武单抗(ONO-4538/BMS-936558、MDX1106、OPDIVO、BRISTOL MYERS SQUIBB)、派姆单抗(KEYTRUDA、MERCK)、MK-3475(MERCK)、BMS936559(BRISTOL MYERS SQUIBB)、依鲁替尼(PHARMACYCLICS/ABBVIE)、阿特珠单抗(TECENTRIQ、GENENTECH)和/或MPDL328OA(ROCHE)-难治性患者。例如，在实施方案中，受试者对抗CTLA-4剂为难治性的，例如易普利姆玛(YERVOY)难治性患者(例如黑素瘤患者)。因此，在实施方案中，本公开提供了挽救对各种疗法(包括一种或多种免疫调节剂的单一疗法)无反应的患者的癌症治疗方法。
在实施方案中，本公开提供了抗癌剂和/或靶向肿瘤微环境内的细胞或组织的嵌合蛋白，所述抗癌剂选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体，或其组合。在实施方案中，肿瘤微环境内的细胞或组织表达抗癌剂和/或本公开的方法中使用的嵌合蛋白的一个或多个靶标或结合伴侣，所述抗癌剂选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体，或其组合。肿瘤微环境是指肿瘤存在的细胞环境，包括细胞、分泌蛋白、生理小分子和血管等。在实施方案中，肿瘤微环境内的细胞或组织是以下的一种或多种：肿瘤脉管系统；肿瘤浸润淋巴细胞；成纤维细胞网状细胞；内皮祖细胞(EPC)；癌症相关的成纤维细胞；周细胞；其他基质细胞；细胞外基质(ECM)的组分；树突状细胞；抗原呈递细胞；T细胞；调节性T细胞；巨噬细胞；中性粒细胞；以及位于肿瘤附近的其他免疫细胞。在实施方案中，抗癌剂和/或本公开的方法中使用的嵌合蛋白靶向癌细胞，所述抗癌剂选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体，或其组合。在实施方案中，癌细胞表达抗癌剂和/或本公开的方法中使用的嵌合蛋白的一个或多个靶标或结合伴侣，所述抗癌剂选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体，或其组合。
在实施方案中，本方法提供用抗癌剂和/或嵌合蛋白进行的对另外的药剂为难治性的患者的治疗，此类“另外的药剂”在本文别处公开，包括但不限于本文公开的各种化疗剂，所述抗癌剂选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体，或其组合。
调节性T细胞的激活受到共刺激和共抑制信号的严重影响。共刺激分子的两个主要家族包括B7和肿瘤坏死因子(TNF)家族。这些分子与T细胞上分别属于CD28或TNF受体家族的受体结合。许多明确的共抑制剂及其受体属于B7和CD28家族。
在实施方案中，免疫刺激信号是指增强免疫应答的信号。例如，在肿瘤学背景下，此类信号可以增强抗肿瘤免疫力。例如但不限于，可以通过直接刺激白细胞的增殖、细胞因子产生、杀伤活性或吞噬活性来鉴定免疫刺激信号。具体实例包括使用受体激动剂抗体或使用包含此类受体的配体(分别为OX40L、CD40L和HVEM)的嵌合蛋白直接刺激TNF超家族受体，例如OX40、CD40和LIGHT。这些受体中任何一种的刺激都可以直接刺激个体T细胞亚群的增殖和细胞因子的产生。另一个实例包括通过抑制免疫抑制细胞活性的受体直接刺激此类免疫抑制细胞。在另一个实例中，这将包括使用CD40激动性抗体或包含CD40L的嵌合蛋白刺激抗原呈递细胞表面上的CD40，引起抗原呈递细胞的激活，包括这些细胞在适当的天然共刺激分子(包括B7或TNF超家族中的那些)的情况下呈递抗原的能力增强。在另一个实例中，这将包括使用含有LIGHT的嵌合蛋白刺激淋巴或基质细胞表面上的LTBR，引起淋巴细胞的活化和/或促炎细胞因子或趋化因子的产生，以进一步刺激免疫应答，任选地，在肿瘤内。
在实施方案中，抗癌剂和/或嵌合蛋白能够或发现用于涉及增强、恢复、促进和/或刺激免疫调节的方法中，所述抗癌剂选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体，或其组合。在实施方案中，选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体或其组合的抗癌剂和/或本文描述的在本公开的方法中使用的嵌合蛋白恢复、促进和/或刺激针对肿瘤细胞的一种或多种免疫细胞的活性或激活，所述肿瘤细胞包括但不限于：T细胞、细胞毒性T淋巴细胞、T辅助细胞、自然杀伤(NK)细胞、自然杀伤T(NKT)细胞、抗肿瘤巨噬细胞(例如M1巨噬细胞)、B细胞和树突状细胞。在实施方案中，选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体或其组合的抗癌剂和/或本公开的方法中使用的嵌合蛋白增强、恢复、促进和/或刺激T细胞的活性和/或激活，作为非限制性实例，包括通过激活和/或刺激一种或多种T细胞内在信号，包括促存活信号；自分泌或旁分泌生长信号；p38 MAPK-、ERK-、STAT-、JAK-、AKT-或PI3K-介导的信号；抗凋亡信号；和/或促进促炎细胞因子产生或T细胞迁移或T细胞肿瘤浸润中的一种或多种和/或为其所必需的信号。
在实施方案中，选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体或其组合的抗癌剂和/或本公开的方法中使用的嵌合蛋白能够或发现用于涉及、引起进入肿瘤或肿瘤微环境的T细胞(包括但不限于细胞毒性T淋巴细胞、T辅助细胞、自然杀伤T(NKT)细胞)、B细胞、自然杀伤(NK)细胞、自然杀伤T(NKT)细胞、树突细胞、单核细胞和巨噬细胞(例如，M1和M2中的一种或多种)中的一种或多种增加的方法中。在实施方案中，选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体或其组合的抗癌剂和/或本公开的方法中使用的嵌合蛋白增强CD8+T细胞、特别是已浸润到肿瘤细胞中的那些T细胞对肿瘤抗原的识别。在实施方案中，选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体或其组合的抗癌剂和/或本公开的方法中使用的嵌合蛋白诱导CD19表达和/或增加CD19阳性细胞(例如，CD19阳性B细胞)的数量。在实施方案中，选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体或其组合的抗癌剂和/或本公开的方法中使用的嵌合蛋白诱导IL-15Rα表达和/或增加IL-15Rα阳性细胞(例如IL-15Rα阳性树突细胞)的数量。
在实施方案中，选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体或其组合的抗癌剂和/或本公开的方法中使用的嵌合蛋白能够或发现用于涉及、抑制和/或导致免疫抑制细胞(例如，骨髓源性抑制细胞(MDSC)、调节性T细胞(Treg)、肿瘤相关中性粒细胞(TAN)、M2巨噬细胞和肿瘤相关巨噬细胞(TAM))的减少，尤其是在肿瘤和/或肿瘤微环境(TME)内的减少的方法中。在实施方案中，本发明的疗法可以改变肿瘤部位和/或TME中M1与M2巨噬细胞的比率以有利于M1巨噬细胞。
在实施方案中，选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体或其组合的抗癌剂和/或本公开的方法中使用的嵌合蛋白能够增加各种细胞因子或趋化因子的血清水平，包括但不限于IFNγ、TNFα、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-9、IL-10、IL-13、IL-15、IL-17A、IL-17F、IL-22、CCL2、CCL3、CCL4、CXCL8、CXCL9、CXCL10、CXCL11和CXCL12中的一种或多种。在实施方案中，选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体或其组合的抗癌剂和/或本公开的方法中使用的嵌合蛋白能够增强接受治疗的受试者的血清中的IL-2、IL-4、IL-5、IL-10、IL-13、IL-17A、IL-22、TNFα或IFNγ。在实施方案中，施用选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体或其组合的抗癌剂和/或本公开的方法中使用的嵌合蛋白能够增强TNFα分泌。在一个具体实施方案中，施用选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体或其组合的抗癌剂和/或本公开的方法中使用的嵌合蛋白能够增强白细胞的超抗原介导的TNFα分泌。这种细胞因子应答的检测可以提供确定指定抗癌剂和/或本公开的方法中使用的嵌合蛋白的最佳给药方案的方法，所述指定抗癌剂选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体，或其组合。
针对选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体或其组合的抗癌剂和/或本公开的方法中使用的嵌合蛋白的抗体能够增加CD4+和/或CD8+T细胞亚群或防止CD4+和/或CD8+T细胞亚群的减少。
选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体或其组合的抗癌剂；和/或本公开的方法中使用的嵌合蛋白能够增强T细胞的肿瘤杀伤活性。
在实施方案中，选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体或其组合的抗癌剂；和/或本公开的方法中使用的嵌合蛋白抑制、阻断和/或减少抗肿瘤CD8+和/或CD4+T细胞的细胞死亡；或刺激、诱导和/或增加促肿瘤T细胞的细胞死亡。T细胞耗竭是一种T细胞功能障碍状态，其特征是增殖和效应物功能逐渐丧失，最终导致克隆缺失。因此，促肿瘤T细胞是指在许多慢性感染、炎性疾病和癌症期间出现的T细胞功能障碍状态。这种功能障碍被定义为增殖和/或效应物功能较差、抑制性受体持续表达以及与功能性效应物或记忆T细胞不同的转录状态。耗竭阻碍对感染和肿瘤的最佳控制。示例性的促肿瘤T细胞包括但不限于Treg、表达一种或多种检查点抑制性受体的CD4+和/或CD8+T细胞、Th2细胞和Th17细胞。检查点抑制性受体是指免疫细胞上表达的受体，其防止或抑制不受控制的免疫应答。相比之下，抗肿瘤CD8+和/或CD4+T细胞是指能够对肿瘤产生免疫应答的T细胞。
在实施方案中，选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体或其组合的抗癌剂和/或本公开的方法中使用的嵌合蛋白能够增加效应T细胞与调节性T细胞的比率并且可以用于包括增加效应T细胞与调节性T细胞的比率的方法中。示例性的效应T细胞包括ICOS+效应T细胞；细胞毒性T细胞(例如αβTCR、CD3+、CD8+、CD45RO+)；CD4+效应T细胞(例如αβTCR、CD3+、CD4+、CCR7+、CD62Lhi、IL-7R/CD127+)；CD8+效应T细胞(例如αβTCR、CD3+、CD8+、CCR7+、CD62Lhi、IL-7R/CD127+)；效应记忆T细胞(例如CD62L低、CD44+、TCR、CD3+、IL-7R/CD127+、IL-15R+、CCR7低)；中枢记忆T细胞(例如，CCR7+、CD62L+、CD27+；或CCR7hi、CD44+、CD62Lhi、TCR、CD3+、IL-7R/CD127+、IL-15R+)；CD62L+效应T细胞；CD8+效应记忆T细胞(TEM)，包括早期效应记忆T细胞(CD27+CD62L-)和晚期效应记忆T细胞(CD27-CD62L-)(分别为TemE和TemL)；CD127(+)CD25(低/-)效应T细胞；CD127(-)CD25(-)效应T细胞；CD8+干细胞记忆效应细胞(TSCM)(例如，CD44(低)CD62L(高)CD122(高)sca(+))；TH1效应T-细胞(例如，CXCR3+、CXCR6+和CCR5+；或αβTCR、CD3+、CD4+、IL-12R+、IFNγR+、CXCR3+)、TH2效应T细胞(例如，CCR3+、CCR4+和CCR8+；或αβTCR、CD3+、CD4+、IL-4R+、IL-33R+、CCR4+、IL-17RB+、CRTH2+)；TH9效应T细胞(例如，αβTCR、CD3+、CD4+)；TH17效应T细胞(例如，αβTCR、CD3+、CD4+、IL-23R+、CCR6+、IL-1R+)；CD4+CD45RO+CCR7+效应T细胞、CD4+CD45RO+CCR7(-)效应T细胞；以及分泌IL-2、IL-4和/或IFN-γ的效应T细胞。示例性的调节性T细胞包括ICOS+调节性T细胞、CD4+CD25+FOXP3+调节性T细胞、CD4+CD25+调节性T细胞、CD4+CD25-调节性T细胞、CD4+CD25高调节性T细胞、TIM-3+PD-1+调节性T细胞、淋巴细胞激活基因-3(LAG-3)+调节性T细胞、CTLA-4/CD152+调节性T细胞、神经纤毛蛋白-1(Nrp-1)+调节性T细胞、CCR4+CCR8+调节性T细胞、CD62L(L-选择素)+调节性T细胞、CD45RB低调节性T细胞、CD127低调节性T细胞、LRRC32/GARP+调节性T细胞、CD39+调节性T细胞、GITR+调节性T细胞、LAP+调节性T细胞、1B11+调节性T细胞、BTLA+调节性T细胞、1型调节性T细胞(Tr1细胞)、3型辅助性T(Th3)细胞、自然杀伤T细胞表型的调节性细胞(NKTregs)、CD8+调节性T细胞、CD8+CD28-调节性T细胞和/或分泌IL-10、IL-35、TGF-β、TNF-α、半乳糖凝集素-1、IFN-γ和/或MCP1的调节性T细胞。
在实施方案中，选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体或其组合的抗癌剂和/或本公开的方法中使用的嵌合蛋白引起效应T细胞(例如，CD4+CD25-T细胞)的增加。
在实施方案中，选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体或其组合的抗癌剂和/或本公开的方法中使用的嵌合蛋白引起调节性T细胞(例如，CD4+CD25+T细胞)的减少。
在实施方案中，选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体或其组合的抗癌剂和/或本公开的方法中使用的嵌合蛋白产生记忆性应答，所述记忆性应答可能能够预防复发或保护动物免于复发和/或预防或降低转移的可能性。因此，用选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体或其组合的抗癌剂和/或本公开的方法中使用的嵌合蛋白治疗的动物随后能够攻击肿瘤细胞和/或当用选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体，或其组合的抗癌剂和/或本公开的方法中使用的嵌合蛋白治疗后受到再挑战时防止肿瘤的出现。因此，选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体，或其组合、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体或其组合的抗癌剂和/或本公开的方法中使用的嵌合蛋白既刺激主动肿瘤破坏还刺激肿瘤抗原的免疫识别，这对于编程能够防止复发的记忆性应答至关重要。
在实施方案中，选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体或其组合的抗癌剂和/或本公开的方法中使用的嵌合蛋白能够引起抗原呈递细胞的激活。在实施方案中，选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体，或其组合的抗癌剂；和/或本公开的方法中使用的嵌合蛋白能够增强抗原呈递细胞呈递抗原的能力。
在实施方案中，选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体，或其组合的抗癌剂和/或本公开的方法中使用的嵌合蛋白能够瞬时刺激效应T细胞超过约12小时、约24小时、约48小时、约72小时或约96小时或约1周或约2周，并且可以用于包括瞬时刺激效应T细胞超过约12小时、约24小时、约48小时、约72小时或约96小时或约1周或约2周的方法中。在实施方案中，效应T细胞的瞬时刺激基本上发生在患者的血流中或特定的组织/位置(包括淋巴组织，例如骨髓、淋巴结、脾、胸腺、粘膜相关淋巴组织(MALT)、非淋巴组织)中或肿瘤微环境中。
本公开的方法中使用的嵌合蛋白出乎意料地提供了胞外结构域组分与其各自的结合伴侣以缓慢的解离速率(Kd或Koff)的结合。在实施方案中，这提供了受体与配体的出人意料的长期相互作用，反之亦然。这种效应允许更长的正信号效应，例如增加或激活免疫刺激信号。例如，本公开的方法中使用的嵌合蛋白例如经由长解离速率结合允许足够的信号传输以提供免疫细胞增殖，允许抗肿瘤攻击，允许足够的信号传输以提供刺激信号(例如，细胞因子)的释放。
本公开的方法中使用的嵌合蛋白能够在细胞之间形成稳定的突触。由嵌合蛋白促进的细胞(例如，在带有负信号的细胞之间)的稳定突触提供了有利于肿瘤减少的空间定向-例如定位T细胞以攻击肿瘤细胞和/或在空间上阻止肿瘤细胞传递负信号，包括超出嵌合蛋白掩盖的负信号的负信号。在实施方案中，与嵌合蛋白的血清t1/2相比，这提供了更长的靶向(例如肿瘤内)半衰期(t1/2)。这些性质可能具有减少与嵌合蛋白全身分布相关的脱靶毒性的综合优势。
在实施方案中，选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体，或其组合的抗癌剂和/或本公开的方法中使用的嵌合蛋白能够提供持续的免疫调节作用。
选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体或其组合的抗癌剂和/或本公开的方法中使用的嵌合蛋白提供协同治疗作用(例如，抗肿瘤作用)，因为它允许改善两种免疫治疗剂的位点特异性相互作用。在实施方案中，选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体或其组合的抗癌剂和/或本公开的方法中使用的嵌合蛋白提供了减少位点外(off-site)和/或全身毒性的潜能。
在实施方案中，本公开的方法中使用的嵌合蛋白表现出增强的安全性特征。在实施方案中，本公开的方法中使用的嵌合蛋白表现出降低的毒性特征。例如，施用本公开的方法中使用的嵌合蛋白可以导致减少的副作用，例如腹泻、炎症(例如，肠道的炎症)或体重减轻中的一种或多种，这些副作用在施用本公开的方法中使用的针对本公开的方法中使用的嵌合蛋白的胞外结构域所靶向的配体/受体的抗体后发生。在实施方案中，与本公开的方法中使用的针对本公开的方法中使用的嵌合蛋白的胞外结构域所靶向的配体/受体的抗体相比，本公开的方法中使用的嵌合蛋白提供了改善的安全性，且并未牺牲功效。
在实施方案中，相对于当前的免疫疗法，例如在本公开的方法中使用的针对本公开的方法中使用的嵌合蛋白的胞外结构域所靶向的配体/受体的抗体，提供减少的副作用，例如GI并发症。示例性的GI并发症包括腹痛、食欲不振、自身免疫效应、便秘、痉挛、脱水、腹泻、饮食问题、疲劳、胀气、腹部中的液体或腹水、胃肠(GI)生态失调、GI粘膜炎、炎性肠病、肠易激综合征(IBS-D和IBS-C)、恶心、疼痛、粪便或尿液变化、溃疡性结肠炎、呕吐、液体滞留导致体重增加和/或虚弱。
在各个方面，本公开提供了可用于癌症免疫疗法的组合物和方法。例如，本公开部分地涉及治疗癌症的方法，包括施用(同时或顺序)本文公开的嵌合蛋白和抗癌剂，所述抗癌剂选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体，或其组合。
在实施方案中，本公开的嵌合蛋白和/或本公开的方法中使用的嵌合蛋白消除或减少与破坏SIRP1α/CD47信号传导轴相关的副作用。在实施方案中，本发明的嵌合蛋白或利用其的方法消除或减少血液学副作用。在实施方案中，本发明的嵌合蛋白或利用其的方法消除或减少循环红细胞和血小板数量减少、溶血、血凝、血小板减少和/或贫血的程度。在实施方案中，本发明的嵌合蛋白或利用其的方法表现出比抗CD47抗体相对更少的血液学副作用。
本公开的一个方面是一种治疗有需要的受试者的癌症的方法。该方法包括向受试者提供第一药物组合物和向受试者提供第二药物组合物的步骤。第一药物组合物包含异源嵌合蛋白，其包含：(a)第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，(b)第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，和(c)连接第一结构域和第二结构域的接头。第二药物组合物包含抗癌剂，所述抗癌剂选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体，或其组合。
在实施方案中，第一药物组合物和第二药物组合物同时施用。在实施方案中，在施用第二药物组合物之后施用第一药物组合物。在实施方案中，在施用第二药物组合物之前施用第一药物组合物。在实施方案中，第一药物组合物的剂量小于向尚未接受或未正在接受第二药物组合物治疗的受试者施用的第一药物组合物的剂量。在实施方案中，施用的第二药物组合物的剂量小于向尚未接受或未正在接受第一药物组合物治疗的受试者施用的第二药物组合物的剂量。在实施方案中，与仅接受过或仅正在接受第一药物组合物治疗的受试者相比，受试者具有增加的生存机会，且没有胃肠道炎症和体重减轻，和/或肿瘤大小或癌症患病率降低。在实施方案中，与仅接受过或仅正在接受第二药物组合物治疗的受试者相比，受试者的生存机会增加，且没有胃肠道炎症和体重减轻，和/或肿瘤大小或癌症患病率降低。
在实施方案中，同时提供第一药物组合物和第二药物组合物，在提供第二药物组合物之后提供第一药物组合物，或者在提供第二药物组合物之前提供第一药物组合物。
在实施方案中，第一药物组合物的剂量小于向尚未接受或未正在接受第二药物组合物治疗的受试者提供的第一药物组合物的剂量。
在实施方案中，所提供的第二药物组合物的剂量小于向尚未接受或未正在接受第一药物组合物治疗的受试者提供的第二药物组合物的剂量。
在实施方案中，与仅接受过或仅正在接受第一药物组合物治疗的受试者相比，受试者的生存机会增加，且没有胃肠道炎症和体重减轻，和/或肿瘤大小或癌症患病率降低。
在实施方案中，与仅接受过或仅正在接受第二药物组合物治疗的受试者相比，受试者的生存机会增加，且没有胃肠道炎症和体重减轻，和/或肿瘤大小或癌症患病率降低。
在实施方案中，异源嵌合蛋白包含：包含SIRPα(CD172a)的基本上整个胞外结构域的第一结构域和/或包含CD40L的基本上整个胞外结构域的第二结构域。
在实施方案中，异源嵌合蛋白包含：包含SIRPα(CD172a)的基本上整个胞外结构域的第一结构域和/或包含OX40L的基本上整个胞外结构域的第二结构域。
在实施方案中，异源嵌合蛋白包含：包含SIRPα(CD172a)的基本上整个胞外结构域的第一结构域和/或包含LIGHT的基本上整个胞外结构域的第二结构域。
在本文公开的任何实施方案中，异源嵌合蛋白包含：包含SIRPα(CD172a)的基本上整个胞外结构域的第一结构域和/或包含CD40L、OX40L或LIGHT的基本上整个胞外结构域的第二结构域。在实施方案中，异源嵌合蛋白包含：(a)包含SIRPα(CD172a)的一部分的第一结构域，(b)包含CD40L、OX40L或LIGHT的一部分的第二结构域，和(c)包含铰链-CH2-CH3 Fc结构域的接头。
在本文公开的任何实施方案中，接头是选自柔性氨基酸序列、IgG铰链区和抗体序列的多肽。在实施方案中，接头包含能够形成二硫键的至少一个半胱氨酸残基和/或包含铰链-CH2-CH3 Fc结构域。在实施方案中，接头包含源自IgG1或IgG4，例如人IgG4或人IgG4的铰链-CH2-CH3 Fc结构域。在实施方案中，接头包含与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ IDNO:3的氨基酸序列至少95％同一的氨基酸序列。
在实施方案中，第一结构域包含与SEQ ID NO:57的氨基酸序列至少90％、或至少93％、至少95％、或至少96％、或至少98％、或至少99％同一的氨基酸序列。
在实施方案中，第二结构域包含与SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59或SEQ ID NO:62的氨基酸序列至少90％、或至少93％、至少95％、或至少96％、或至少98％、或至少99％同一的氨基酸序列。在实施方案中，第二结构域包含与SEQ ID NO:58的氨基酸序列至少90％、或至少93％、至少95％、或至少96％、或至少98％、或至少99％同一的氨基酸序列。
在实施方案中，异源嵌合蛋白包含与SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61或SEQ ID NO:63的氨基酸序列至少90％、或至少93％、至少95％、或至少96％、或至少98％、或至少99％同一的氨基酸序列。在实施方案中，异源嵌合蛋白包含与SEQ ID NO:60的氨基酸序列至少90％、或至少93％、至少95％、或至少96％、或至少98％、或至少99％同一的氨基酸序列。
在实施方案中，接头是选自柔性氨基酸序列、IgG铰链区和抗体序列的多肽。
在实施方案中，接头包含能够形成二硫键的至少一个半胱氨酸残基和/或包含铰链-CH2-CH3 Fc结构域。在实施方案中，接头包含源自IgG4(例如人IgG4)的铰链-CH2-CH3Fc结构域。在实施方案中，接头包含与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3的氨基酸序列至少95％同一的氨基酸序列。
在实施方案中，异源嵌合蛋白包含：
(a)包含SIRPα(CD172a)的一部分的第一结构域，
(b)包含CD40L的一部分的第二结构域，和
(c)包含铰链-CH2-CH3 Fc结构域的接头。
在实施方案中，异源嵌合蛋白包含：
(a)包含SIRPα(CD172a)的一部分的第一结构域，
(b)包含OX40L的一部分的第二结构域，和
(c)包含铰链-CH2-CH3 Fc结构域的接头。
在实施方案中，异源嵌合蛋白包含：
(a)包含SIRPα(CD172a)的一部分的第一结构域，
(b)包含LIGHT的一部分的第二结构域，以及
(c)包含铰链-CH2-CH3 Fc结构域的接头。
在实施方案中，降甲基化剂/表观遗传调节剂选自阿扎胞苷、5-氮杂-2'-脱氧胞苷、辛二酰苯胺异羟肟酸(saha)、罗米地辛、贝利司他、帕比司他和西达本胺。在实施方案中，降甲基化剂/表观遗传调节剂是阿扎胞苷。
在实施方案中，蛋白酶体抑制剂选自硼替佐米、卡非佐米和伊沙佐米。在实施方案中，蛋白酶体抑制剂是硼替佐米。
在实施方案中，抗代谢物抑制选自胸苷酸合酶、DNA聚合酶、RNA聚合酶和核苷酸还原酶的一种或多种酶。在实施方案中，抗代谢物选自5-氟尿嘧啶(5-FU)、卡培他滨、氟尿苷、阿糖胞苷(ARA-C)、吉西他滨、地西他滨和维达扎。在实施方案中，抗代谢物是5-氟尿嘧啶(5-FU)或阿糖胞苷(ARA-C)。
在实施方案中，DNA合成抑制剂选自5-氟尿嘧啶(5-FU)、卡培他滨、氟尿苷、阿糖胞苷(ARA-C)、吉西他滨、地西他滨和维达扎。在实施方案中，DNA合成抑制剂是5-氟尿嘧啶(5-FU)或阿糖胞苷(ARA-C)。
在实施方案中，免疫检查点抑制剂包含抑制选自CTLA-4、PD-1和PD-L1的途径的药剂。在实施方案中，免疫检查点抑制剂包含抗PD-L1抗体。在实施方案中，抗PD-L1抗体选自阿特珠单抗、度伐鲁单抗、阿维单抗、恩沃利单抗、BMS-936559、CK-301、CS-1001、SHR-1316(HTI-1088)、CBT-502(TQB-2450)和BGB-A333。在实施方案中，免疫检查点抑制剂包含抗CTLA-4抗体。在实施方案中，抗CTLA-4抗体是易普利姆玛。在实施方案中，免疫检查点抑制剂包含选自派姆单抗、纳武单抗和西米普利单抗的抗PD-1抗体。
在实施方案中，蒽环素选自柔红霉素、多柔比星、表柔比星、伊达比星、米托蒽醌和戊柔比星。在实施方案中，蒽环素是多柔比星。
在实施方案中，拓扑异构酶II抑制剂选自多柔比星、表柔比星、戊柔比星、柔红霉素、伊达比星、pitoxantrone、匹杉琼、依托泊苷、替尼泊苷和安吖啶。在实施方案中，拓扑异构酶II抑制剂是多柔比星。
在实施方案中，先天免疫检查点抑制剂包含靶向CD47-SIRPα相互作用的药剂。在实施方案中，先天免疫检查点抑制剂选自莫洛利单抗、CC-90002(Celgene)、CC-95251(Celgene)、TTI-621(Trillium Therapeutics)、TTI-622(Trillium Therapeutics)、ALX148(ALX Oncology)、SRF231(Surface Oncology)、IBI188(Innovent)、AO-176(ArchOncology)、BI 765063/OSE-172(Boehringer Ingelheim/OSE Immunotherapeutics)、TG-1801/NI_1701(TG Therapeutics/Novimmune)、TJC4(I-Mab)和SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白。
在实施方案中，Bcl2抑制剂选自奥利默森、纳维托克(ABT-263)、维奈托克(ABT-199)、奥巴克拉甲磺酸盐(GX15-070)和AT-101。在实施方案中，Bcl2抑制剂是维奈托克。
在实施方案中，蛋白类泛素化修饰抑制剂是pevonedistat。
在实施方案中，微管靶向剂选自紫杉醇、埃博霉素、多西他赛、圆皮海绵内酯、长春花碱、长春新碱、长春瑞滨、长春氟宁、尾海兔素、软海绵素、哈米特林和隐花素52。在实施方案中，微管靶向剂是紫杉醇。
在实施方案中，胸苷酸合酶(TS)抑制剂选自5-氟尿嘧啶(5-FU)、6-巯基嘌呤(6-MP)、卡培他滨、阿糖胞苷、氟尿苷、氟达拉滨、吉西他滨、羟基脲、甲氨蝶呤、培美曲塞、光氨蝶呤、雷替曲塞、诺拉曲塞、ZD9331和GS7904L。在实施方案中，DNA合成抑制剂是5-氟尿嘧啶(5-FU)或阿糖胞苷(ARA-C)。
在实施方案中，铂类药物选自顺铂、卡铂、奥沙利铂、奈达铂、庚铂和洛铂。在实施方案中，铂类药物是顺铂。在实施方案中，铂类药物是奥沙利铂。
在实施方案中，拓扑异构酶I抑制剂选自喜树碱、贝洛替康、拓扑替康和伊立替康。在实施方案中，拓扑异构酶I抑制剂是伊立替康。
在实施方案中，抗BCMA抗体是C12A3.2。
在实施方案中，抗CD38抗体选自达雷木单抗和伊沙妥昔单抗。在实施方案中，抗CD38抗体是达雷木单抗。
在实施方案中，免疫调节酰亚胺药物(IMiD)选自阿普斯特、沙利度胺、来那度胺和泊马度胺。在实施方案中，免疫调节酰亚胺药物(IMiD)是来那度胺或泊马度胺。
在实施方案中，抗SLAMF7抗体是依托珠单抗。
在实施方案中，突变p53的再激活剂是Prima-1或APR-246。
在实施方案中，抗CD123抗体是塔妥珠单抗。
在实施方案中，抗FOLR1抗体是法妥组单抗或米妥昔单抗。
在实施方案中，癌症是基底细胞癌、胆道癌；膀胱癌；骨癌；脑和中枢神经系统癌症；乳腺癌；腹膜癌；宫颈癌；绒毛膜癌；结肠和直肠癌；结缔组织癌；消化系统癌症；子宫内膜癌；食道癌；眼癌；头颈癌；胃癌(包括消化道癌)；胶质母细胞瘤；肝细胞癌(hepaticcarcinoma)；肝细胞瘤(hepatoma)；上皮内肿瘤；肾脏癌或肾癌；喉癌；白血病；肝癌；肺癌(例如，小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌和肺鳞癌)；黑色素瘤；骨髓瘤；成神经细胞瘤；口腔癌(唇、舌、口和咽)；卵巢癌；胰腺癌；前列腺癌；视网膜母细胞瘤；横纹肌肉瘤；直肠癌；呼吸系统癌症；唾液腺癌；肉瘤；皮肤癌；鳞状细胞癌；胃癌；睾丸癌；甲状腺癌；子宫癌或子宫内膜癌；泌尿系统癌症；外阴癌；淋巴瘤，包括霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤，以及B细胞淋巴瘤(包括低级/滤泡性非霍奇金淋巴瘤(NHL)；小淋巴细胞(SL)NHL；中级/滤泡性NHL；中级弥漫性NHL；高级免疫母细胞NHL；高级淋巴母细胞NHL；高级小非裂解细胞性NHL；巨大肿块疾病NHL；套细胞淋巴瘤；AIDS相关淋巴瘤；和瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症；慢性淋巴细胞白血病(CLL)；急性成淋巴细胞白血病(ALL)；毛细胞白血病；慢性成髓细胞白血病；以及其他癌和肉瘤；和移植后淋巴增殖性疾病(PTLD)，以及与斑痣性错构瘤病、水肿(例如与脑肿瘤相关的水肿)、梅格斯综合征(Meigs’syndrome)相关的异常血管增生。
在实施方案中，受试者患有对包含能够结合PD-1或结合PD-1配体的抗体的治疗反应不良或为难治性的癌症。在实施方案中，在用能够结合PD-1或结合PD-1配体的抗体治疗大约12周后，癌症对这样的治疗反应不良或无反应。在实施方案中，能够结合PD-1或结合PD-1配体的抗体选自纳武单抗(ONO-4538/BMS-936558、MDX1106、OPDIVO、BRISTOL MYERSSQUIBB)、派姆单抗(KEYTRUDA、MERCK)、MK-3475(MERCK)、BMS 936559(BRISTOL MYERSSQUIBB)、依鲁替尼(PHARMACYCLICS/ABBVIE)、阿特珠单抗(TECENTRIQ、GENENTECH)和MPDL328OA(ROCHE)。
本公开的另一个方面是用于治疗受试者的癌症的方法，其包括向受试者提供包含异源嵌合蛋白的药物组合物。异源嵌合蛋白包含：(a)第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，(b)第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，和(c)连接第一结构域和第二结构域的接头领域。在这方面，受试者已经接受或正在接受抗癌剂的治疗，所述抗癌剂选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体，或其组合。
在实施方案中，向受试者提供的药物组合物的剂量小于向尚未接受或未正在接受抗癌剂治疗的受试者提供的药物组合物的剂量，所述抗癌剂选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体，或其组合。
本公开的又一个方面是一种治疗受试者的癌症的方法，其包括向受试者提供包含抗癌剂的药物组合物，所述抗癌剂选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体，或其组合。在这个方面，受试者已经接受或正在接受：异源嵌合蛋白的治疗，所述异源嵌合蛋白包含：(a)第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，(b)第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，和(c)连接第一结构域和第二结构域的接头。
在实施方案中，向受试者提供的药物组合物的剂量小于向尚未接受或未正在接受异源嵌合蛋白治疗的受试者提供的药物组合物的剂量。
在一个方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物，所述异源嵌合蛋白包含：第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体；第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体；以及连接第一结构域和第二结构域的接头，其中受试者已经接受或正在接受包含降甲基化剂/表观遗传调节剂的第二药物组合物的治疗。在实施方案中，降甲基化剂/表观遗传调节剂选自阿扎胞苷、5-氮杂-2'-脱氧胞苷、辛二酰苯胺异羟肟酸(saha)、罗米地辛、贝利司他、帕比司他和西达本胺。在实施方案中，降甲基化剂/表观遗传调节剂是阿扎胞苷。
在一个方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含降甲基化剂/表观遗传调节剂的第二药物组合物，其中受试者已经接受或正在接受包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物的治疗，所述异源嵌合蛋白包含：第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体；第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体；以及连接第一结构域和第二结构域的接头。在实施方案中，降甲基化剂/表观遗传调节剂选自阿扎胞苷、5-氮杂-2'-脱氧胞苷、辛二酰苯胺异羟肟酸(saha)、罗米地辛、贝利司他、帕比司他和西达本胺。在实施方案中，降甲基化剂/表观遗传调节剂是阿扎胞苷。
在一个方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物，所述异源嵌合蛋白包含：第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，以及连接第一结构域和第二结构域的接头；以及向受试者施用包含蛋白酶体抑制剂的第二药物组合物。在实施方案中，蛋白酶体抑制剂选自硼替佐米、卡非佐米和伊沙佐米。在实施方案中，蛋白酶体抑制剂是硼替佐米。
在一个方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物，所述异源嵌合蛋白包含：第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，以及连接第一结构域和第二结构域的接头，其中受试者已经接受或正在接受包含蛋白酶体抑制剂的第二药物组合物的治疗。在实施方案中，蛋白酶体抑制剂选自硼替佐米、卡非佐米和伊沙佐米。在实施方案中，蛋白酶体抑制剂是硼替佐米。
在一个方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含蛋白酶体抑制剂的第二药物组合物，其中所述受试者已经接受或正在接受包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物的治疗，所述异源嵌合蛋白包含：第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，以及连接第一结构域和第二结构域的接头。在实施方案中，蛋白酶体抑制剂选自硼替佐米、卡非佐米和伊沙佐米。在实施方案中，蛋白酶体抑制剂是硼替佐米。
在一个方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物，所述异源嵌合蛋白包含：第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，以及连接第一结构域和第二结构域的接头；以及向受试者施用包含抗代谢物的第二药物组合物。在实施方案中，抗代谢物选自5-氟尿嘧啶(5-FU)、卡培他滨、氟尿苷、阿糖胞苷(ARA-C)、吉西他滨、地西他滨和维达扎。在实施方案中，抗代谢物是阿糖胞苷(ARA-C)。
在一个方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物，所述异源嵌合蛋白包含：第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，以及连接第一结构域和第二结构域的接头，其中受试者已经接受或正在接受包含抗代谢物的第二药物组合物的治疗。在实施方案中，抗代谢物选自5-氟尿嘧啶(5-FU)、卡培他滨、氟尿苷、阿糖胞苷(ARA-C)、吉西他滨、地西他滨和维达扎。在实施方案中，抗代谢物是阿糖胞苷(ARA-C)。
在一个方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含抗代谢物的第二药物组合物，其中受试者已经接受或正在接受包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物的治疗，所述异源嵌合蛋白包含：第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，以及连接第一结构域和第二结构域的接头。在实施方案中，抗代谢物选自5-氟尿嘧啶(5-FU)、卡培他滨、氟尿苷、阿糖胞苷(ARA-C)、吉西他滨、地西他滨和维达扎。在实施方案中，抗代谢物是阿糖胞苷(ARA-C)。
在一个方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物，所述异源嵌合蛋白包含：第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，以及连接第一结构域和第二结构域的接头；以及向受试者施用包含DNA合成抑制剂的第二药物组合物。在实施方案中，DNA合成抑制剂选自5-氟尿嘧啶(5-FU)、卡培他滨、氟尿苷、阿糖胞苷(ARA-C)、吉西他滨、地西他滨和维达扎。在实施方案中，DNA合成抑制剂是阿糖胞苷(ARA-C)或5-氟尿嘧啶(5-FU)。
在一个方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物，所述异源嵌合蛋白包含：第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，以及连接第一结构域和第二结构域的接头，其中受试者已经接受或正在接受包含DNA合成抑制剂的第二药物组合物的治疗。在实施方案中，DNA合成抑制剂选自5-氟尿嘧啶(5-FU)、卡培他滨、氟尿苷、阿糖胞苷(ARA-C)、吉西他滨、地西他滨和维达扎。在实施方案中，DNA合成抑制剂是阿糖胞苷(ARA-C)或5-氟尿嘧啶(5-FU)。
在一个方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含DNA合成抑制剂的第二药物组合物，其中该受试者已经接受或正在接受包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物的治疗，所述异源嵌合蛋白包含：第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，以及连接第一结构域和第二结构域的接头。在实施方案中，DNA合成抑制剂选自5-氟尿嘧啶(5-FU)、卡培他滨、氟尿苷、阿糖胞苷(ARA-C)、吉西他滨、地西他滨和维达扎。在实施方案中，DNA合成抑制剂是阿糖胞苷(ARA-C)或5-氟尿嘧啶(5-FU)。
在一个方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物，所述异源嵌合蛋白包含：第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，以及连接第一结构域和第二结构域的接头；以及向受试者施用包含免疫检查点抑制剂的第二药物组合物。在实施方案中，免疫检查点抑制剂包含抑制选自CTLA-4、PD-1和PD-L1的途径的药剂。在实施方案中，免疫检查点抑制剂包含抗PD-L1抗体。在实施方案中，抗PD-L1抗体选自阿特珠单抗、度伐鲁单抗、阿维单抗、恩沃利单抗、BMS-936559、CK-301、CS-1001、SHR-1316(HTI-1088)、CBT-502(TQB-2450)和BGB-A333。
在一个方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物，所述异源嵌合蛋白包含：第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，以及连接第一结构域和第二结构域的接头，其中受试者已经接受或正在接受包含免疫检查点抑制剂的第二药物组合物的治疗。在实施方案中，免疫检查点抑制剂包含抑制选自CTLA-4、PD-1和PD-L1的途径的药剂。在实施方案中，免疫检查点抑制剂包含抗PD-L1抗体。在实施方案中，抗PD-L1抗体选自阿特珠单抗、度伐鲁单抗、阿维单抗、恩沃利单抗、BMS-936559、CK-301、CS-1001、SHR-1316(HTI-1088)、CBT-502(TQB-2450)和BGB-A333。
在一个方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含免疫检查点抑制剂的第二药物组合物，其中受试者已经接受或正在接受包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物的治疗，所述异源嵌合蛋白包含：第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，以及连接第一结构域和第二结构域的接头。在实施方案中，免疫检查点抑制剂包含抑制选自CTLA-4、PD-1和PD-L1的途径的药剂。在实施方案中，免疫检查点抑制剂包含抗PD-L1抗体。在实施方案中，抗PD-L1抗体选自阿特珠单抗、度伐鲁单抗、阿维单抗、恩沃利单抗、BMS-936559、CK-301、CS-1001、SHR-1316(HTI-1088)、CBT-502(TQB-2450)和BGB-A333。
在一个方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物，所述异源嵌合蛋白包含：第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，以及连接第一结构域和第二结构域的接头；以及向受试者施用包含蒽环素的第二药物组合物。在实施方案中，蒽环素选自柔红霉素、多柔比星、表柔比星、伊达比星、米托蒽醌和戊柔比星。在实施方案中，蒽环素是多柔比星。
在一个方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物，所述异源嵌合蛋白包含：第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，以及连接第一结构域和第二结构域的接头，其中受试者已经接受或正在接受包含蒽环素的第二药物组合物的治疗。在实施方案中，蒽环素选自柔红霉素、多柔比星、表柔比星、伊达比星、米托蒽醌和戊柔比星。在实施方案中，蒽环素是多柔比星。
在一个方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含蒽环素的第二药物组合物，其中所述受试者已经接受或正在接受包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物的治疗，所述异源嵌合蛋白包含：第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，以及连接第一结构域和第二结构域的接头。在实施方案中，蒽环素选自柔红霉素、多柔比星、表柔比星、伊达比星、米托蒽醌和戊柔比星。在实施方案中，蒽环素是多柔比星。
在一个方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物，所述异源嵌合蛋白包含：第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，以及连接第一结构域和第二结构域的接头；以及向受试者施用包含拓扑异构酶II抑制剂的第二药物组合物。在实施方案中，拓扑异构酶II抑制剂选自多柔比星、表柔比星、戊柔比星、柔红霉素、伊达比星、pitoxantrone、匹杉琼、依托泊苷、替尼泊苷和安吖啶。在实施方案中，拓扑异构酶II抑制剂是多柔比星。
在一个方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物，所述异源嵌合蛋白包含：第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，以及连接第一结构域和第二结构域的接头，其中受试者已经接受或正在接受包含拓扑异构酶II抑制剂的第二药物组合物的治疗。在实施方案中，拓扑异构酶II抑制剂选自多柔比星、表柔比星、戊柔比星、柔红霉素、伊达比星、pitoxantrone、匹杉琼、依托泊苷、替尼泊苷和安吖啶。在实施方案中，拓扑异构酶II抑制剂是多柔比星。
在一个方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含拓扑异构酶II抑制剂的第二药物组合物，其中受试者已经接受或正在接受包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物的治疗，所述异源嵌合蛋白包含：第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，以及连接第一结构域和第二结构域的接头。在实施方案中，拓扑异构酶II抑制剂选自多柔比星、表柔比星、戊柔比星、柔红霉素、伊达比星、pitoxantrone、匹杉琼、依托泊苷、替尼泊苷和安吖啶。在实施方案中，拓扑异构酶II抑制剂是多柔比星。
在一个方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物，所述异源嵌合蛋白包含：第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，以及连接第一结构域和第二结构域的接头；以及向受试者施用包含先天免疫检查点抑制剂的第二药物组合物。在实施方案中，先天免疫检查点抑制剂包含靶向CD47-SIRPα相互作用的药剂。在实施方案中，先天免疫检查点抑制剂选自莫洛利单抗、CC-90002(Celgene)、CC-95251(Celgene)、TTI-621(Trillium Therapeutics)、TTI-622(Trillium Therapeutics)、ALX148(ALX Oncology)、SRF231(Surface Oncology)、IBI188(Innovent)、AO-176(Arch Oncology)、BI 765063/OSE-172(Boehringer Ingelheim/OSEImmunotherapeutics)、TG-1801/NI_1701(TG Therapeutics/Novimmune)、TJC4(I-Mab)和SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白。
在一个方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物，所述异源嵌合蛋白包含：第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，以及连接第一结构域和第二结构域的接头，其中受试者已经接受或正在接受包含先天免疫检查点抑制剂的第二药物组合物的治疗。在实施方案中，先天免疫检查点抑制剂包含靶向CD47-SIRPα相互作用的药剂。在实施方案中，先天免疫检查点抑制剂选自莫洛利单抗、CC-90002(Celgene)、CC-95251(Celgene)、TTI-621(TrilliumTherapeutics)、TTI-622(Trillium Therapeutics)、ALX148(ALX Oncology)、SRF231(Surface Oncology)、IBI188(Innovent)、AO-176(Arch Oncology)、BI 765063/OSE-172(Boehringer Ingelheim/OSE Immunotherapeutics)、TG-1801/NI_1701(TGTherapeutics/Novimmune)、TJC4(I-Mab)和SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白。
在一个方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含先天免疫检查点抑制剂的第二药物组合物，其中受试者已经接受或正在接受包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物的治疗，所述异源嵌合蛋白包含：第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，以及连接第一结构域和第二结构域的接头。在实施方案中，先天免疫检查点抑制剂包含靶向CD47-SIRPα相互作用的药剂。在实施方案中，先天免疫检查点抑制剂选自莫洛利单抗、CC-90002(Celgene)、CC-95251(Celgene)、TTI-621(TrilliumTherapeutics)、TTI-622(Trillium Therapeutics)、ALX148(ALX Oncology)、SRF231(Surface Oncology)、IBI188(Innovent)、AO-176(Arch Oncology)、BI 765063/OSE-172(Boehringer Ingelheim/OSE Immunotherapeutics)、TG-1801/NI_1701(TGTherapeutics/Novimmune)、TJC4(I-Mab)和SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白。
在一个方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物，所述异源嵌合蛋白包含：第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，以及连接第一结构域和第二结构域的接头；以及向受试者施用包含Bcl2抑制剂的第二药物组合物。在实施方案中，Bcl2抑制剂选自奥利默森、纳维托克(ABT-263)、维奈托克(ABT-199)、奥巴克拉甲磺酸盐(GX15-070)和AT-101。在实施方案中，Bcl2抑制剂是维奈托克。
在一个方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物，所述异源嵌合蛋白包含：第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，以及连接第一结构域和第二结构域的接头，其中受试者已经接受或正在接受包含Bcl2抑制剂的第二药物组合物的治疗。在实施方案中，Bcl2抑制剂选自奥利默森、纳维托克(ABT-263)、维奈托克(ABT-199)、奥巴克拉甲磺酸盐(GX15-070)和AT-101。在实施方案中，Bcl2抑制剂是维奈托克。
在一个方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含Bcl2抑制剂的第二药物组合物，其中所述受试者已经接受或正在接受包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物的治疗，所述异源嵌合蛋白包含：第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，以及连接第一结构域和第二结构域的接头。在实施方案中，Bcl2抑制剂选自奥利默森、纳维托克(ABT-263)、维奈托克(ABT-199)、奥巴克拉甲磺酸盐(GX15-070)和AT-101。在实施方案中，Bcl2抑制剂是维奈托克。
在一个方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物，所述异源嵌合蛋白包含：第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，以及连接第一结构域和第二结构域的接头；以及向受试者施用包含蛋白类泛素化修饰抑制剂的第二药物组合物。在实施方案中，蛋白类泛素化修饰抑制剂是pevonedistat(MLN4924)。
在一个方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物，所述异源嵌合蛋白包含：第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，以及连接第一结构域和第二结构域的接头，其中受试者已经接受或正在接受包含蛋白类泛素化修饰抑制剂的第二药物组合物的治疗。在实施方案中，蛋白类泛素化修饰抑制剂是pevonedistat(MLN4924)。
在一个方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含蛋白类泛素化修饰抑制剂的第二药物组合物，其中受试者已经接受或正在接受包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物的治疗，所述异源嵌合蛋白包含：第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，以及连接第一结构域和第二结构域的接头。在实施方案中，蛋白类泛素化修饰抑制剂是pevonedistat(MLN4924)。
在一个方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物，所述异源嵌合蛋白包含：第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，以及连接第一结构域和第二结构域的接头；以及向受试者施用包含微管靶向剂的第二药物组合物。在实施方案中，微管靶向剂选自紫杉醇、埃博霉素、多西他赛、圆皮海绵内酯、长春花碱、长春新碱、长春瑞滨、长春氟宁、尾海兔素、软海绵素、哈米特林和隐花素52。在实施方案中，微管靶向剂是紫杉醇。
在一个方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物，所述异源嵌合蛋白包含：第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，以及连接第一结构域和第二结构域的接头，其中受试者已经接受或正在接受包含微管靶向剂的第二药物组合物的治疗。在实施方案中，微管靶向剂选自紫杉醇、埃博霉素、多西他赛、圆皮海绵内酯、长春花碱、长春新碱、长春瑞滨、长春氟宁、尾海兔素、软海绵素、哈米特林和隐花素52。在实施方案中，微管靶向剂是紫杉醇。
在一个方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含微管靶向剂的第二药物组合物，其中所述受试者已经接受或正在接受用包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物的治疗，所述异源嵌合蛋白包含：第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，以及连接第一结构域和第二结构域的接头。在实施方案中，微管靶向剂选自紫杉醇、埃博霉素、多西他赛、圆皮海绵内酯、长春花碱、长春新碱、长春瑞滨、长春氟宁、尾海兔素、软海绵素、哈米特林和隐花素52。在实施方案中，微管靶向剂是紫杉醇。
在一个方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物，所述异源嵌合蛋白包含：第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，以及连接第一结构域和第二结构域的接头；以及向受试者施用包含胸苷酸合酶(TS)抑制剂的第二药物组合物。在实施方案中，胸苷酸合酶(TS)抑制剂选自5-氟尿嘧啶(5-FU)、6-巯基嘌呤(6-MP)、卡培他滨、阿糖胞苷、氟尿苷、氟达拉滨、吉西他滨、羟基脲、甲氨蝶呤、培美曲塞、光氨蝶呤、雷替曲塞、诺拉曲塞(nolatrexed)、ZD9331和GS7904L。在实施方案中，胸苷酸合酶(TS)抑制剂是5-氟尿嘧啶(5-FU)。
在一个方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物，所述异源嵌合蛋白包含：第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，以及连接第一结构域和第二结构域的接头，其中受试者已经接受或正在接受包含胸苷酸合酶(TS)抑制剂的第二药物组合物的治疗。在实施方案中，胸苷酸合酶(TS)抑制剂选自5-氟尿嘧啶(5-FU)、6-巯基嘌呤(6-MP)、卡培他滨、阿糖胞苷、氟尿苷、氟达拉滨、吉西他滨、羟基脲、甲氨蝶呤、培美曲塞、光氨蝶呤、雷替曲塞、诺拉曲塞(nolatrexed)、ZD9331和GS7904L。在实施方案中，胸苷酸合酶(TS)抑制剂是5-氟尿嘧啶(5-FU)。
在一个方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含胸苷酸合酶(TS)抑制剂的第二药物组合物，其中受试者已经接受或正在接受用包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物，所述异源嵌合蛋白包含：第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，以及连接第一结构域和第二结构域的接头。在实施方案中，胸苷酸合酶(TS)抑制剂选自5-氟尿嘧啶(5-FU)、6-巯基嘌呤(6-MP)、卡培他滨、阿糖胞苷、氟尿苷、氟达拉滨、吉西他滨、羟基脲、甲氨蝶呤、培美曲塞、光氨蝶呤、雷替曲塞、诺拉曲塞(nolatrexed)、ZD9331和GS7904L。在实施方案中，胸苷酸合酶(TS)抑制剂是5-氟尿嘧啶(5-FU)。
在一个方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物，所述异源嵌合蛋白包含：第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，以及连接第一结构域和第二结构域的接头；以及向受试者施用包含铂类药物的第二药物组合物。在实施方案中，铂类药物选自顺铂、卡铂、奥沙利铂、奈达铂、庚铂和洛铂。在实施方案中，铂类药物是顺铂。在实施方案中，铂类药物是奥沙利铂。
在一个方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物，所述异源嵌合蛋白包含：第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，以及连接第一结构域和第二结构域的接头，其中受试者具有已经接受或正在接受包含铂类药物的第二药物组合物的治疗。在实施方案中，铂类药物选自顺铂、卡铂、奥沙利铂、奈达铂、庚铂和洛铂。在实施方案中，铂类药物是顺铂。在实施方案中，铂类药物是奥沙利铂。
在一个方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含铂类药物的第二药物组合物，其中受试者已经接受或正在接受包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物的治疗，所述异源嵌合蛋白包含：第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，以及连接第一结构域和第二结构域的接头。在实施方案中，铂类药物选自顺铂、卡铂、奥沙利铂、奈达铂、庚铂和洛铂。在实施方案中，铂类药物是顺铂。在实施方案中，铂类药物是奥沙利铂。
在一个方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物，所述异源嵌合蛋白包含：第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，以及连接第一结构域和第二结构域的接头；以及向受试者施用包含拓扑异构酶I抑制剂的第二药物组合物。在实施方案中，拓扑异构酶I抑制剂选自喜树碱、贝洛替康、拓扑替康和伊立替康。在实施方案中，拓扑异构酶I抑制剂是伊立替康。
在一个方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物，所述异源嵌合蛋白包含：第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，以及连接第一结构域和第二结构域的接头，其中受试者已经接受或正在接受包含拓扑异构酶I抑制剂的第二药物组合物的治疗。在实施方案中，拓扑异构酶I抑制剂选自喜树碱、贝洛替康、拓扑替康和伊立替康。在实施方案中，拓扑异构酶I抑制剂是伊立替康。
在一个方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含拓扑异构酶I抑制剂的第二药物组合物，其中受试者已经接受或正在接受包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物的治疗，所述异源嵌合蛋白包含：第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，以及连接第一结构域和第二结构域的接头。在实施方案中，拓扑异构酶I抑制剂选自喜树碱、贝洛替康、拓扑替康和伊立替康。在实施方案中，拓扑异构酶I抑制剂是伊立替康。
在一个方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物，所述异源嵌合蛋白包含：第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，以及连接第一结构域和第二结构域的接头；以及向受试者施用包含抗BCMA抗体的第二药物组合物。在实施方案中，抗BCMA抗体是C12A3.2。
在一个方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物，所述异源嵌合蛋白包含：第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，以及连接第一结构域和第二结构域的接头，其中受试者已经接受或正在接受包含抗BCMA抗体的第二药物组合物的治疗。在实施方案中，抗BCMA抗体是贝兰妥单抗或C12A3.2。在实施方案中，抗BCMA抗体是C12A3.2。
在一个方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含抗BCMA抗体的第二药物组合物，其中受试者已经接受或正在接受包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物的治疗，所述异源嵌合蛋白包含：第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，其中该部分能够结合LIGHT受体，以及连接第一结构域和第二结构域的接头。在实施方案中，抗BCMA抗体是贝兰妥单抗。在实施方案中，抗BCMA抗体是贝兰妥单抗或C12A3.2。
在一个方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物，所述异源嵌合蛋白包含：第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，以及连接第一结构域和第二结构域的接头；以及向受试者施用包含抗CD38抗体的第二药物组合物。在实施方案中，抗CD38抗体选自达雷木单抗和伊沙妥昔单抗。在实施方案中，抗CD38抗体是达雷木单抗。
在一个方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物，所述异源嵌合蛋白包含：第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，以及连接第一结构域和第二结构域的接头，其中受试者已经接受或正在接受包含抗CD38抗体的第二药物组合物的治疗。在实施方案中，抗CD38抗体选自达雷木单抗和伊沙妥昔单抗。在实施方案中，抗CD38抗体是达雷木单抗。
在一个方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含抗CD38抗体的第二药物组合物，其中受试者已经接受或正在接受包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物的治疗，所述异源嵌合蛋白包含：第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，以及连接第一结构域和第二结构域的接头。在实施方案中，抗CD38抗体选自达雷木单抗和伊沙妥昔单抗。在实施方案中，抗CD38抗体是达雷木单抗。
在一个方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物，所述异源嵌合蛋白包含：第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，以及连接第一结构域和第二结构域的接头；以及向受试者施用包含免疫调节酰亚胺药物(IMiD)的第二药物组合物。在实施方案中，免疫调节酰亚胺药物(IMiD)选自阿普斯特、沙利度胺、来那度胺和泊马度胺。在实施方案中，免疫调节酰亚胺药物(IMiD)是来那度胺或泊马度胺。
在一个方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物，所述异源嵌合蛋白包含：第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，以及连接第一结构域和第二结构域的接头，其中受试者已经接受或正在接受包含免疫调节酰亚胺药物(IMiD)的第二药物组合物的治疗。在实施方案中，免疫调节酰亚胺药物(IMiD)选自阿普斯特、沙利度胺、来那度胺和泊马度胺。在实施方案中，免疫调节酰亚胺药物(IMiD)是来那度胺或泊马度胺。
在一个方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含免疫调节酰亚胺药物(IMiD)的第二药物组合物，其中受试者已经接受或正在接受包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物的治疗，所述异源嵌合蛋白包含：第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)胞外域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，以及连接第一结构域和第二结构域的接头。在实施方案中，免疫调节酰亚胺药物(IMiD)选自阿普斯特、沙利度胺、来那度胺和泊马度胺。在实施方案中，免疫调节酰亚胺药物(IMiD)是来那度胺或泊马度胺。
在一个方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物，所述异源嵌合蛋白包含：第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，以及连接第一结构域和第二结构域的接头；以及向受试者施用包含抗SLAMF7抗体的第二药物组合物。
在一个方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物，所述异源嵌合蛋白包含：第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，以及连接第一结构域和第二结构域的接头，其中受试者已经接受或正在接受包含抗SLAMF7抗体的第二药物组合物的治疗。
在一个方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含抗SLAMF7抗体的第二药物组合物，其中受试者已经接受或正在接受包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物的治疗，所述异源嵌合蛋白包含：第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，以及连接第一结构域和第二结构域的接头。在实施方案中，抗SLAMF7抗体是依托珠单抗。
在一个方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物，所述异源嵌合蛋白包含：第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，以及连接第一结构域和第二结构域的接头；以及向受试者施用包含抗CD123抗体的第二药物组合物。在实施方案中，抗CD123抗体是塔妥珠单抗。
在一个方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物，所述异源嵌合蛋白包含：第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，以及连接第一结构域和第二结构域的接头，其中受试者已经接受或正在接受包含抗CD123抗体的第二药物组合物的治疗。在实施方案中，抗CD123抗体是塔妥珠单抗。
在一个方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含抗CD123抗体的第二药物组合物，其中受试者已经接受或正在接受包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物的治疗，所述异源嵌合蛋白包含：第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，以及连接第一结构域和第二结构域的接头。在实施方案中，抗CD123抗体是塔妥珠单抗。
在一个方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物，所述异源嵌合蛋白包含：第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，以及连接第一结构域和第二结构域的接头；以及向受试者施用包含突变p53的再激活剂的第二药物组合物。在实施方案中，突变p53的再激活剂是Prima-1或APR-246。在实施方案中，突变p53的再激活剂是APR-246。
在一个方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物，所述异源嵌合蛋白包含：第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，以及连接第一结构域和第二结构域的接头，其中受试者已经接受或正在接受包含突变p53再激活剂的第二药物组合物的治疗。在实施方案中，突变p53的再激活剂是Prima-1或APR-246。在实施方案中，突变p53的再激活剂是APR-246。
在一个方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含突变p53再激活剂的第二药物组合物，其中受试者已经接受或正在接受包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物的治疗，所述异源嵌合蛋白包含：第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，以及连接第一结构域和第二结构域的接头。在实施方案中，突变p53的再激活剂是Prima-1或APR-246。在实施方案中，突变p53的再激活剂是APR-246。
在一个方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物，所述异源嵌合蛋白包含：第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，以及连接第一结构域和第二结构域的接头；以及向受试者施用包含抗FOLR1抗体的第二药物组合物。在实施方案中，抗FOLR1抗体是法妥组单抗或米妥昔单抗。在实施方案中，抗FOLR1抗体是法妥组单抗。
在一个方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物，所述异源嵌合蛋白包含：第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，以及连接第一结构域和第二结构域的接头，其中受试者已经接受或正在接受包含抗FOLR1抗体的第二药物组合物的治疗。在实施方案中，抗FOLR1抗体是法妥组单抗或米妥昔单抗。在实施方案中，抗FOLR1抗体是法妥组单抗。
在一个方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：向受试者施用包含抗FOLR1抗体的第二药物组合物，其中受试者已经接受或正在接受包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物的治疗，所述异源嵌合蛋白包含：第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，以及连接第一结构域和第二结构域的接头。在实施方案中，抗FOLR1抗体是法妥组单抗或米妥昔单抗。在实施方案中，抗FOLR1抗体是米妥昔单抗。
联合疗法和缀合
在实施方案中，本公开提供了嵌合蛋白和进一步包括向受试者施用另外的药剂的方法。在实施方案中，本公开涉及共同施用和/或共同配制。本文公开的任何组合物可以共同配制和/或共同施用。
在一个方面，本公开提供了一种治疗受试者的癌症的方法，其包括：(i)向受试者施用包含异源嵌合蛋白的药物组合物，所述异源嵌合蛋白包含：(a)第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，(b)第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，和(c)连接第一结构域和第二结构域的接头领域；以及(ii)向受试者施用包含抗癌剂的第二药物组合物，所述抗癌剂选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体，或其组合。
在一个方面，本公开提供了一种治疗受试者的癌症的方法，其包括：(i)向受试者施用包含异源嵌合蛋白的药物组合物，所述异源嵌合蛋白包含：(a)第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，(b)第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，和(c)连接第一结构域和第二结构域的接头；其中所述受试者已经接受或正在接受包含抗癌剂的第二药物组合物的治疗，所述抗癌剂选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体，或其组合。
在一个方面，本公开提供了一种治疗受试者的癌症的方法，其包括：(i)向受试者施用包含抗癌剂的第二药物组合物，所述抗癌剂选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体，或其组合；其中所述受试者已经接受或正在接受包含异源嵌合蛋白的药物组合物的治疗，所述异源嵌合蛋白包含：(a)第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，(b)第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，以及(c)连接第一结构域和第二结构域的接头。
在实施方案中，包含抗癌剂的第二药物组合物和/或本文公开的在本公开的方法中使用的嵌合蛋白当与另一种药剂共同施用时协同作用，并且以低于当此类药剂用作单一疗法时通常采用的剂量的剂量施用，所述抗癌剂选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体，或其组合。在实施方案中，本文提及的任何药剂可以与本文公开的任何嵌合蛋白联合使用。
在实施方案中，包含抗癌剂的第二药物组合物和/或本文公开的在本公开的方法中使用的嵌合蛋白可以与本文公开的任何抗癌疗法联合使用，所述抗癌剂选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体，或其组合。
在实施方案中，包含抗癌剂的第二药物组合物和/或本文公开的在本公开的方法中使用的嵌合蛋白彼此协同作用，所述抗癌剂选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体，或其组合。在实施方案中，如本文公开的嵌合蛋白减少共同施用的第二药物组合物的施用次数。
在本公开的多个方面和实施方案中，需要癌症治疗的患者对如本文所公开的免疫疗法例如抗癌免疫疗法反应不良或预测反应不良或无反应，所述癌症疗法包含：包含抗癌剂的第二药物组合物，所述抗癌剂选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体，或其组合；和/或如本文所公开的在本公开的方法中使用的嵌合蛋白。此外，在实施方案中，需要如本文所公开的抗癌剂的患者对免疫检查点免疫疗法反应不良或预测可能反应不良或无反应。免疫检查点分子可以选自PD-1、PD-L1、PD-L2、ICOS、ICOSL和CTLA-4。此外，在实施方案中，需要如本文所公开的抗癌剂的患者对针对表皮生长因子受体(EGFR)、人表皮生长因子受体2(Her2)和CD20中的一种或多种的疗法反应不良或预测可能反应不良或无反应。
在实施方案中，选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体，或其组合的抗癌剂和/或本文公开的在本公开的方法中使用的嵌合蛋白(和/或另外的药剂)包括修饰的衍生物，即，通过将任何类型的分子共价连接至组合物，使得共价连接不妨碍组合物的活性。例如但不限于，衍生物包括尤其是已经通过糖基化、脂化、乙酰化、聚乙二醇化、磷酸化、酰胺化、通过已知的保护/封闭基团衍生化、蛋白水解裂解、与细胞配体或其他蛋白的连接等进行修饰的组合物。可以通过已知技术进行多种化学修饰中的任一种，包括但不限于特定的化学裂解、乙酰化、甲酰化、衣霉素的代谢合成等。另外，衍生物可以含有一种或多种非经典氨基酸。
选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体或其组合的抗癌剂和/或本文公开的在本公开的方法中使用的嵌合蛋白(和/或其他抗癌疗法)可以因此被翻译后修饰以添加效应物部分，例如化学接头、可检测部分例如荧光染料、酶、底物、生物发光材料、放射性材料和化学发光部分，或功能部分，例如链霉抗生物素蛋白、抗生物素蛋白、生物素、细胞毒素、细胞毒剂和放射性材料。
在实施方案中，选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体或其组合的抗癌剂和/或本文公开的在本公开的方法中使用的嵌合蛋白包括被修饰的衍生物，即，通过将任何类型的分子共价连接至组合物，使得共价连接不妨碍组合物的活性。例如但不限于，衍生物包括尤其是已经通过糖基化、脂化、乙酰化、聚乙二醇化、磷酸化、酰胺化、通过已知的保护/封闭基团衍生化、蛋白水解裂解、与细胞配体或其他蛋白的连接等进行修饰的组合物。可以通过已知技术进行多种化学修饰中的任一种，包括但不限于特定的化学裂解、乙酰化、甲酰化、衣霉素的代谢合成等。另外，衍生物可以含有一种或多种非经典氨基酸。
选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体或其组合的抗癌剂和/或本文公开的在本公开的方法中使用的嵌合蛋白，可以因此被翻译后修饰以添加效应物部分，例如化学接头、可检测部分例如荧光染料、酶、底物、生物发光材料、放射性材料和化学发光部分，或功能部分，例如链霉抗生物素蛋白、抗生物素蛋白、生物素、细胞毒素、细胞毒剂和放射性材料。
药物组合物
本公开的方法包括施用药物组合物，所述药物组合物包含治疗有效量的包含抗癌剂的第二药物组合物和/或如本文所公开的在本公开的方法中使用的嵌合蛋白中的至少一种，所述抗癌剂选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体，或其组合。
选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体或其组合的抗癌剂和/或本文公开的在本公开的方法中使用的嵌合蛋白(和/或另外的药剂)，可具有可与无机酸或有机酸反应的足够碱性的官能团，或可与无机碱或有机碱反应的羧基，以形成药学上可接受的盐。药学上可接受的酸加成盐由药学上可接受的酸形成，如本领域众所周知的。此类盐包括例如Journal ofPharmaceutical Science,66,2-19(1977)和The Handbook of Pharmaceutical Salts；Properties,Selection,and Use.P.H.Stahl and C.G.Wermuth(eds.),Verlag,Zurich(瑞士)2002中列出的药学上可接受的盐，所述文献通过引用以其整体并入本文。
在实施方案中，本文公开的组合物是药学上可接受的盐的形式。
此外，包含抗癌剂的第二药物组合物和/或本文公开的在本公开的方法中使用的嵌合蛋白(和/或另外的药剂)可以作为组合物(例如药物组合物)的组分施用于受试者，所述组合物包含药学上可接受的载体或媒介物，所述抗癌剂选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体，或其组合。此类药物组合物可以任选地包含合适量的药学上可接受的赋形剂以提供适当施用的形式。药物赋形剂可以是液体，例如水和油，包括石油、动物、植物或合成来源的那些，例如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等。药物赋形剂可以是例如盐水、阿拉伯树胶、明胶、淀粉糊、滑石粉、角蛋白、胶体二氧化硅、尿素等。此外，还可以使用辅助剂、稳定剂、增稠剂、润滑剂和着色剂。在实施方案中，药学上可接受的赋形剂在施用于受试者时是无菌的。当静脉内施用本文公开的任何药剂时，水是有用的赋形剂。盐水溶液以及葡萄糖水溶液和甘油溶液也可以用作液体赋形剂，特别是用于注射溶液。合适的药物赋形剂还包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、大米、面粉、白垩、硅胶、硬脂酸钠、单硬脂酸甘油酯、滑石粉、氯化钠、脱脂奶粉、甘油、丙烯、乙二醇、水、乙醇等等。如果需要，本文公开的任何药剂还可以包含少量的润湿剂或乳化剂、或pH缓冲剂。
在实施方案中，将本文公开的组合物(例如药物组合物)重悬于盐水缓冲液(包括但不限于TBS、PBS等)中。
在实施方案中，选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体或其组合的抗癌剂和/或本公开的方法中使用的嵌合蛋白可以通过与另一种药剂缀合和/或融合来延长半衰期或以其他方式改善药效学和药代动力学性质。在实施方案中，选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体或其组合的抗癌剂和/或本公开的方法中使用的嵌合蛋白，可以与PEG、XTEN(例如，作为rPEG)、聚唾液酸(POLYXEN)、白蛋白(例如人血清白蛋白或HAS)、弹性蛋白样蛋白(ELP)、PAS、HAP、GLK、CTP、转铁蛋白等中的一种或多种融合或缀合。在实施方案中，个体嵌合蛋白中的每一个均与以下文献中描述的一种或多种药剂融合：BioDrugs(2015)29:215–239，其全部内容通过引用并入本文。
本公开包括在药物组合物的各种制剂中的抗癌剂和/或本公开的方法中使用的嵌合蛋白(和/或另外的药剂)，所述抗癌剂选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体或其组合。包含抗癌剂的第二药物组合物和/或本文公开的在本公开的方法中使用的嵌合蛋白(和/或另外的药剂)可以采取溶液、混悬剂、乳剂、滴剂、片剂、丸剂(pill)、微丸剂(pellet)、胶囊剂、含有液体的胶囊剂、粉末剂、缓释制剂、栓剂、乳剂、气雾剂、喷雾剂、悬浮剂的形式或任何其他适合使用的形式，所述抗癌剂选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体，或其组合。也可以使用编码蛋白序列的DNA或RNA构建体。在实施方案中，组合物是胶囊剂的形式(参见例如美国专利号5,698,155)。合适的药物赋形剂的其他实例描述于Remington’sPharmaceutical Sciences 1447-1676(Alfonso R.Gennaro eds.,19th ed.1995)，其通过引用并入本文。
必要时，包含抗癌剂和/或本公开的方法中使用的嵌合蛋白(和/或另外的药剂)的药物组合物还可以包括增溶剂，所述抗癌剂选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体，或其组合。而且，可以用本领域已知的合适的媒介物或递送装置来递送药剂。本文概述的联合疗法可以在单一递送媒介物或递送装置中共同递送。用于施用的组合物可以任选地包括局部麻醉剂，例如利多卡因以减轻注射部位的疼痛。
包含抗癌剂和/或本公开的在本公开的方法中使用的嵌合蛋白(和/或另外的药剂)的药物组合物可以方便地以单位剂型存在，并且可以通过药学领域熟知的任何方法来制备，所述抗癌剂选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体，或其组合。此类方法通常包括将治疗剂与载体结合的步骤，所述载体构成一种或多种辅助成分。通常，通过使治疗剂与液体载体、细碎的固体载体或这两者均匀且紧密地结合来制备药物组合物，然后，如果需要，将产品成型为所需制剂的剂型(例如，湿法或干法制粒、粉末混合物等，然后使用本领域已知的常规方法压片)。
在实施方案中，包含抗癌剂的第二药物组合物和/或本文公开的在本公开的方法中使用的嵌合蛋白(和/或另外的药剂)根据常规程序被配制为适合于本文公开的施用方式的药物组合物，所述抗癌剂选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体，或其组合。
在一个方面，本公开提供了一种治疗受试者的癌症的方法，其包括：(i)向受试者施用包含异源嵌合蛋白的药物组合物，所述异源嵌合蛋白包含：(a)第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，(b)第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，和(c)连接第一结构域和第二结构域的接头；以及(ii)向受试者施用包含阿扎胞苷和/或维奈托克的第二药物组合物。
在一个方面，本公开提供了一种治疗受试者的癌症的方法，其包括：(i)向受试者施用包含异源嵌合蛋白的药物组合物，所述异源嵌合蛋白包含：(a)第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，(b)第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，和(c)连接第一结构域和第二结构域的接头；其中所述受试者已经接受或正在接受包含阿扎胞苷和/或维奈托克的第二药物组合物的治疗。
在一个方面，本公开提供了一种治疗受试者的癌症的方法，其包括：(i)向受试者施用包含阿扎胞苷和/或维奈托克的第二药物组合物；其中所述受试者已经接受或正在接受包含异源嵌合蛋白的药物组合物的治疗，所述异源嵌合蛋白包含：(a)第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，(b)第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，以及(c)连接第一结构域和第二结构域的接头。
在一个方面，本公开提供了一种治疗受试者的癌症的方法，其包括：(i)向受试者施用包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物，所述异源嵌合蛋白包含：(a)第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，(b)第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，和(c)连接第一结构域和第二结构域的接头；(ii)向受试者施用包含阿扎胞苷的第二药物组合物；以及(iii)向受试者施用包含维奈托克的第三药物组合物。在实施方案中，第一药物组合物和第二药物组合物同时施用。在实施方案中，第一药物组合物和第三药物组合物同时施用。在实施方案中，第二药物组合物和第三药物组合物同时施用。在实施方案中，第一药物组合物、第二药物组合物和第三药物组合物同时施用。在实施方案中，在施用第二药物组合物和/或第三药物组合物之后施用第一药物组合物。在实施方案中，在施用和/或第一药物组合物和/或第三药物组合物之后施用第二药物组合物。在实施方案中，在施用和/或第一药物组合物和/或第二药物组合物之后施用第三药物组合物。
在一个方面，本公开提供了一种治疗受试者的癌症的方法，其包括：(i)向受试者施用包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物，所述异源嵌合蛋白包含：(a)第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，(b)第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，和(c)连接第一结构域和第二结构域的接头，其中受试者已经接受或正在接受包含阿扎胞苷的第二药物组合物和/或包含维奈托克的第三药物组合物的治疗。在实施方案中，受试者在第三药物组合物之后已经接受或正在接受第二药物组合物的治疗。在实施方案中，受试者在第二药物组合物之后已经接受或正在接受第三药物组合物的治疗。
在一个方面，本公开提供了一种治疗受试者的癌症的方法，其包括：(i)向受试者施用包含阿扎胞苷的第二药物组合物，其中受试者已经接受或正在接受第一药物组合物的治疗和/或包含维奈托克的第三药物组合物的治疗，其中第一药物组合物包含异源嵌合蛋白，所述异源嵌合蛋白包含：(a)第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，(b)第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，和(c)连接第一结构域和第二结构域的接头。在实施方案中，受试者在第三药物组合物之后已经接受或正在接受第一药物组合物的治疗。在实施方案中，受试者在第一药物组合物之后已经接受或正在接受第三药物组合物的治疗。
在一个方面，本公开提供了一种治疗受试者的癌症的方法，其包括：(i)向受试者施用包含维奈托克的第三药物组合物，其中受试者已经接受或正在接受第一药物组合物和/或包含阿扎胞苷的第二药物组合物的治疗，其中第一药物组合物包含异源嵌合蛋白，所述异源嵌合蛋白包含：(a)第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，(b)第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，和(c)连接第一结构域和第二结构域的接头。在实施方案中，受试者在第二药物组合物之后已经接受或正在接受第一药物组合物的治疗。在实施方案中，受试者在第一药物组合物之后已经接受或正在接受第二药物组合物的治疗。
施用、给药和治疗方案
施用途径包括例如：皮内、瘤内、肌内、腹膜内、静脉内、皮下、鼻内、硬膜外、口服、舌下、鼻内、脑内、阴道内、经皮、直肠、通过吸入、或外用，特别是施用于耳、鼻、眼睛或皮肤。
作为实例，施用导致选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体，或其组合的抗癌剂；和/或本文公开的在本公开的方法中使用的嵌合蛋白(和/或另外的药剂)释放到血流中(经由肠内或肠胃外施用)，或者可选地，选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体或其组合的抗癌剂；和/或本公开的方法中使用的嵌合蛋白(和/或另外的药剂)直接施用至活动性疾病部位。
包含抗癌剂的第二药物组合物和/或本文公开的在本公开的方法中使用的嵌合蛋白(和/或另外的药剂)可以口服施用，所述抗癌剂选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体，或其组合。选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体或其组合的此类抗癌剂和/或本公开的方法中使用的嵌合蛋白(和/或另外的药剂)还可以通过任何其他方便的途径施用，例如，通过静脉内输注或推注、通过上皮或粘膜皮肤内层(例如，口腔粘膜、直肠粘膜和肠粘膜等)吸收，并且可以与另一种生物活性剂一起施用。施用可以是全身的或局部的。各种递送系统是已知的，例如封装在脂质体、微粒、微囊、胶囊等中，并且可用于施用。
在具体实施方案中，可能需要局部施用至需要治疗的区域。在实施方案中，例如在癌症的治疗中，选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体或其组合的抗癌剂和/或本公开的方法中使用的嵌合蛋白(和/或另外的药剂)施用于肿瘤微环境(例如，围绕和/或供给肿瘤细胞的细胞、分子、细胞外基质和/或血管，包括例如，肿瘤脉管系统；肿瘤浸润淋巴细胞；成纤维细胞网状细胞；内皮祖细胞(EPC)；癌症相关成纤维细胞；周细胞；其他基质细胞；细胞外基质(ECM)的组分；树突细胞；抗原呈递细胞；T细胞；调节性T细胞；巨噬细胞；中性粒细胞；以及位于肿瘤附近的其他免疫细胞)或淋巴结和/或靶向于肿瘤微环境或淋巴结。在实施方案中，例如在癌症的治疗中，选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体，或其组合的抗癌剂和/或本公开的方法中使用的嵌合蛋白(和/或另外的药剂)瘤内施用。
在实施方案中，选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体或其组合的抗癌剂和/或本公开的方法中使用的嵌合蛋白允许双重效应，其提供比常规免疫疗法(例如，用OPDIVO、KEYTRUDA、YERVOY和TECENTRIQ中的一种或多种进行的治疗)中所见的副作用更少的副作用。例如，选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体或其组合的抗癌剂和/或本公开的方法中使用的嵌合蛋白减少或预防常见的免疫相关不良事件，这些不良事件影响多种组织和器官，包括皮肤、胃肠道、肾脏、外周和中枢神经系统、肝脏、淋巴结、眼睛、胰腺和内分泌系统；如垂体炎、结肠炎、肝炎、肺炎、皮疹和风湿性疾病。此外，本发明的局部施用(例如瘤内施用)避免了用标准全身施用(例如IV输注)观察到的不良事件，如与常规免疫疗法(例如，用OPDIVO、KEYTRUDA、YERVOY和TECENTRIQ中的一种或多种进行的治疗)一起使用时所观察到的不良事件。
适合于肠胃外施用(例如静脉内、肌内、腹膜内、皮下和关节内注射和输注)的剂型包括例如溶液剂、混悬剂、分散剂、乳剂等。它们还可以以无菌固体组合物(例如冻干组合物)的形式制造，该无菌固体组合物(例如冻干组合物)可以在即将使用前溶解或悬浮于无菌注射介质中。它们可以含有例如本领域已知的悬浮剂或分散剂。
包含抗癌剂的第二药物组合物和/或本文公开的在本公开的方法中使用的嵌合蛋白(和/或另外的药剂)的剂量以及给药方案可以取决于各种参数，包括但不限于正在被治疗的疾病、受试者的一般健康状况和施用医师的判断，所述抗癌剂选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体，或其组合。包含抗癌剂的第二药物组合物和/或本文公开的在本公开的方法中使用的嵌合蛋白可以在另一种药剂施用之前(例如，之前5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周)、同时或之后(例如，之后5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周)施用于有此需要的受试者，所述抗癌剂选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体，或其组合。
在实施方案中，包含抗癌剂的第二药物组合物和/或本公开的方法中使用的嵌合蛋白和另外的药剂间隔1分钟、间隔10分钟、间隔30分钟、间隔小于1小时、间隔1小时、间隔1小时至2小时、间隔2小时至3小时、间隔3小时至4小时、间隔4小时至5小时、间隔5小时至6小时、间隔6小时至7小时、间隔7小时至8小时、间隔8小时至9小时、间隔9小时至10小时、间隔10小时至11小时、间隔11小时至12小时、间隔1天、间隔2天、间隔3天、间隔4天、间隔5天、间隔6天、间隔1周、间隔2周、间隔3周或间隔4周施用，所述抗癌剂选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体，或其组合。
在实施方案中，本公开涉及共同施用包含抗癌剂的第二药物组合物；和/或诱导适应性免疫应答的在本公开的方法中使用的嵌合蛋白和针对免疫检查点分子的另一种抗体；和/或诱导适应性免疫应答的在本公开的方法中使用的嵌合蛋白，所述抗癌剂选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体，或其组合。在此类实施方案中，包含选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体或其组合的抗癌剂的第二药物组合物；和/或诱导先天性免疫应答的在本公开的方法中使用的嵌合蛋白可以在施用包含选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体或其组合的抗癌剂的第二药物组合物和/或诱导适应性免疫应答的在本公开的方法中使用的嵌合蛋白之前、同时或之后施用。例如，选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体或其组合的抗癌剂；和/或本公开的方法中使用的嵌合蛋白可以间隔1分钟、间隔10分钟、间隔30分钟、间隔小于1小时、间隔1小时、间隔1小时至2小时、间隔2小时至3小时、间隔3小时至4小时施用、间隔4小时至5小时、间隔5小时至6小时、间隔6小时至7小时、间隔7小时至8小时、间隔8小时至9小时、间隔9小时至10小时、间隔10小时至11小时、间隔11小时至12小时、间隔1天、间隔2天、间隔3天、间隔4天、间隔5天、间隔6天、间隔1周、间隔2周、间隔3周或间隔4周。在一个示例性实施方案中，包含选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体，或其组合的抗癌剂的第二药物组合物；和/或诱导先天性免疫应答的在本公开的方法中的嵌合蛋白与包含选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体或其组合的抗癌剂的第二药物组合物；和/或诱导适应性应答的在本公开的方法中使用的嵌合蛋白间隔1周施用，或隔周施用(即，在施用包含选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体，或其组合的抗癌剂的第二药物组合物；和/或诱导适应性免疫应答的在本公开的方法中的嵌合蛋白1周后施用包含选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体，或其组合的抗癌剂的第二药物组合物；和/或诱导先天性免疫应答的在本公开的方法中的嵌合蛋白，如此反复)。
包含抗癌剂的第二药物组合物和/或本文公开的在本公开的方法中使用的嵌合蛋白(和/或另外的药剂)的剂量可取决于若干因素，包括病况的严重程度、是否要治疗或预防病况以及待治疗的受试者的年龄、体重和健康状况，所述抗癌剂选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体，或其组合。此外，有关特定受试者的药物基因组学(基因型对治疗药物的药代动力学、药效学或功效谱的影响)信息可能会影响所使用的剂量。此外，确切的个体剂量可以根据多种因素进行一定程度的调整，包括被施用的药剂的具体组合、施用时间、施用途径、制剂的性质、排泄速率、正在治疗的具体疾病、病症的严重程度以及病症的解剖位置。可以预期剂量的一些变化。
对于通过肠胃外注射施用包含抗癌剂的第二药物组合物和/或本文公开的在本公开的方法中使用的嵌合蛋白(和/或另外的药剂)，所述抗癌剂选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体，或其组合，剂量可以是每天约0.1mg至约250mg、每天约1mg至约20mg、或每天约3mg至约5mg。一般而言，当口服或肠胃外施用时，本文公开的任何药剂的剂量可为每天约0.1mg至约1500mg，或每天约0.5mg至约10mg，或每天约0.5mg至约5mg，或每天约200至约1,200mg(例如，每天约200mg、约300mg、约400mg、约500mg、约600mg、约700mg、约800mg、约900mg、约1,000mg、约1,100mg、约1,200mg)。
在实施方案中，包含抗癌剂的第二药物组合物和/或本文公开的在本公开的方法中使用的嵌合蛋白(和/或另外的药剂)的施用通过肠胃外注射或输注进行，剂量为每次治疗约0.1mg至约1500mg，或每次治疗约0.5mg至约10mg，或每次治疗约0.5mg至约5mg，或每次治疗约200至约1,200mg(例如，每次治疗约200mg、约300mg、约400mg、约500mg、约600mg、约700mg、约800mg、约900mg、约1,000mg、约1,100mg、约1,200mg)，所述抗癌剂选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体，或其组合。
在实施方案中，包含抗癌剂的第二药物组合物和/或本公开的方法中使用的嵌合蛋白(和/或另外的药剂)的合适剂量在约0.01mg/kg至约100mg/kg受试者体重或约0.01mg/kg至约10mg/kg体重的范围内，例如，约0.01mg/kg、约0.02mg/kg、约0.03mg/kg、约0.04mg/kg、约0.05mg/kg、约0.06mg/kg、约0.07mg/kg、约0.08mg/kg、约0.09mg/kg、约0.1mg/kg、约0.2mg/kg、约0.3mg/kg、约0.4mg/kg、约0.5mg/kg、约0.6mg/kg、约0.7mg/kg、约0.8mg/kg、约0.9mg/kg、约1mg/kg、约1.1mg/kg、约1.2mg/kg、约1.3mg/kg、约1.4mg/kg、约1.5mg/kg、约1.6mg/kg、约1.7mg/kg、约1.8mg/kg、1.9mg/kg、约2mg/kg、约3mg/kg、约4mg/kg、约5mg/kg、约6mg/kg、约7mg/kg、约8mg/kg、约9mg/kg、约10mg/kg体重，包括其间的所有值和范围，所述抗癌剂选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体，或其组合。
在另一个实施方案中，递送可以在囊泡中，特别是脂质体中(参见Langer,1990,Science 249:1527-1533；Treat等人,Liposomes in Therapy of Infectious Diseaseand Cancer,Lopez-Berestein和Fidler(编),Liss,New York,pp.353-365(1989)。
包含抗癌剂的第二药物组合物和/或本文公开的本公开的方法中使用的嵌合蛋白(和/或另外的药剂)可以通过控释或缓释方式或通过本领域普通技术人员众所周知的递送装置来施用，所述抗癌剂选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体，或其组合。实例包括但不限于以下专利中描述的那些：美国专利号3,845,770；3,916,899；3,536,809；3,598,123；4,008,719；5,674,533；5,059,595；5,591,767；5,120,548；5,073,543；5,639,476；5,354,556；和5,733,556，每一篇均通过引用以其整体并入本文。使用例如羟丙甲基纤维素、其他聚合物基质、凝胶、渗透膜、渗透系统、多层包衣、微粒、脂质体、微球或它们的组合以不同比例提供所需的释放曲线，此类剂型可用于提供一种或多种活性成分的控释或缓释。活性成分的控释或缓释可以通过各种条件来刺激，包括但不限于pH变化、温度变化、适当波长的光刺激、酶的浓度或可用性、水的浓度或可用性，或其他生理条件或化合物。
在另一个实施方案中，可以使用聚合材料(参见Medical Applications ofControlled Release,Langer和Wise(编),CRC Pres.,Boca Raton,Florida(1974)；Controlled Drug Bioavailability,Drug Product Design and Performance,Smolenand Ball(编),Wiley,New York(1984)；Ranger和Peppas,1983,J.Macromol.Sci.Rev.Macromol.Chem.23:61；还参见Levy等人,1985,Science 228:190；During等人,1989,Ann.Neurol.25:351；Howard等人,1989,J.Neurosurg.71:105)。
在另一个实施方案中，控释系统可以放置在待治疗的靶区域附近，因此仅需要全身剂量的一部分(参见，例如，Goodson,in Medical Applications of ControlledRelease,supra,vol.2,pp.115-138(1984))。可以使用Langer,1990,Science 249:1527-1533)的综述中讨论的其他控释系统。
包含抗癌剂的第二药物组合物和/或本文公开的本公开的方法中使用的嵌合蛋白(和/或另外的药剂)的施用可以独立地是每天一至四次或每月一至四次或每年一至六次或每两年、三年、四年或五年一次。施用可以持续一天或一个月、两个月、三个月、六个月、一年、两年、三年，甚至可以持续受试者的一生，所述抗癌剂选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体，或其组合。
利用包含抗癌剂的第二药物组合物和/或本文公开的本公开的方法中使用的嵌合蛋白(和/或另外的药剂)的剂量方案可以根据多种因素来选择，包括受试者的类型、物种、年龄、体重、性别和医疗状况；待治疗病况的严重程度；施用途径；受试者的肾或肝功能；个体的药物基因组学构成；以及所使用的本发明的具体化合物，所述抗癌剂选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体，或其组合。包含抗癌剂的第二药物组合物和/或本文公开的本公开的方法中使用的嵌合蛋白(和/或另外的药剂)可以以单日剂量施用，或者总日剂量可以以每天两次、三次或四次的分剂量施用，所述抗癌剂选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体，或其组合。此外，包含抗癌剂的第二药物组合物和/或本文公开的本公开的方法中使用的嵌合蛋白(和/或另外的药剂)可以在整个剂量方案中连续施用而不是间歇施用，所述抗癌剂选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体，或其组合。
融合蛋白、核酸和细胞
本公开的方法中使用的嵌合蛋白可以是重组融合蛋白，例如具有本文公开的胞外结构域的单一多肽。例如，在实施方案中，嵌合蛋白在原核细胞、真核细胞或无细胞表达系统中作为单个单位被翻译。
在实施方案中，嵌合蛋白是包含多个多肽(例如本文公开的多个胞外结构域)的重组蛋白，所述多个多肽例如在体外(例如，用一个或多个本文公开的合成接头)组合以得到单个单位。
在实施方案中，将嵌合蛋白化学合成为一种多肽，或者每个结构域可以单独化学合成然后组合。在实施方案中，嵌合蛋白的一部分被翻译并且一部分被化学合成。
可以通过将编码三个片段(I型跨膜蛋白的胞外结构域，随后是接头序列，随后是II型跨膜蛋白的胞外结构域)的核酸克隆到载体(质粒、病毒或其他)中来产生构建体，其中完整序列的氨基末端对应于含有I型跨膜蛋白的胞外结构域的分子的“左”侧，并且完整序列的羧基末端对应于含有II型跨膜蛋白的胞外结构域的分子的“右”侧。在具有如本文别处所述的其他构型之一的嵌合蛋白的实施方案中，构建体将包含三个核酸，使得产生的翻译的嵌合蛋白具有所需的构型，例如双向内嵌合蛋白。因此，在实施方案中，本公开的方法中使用的嵌合蛋白被如此工程化。
本公开的方法中使用的嵌合蛋白可以由克隆到表达载体中的核酸编码。在实施方案中，表达载体包含DNA或RNA。在实施方案中，表达载体是哺乳动物表达载体。
原核和真核载体均可用于表达嵌合蛋白。原核载体包括基于大肠杆菌序列的构建体(参见，例如，Makrides,Microbiol Rev 1996,60:512-538)。可用于在大肠杆菌中表达的调节区的非限制性实例包括lac、trp、lpp、phoA、recA、tac、T3、T7和λPL。原核表达载体的非限制性实例可以包括λgt载体系列，例如λgt11(Huynh等人,“DNA Cloning Techniques,Vol.I:APractical Approach,”1984,(D.Glover,ed.),pp.49-78,IRL Press,Oxford)和pET载体系列(Studier等人,Methods Enzymol 1990,185:60-89)。然而，原核宿主载体系统不能执行哺乳动物细胞的大部分翻译后处理。因此，真核宿主-载体系统可能特别有用。多个调节区可用于在哺乳动物宿主细胞中表达嵌合蛋白。例如，可以使用SV40早期和晚期启动子、巨细胞病毒(CMV)立即早期启动子和劳斯肉瘤病毒长末端重复(RSV-LTR)启动子。可用于哺乳动物细胞的诱导型启动子包括但不限于与金属硫蛋白II基因、小鼠乳腺肿瘤病毒糖皮质激素反应性长末端重复序列(MMTV-LTR)、β-干扰素基因和hsp70基因相关的启动子(参见，Williams等人,Cancer Res 1989,49:2735-42；和Taylor等人,Mol Cell Biol1990,10:165-75)。热休克启动子或应激启动子也可能有利于驱动嵌合蛋白在重组宿主细胞中的表达。
在实施方案中，表达载体包含编码嵌合蛋白的核酸或其补体，其有效连接至在哺乳动物细胞中具有功能的表达控制区或其补体。表达控制区能够驱动有效连接的阻断剂和/或刺激剂编码核酸的表达，使得在用表达载体转化的人细胞中产生阻断剂和/或刺激剂。
在实施方案中，本公开的方法中使用的嵌合蛋白可在哺乳动物宿主细胞中作为可分泌的且全功能的单多肽链产生。
表达控制区是调节性多核苷酸(本文中有时称为元件)，例如启动子和增强子，其影响有效连接的核酸的表达。本公开的表达载体的表达控制区能够在人细胞中表达有效连接的编码核酸。在实施方案中，细胞是肿瘤细胞。在另一个实施方案中，细胞是非肿瘤细胞。在实施方案中，表达控制区赋予有效连接的核酸可调节的表达。信号(有时称为刺激)可以增加或减少与这样的表达控制区有效连接的核酸的表达。这种响应于信号而增加表达的表达控制区通常被称为诱导型。这种响应于信号而降低表达的表达控制区通常被称为抑制型。通常，这些元件赋予的增加或减少量与存在的信号量成正比；信号量越大，表达的增加或减少就越大。
在实施方案中，本公开主张使用能够响应于信号瞬时实现高水平表达的诱导型启动子。例如，当在肿瘤细胞附近时，用包含此类表达控制序列的嵌合蛋白(和/或另外的药剂)的表达载体转化的细胞通过使转化细胞暴露于适当的信号被诱导以瞬时产生高水平的药剂。示例性的诱导型表达控制区包括那些包含用诸如小分子化学化合物的信号刺激的诱导型启动子的区域。在其他实例中，嵌合蛋白由含有嵌合抗原受体的细胞或体外扩增的肿瘤浸润淋巴细胞在对细胞的抗原识别敏感的启动子的控制下表达，并导致嵌合蛋白响应于肿瘤抗原识别的局部分泌。具体的实例可以在例如美国专利号5,989,910、5,935,934、6,015,709和6,004,941中找到，这些专利中的每一个均通过引用以其整体并入本文。
表达控制区和基因座控制区包括全长启动子序列，例如天然启动子和增强子元件，以及保留全部或部分的全长或非变体功能的子序列或多核苷酸变体。如本文所用，术语“功能性”及其语法变体，当在提及核酸序列、子序列或片段时使用时，意指该序列具有天然核酸序列(例如，非变体或未修饰的序列)的一种或多种功能。
如本文所用，“有效的连接(operable linkage)”是指所描述的部件的物理并置，以允许它们以其预期的方式起作用。在与核酸处于有效的连接的表达控制元件的实例中，这种关系使得控制元件调节核酸的表达。通常，调节转录的表达控制区并置在转录核酸的5'端附近(即“上游”)。表达控制区也可以位于转录序列的3'端(即“下游”)或转录物内(例如，在内含子中)。表达控制元件可位于距转录序列一定距离处(例如距核酸100至500、500至1000、2000至5000或更多个核苷酸)。表达控制元件的具体实例是启动子，其通常位于转录序列的5'。表达控制元件的另一个实例是增强子，其可以位于转录序列的5'或3'，或者位于转录序列内。
在人细胞中起作用的表达系统是本领域众所周知的；这些包括病毒系统。一般而言，在人细胞中起作用的启动子是能够结合哺乳动物RNA聚合酶并启动编码序列的下游(3')转录成mRNA的任何DNA序列。启动子具有一个转录起始区，其通常位于编码序列的5'端附近，并且通常具有位于转录起始位点上游25-30个碱基对的TATA盒。TATA盒被认为引导RNA聚合酶II在正确的位点开始RNA合成。启动子通常还含有上游启动子元件(增强子元件)，其通常位于TATA盒上游100至200个碱基对内。上游启动子元件决定转录起始的速率，并且可以在任一方向上发挥作用。特别用作启动子的是来自哺乳动物病毒基因的启动子，因为病毒基因经常被高度表达并且具有广泛的宿主范围。实例包括SV40早期启动子、小鼠乳腺肿瘤病毒LTR启动子、腺病毒主要晚期启动子、单纯疱疹病毒启动子和CMV启动子。
通常，哺乳动物细胞识别的转录终止和聚腺苷酸化序列是位于翻译终止密码子3'的调节区，并因此与启动子元件一起位于编码序列的侧翼。成熟mRNA的3’末端是通过位点特异性翻译后裂解和聚腺苷酸化形成的。转录终止子和聚腺苷酸化信号的实例包括源自SV40的那些。内含子也可以包括在表达构建体中。
有多种技术可用于将核酸引入活细胞中。适合在体外将核酸转移到哺乳动物细胞中的技术包括使用脂质体、电穿孔、显微注射、细胞融合、基于聚合物的系统、DEAE-葡聚糖、病毒转导、磷酸钙沉淀法等。对于体内基因转移，还可以使用许多技术和试剂，包括脂质体；基于天然聚合物的递送媒介物，例如壳聚糖和明胶；病毒载体也适合体内转导。在一些情况下，需要提供靶向剂，例如对肿瘤细胞表面膜蛋白具有特异性的抗体或配体。当采用脂质体时，与内吞作用相关的细胞表面膜蛋白结合的蛋白可用于靶向和/或促进摄取，例如，对特定细胞类型具有向性的衣壳蛋白或其片段、针对在循环中经历内化的蛋白的抗体、靶向细胞内定位并延长细胞内半衰期的蛋白。受体介导的内吞作用的技术例如由以下文献记载：Wu等人,J.Biol.Chem.262,4429-4432(1987)；和Wagner等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA87,3410-3414(1990)。
在适当的情况下，还可以使用基因递送剂，例如整合序列。许多整合序列是本领域已知的(参见例如Nunes-Duby等人,Nucleic Acids Res.26:391-406,1998；Sadwoski,J.Bacteriol.,165:341-357,1986；Bestor,Cell,122(3):322-325,2005；Plasterk等人,TIG 15:326-332,1999；Kootstra等人,Ann.Rev.Pharm.Toxicol.,43:413-439,2003)。这些包括重组酶和转座酶。实例包括Cre(Sternberg和Hamilton,J.Mol.Biol.,150:467-486,1981)、λ(Nash,Nature,247,543-545,1974)、FIp(Broach等人,Cell,29:227-234,1982)、R(Matsuzaki等人,J.Bacteriology,172:610-618,1990)、cpC31(参见例如Groth等人,J.Mol.Biol.335:667-678,2004)、睡美人、水手家族的转座酶(Plasterk等，同上)，以及用于整合病毒例如AAV、逆转录病毒和具有提供病毒整合的组分的抗病毒的组分，例如逆转录病毒或慢病毒的LTR序列以及AAV的ITR序列(Kootstra等人,Ann.Rev.Pharm.Toxicol.,43:413-439,2003)。此外，直接和靶向遗传整合策略可用于插入编码嵌合融合蛋白的核酸序列，包括CRISPR/CAS9、锌指、TALEN和大范围核酸酶基因编辑技术。
在实施方案中，用于表达嵌合蛋白(和/或另外的药剂)的表达载体是病毒载体。许多可用于基因疗法的病毒载体是已知的(参见，例如，Lundstrom,Trends Biotechnol.,21:1 17,122,2003)。示例性的病毒载体包括选自抗病毒(antivirus，LV)、逆转录病毒(RV)、腺病毒(AV)、腺相关病毒(AAV)和α病毒的那些，但也可以使用其他病毒载体。对于体内用途，适合使用未整合到宿主基因组中的病毒载体，例如α病毒和腺病毒。α病毒的示例性类型包括辛德比斯病毒(Sindbis virus)、委内瑞拉马脑炎(VEE)病毒和塞姆利基森林病毒(Semliki Forest virus，SFV)。对于体外用途，整合到宿主基因组中的病毒载体是合适的，例如逆转录病毒、AAV和抗病毒。在实施方案中，本公开提供了体内转导人细胞的方法，其包括使体内实体瘤与本公开的病毒载体接触。
可将表达载体引入到宿主细胞以产生本公开的方法中使用的嵌合蛋白。例如，细胞可以在体外培养或进行基因工程化。有用的哺乳动物宿主细胞包括但不限于源自人类、猴子和啮齿动物的细胞(参见例如Kriegler，“Gene Transfer and Expression:ALaboratory Manual,”1990,New York,Freeman&Co.)。这些包括SV40转化的猴肾细胞系(例如COS-7、ATCC CRL 1651)；人胚胎肾系(例如亚克隆用于在悬浮培养中生长的293、293-EBNA或293细胞，Graham等人,J Gen Virol 1977,36:59)；幼仓鼠肾细胞(例如BHK、ATCCCCL 10)；中国仓鼠卵巢细胞-DHFR(例如，CHO，Urlaub和Chasin,Proc Natl Acad Sci USA1980,77:4216)；DG44 CHO细胞、CHO-K1细胞、小鼠支持细胞(Mather,Biol Reprod 1980,23:243-251)；小鼠成纤维细胞(例如，NIH-3T3)、猴肾细胞(例如，CV1 ATCC CCL 70)；非洲绿猴肾细胞(例如，VERO-76，ATCC CRL-1587)；人宫颈癌细胞(例如，HELA，ATCC CCL 2)；犬肾细胞(例如，MDCK，ATCC CCL 34)；水牛大鼠肝细胞(例如，BRL 3A，ATCC CRL 1442)；人肺细胞(例如，W138，ATCC CCL 75)；人肝细胞(例如Hep G2、HB 8065)；和小鼠乳腺肿瘤细胞(例如，MMT 060562，ATCC CCL51)。用于表达本文公开的嵌合蛋白的示例性癌细胞类型包括小鼠成纤维细胞系NIH3T3、小鼠Lewis肺癌细胞系LLC、小鼠肥大细胞瘤细胞系P815、小鼠淋巴瘤细胞系EL4及其卵清蛋白转染子E.G7、小鼠黑色素瘤细胞系B16F10、小鼠纤维肉瘤细胞系MC57和人小细胞肺癌细胞系SCLC#2和SCLC#7。
宿主细胞可以从正常或受影响的受试者(包括健康人、癌症患者和具有感染性疾病的患者)、私人实验室保藏、公共培养物保藏中心(例如美国典型培养物保藏中心(ATCC))或商业供应商获得。
可用于体外、离体和/或体内产生本公开的方法中使用的嵌合蛋白的细胞包括但不限于上皮细胞、内皮细胞、角质形成细胞、成纤维细胞、肌肉细胞、肝细胞；血细胞，例如T淋巴细胞、表达嵌合抗原受体的T细胞、肿瘤浸润淋巴细胞、B淋巴细胞、单核细胞、巨噬细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、巨核细胞、粒细胞；各种干细胞或祖细胞，特别是造血干细胞或祖细胞(例如，如从骨髓获得的)、脐带血、外周血和胎儿肝脏。细胞类型的选择取决于正在治疗或预防的肿瘤或感染性疾病的类型，并且可以由本领域技术人员确定。
含Fc的大分子(例如单克隆抗体)的生产和纯化已成为标准化方法，产品之间只需进行少量修饰。例如，许多含Fc的大分子由人胚肾(HEK)细胞(或其变体)或中国仓鼠卵巢(CHO)细胞(或其变体)产生，或者在一些情况下通过细菌或合成方法产生。生产后，HEK或CHO细胞分泌的含Fc的大分子通过与Protein A柱结合进行纯化，随后使用各种方法进行“精制”。一般来说，纯化的含Fc的大分子以液体形式储存一段时间、冷冻较长时间或在一些情况下冻干。在实施方案中，本文所主张的嵌合蛋白的产生与传统的含Fc的大分子相比可以具有独特的特征。在某些实例中，可以使用特定的色谱树脂或使用不依赖于Protein A捕获的色谱方法来纯化嵌合蛋白。在实施方案中，嵌合蛋白可以寡聚状态或多种寡聚状态纯化，并使用特定方法富集特定寡聚状态。不受理论的束缚，这些方法可以包括用特定缓冲液处理，包括指定的盐浓度、pH和添加剂组合物。在其他实例中，此类方法可以包括相对于一种寡聚状态有利于另一种寡聚状态的处理。本文获得的嵌合蛋白可以使用本领域中指定的方法另外“精制”。在实施方案中，嵌合蛋白高度稳定并且能够耐受宽范围的pH暴露(pH 3-12之间)，能够耐受大量的冷冻/解冻应激(大于3次冷冻/解冻循环)，并且能够耐受高温下的长时间孵育(40℃下超过2周)。在实施方案中，嵌合蛋白显示出在此类应激条件下保持完整，没有降解、脱酰胺化等的迹象。
受试者和/或动物
在实施方案中，受试者和/或动物是哺乳动物，例如人、小鼠、大鼠、豚鼠、狗、猫、马、牛、猪、兔、羊或非人灵长类动物，例如猴、黑猩猩、或狒狒。在实施方案中，受试者和/或动物是非哺乳动物，例如斑马鱼。在实施方案中，受试者和/或动物可以包含荧光标记的细胞(用例如GFP)。在实施方案中，受试者和/或动物是转基因动物，其包含荧光细胞。
在实施方案中，受试者和/或动物是人。在实施方案中，人是儿科人类。在实施方案中，人是成年人。在实施方案中，人是老年人。在实施方案中，人可以被称为患者。
在某些实施方案中，人的年龄范围为约0个月至约6个月、约6至约12个月、约6至约18个月、约18至约36个月、约1至约5岁、约5至约10岁、约10至约15岁、约15至约20岁、约20至约25岁、约25至约30岁、约30至约35岁、约35至约40岁、约40至约45岁、约45至约50岁、约50至约55岁、约55至约60岁、约60至约65岁、约65至约70岁、约70至约75岁、约75至约80岁、约80至约85岁、约85岁至约90岁、约90岁至约95岁或约95岁至约100岁。
在实施方案中，受试者是非人动物，并且因此，本公开涉及兽医用途。在一个具体实施方案中，非人动物是家庭宠物。在另一个具体实施方案中，非人动物是家畜动物。
在实施方案中，受试者患有对包含能够结合PD-1或结合PD-1配体的抗体的治疗反应不良或为难治性的癌症。在实施方案中，受试者患有对用能够结合PD-1或结合PD-1配体的抗体治疗大约12周后对这样的治疗反应不良或无反应的癌症。
试剂盒和药物
本公开的方面提供了可以简化本文公开的药物组合物和/或嵌合蛋白的施用的试剂盒。
本公开的示例性试剂盒包含选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体或其组合的任何抗癌剂；和/或在本公开的方法中使用的嵌合蛋白和/或单位剂型的本文公开的药物组合物。在实施方案中，单位剂型是容器，例如预填充注射器，其可以是无菌的，含有本文公开的任何药剂和药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂或媒介物。试剂盒还可包含指导本文公开的任何药剂的使用的标签或印刷说明书。该试剂盒还可以包括眼睑窥器、局部麻醉剂和用于施用位置的清洁剂。该试剂盒还可以进一步包含本文公开的一种或多种另外的药剂。在实施方案中，试剂盒包含容器，该容器含有有效量的本公开的组合物和有效量的另一种组合物，例如本文公开的那些组合物。
本公开的多方面包括如本文公开的嵌合蛋白在制备药物(例如用于治疗癌症的药物)中的用途。
本文公开的任何方面或实施方案可以与本文公开的任何其他方面或实施方案组合。
将在以下实施例中进一步描述本发明，这些实施例并不限制权利要求中描述的本公开的范围。
实施例
提供本文的实施例是为了说明本公开的优点和益处，并进一步帮助本领域普通技术人员制备或使用本公开的嵌合蛋白。还呈现本文的实施例以便更全面地说明本公开的优选方面。这些实施例绝不应被解释为限制由所附权利要求限定的本公开的范围。实施例可以包括或并入上述本公开的任何变形、方面或实施方案。上述变形、方面或实施方案还可各自包括或并入本公开的任何或所有其他变形、方面或实施方案的变形。
实施例1：通过降甲基化剂/表观遗传调节剂放大SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的吞噬刺激活性
确定了用降甲基化剂/表观遗传调节剂处理癌细胞对SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的吞噬刺激活性的影响。
简而言之，K652人慢性粒细胞白血病(CML)细胞用绿色荧光追踪剂标记，并用单独的媒介物对照或0.1μM阿扎胞苷处理过夜。第二天，将肿瘤细胞在PBS中洗涤，然后在有或没有SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的情况下与人巨噬细胞在37℃、5％ CO2的存在下共培养4小时。这一孵育之后，收获细胞并用抗CD11b抗体(一种巨噬细胞标志物)处理，并使用流式细胞术进行分析。通过肿瘤(绿色荧光追踪剂)和巨噬细胞(抗CD11b抗体染色)信号的重叠确定阳性吞噬作用。通过将最大吞噬值设置为1，然后相应地标准化所有其他复式样品来计算吞噬指数。绘制所示处理的吞噬指数。如图2A所示，单用媒介物对照处理过夜然后在不存在SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的情况下与人巨噬细胞共培养的K652细胞(对照K652细胞)在背景水平下被人巨噬细胞吞噬。与对照K652细胞相比，单用阿扎胞苷(过夜)或单用SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白(4小时)处理导致吞噬水平增加(图2A)。有趣的是，如图2A所示，用阿扎胞苷(过夜)和SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白(4小时)处理的K652细胞表现出增加的吞噬水平，这与对照K652细胞(p<0.001)、单用阿扎胞苷(过夜)处理的K652细胞(p<0.05)或单用SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白(4小时)处理的K652细胞(p<0.01)相比具有统计学显著性。
在另一项实验中，将Kasumi-3人急性髓细胞白血病(AML)细胞用绿色荧光追踪剂标记，并用单独的媒介物对照或0.1μM阿扎胞苷处理过夜。第二天，将肿瘤细胞在PBS中洗涤，然后在有或没有SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的情况下与人巨噬细胞在37℃、5％ CO2的存在下共培养4小时。这一孵育之后，收获细胞并用抗CD11b抗体(一种巨噬细胞标志物)处理，并使用流式细胞术进行分析。通过肿瘤(绿色荧光追踪剂)和巨噬细胞(抗CD11b抗体染色)信号的重叠确定阳性吞噬作用。通过将最大吞噬值设置为1，然后相应地标准化所有其他复式样品来计算吞噬指数。绘制所示处理的吞噬指数。如图2B所示，单用媒介物对照处理过夜然后在不存在SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的情况下与人巨噬细胞共培养的Kasumi-3细胞(对照Kasumi-3细胞)在背景水平下被人巨噬细胞吞噬。与对照Kasumi-3细胞相比，单用阿扎胞苷(过夜)或单用SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白(4小时)处理导致吞噬水平轻微增加(图2B)。有趣的是，如图2B所示，用阿扎胞苷(过夜)和SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白(4小时)处理的Kasumi-3细胞表现出增加的吞噬水平，这与对照Kasumi-3细胞(p<0.0001)、单用阿扎胞苷(过夜)处理的Kasumi-3细胞(p<0.0001)或单用SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白(4小时)处理的Kasumi-3细胞(p<0.0001)相比具有统计学显著性。
总的来说，这些结果表明SIRPα-Fc-CD40L与降甲基化剂如阿扎胞苷的组合增强了血液肿瘤例如CML和AML的吞噬作用。这些结果证明了降甲基化剂阿扎胞苷增强了SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的吞噬刺激活性。因此，这些结果表明，与SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白和降甲基化剂二者相比，采用SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白和降甲基化剂/表观遗传调节剂的癌症联合疗法可产生更好的功效。
实施例2：通过蛋白酶体抑制剂放大SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的吞噬刺激活性
确定了蛋白酶体抑制剂处理癌细胞对SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的吞噬刺激活性的影响。
简而言之，将MM1R人多发性骨髓瘤(MM)细胞用绿色荧光追踪剂标记，并用单独的媒介物对照或1μM硼替佐米处理过夜。第二天，将肿瘤细胞在PBS中洗涤，然后在有或没有SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的情况下与人巨噬细胞在37℃、5％ CO2的存在下共培养4小时。这一孵育之后，收获细胞并用抗CD11b抗体(一种巨噬细胞标志物)处理，并使用流式细胞术进行分析。通过肿瘤(绿色荧光追踪剂)和巨噬细胞(抗CD11b抗体染色)信号的重叠确定阳性吞噬作用。通过将最大吞噬值设置为1，然后相应地标准化所有其他复式样品来计算吞噬指数。绘制所示处理的吞噬指数。如图3A所示，单用媒介物对照处理过夜然后在不存在SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的情况下与人巨噬细胞共培养的MM1R细胞(对照MM1R细胞)在背景水平下被人巨噬细胞吞噬。与对照MM1R细胞相比，单用硼替佐米(过夜)或单用SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白(4小时)处理导致吞噬水平增加(图3A)。有趣的是，如图3A所示，与对照MM1R细胞(p<0.0001)、单用硼替佐米(过夜)处理的MM1R细胞或单用SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白(4小时)处理的MM1R细胞相比，用硼替佐米(过夜)和SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白(4小时)处理的MM1R细胞表现出增加的吞噬水平。
在另一项实验中，将ARD1人多发性骨髓瘤(MM)细胞用绿色荧光追踪剂标记，并用单独的媒介物对照或1μM硼替佐米处理过夜。第二天，将肿瘤细胞在PBS中洗涤，然后在有或没有SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的情况下与人巨噬细胞在37℃、5％ CO2的存在下共培养4小时。这一孵育之后，收获细胞并用抗CD11b抗体(巨噬细胞标志物)处理，并使用流式细胞术进行分析。通过肿瘤(绿色荧光追踪剂)和巨噬细胞(抗CD11b抗体染色)信号的重叠确定阳性吞噬作用。通过将最大吞噬值设置为1，然后相应地标准化所有其他复式样品来计算吞噬指数。绘制所示处理的吞噬指数。如图3B所示，单用媒介物对照处理过夜然后在不存在SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的情况下与人巨噬细胞共培养的ARD1细胞(对照ARD1细胞)在背景水平下被人巨噬细胞吞噬。与对照ARD1细胞相比，单用硼替佐米(过夜)或单用SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白(4小时)处理导致吞噬水平增加(图3B)。有趣的是，如图3B所示，与对照ARD1细胞(p<0.0001)、单用硼替佐米(过夜)处理的ARD1细胞或单用SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白(4小时)处理的ARD1细胞相比，用硼替佐米(过夜)和SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白(4小时)处理的ARD1细胞表现出增加的吞噬水平。
这些结果证明了蛋白酶体抑制剂硼替佐米增强了SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的吞噬刺激活性。因此，这些结果表明，与SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白和蛋白酶体抑制剂二者相比，采用SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白和蛋白酶体抑制剂的癌症联合疗法可产生更好的功效。
实施例3：通过Bcl2抑制剂放大SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的吞噬刺激活性
确定了Bcl2抑制剂处理癌细胞对SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的吞噬刺激活性的影响。
简而言之，将K652人慢性粒细胞白血病(CML)细胞用绿色荧光追踪剂标记，并用单独的媒介物对照或1μM维奈托克处理过夜。第二天，将肿瘤细胞在PBS中洗涤，然后在有或没有SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的情况下与人巨噬细胞在37℃、5％ CO2的存在下共培养4小时。这一孵育之后，收获细胞并用抗CD11b抗体(一种巨噬细胞标志物)处理，并使用流式细胞术进行分析。通过肿瘤(绿色荧光追踪剂)和巨噬细胞(抗CD11b抗体染色)信号的重叠确定阳性吞噬作用。通过将最大吞噬值设置为1，然后相应地标准化所有其他复式样品来计算吞噬指数。绘制所示处理的吞噬指数。如图4所示，单用媒介物对照处理过夜然后在不存在SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的情况下与人巨噬细胞共培养的K562细胞(对照K562细胞)在背景水平下被人巨噬细胞吞噬。与对照K562细胞相比，单用维奈托克(过夜)或单用SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白(4小时)处理导致吞噬水平增加(图4)。有趣的是，如图4所示，与对照K562细胞(p<0.0001)、单用维奈托克(过夜)处理的K562细胞或单用SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白(4小时)处理的K562细胞相比，用维奈托克(过夜)和SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白(4小时)处理的K562细胞表现出增加的吞噬水平。
这些结果证明了Bcl2抑制剂维奈托克增强了SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的吞噬刺激活性。因此，这些结果表明，与SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白和Bcl2抑制剂二者相比，采用SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白和Bcl2抑制剂的癌症联合疗法可产生更好的功效。
实施例4：通过抗BCMA抗体放大SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的吞噬刺激活性
确定了具有抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)活性的抗BCMA抗体(克隆C12A3.2)处理癌细胞对SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的吞噬刺激活性的影响。
简而言之，将KM28PE人多发性骨髓瘤(MM)细胞用绿色荧光追踪剂标记，并与人巨噬细胞共培养，并用(1)单独的媒介物对照、(2)10μg/ml SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白、(3)1μg/ml抗BCMA抗体或(4)1μg/ml抗BCMA抗体和10μg/ml SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白处理，并在37℃、5％ CO2的存在下孵育4小时。这一孵育之后，收获细胞并用抗CD11b抗体(一种巨噬细胞标志物)处理，并使用流式细胞术进行分析。通过肿瘤(绿色荧光追踪剂)和巨噬细胞(抗CD11b抗体染色)信号的重叠确定阳性吞噬作用。通过将最大吞噬值设置为1，然后相应地标准化所有其他复式样品来计算吞噬指数。绘制所示处理的吞噬指数。如图5A所示，单用媒介物对照处理的KM28PE细胞在背景水平下被人巨噬细胞吞噬。与仅媒介物处理的KM28PE细胞相比，单用抗BCMA抗体或单用SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白处理导致吞噬水平增加(图5A)。有趣的是，如图5A所示，与仅媒介物处理的KM28PE细胞(p<0.01)、单用抗BCMA抗体处理的KM28PE细胞(p<0.05)或单用SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白处理的KM28PE细胞(p<0.05)相比，用抗BCMA抗体和SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白处理的KM28PE细胞表现出增加的吞噬水平。
在另一项实验中，将KM12B人多发性骨髓瘤(MM)细胞用绿色荧光追踪剂标记，并与人巨噬细胞共培养，并用(1)单独的媒介物对照、(2)10μg/ml SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白、(3)1μg/ml抗BCMA抗体或(4)1μg/ml抗BCMA抗体和10μg/ml SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白处理，并在37℃、5％ CO2的存在下孵育4小时。孵育后，收获细胞并用抗CD11b抗体(一种巨噬细胞标志物)处理，并使用流式细胞术进行分析。通过肿瘤(绿色荧光追踪剂)和巨噬细胞(抗CD11b抗体染色)信号的重叠确定阳性吞噬作用。通过将最大吞噬值设置为1，然后相应地标准化所有其他复式样品来计算吞噬指数。绘制所示处理的吞噬指数。如图5B所示，单用媒介物对照处理的KM12B细胞在背景水平下被人巨噬细胞吞噬。与仅媒介物处理的KM12B细胞相比，单用抗BCMA抗体或单用SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白处理导致吞噬水平增加(图5B)。有趣的是，如图5B所示，与仅媒介物处理的KM12B细胞(p<0.01)、单用抗BCMA抗体处理的KM12B细胞(p<0.05)或单用SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白处理的KM12B细胞(p<0.05)相比，用抗BCMA抗体和SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白处理的KM12B细胞表现出增加的吞噬水平。
这些结果证明了抗BCMA抗体增强了SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的吞噬刺激活性。因此，这些结果表明，与SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白和抗BCMA抗体二者相比，采用SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白和抗BCMA抗体的癌症联合疗法可产生更好的功效。
实施例5：通过抗CD38抗体放大SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的吞噬刺激活性
确定了抗CD38抗体处理癌细胞对SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的吞噬刺激活性的影响。
简而言之，将ARD1人多发性骨髓瘤(MM)细胞用IncuCyte phRodo Red标记试剂盒标记，并与人巨噬细胞共培养，并用(1)单独的媒介物对照、(2)10μg/ml SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白、(3)1μg/ml达雷木单抗(一种专精抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)的抗CD38抗体)或(4)1μg/ml达雷木单抗和10μg/ml SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白处理，并在37℃、5％ CO2的存在下孵育2小时。使用IncuCyte延时显微镜系统对培养物进行成像，并通过红色荧光强度的增加来确定阳性吞噬作用，当phRodo Red标记的肿瘤细胞内化到酸性巨噬细胞吞噬体中时出现红色荧光强度的增加。通过将最大吞噬值设置为1，然后相应地标准化所有其他复式样品来计算吞噬指数。绘制所示处理的吞噬指数。如图6所示，单用媒介物对照处理的ARD1细胞在背景水平下被人巨噬细胞吞噬。与仅媒介物处理的ARD1细胞相比，单用达雷木单抗或单用SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白处理导致吞噬水平增加(图6)。有趣的是，如图6所示，与仅媒介物处理的ARD1细胞(p<0.0001)、单用达雷木单抗处理的ARD1细胞(p<0.0001)或单用SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白处理的ARD1细胞(p<0.05)相比，用达雷木单抗和SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白处理的ARD1细胞表现出增加的吞噬水平。
这些结果证明了抗CD38抗体达雷木单抗增强了SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的吞噬刺激活性。因此，这些结果表明，与SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白和抗CD38抗体二者相比，采用SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白和抗CD38抗体的癌症联合疗法可产生更好的功效。这些数据还表明，SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白与针对肿瘤特异性抗原靶标(但不限于，例如PD-L1、CD47、CD38、FOLR1、CD123、SLAMF7和BCMA)的具有ADCC/ADCP能力的抗体的组合与SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白和抗体本身相比，可产生更好的功效。
实施例6：通过免疫调节酰亚胺药物(IMiD)放大SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的吞噬刺激活性
确定了免疫调节酰亚胺药物(IMiD)处理癌细胞对SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的吞噬刺激活性的影响。
简而言之，从人供体PBMC中分离CD14+单核细胞并与m-CSF(100ng/mL)一起培养6天。第6天，将IFNγ(100ng/mL)和LPS(10ng/mL)添加到细胞中另外24小时，产生M1极化巨噬细胞。在巨噬细胞分化的第5天，将来自同一人供体的另一小瓶PBMC解冻，并使用磁珠分离试剂盒分离CD3 T细胞。这些T细胞用CD3/CD28 T细胞磁激活珠激活2天。第7天，当巨噬细胞和T细胞都被激活并准备就绪时，将它们与用绿色荧光追踪剂标记的KMS12B多发性骨髓瘤细胞在10μM泊马度胺以及有或没有50μg/ml SIPRα-Fc-CD40L嵌合蛋白的情况下合并。在不含T细胞的情况下，将与巨噬细胞和10μM泊马度胺一起孵育的KMS12B细胞用作阴性对照。该共培养物在37℃、5％ CO2下孵育4小时。这一孵育之后，收获细胞并用抗CD11b抗体(一种巨噬细胞标志物)处理，并使用流式细胞术进行分析。通过肿瘤(绿色荧光追踪剂)和巨噬细胞(抗CD11b抗体染色)信号的重叠确定阳性吞噬作用。通过将最大吞噬值设置为1，然后相应地标准化所有其他复式样品来计算吞噬指数。绘制所示处理的吞噬指数。当巨噬细胞和肿瘤细胞在泊马度胺的存在下合并时，产生基线吞噬信号(黑色条；图7)。如图7所示，与在不含T细胞的情况下孵育的KMS12B细胞(阴性对照)相比，与T细胞、巨噬细胞和泊马度胺一起孵育的KMS12B细胞显示出增加的吞噬作用。进一步地，如图7所示，与没有用SIPRα-Fc-CD40L嵌合蛋白处理的KMS12B细胞相比，用泊马度胺和SIPRα-Fc-CD40L嵌合蛋白处理的KMS12B细胞表现出进一步的吞噬作用。
已表明IMiD(例如泊马度胺)调节免疫细胞并增强效应物功能。不受理论的束缚，很可能当CD3/CD28激活的T细胞也存在时，吞噬作用增加，这可能是由于T细胞对肿瘤细胞的细胞毒性作用，使得它们成为巨噬细胞介导的吞噬作用更好的靶标。向该系统中添加SIRPα-Fc-CD40L进一步增强了吞噬作用。因此，这些数据证明了，免疫细胞激活剂与增强吞噬作用的药物的组合看起来具有良好的协同作用。因此，这些结果表明，与SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白和抗CD38抗体两者相比，采用SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白和一种IMiD的癌症联合疗法可产生更好的功效。
实施例7：通过抗SLAMF7抗体放大SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的吞噬刺激活性
确定了抗SLAMF7抗体处理癌细胞对SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的吞噬刺激活性的影响。
简而言之，将ARD1人多发性骨髓瘤细胞用绿色荧光追踪剂标记，并与人巨噬细胞共培养，并用(1)单独的媒介物对照、(2)10μg/ml SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白、(3)1μg/ml依托珠单抗(一种专精抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)的抗SLAMF7抗体)或(4)1μg/ml依托珠单抗和10μg/ml SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白处理，并在37℃、5％ CO2的存在下孵育4小时。这一孵育之后，收获细胞并用抗CD11b抗体(一种巨噬细胞标志物)处理，并使用流式细胞术进行分析。通过肿瘤(绿色荧光追踪剂)和巨噬细胞(抗CD11b抗体染色)信号的重叠确定阳性吞噬作用。通过将最大吞噬值设置为1，然后相应地标准化所有其他复式样品来计算吞噬指数。绘制所示处理的吞噬指数。如图8所示，单用媒介物对照处理的ARD1细胞在背景水平下被人巨噬细胞吞噬。与仅媒介物处理的ARD1细胞相比，单用依托珠单抗或单用SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白处理导致吞噬水平增加(图8)。有趣的是，如图8所示，与仅媒介物处理的ARD1细胞(p<0.05)、单用依托珠单抗处理的ARD1细胞或单用SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白处理的ARD1细胞相比，用依托珠单抗和SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白处理的ARD1细胞表现出增加的吞噬水平。
这些结果证明了抗SLAMF7抗体依托珠单抗增强了SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的吞噬刺激活性。因此，这些结果表明，与SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白和抗SLAMF7抗体二者相比，采用SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白和抗SLAMF7抗体的癌症联合疗法可产生更好的功效。这些数据还表明，SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白与针对肿瘤特异性抗原靶标(但不限于，例如PD-L1、CD47、CD38、FOLR1、CD123、SLAMF7和BCMA)的具有ADCC/ADCP能力的抗体的组合与SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白和抗体本身相比，可产生更好的功效。
实施例8：通过抗FOLR1抗体放大SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的吞噬刺激活性
确定了抗FOLR1抗体处理癌细胞对SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的吞噬刺激活性的影响。
简而言之，将SKOV3卵巢癌细胞用绿色荧光追踪剂标记，并与人巨噬细胞共培养，并用(1)单独的媒介物对照、(2)10μg/ml SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白、(3)1μg/ml抗FOLR1抗体或(4)1μg/ml抗FOLR1抗体和10μg/ml SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白处理，并在37℃、5％ CO2的存在下孵育4小时。这一孵育之后，收获细胞并用抗CD11b抗体(一种巨噬细胞标志物)处理，并使用流式细胞术进行分析。通过肿瘤(绿色荧光追踪剂)和巨噬细胞(抗CD11b抗体染色)信号的重叠确定阳性吞噬作用。通过将最大吞噬值设置为1，然后相应地标准化所有其他复式样品来计算吞噬指数。绘制所示处理的吞噬指数。如图9所示，单用媒介物对照处理的SKOV3细胞在背景水平下被人巨噬细胞吞噬。与仅媒介物处理的SKOV3细胞相比，单用抗FOLR1抗体或单用SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白处理导致吞噬水平增加(图9)。有趣的是，如图9所示，与仅媒介物处理的SKOV3细胞(p<0.0001)、单用抗FOLR1抗体处理的SKOV3细胞或单用SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白处理的SKOV3细胞相比，用抗FOLR1抗体和SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白处理的SKOV3细胞表现出增加的吞噬水平。
这些结果证明了SIRPα-Fc-CD40L与具有ADCC/ADCP能力的FOLR1抗体的组合增强了卵巢肿瘤细胞的吞噬作用。因此，这些结果表明，与SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白和抗FOLR1抗体二者相比，采用SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白和抗FOLR1抗体的癌症联合疗法可产生更好的功效。这些数据还表明，SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白与针对肿瘤特异性抗原靶标(但不限于，例如PD-L1、CD47、CD38、FOLR1、CD123、SLAMF7和BCMA)的具有ADCC/ADCP能力的抗体的组合与SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白和抗体本身相比，可产生更好的功效。
实施例9：SIRPα(CD172a)-Fc-CD40L嵌合蛋白与紫杉醇联合的体内抗肿瘤活性
评价了与纺锤体毒素联合的SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的功效。为此，测定了紫杉醇和嵌合蛋白在体内靶向和减少肿瘤体积的能力。简而言之，将BALB/C小鼠接种了500,000个CT26肿瘤细胞。当肿瘤体积约为50至60mm3(第0天)时，将小鼠随机分配到以下治疗组：(1)仅媒介物对照，(2)单用300μg的SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白，(3)单用24mg/kg的紫杉醇，和(4)300μg的SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白和24mg/kg的紫杉醇的组合。在第0、3和6天经由腹膜内注射对小鼠给药。第14天用电子卡尺测量肿瘤并使用GraphPad Prism软件绘图。如图10A所示，单用SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白和单用紫杉醇的治疗导致肿瘤尺寸减小。有趣的是，SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白和紫杉醇的联合治疗引起肿瘤尺寸的进一步减小(图10A)。
这些结果表明，SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白和微管蛋白动力学抑制剂(但不限于，例如紫杉醇、埃博霉素、多西他赛、圆皮海绵内酯、长春花碱、长春新碱、长春瑞滨、长春氟宁、尾海兔素、软海绵素、哈米特林和隐花素52)的组合可比任一单一治疗都有益，因此可用于本文公开的方法中。
实施例10：SIRPα(CD172a)-Fc-CD40L嵌合蛋白与5-氟尿嘧啶联合的体内抗肿瘤活性
评价了与抗代谢物联合的SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的功效。为此，测定了5-氟尿嘧啶和嵌合蛋白在体内靶向和减少肿瘤体积的能力。简而言之，将BALB/C小鼠接种了500,000个CT26肿瘤细胞。当肿瘤体积约为50至60mm3(第0天)时，将小鼠随机分配到以下治疗组：(1)仅媒介物对照，(2)单用300μg的SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白，(3)单用20mg/kg的5-氟尿嘧啶，和(4)300μg的SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白和20mg/kg的5-氟尿嘧啶的组合。如下经由腹膜内注射对小鼠给药：在第0、3和6天施用SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白；第0、2和4天施用5-氟尿嘧啶。第11天用电子卡尺测量肿瘤并使用GraphPad Prism软件绘图。如图10B所示，单用SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白和单用5-氟尿嘧啶的治疗导致肿瘤尺寸减小。有趣的是，与仅媒介物对照(p<0.01)、单用SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白和单用20mg/kg的5-氟尿嘧啶(p<0.05)相比，SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白和5-氟尿嘧啶的联合治疗引起肿瘤尺寸的进一步减小(图10B)。
这些结果证明了，SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白与抗代谢物和/或胸苷酸合酶抑制剂(但不限于，例如5-氟尿嘧啶(5-FU)、6-巯基嘌呤(6-MP)、卡培他滨、阿糖胞苷、氟尿苷、氟达拉滨、吉西他滨、羟基脲、甲氨蝶呤、培美曲塞、光氨蝶呤、雷替曲塞、诺拉曲塞、ZD9331和GS7904L)的组合可比任一单一治疗都有益，因此可用于本文公开的方法中。
实施例11：SIRPα(CD172a)-Fc-CD40L嵌合蛋白与伊立替康联合的体内抗肿瘤活性
评价了与拓扑异构酶I抑制剂联合的SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的功效。为此，测定了伊立替康和嵌合蛋白在体内靶向和减少肿瘤体积的能力。简而言之，将BALB/C小鼠接种了500,000个CT26肿瘤细胞。当肿瘤体积约为50至60mm3(第0天)时，将小鼠随机分配到以下治疗组：(1)仅媒介物对照，(2)单用300μg的SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白，(3)单用25mg/kg的伊立替康，和(4)300μg的SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白和25mg/kg的伊立替康的组合。在第0和2天经由腹膜内注射对小鼠给药。第4天用电子卡尺测量肿瘤并使用GraphPad Prism软件绘图。如图10C所示，单用SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白和单用伊立替康的治疗导致肿瘤尺寸减小。有趣的是，SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白和伊立替康的联合治疗引起肿瘤尺寸的进一步减小(图10C)。
这些结果表明，SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白和拓扑异构酶I抑制剂(但不限于，例如喜树碱、贝洛替康拓扑替康和伊立替康)的组合可比任一单一治疗都有益，因此可用于本文公开的方法中。
实施例12：SIRPα(CD172a)-Fc-CD40L嵌合蛋白与多柔比星联合的体内抗肿瘤活性
评价了与蒽环素联合的SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的功效。为此，测定了多柔比星和嵌合蛋白在体内靶向和减少肿瘤体积的能力。简而言之，将BALB/C小鼠接种了500,000个CT26肿瘤细胞。当肿瘤体积约为50至60mm3(第0天)时，将小鼠随机分配到以下治疗组：(1)仅媒介物对照，(2)单用300μg的SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白，(3)单用8mg/kg的多柔比星，和(4)300μg的SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白和8mg/kg的多柔比星的组合。在第0、3和6天经由腹膜内注射用SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白对小鼠给药，并通过尾静脉用多柔比星对小鼠给药3次。第7天用电子卡尺测量肿瘤并使用GraphPad Prism软件绘图。如图10D所示，单用SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白和单用多柔比星的治疗导致肿瘤尺寸减小。有趣的是，SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白和多柔比星的联合治疗引起肿瘤尺寸的进一步减小(图10D)。
这些结果表明，SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白和蒽环类抗生素(但不限于，例如柔红霉素、多柔比星、表柔比星、伊达比星、米托蒽醌和戊柔比星)或拓扑异构酶II抑制剂(但不限于，例如多柔比星、表柔比星、戊柔比星、柔红霉素、伊达比星、pitoxantrone、匹杉琼、依托泊苷、替尼泊苷和安吖啶)的组合可比任一单一治疗都有益，因此可用于本文公开的方法中。
实施例13：SIRPα(CD172a)-Fc-CD40L嵌合蛋白与铂类药物联合的体内抗肿瘤活性
评价了与铂类化合物联合的SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的功效。为此，测定了顺铂和嵌合蛋白在体内靶向和减少肿瘤体积的能力。简而言之，将BALB/C小鼠接种了500,000个CT26肿瘤细胞。当肿瘤体积约为50至60mm3(第0天)时，将小鼠随机分配到以下治疗组：(1)仅媒介物对照，(2)单用300μg的SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白，(3)单用200μg的顺铂，和(4)300μg的SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白和200μg的顺铂的组合。在第0和3天用SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白以及在第0天用顺铂经由腹膜内注射对小鼠给药。第4天用电子卡尺测量肿瘤并使用GraphPad Prism软件绘图。如图10E所示，单用SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白和单用顺铂的治疗导致肿瘤尺寸减小。有趣的是，SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白和顺铂的联合治疗引起肿瘤尺寸的进一步减小(图10E)。
在另一项实验中，测定了奥沙利铂和嵌合蛋白在体内靶向和减少肿瘤体积的能力。简而言之，将BALB/C小鼠接种了500,000个CT26肿瘤细胞。当肿瘤体积约为50至60mm3(第0天)时，将小鼠随机分配到以下治疗组：(1)仅媒介物对照，(2)单用300μg的SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白，(3)单用10mg/kg的奥沙利铂，和(4)300μg的SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白和10mg/kg的奥沙利铂的组合。在第0和3天用SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白以及在第0天用奥沙利铂经由腹膜内注射对小鼠给药。第4天用电子卡尺测量肿瘤并使用GraphPad Prism软件绘图。如图10F所示，单用SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白和单用奥沙利铂的治疗导致肿瘤尺寸减小。有趣的是，SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白和奥沙利铂的联合治疗引起肿瘤尺寸的进一步减小(图10F)。
这些结果表明，SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白和铂类药物(但不限于，例如顺铂、卡铂和奥沙利铂)的组合可比任一单一治疗都有益，因此可用于本文公开的方法中。
实施例14：SIRPα(CD172a)-Fc-CD40L嵌合蛋白与免疫检查点抑制剂联合的体内抗肿瘤活性
评价了与免疫检查点抑制剂联合的SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的功效。为此，测定了抗PD-L1抗体和嵌合蛋白在体内靶向和减少肿瘤体积的能力。简而言之，将BALB/C小鼠接种了1×106个A20淋巴瘤细胞。当肿瘤体积约为75至80mm3(第0天)时，将小鼠随机分配到以下治疗组：(1)仅媒介物对照，(2)单用200μg的小鼠SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白，(3)100μg的抗PD-L1抗体(克隆10F.9G2)，和(4)200μg的SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白和100μg的抗PD-L1抗体的组合。在第0、3和6天用SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白经由腹膜内注射对小鼠给药。第12天用电子卡尺测量肿瘤并使用GraphPad Prism软件绘图。在媒介物对照组的平均值和mSIRPα-Fc-CD40L组的平均值处绘制虚线。如图13A所示，单用SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白和单用抗PD-L1抗体的治疗导致肿瘤尺寸减小。有趣的是，SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白和抗PD-L1抗体的联合治疗引起肿瘤尺寸的进一步减小(图13A)。
这些结果表明，SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白和和免疫检查点抑制剂(但不限于，例如抗PD-1、抗PD-L1和抗CTLA抗体)的组合可比任一单一治疗都有益，并因此可用于本文公开的方法中。
实施例15：SIRPα(CD172a)-Fc-CD40L嵌合蛋白与抗代谢物/DNA合成抑制剂联合的体内抗肿瘤活性
评价了与抗代谢物/DNA合成抑制剂联合的SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的功效。为此，测定了阿糖胞苷和嵌合蛋白在体内靶向和减少肿瘤体积的能力。简而言之，将BALB/C小鼠接种了1×106个A20淋巴瘤细胞。当肿瘤体积约为75至80mm3(第0天)时，将小鼠随机分配到以下治疗组：(1)仅媒介物对照，(2)单用200μg的小鼠SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白，(3)50mg/kg的阿糖胞苷，和(4)200μg的SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白和50mg/kg的阿糖胞苷的组合。在第0、3和6天用SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白以及在第0、1、2和3天用阿糖胞苷经由腹膜内注射对小鼠给药。第12天用电子卡尺测量肿瘤并使用GraphPad Prism软件绘图。在媒介物对照组的平均值和mSIRPα-Fc-CD40L组的平均值处绘制虚线。如图13B所示，单用SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白和单用抗PD-L1抗体的治疗导致肿瘤尺寸减小。有趣的是，SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白和抗PD-L1抗体的联合治疗引起肿瘤尺寸的进一步减小(图13B)。
这些结果表明，SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白和抗代谢物/DNA合成抑制剂(但不限于，例如5-氟尿嘧啶(5-FU)、卡培他滨、氟尿苷、阿糖胞苷(ARA-C)、吉西他滨、地西他滨和维达扎)的组合可比任一单一治疗都有益，并因此可用于本文公开的方法中。
实施例16：SIRPα(CD172a)-Fc-CD40L嵌合蛋白与降甲基化剂/表观遗传调节剂和/或蛋白类泛素化修饰抑制剂联合的体内抗肿瘤活性
评价了与降甲基化剂/表观遗传调节剂和/或蛋白类泛素化修饰抑制剂联合的SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的功效。为此，测定了抗PD-L1抗体和嵌合蛋白在体内靶向和减少肿瘤体积的能力。简而言之，将BALB/C小鼠接种了1×106个A20淋巴瘤细胞。当肿瘤体积约为75至80mm3(第0天)时，将小鼠随机分配到以下治疗组：(1)仅媒介物对照，(2)单用1mg/kg阿扎胞苷，(3)单用4mg/kg pevonedistat(MLN4924)，(4)1mg/kg阿扎胞苷和4mg/kgpevonedistat(MLN4924)的组合，(5)单用200μg的SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白，(6)1mg/kg阿扎胞苷和200μg的SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的组合，(7)4mg/kg pevonedistat(MLN4924)和200μg的SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的组合，和(8)1mg/kg阿扎胞苷、4mg/kg pevonedistat(MLN4924)和200μg的SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的组合。在第0、3和6天用SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白以及在第0、1、2和3天用pevonedistat(MLN4924)经由腹膜内注射对小鼠给药。第12天用电子卡尺测量肿瘤并使用GraphPad Prism软件绘图。在媒介物对照组的平均值和mSIRPα-Fc-CD40L组的平均值处绘制虚线。
如图13C所示，单用阿扎胞苷、单用pevonedistat(MLN4924)和单用SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的治疗导致肿瘤尺寸减小。有趣的是，如图13C所示，由SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白与阿扎胞苷和pevonedistat(MLN4924)任一的组合引起的肿瘤减小程度大于单用SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白、单用阿扎胞苷和单用pevonedistat(MLN4924)中的每一种引起的肿瘤减小程度。相比之下，由阿扎胞苷和pevonedistat(MLN4924)的组合引起的肿瘤减小程度不大于由单用阿扎胞苷或单用pevonedistat(MLN4924)引起的肿瘤减小程度(图13C)。有趣的是，SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白、阿扎胞苷和pevonedistat(MLN4924)的联合治疗引起肿瘤尺寸的进一步减小(图13B)，其大于所有其他治疗引起的减小。因此，虽然阿扎胞苷和pevonedistat(MLN4924)的组合引起的肿瘤减小程度不大于单用阿扎胞苷或单用pevonedistat(MLN4924)引起的肿瘤减小程度，但是由SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白、阿扎胞苷和pevonedistat(MLN4924)的组合引起的肿瘤减小程度大于由SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白和阿扎胞苷的组合或SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白和pevonedistat(MLN4924)的组合引起的肿瘤减小程度。
正如阿扎胞苷和pevonedistat(MLN4924)的组合所示，抗癌药物的组合并不总是产生有益的效果。然而，这些结果证明了SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白和降甲基化剂/表观遗传调节剂(但不限于，例如阿扎胞苷、5-氮杂-2'-脱氧胞苷、辛二酰苯胺异羟肟酸(saha)、罗米地辛、贝利司他、帕比司他和西达本胺)的组合可比任一单一治疗都有益，并因此可用于本文公开的方法中。这些结果还证明了，SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白和蛋白类泛素化修饰抑制剂(不限于此，例如pevonedistat(MLN4924))的组合可对癌症有效，可比任一单一治疗都有益，并因此可用于本文公开的方法中。此外，这些结果还证明了SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的组合、SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白与降甲基化剂/表观遗传调节剂(但不限于，例如阿扎胞苷、5-氮杂-2'-脱氧胞苷、辛二酰苯胺异羟肟酸(saha)、罗米地辛、贝利司他、帕比司他和西达本胺)和蛋白类泛素化修饰抑制剂(但不限于，例如pevonedistat(MLN4924))的组合可对癌症有效，可比单一治疗或双重治疗都有益，并因此可用于本文公开的方法中。
实施例17：化疗剂对SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的吞噬刺激活性的放大与CD47和/或促吞噬信号的诱导相关。
为了了解观察到的化疗剂对SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的吞噬刺激活性的增强的分子基础，研究了促吞噬信号和抗吞噬信号的表面表达。
简言之，将K652人慢性粒细胞白血病细胞在仅媒介物对照、1μM阿扎胞苷或1μMpevonedistat的存在下孵育过夜。第二天，通过流式细胞术对K652细胞分析CD47或钙网蛋白(CRT)的表面表达。如图11A所示，与仅用媒介物处理的K652细胞相比，阿扎胞苷和pevonedistat(MLN4924)都诱导了K652细胞中CD47的表达。这些结果证明了观察到的阿扎胞苷对SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的吞噬刺激活性的增强与CD47(SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的一种靶标)的诱导相关。
有趣的是，如图11C所示，与仅用媒介物处理的K652细胞相比，阿扎胞苷和pevonedistat(MLN4924)都诱导K652细胞中钙网蛋白(一种促吞噬标志物)的表达。这些结果证明了观察到的阿扎胞苷对SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的吞噬刺激活性的增强与钙网蛋白(一种促凋亡蛋白)的诱导相关。
在另一项实验中，Kasumi-3人急性髓细胞白血病(AML)细胞在仅媒介物对照、1μMpevonedistat(MLN4924)或1μM pevonedistat的存在下孵育过夜。第二天，通过流式细胞术对Kasumi-3细胞分析CD47或钙网蛋白(CRT)的表面表达。如图11B所示，与仅用媒介物处理的Kasumi-3细胞相比，pevonedistat(MLN4924)和pevonedistat(MLN4924)都诱导Kasumi-3细胞中CD47的表达。这些结果证明了所观察到的pevonedistat(MLN4924)对SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的吞噬刺激活性的增强与CD47(SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的一种靶标)的诱导相关。
进一步地，如图11D所示，与仅用媒介物处理的Kasumi-3细胞相比，pevonedistat(MLN4924)和pevonedistat(MLN4924)都诱导Kasumi-3细胞中钙网蛋白(一种促吞噬标志物)的表达。这些结果证明了所观察到的pevonedistat(MLN4924)对SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的吞噬刺激活性的增强与钙网蛋白(一种促凋亡蛋白)的诱导相关。
总的来说，这些结果证明了，观察到的化疗剂对SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的吞噬刺激活性的增强与CD47和/或促吞噬信号的诱导相关。因此，这些结果表明CD47和/或促吞噬信号的诱导可以用于预测对本文公开的疗法的反应的方法中或用于选择用于本文公开的疗法的患者的方法中。
实施例18：APR-246(突变p53的再激活剂)诱导p53和促吞噬信号。
为了了解所观察到的APR-246对SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的吞噬刺激活性的增强的分子基础，研究了p53的表面表达和抗吞噬信号。
简而言之，将Kasumi-1人急性髓细胞白血病(AML)细胞在仅媒介物对照、15μMAPR-246或50μM APR-246的存在下孵育过夜。第二天，通过流式细胞术对Kasumi-1细胞分析p53和钙网蛋白(CRT)的表面表达。如图12A所示，与仅媒介物处理的Kasumi-1细胞相比，APR-246引起Kasumi-1细胞中p53的表达产生剂量依赖性诱导。
有趣的是，如图12B所示，与仅媒介物处理的Kasumi-1细胞相比，APR-246诱导Kasumi-1细胞中钙网蛋白(一种促吞噬标志物)的表达。这些结果证明了观察到的阿扎胞苷对SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的吞噬刺激活性的增强与钙网蛋白(一种促凋亡蛋白)的诱导相关。
这些结果与前面的实施例一起证明了化疗剂诱导促吞噬信号。因此，这些结果表明，诱导促吞噬信号可以用于预测对本文公开的疗法的反应的方法中或用于选择用于本文公开的疗法的患者的方法中。。
实施例19：阿扎胞苷和维奈托克增加促凋亡标志物的表达并放大SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的吞噬刺激活性。
研究了凋亡标志物膜联蛋白3或促凋亡蛋白钙网蛋白(CRT)的表面表达。简而言之，Kasumi-3细胞在仅媒介物对照、增加量的阿扎胞苷或维奈托克、或阿扎胞苷和维奈托克的组合的存在下孵育过夜。第二天，通过流式细胞术对细胞分析膜联蛋白或钙网蛋白(CRT)的表面表达。如图14A所示，与仅用媒介物处理的Kasumi-3细胞相比，阿扎胞苷和维奈托克都以剂量依赖性方式诱导Kasumi-3细胞中膜联蛋白V的表达。此外，除了非常高浓度的阿扎胞苷和维奈托克(各100μM)之外，与相应的单一治疗相比，阿扎胞苷和维奈托克诱导的细胞凋亡不是累积的(图14A)。如图14B所示，与仅用媒介物处理的Kasumi-3细胞相比，阿扎胞苷和维奈托克均以剂量依赖性方式诱导Kasumi-3细胞中钙网蛋白的表达。此外，除了非常高浓度的阿扎胞苷和维奈托克(各100μM)之外，与相应的单一治疗相比，阿扎胞苷和维奈托克诱导的细胞凋亡不是累积的(图14B)。
这些结果尤其证明了阿扎胞苷和维奈托克都诱导Kasumi-3细胞中的细胞凋亡和促凋亡蛋白钙网蛋白。
确定了阿扎胞苷和/或维奈托克处理癌细胞对SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的吞噬刺激活性的影响。
简而言之，将Kasumi-3 AML细胞用绿色荧光追踪剂标记，并与人巨噬细胞共培养，并用(1)单独的媒介物对照、(2)50μg/ml SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白、(3)10μM阿扎胞苷、(4)50μg/ml SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白+10μM阿扎胞苷、(5)1μM维奈托克、(6)50μg/ml SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白+1μM维奈托克或(7)50μg/ml SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白+1μM维奈托克+10μM阿扎胞苷处理。将细胞在37℃、5％ CO2的存在下孵育4小时。这一孵育之后，收获细胞并用抗CD11b抗体(一种巨噬细胞标志物)处理，并使用流式细胞术进行分析。通过肿瘤(绿色荧光追踪剂)和巨噬细胞(抗CD11b抗体染色)信号的重叠确定阳性吞噬作用。通过将最大吞噬值设置为1，然后相应地标准化所有其他复式样品来计算吞噬指数。绘制所示处理的吞噬指数。如图14C所示，单用媒介物对照处理的Kasumi-3细胞在背景水平下被人巨噬细胞吞噬。与仅媒介物处理的Kasumi-3细胞相比，单用SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白(p<0.05)、单用阿扎胞苷(p<0.0001)或单用维奈托克(p<0.05)处理的Kasumi-3细胞表现出增加的吞噬水平(图14C)。如图14C所示，与仅媒介物处理的细胞(p<0.0001)、单用阿扎胞苷处理的细胞(p<0.05)或单用SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白处理的细胞(p<0.0001)相比，阿扎胞苷和SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的组合处理的细胞表现出增加的吞噬水平。进一步地，如图14C所示，与仅媒介物处理的细胞(p<0.0001)、单用维奈托克处理的细胞(p<0.05)或单用SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白处理的细胞(p<0.001)相比，维奈托克和SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的组合处理的细胞表现出增加的吞噬水平。有趣的是，如图14C所示，与仅媒介物处理的细胞(p<0.0001)、单用阿扎胞苷处理的细胞(p<0.001)、单用维奈托克处理的细胞(p<0.0001)或单用SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白处理的细胞(p<0.0001)、阿扎胞苷和SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的组合处理的细胞或维奈托克和SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的组合处理的细胞(p<0.001)相比，阿扎胞苷、维奈托克和SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白的组合处理的细胞表现出增加的吞噬水平。
这些结果证明了SIRPα-Fc-CD40L与阿扎胞苷、维奈托克的组合增强了肿瘤细胞的吞噬作用。因此，这些结果尤其表明，(1)与SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白和阿扎胞苷二者相比，采用SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白和阿扎胞苷的癌症联合疗法可产生更好的功效；(2)与SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白和维奈托克相比，采用SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白和维奈托克的癌症联合疗法可产生更好的功效，以及(3)与SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白、阿扎胞苷和维奈托克中的每一种相比，采用SIRPα-Fc-CD40L嵌合蛋白、阿扎胞苷和维奈托克的癌症联合疗法可产生更好的功效。
通过引用并入
本文提及的所有专利和出版物均通过引用以其整体并入本文。
本文讨论的出版物仅是为了它们在本申请的提交日期之前的公开内容而提供。本文中的任何内容均不应被解释为承认本公开无权凭借在先公开而早于此类出版物。
如本文所使用的，所有标题仅用于组织目的并且旨在不以任何方式限制本公开。任何个体部分的内容可能同样适用于所有部分。
等同方案
尽管已经结合其特定实施方案公开了本公开，但是应当理解，其能够进行进一步的修改，并且本申请旨在覆盖本公开的任何变化、用途或改编，其通常遵循本公开的原理并包括对本公开的偏离，这些偏离属于本公开所属领域内的已知或习惯实践，并且可以应用于上文所述的以及在所附权利要求的范围内如下所述的基本特征。
仅使用常规实验，本领域技术人员将认识到或能够确定本文具体公开的具体实施方案的许多等同方案。这些等同方案旨在包含在所附权利要求的范围内。
序列表
<110> 沙塔克实验室有限公司（Shattuck Labs, Inc.）
<120> 基于SIRPα的嵌合蛋白的联合疗法
<130> SHK-045PC/116981-5045
<150> US 63/308,304
<151> 2022-02-09
<150> US 63/157,324
<151> 2021-03-05
<160> 63
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 217
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成多肽
<400> 1
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Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
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<223> 合成多肽
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成多肽
<400> 14
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10
<210> 15
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成多肽
<400> 15
Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys
1 5 10 15
<210> 16
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成多肽
<400> 16
Glu Ala Ala Ala Arg Glu Ala Ala Ala Arg Glu Ala Ala Ala Arg Glu
1 5 10 15
Ala Ala Ala Arg
20
<210> 17
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成多肽
<400> 17
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala
1 5 10 15
Ser
<210> 18
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成多肽
<400> 18
Gly Gly Gly Gly Ala Gly Gly Gly Gly
1 5
<210> 19
<400> 19
000
<210> 20
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成多肽
<400> 20
Gly Ser Gly Ser Gly Ser
1 5
<210> 21
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成多肽
<400> 21
Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser
1 5 10
<210> 22
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成多肽
<400> 22
Gly Gly Gly Gly Ser Ala Ser
1 5
<210> 23
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成多肽
<400> 23
Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro
1 5 10 15
Ala Pro Ala Pro
20
<210> 24
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成多肽
<400> 24
Cys Pro Pro Cys
1
<210> 25
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成多肽
<400> 25
Gly Gly Gly Gly Ser
1 5
<210> 26
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成多肽
<400> 26
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10
<210> 27
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成多肽
<400> 27
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 28
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成多肽
<400> 28
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser
20
<210> 29
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成多肽
<400> 29
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
20 25
<210> 30
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成多肽
<400> 30
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
20 25 30
<210> 31
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成多肽
<400> 31
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Ser
35
<210> 32
<211> 40
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成多肽
<400> 32
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
35 40
<210> 33
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成多肽
<400> 33
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 34
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成多肽
<400> 34
Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly
1 5
<210> 35
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成多肽
<400> 35
Gly Gly Gly Gly Gly Gly
1 5
<210> 36
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成多肽
<400> 36
Glu Ala Ala Ala Lys
1 5
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<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成多肽
<400> 37
Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys
1 5 10
<210> 38
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成多肽
<400> 38
Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys
1 5 10 15
<210> 39
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成多肽
<400> 39
Ala Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Ala
1 5 10
<210> 40
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成多肽
<400> 40
Ala Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys
1 5 10 15
Ala
<210> 41
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成多肽
<400> 41
Ala Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys
1 5 10 15
Glu Ala Ala Ala Lys Ala
20
<210> 42
<211> 27
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成多肽
<400> 42
Ala Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys
1 5 10 15
Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Ala
20 25
<210> 43
<211> 46
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成多肽
<400> 43
Ala Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys
1 5 10 15
Glu Ala Ala Ala Lys Ala Leu Glu Ala Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala
20 25 30
Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Ala
35 40 45
<210> 44
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成多肽
<400> 44
Pro Ala Pro Ala Pro
1 5
<210> 45
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成多肽
<400> 45
Lys Glu Ser Gly Ser Val Ser Ser Glu Gln Leu Ala Gln Phe Arg Ser
1 5 10 15
Leu Asp
<210> 46
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成多肽
<400> 46
Gly Ser Ala Gly Ser Ala Ala Gly Ser Gly Glu Phe
1 5 10
<210> 47
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成多肽
<400> 47
Gly Gly Gly Ser Glu
1 5
<210> 48
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成多肽
<400> 48
Gly Ser Glu Ser Gly
1 5
<210> 49
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成多肽
<400> 49
Gly Ser Glu Gly Ser
1 5
<210> 50
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成多肽
<400> 50
Gly Glu Gly Gly Ser Gly Glu Gly Ser Ser Gly Glu Gly Ser Ser Ser
1 5 10 15
Glu Gly Gly Gly Ser Glu Gly Gly Gly Ser Glu Gly Gly Gly Ser Glu
20 25 30
Gly Gly Ser
35
<210> 51
<211> 234
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成多肽
<400> 51
Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu
1 5 10 15
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
20 25 30
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
35 40 45
Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
50 55 60
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr
65 70 75 80
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Ser
85 90 95
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Ser Lys Gly Leu Pro Ser Ser
100 105 110
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Asn Ala Thr Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
115 120 125
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
130 135 140
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
145 150 155 160
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
165 170 175
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr
180 185 190
Val Asp Lys Ser Ser Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
195 200 205
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
210 215 220
Ser Leu Gly Lys Ile Glu Gly Arg Met Asp
225 230
<210> 52
<211> 234
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成多肽
<400> 52
Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu
1 5 10 15
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Gln Leu
20 25 30
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
35 40 45
Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
50 55 60
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr
65 70 75 80
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Thr Pro His Ser Asp Trp Leu Ser
85 90 95
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Ser Lys Gly Leu Pro Ser Ser
100 105 110
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Asn Ala Thr Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
115 120 125
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
130 135 140
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
145 150 155 160
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
165 170 175
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr
180 185 190
Val Asp Lys Ser Ser Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
195 200 205
Leu His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
210 215 220
Ser Leu Gly Lys Ile Glu Gly Arg Met Asp
225 230
<210> 53
<211> 234
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成多肽
<400> 53
Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu
1 5 10 15
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Gln Leu
20 25 30
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
35 40 45
Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
50 55 60
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr
65 70 75 80
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Ser
85 90 95
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Ser Lys Gly Leu Pro Ser Ser
100 105 110
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Asn Ala Thr Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
115 120 125
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
130 135 140
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
145 150 155 160
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
165 170 175
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr
180 185 190
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
195 200 205
Leu His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
210 215 220
Ser Leu Gly Lys Ile Glu Gly Arg Met Asp
225 230
<210> 54
<211> 234
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成多肽
<400> 54
Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu
1 5 10 15
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
20 25 30
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
35 40 45
Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
50 55 60
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr
65 70 75 80
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Ser
85 90 95
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Ser Lys Gly Leu Pro Ser Ser
100 105 110
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Asn Ala Thr Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
115 120 125
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
130 135 140
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
145 150 155 160
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
165 170 175
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr
180 185 190
Val Asp Lys Ser Ser Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
195 200 205
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
210 215 220
Ser Leu Gly Lys Ile Glu Gly Arg Met Asp
225 230
<210> 55
<211> 234
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成多肽
<400> 55
Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu
1 5 10 15
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Gln Leu
20 25 30
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
35 40 45
Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
50 55 60
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr
65 70 75 80
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Thr Pro His Ser Asp Trp Leu Ser
85 90 95
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Ser Lys Gly Leu Pro Ser Ser
100 105 110
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Asn Ala Thr Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
115 120 125
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
130 135 140
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
145 150 155 160
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
165 170 175
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr
180 185 190
Val Asp Lys Ser Ser Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
195 200 205
Leu His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
210 215 220
Ser Leu Gly Lys Ile Glu Gly Arg Met Asp
225 230
<210> 56
<211> 234
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成多肽
<400> 56
Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu
1 5 10 15
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Gln Leu
20 25 30
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
35 40 45
Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
50 55 60
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr
65 70 75 80
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Ser
85 90 95
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Ser Lys Gly Leu Pro Ser Ser
100 105 110
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Asn Ala Thr Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
115 120 125
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
130 135 140
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
145 150 155 160
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
165 170 175
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr
180 185 190
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
195 200 205
Leu His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
210 215 220
Ser Leu Gly Lys Ile Glu Gly Arg Met Asp
225 230
<210> 57
<211> 343
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成序列
<400> 57
Glu Glu Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala
1 5 10 15
Ala Gly Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ala Thr Ser Leu Ile Pro
20 25 30
Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Glu Leu
35 40 45
Ile Tyr Asn Gln Lys Glu Gly His Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser
50 55 60
Asp Leu Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Asn
65 70 75 80
Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys
85 90 95
Gly Ser Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu
100 105 110
Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser Ala Pro Val Val Ser Gly Pro Ala Ala
115 120 125
Arg Ala Thr Pro Gln His Thr Val Ser Phe Thr Cys Glu Ser His Gly
130 135 140
Phe Ser Pro Arg Asp Ile Thr Leu Lys Trp Phe Lys Asn Gly Asn Glu
145 150 155 160
Leu Ser Asp Phe Gln Thr Asn Val Asp Pro Val Gly Glu Ser Val Ser
165 170 175
Tyr Ser Ile His Ser Thr Ala Lys Val Val Leu Thr Arg Glu Asp Val
180 185 190
His Ser Gln Val Ile Cys Glu Val Ala His Val Thr Leu Gln Gly Asp
195 200 205
Pro Leu Arg Gly Thr Ala Asn Leu Ser Glu Thr Ile Arg Val Pro Pro
210 215 220
Thr Leu Glu Val Thr Gln Gln Pro Val Arg Ala Glu Asn Gln Val Asn
225 230 235 240
Val Thr Cys Gln Val Arg Lys Phe Tyr Pro Gln Arg Leu Gln Leu Thr
245 250 255
Trp Leu Glu Asn Gly Asn Val Ser Arg Thr Glu Thr Ala Ser Thr Val
260 265 270
Thr Glu Asn Lys Asp Gly Thr Tyr Asn Trp Met Ser Trp Leu Leu Val
275 280 285
Asn Val Ser Ala His Arg Asp Asp Val Lys Leu Thr Cys Gln Val Glu
290 295 300
His Asp Gly Gln Pro Ala Val Ser Lys Ser His Asp Leu Lys Val Ser
305 310 315 320
Ala His Pro Lys Glu Gln Gly Ser Asn Thr Ala Ala Glu Asn Thr Gly
325 330 335
Ser Asn Glu Arg Asn Ile Tyr
340
<210> 58
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成序列
<400> 58
His Arg Arg Leu Asp Lys Ile Glu Asp Glu Arg Asn Leu His Glu Asp
1 5 10 15
Phe Val Phe Met Lys Thr Ile Gln Arg Cys Asn Thr Gly Glu Arg Ser
20 25 30
Leu Ser Leu Leu Asn Cys Glu Glu Ile Lys Ser Gln Phe Glu Gly Phe
35 40 45
Val Lys Asp Ile Met Leu Asn Lys Glu Glu Thr Lys Lys Glu Asn Ser
50 55 60
Phe Glu Met Gln Lys Gly Asp Gln Asn Pro Gln Ile Ala Ala His Val
65 70 75 80
Ile Ser Glu Ala Ser Ser Lys Thr Thr Ser Val Leu Gln Trp Ala Glu
85 90 95
Lys Gly Tyr Tyr Thr Met Ser Asn Asn Leu Val Thr Leu Glu Asn Gly
100 105 110
Lys Gln Leu Thr Val Lys Arg Gln Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln
115 120 125
Val Thr Phe Cys Ser Asn Arg Glu Ala Ser Ser Gln Ala Pro Phe Ile
130 135 140
Ala Ser Leu Cys Leu Lys Ser Pro Gly Arg Phe Glu Arg Ile Leu Leu
145 150 155 160
Arg Ala Ala Asn Thr His Ser Ser Ala Lys Pro Cys Gly Gln Gln Ser
165 170 175
Ile His Leu Gly Gly Val Phe Glu Leu Gln Pro Gly Ala Ser Val Phe
180 185 190
Val Asn Val Thr Asp Pro Ser Gln Val Ser His Gly Thr Gly Phe Thr
195 200 205
Ser Phe Gly Leu Leu Lys Leu
210 215
<210> 59
<211> 133
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成序列
<400> 59
Gln Val Ser His Arg Tyr Pro Arg Ile Gln Ser Ile Lys Val Gln Phe
1 5 10 15
Thr Glu Tyr Lys Lys Glu Lys Gly Phe Ile Leu Thr Ser Gln Lys Glu
20 25 30
Asp Glu Ile Met Lys Val Gln Asn Asn Ser Val Ile Ile Asn Cys Asp
35 40 45
Gly Phe Tyr Leu Ile Ser Leu Lys Gly Tyr Phe Ser Gln Glu Val Asn
50 55 60
Ile Ser Leu His Tyr Gln Lys Asp Glu Glu Pro Leu Phe Gln Leu Lys
65 70 75 80
Lys Val Arg Ser Val Asn Ser Leu Met Val Ala Ser Leu Thr Tyr Lys
85 90 95
Asp Lys Val Tyr Leu Asn Val Thr Thr Asp Asn Thr Ser Leu Asp Asp
100 105 110
Phe His Val Asn Gly Gly Glu Leu Ile Leu Ile His Gln Asn Pro Gly
115 120 125
Glu Phe Cys Val Leu
130
<210> 60
<211> 792
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成序列
<400> 60
Glu Glu Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala
1 5 10 15
Ala Gly Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ala Thr Ser Leu Ile Pro
20 25 30
Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Glu Leu
35 40 45
Ile Tyr Asn Gln Lys Glu Gly His Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser
50 55 60
Asp Leu Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Asn
65 70 75 80
Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys
85 90 95
Gly Ser Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu
100 105 110
Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser Ala Pro Val Val Ser Gly Pro Ala Ala
115 120 125
Arg Ala Thr Pro Gln His Thr Val Ser Phe Thr Cys Glu Ser His Gly
130 135 140
Phe Ser Pro Arg Asp Ile Thr Leu Lys Trp Phe Lys Asn Gly Asn Glu
145 150 155 160
Leu Ser Asp Phe Gln Thr Asn Val Asp Pro Val Gly Glu Ser Val Ser
165 170 175
Tyr Ser Ile His Ser Thr Ala Lys Val Val Leu Thr Arg Glu Asp Val
180 185 190
His Ser Gln Val Ile Cys Glu Val Ala His Val Thr Leu Gln Gly Asp
195 200 205
Pro Leu Arg Gly Thr Ala Asn Leu Ser Glu Thr Ile Arg Val Pro Pro
210 215 220
Thr Leu Glu Val Thr Gln Gln Pro Val Arg Ala Glu Asn Gln Val Asn
225 230 235 240
Val Thr Cys Gln Val Arg Lys Phe Tyr Pro Gln Arg Leu Gln Leu Thr
245 250 255
Trp Leu Glu Asn Gly Asn Val Ser Arg Thr Glu Thr Ala Ser Thr Val
260 265 270
Thr Glu Asn Lys Asp Gly Thr Tyr Asn Trp Met Ser Trp Leu Leu Val
275 280 285
Asn Val Ser Ala His Arg Asp Asp Val Lys Leu Thr Cys Gln Val Glu
290 295 300
His Asp Gly Gln Pro Ala Val Ser Lys Ser His Asp Leu Lys Val Ser
305 310 315 320
Ala His Pro Lys Glu Gln Gly Ser Asn Thr Ala Ala Glu Asn Thr Gly
325 330 335
Ser Asn Glu Arg Asn Ile Tyr Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro
340 345 350
Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
355 360 365
Pro Lys Pro Lys Asp Gln Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
370 375 380
Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn
385 390 395 400
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
405 410 415
Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
420 425 430
Leu His Gln Asp Trp Leu Ser Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
435 440 445
Ser Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Asn Ala Thr
450 455 460
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu
465 470 475 480
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
485 490 495
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
500 505 510
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
515 520 525
Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly
530 535 540
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
545 550 555 560
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Ile Glu Gly Arg Met
565 570 575
Asp His Arg Arg Leu Asp Lys Ile Glu Asp Glu Arg Asn Leu His Glu
580 585 590
Asp Phe Val Phe Met Lys Thr Ile Gln Arg Cys Asn Thr Gly Glu Arg
595 600 605
Ser Leu Ser Leu Leu Asn Cys Glu Glu Ile Lys Ser Gln Phe Glu Gly
610 615 620
Phe Val Lys Asp Ile Met Leu Asn Lys Glu Glu Thr Lys Lys Glu Asn
625 630 635 640
Ser Phe Glu Met Gln Lys Gly Asp Gln Asn Pro Gln Ile Ala Ala His
645 650 655
Val Ile Ser Glu Ala Ser Ser Lys Thr Thr Ser Val Leu Gln Trp Ala
660 665 670
Glu Lys Gly Tyr Tyr Thr Met Ser Asn Asn Leu Val Thr Leu Glu Asn
675 680 685
Gly Lys Gln Leu Thr Val Lys Arg Gln Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala
690 695 700
Gln Val Thr Phe Cys Ser Asn Arg Glu Ala Ser Ser Gln Ala Pro Phe
705 710 715 720
Ile Ala Ser Leu Cys Leu Lys Ser Pro Gly Arg Phe Glu Arg Ile Leu
725 730 735
Leu Arg Ala Ala Asn Thr His Ser Ser Ala Lys Pro Cys Gly Gln Gln
740 745 750
Ser Ile His Leu Gly Gly Val Phe Glu Leu Gln Pro Gly Ala Ser Val
755 760 765
Phe Val Asn Val Thr Asp Pro Ser Gln Val Ser His Gly Thr Gly Phe
770 775 780
Thr Ser Phe Gly Leu Leu Lys Leu
785 790
<210> 61
<211> 710
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成序列
<400> 61
Glu Glu Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala
1 5 10 15
Ala Gly Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ala Thr Ser Leu Ile Pro
20 25 30
Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Glu Leu
35 40 45
Ile Tyr Asn Gln Lys Glu Gly His Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser
50 55 60
Asp Leu Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Asn
65 70 75 80
Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys
85 90 95
Gly Ser Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu
100 105 110
Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser Ala Pro Val Val Ser Gly Pro Ala Ala
115 120 125
Arg Ala Thr Pro Gln His Thr Val Ser Phe Thr Cys Glu Ser His Gly
130 135 140
Phe Ser Pro Arg Asp Ile Thr Leu Lys Trp Phe Lys Asn Gly Asn Glu
145 150 155 160
Leu Ser Asp Phe Gln Thr Asn Val Asp Pro Val Gly Glu Ser Val Ser
165 170 175
Tyr Ser Ile His Ser Thr Ala Lys Val Val Leu Thr Arg Glu Asp Val
180 185 190
His Ser Gln Val Ile Cys Glu Val Ala His Val Thr Leu Gln Gly Asp
195 200 205
Pro Leu Arg Gly Thr Ala Asn Leu Ser Glu Thr Ile Arg Val Pro Pro
210 215 220
Thr Leu Glu Val Thr Gln Gln Pro Val Arg Ala Glu Asn Gln Val Asn
225 230 235 240
Val Thr Cys Gln Val Arg Lys Phe Tyr Pro Gln Arg Leu Gln Leu Thr
245 250 255
Trp Leu Glu Asn Gly Asn Val Ser Arg Thr Glu Thr Ala Ser Thr Val
260 265 270
Thr Glu Asn Lys Asp Gly Thr Tyr Asn Trp Met Ser Trp Leu Leu Val
275 280 285
Asn Val Ser Ala His Arg Asp Asp Val Lys Leu Thr Cys Gln Val Glu
290 295 300
His Asp Gly Gln Pro Ala Val Ser Lys Ser His Asp Leu Lys Val Ser
305 310 315 320
Ala His Pro Lys Glu Gln Gly Ser Asn Thr Ala Ala Glu Asn Thr Gly
325 330 335
Ser Asn Glu Arg Asn Ile Tyr Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro
340 345 350
Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
355 360 365
Pro Lys Pro Lys Asp Gln Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
370 375 380
Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn
385 390 395 400
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
405 410 415
Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
420 425 430
Leu His Gln Asp Trp Leu Ser Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
435 440 445
Ser Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Asn Ala Thr
450 455 460
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu
465 470 475 480
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
485 490 495
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
500 505 510
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
515 520 525
Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly
530 535 540
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
545 550 555 560
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Ile Glu Gly Arg Met
565 570 575
Asp Gln Val Ser His Arg Tyr Pro Arg Ile Gln Ser Ile Lys Val Gln
580 585 590
Phe Thr Glu Tyr Lys Lys Glu Lys Gly Phe Ile Leu Thr Ser Gln Lys
595 600 605
Glu Asp Glu Ile Met Lys Val Gln Asn Asn Ser Val Ile Ile Asn Cys
610 615 620
Asp Gly Phe Tyr Leu Ile Ser Leu Lys Gly Tyr Phe Ser Gln Glu Val
625 630 635 640
Asn Ile Ser Leu His Tyr Gln Lys Asp Glu Glu Pro Leu Phe Gln Leu
645 650 655
Lys Lys Val Arg Ser Val Asn Ser Leu Met Val Ala Ser Leu Thr Tyr
660 665 670
Lys Asp Lys Val Tyr Leu Asn Val Thr Thr Asp Asn Thr Ser Leu Asp
675 680 685
Asp Phe His Val Asn Gly Gly Glu Leu Ile Leu Ile His Gln Asn Pro
690 695 700
Gly Glu Phe Cys Val Leu
705 710
<210> 62
<211> 182
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成多肽
<400> 62
Leu Gln Leu His Trp Arg Leu Gly Glu Met Val Thr Arg Leu Pro Asp
1 5 10 15
Gly Pro Ala Gly Ser Trp Glu Gln Leu Ile Gln Glu Arg Arg Ser His
20 25 30
Glu Val Asn Pro Ala Ala His Leu Thr Gly Ala Asn Ser Ser Leu Thr
35 40 45
Gly Ser Gly Gly Pro Leu Leu Trp Glu Thr Gln Leu Gly Leu Ala Phe
50 55 60
Leu Arg Gly Leu Ser Tyr His Asp Gly Ala Leu Val Val Thr Lys Ala
65 70 75 80
Gly Tyr Tyr Tyr Ile Tyr Ser Lys Val Gln Leu Gly Gly Val Gly Cys
85 90 95
Pro Leu Gly Leu Ala Ser Thr Ile Thr His Gly Leu Tyr Lys Arg Thr
100 105 110
Pro Arg Tyr Pro Glu Glu Leu Glu Leu Leu Val Ser Gln Gln Ser Pro
115 120 125
Cys Gly Arg Ala Thr Ser Ser Ser Arg Val Trp Trp Asp Ser Ser Phe
130 135 140
Leu Gly Gly Val Val His Leu Glu Ala Gly Glu Lys Val Val Val Arg
145 150 155 160
Val Leu Asp Glu Arg Leu Val Arg Leu Arg Asp Gly Thr Arg Ser Tyr
165 170 175
Phe Gly Ala Phe Met Val
180
<210> 63
<211> 759
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 合成多肽
<400> 63
Glu Glu Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala
1 5 10 15
Ala Gly Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ala Thr Ser Leu Ile Pro
20 25 30
Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Glu Leu
35 40 45
Ile Tyr Asn Gln Lys Glu Gly His Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser
50 55 60
Asp Leu Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Asn
65 70 75 80
Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys
85 90 95
Gly Ser Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu
100 105 110
Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser Ala Pro Val Val Ser Gly Pro Ala Ala
115 120 125
Arg Ala Thr Pro Gln His Thr Val Ser Phe Thr Cys Glu Ser His Gly
130 135 140
Phe Ser Pro Arg Asp Ile Thr Leu Lys Trp Phe Lys Asn Gly Asn Glu
145 150 155 160
Leu Ser Asp Phe Gln Thr Asn Val Asp Pro Val Gly Glu Ser Val Ser
165 170 175
Tyr Ser Ile His Ser Thr Ala Lys Val Val Leu Thr Arg Glu Asp Val
180 185 190
His Ser Gln Val Ile Cys Glu Val Ala His Val Thr Leu Gln Gly Asp
195 200 205
Pro Leu Arg Gly Thr Ala Asn Leu Ser Glu Thr Ile Arg Val Pro Pro
210 215 220
Thr Leu Glu Val Thr Gln Gln Pro Val Arg Ala Glu Asn Gln Val Asn
225 230 235 240
Val Thr Cys Gln Val Arg Lys Phe Tyr Pro Gln Arg Leu Gln Leu Thr
245 250 255
Trp Leu Glu Asn Gly Asn Val Ser Arg Thr Glu Thr Ala Ser Thr Val
260 265 270
Thr Glu Asn Lys Asp Gly Thr Tyr Asn Trp Met Ser Trp Leu Leu Val
275 280 285
Asn Val Ser Ala His Arg Asp Asp Val Lys Leu Thr Cys Gln Val Glu
290 295 300
His Asp Gly Gln Pro Ala Val Ser Lys Ser His Asp Leu Lys Val Ser
305 310 315 320
Ala His Pro Lys Glu Gln Gly Ser Asn Thr Ala Ala Glu Asn Thr Gly
325 330 335
Ser Asn Glu Arg Asn Ile Tyr Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro
340 345 350
Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
355 360 365
Pro Lys Pro Lys Asp Gln Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
370 375 380
Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn
385 390 395 400
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
405 410 415
Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
420 425 430
Leu His Gln Asp Trp Leu Ser Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
435 440 445
Ser Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Asn Ala Thr
450 455 460
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu
465 470 475 480
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
485 490 495
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
500 505 510
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
515 520 525
Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly
530 535 540
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
545 550 555 560
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Ile Glu Gly Arg Met
565 570 575
Asp Leu Gln Leu His Trp Arg Leu Gly Glu Met Val Thr Arg Leu Pro
580 585 590
Asp Gly Pro Ala Gly Ser Trp Glu Gln Leu Ile Gln Glu Arg Arg Ser
595 600 605
His Glu Val Asn Pro Ala Ala His Leu Thr Gly Ala Asn Ser Ser Leu
610 615 620
Thr Gly Ser Gly Gly Pro Leu Leu Trp Glu Thr Gln Leu Gly Leu Ala
625 630 635 640
Phe Leu Arg Gly Leu Ser Tyr His Asp Gly Ala Leu Val Val Thr Lys
645 650 655
Ala Gly Tyr Tyr Tyr Ile Tyr Ser Lys Val Gln Leu Gly Gly Val Gly
660 665 670
Cys Pro Leu Gly Leu Ala Ser Thr Ile Thr His Gly Leu Tyr Lys Arg
675 680 685
Thr Pro Arg Tyr Pro Glu Glu Leu Glu Leu Leu Val Ser Gln Gln Ser
690 695 700
Pro Cys Gly Arg Ala Thr Ser Ser Ser Arg Val Trp Trp Asp Ser Ser
705 710 715 720
Phe Leu Gly Gly Val Val His Leu Glu Ala Gly Glu Lys Val Val Val
725 730 735
Arg Val Leu Asp Glu Arg Leu Val Arg Leu Arg Asp Gly Thr Arg Ser
740 745 750
Tyr Phe Gly Ala Phe Met Val
755

Claims (82)

1.一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：
向受试者施用包含异源嵌合蛋白的第一药物组合物，所述异源嵌合蛋白包含：
(a)第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，
(b)第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，和
(c)连接第一结构域和第二结构域的接头；和
向受试者施用包含抗癌剂的第二药物组合物，所述抗癌剂选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体，或其组合。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一药物组合物和所述第二药物组合物同时施用。
3.根据权利要求1所述的方法，其中在施用所述第二药物组合物之后施用所述第一药物组合物。
4.根据权利要求1所述的方法，其中在施用所述第二药物组合物之前施用所述第一药物组合物。
5.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述第一药物组合物的剂量小于向尚未接受或未正在接受所述第二药物组合物治疗的受试者施用的第一药物组合物的剂量。
6.根据权利要求1、2或4中任一项所述的方法，其中施用的第二药物组合物的剂量小于向尚未接受或未正在接受所述第一药物组合物治疗的受试者施用的第二药物组合物的剂量。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中当与仅接受过或仅正在接受所述第一药物组合物治疗的受试者相比时，所述受试者的生存机会增加，没有胃肠道炎症和体重减轻，和/或肿瘤大小或癌症患病率降低。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中当与仅接受过或仅正在接受所述第二药物组合物治疗的受试者相比时，所述受试者的生存机会增加，没有胃肠道炎症和体重减轻，和/或肿瘤大小或癌症患病率降低。
9.一种治疗受试者的癌症的方法，其包括：
向受试者施用包含异源嵌合蛋白的药物组合物，所述异源嵌合蛋白包含：
(a)第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，
(b)第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，和
(c)连接第一结构域和第二结构域的接头；
其中所述受试者已经接受或正在接受包含抗癌剂的第二药物组合物的治疗，所述抗癌剂选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体，或其组合。
10.根据权利要求9所述的方法，其中向所述受试者施用的药物组合物的剂量小于向尚未接受或未正在接受所述第二药物组合物治疗的受试者施用的药物组合物的剂量。
11.一种治疗受试者的癌症的方法，其包括：
向受试者施用包含抗癌剂的第二药物组合物，所述抗癌剂选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体，或其组合；
其中所述受试者已经接受或正在接受异源嵌合蛋白的治疗，所述异源嵌合蛋白包含：
(a)第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，
(b)第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，和
(c)连接第一结构域和第二结构域的接头。
12.根据权利要求11所述的方法，其中向所述受试者提供的药物组合物的剂量小于向尚未接受或未正在接受所述异源嵌合蛋白治疗的受试者提供的药物组合物的剂量。
13.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述第二药物组合物包含降甲基化剂/表观遗传调节剂。
14.根据权利要求13所述的方法，其中所述降甲基化剂/表观遗传调节剂选自阿扎胞苷、5-氮杂-2'-脱氧胞苷、辛二酰苯胺异羟肟酸(saha)、罗米地辛、贝利司他、帕比司他和西达本胺。
15.根据权利要求14所述的方法，其中所述降甲基化剂/表观遗传调节剂是阿扎胞苷。
16.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述第二药物组合物包含蛋白酶体抑制剂。
17.根据权利要求16所述的方法，其中所述蛋白酶体抑制剂选自硼替佐米、卡非佐米和伊沙佐米。
18.根据权利要求17所述的方法，其中所述蛋白酶体抑制剂是硼替佐米。
19.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述第二药物组合物包含抗代谢物。
20.根据权利要求19所述的方法，其中所述抗代谢物选自5-氟尿嘧啶(5-FU)、卡培他滨、氟尿苷、阿糖胞苷(ARA-C)、吉西他滨、地西他滨和维达扎。
21.根据权利要求20所述的方法，其中所述抗代谢物是阿糖胞苷(ARA-C)。
22.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述第二药物组合物包含DNA合成抑制剂。
23.根据权利要求22所述的方法，其中所述DNA合成抑制剂选自5-氟尿嘧啶(5-FU)、卡培他滨、氟尿苷、阿糖胞苷(ARA-C)、吉西他滨、地西他滨和维达扎。
24.根据权利要求23所述的方法，其中所述DNA合成抑制剂是阿糖胞苷(ARA-C)或5-氟尿嘧啶(5-FU)。
25.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述第二药物组合物包含免疫检查点抑制剂。
26.根据权利要求25所述的方法，其中所述免疫检查点抑制剂包含抑制选自CTLA-4、PD-1和PD-L1的途径的药剂。
27.根据权利要求26所述的方法，其中所述免疫检查点抑制剂包括抗PD-L1抗体。
28.根据权利要求27所述的方法，其中所述抗PD-L1抗体选自阿特珠单抗、度伐鲁单抗、阿维单抗、恩沃利单抗、BMS-936559、CK-301、CS-1001、SHR-1316(HTI-1088)、CBT-502(TQB-2450)和BGB-A333。
29.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述第二药物组合物包含蒽环素。
30.根据权利要求29所述的方法，其中所述蒽环素选自柔红霉素、多柔比星、表柔比星、伊达比星、米托蒽醌和戊柔比星。
31.根据权利要求30所述的方法，其中所述蒽环素是多柔比星。
32.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述第二药物组合物包含拓扑异构酶II抑制剂。
33.根据权利要求32所述的方法，其中所述拓扑异构酶II抑制剂选自多柔比星、表柔比星、戊柔比星、柔红霉素、伊达比星、pitoxantrone、匹杉琼、依托泊苷、替尼泊苷和安吖啶。
34.根据权利要求33所述的方法，其中所述拓扑异构酶II抑制剂是多柔比星。
35.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述第二药物组合物包含Bcl2抑制剂。
36.根据权利要求35所述的方法，其中所述Bcl2抑制剂选自奥利默森、纳维托克(ABT-263)、维奈托克(ABT-199)、奥巴克拉甲磺酸盐(GX15-070)和AT-101。
37.根据权利要求36所述的方法，其中所述Bcl2抑制剂是维奈托克。
38.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述第二药物组合物包含蛋白类泛素化修饰抑制剂。
39.根据权利要求38所述的方法，其中所述蛋白类泛素化修饰抑制剂是pevonedistat(MLN4924)。
40.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述第二药物组合物包含微管靶向剂。
41.根据权利要求40所述的方法，其中所述微管靶向剂选自紫杉醇、埃博霉素、多西他赛、圆皮海绵内酯、长春花碱、长春新碱、长春瑞滨、长春氟宁、尾海兔素、软海绵素、哈米特林和隐花素52。
42.根据权利要求41所述的方法，其中所述微管靶向剂是紫杉醇。
43.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述第二药物组合物包含胸苷酸合酶(TS)抑制剂。
44.根据权利要求43所述的方法，其中所述胸苷酸合酶(TS)抑制剂选自5-氟尿嘧啶(5-FU)、6-巯基嘌呤(6-MP)、卡培他滨、阿糖胞苷、氟尿苷、氟达拉滨、吉西他滨、羟基脲、甲氨蝶呤、培美曲塞、光氨蝶呤、雷替曲塞、诺拉曲塞、ZD9331和GS7904L。
45.根据权利要求44所述的方法，其中所述胸苷酸合酶(TS)抑制剂是5-氟尿嘧啶(5-FU)。
46.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述第二药物组合物包含铂类药物。
47.根据权利要求46所述的方法，其中所述铂类药物选自顺铂、卡铂、奥沙利铂、奈达铂、庚铂和洛铂。
48.根据权利要求47所述的方法，其中所述铂类药物是顺铂。
49.根据权利要求47所述的方法，其中所述铂类药物是奥沙利铂。
50.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述第二药物组合物包含拓扑异构酶I抑制剂。
51.根据权利要求50所述的方法，其中所述拓扑异构酶I抑制剂选自喜树碱、贝洛替康、拓扑替康和伊立替康。
52.根据权利要求50所述的方法，其中所述拓扑异构酶I抑制剂是伊立替康。
53.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述第二药物组合物包含抗BCMA抗体。
54.根据权利要求53所述的方法，其中所述抗BCMA抗体是C12A3.2。
55.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述第二药物组合物包含抗CD38抗体。
56.根据权利要求55所述的方法，其中所述抗CD38抗体选自达雷木单抗和伊沙妥昔单抗。
57.根据权利要求56所述的方法，其中所述抗CD38抗体是达雷木单抗。
58.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述第二药物组合物包含免疫调节酰亚胺药物(IMiD)。
59.根据权利要求58所述的方法，其中所述免疫调节酰亚胺药物(IMiD)选自阿普斯特、沙利度胺、来那度胺和泊马度胺。
60.根据权利要求59所述的方法，其中所述免疫调节酰亚胺药物(IMiD)是来那度胺或泊马度胺。
61.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述第二药物组合物包含抗SLAMF7抗体。
62.根据权利要求61所述的方法，其中所述抗SLAMF7抗体是依托珠单抗。
63.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述第二药物组合物包含抗CD123抗体。
64.根据权利要求63所述的方法，其中所述抗CD123抗体是塔妥珠单抗。
65.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述第二药物组合物包含突变p53的再激活剂。
66.根据权利要求65所述的方法，其中所述突变p53的再激活剂是Prima-1或APR-246。
67.根据权利要求66所述的方法，其中所述突变p53的再激活剂是APR-246。
68.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述第二药物组合物包含抗FOLR1抗体，任选地，其中所述抗FOLR1抗体选自法妥组单抗和米妥昔单抗。
69.根据权利要求68所述的方法，其中所述抗FOLR1抗体是法妥组单抗。
70.根据权利要求1至69中任一项所述的方法，其中所述异源嵌合蛋白包含：包含SIRPα(CD172a)的基本上整个胞外结构域的第一结构域和/或包含CD40L、OX40L或LIGHT的基本上整个胞外结构域的第二结构域。
71.根据权利要求1至70中任一项所述的方法，其中所述异源嵌合蛋白包含：
(a)包含SIRPα(CD172a)的一部分的第一结构域，
(b)包含CD40L、OX40L或LIGHT的一部分的第二结构域，和
(c)包含铰链-CH2-CH3 Fc结构域的接头。
72.根据权利要求1至71中任一项所述的方法，其中所述接头是选自柔性氨基酸序列、IgG铰链区和抗体序列的多肽。
73.根据权利要求1至71中任一项所述的方法，其中所述接头包含能够形成二硫键的至少一个半胱氨酸残基和/或包含铰链-CH2-CH3 Fc结构域。
74.根据权利要求73所述的方法，其中所述接头包含源自IgG1或IgG4如人IgG4或人IgG4的铰链-CH2-CH3 Fc结构域。
75.根据权利要求74所述的方法，其中所述接头包含与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3的氨基酸序列至少95％同一的氨基酸序列。
76.根据权利要求1至75中任一项所述的方法，其中所述第一结构域包含与SEQ ID NO:57的氨基酸序列至少90％、或至少93％、至少95％、或至少96％、或至少98％、或至少99％同一的氨基酸序列。
77.根据权利要求1至76中任一项所述的方法，其中所述第二结构域包含与SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59或SEQ ID NO:62的氨基酸序列至少90％、或至少93％、至少95％、或至少96％、或至少98％、或至少99％同一的氨基酸序列。
78.根据权利要求77所述的方法，其中所述第二结构域包含与SEQ ID NO:58的氨基酸序列至少90％、或至少93％、至少95％、或至少96％、或至少98％、或至少99％同一的氨基酸序列。
79.根据权利要求1至77中任一项所述的方法，其中所述异源嵌合蛋白包含与SEQ IDNO:60、SEQ ID NO:61或SEQ ID NO:63的氨基酸序列至少90％、或至少93％、至少95％、或至少96％、或至少98％、或至少99％同一的氨基酸序列。
80.根据权利要求78或权利要求79所述的方法，其中所述异源嵌合蛋白包含与SEQ IDNO:60的氨基酸序列至少90％、或至少93％、至少95％、或至少96％、或至少98％、或至少99％同一的氨基酸序列。
81.根据权利要求1至80中任一项所述的方法，其中所述癌症是以下癌症或与之相关：基底细胞癌、胆道癌；膀胱癌；骨癌；脑和中枢神经系统癌症；乳腺癌；腹膜癌；宫颈癌；绒毛膜癌；结肠和直肠癌；结缔组织癌；消化系统癌症；子宫内膜癌；食道癌；眼癌；头颈癌；胃癌(包括消化道癌)；胶质母细胞瘤；肝细胞癌；肝细胞瘤；上皮内肿瘤；肾脏癌或肾癌；喉癌；白血病；肝癌；肺癌(例如，小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌和肺鳞癌)；黑色素瘤；骨髓瘤；成神经细胞瘤；口腔癌(唇、舌、口和咽)；卵巢癌；胰腺癌；前列腺癌；视网膜母细胞瘤；横纹肌肉瘤；直肠癌；呼吸系统癌症；唾液腺癌；肉瘤；皮肤癌；鳞状细胞癌；胃癌；睾丸癌；甲状腺癌；子宫癌或子宫内膜癌；泌尿系统癌症；外阴癌；淋巴瘤，包括霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤，以及B细胞淋巴瘤(包括低级/滤泡性非霍奇金淋巴瘤(NHL)；小淋巴细胞(SL)NHL；中级/滤泡性NHL；中级弥漫性NHL；高级免疫母细胞NHL；高级淋巴母细胞NHL；高级小非裂解细胞性NHL；巨大肿块疾病NHL；套细胞淋巴瘤；AIDS相关淋巴瘤；和瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症；慢性淋巴细胞白血病(CLL)；急性成淋巴细胞白血病(ALL)；毛细胞白血病；慢性成髓细胞白血病；以及其他癌和肉瘤；和移植后淋巴增殖性疾病(PTLD)，以及与斑痣性错构瘤病、水肿(例如与脑肿瘤相关的水肿)、梅格斯综合征相关的异常血管增生。
82.一种用于治疗癌症的药物，所述药物包含第一药物组合物和第二药物组合物，其中所述第一药物组合物和所述第二药物组合物同时或顺序地联合施用，
其中所述第一药物组合物包含异源嵌合蛋白，所述异源嵌合蛋白包含：
(a)第一结构域，其包含SIRPα(CD172a)的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合SIRPα(CD172a)配体，
(b)第二结构域，其包含CD40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合CD40L受体；OX40L的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合OX40L受体；或LIGHT的胞外结构域的一部分，其中该部分能够结合LIGHT受体，和
(c)连接第一结构域和第二结构域的接头；并且
其中所述第二药物组合物包含抗癌剂，所述抗癌剂选自降甲基化剂/表观遗传调节剂、蛋白酶体抑制剂、抗代谢物、DNA合成抑制剂、免疫检查点抑制剂、蒽环素、拓扑异构酶II抑制剂、先天免疫检查点抑制剂、Bcl2抑制剂、蛋白类泛素化修饰抑制剂、微管靶向剂、胸苷酸合酶(TS)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶I抑制剂、抗BCMA抗体、抗CD38抗体、免疫调节酰亚胺药物(IMiD)、抗SLAMF7抗体、抗CD123抗体、突变p53的再激活剂和抗FOLR1抗体，或其组合。
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