CN117327172A - 血红蛋白的稳定化方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及血红蛋白的稳定化方法。一个方式中，提供能够在溶液中稳定地保存血红蛋白的新方法。作为一个方式，本发明涉及一种用于使溶液中的血红蛋白稳定的方法，其包括使乙酰丙酮和尿酸中的至少一者在包含血红蛋白的溶液中共存的步骤。
Description
技术领域
本发明涉及溶液中的血红蛋白的稳定化方法。
背景技术
以生物试样为检体的检体检查的测定值对于健康状态的把握、疾病的诊断和治疗而言是重要的指标。因此，为了确保测定值的可靠性，检查系统的质量控制是必要的。作为质量控制中使用的质控品试剂，利用包含生物试样中成分、其模拟物质的质控品试剂。另外，对于质控品试剂，需要经时变化少、稳定性高的试剂，正在研究实现稳定化的方法(日本专利第6514190号和日本特开2003-14768号公报)。
日本专利第6514190号公开了将尿中的测定对象物中的不稳定的物质冷冻干燥、将稳定的物质在溶液中保存的质量控制用试剂盒。日本特开2003-14768号公报公开了：为了血红蛋白的稳定化而利用2-酮戊二酸等。
发明内容
本发明提供能够在溶液中稳定地保存血红蛋白的新方法、血红蛋白溶液的用于测定生物试样的血红蛋白的应用和能够稳定地保存血红蛋白的含有血红蛋白的保存溶液。
作为一个方式，本发明涉及用于使溶液中的血红蛋白稳定的方法，其包括使乙酰丙酮和尿酸中的至少一者在包含血红蛋白的溶液中共存的步骤。
作为另一个方式，本发明涉及血红蛋白溶液的用于测定生物试样的血红蛋白的应用，其包括下述步骤：进行作为血红蛋白测定的质控品或校准品的、前述血红蛋白溶液的血红蛋白的测定；以及进行生物试样中的血红蛋白的测定，前述血红蛋白溶液为将血红蛋白与乙酰丙酮和尿酸中的至少一者混合而制备、并在制备后经过一定期间后的血红蛋白溶液。
作为另一个方式，本发明涉及血红蛋白的保存溶液，其包含血红蛋白以及乙酰丙酮和尿酸中的至少一者。
根据本发明，在一个方式中，可以提供能够稳定地保存溶液中的血红蛋白的方法、血红蛋白溶液的用于测定生物试样的血红蛋白的应用和含有血红蛋白的保存溶液。
附图说明
图1为示出将血红蛋白在溶液中在30℃下保存13天后的血红蛋白的稳定性确认试验的结果的一例的图。
图2为示出将血红蛋白在溶液中在30℃下保存27天后的血红蛋白的稳定性确认试验的结果的一例的图。
具体实施方式
作为检体检查中的测定方法，有将液态试剂和生物试样混合并进行测定的方法、使用在滤纸等中包含试剂并使其干燥而得的干试纸进行测定的方法。使用试纸的测定由于操作简便和能够同时对多个项目进行测定等原因，作为筛选检查而广泛进行。进行检体检查时，虽然频率根据设施而不同，但是使用质控品试剂的质量控制至少一天会进行一次。作为质控品试剂，有液态的质控品试剂和用时制备的冷冻干燥粉末的质控品试剂。
在冷冻干燥粉末的质控品试剂的情况下，存在需要用时制备、因此操作变得繁杂的问题。另外，在液态的质控品试剂的情况下，需要稳定地保存质控品试剂中包含的成分(例如测定项目)。
作为生物试样、例如尿、便、血液或唾液等的测定项目之一，有血红蛋白(潜血、BLD)。因此，使用包含血红蛋白的质控品试剂。但是，血红蛋白在溶液中保存稳定性低，例如会因保存温度之类的保存条件而发生变性，根据情况有时会分解。其结果是，血红蛋白的立体结构有时会遭到破坏，可能产生质控品试剂不能正确地作为质量控制发挥作用的问题。
鉴于上述问题，本发明提供能够在含有血红蛋白的溶液、例如用于实施生物试样的检体检查的质量控制的质量控制试剂溶液中稳定地保存血红蛋白的方法。作为本发明中的生物试样的检体检查，在一个或多个实施方式中，可列举尿检查、血液检查、便检查和唾液检查等。作为生物试样，在一个或多个实施方式中，可列举尿、便、血液和唾液、以及来自这些的检体等。作为生物试样，在一个或多个实施方式中，可列举来自人的检体和来自人以外的哺乳动物的检体等。
本发明人发现，通过使乙酰丙酮和尿酸中的至少一者在包含血红蛋白的溶液中共存，能够提高溶液中的血红蛋白的保存稳定性。根据本发明，在一个或多个实施方式中，能够实现在包含血红蛋白的溶液中稳定地保存血红蛋白(例如人血红蛋白)。
尿酸是pKa为5.75的弱酸。因此，在生理pH(7.40)下，约98％的尿酸以解离型(离子化)尿酸(尿酸盐(urate))被观察到，如果pH变得低于5.75，则尿酸中非解离型尿酸(尿酸(uric acid))占优势。本发明中，“尿酸”可包括尿酸盐(urate)和尿酸(uric acid)。
本发明中的“包含血红蛋白的溶液(血红蛋白溶液)”在一个或多个实施方式中是指血红蛋白的浓度为0.06mg/dL～2.0mg/dL的溶液。溶液中的血红蛋白的浓度在一个或多个实施方式中可以为0.1mg/dL以上、0.5mg/dL以上、0.7mg/dL以上、0.8mg/dL以上、0.9mg/dL以上或1mg/dL以上。溶液中的血红蛋白的浓度在一个或多个实施方式中可以为2mg/dL以下、1.9mg/dL以下、1.8mg/dL以下或1.7mg/dL以下。溶液中的血红蛋白的浓度在一个或多个实施方式中可以通过血红蛋白接触活性法、氰化高铁血红蛋白法、或利用血红蛋白抗体的免疫学检测法等进行测定。
本发明中，作为“能够稳定地保存血红蛋白”，在一个或多个实施方式中可列举血红蛋白的过氧化物酶(POD)活性得到维持。血红蛋白的POD活性在一个或多个实施方式中可以通过测定试纸的BLD垫的反射率(波长570～660nm)来进行确认。作为试纸，在一个或多个实施方式中可列举AUTION Sticks 10PA(商品名、爱科来株式会社制)等尿试纸。
作为“能够稳定地保存血红蛋白”，在一个或多个实施方式中可列举：包含血红蛋白的溶液的刚制备后与该溶液的保存后的血红蛋白的测定值的差值(的绝对值)(保存后-刚制备后)小。作为血红蛋白的测定值，在一个或多个实施方式中可列举尿试纸的BLD垫的反射率(波长570～660nm)。本发明中，“刚制备后”是指向包含血红蛋白的溶液中添加乙酰丙酮和尿酸中的至少一者起(混合乙酰丙酮和尿酸的情况下，添加乙酰丙酮和尿酸这两者起)60分钟以内。
作为“能够稳定地保存血红蛋白”，在一个或多个实施方式中可列举：在尿试纸的BLD垫的反射率(波长570～660nm)中，包含血红蛋白的溶液的刚制备后的反射率Rbef与在30℃下保存13天后的反射率Raft13的差值(ΔR＝Raft13-Rbef)为50以下、45以下、25以下、20以下、15以下、10以下、8以下、7以下、5以下或4以下。
另外，作为“能够稳定地保存血红蛋白”，在一个或多个实施方式中可列举：在尿试纸的BLD垫的反射率(波长570～660nm)中，包含血红蛋白的溶液的刚制备后的反射率Rbef与在30℃下保存27天后的反射率Raft27的差值(ΔR＝Raft27-Rbef)为80以下、70以下、55以下、50以下、45以下、40以下、35以下或30以下。
反射率的测定可以通过实施例中记载的方法来进行。
[稳定化方法]
一个方式中，本发明涉及用于使溶液中的血红蛋白稳定的方法(以下也称为“本发明的方法”)，其包括使乙酰丙酮和尿酸中的至少一者在包含血红蛋白的溶液中共存的步骤。本发明的方法在一个或多个实施方式中可以优选用于提高质量控制试剂溶液中的血红蛋白的稳定化。因此，本发明中的包含血红蛋白的溶液在一个或多个实施方式中为质量控制试剂溶液。作为本发明中的质量控制试剂溶液，在一个或多个实施方式中可列举尿检查用质控品试剂、血液检查用质控品试剂、便检查用质控品试剂和唾液检查用质控品试剂等。
从进一步提高血红蛋白的稳定性的观点出发，在一个或多个实施方式中，优选包括使乙酰丙酮和尿酸这两者在包含血红蛋白的溶液中共存的步骤。
作为溶液中的乙酰丙酮的浓度，在一个或多个实施方式中为10mg/dL～200mg/dL。从进一步提高血红蛋白的稳定性的观点出发，在一个或多个实施方式中，溶液中的乙酰丙酮的浓度为20mg/dL以上、30mg/dL以上、40mg/dL以上、50mg/dL以上、60mg/dL以上、70mg/dL以上、80mg/dL以上、90mg/dL以上、或100mg/dL以上。从同样的观点出发，在一个或多个实施方式中，为190mg/dL以下或180mg/dL以下。
作为溶液中的尿酸的浓度，在一个或多个实施方式中为1mg/dL～20mg/dL。从进一步提高血红蛋白的的稳定性的观点出发，在一个或多个实施方式中，溶液中的尿酸的浓度为2mg/dL以上、3mg/dL以上、4mg/dL以上、5mg/dL以上、6mg/dL以上、7mg/dL以上、8mg/dL以上、9mg/dL以上、或10mg/dL以上。从同样的观点出发，在一个或多个实施方式中，为19mg/dL以下或18mg/dL以下。
本发明中使用的“尿酸”可以为尿酸盐，也可以为尿酸本身。作为尿酸盐，在一个或多个实施方式中可列举尿酸单钠。
从进一步提高血红蛋白的稳定性的观点出发，在一个或多个实施方式中，本发明的方法优选包括以溶液中的乙酰丙酮的浓度为10mg/dL～200mg/dL且溶液中的尿酸的浓度为1mg/dL～20mg/dL的方式使乙酰丙酮和尿酸在包含血红蛋白的溶液中共存的步骤，更优选以更优选乙酰丙酮的浓度为40mg/dL～120mg/dL且尿酸的浓度为5mg/dL～15mg/dL的方式共存。虽然没有特别限定，但是在一个或多个实施方式中，可列举以乙酰丙酮的浓度为约50mg/dL且尿酸的浓度为约10mg/dL的方式、或以乙酰丙酮的浓度为约100mg/dL且尿酸的浓度为约10mg/dL的方式使乙酰丙酮和尿酸在包含血红蛋白的溶液中共存。
根据本发明的方法，在一个或多个实施方式中，可以在8℃下在溶液中以稳定的状态保存血红蛋白1个月以上，进而，可以在8℃下在溶液中稳定地保存血红蛋白6个月以上、8个月以上、10个月以上或12个月以上。因此，本发明的方法在一个或多个实施方式中包括将包含血红蛋白以及乙酰丙酮和尿酸中的至少一者的溶液保存一定期间的步骤。在本发明的方法中，作为保存一定期间，在一个或多个实施方式中可列举在8℃下保存5天以上、10天以上、11天以上、12天以上、13天以上、14天以上、15天以上、16天以上、17天以上、18天以上、19天以上、20天以上、1个月以上、6个月以上、8个月以上、10个月以上或12个月以上。
根据本发明的方法，在一个或多个实施方式中，可以在30℃下在溶液中以稳定的状态保存血红蛋白10天以上，进而可以在30℃下在溶液中稳定地保存血红蛋白15天以上、20天以上或25天以上。根据本发明的方法，在一个或多个实施方式中，可以在20℃下在溶液中以稳定的状态保存血红蛋白1.5个月以上，进而可以在20℃下在溶液中稳定地保存血红蛋白2个月以上、2.5个月以上或3个月以上。另外，根据本发明的方法，在一个或多个实施方式中，可以在4℃下在溶液中以稳定的状态保存血红蛋白13个月以上，进而，可以在4℃下在溶液中稳定地保存血红蛋白15个月以上、20个月以上、25个月以上或27个月以上。
因此，在本发明的方法中，作为保存一定期间这一特征的其它方式，在一个或多个实施方式中，可以为在30℃下保存5天以上、6天以上、7天以上、8天以上、9天以上、10天以上、15天以上、20天以上或25天以上，可以为在20℃下保存15天以上、1个月以上、1.5个月以上、2个月以上、2.5个月以上或3个月以上，或者，可以为在4℃下保存1个月以上、2个月以上、3个月以上、4个月以上、6个月以上、10个月以上、12个月以上、13个月以上、15个月以上、20个月以上、25个月以上或27个月以上。
本发明中，保存可包括输送和/或保管。
包含血红蛋白的溶液在一个或多个实施方式中可包含缓冲剂。作为缓冲剂，在一个或多个实施方式中，可列举磷酸、N,N-双(2-羟乙基)甘氨酸(Bicine)、N,N-双(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸(BES)、3-吗啉代丙磺酸(MOPS)、N-三(羟甲基)甲基-2-氨基乙磺酸(TES)、2-[4-(2-羟乙基)-1-哌嗪基]乙磺酸(HEPES)、N-[三(羟甲基)甲基]甘氨酸(TRICINE)、哌嗪-1,4-双(2-乙磺酸)(PIPES)和哌嗪-1,4-双(2-羟基-3-丙磺酸)无水物(POPSO)等。
本发明中，包含血红蛋白的溶液在一个或多个实施方式中不包含生物体尿。作为生物体尿，在一个或多个实施方式中可列举人尿等。
包含血红蛋白的溶液的pH在一个或多个实施方式中为7～9。本发明中的包含血红蛋白的溶液的pH为25℃下的值，可以使用pH计进行测定。具体而言，可以通过实施例中记载的方法来测定。
包含血红蛋白的溶液在一个或多个实施方式中可以包含血红蛋白以外的成分。作为血红蛋白以外的成分，在一个或多个实施方式中可列举肌酐、葡萄糖、白蛋白、弹性蛋白酶、甘氨酸、甲基氯异噻唑啉酮、2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮、叠氮化钠、亚硝酸钠、硫酸庆大霉素、妥布霉素、尿素、氯化钠和氯化钾等。作为白蛋白，在一个或多个实施方式中可列举牛血清白蛋白和人血清白蛋白等。
作为血红蛋白以外的成分的一例，可列举氯化钠、尿素、肌酐和氯化钾的组合。作为血红蛋白以外的成分的其它组合的例子，可列举肌酐、葡萄糖、白蛋白和弹性蛋白酶的组合。含有这些组合的配方(包含血红蛋白的溶液)在一个或多个实施方式中不仅可用作血红蛋白质控品试剂，还可用作葡萄糖、蛋白质、肌酐、亚硝酸盐和/或白细胞的质控品试剂。
包含血红蛋白的溶液在一个或多个实施方式中可以包含磷酸缓冲液以及选自由肌酐、葡萄糖、白蛋白、弹性蛋白酶、甘氨酸、甲基氯异噻唑啉酮、2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮、叠氮化钠、亚硝酸钠、硫酸庆大霉素、妥布霉素、尿素、氯化钠和氯化钾等组成的组中的至少1种或2种以上。
[保存溶液]
作为另一方式，本发明涉及血红蛋白的保存溶液。本发明的保存溶液包含血红蛋白以及乙酰丙酮和尿酸中的至少一者。本发明中，“血红蛋白的保存溶液”是指用于保存该溶液中的血红蛋白的含有血红蛋白的溶液，在一个或多个实施方式中，是指可用作质控品或校准品的、用于稳定地保存血红蛋白的或能够稳定地保存血红蛋白的、含有血红蛋白的溶液。
本发明的保存溶液在一个或多个实施方式中可以优选用于提高质量控制试剂溶液之类的质控品试剂中的血红蛋白的稳定化。因此，本发明的保存溶液在一个或多个实施方式中可以用作质控品或校准品，优选可以用作用于尿检查、血液检查、便检查或唾液检查的质控品。
本发明的保存溶液中的乙酰丙酮的浓度、尿酸的浓度、缓冲剂、pH和其它成分等与上述本发明的方法同样。
本发明的保存溶液在一个或多个实施方式中可以通过将血红蛋白与乙酰丙酮和/或尿酸、以及根据需要的上述其它成分混合而制造。因此，作为另一个方式，本发明涉及血红蛋白的保存溶液的制造方法，其包括将血红蛋白与乙酰丙酮和/或尿酸、以及根据需要的上述其它成分混合的步骤。本发明的制造方法在一个或多个实施方式中包括以使溶液中的乙酰丙酮和/或尿酸的浓度达到上述范围的方式进行调整的步骤。本发明的制造方法在一个或多个实施方式中可以包括将制备的血红蛋白的保存溶液保存一定期间的步骤。
[血红蛋白的检查方法]
另一方式中，本发明涉及测定生物试样的血红蛋白的方法，其包括下述步骤：进行作为血红蛋白测定的质控品或校准品的、预先制备的血红蛋白溶液的血红蛋白的测定；以及进行生物试样中的血红蛋白的测定，前述预先制备的血红蛋白溶液为将血红蛋白与乙酰丙酮和尿酸中的至少一者混合而制备、并在制备后经过一定期间后的血红蛋白溶液。
另一个方式中，本发明涉及血红蛋白溶液的用于测定生物试样的血红蛋白的应用，其包括下述步骤：进行作为血红蛋白测定的质控品或校准品的、前述血红蛋白溶液的血红蛋白的测定；以及进行生物试样中的血红蛋白的测定，前述血红蛋白溶液为将血红蛋白与乙酰丙酮和尿酸中的至少一者混合而制备、并在制备后经过一定期间后的血红蛋白溶液。
作为这些方式中使用的血红蛋白溶液，可使用通过本发明的方法而稳定保存的血红蛋白溶液。
本发明中，作为生物试样的血红蛋白的检查方法或测定方法，没有特别限定，在一个或多个实施方式中，可列举使生物试样或者用作质控品或校准品的上述血红蛋白溶液与检测试剂接触、并且对接触后的显色进行光学分析的方法等。在一个或多个实施方式中，生物试样和/或血红蛋白溶液与检测试剂的接触可通过将生物试样或血红蛋白溶液与检测试剂混合、以及将生物试样或血红蛋白溶液供于血红蛋白测定用试验片和/或血红蛋白测定用干试纸来进行。
作为光学分析，在一个或多个实施方式中，可列举光谱化学分析等，所述光谱化学分析包括使用光谱仪等从分析对象物的透射光、反射光或散射光中获取分析对象物相关信息的步骤。作为光学分析的结果，在一个或多个实施方式中，可得到期望波长下的血红蛋白的吸光度、透射率或反射率等。作为一例，可以将如下操作作为光学分析：检测与试样接触后的检测试剂的透射光、反射光或散射光，由检测到的光计算出检测试剂的吸光度、透射率或反射率等表示光学特征的值。需要说明的是，光学分析的形式不限于这些。其它的使用光学方法和/或分光法的测定也包括在光学分析中。
作为对显色进行光学分析，在一个或多个实施方式中可列举：对于生物试样或血红蛋白溶液与检测试剂的混合液进行光学分析和对于血红蛋白测定用干试纸的试剂垫进行光学分析等，但可以不限于这些形式，可采取现有公知的形式。另外，本说明书中，“显色”可包括从无色开始发色而形成的颜色、和从其它颜色发生颜色转变而形成的颜色。
光学分析可以使用市售的光学分析装置来进行。另外，作为光学分析装置，在一个或多个实施方式中，可列举AUTION MAX(注册商标)(爱科来株式会社制)。
本发明可涉及以下的非限定性的一个或多个实施方式。
[A1]一种用于使溶液中的血红蛋白稳定的方法，其包括使乙酰丙酮和尿酸中的至少一者在包含前述血红蛋白的溶液中共存的步骤。
[A2]根据[A1]所述的方法，其中，前述溶液为质量控制试剂溶液。
[A3]根据[A1]或[A2]所述的方法，其中，前述溶液中的乙酰丙酮的浓度为10mg/dL～200mg/dL。
[A4]根据[A1]至[A3]中任一项所述的方法，其中，前述溶液中的尿酸的浓度为1mg/dL～20mg/dL。
[A5]根据[A1]至[A4]中任一项所述的方法，其中，包括使乙酰丙酮和尿酸在前述溶液中共存的步骤。
[A6]根据[A1]至[A5]中任一项所述的方法，其中，前述溶液中的乙酰丙酮的浓度为10mg/dL～200mg/dL，和/或前述溶液中的尿酸的浓度为1mg/dL～20mg/dL。
[A7]根据[A1]至[A6]中任一项所述的方法，其中，前述溶液还包含磷酸缓冲液。
[A8]根据[A1]至[A7]中任一项所述的方法，其中，前述溶液的pH为7～9。
[A9]根据[A1]至[A8]中任一项所述的方法，其包括下述步骤：将包含前述血红蛋白以及乙酰丙酮和尿酸中的至少一者的溶液保存一定期间。
[A10]根据[A1]至[A9]中任一项所述的方法，其中，前述溶液还包含选自由肌酐、葡萄糖、白蛋白、弹性蛋白酶和亚硝酸钠组成的组中的至少一种。
[A11]根据[A1]至[A10]中任一项所述的方法，其中，前述溶液不含生物体尿。
[A12]一种血红蛋白的保存溶液，其包含血红蛋白以及乙酰丙酮和尿酸中的至少一者。
[A13]根据[A12]所述的保存溶液，其中，前述溶液为质量控制试剂溶液。
[A14]根据[A12]或[A13]所述的保存溶液，其中，前述溶液包含血红蛋白、乙酰丙酮和尿酸。
[A15]根据[A12]至[A14]中任一项所述的保存溶液，其中，前述溶液中的乙酰丙酮的浓度为10mg/dL～200mg/dL。
[A16]根据[A12]至[A15]中任一项所述的保存溶液，其中，前述溶液中的尿酸的浓度为1mg/dL～20mg/dL。
[A17]根据[A12]至[A16]中任一项所述的保存溶液，其中，前述溶液中的乙酰丙酮的浓度为10mg/dL～200mg/dL，和/或前述溶液中的尿酸的浓度为1mg/dL～20mg/dL。
[A18]根据[A12]至[A17]中任一项所述的保存溶液，其中，前述溶液还包含磷酸缓冲液、和/或
选自由肌酐、葡萄糖、白蛋白、弹性蛋白酶和亚硝酸钠组成的组中的至少一种。
[A19]根据[A12]至[A18]中任一项所述的保存溶液，其用作尿检查用质控品。
[B1]一种用于使溶液中的血红蛋白稳定的方法，其包括下述步骤：
将血红蛋白与乙酰丙酮和尿酸中的至少一者混合而制备血红蛋白溶液；以及
将前述血红蛋白溶液保存一定期间。
[B2]根据[B1]所述的方法，其中，前述血红蛋白溶液中的乙酰丙酮的浓度为10mg/dL～200mg/dL。
[B3]根据[B1]或[B2]所述的方法，其中，前述血红蛋白溶液中的尿酸的浓度为1mg/dL～20mg/dL。
[B4]根据[B1]至[B3]中任一项所述的方法，其中，前述血红蛋白溶液包含血红蛋白、乙酰丙酮和尿酸。
[B5]根据[B1]至[B4]中任一项所述的方法，其中，前述血红蛋白溶液中的乙酰丙酮的浓度为10mg/dL～200mg/dL，和/或前述血红蛋白溶液中的尿酸的浓度为1mg/dL～20mg/dL。
[B6]根据[B1]至[B5]中任一项所述的方法，其中，前述血红蛋白溶液还包含磷酸缓冲液。
[B7]根据[B1]至[B6]中任一项所述的方法，其中，前述血红蛋白溶液的pH为7～9。
[B8]根据[B1]至[B7]中任一项所述的方法，其包括下述步骤：将前述血红蛋白溶液输送到远方。
[B9]根据[B1]至[B8]中任一项所述的方法，其中，还包括下述步骤：向前述血红蛋白溶液中混合选自由肌酐、葡萄糖、白蛋白、弹性蛋白酶和亚硝酸钠组成的组中的至少一种。
[B10]根据[B1]至[B9]中任一项所述的方法，其中，前述血红蛋白溶液不含生物体尿。
[B11]根据[B1]至[B10]中任一项所述的方法，其中，前述血红蛋白溶液中的血红蛋白的浓度为0.06mg/dL～2.0mg/dL。
[B12]一种校准品的制造方法，所述校准品用于管理生物试样中的血红蛋白检查的精度，
所述制造方法包括将血红蛋白与乙酰丙酮和尿酸中的至少一者混合而制备前述校准品的步骤。
[B13]根据[B12]所述的方法，其中，包括以前述乙酰丙酮的浓度达到10mg/dL～200mg/dL的方式将前述乙酰丙酮与前述血红蛋白混合的步骤。
[B14]根据[B12]或[B13]所述的方法，其中，包括以前述尿酸的浓度达到1mg/dL～20mg/dL的方式将前述尿酸与前述血红蛋白混合的步骤。
[B15]根据[B12]至[B14]中任一项所述的方法，其中，包括以乙酰丙酮的浓度达到10mg/dL～200mg/dL且尿酸的浓度达到1mg/dL～20mg/dL的方式将前述血红蛋白与前述乙酰丙酮与前述尿酸混合的步骤。
[B16]根据[B12]至[B15]中任一项所述的方法，其中，还包括向前述校准品中混合磷酸缓冲液、和/或选自由肌酐、葡萄糖、白蛋白、弹性蛋白酶和亚硝酸钠组成的组中的至少一种的步骤。
[B17]根据[B12]至[B16]中任一项所述的方法，其中，包括将前述制备的校准品保存一定期间的步骤。
[B18]一种测定生物试样的血红蛋白的方法，其包括下述步骤：
进行作为前述生物试样的血红蛋白测定的质控品或校准品的、预先制备的血红蛋白溶液的血红蛋白的测定；以及
进行生物试样中的血红蛋白的测定，
前述预先制备的血红蛋白溶液为将血红蛋白与乙酰丙酮和尿酸中的至少一者混合而制备、并在制备后经过一定期间后的血红蛋白溶液。
[B19]一种测定生物试样的血红蛋白的方法，其包括下述步骤：
进行用于使血红蛋白溶液中的血红蛋白稳定化的处理；
使用进行了前述稳定化处理的血红蛋白溶液进行分析装置或试剂的质量控制；以及
使用进行了前述质量控制的分析装置或试剂来进行生物试样中的血红蛋白的测定，
用于使前述血红蛋白稳定化的处理包括将血红蛋白与乙酰丙酮与尿酸混合的步骤。
[B20]根据[B19]所述的方法，其中，前述混合包括以乙酰丙酮的浓度为10mg/dL～200mg/dL、尿酸的浓度为1mg/dL～20mg/dL、且血红蛋白的浓度达到0.06mg/dL～2.0mg/dL的方式将前述血红蛋白与前述乙酰丙酮与前述尿酸混合的步骤。
[C1]血红蛋白溶液的用于测定生物试样的血红蛋白的应用，其包括下述步骤：
进行作为前述生物试样的血红蛋白测定的质控品或校准品的、前述血红蛋白溶液的血红蛋白的测定；以及
进行生物试样中的血红蛋白的测定，
前述血红蛋白溶液为将血红蛋白与乙酰丙酮和尿酸中的至少一者混合而制备、并在制备后经过一定期间后的血红蛋白溶液。
[C2]根据[C1]所述的应用，其中，前述血红蛋白溶液包含血红蛋白、乙酰丙酮和尿酸。
[C3]根据[C1]或[C2]所述的应用，其中，前述血红蛋白溶液中的乙酰丙酮的浓度为10mg/dL～200mg/dL。
[C4]根据[C1]至[C3]中任一项所述的应用，其中，前述血红蛋白溶液中的尿酸的浓度为1mg/dL～20mg/dL。
[C5]根据[C1]至[C4]中任一项所述的应用，其中，前述血红蛋白溶液还包含磷酸缓冲液、和/或
选自由肌酐、葡萄糖、白蛋白、弹性蛋白酶和亚硝酸钠组成的组中的至少一种。
[C6]根据[C1]至[C5]中任一项所述的应用，其中，前述血红蛋白溶液中的血红蛋白的浓度为0.06mg/dL～2.0mg/dL。
以下，通过实施例进一步详细地说明本发明，但是这些为例示性的，本发明不受这些实施例限制。
实施例
[含有血红蛋白的溶液的制备]
将下述储备溶液按照下述的配合量配合，用纯化水混合至总量为100mL，制备如下述＜含有血红蛋白的溶液＞中所示组成的含有血红蛋白的溶液。各实施例和比较例的含有血红蛋白的溶液中的尿酸单钠和乙酰丙酮的浓度如下述表1和2所示。
＜储备溶液和配合量＞
125mM磷酸缓冲液80mL
5000mg/dL肌酐4.4mL
150mg/dL尿酸单钠0、0.67或6.7mL
5000mg/dL葡萄糖0.8mL
8000mg/dL BSA 2.5mL
100mg/dL人血红蛋白1.5mL
8000mg/dL乙酰丙酮0、0.63或1.25mL
50mg/dL亚硝酸钠0.8mL
50mg/dL弹性蛋白酶0.8mL
＜含有血红蛋白的溶液＞
100mM磷酸缓冲液
220mg/dL肌酐
0、1或10mg/dL尿酸单钠
400mg/dL葡萄糖
200mg/dL BSA
1.5mg/dL人血红蛋白
0、50或100mg/dL乙酰丙酮
0.4mg/dL亚硝酸钠
0.4mg/dL弹性蛋白酶
pH：8
上述pH为使用pH计(株式会社堀场制作所制)测定的含有血红蛋白的溶液的25℃下的值，是将pH计的电极在测定对象溶液中浸渍1分钟后的值。
[稳定性确认试验]
确认通过下述步骤制备的含有血红蛋白的溶液的稳定性。
(1)如上所述地制备含有血红蛋白的溶液，在制备起30分钟后，将本公司的尿试纸(商品名：AUTION Sticks 10PA、爱科来株式会社制)浸渍于前述含有血红蛋白的溶液中，用AUTION MAX AX-4060(测定波长：635nm)测定BLD试验垫的反射率(Rbef)(％)(血红蛋白测定值)(N＝6)。
(2)与(1)的测定并行地，将制备的含有血红蛋白的溶液在30℃下保存13天或27天。
(3)在(2)的保存后，与(1)同样地测定本公司的尿试纸(商品名：AUTION Sticks10PA、爱科来株式会社制)的BLD试验垫的反射率(Raft13或Raft27)(％)(N＝6)。
(4)计算出(3)与(1)的测定结果的反射率的差值(ΔR＝[保管后值((3)的反射率：Raft13或Raft27)]-[初始值((1)的反射率：Rbef)])。
将得到的结果示于下述表1和2以及图1和2。
需要说明的是，测定中使用的尿试纸的BLD试验垫利用如下反应：通过血红蛋白接触活性法，试纸利用血红蛋白所具有的过氧化物酶(POD)样作用而发生变色。BLD试验垫包含作为过氧化物的过氧化氢异丙苯(CHP)和作为色原体的3,3’,5,5’-四甲基联苯胺(TMBZ)。使包含血红蛋白(Hb)的试样与BLD试验垫接触时，利用Hb的POD样作用，试验垫中的过氧化氢异丙苯分解而产生氧，该氧将3,3’,5,5’-四甲基联苯胺的还原型氧化而变为氧化型TMBZ(有颜色)，从而引起显色。由此，试验垫根据试样中的Hb而着色，能够测定试样中的Hb浓度。
另外，在30℃下13天或27天的保存分别相当于在8℃保存时的6.5个月或13.5个月(基于阿伦尼乌斯分析的推论)。
[表1]
[表2]
表1和图1示出保存13天时的稳定性确认试验结果的一例，表2和图2示出保存27天时的稳定性确认试验结果的一例。图1和图2均为示出将比较例1或2(不含尿酸单钠和乙酰丙酮的含有血红蛋白的溶液)的反射率的差值(ΔR)设为1时的相对值(反射率的变化率)的图。
如表1所示，在30℃下保存13天时，实施例1～8(含有乙酰丙酮和/或尿酸单钠)中的与初始值的差值均为50以下，因此可以说血红蛋白的POD活性得到维持、能够稳定地保存。
如图1所示，在30℃下保存13天时，实施例1～8(含有乙酰丙酮和/或尿酸单钠)的相对值(变化率)小于0.7，均能够稳定地保存血红蛋白。其中，含有乙酰丙酮和尿酸单钠两者的实施例5～8中为0.17以下，特别是，含有乙酰丙酮和10mg/dL的尿酸单钠的实施例6和8的相对值(变化率)为0.06以下，能够极其稳定地保存血红蛋白。
如表2所示，在30℃下保存27天时，实施例9～12(含有乙酰丙酮和/或尿酸单钠)中的与初始值的差值均为55以下，因此可以说血红蛋白的POD活性得到维持、能够稳定地保存。
如图2所示，在30℃下保存27天时，实施例9～12的相对值(变化率)也均为0.6以下，均能够稳定地保存血红蛋白。特别是，含有乙酰丙酮和10mg/dL的尿酸单钠的实施例10和12的相对值(变化率)为0.33以下。即，即使是在30℃下保存27天时，也与在30℃下保存13天时同样，通过含有乙酰丙酮和/或尿酸单钠而能够稳定地保存血红蛋白。
Claims (15)
1.一种用于使溶液中的血红蛋白稳定的方法，其包括使乙酰丙酮和尿酸中的至少一者在包含所述血红蛋白的溶液中共存的步骤。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述溶液中的乙酰丙酮的浓度为10mg/dL～200mg/dL。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述溶液中的尿酸的浓度为1mg/dL～20mg/dL。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其包括使乙酰丙酮、尿酸和血红蛋白在所述溶液中共存的步骤。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中，所述溶液还包含磷酸缓冲液。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中，所述溶液的pH为7～9。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其包括下述步骤：将包含所述血红蛋白以及乙酰丙酮和尿酸中的至少一者的溶液保存一定期间。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中，所述溶液还包含选自由肌酐、葡萄糖、白蛋白、弹性蛋白酶和亚硝酸钠组成的组中的至少一种。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中，所述溶液不含人尿。
10.血红蛋白溶液在制造生物试样的血红蛋白测定的质控品或校准品中的应用，其中，
所述血红蛋白溶液为将血红蛋白与乙酰丙酮和尿酸中的至少一者混合而制备、并在制备后经过一定期间后的血红蛋白溶液。
11.根据权利要求10所述的应用，其中，所述血红蛋白溶液包含血红蛋白、乙酰丙酮和尿酸。
12.根据权利要求10或11所述的应用，其中，所述血红蛋白溶液中的乙酰丙酮的浓度为10mg/dL～200mg/dL。
13.根据权利要求10至12中任一项所述的应用，其中，所述血红蛋白溶液中的尿酸的浓度为1mg/dL～20mg/dL。
14.根据权利要求10至13中任一项所述的应用，其中，所述血红蛋白溶液还包含磷酸缓冲液和/或
选自由肌酐、葡萄糖、白蛋白、弹性蛋白酶和亚硝酸钠组成的组中的至少一种。
15.根据权利要求10至14中任一项所述的应用，其中，所述血红蛋白溶液中的血红蛋白的浓度为0.06mg/dL～2.0mg/dL。
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