CN117257966A - 用于肺部选择性递送核酸的类脂质分子、类脂质纳米颗粒及其制备方法和应用 - Google Patents
用于肺部选择性递送核酸的类脂质分子、类脂质纳米颗粒及其制备方法和应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供一种用于肺部选择性递送核酸的类脂质分子、类脂质纳米颗粒及其制备方法和应用。本发明类脂质分子是由聚乙烯亚胺与环氧烃类加成所得，制备方法简单，成本低；其类脂质纳米颗粒可特异性地递送核酸至肺部并发挥效用，具有优异的转染效率，且具有良好的生物安全性；且对肝部无明显转染效果。
Description
技术领域
本发明涉及用于肺部选择性递送核酸的类脂质分子、类脂质纳米颗粒及其制备方法和应用，属于生物医药领域。
背景技术
核酸作为一种新型生物技术药物，能够从基因层面调控蛋白表达，可用于治疗癌症、病毒感染性疾病、遗传性疾病等多种疾病。与传统的化学小分子药物和抗体药物相比，核酸具有特异性强、作用范围广、设计方便、不易产生耐药性等优势，因此在生物医疗领域具有广阔的应用前景。然而，核酸药物在体内外递送时面临诸多屏障。例如，核酸分子量较大、负电性极强导致其不易通过细胞膜进入细胞；核酸易激活机体内的免疫系统导致其被快速清除；经跨膜转运进入细胞后滞留在内涵体-溶酶体系统中，利用率低。因此，开发递送技术将核酸药物安全高效地输送至特定靶器官和靶细胞至关重要。
近年来，非病毒递送载体受到广泛关注，尤其是脂质/类脂质纳米颗粒(LNP)在核酸药物递送方面取得了重大进展。目前已有三款基于LNP递送系统的核酸药物获得美国食品和药物管理局(FDA)批准上市：siRNA药物Onpattro用于治疗遗传性转甲状腺淀粉样蛋白介导的淀粉样变性引起的多发神经性病变；mRNA疫苗Spikevax；mRNA疫苗Comiranty。尽管如此，绝大部分核酸递送系统在全身给药后主要在肝脏和脾脏中聚集，这导致基于核酸技术的应用主要局限于肝脏相关疾病。因此，特异性递送核酸药物至肝脏以外器官是目前递送系统面临的重要挑战之一。
目前，已有研究通过在LNP表面修饰生物靶向分子(肽段、抗体或蛋白质)或者在LNP传统组分基础上添加辅助组分(永久阳离子脂质或永久阴离子脂质)实现核酸药物的器官选择性递送。然而，这种设计策略会使药物配方复杂化，可能会对药物生产过程产生不利影响。因此，在维持原配方要素不变的基础上实现递送载体的器官选择性至关重要。
发明内容
为解决当前核酸递送系统经全身给药后难以实现特异性器官聚集并发挥效用的难题，本发明提供了用于肺部选择性递送核酸的类脂质分子、类脂质纳米颗粒及其制备方法和应用。本发明类脂质分子是由聚乙烯亚胺与环氧烃类加成所得，制备方法简单，成本低；其类脂质纳米颗粒可特异性地递送核酸至肺部并发挥效用，具有优异的转染效率，且具有良好的生物安全性。
本发明的技术方案如下：
本发明第一方面，提供一种用于肺部选择性递送核酸的类脂质分子的制备方法，包括步骤：聚乙烯亚胺(PEI)与环氧烃类经加成反应得到用于肺部选择性递送核酸的类脂质分子。
根据本发明优选的，聚乙烯亚胺(PEI)为支状PEI(BPEI)或线性PEI(LPEI)。优选的，聚乙烯亚胺(PEI)为支状PEI(BPEI)。
根据本发明优选的，聚乙烯亚胺(PEI)分子量为0.3～18kDa。优选的，聚乙烯亚胺(PEI)分子量为0.6kDa。
根据本发明优选的，环氧烃类结构中的烃基选自饱和或不饱和、支化或未支化、卤代或未卤代的碳原子数为C1～C20的脂肪烃基。优选的，环氧烃类结构中的烃基选自饱和、未支化、未卤代的碳原子数为C1～C20的脂肪烃基。进一步优选的，环氧烃类结构中的烃基选自饱和、未支化、未卤代的碳原子数为C4～C18的脂肪烃基。更优选的，环氧烃类选自1，2-环氧己烷、1，2-环氧辛烷、1，2-环氧癸烷、1，2-环氧十二烷或1，2-环氧十四烷中的一种。
根据本发明优选的，聚乙烯亚胺(PEI)与环氧烃类的摩尔比为1：6～14。优选的，聚乙烯亚胺(PEI)与环氧烃类的摩尔比为1：8～13。最优选的，聚乙烯亚胺(PEI)与环氧烃类的摩尔比为1：12.5。
根据本发明优选的，加成反应温度为80℃～100℃，加成反应时间为48～72小时。优选的，加成反应温度为85℃～95℃，加成反应时间为48～60小时。
根据本发明优选的，加成反应是于避光条件下进行。
根据本发明优选的，加成反应所得产物的后处理方法如下：将产物用无水乙醇透析后烘干即得。
本发明第二方面，提供由上述方法制备得到的用于肺部选择性递送核酸的类脂质分子。
本发明第三方面，提供一种类脂质纳米颗粒，包括如下质量百分比的原料组成：类脂质分子30～80％，聚乙二醇化脂质5～40％，类固醇5～60％。
根据本发明优选的，所述聚乙二醇化脂质选自二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000、1,2-二肉豆蔻酰-rac-甘油-3-甲氧基-聚乙二醇2000、d-α琥珀酸生育酚聚乙二醇酯、2-豆蔻酸锡酰-3-磷脂乙醇胺-聚乙二醇2000、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000或1,2-二硬脂酰-rac-甘油-聚乙二醇2000中的一种。优选的，所述聚乙二醇化脂质为二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000或1,2-二肉豆蔻酰-rac-甘油-3-甲氧基-聚乙二醇2000中的一种。
根据本发明优选的，所述类固醇选自胆固醇、β-谷甾醇、豆甾醇、谷甾醇、豆甾烷醇、谷甾烷醇、麦角固醇、胆甾烷醇、脱氢胆固醇、二氢胆固醇、羟基胆固醇或岩皂甾醇中的一种。优选的，所述类固醇选自胆固醇、β-谷甾醇、豆甾醇、豆甾烷醇、麦角固醇或岩皂甾醇中的一种。最优选的，所述类固醇为胆固醇。
本发明第四方面，提供一种类脂质纳米颗粒的制备方法，包括步骤：
1)将类脂质分子、聚乙二醇化脂质、类固醇溶解于有机溶剂中，得到脂质预混液；
2)将脂质预混液在涡旋条件下逐滴滴加到缓冲液中，得到类脂质纳米颗粒。
根据本发明优选的，步骤1)中，所述有机溶剂为无水乙醇；所述有机溶剂的用量为溶解量。优选的，脂质预混液中，类脂质分子的质量浓度为1.5-50mg/ml。最优选的，脂质预混液中，类脂质分子的质量浓度为25mg/ml。
根据本发明优选的，步骤2)中，所述缓冲液为醋酸-醋酸钠缓冲液或柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液；缓冲液pH为4-8。优选的，所述缓冲液为醋酸-醋酸钠缓冲液；所述缓冲液pH为4-6。最优选的，所述缓冲液pH为5.5。
根据本发明优选的，步骤2)中，所述缓冲液的用量为使所得混合液为胶状分散体。优选的，脂质预混液和缓冲液的体积比为1：8～100。最优选的，脂质预混液和缓冲液的体积比为1：30。
根据本发明优选的，步骤2)中，脂质预混液在涡旋条件下逐滴滴加到缓冲液中后，所得混合液即为含有脂质纳米颗粒的分散液，可直接后续使用；或者，所得混合液经干燥后得到脂质纳米颗粒。
本发明第五方面，提供上述类脂质分子或类脂质纳米颗粒的应用，用于肺部选择性递送核酸药物。
根据本发明优选的，所述核酸药物选自信使RNA(mRNA)、小干扰RNA(siRNA)、微小RNA(microRNA)、反义寡核苷酸(ASO)、环状RNA(circRNA)、短发夹RNA(shRNA)、DNA或核酸适配体。
根据本发明优选的，具体应用方法如下：
1)将类脂质纳米颗粒溶液与核酸药物混合，室温静置，得到类脂质纳米颗粒-核酸复合物；
2)将复合物施用于生物体，在生物体内实现核酸药物的肺部选择性富集并发挥效用。
优选的，类脂质纳米颗粒溶液的质量浓度为0.4-4.8mg/ml。最优选的，类脂质纳米颗粒溶液的质量浓度为1.4mg/ml。
优选的，类脂质纳米颗粒溶液为上述含有脂质纳米颗粒的分散液；或者，将脂质纳米颗粒分散于缓冲液中制备得到；所述缓冲液为醋酸-醋酸钠缓冲液或柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液；缓冲液pH为4-8。进一步优选的，所述缓冲液为醋酸-醋酸钠缓冲液；所述缓冲液pH为4-6。最优选的，所述缓冲液pH为5.5。
优选的，所述类脂质纳米颗粒与核酸药物的质量比为2～20:1。进一步优选的，所述类脂质纳米颗粒与核酸药物的质量比为7～15:1。
优选的，所述室温静置时间为5～60分钟。进一步优选的，所述室温静置时间为10～30分钟。
优选的，复合物施用方式包括：静脉注射、肌肉注射、气管给药、皮下注射、鼻腔吸入或口服。
本发明的技术特点及有益效果如下：
1、本发明类脂质分子由聚乙烯亚胺(PEI)与环氧烃类经加成反应得到；制备方法简单，原料廉价易得，成本低，且安全环保。
2、利用本发明类脂质分子制备类脂质纳米颗粒，所得类脂质纳米颗粒可特异性的递送核酸至肺部并发挥效用，具有优异的转染效率、良好的生物安全性；且对肝部无明显转染效果。本发明的肺部选择性递送核酸的类脂质分子，无需联合生物靶向分子或形成纳米颗粒时添加辅助组分即可实现核酸的肺部选择性递送，有效减少递送系统对生物体的毒副作用。本发明在减少递送系统肝脏积累并递送核酸至肺部方面具有显著优势，有利于激励核酸药物递送领域的进一步发展。
附图说明
图1为聚乙烯亚胺、实施例1-5所得类脂质分子的核磁氢谱图。
图2为实施例6所得类脂质纳米颗粒的外观图及丁达尔现象图。
图3为实施例6所得类脂质纳米颗粒的物理化学性质表征图，包括水合粒径、ζ电势、粒径分布、形貌图。
图4为应用例1中类脂质纳米颗粒对于mRNA的负载效率图。
图5为试验例1中类脂质纳米颗粒-增强绿色蛋白(EGFP)mRNA复合物在Hela细胞内的递送转染效果图，包括流式细胞仪定量分析图和荧光显微镜照片。
图6A为试验例2中静脉注射DiR荧光分子标记的类脂质纳米颗粒-mRNA复合物6小时后，小鼠心、肝、脾、肺、肾的离体荧光成像图片及荧光定量分析图。
图6B为试验例2中静脉注射类脂质纳米颗粒-荧光素酶(Luc)mRNA复合物6小时后，小鼠心、肝、脾、肺、肾的离体生物发光成像图片及生物发光定量分析图。
图7A为试验例3中用不同浓度类脂质纳米颗粒-mRNA复合物处理后Hela细胞的细胞活性评估图。
图7B为试验例3中在可实现有效转染的浓度下类脂质纳米颗粒-mRNA复合物经全身给药后对小鼠体内各器官(心、肝、脾、肺、肾)的病理学评价图。
具体实施方式
下述内容为结合具体实施例对本发明进行进一步阐述，但本发明不局限于下述实例。
同时下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂、材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
实施例中，支状聚乙烯亚胺(PEI)，上海阿拉丁生化科技股份有限公司有售，其结构式如下图所示：
实施例1
一种用于肺部选择性递送核酸的类脂质分子的制备方法，步骤如下：
将分子量为0.6kDa的支状聚乙烯亚胺(PEI)与1，2-环氧己烷以1：12.5的摩尔比混合均匀，在避光条件下，90℃加热并持续搅拌60小时。将所得粗产物用无水乙醇透析后烘干去除乙醇，得到尾链含羟基的类脂质分子并将其命名为EO6。
将所得类脂质分子进行核磁氢谱分析，所得核磁氢谱图如图1所示，左侧插入小图为部分放大图谱所得。
实施例2
一种用于肺部选择性递送核酸的类脂质分子的制备方法，步骤如下：
将分子量为0.6kDa的支状聚乙烯亚胺(PEI)与1，2-环氧辛烷以1：12.5的摩尔比混合均匀，在避光条件下，90℃加热并持续搅拌60小时。将所得粗产物用无水乙醇透析后烘干去除乙醇，得到尾链含羟基的类脂质分子并将其命名为EO8。
将所得类脂质分子进行核磁氢谱分析，所得核磁氢谱图如图1所示，左侧插入小图为部分放大图谱所得。
实施例3
一种用于肺部选择性递送核酸的类脂质分子的制备方法，步骤如下：
将分子量为0.6kDa的支状聚乙烯亚胺(PEI)与1，2-环氧癸烷以1：12.5的摩尔比混合均匀，在避光条件下，90℃加热并持续搅拌60小时。将所得粗产物用无水乙醇透析后烘干去除乙醇，得到尾链含羟基的类脂质分子并将其命名为EO10。
将所得类脂质分子进行核磁氢谱分析，所得核磁氢谱图如图1所示，左侧插入小图为部分放大图谱所得。
实施例4
一种用于肺部选择性递送核酸的类脂质分子的制备方法，步骤如下：
将分子量为0.6kDa的支状聚乙烯亚胺(PEI)与1，2-环氧十二烷以1：12.5的摩尔比混合均匀，在避光条件下，90℃加热并持续搅拌60小时。将所得粗产物用无水乙醇透析后烘干去除乙醇，得到尾链含羟基的类脂质分子并将其命名为EO12。
将所得类脂质分子进行核磁氢谱分析，所得核磁氢谱图如图1所示，左侧插入小图为部分放大图谱所得。
实施例5
一种用于肺部选择性递送核酸的类脂质分子的制备方法，步骤如下：
将分子量为0.6kDa的支状聚乙烯亚胺(PEI)与1，2-环氧十四烷以1：12.5的摩尔比混合均匀，在避光条件下，90℃加热并持续搅拌60小时。将所得粗产物用无水乙醇透析后烘干去除乙醇，得到尾链含羟基的类脂质分子并将其命名为EO14。
将所得类脂质分子进行核磁氢谱分析，所得核磁氢谱图如图1所示，左侧插入小图为部分放大图谱所得。
对比例1
一种类脂质分子的制备方法，步骤如下：
将分子量为0.6kDa的支状聚乙烯亚胺(PEI)与2-丙烯酸十二烷基酯以1：12.5的摩尔比混合均匀，在避光条件下，90℃加热并持续搅拌60小时。将所得粗产物用无水乙醇透析后烘干去除乙醇，得到尾链含酯键的类脂质分子并将其命名为EA12。
对比例2
一种类脂质分子的制备方法，步骤如下：
将分子量为0.6kDa的支状聚乙烯亚胺(PEI)与2-丙烯酸十二烷基酯以1：10的摩尔比混合均匀，在避光条件下，90℃加热并持续搅拌48小时。将所得粗产物用无水乙醇透析后烘干去除乙醇，得到尾链含酯键的类脂质分子并将其命名为10A12。
实施例6
一种类脂质纳米颗粒，包括如下质量百分比的原料组成：类脂质分子(实施例1-5或对比例)58％，聚乙二醇化脂质(1,2-二肉豆蔻酰-rac-甘油-3-甲氧基-聚乙二醇2000，DMG-PEG)28％，类固醇(胆固醇)14％。
上述类脂质纳米颗粒的制备方法，步骤如下：
将实施例1-5或对比例所得类脂质分子分别与1,2-二肉豆蔻酰-rac-甘油-3-甲氧基-聚乙二醇2000(DMG-PEG)及胆固醇溶解在无水乙醇中，得到脂质预混液(类脂质分子的质量浓度为25mg/ml)。将该脂质预混液在涡旋条件下逐滴滴加到pH为5.5的醋酸-醋酸钠缓冲液中(脂质预混液和缓冲液的体积比为1：30)，形成胶状分散体(如图2所示，上图为无光源照射时照片，下图为红色激光照射时照片)，得到类脂质纳米颗粒分散液，并将其分别命名为EA12-LNP(对比例1)，10A12-LNP(对比例2)，EO6-LNP(实施例1)，EO8-LNP(实施例2)，EO10-LNP(实施例3)，EO12-LNP(实施例4)，EO14-LNP(实施例5)。
对所得类脂质纳米颗粒进行物理化学性质表征，如图3所示，所得类脂质纳米颗粒均为球形、水合粒径在70～200nm范围内且粒径分布较为均一、在pH为5.5条件下ζ电势均为正值。
应用例1
将实施例6所得类脂质纳米颗粒分散液(质量浓度为1.4mg/ml)分别与mRNA迅速混合，其中，类脂质纳米颗粒与mRNA的质量比为15：1；室温放置20分钟，得到类脂质纳米颗粒-核酸复合物。
对该类脂质纳米颗粒-核酸复合物中类脂质纳米颗粒对于mRNA的负载效率进行定量，如图4所示，所有类脂质纳米颗粒对于mRNA的负载效率均超过80％。其中，EO6-LNP、EO8-LNP、EO10-LNP、EO12-LNP、EO14-LNP对mRNA的负载率均超过90％，且均优于EA12-LNP对mRNA的负载率(约为82％)。
试验例1
将应用例1所得类脂质纳米颗粒-核酸复合物以0.4μg/ml的mRNA浓度对Hela细胞进行处理，其中所述mRNA为EGFP mRNA。在37℃、5％CO2条件下静置24小时后，用荧光显微镜记录EGFP在Hela细胞中的表达情况，并用流式细胞仪对荧光进行定量分析。如图5所示，类脂质纳米颗粒-核酸复合物对Hela细胞的转染效率与类脂质分子中疏水尾链结构密切相关，其中EO10-LNP、EO12-LNP、EO14-LNP、EA12-LNP对Hela细胞实现了不同程度的转染，尤其是EO14-LNP表现最佳，且其对Hela细胞的mRNA转染效率显著优于EA12-LNP。
试验例2
根据试验例1的实验结果，选取实施例6中所得类脂质纳米颗粒-核酸复合物EA12-LNP-mRNA、10A12-LNP-mRNA、EO10-LNP-mRNA、EO12-LNP-mRNA、EO14-LNP-mRNA进行小鼠体内实验。以0.2μg/g的mRNA剂量将类脂质纳米颗粒-mRNA复合物经静脉注入小鼠体内，其中所述mRNA为荧光素酶mRNA。静脉注射6小时后观察类脂质纳米颗粒-mRNA复合物在小鼠心、肝、脾、肺、肾各器官中的选择性聚集与转染。
图6A中所示类脂质纳米颗粒已用DiR荧光分子进行标记，通过对器官进行离体荧光成像观察类脂质纳米颗粒-mRNA复合物在各器官中聚集并对各器官中的荧光进行定量分析。结果显示，类脂质纳米颗粒表现出在肺上聚集的显著差异性：EA12-LNP在肝部的聚集程度均显著高于EO10-LNP、EO12-LNP、EO14-LNP、10A12-LNP，且在肺部无明显聚集。而EO10-LNP、EO12-LNP、EO14-LNP在肺部的聚集程度则均明显优于EA12-LNP和10A12-LNP。
为观察类脂质纳米颗粒-mRNA复合物在各器官中的转染，在静脉注射上述复合物6小时后，对小鼠皮下进行施用荧光素15分钟，之后观察各器官中的生物发光信号。如图6B所示，通过对小鼠心、肝、脾、肺、肾各器官中的生物发光信号进行离体成像并对该信号进行定量分析以评价类脂质纳米颗粒-mRNA复合物对小鼠体内各器官的转染效率。结果显示，类脂质纳米颗粒表现出对肺转染的显著差异性：EA12-LNP在肺部无明显转染效果而主要转染肝部，EO10-LNP、EO12-LNP、EO14-LNP以及10A12-LNP则主要转染肺部，对其他器官无明显转染效果。其中，EO10-LNP、EO12-LNP、EO14-LNP在肺部的mRNA转染效果均显著优于10A12-LNP，并且EO14-LNP在肺部的mRNA转染效果最优。
本发明的肺部选择性递送核酸的类脂质纳米颗粒表现出比例更高的肺部选择性富集，并且其介导的mRNA在肺部表达量更高。
试验例3
根据试验例1和试验例2的实验结果，选取应用例1中类脂质纳米颗粒-核酸复合物EO14-LNP-mRNA进行体内外生物安全性评价。
将Hela细胞与EO14-LNP-mRNA复合物按照不同的mRNA用量(0.2、0.4、0.6μg/ml)进行共同孵育。24小时后，用CCK-8法检测Hela细胞活性。如图7A所示，用不同mRNA浓度的EO14-LNP-mRNA复合物刺激24小时后，细胞存活率均在80％以上，表明本发明的类脂质纳米颗粒在细胞上具有良好的生物安全性能。
将EO14-LNP-mRNA复合物按照0.2μg/g的mRNA剂量静脉注入小鼠体内，24小时后，对小鼠的心、肝、脾、肺、肾进行H&E染色以进行病理学检查。如图7B所示，与未经处理的小鼠相比，经EO14-LNP-mRNA复合物处理的小鼠各器官均未出现明显病变，表明本发明的类脂质纳米颗粒在实现有效转染的剂量下在体内具有良好的生物安全性。
Claims (10)
1.一种用于肺部选择性递送核酸的类脂质分子的制备方法，包括步骤：聚乙烯亚胺(PEI)与环氧烃类经加成反应得到用于肺部选择性递送核酸的类脂质分子。
2.根据权利要求1所述用于肺部选择性递送核酸的类脂质分子的制备方法，其特征在于，包括以下条件中的一项或多项：
i、聚乙烯亚胺(PEI)为支状PEI(BPEI)或线性PEI(LPEI)；优选的，聚乙烯亚胺(PEI)为支状PEI(BPEI)；
ii、聚乙烯亚胺(PEI)分子量为0.3～18kDa；优选的，聚乙烯亚胺(PEI)分子量为0.6kDa；
iii、聚乙烯亚胺(PEI)与环氧烃类的摩尔比为1：6～14；优选的，聚乙烯亚胺(PEI)与环氧烃类的摩尔比为1：8～13；最优选的，聚乙烯亚胺(PEI)与环氧烃类的摩尔比为1：12.5。
3.根据权利要求1所述用于肺部选择性递送核酸的类脂质分子的制备方法，其特征在于，环氧烃类结构中的烃基选自饱和或不饱和、支化或未支化、卤代或未卤代的碳原子数为C1～C20的脂肪烃基；优选的，环氧烃类结构中的烃基选自饱和、未支化、未卤代的碳原子数为C1～C20的脂肪烃基；进一步优选的，环氧烃类结构中的烃基选自饱和、未支化、未卤代的碳原子数为C4～C18的脂肪烃基；更优选的，环氧烃类选自1，2-环氧己烷、1，2-环氧辛烷、1，2-环氧癸烷、1，2-环氧十二烷或1，2-环氧十四烷中的一种。
4.根据权利要求1所述用于肺部选择性递送核酸的类脂质分子的制备方法，其特征在于，包括以下条件中的一项或多项：
i、加成反应温度为80℃～100℃，加成反应时间为48～72小时；优选的，加成反应温度为85℃～95℃，加成反应时间为48～60小时；
ii、加成反应是于避光条件下进行；
iii、加成反应所得产物的后处理方法如下：将产物用无水乙醇透析后烘干即得。
5.如权利要求1-4任意一项方法制备得到的用于肺部选择性递送核酸的类脂质分子。
6.一种类脂质纳米颗粒，包括如下质量百分比的原料组成：类脂质分子30～80％，聚乙二醇化脂质5～40％，类固醇5～60％。
7.根据权利要求6所述类脂质纳米颗粒，其特征在于，包括以下条件中的一项或多项：
i、所述聚乙二醇化脂质选自二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000、1,2-二肉豆蔻酰-rac-甘油-3-甲氧基-聚乙二醇2000、d-α琥珀酸生育酚聚乙二醇酯、2-豆蔻酸锡酰-3-磷脂乙醇胺-聚乙二醇2000、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000或1,2-二硬脂酰-rac-甘油-聚乙二醇2000中的一种；优选的，所述聚乙二醇化脂质为二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000或1,2-二肉豆蔻酰-rac-甘油-3-甲氧基-聚乙二醇2000中的一种；
ii、所述类固醇选自胆固醇、β-谷甾醇、豆甾醇、谷甾醇、豆甾烷醇、谷甾烷醇、麦角固醇、胆甾烷醇、脱氢胆固醇、二氢胆固醇、羟基胆固醇或岩皂甾醇中的一种；优选的，所述类固醇选自胆固醇、β-谷甾醇、豆甾醇、豆甾烷醇、麦角固醇或岩皂甾醇中的一种；最优选的，所述类固醇为胆固醇。
8.如权利要求6或7所述类脂质纳米颗粒的制备方法，包括步骤：
1)将类脂质分子、聚乙二醇化脂质、类固醇溶解于有机溶剂中，得到脂质预混液；
2)将脂质预混液在涡旋条件下逐滴滴加到缓冲液中，得到类脂质纳米颗粒。
9.根据权利要求8所述类脂质纳米颗粒的制备方法，其特征在于，包括以下条件中的一项或多项：
i、步骤1)中，所述有机溶剂为无水乙醇；所述有机溶剂的用量为溶解量；优选的，脂质预混液中，类脂质分子的质量浓度为1.5-50mg/ml；最优选的，脂质预混液中，类脂质分子的质量浓度为25mg/ml；
ii、步骤2)中，所述缓冲液为醋酸-醋酸钠缓冲液或柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液；缓冲液pH为4-8；优选的，所述缓冲液为醋酸-醋酸钠缓冲液；所述缓冲液pH为4-6；最优选的，所述缓冲液pH为5.5；
iii、步骤2)中，所述缓冲液的用量为使所得混合液为胶状分散体；优选的，脂质预混液和缓冲液的体积比为1：8～100；最优选的，脂质预混液和缓冲液的体积比为1：30；
iv、步骤2)中，脂质预混液在涡旋条件下逐滴滴加到缓冲液中后，所得混合液即为含有脂质纳米颗粒的分散液，可直接后续使用；或者，所得混合液经干燥后得到脂质纳米颗粒。
10.如权利要求5所述类脂质分子或权利要求6或7所述类脂质纳米颗粒的应用，用于肺部选择性递送核酸药物；
优选的，所述核酸药物选自信使RNA(mRNA)、小干扰RNA(siRNA)、微小RNA(microRNA)、反义寡核苷酸(ASO)、环状RNA(circRNA)、短发夹RNA(shRNA)、DNA或核酸适配体；
优选的，具体应用方法如下：
1)将类脂质纳米颗粒溶液与核酸药物混合，室温静置，得到类脂质纳米颗粒-核酸复合物；
2)将复合物施用于生物体，在生物体内实现核酸药物的肺部选择性富集并发挥效用。
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