CN117243981A - 植物乳杆菌jylp-326在制备改善情绪的产品中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及微生物技术领域，具体涉及一种植物乳杆菌JYLP‑326在制备改善情绪的产品中的应用。植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）JYLP‑326已于2019年6月27日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏号为CGMCC No.18038；改善情绪的产品包含植物乳杆菌JYLP‑326。实验结果显示，植物乳杆菌JYLP‑326可显著改善慢性不可预测的温和刺激（CUMS）模型小鼠的情绪低落和抑郁倾向，调节CUMS小鼠的海马区情绪相关神经细胞、蛋白质和炎症因子水平，对小鼠海马区有潜在神经保护作用。
Description
技术领域
本发明涉及微生物技术领域，具体涉及一种植物乳杆菌JYLP-326在制备改善情绪的产品中的应用。
背景技术
情绪低落是人们常见的心理问题之一，它会给人们的日常生活、工作、学习带来很大的负面影响。如果情绪低落持续时间较长，就会产生一系列的后果。在生理方面，长期情绪低落会导致免疫力下降、增加感染疾病的风险；会导致血液中的肾上腺素和皮质醇水平升高，增加心脏病和中风的风险；会导致消化系统问题，如胃酸过多、胃痉挛、腹泻等。在心理健康方面，长期情绪低落是抑郁症的前兆，或导致焦虑症的发生。
情绪低落作为一种情绪症状，要先评估严重性。如果情绪低落已经比较严重，同时伴有思维迟缓、意志活动减退的症状，需要就诊确认是否达到抑郁症。对于轻度抑郁症的患者来说，通过心理咨询、治疗，可逐渐改善患者不合理的认知模式、重建认知体系，在一定程度上缓解焦虑、改善情绪，但心理治疗起效慢，疗效因人而异。对于有明显焦虑狂躁的严重抑郁患者，需要服用抗抑郁药物。抗抑郁药物包括选择性5-羟色胺再摄取抑制剂、选择性去甲肾上腺素再摄取抑制剂、三环类抗抑郁药、单胺氧化酶抑制剂以及针对多种神经递质的药物等，但是这类药物容易产生副作用，比如使人困倦、口干、视物模糊、便秘、心跳加快、排尿困难和体位性低血压等。
与此同时，越来越多的科学家开始探索使用益生菌来改善情绪、治疗抑郁。中国专利CN110791451A公开了一株植物乳杆菌JYLP-326及其对睡眠的改善应用和产品。该专利公开了植物乳杆菌JYLP-326可增加下丘脑GABA的含量，有助于改善失眠。关于益生菌是否可有效改善情绪、治疗抑郁及其作用机制仍需进一步的研究。
发明内容
针对益生菌在改善情绪、治疗抑郁方面效果及作用机制不明确的技术问题，本发明提供一种植物乳杆菌JYLP-326在制备改善情绪的产品中的应用，具体技术方案如下：
植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）JYLP-326已于2019年6月27日保藏至中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏号为CGMCC No.18038；改善情绪的产品包含植物乳杆菌JYLP-326。
进一步的，改善情绪的产品为调节CUMS小鼠海马区情绪相关神经细胞、蛋白质和炎症因子的产品。
进一步的，改善情绪的产品为调节CUMS小鼠结肠中的TLR4-MyD88-NF-κB信号通路和炎症因子的产品。
进一步的，改善情绪的产品为调节CUMS小鼠结肠炎症的产品。
进一步的，改善情绪的产品为抑制RAGE-TLR4信号通路的产品。
进一步的，改善情绪的产品为调节CUMS小鼠肠道微生物菌群的产品。
进一步的，植物乳杆菌JYLP-326的含量为1.0×1010~2.5×1010cfu/g。
进一步的，改善情绪的产品的制备方法包括以下步骤：
（1）将植物乳杆菌JYLP-326在MRS固体培养基上进行活化，厌氧培养24h后挑取单菌落接种到MRS液体培养基中，然后在37℃条件下培养24h获得菌液；调整菌液浓度，经低温离心、洗涤、包被和真空冷冻干燥获得菌粉；
（2）将步骤（1）制备好的植物乳杆菌JYLP-326与低聚异麦芽糖复配得到改善情绪的产品。
进一步的，MRS液体培养基成分包括：蛋白胨10g、牛肉粉5g、三水醋酸钠5g、七水磷酸氢二钾2g、吐温80 1mL、四水硫酸锰0.05g、柠檬酸三铵2g、葡萄糖20g、七水硫酸镁0.2g、蒸馏水1000mL；向MRS液体培养基加入15g/L琼脂获得MRS固体培养基。
本发明的有益效果在于：
1、本发明提供的植物乳杆菌JYLP-326在制备改善情绪的产品中的应用，实验结果显示，植物乳杆菌JYLP-326活性高、抗氧化能力强，可有效抑制多种病原菌的生长，显著改善慢性不可预测的温和刺激（CUMS）模型小鼠的情绪低落和抑郁倾向，调节CUMS小鼠的海马区情绪相关神经细胞、蛋白质和炎症因子水平，对小鼠海马区有潜在神经保护作用。
2、本发明提供的植物乳杆菌JYLP-326在制备改善情绪的产品中的应用，实验结果显示，植物乳杆菌JYLP-326有效增强了肠道屏障的完整性，并减少了TLR4、MyD88和p-p65的表达，表明其在调节肠道炎症方面具有潜力。经过实验验证，植物乳杆菌JYLP-326和RAGE抑制剂FPS-ZM1处理均显著降低了小鼠海马区中HMGB1、RAGE和TLR4蛋白的表达，提示植物乳杆菌JYLP-326可能通过抑制RAGE-TLR4信号通路来改善情绪低落、不稳定。
3、肠道菌群与情绪改变密切相关，植物乳杆菌JYLP-326的治疗可有效增加乳杆菌的丰度并减少萨特氏菌属和经黏液真杆菌属的存在，在一定程度上逆转了与情绪低落、不稳定相关的肠道菌群的变化。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，对于本领域普通技术人员而言，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是实施例1-2中植物乳杆菌JYLP-326的生长曲线、益生菌特性研究及对CUMS小鼠情绪影响结果图。
图2是实施例3中植物乳杆菌JYLP-326对CUMS小鼠海马区情绪相关神经细胞、蛋白质和炎症因子的影响结果图。
图3是实施例4中植物乳杆菌JYLP-326对CUMS小鼠结肠中的TLR4-MyD88-NF-κB信号通路和炎症的影响结果图。
图4是实施例5中植物乳杆菌JYLP-326和RAGE特异性抑制剂FPS-ZM1对CUMS小鼠情绪影响及海马区绪相关神经细胞的影响结果图。
图5是实施例6中植物乳杆菌JYLP-326和RAGE特异性抑制剂FPS-ZM1对CUMS小鼠肠道微生物菌群的影响结果图。
具体实施方式
为了使本技术领域的人员更好地理解本发明中的技术方案，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本发明保护的范围。
下列实施例中使用的植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）JYLP-326为申请人自行采集，已于2019年6月27日保藏至中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏号为CGMCC No.18038。其他相关信息已于专利CN110791451A中进行披露。
实施例1 植物乳杆菌JYLP-326的生长曲线及益生菌特性研究
1. 植物乳杆菌JYLP-326的生长曲线
将植物乳杆菌JYLP-326接种到MRS液体培养基中，置于37℃摇床培养，每隔2h测定一次OD值。结果如图1A所示，生长曲线显示植物乳杆菌JYLP-326在2h时进入对数期并在12h时达到稳定期，说明该菌具有良好的活性。
2. 植物乳杆菌JYLP-326的益生菌特性研究
将植物乳杆菌JYLP-326接种到MRS液体培养基中，在37℃恒温培养箱中培养，使其OD值等于0.6后终止培养，保留菌株培养液备用。
（1）耐酸耐胆盐实验
①耐酸实验：取100 μL菌株培养液，用PBS缓冲液稀释101、103、105倍，6000g离心3min，弃掉上清；分别加入pH=3、4、5、7的PBS缓冲液，放置4小时后，混匀取10 μL涂板，在37℃恒温培养箱中培养12~48小时，活菌计数，做好实验记录，结果如图1B所示。
②耐胆盐实验：取100 μL菌株培养液，用PBS缓冲液稀释101、103、105倍，6000g离心3min，弃掉上清；分别加入含有0、0.1%、0.2%、0.3%牛胆盐的培养基，在37℃恒温培养箱中培养12~48小时，混匀取10μL涂板，在37℃恒温培养箱中培养12~48小时，活菌计数，做好实验记录，结果如图1C所示。
耐酸耐胆盐实验结果表明，植物乳杆菌JYLP-326对pH3~7环境和0~0.3%胆盐浓度环境均有较强的耐受能力。
（2）自由基清除能力的测定
①DPPH自由基清除能力测定
取2mL菌株培养液上清液，加入2mL DPPH甲醇溶液（浓度0.2mmol/L），黑暗下室温反应30min，取上清液517nm测吸光度，以2mL DPPH甲醇溶液加入2mL去离子水为对照。按照下列公式计算DPPH自由基清除率：
②羟基自由基清除能力测定
取2mmol/L的硫酸亚铁溶液1mL、6mmol/L过氧化氢1mL、6mmol/L水杨酸1mL的混合溶液，加入1mL菌株培养液上清，静置30min，在510nm处测定吸光度，以向混合溶液加入1mL蒸馏水为对照，按下列公式计算羟自由基的清除率：
③超氧自由基清除能力的测定
在0.5mL菌株培养液中加入150mmol/L的Tris-HCl溶液（pH=8.0）2mL，然后再加入1.2mmol/L邻苯三酚溶液1mL，室温反应30min，测定325nm处吸光度，按下列公式计算超氧自由基清除率：
其中，A00表示不含菌株培养液和邻苯三酚的吸光度；A01表示不含菌株培养液但含邻苯三酚的吸光度；A10表示含菌株培养液不含邻苯三酚的吸光度；A11表示含菌株培养液和邻苯三酚的吸光度。
自由基清除能力结果如图1D所示，植物乳杆菌JYLP-326表现出很强的抗氧化能力，对超氧自由基的清除能力达54.3%。
（3）抑菌实验
对常见病原菌的抑制效果试验采用牛津杯法。使用长杆大棉签吸取适量病原菌菌液，压去多余水分，采用360°旋转法轻轻地将病原菌涂布于检测平板上，将牛津杯放置于相应位置，然后吸取200μL菌株培养液加入到牛津杯内，将平板放置于4℃冰箱中扩散24h，然后在30℃下培养48h后测量抑菌圈直径并记录。
实验结果如图1E所示，植物乳杆菌JYLP-326明显抑制了致病菌沙门氏菌（Salmonella typhimurium）ATCC 13311、沙门氏菌（Salmonella enteritidis）ATCC13076、弯曲志贺氏菌（Shigella flexneri）ATCC 12022、李斯特菌（Listeria monocytogenes）ATCC 19111和粪肠球菌（Enterococcus faecalis）ATCC 29212的生长，抑制圈直径范围为9~14.67mm。
实施例2 植物乳杆菌JYLP-326对CUMS小鼠的情绪状况的影响
慢性不可预测的温和刺激（CUMS）模型是模拟抑郁症患者的疾病状态目前被广泛应用于研究抑郁症等精神疾病的动物模型之一，通过建立CUMS模型，模拟抑郁症患者的疾病状态，然后用植物乳杆菌JYLP-326喂养CUMS小鼠，以探索植物乳杆菌JYLP-326治疗抑郁症的病理生理机制的实验研究。实验的整体实施方案如图1F所示。
1.建立CUMS小鼠模型
选取48只8周龄雄性C57BL/6小鼠作为实验用鼠，从中随机选取36只用于建立CUMS小鼠模型。建立CUMS模型的方法如下：将空笼17h、斜笼45°17h、湿笼17h、食物剥夺14h、夜间光照12h、热水游泳5min、饮水剥夺16h、夹尾5min共8种刺激随机安排到28天内，每日2种，同种刺激不连续出现，使小鼠不能预料刺激的发生。其余12只小鼠作为对照组（C），正常饲养，不给予刺激。
2.实验处理
从第5周开始，将36只CUMS模型小鼠重新随机分为3组，分别为模型组（M）、低剂量治疗组（ML）和高剂量治疗组（MH），每组12只。四组小鼠，每组均分养在两个笼子中。对照组小鼠和模型组小鼠正常饲喂，不做其它处理；低剂量治疗组小鼠每天灌胃1×107CFU的植物乳杆菌JYLP-326，高剂量治疗组小鼠每天灌胃1×109CFU的植物乳杆菌JYLP-326，连续一个月。实验期间，收集所有小鼠的粪便。
3.旷场测试（OFT）
实验在安静的环境下进行。将动物放入箱内底面中心，同时进行摄像和计时。观察3~5 min后停止摄像。清洗方箱内壁及底面，以免上次动物余留的信息（如动物的大小便、气味）影响下次测试结果，更换动物，继续实验。
测试结果如图1G所示，与对照组正常小鼠相比，模型组CUMS小鼠的总移动距离明显较短（P<0.05）。然而，低剂量治疗组和高剂量治疗组小鼠的总移动距离有中等程度的改善。
4.糖水偏好测试（SPT）
首先进行糖水适应的训练，前24h每个鼠笼放置两瓶1%蔗糖水，24h后将其中的一瓶换为纯水。适应之后进行测试：每笼各放置1%蔗糖溶液和纯水各一瓶，小鼠自由取水，禁食。12h后测量剩余液体体积，记录蔗糖水、纯水及总液体消耗，按照下列公式计算糖水偏好：
测试结果如图1H所示，通过糖水偏好测试评估，模型组CUMS小鼠表现出厌恶行为，蔗糖偏好下降。对照组小鼠的蔗糖偏好为77.27±1.94%，而模型组小鼠的蔗糖偏好水平下降到31.80±3.09%。服用植物乳杆菌JYLP-326显著逆转了蔗糖偏好行为（P<0.05）。
5.悬尾实验（TST）
使用医用胶带将小鼠尾部固定在实验箱顶部，用摄像机记录6分钟内小鼠的行为，并用Tail Suspension ScanTM（Clever Sys Inc,VA,USA）分析软件进行分析，统计后4分钟内小鼠四肢与躯干完全不动的时间。
测试结果如图1I所示，与对照组相比，模型组小鼠在悬尾试验中表现出更长的不动时间（P<0.05），而高剂量治疗组小鼠的不动时间相对于模型组小鼠组明显缩短。
实施例3 植物乳杆菌JYLP-326对CUMS小鼠的海马区情绪相关神经细胞、蛋白质和炎症因子的影响
将小鼠处死取材，免疫组化检测和神经炎症有关的细胞；Western测脑中5-HT1A受体、5-HT合成限速酶（色氨酸羟化酶2和磷酸化色氨酸羟化酶2，TPH2/p-TPH2）；使用RT-PCR检测小鼠海马区IL-6、IL-1β和TNF-α炎症因子的表达。实验结果如图2所示。
首先，利用免疫组化方法观察了小鼠海马中GFAP（星形胶质细胞标记物）和Iba-1（小胶质细胞标记物）的表达情况（图2A）。与对照组相比，模型组CUMS小鼠的GFAP阳性神经元的百分比和Iba1阳性神经元的百分比显著升高（P<0.05，图2B、C）。与模型组相比，ML组和MH组结果显示，植物乳杆菌JYLP-326的处理显著降低了小鼠海马中GFAP和Iba-1的表达（P<0.05）。
然后，检测小鼠海马区和肠道中的5-HT水平，以分析情绪不稳定与其内部分子机制之间的联系（图2D、E）。模型组CUMS小鼠海马中的5-HT水平（269µg/g）远低于对照组正常小鼠（396.30µg/g，P<0.01，图2D）。与M组相比，接受植物乳杆菌JYLP-326处理的ML组和MH组的5-HT水平显著提高（337.37µg/g、364.33µg/g，P<0.01，图2D）。同时，模型组小鼠结肠中的5-HT水平远低于对照组（P<0.01，图2E），而植物乳杆菌JYLP-326处理诱导了ML组和MH组结肠中的5-HT水平显著提高（P<0.01，图2E），与海马区的趋势一致。
此外，通过免疫印迹法检测了植物乳杆菌JYLP-326对与5-HT相关蛋白质表达水平的影响（图2F）。结果显示，模型组CUMS小鼠的海马区中，p-TPH2/TPH2的表达显著低于对照组（P<0.05，图2G），5-HT1受体的表达也显著降低（P<0.01，图2H）。然而，接受植物乳杆菌JYLP-326处理的高剂量治疗组在这些变化上显著恢复正常水平（P<0.01）。大脑组织中炎症细胞因子的过度表达也被认为是情绪不稳定的标志之一。因此，通过逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测了IL-6、IL-1β和TNF-α的mRNA表达水平（图2I-K）。与对照组相比，模型组CUMS小鼠表现出炎症因子的过度表达（P<0.01）。然而，经植物乳杆菌JYLP-326处理后，低剂量治疗组（P<0.05）和高剂量治疗组（P<0.01）显示出明显改善。结果表明，植物乳杆菌JYLP-326具有改善情绪低落、不稳定和对小鼠海马区的潜在神经保护作用。
实施例4 植物乳杆菌JYLP-326对CUMS小鼠的结肠TLR4-MyD88-NF-κB信号通路和炎症的影响
情绪不稳定患者中肠道5-HT缺失导致肠道运动功能受损，表现为回肠绒毛变短；促炎性细胞因子表达增多，通过脑-肠轴对情绪的发生发展起着促进作用。将小鼠处死取材，使用HE染色检测回肠绒毛，使用RT-PCR检测小鼠IL-6、IL-1β和TNF-α炎症因子的表达；并进行TLR4、MyD88、p65、p-p65促炎通路的检测，实验结果如图3所示。
如图3A所示，在模型组CUMS小鼠的结肠中，黏膜上皮细胞脱落，肠腺结构部分破坏，而对照组、低剂量治疗组和高剂量治疗组小鼠的肠道组织中，没有黏膜上皮细胞脱落，肠腺结构完整。此外，通过RT-PCR研究了炎症因子TNF-α、IL-6和IL-1β的水平。结果显示，与对照组相比，模型组小鼠结肠炎症因子显著增加（P<0.01）。图3B-D显示，模型组CUMS小鼠的结肠中，TNF-α、IL-6和IL-1β的表达显著高于低剂量治疗组和高剂量治疗组（P<0.01）。
采用Western blot分析评估了TLR4-MyD88-NF-κB炎症通路中关键蛋白质的表达（图3E）。与对照组相比，模型组的TLR4、MyD88和p-p65表达显著增加（P<0.05，图3F-H）。此外，评估了小鼠结肠组织中与肠道通透性相关的蛋白质的表达。与对照组相比，模型组的ZO-1和Occludin表达减少。然而，植物乳杆菌JYLP-326的处理显著增加了低剂量治疗组和高剂量治疗组中ZO-1和Occludin的表达（图3I-K）。这些Western blot结果表明，植物乳杆菌JYLP-326有效增强了肠道屏障的完整性，并减少了TLR4、MyD88和p-p65的表达，表明其在调节肠道炎症方面具有潜力。
实施例5 RAGE特异性抑制剂FPS-ZM1对CUMS小鼠情绪行为的影响
为了验证RAGE-TLR4通路在植物乳杆菌JYLP-326改善情绪低落、不稳定中的参与程度，进行了额外的实验。选取60只8周龄雄性C57BL/6小鼠作为实验用鼠，选取48只按照实施例2的方法建立CUMS小鼠模型，其余12只为正常组。从第5周开始，将48只CUMS模型小鼠重新随机分为3组，分别为模型组（M组）、低剂量治疗组（ML组）、高剂量治疗组（MH组）和抑制剂组（MI组），并重复实施例2-4中的实验，来研究RAGE-TLR4抑制对巨噬细胞/微胶质细胞极化和CUMS小鼠情绪不稳定症状改善的影响，实验结果如图4所示。
为了评估FPS-ZM1抑制剂的影响，我们对小鼠进行了OFT、SPT和TST测试（图4A、B、C）。根据OFT测试结果，与模型组相比，植物乳杆菌JYLP-326处理的低剂量治疗组、高剂量治疗组和FPS-ZM1处理的抑制剂组的参数值均有所改善（P<0.01）。在SPT测试中，与对照组相比，模型组的蔗糖偏好度下降到34.25±4.26%（P<0.05）。TST测试的结果表明，与植物乳杆菌JYLP-326相比，FPS-ZM1抑制剂表现出更好的效果，高剂量治疗组和抑制剂组小鼠的静止时间明显少于模型组CUMS小鼠。由此可知，植物乳杆菌JYLP-326和FPS-ZM1抑制剂均显著改善了情绪低落、不稳定，有助于逆转抑郁倾向。
利用免疫组化方法观察了各组小鼠海马区中GFAP（星形胶质细胞标记物）和Iba1（小胶质细胞标记物）的表达情况（图4D）。与对照组相比，模型组的GFAP阳性神经元百分比和Iba1阳性神经元百分比均显著降低（P<0.05）。与模型组相比，高剂量治疗组和抑制剂组的结果表明，抑制炎症使得GFAP和Iba-1的表达量显著下降（P<0.01，图4E、F）。此外，还测试了小鼠海马区中HMGB1-RAGE-TLR4蛋白的表达水平。与对照组相比，模型组CUMS小鼠海马区中HMGB1、RAGE和TLR4蛋白的表达水平显著增高（P<0.01），而植物乳杆菌JYLP-326和FPS-ZM1处理显著降低了小鼠海马区中HMGB1、RAGE和TLR4蛋白的表达（P<0.01，图4G-J）。
实施例6 植物乳杆菌JYLP-326对CUMS小鼠肠道菌群的影响
肠道菌群与情绪改变密切相关。实验期间，收集所有小鼠的粪便，进行16S rRNA高通量测序分析，实验结果如图5所示。
从Chao1指数和Observed_species指数的结果来看，不同组别的肠道菌群α-多样性指数存在差异，表明情绪低落、不稳定在一定程度上扰乱了肠道菌群的平衡（图5A、B）。低剂量治疗组和高剂量治疗组的Chao1指数和Observed_species指数略高于模型组（P<0.05），这表明植物乳杆菌JYLP-326可以恢复被情绪低落、不稳定扰乱的肠道菌群的多样性。此外，Bray-Curtis相异性的PCoA分析显示，ML组、MH组和MI组小鼠的肠道菌群β-多样性与C组相似，但与M组不同，进一步说明情绪不稳定对人类肠道菌群结构产生影响，而益生菌植物乳杆菌JYLP-326可以重塑肠道微生物谱（图5C）。Venn图显示，在所有样本中共鉴定出3114个操作分类单元（OTUs），其中377个OTUs在所有组别中共有，C组、M组、ML组、MH组和MI组分别检测到705、607、512、497和416个独特的OTUs（图5D）。这些结果表明，植物乳杆菌JYLP-326的给药改善了CUMS小鼠肠道菌群，使其呈现出与正常小鼠类似的模式。在门水平上，不同组别中的优势菌群主要是厚壁菌门（Firmicutes）、变形菌门（Proteobacteria）、拟杆菌门（Bacteroidetes）和疣微菌门（Verrucomicrobia），它们分别占据了三组测序结果的97.79%、91.41%、93.29%、94.25%和92.96%（图5E）。值得注意的是，M组的变形菌门的相对丰度（25.62%）明显高于ML组、MH组和MI组（P<0.001，图5G），但这种增加可以通过植物乳杆菌JYLP-326或FPS-ZM1抑制剂的给药来恢复。相反，M组的厚壁菌门的相对丰度（图5H，58.97%）低于MH组（78.64%），而拟杆菌门的相对丰度（图5I，6.02%）低于MI组（13.92%）。在属水平上，不同组别中的优势菌群主要是乳杆菌属（Lactobacillus）、阿克曼氏菌属（Akkermansia）、萨特氏菌属（Sutterella）（图5F）。M组小鼠的粪便微生物谱中萨特氏菌属（13.73%）和经黏液真杆菌属（Blautia，4.74%）的存在相对较高，而ML组、MH组和MI组中萨特氏菌属和经黏液真杆菌属的存在较低（图5I、K）。然而，M组的乳杆菌存在度（20.46%）低于C组（26.06%）、MH组（29.51%）和MI组（30.97%）（图5J）。这些发现表明，植物乳杆菌JYLP-326的治疗可有效增加乳杆菌的丰度并减少萨特氏菌属和经黏液真杆菌属的存在，在一定程度上逆转了与情绪低落、不稳定相关的肠道菌群的变化。
实施例7 制备改善情绪的产品
（1）制备MRS液体培养基和MRS固体培养基：
MRS液体培养基成分包括：蛋白胨10g、牛肉粉5g、三水醋酸钠5g、七水磷酸氢二钾2g、吐温80 1mL、四水硫酸锰0.05g、柠檬酸三铵2g、葡萄糖20g、七水硫酸镁0.2g、蒸馏水1000mL；向MRS液体培养基中加入15g/L琼脂获得MRS固体培养基。
（2）将植物乳杆菌JYLP-326在MRS固体培养基上进行活化，厌氧培养24h后挑取单菌落接种到MRS液体培养基中，然后在37℃条件下培养24h获得菌液；经低温离心、洗涤、包被和真空冷冻干燥获得植物乳杆菌JYLP-326菌粉。
（3）将植物乳杆菌JYLP-326菌粉与低聚异麦芽糖（购自保龄宝生物股份有限公司）复配得到改善情绪的产品。
根据不同的剂量需求，通过调整植物乳杆菌JYLP-326菌粉与低聚异麦芽糖的复配比例，可获得植物乳杆菌JYLP-326含量分别为100亿/g、150亿/g、200亿/g、250亿/g的产品。
尽管通过参考附图并结合优选实施例的方式对本发明进行了详细描述，但本发明并不限于此。在不脱离本发明的精神和实质的前提下，本领域普通技术人员可以对本发明的实施例进行各种等效的修改或替换，而这些修改或替换都应在本发明的涵盖范围内/任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (8)
1. 一种植物乳杆菌JYLP-326在制备改善情绪的产品中的应用，其特征在于，植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）JYLP-326已于2019年6月27日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏号为CGMCC No.18038；改善情绪的产品包含植物乳杆菌JYLP-326。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，改善情绪的产品为调节CUMS小鼠海马区情绪相关神经细胞、蛋白质和炎症因子的产品。
3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，改善情绪的产品为调节CUMS小鼠结肠中的TLR4-MyD88-NF-κB信号通路和炎症因子的产品。
4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，改善情绪的产品为抑制RAGE-TLR4信号通路的产品。
5.如权利要求1所述的应用，其特征在于，改善情绪的产品为调节CUMS小鼠肠道微生物菌群的产品。
6.如权利要求1所述的应用，其特征在于，植物乳杆菌JYLP-326的含量为1.0×1010~2.5×1010cfu/g。
7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，改善情绪的产品的制备方法包括以下步骤：
（1）将植物乳杆菌JYLP-326在MRS固体培养基上进行活化，厌氧培养24h后挑取单菌落接种到MRS液体培养基中，然后在37℃条件下培养24h获得菌液；调整菌液浓度，经低温离心、洗涤、包被和真空冷冻干燥获得菌粉；
（2）将步骤（1）制备好的植物乳杆菌JYLP-326与低聚异麦芽糖复配得到改善情绪的产品。
8. 如权利要求7所述的应用，其特征在于，MRS液体培养基成分包括：蛋白胨10g、牛肉粉5g、三水醋酸钠5g、七水磷酸氢二钾2g、吐温80 1mL、四水硫酸锰0.05g、柠檬酸三铵2g、葡萄糖20g、七水硫酸镁0.2g、蒸馏水1000mL；向MRS液体培养基加入15g/L琼脂获得MRS固体培养基。
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