CN117224518B

CN117224518B - 索法酮在制备用于预防/治疗过敏性哮喘的药物中的应用

Info

Publication number: CN117224518B
Application number: CN202311489625.4A
Authority: CN
Inventors: 张书杰; 马昂; 刘丹丹; 丰晨然; 文凡; 吕海宁; 谷丽维; 张昕炜; 史巧莉; 王继刚
Original assignee: Institute of Materia Medica of CAMS
Current assignee: Institute of Materia Medica of CAMS
Priority date: 2023-11-10
Filing date: 2023-11-10
Publication date: 2024-02-02
Anticipated expiration: 2043-11-10
Also published as: CN117224518A

Abstract

本发明属于生物医药领域，具体涉及索法酮在制备用于预防/治疗过敏性哮喘的药物中的应用。本发明还公开了一种用于预防/治疗过敏性哮喘的药物，所述药物中含有索法酮。在动物模型上，本发明证明了索法酮能够改善过敏性哮喘小鼠的病理状态及相关生化指标，阐明了索法酮抗过敏性哮喘的药理作用。由于索法酮来源于中药活性成分，且是临床上一直在应用的药物，其副作用较小，安全性可控，因而可作为抗过敏性哮喘的潜在药物进行后续开发，缩短了新药开发的周期，具有较强的转化价值。

Description

索法酮在制备用于预防/治疗过敏性哮喘的药物中的应用

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及索法酮在制备用于预防/治疗过敏性哮喘的药物中的应用。

背景技术

过敏性哮喘（Allergic asthma）是目前常见的一种慢性炎症性呼吸道疾病。气道慢性炎症和气道重塑是过敏性哮喘的两大病理性特征，整个病理过程由多种细胞包括气道炎性细胞（嗜酸性粒细胞，肥大细胞，中性粒细胞等）以及气道结构细胞（气道上皮细胞、平滑肌细胞等）共同参与。

过敏性哮喘是一种顽固性的疾病，发作先兆症状有打喷嚏、流眼泪、鼻痒、眼痒、咳嗽、胸闷等症状，如不及时处理，进一步可发展为气流阻塞，反复喘息等症状，多在夜间或者清晨发作，运动、冷空气等诱因可加重疾病（中华医学会呼吸病学分会哮喘学组:支气管哮喘防治指南(支气管哮喘的定义、诊断、治疗及教育和管理方案)；中华结核和呼吸杂志(2003)）。

过敏性哮喘长期反复发作可诱发慢性支气管炎及肺间质纤维化等疾病。发病因素包括花粉、尘螨、真菌、动物皮屑、食物如虾、牛奶、坚果及冷空气等，因此很难避免。过敏性哮喘发病率高，常反复发作，很难从根本上治愈。目前临床上还没有一种能彻底治愈哮喘的药物。治疗哮喘的临床一线用药多是舒张支气管及减轻气道炎症的药物，包括糖皮质激素类(如布地奈德)、β2 受体激动剂（如沙丁胺醇)、抗胆碱类(如异丙托澳)、茶碱类(如氨茶碱)、抗组胺类(如酮参芬)和白三烯调节剂(如孟鲁司特)。这些药物具有较强的抑制气道炎症和松弛气道平滑肌的作用，但长期服用会产生耐药性并带来严重的不良反应，包括骨质疏松、生长发育受限、心律失常、免疫力降低、神经毒性等严重副作用。

机制上，（辅助型T细胞1）Th1/（辅助型T细胞2）Th2细胞免疫功能失衡在过敏性哮喘发病机制中一直占据主导地位，即过敏性哮喘是Th2细胞过度分化所导致的过敏性疾病。Th1和Th2细胞均从原始T细胞分化而来，Th1细胞可以分泌IFN-γ，Th2细胞可以分泌IL-4、IL-5和IL-13。

从近年的研发现状来看，治疗药物选择仍然有限，远未满足临床的需求，临床上仍缺乏长期安全有效且经济的小分子口服药物，因此亟待开发新型安全、有效适合长期服用的过敏性哮喘治疗药物。

发明内容

发明目的：针对于上述现有技术的不足，本发明公开了索法酮在制备用于预防/治疗过敏性哮喘的药物中的应用。

索法酮是中药广豆根中提取、合成的有效成分，属异戊二烯基查耳酮衍生物，能增加胃血流量，扩张胃粘膜血管，增加胃组织耗氧量，促进胃粘膜修复，增加胃壁构成成分，增加胃组织内前列腺素含量，其作用机理为抑制前列腺素分解酶5-羟基前列腺素脱氢酶。主要通过增强防御因子而对消化道溃疡发挥良好效果。临床上，索法酮目前在临床上主要用于治疗胃溃疡与胃炎。

作为临床上在应用的药物，索法酮安全性在临床上得以验证，发现其新的药理作用，大大缩短了抗过敏性哮喘药物的研发周期，节省了药物开发的成本，增加了其成为抗过敏性哮喘药物的可能性。

索法酮的结构式如下：

技术方案：索法酮在制备用于预防/治疗过敏性哮喘的药物中的应用。

进一步地，所述药物由索法酮和药学上能够接受的载体组成。

更进一步地，所述载体为稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂中的一种或多种。

进一步地，所述药物以片剂、胶囊剂、丸剂、散剂、颗粒剂、糖浆剂、溶液剂、乳剂、注射剂、喷雾剂、气雾剂、凝胶型、霜剂、酊剂、巴布剂、橡胶贴膏剂或贴膏剂形式存在。

一种用于预防/治疗过敏性哮喘的药物，所述药物中含有索法酮。

上述用于预防/治疗过敏性哮喘的药物，其活性成分为索法酮。上述用于预防/治疗过敏性哮喘的药物可通过多种方式进入患者机体（肌肉、皮内、皮下、静脉、粘膜组织），如：口服、注射、喷射、滴鼻、滴眼、渗透、吸收、物理或化学介导等方式；或是被其他物质混合或包裹后导入机体。

本发明公开的索法酮在制备用于预防/治疗过敏性哮喘的药物中的应用具有以下有益效果：

由于索法酮来源于中药活性成分，且是临床上一直在应用的药物，其副作用较小，安全性可控，因而可作为抗过敏性哮喘的潜在药物进行后续开发，缩短了新药开发的周期，具有较强的转化价值。

附图说明

图1为实施例1中小鼠的体重变化示意图。

图2为实施例2中小鼠血清中OVA特异性的IgE水平的示意图。

图3为实施例3中小鼠的肺部组织的H&E染色检测的示意图。

图4为实施例4中小鼠的肺部组织的PAS染色检测的示意图。

图5A为实施例5中小鼠血清中IL-4炎症因子水平的示意图。

图5B为实施例5中小鼠血清中IL-17A炎症因子水平的示意图。

图5C为实施例5中小鼠血清中IL-5炎症因子水平的示意图。

图6为实施例6中小鼠肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞的比例示意图。

图7A和图7B为实施例7中小鼠肺部细胞中Th1细胞及Th2细胞的比例示意图。

图8为哮喘模型的建立流程图。

具体实施方式

下面通过具体实施例对本发明的技术方案进行说明。

下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，所述试剂和生物材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。

实验材料

小鼠：C57BL/6J小鼠购买于北京维通利华生物技术公司，为正常饲养小鼠，8周龄，小鼠生长过程处于同一环境，且喂养同样的食物。

实验方法

1、哮喘模型的建立：

哮喘模型分为两个阶段，如图8所示：

第一阶段为致敏阶段：在第0、14天皮下注射10μg OVA及10mg 氢氧化铝佐剂制成混合乳剂（0.2ml/只）对小鼠进行致敏，而正常对照组注射相同剂量的生理盐水作为对照。

第二阶段为激发阶段：在21天到28天将模型组及给药组两组小鼠放置于雾化箱中，在雾化器的帮助下，用2% OVA溶液连续雾化7天，而正常组用生理盐水作为空白对照，每天雾化30min。

与此同时，给药组灌胃给索法酮200/100/50mg/kg（索法酮溶解在玉米油中，每只小鼠灌胃体积为200μl），模型组及正常对照组给相同体积的玉米油。

2、样本采集及处理

血液收集：最后一次激发后，小鼠禁食12-16h摘眼球取血放入采血管中，3000rpm离心30min，取上清血液，放入-80℃冰箱中保存。

肺泡灌洗液（BALF）：小鼠取血后进行安乐死，将小鼠固定在泡沫板上用手术剪剪开小鼠皮毛，分理组织暴露出气管，插入气管插管连接的注射器，并将气管插管用手术线固定，用注射器吸入1ml预冷的PBS缓冲液，将注射器中的PBS缓冲液推入肺中，反复进行灌洗，将灌洗液吸出得到肺泡灌洗液。取肺泡灌洗液，进行吉姆萨染色，对细胞进行分类计数。将肺部组织取下，放入4%多聚甲醛中固定保存。进行H&E染色及PAS染色。

肺组织免疫细胞分析：用生理盐水灌注肺组织至变白，取下肺组织，采用组织研磨仪将肺组织研磨成单细胞，采用红细胞裂解液裂解红细胞，细胞悬液离心后用PBS缓冲液清洗2次，加入封闭抗体封闭30min后离心，弃去上清，在细胞沉淀中加入流式检测抗体（PE-γIFN/FITC-CD4/APC-IL-4）孵育30min后，离心后PBS缓冲液清洗2次，加入细胞固定液固定10min后离心弃去固定液，PBS缓冲液重悬细胞沉淀，流式上机检测肺组织中Th1细胞及Th2细胞的比例。

实施例1

按照上述方法，小鼠最后一次雾化后，称量小鼠体重。结果如图1所示。图1为实施例1中小鼠的体重变化示意图，其中：正常对照组：con；模型组: OVA；给药组：OVA+SOF（200mg/kg、100mg/kg、50mg/kg，灌胃给药）；**，p＜0.01；****，p＜0.0001。从图1可以看出索法酮可以保护OVA引起的过敏性哮喘小鼠体重降低。

实施例2

小鼠最后一次雾化后3天后，按照上述方法收集小鼠血清，采用ELISA试剂盒检测血清中OVA特异性的IgE的水平。结果如图2所示，图2为实施例2中小鼠血清中OVA特异性的IgE水平的示意图，其中：正常对照组：con；模型组: OVA；给药组：OVA+SOF（200mg/kg、100mg/kg、50mg/kg，灌胃给药）；**，p＜0.01；****，p＜0.0001。从图2可以看出索法酮可以降低过敏性哮喘小鼠血清中OVA特异性的IgE的水平。

实施例3

H&E染色：小鼠造模成功后，取肺部组织，固定在4%多聚甲醛中，制作石蜡切片，采用H&E 染色观察索法酮处理后小鼠气道的病理状态，判断索法酮对小鼠哮喘模型中气道重塑的影响，结果如图3所示，图3为实施例3中小鼠的肺部组织的H&E染色检测的示意图，其中：正常对照组：con；模型组: OVA；给药组：OVA+SOF 200mg/kg。从图3可以看出索法酮可以改善OVA引起的过敏性哮喘小鼠的病理特征。

实施例4

PAS染色：小鼠造模成功后，取肺部组织，固定在4%多聚甲醛中，制作石蜡切片，采用PAS染色观察索法酮处理组及其对照组气道附近呈紫红色的糖类物质，进而判断索法酮对于小鼠哮喘模型气道重塑中气道粘液分泌的影响，其结果如图4所示，图4为小鼠的肺部组织的PAS染色检测的示意图，其中：正常对照组：con；模型组:OVA；给药组：OVA+SOF200mg/kg。从图4可以看出索法酮可以减少OVA引起的过敏性哮喘小鼠的气管损伤，减少炎症细胞浸润以及气管粘液分泌。

实施例5

按照上述方法，小鼠最后一次雾化后，收集小鼠血清，离心分离出血清，用ELISA试剂盒分别检测血清中炎症因子IL-4、IL-5、IL-17A的水平，结果如图5A-图5C所示，图5A为实施例5中小鼠血清中IL-4炎症因子水平的示意图。图5B为实施例5中小鼠血清中IL-17A炎症因子水平的示意图。图5C为实施例5中小鼠血清中IL-5炎症因子水平的示意图，其中：正常对照组：con；模型组: OVA；给药组：OVA+SOF （200mg/kg、100mg/kg、50mg/kg，灌胃给药）；**，p＜0.01，****，p＜0.0001。从图5A-图5C可以看出索法酮可以降低OVA引起的过敏性哮喘小鼠血清中炎症因子IL-4、IL-5、IL-17A的水平。

实施例6

按照上述方法，小鼠最后一次雾化后，取肺泡灌洗液进行吉姆萨染色，对小鼠肺泡灌洗液中的嗜酸性粒细胞进行统计分析，其结果如图6所示。图6为实施例6中小鼠肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞的比例示意图，其中：正常对照组：con；模型组: OVA；给药组：OVA+SOF（200mg/kg、100mg/kg、50mg/kg，灌胃给药）；**，p＜0.01，****，p＜0.0001。从图6可以看出索法酮可以降低OVA引起的过敏性哮喘小鼠肺泡灌洗液中嗜酸粒性细胞的比例。

实施例7

流式分析模型组及给药组小鼠肺部组织细胞中Th1细胞、 Th2细胞的比例，并进行统计分析，具体步骤如下：

按照上述方法，小鼠最后一次雾化后3d后，小鼠安乐死后，取小鼠肺部组织，按照上述方法将肺部组织研磨成单细胞悬液，加入流式抗体染色后进行流式上机分析：Th2细胞（APC-IL-4+/FITC-CD4+），Th1细胞（PE-IFN-γ+/FITC-CD4+，结果如图7A和图7B 所示，图7A和图7B为实施例7中小鼠肺部细胞中Th1细胞及Th2细胞的比例示意图，其中：正常对照组：con；模型组: OVA；给药组：OVA+SOF 200mg/kg；**，p＜0.01，****，p＜0.0001。从图7A和图7B可以看出索法酮能够维持Th1/Th2细胞的平衡，抑制Th2细胞比例，增加Th1细胞比例。

综上所述，索法酮作为治疗过敏性哮喘的药物能够明显缓解OVA处理导致的过敏性哮喘小鼠的体重降低。

索法酮作为治疗过敏性哮喘的药物能够明显降低过敏性哮喘小鼠血清中OVA特异性的IgE水平。

索法酮可以改善过敏性哮喘小鼠的气道重塑。

索法酮可以抑制过敏性哮喘小鼠气管炎症细胞浸润及粘液分泌。

索法酮可以减少过敏性哮喘小鼠肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞的比例。

索法酮可以减少过敏性哮喘小鼠血清中炎症因子的水平。

索法酮可以维持Th1/Th2细胞的平衡，抑制Th2细胞比例，增加Th1细胞比例。

上面对本发明的实施方式做了详细说明。但是本发明并不限于上述实施方式，在所属技术领域普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本发明宗旨的前提下做出各种变化。

Claims

1.索法酮在制备用于预防/治疗过敏性哮喘的药物中的应用。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物由索法酮和药学上能够接受的载体组成。

3.如权利要求1-2任意一项所述的应用，其特征在于，所述药物以片剂、胶囊剂、丸剂、散剂、颗粒剂、糖浆剂的形式存在。