CN117202938A - 变体Fc结构域及其用途 - Google Patents

变体Fc结构域及其用途 Download PDF

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CN117202938A CN202280030384.4A CN202280030384A CN117202938A CN 117202938 A CN117202938 A CN 117202938A CN 202280030384 A CN202280030384 A CN 202280030384A CN 117202938 A CN117202938 A CN 117202938A
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Abstract

本公开涉及用于治疗或预防疾病的变体Fc结构域单体、融合蛋白、缀合物、组合物和相关方法。具体地，本公开的特征在于包含在根据Kabat索引编号第246位的突变的变体Fc结构域单体。

Description

变体Fc结构域及其用途
序列声明
本申请含有已以ASCII格式以电子方式提交且据此以引用方式整体并入的序列表。在2022年2月24日创建的所述ASCII副本被命名为50945-072WO2_Sequence_Listing_2_24_22_ST25，并且大小为71,230字节。
背景技术
许多治疗剂(诸如小分子治疗剂)和生物制剂(诸如肽、多肽和多核苷酸)的效用具有血清半衰期不足的缺点。这需要以高频率和/或更高剂量施用这些治疗剂，或使用缓释制剂以维持治疗效果所需的血清水平。药物的频繁全身施用伴随着相当大的负面副作用。例如，频繁的全身注射为受试者带来相当大的不适，造成与施用相关的感染的高风险，并且可能需要住院治疗或频繁就医，特别是当治疗剂需要静脉内施用时。此外，在长期治疗中，每日静脉内注射也可导致由血管的反复穿刺引起的组织瘢痕形成和血管病理的显著副作用。类似的问题对于所有治疗剂频繁全身施用是已知的。所有这些因素导致患者依从性的降低和卫生系统的成本增加。
需要增加治疗剂半衰期和功效的新的且更有效的方法。
发明内容
本公开提供了Fc结构域单体、包含Fc结构域单体的缀合物以及包含Fc结构域单体的融合蛋白，其中Fc结构域单体是亲本Fc多肽(例如，IgG1或IgG2多肽)的突变变体。Fc结构域单体可包含一个或多个有助于增加半衰期和/或功效的突变。
所述一个或多个突变可促进或维持Fc结构域单体与Fc受体(例如，新生儿Fc受体(FcRn))的相互作用。例如，当Fc结构域单体与一种或多种治疗性分子缀合时，缀合可能会干扰Fc结构域单体与FcRn的相互作用。FcRn结合是理想的，因为它与增加的半衰期相关。所描述的Fc结构域单体变体促进小分子与变体Fc的氨基酸位点的缀合，其中小分子与变体Fc的缀合使得对FcRn结合的破坏最小化。在一些实施方案中，突变掩盖变体Fc结构域单体上的缀合位点，使得小分子的缀合不发生在将干扰与Fc受体相互作用的位点。
所述一个或多个突变还可使制造期间的聚集最小化，从而增加生产并降低成本。Fc结构域单体还可优化大小(例如，如通过kDa或氨基酸残基测量)，以使向目标组织的组织分布最大化并且/或者使肾清除率最小化。
本文所述的Fc结构域单体可以与治疗剂缀合。治疗剂可以与Fc结构域单体的一个或多个赖氨酸残基缀合。赖氨酸残基(例如，K246)突变为除赖氨酸之外的氨基酸残基可阻止治疗剂与该位置缀合。当赖氨酸与Fc结构域单体的介导功能(例如，结合Fc受体)的一个或多个氨基酸残基接近时，则可能需要防止治疗剂与赖氨酸残基缀合以防止Fc结构域单体的功能破坏。
在一个方面，本公开提供了一种变体Fc结构域单体(例如，亲本Fc多肽的变体)。在一些实施方案中，变体Fc结构域单体包含第246位的氨基酸取代(例如，K246X，其中X不是赖氨酸)。在一些实施方案中，第246位的氨基酸选自丝氨酸、甘氨酸、丙氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、精氨酸、组氨酸、谷氨酸或天冬氨酸。在一些实施方案中，第246位的氨基酸是丝氨酸。在一些实施方案中，第246位的氨基酸是甘氨酸。在一些实施方案中，第246位的氨基酸是丙氨酸。在一些实施方案中，第246位的氨基酸是苏氨酸。在一些实施方案中，第246位的氨基酸是天冬酰胺。在一些实施方案中，第246位的氨基酸是谷氨酰胺。在一些实施方案中，第246位的氨基酸是精氨酸。在一些实施方案中，第246位的氨基酸是组氨酸。在一些实施方案中，第246位的氨基酸是谷氨酸。在一些实施方案中，第246位的氨基酸是天冬氨酸。氨基酸取代是相对于野生型Fc单体氨基酸序列的，例如野生型人IgG1或IgG2。
在一些实施方案中，变体Fc结构域单体包含第246位以及(i)第252、254和256位，(ii)第309、311和434位，或(iii)第428和434位的氨基酸取代，其中第246位的取代是非赖氨酸的氨基酸(例如，非赖氨酸的天然存在的氨基酸)，第252位的取代是酪氨酸，第254位的取代是苏氨酸，第256位的取代是谷氨酸，第309位的取代是天冬氨酸，第311位的取代是组氨酸，第428位的取代是亮氨酸，并且第434位的取代是丝氨酸。如上文和整个公开中所示的变体Fc单体的氨基酸编号是根据如Kabat中的EU索引的。氨基酸取代是相对于野生型Fc单体氨基酸序列的，例如野生型人IgG1或IgG2。
在一些实施方案中，变体Fc结构域单体还包含第220位的取代，例如，其中第220位的取代是丝氨酸。
在一些实施方案中，变体Fc结构域单体包含第246位的非赖氨酸的氨基酸；第252位的酪氨酸；第254位的苏氨酸；以及第256位的谷氨酸。在一些实施方案中，变体Fc结构域单体包含第220位的丝氨酸；第246位的非赖氨酸的氨基酸；第252位的酪氨酸；第254位的苏氨酸；以及第256位的谷氨酸。
在一些实施方案中，变体Fc结构域单体包含第246位的非赖氨酸的氨基酸；第309位的天冬氨酸；第311位的组氨酸；以及第434位的丝氨酸。在一些实施方案中，变体Fc结构域单体包含第220位的丝氨酸；第246位的非赖氨酸的氨基酸；第309位的天冬氨酸；第311位的组氨酸；以及第434位的丝氨酸。
在一些实施方案中，变体Fc结构域单体包含第246位的非赖氨酸的氨基酸；第428位的甲硫氨酸；以及第434位的丝氨酸。在一些实施方案中，变体Fc结构域单体包含第220位的丝氨酸；第246位的非赖氨酸的氨基酸；第428位的甲硫氨酸；以及第434位的丝氨酸。
在一些实施方案中，变体Fc结构域单体还包含第297位的取代，其中第297位不是天冬酰胺。在一些实施方案中，第297位的氨基酸是丙氨酸。
在一些实施方案中，变体Fc结构域单体是人IgG1或人IgG2的变体。在一些实施方案中，变体Fc结构域单体是人IgG1的变体。
在一些实施方案中，变体Fc结构域单体包含少于约300个氨基酸残基(例如，少于约300个、少于约295个、少于约290个、少于约285个、少于约280个、少于约275个、少于约270个、少于约265个、少于约260个、少于约255个、少于约250个、少于约245个、少于约240个、少于约235个、少于约230个、少于约225个或少于约220个氨基酸残基)。在一些实施方案中，变体Fc结构域单体小于约40kDa(例如，小于约35kDa、小于约30kDa、小于约25kDa)。
在一些实施方案中，变体Fc结构域单体包含至少200个氨基酸残基(例如，至少210个、至少220个、至少230个、至少240个、至少250个、至少260个、至少270个、至少280个、至少290个或至少300个氨基残基)。在一些实施方案中，变体Fc结构域单体为至少20kDa(例如，至少25kDa、至少30kDa或至少35kDa)。
在一些实施方案中，变体Fc结构域单体包含200个至400个氨基酸残基(例如，200个至250个、250个至300个、300个至350个、350个至400个、200个至300个、250个至350个或300个至400个氨基酸残基)。在一些实施方案中，变体Fc结构域单体的长度介于200个和300个氨基酸残基之间(例如，介于210个和300个之间、介于230个和300个之间、介于250个和300个之间、介于270个和300个之间、介于290个和300个之间、介于210个和290个之间、介于220个和280个之间、介于230个和270个之间、介于240个和260个之间、或介于245个和255个氨基酸残基之间)。在具体的实施方案中，变体Fc结构域单体介于240个和255个氨基酸残基之间(例如，241个氨基酸残基、242个氨基酸残基、243个氨基酸残基、244个氨基酸残基、245个氨基酸残基、246个氨基酸残基、247个氨基酸残基、248个氨基酸残基、249个氨基酸残基、250个氨基酸残基、251个氨基酸残基、252个氨基酸残基、253个氨基酸残基或254个氨基酸残基)。在甚至更具体的实施方案中，变体Fc结构域单体的长度为246个氨基酸残基。在一些实施方案中，变体Fc结构域单体为20至40kDa(例如，20至25kDa、25至30kDa、35至40kDa、20至30kDa、25至35kDa或30至40kDa)。在一些实施方案中，变体Fc结构域单体的质量介于约20kDa和约40kDa之间(例如，20kDa至25kDa、25kDa至30kDa、30kDa至35kDa、35kDa至40kDa)。
在一些实施方案中，变体Fc结构域单体的N-末端包含Fab结构域的10至20个残基(例如，11、12、13、14、15、16、17、18或19个残基)。
在一些实施方案中，变体Fc结构域单体的N-末端是氨基酸残基198-205中的任一者。在一些实施方案中，变体Fc结构域单体的N-末端是氨基酸残基201(例如，Asn 201)。在一些实施方案中，变体Fc结构域单体的N-末端是氨基酸残基202(例如，Val 202)。
在一些实施方案中，变体Fc结构域单体的C-末端是氨基酸残基437-447中的任一者。在一些实施方案中，变体Fc结构域单体的C-末端是氨基酸残基446(例如，Gly 446)。在一些实施方案中，变体Fc结构域单体的C-末端是氨基酸残基447(例如，Lys 447)。
在一些实施方案中，变体Fc结构域单体包含与SEQ ID NO:1-28中任一者(例如，SEQ ID NO:9-15、SEQ ID NO:16-22或SEQ ID NO:23-28)的序列具有至少90％同一性(例如，91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％、或100％同一性)的氨基酸序列。在一些实施方案中，变体Fc结构域单体包含SEQ ID NO:1-28中任一者(例如，SEQ ID NO:9-15、SEQ ID NO:16-22或SEQ ID NO:23-28)的氨基酸序列。
在另一方面，本公开提供了一种变体Fc结构域，其包含各自独立地选自本文所述的变体Fc结构域单体中的任一者的变体Fc结构域单体的二聚体，其中变体Fc结构域的质量介于约50kDa和约70kDa之间(例如，约51kDa、约52kDa、约53kDa、约54kDa、约55kDa、约56kDa、约57kDa、约58kDa、约59kDa、约60kDa、约61kDa、约62kDa、约63kDa、约64kDa、约65kDa、约66kDa、约67kDa、约68kDa或约69kDa)。在一些实施方案中，变体Fc结构域单体二聚化(例如，同二聚体或异二聚体)以形成变体Fc结构域。在一些实施方案中，变体Fc结构域为至少40kDa(例如，至少45kDa、至少50kDa、至少55kDa、至少60kDa、至少65kDa、至少70kDa、至少75kDa或至少80kDa)。在一些实施方案中，变体Fc结构域的质量介于40kDa和80kDa之间(例如，介于约42kDa和约50kDa、约48kDa和约55kDa、约53kDa和约60kDa、约58kDa和约65kDa、约62kDa和约70kDa、约68kDa和约75kDa或约72kDa和约80kDa之间)。在具体的实施方案中，变体Fc结构域介于55kDa和62kDa之间(例如，约56kDa、约57kDa、约58kDa、约59kDa、约60kDa或约61kDa)。在优选的实施方案中，变体Fc结构域是包含两个变体Fc结构域单体的同二聚体(例如，其中每个变体Fc结构域单体包含SEQ ID NO:1-28中任一者的序列的同二聚体)。
在另一方面，本公开提供了包含本文所述的变体Fc结构域单体和至少一种治疗剂的缀合物，其中变体Fc结构域单体通过接头与所述至少一种治疗剂共价缀合。在一些实施方案中，该缀合物由式(1)描述：
其中每个A独立地为治疗剂；
每个E包含本文所述的变体Fc结构域单体；
L为接头；
n为1或2；
T为1至20的整数；并且
连接到E的波浪线表示每个L-A共价连接到E(例如，通过接头或键)，
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，每个接头与变体Fc结构域单体的赖氨酸残基缀合。
在一些实施方案中，治疗剂(A)是小分子治疗剂。在某些实施方案中，治疗剂(A)是单体(例如，单一)小分子治疗剂。在一些实施方案中，治疗剂(A)是小分子治疗剂的多聚体(例如，2种或更多种、3种或更多种、4种或更多种、或5种或更多种)。在一些实施方案中，当(A)是小分子治疗剂的多聚体(例如，2种或更多种、3种或更多种、4种或更多种、或5种或更多种)时，(A)中的每一者可以是相同的小分子剂或不同的小分子剂。在某些实施方案中，当治疗剂(A)是小分子剂的多聚体(例如，2种或更多种、3种或更多种、4种或更多种、或5种或更多种)时，小分子剂中的每一者通过本文所述的任何接头连接。在一些实施方案中，接头具有三价结构(例如，三价接头)。三价接头具有三个臂，其中每个臂共价连接到缀合物的组分(例如，第一臂与第一治疗剂缀合，第二臂与第二治疗剂缀合，第三臂与融合蛋白或变体Fc结构域单体缀合)。
在一些实施方案中，每个接头包括聚乙二醇(PEG)接头，其包含约2-10个(例如，2、3、4、5、6、7、8、9或10个)PEG单元。在一些实施方案中，三价接头的至少一个臂包含聚乙二醇(PEG)接头，其包含约2-10个(例如，2、3、4、5、6、7、8、9或10个)PEG单元。
在一些实施方案中，治疗剂(A)是抗病毒剂、抗真菌剂或抗细菌剂。在一些实施方案中，治疗剂是抗病毒剂。在一些实施方案中，治疗剂是抗真菌剂。在另外的实施方案中，治疗剂是抗细菌剂。
在一些实施方案中，缀合物为至少40kDa(例如，至少45kDa、至少50kDa、至少55kDa、至少60kDa、至少65kDa、至少70kDa、至少75kDa或至少80kDa)。在一些实施方案中，缀合物的质量介于约40kDa和约80kDa之间(例如，40kDa至50kDa、45kDa至55kDa、50kDa至60kDa、55kDa至65kDa、60kDa至70kDa、65kDa至75kDa或70kDa至80kDa)。在具体的实施方案中，缀合物的质量介于58kDa和70kDa之间(例如，约59kDa、约60kDa、或约61kDa、62kDa、63kDa、64kDa、65kDa、66kDa、67kDa、68kDa或69kDa)。
在另一方面，本公开提供了包含变体Fc结构域单体和至少一种多肽治疗剂的融合蛋白，其中变体Fc结构域单体通过接头与多肽治疗剂共价缀合。在一些实施方案中，该融合蛋白包含以下结构：
(P2-L2)n2-B-(L1-P1)n1
其中B为变体Fc结构域单体、包含变体Fc结构域单体的多肽或缀合物(例如，本文所述的任何缀合物)；P1和P2各自独立地为多肽治疗剂；L1和L2各自独立地为接头；并且n1和n2各自独立地为0或1，其中n1和n2中的至少一者为1。
在一些实施方案中，融合蛋白包含少于约500个氨基酸残基(例如，少于约495个、少于约490个、少于约485个、少于约480个、少于约475个、少于约470个、少于约465个、少于约460个、少于约455个、少于约450个、少于约445个、少于约440个、少于约435个、少于约430个、少于约425个、少于约420个、少于约415个、少于约410个、少于约405个、少于约400个、少于约395个、少于约390个、少于约385个、少于约380个、少于约375个、少于约370个、少于约365个、少于约360个、少于约355个、少于约350个、少于约345个、少于约340个、少于约335个、少于约330个、少于约325个、少于约320个、少于约315个、少于约310个、少于约305个、少于约300个、少于约295个、少于约290个、少于约285个、少于约280个、少于约275个、少于约270个、少于约265个、少于约260个或少于约255个)。在一些实施方案中，变体Fc结构域单体小于约50kDa(例如，小于约45kDa、小于约40kDa、小于约35kDa或小于约30kDa)。
在一些实施方案中，融合蛋白包含至少250个氨基酸残基(例如，至少约250个、至少约260个、至少约270个、至少约280个、至少约290个、至少约300个氨基酸残基、至少约310个、至少约320个、至少约330个、至少约340个、至少约350个、至少约360个、至少约370个、至少约380个、至少约390个、至少约400个、至少约410个、至少约420个、至少约430个、至少约440个、至少约450个、至少约460个、至少约470个、至少约480个或至少约490个)。在一些实施方案中，融合蛋白为至少约30kDa(例如，至少约35kDa、至少约40kDa或至少约45kDa)。
在一些实施方案中，融合蛋白包含250个至500个氨基酸残基(例如，250个至300个、300个至350个、350个至400个、200个至300个、250个至350个、300个至400个、350个至450个或400个至500个氨基酸残基)。在一些实施方案中，变体Fc结构域单体为30至50kDa(例如，30至35kDa、30至40kDa、35至45kDa或40至50kDa)。
在一些实施方案中，治疗性多肽各自独立地包含少于约200个氨基酸残基(例如，少于约195个、少于约190个、少于约185个、少于约180个、少于约175个、少于约170个、少于约165个、少于约160个、少于约155个、少于约150个、少于约145个、少于约140个、少于约135个、少于约130个、少于约125个、少于约120个、少于约115个、少于约110个、少于约105个、少于约100个、少于约95个、少于约90个、少于约85个、少于约80个、少于约75个、少于约70个、少于约65个、少于约60个、少于约55个、少于约50个、少于约45个、少于约40个、少于约35个、少于约30个、少于约25个、少于约20个或少于约15个氨基酸残基)。
在一些实施方案中，治疗性多肽各自独立地包含至少约10个氨基酸残基(例如，至少约15个、至少约20个、至少约25个、至少约30个、至少约35个、至少约40个、至少约45个、至少约50个、至少约55个、至少约60个、至少约65个、至少约70个、至少约75个、至少约80个、至少约85个、至少约90个、至少约95个氨基酸残基、至少约100个、至少约105个、至少约110个、至少约115个、至少约120个、至少约125个、至少约130个、至少约135个、至少约140个、至少约145个、至少约150个、至少约155个、至少约160个、至少约165个、至少约170个、至少约175个、至少约180个、至少约185个、至少约190个或至少约195个氨基酸残基)。
在一些实施方案中，n1为1，n2为0，并且融合蛋白包含以下结构：
B-L1-P1。
在一些实施方案中，接头(L1)与Fc结构域单体(B)的C-末端和多肽治疗剂(P1)的N-末端缀合。在一些实施方案中，接头(L1)与Fc结构域单体(B)的N-末端和多肽治疗剂(P1)的C-末端缀合。在一些实施方案中，L1是包含2至200个氨基酸的肽接头。在一些实施方案中，L1是包含5至25个氨基酸的肽接头。在一些实施方案中，L1是包含(GS)x、(GGS)x、(GGGGS)x、(GGSG)x、(SGGG)x中任一者的氨基酸序列的肽接头，其中x为1至10的整数。在一些实施方案中，当B、L1和P1表达为单个多肽链时。在一些实施方案中，接头(L1)与Fc结构域单体(B)的N-末端和多肽治疗剂(P1)的N-末端缀合。在一些实施方案中，接头(L1)与Fc结构域单体(B)的C-末端和多肽治疗剂(P1)的C-末端缀合。在一些实施方案中，L1包含与B和P1中的每一者共价缀合的化学接头。在一些实施方案中，B和P1表达为单独的多肽链，并且随后各自与L1共价缀合。
在一些实施方案中，n1为1，n2为1，并且融合蛋白包含以下结构：
P2-L2-B-L1-P1。
在一些实施方案中，接头(L2)与多肽治疗剂(P2)的C-末端和Fc结构域单体(B)的N-末端缀合，并且接头(L1)与Fc结构域单体(B)的C-末端和多肽治疗剂(P1)的N-末端缀合。在一些实施方案中，L1和L2各自为独立选择的包含2至200个氨基酸的肽接头。在一些实施方案中，L1和L2各自为独立选择的包含5至25个氨基酸的肽接头。在一些实施方案中，L1和L2各自为独立选择的包含(GS)x、(GGS)x、(GGGGS)x、(GGSG)x、(SGGG)x中任一者的氨基酸序列的肽接头，其中x为1至10的整数(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10)。在一些实施方案中，P2、L2、B、L1和P1一起表达为单个多肽链。在一些实施方案中，接头(L2)与多肽治疗剂(P2)的N-末端和Fc结构域单体(B)的N-末端缀合，并且接头(L1)与多肽治疗剂(P1)的N-末端和Fc结构域单体(B)的C-末端缀合。在一些实施方案中，接头(L2)与多肽治疗剂(P2)的C-末端和Fc结构域单体(B)的N-末端缀合，并且接头(L1)与多肽治疗剂(P1)的C-末端和Fc结构域单体(B)的C-末端缀合。在一些实施方案中，L2包含与B和P2中的每一者共价缀合的化学接头，并且L1包含与B和P1中的每一者共价缀合的化学接头。在一些实施方案中，P2、B和P1表达为单独的多肽链，P2和B随后各自与L2共价缀合，并且P1和B随后各自与L1共价缀合。
在本文所述任何方面的一些实施方案中，变体Fc结构域单体二聚化以形成Fc结构域。在一些实施方案中，Fc结构域中的每个变体Fc结构域单体具有相同的氨基酸序列，从而形成同二聚体Fc结构域。
在另一方面，本公开提供看一种药物组合物，其包含本文所述的任何变体Fc结构域单体、本文所述的任何缀合物、本文所述的任何融合蛋白或任何Fc结构域、以及药学上可接受的载体。
在另一方面，本公开提供了一种治疗或预防受试者的呼吸病症的方法，该方法包括向受试者施用本文所述的任何组合物。在一些实施方案中，呼吸病症是感染。在一些实施方案中，感染是病毒感染。在一些实施方案中，病毒感染选自包括RSV、流感、登革热、β冠状病毒(例如，COVID-19)和寨卡病毒的组。在一些实施方案中，感染是细菌感染。在一些实施方案中，呼吸病症选自包括慢性阻塞性肺病(COPD)、慢性支气管炎、囊性纤维化、支气管扩张和肺炎的组。
在一些实施方案中，上皮层流体中Fc结构域单体、缀合物、融合蛋白或Fc结构域的浓度比率是施用后2小时内血浆中Fc结构域单体、缀合物、融合蛋白或Fc结构域的浓度的至少30％。在一些实施方案中，浓度比率在施用后2小时内为至少45％。在一些实施方案中，浓度比率在施用后2小时内为至少55％。在一些实施方案中，浓度比率在施用后2小时内为至少60％。在上述的具体实施方案中，施用途径是通过注射，例如通过肌内、皮下、腹膜内或静脉内注射。在上述的具体实施方案中，施用途径是口服。
在另一方面，本公开提供了一种治疗或预防受试者的肝脏病症的方法，该方法包括向受试者施用本文所述的任何组合物。在一些实施方案中，肝脏病症是感染(例如，病毒感染，诸如甲型肝炎、乙型肝炎或丙型肝炎)、真菌感染或细菌感染。在一些实施方案中，肝脏病症选自包括原发性胆汁性胆管炎、原发性硬化性胆管炎、肝细胞癌、胆管癌、肝细胞腺瘤、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)、急性肝功能衰竭和肝硬化的组。
在另一方面，本公开提供了一种治疗或预防受试者的中枢神经系统(CNS)病症的方法，该方法包括向受试者施用本文所述的任何组合物。在一些实施方案中，CNS病症是感染。在一些实施方案中，感染是病毒感染、细菌感染或真菌感染。在一些实施方案中，病毒感染选自包括单纯疱疹病毒(HSV)1、HSV 2、爱泼斯坦-巴尔病毒(Epstein-Barr virus)、水痘带状疱疹病毒、脊髓灰质炎病毒、柯萨奇病毒、西尼罗河病毒、拉克罗斯病毒、西方马脑炎病毒、东方马脑炎病毒、玻瓦桑病毒或狂犬病病毒的组。在一些实施方案中，CNS病症选自包括癌症、阿尔茨海默病、帕金森病、癫痫、多发性硬化症、精神分裂症和脑膜炎的组。
在另一方面，本公开提供了一种治疗或预防受试者的肌肉病症的方法，该方法包括向受试者施用本文所述的任何组合物。在一些实施方案中，肌肉病症是肌炎或癌症。在一些实施方案中，肌炎由损伤、感染或免疫病症引起。
在另一方面，本公开提供了一种治疗或预防受试者的皮肤病症的方法，该方法包括向受试者施用本文所述的任何组合物。在一些实施方案中，皮肤病症是感染(例如，病毒感染(HSV 1、HSV 2或水痘带状疱疹病毒))、真菌感染或细菌感染。在一些实施方案中，皮肤病症选自包括湿疹、银屑病、痤疮、酒渣鼻、感冒疮、蜂窝组织炎、基底细胞癌、鳞状细胞癌和黑素瘤的组。
在另一方面，本公开提供了治疗或预防受试者的眼部病症的方法，该方法包括向受试者施用本文所述的任何组合物。在一些实施方案中，眼部病症是感染(例如，病毒感染(HSV 1或HSV 2))、真菌感染或细菌感染。在一些实施方案中，眼部病症选自年龄相关性黄斑变性、白内障和青光眼。
在另一方面，本公开提供了一种治疗或预防受试者的血管病症的方法，该方法包括向受试者施用本文所述的任何组合物。在一些实施方案中，血管病症是感染(例如，病毒感染、真菌感染或细菌感染)。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，变体Fc结构域单体(例如，Fc结构域的每个变体Fc结构域单体)包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列。在一些实施方案中，变体Fc结构域单体包含与SEQ ID NO:1的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，变体Fc结构域单体(例如，Fc结构域的每个变体Fc结构域单体)包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列。在一些实施方案中，变体Fc结构域单体包含与SEQ ID NO:2的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，变体Fc结构域单体(例如，Fc结构域的每个变体Fc结构域单体)包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列。在一些实施方案中，变体Fc结构域单体包含与SEQ ID NO:3的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，变体Fc结构域单体(例如，Fc结构域的每个变体Fc结构域单体)包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列。在一些实施方案中，变体Fc结构域单体包含与SEQ ID NO:4的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，变体Fc结构域单体(例如，Fc结构域的每个变体Fc结构域单体)包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列。在一些实施方案中，变体Fc结构域单体包含与SEQ ID NO:5的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，变体Fc结构域单体(例如，Fc结构域的每个变体Fc结构域单体)包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列。在一些实施方案中，变体Fc结构域单体包含与SEQ ID NO:6的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，变体Fc结构域单体(例如，Fc结构域的每个变体Fc结构域单体)包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列。在一些实施方案中，变体Fc结构域单体包含与SEQ ID NO:8的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，变体Fc结构域单体(例如，Fc结构域的每个变体Fc结构域单体)包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列。在一些实施方案中，变体Fc结构域单体包含与SEQ ID NO:9的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，变体Fc结构域单体(例如，Fc结构域的每个变体Fc结构域单体)包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列。在一些实施方案中，变体Fc结构域单体包含与SEQ ID NO:10的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，变体Fc结构域单体(例如，Fc结构域的每个变体Fc结构域单体)包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列。在一些实施方案中，变体Fc结构域单体包含与SEQ IDNO:11的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，变体Fc结构域单体(例如，Fc结构域的每个变体Fc结构域单体)包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列。在一些实施方案中，变体Fc结构域单体包含与SEQ ID NO:12的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，变体Fc结构域单体(例如，Fc结构域的每个变体Fc结构域单体)包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列。在一些实施方案中，变体Fc结构域单体包含与SEQ ID NO:13的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，变体Fc结构域单体(例如，Fc结构域的每个变体Fc结构域单体)包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列。在一些实施方案中，变体Fc结构域单体包含与SEQ ID NO:14的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，变体Fc结构域单体(例如，Fc结构域的每个变体Fc结构域单体)包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列。在一些实施方案中，变体Fc结构域单体包含与SEQ ID NO:15的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，变体Fc结构域单体(例如，Fc结构域的每个变体Fc结构域单体)包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列。在一些实施方案中，变体Fc结构域单体包含与SEQ ID NO:16的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，变体Fc结构域单体(例如，Fc结构域的每个变体Fc结构域单体)包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列。在一些实施方案中，变体Fc结构域单体包含与SEQ ID NO:17的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，变体Fc结构域单体(例如，Fc结构域的每个变体Fc结构域单体)包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列。在一些实施方案中，变体Fc结构域单体包含与SEQ ID NO:18的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，变体Fc结构域单体(例如，Fc结构域的每个变体Fc结构域单体)包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列。在一些实施方案中，变体Fc结构域单体包含与SEQ ID NO:19的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，变体Fc结构域单体(例如，Fc结构域的每个变体Fc结构域单体)包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列。在一些实施方案中，变体Fc结构域单体包含与SEQ ID NO:20的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，变体Fc结构域单体(例如，Fc结构域的每个变体Fc结构域单体)包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列。在一些实施方案中，变体Fc结构域单体包含与SEQ ID NO:21的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，变体Fc结构域单体(例如，Fc结构域的每个变体Fc结构域单体)包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列。在一些实施方案中，变体Fc结构域单体包含与SEQ ID NO:22的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，变体Fc结构域单体(例如，Fc结构域的每个变体Fc结构域单体)包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列。在一些实施方案中，变体Fc结构域单体包含与SEQ ID NO:23的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，变体Fc结构域单体(例如，Fc结构域的每个变体Fc结构域单体)包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列。在一些实施方案中，变体Fc结构域单体包含与SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，变体Fc结构域单体(例如，Fc结构域的每个变体Fc结构域单体)包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列。在一些实施方案中，变体Fc结构域单体包含与SEQ ID NO:25的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，变体Fc结构域单体(例如，Fc结构域的每个变体Fc结构域单体)包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列。在一些实施方案中，变体Fc结构域单体包含与SEQ ID NO:26的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，变体Fc结构域单体(例如，Fc结构域的每个变体Fc结构域单体)包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列。在一些实施方案中，变体Fc结构域单体包含与SEQ ID NO:27的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，变体Fc结构域单体(例如，Fc结构域的每个变体Fc结构域单体)包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列。在一些实施方案中，变体Fc结构域单体包含与SEQ ID NO:28的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
定义
为了便于理解本发明，下面定义了多个术语。本文所定义的术语具有与本发明相关的领域的普通技术人员通常理解的含义。诸如“一个”、“一种”和“该”的术语不旨在仅指单数实体，还包括其具体示例可用于说明的一般类别。本文中的术语用于描述本发明的具体实施方案，但其使用并不限制本发明，除非如权利要求书中所概述那样。
如本文所用，术语“变体Fc结构域单体”是指至少包含铰链结构域以及第二和第三抗体恒定结构域(CH2和CH3)或其功能片段(例如，能够进行以下操作的片段：(i)与另一变体Fc结构域单体二聚化以形成变体Fc结构域，以及(ii)结合Fc受体)的多肽链。在一些实施方案中，变体Fc结构域单体至少包含以下突变：K246X/M252Y/S254T/T256E，其中X是除Lys之外的任何氨基酸。在一些实施方案中，变体Fc结构域单体至少包含以下突变：K246X/V309D/Q311H/N434S，其中X是除Lys之外的任何氨基酸。在一些实施方案中，变体Fc结构域单体至少包含以下突变：K246X/M428L/N434S，其中X是除Lys之外的任何氨基酸。在K246X的一些实施方案中，X选自丝氨酸、甘氨酸、丙氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、精氨酸、组氨酸、谷氨酸和天冬氨酸。在一些实施方案中，变体Fc结构域单体还包含C220S突变。相对于相应的人野生型Fc序列，例如野生型人IgG序列，具有任何上述氨基酸取代的变体Fc结构域单体还可包含一个或多个(一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个或更多个)另外的突变(例如，氨基酸缺失、添加和/或取代)。变体Fc结构域单体可以是IgG亚型(例如，IgG1、IgG2a或IgG2b)(例如，IgG1)。变体Fc结构域单体不包含能够充当抗原识别区例如可变结构域或互补决定区(CDR)的免疫球蛋白的任何部分。在一些实施方案中，变体Fc结构域单体包含Fab区的10至20个(例如，11、12、13、14、15、16、17、18或19个)氨基酸残基。I在一些实施方案中，变体Fc结构域单体(例如，IgG重链，诸如IgG1)包含从Asn201或Glu216中的任一者(例如，Asn201、Val 202、Asn203、His204、Lys 205、Pro206、Ser207、Asn208、Thr209、Lys210、Val211、Asp212、Lys 213、Lys214、Val215或Glu216)延伸到重链的羧基末端(例如，Gly446或Lys447处)的区域。Fc区的C-末端Lys447可以存在或不存在，而不影响Fc区的结构或稳定性。可以表达包含C-末端Lys447的变体Fc结构域单体，然后可以在多肽表达时将其蛋白水解切割(例如，使用编码包含C-末端赖氨酸残基的变体Fc结构域单体的核酸构建体表达变体Fc结构域单体)。也可表达变体Fc结构域单体，而不包含C-末端Lys447。N-末端Asn201可以在多肽表达时脱酰胺。变体Fc结构域单体的N-末端Asn201可以存在或不存在。N-末端Asn201和/或C-末端Lys447的存在或不存在不影响变体Fc结构域单体的结构或稳定性。除非本文另有说明，否则变体Fc结构域单体中氨基酸残基的编号是根据抗体的EU编号系统，也称为Kabat EU索引，如例如Kabat等人，Sequences of Proteins ofImmunological Interest，第5版，Public Health Service,National Institutes ofHealth,Bethesda,MD,1991中所述。
如本文所用，术语“变体Fc结构域”是指例如能够结合Fc受体的两个变体Fc结构域单体的二聚体。在野生型Fc结构域中，两个Fc结构域单体通过两个CH3抗体恒定结构域之间的相互作用二聚化，在一些实施方案中，在两个二聚化Fc结构域单体的铰链结构域之间形成一个或多个二硫键。
如本文可互换使用的术语“Fab”或“抗原结合片段”是指抗体上结合抗原的区域。Fab是本领域的术语，并且其含义是本领域技术人员已知的。Fab区由每条重链和轻链的一个恒定区和一个可变区组成。每条重链由重链可变区(VH)和重链恒定区(CH)组成。重链恒定区可由三个结构域CH1、CH2和/或CH3组成。每条轻链由轻链可变区(VL)和轻链恒定区(CL)组成。VH区和VL区可进一步细分为超变区，称为“互补决定区”(CDR)，其中散布有更保守的区域，称为“框架区”(FR)。在抗体中，重链(例如，VH和CH区)通过铰链连接到Fc结构域单体。本文所述的变体Fc结构域单体可包含Fab结构域和铰链区的10和/或20个残基(例如，11、12、13、14、15、16、17、18或19个残基)。在某些实施方案中，变体Fc结构域单体的N-末端是氨基酸残基198-205中的任一者(对应于Fab结构域的残基)。在一些实施方案中，变体Fc结构域单体的N-末端是氨基酸残基201(例如，Asn 201)。在某些实施方案中，变体Fc结构域单体的N-末端是氨基酸残基202(例如，Val 202)。
术语“共价连接”是指缀合物的两个部分通过在缀合物的两个部分中的两个原子之间形成的共价键彼此连接。
如本文所用，“表面暴露的氨基酸”或“溶剂暴露的氨基酸”诸如表面暴露的半胱氨酸或表面暴露的赖氨酸是指蛋白质周围的溶剂可接近的氨基酸。表面暴露的氨基酸可以是蛋白质的天然存在的或工程化的变体(例如，取代或插入)。在一些实施方案中，表面暴露的氨基酸是当被取代时基本上不改变蛋白质的三维结构的氨基酸。
如本文所用的术语“任选取代的”是指具有0、1或更多个取代基，诸如0-25、0-20、0-10或0-5个取代基。取代基包括但不限于烷基、烯基、炔基、芳基、烷芳基、酰基、杂芳基、杂烷基、杂烯基、杂炔基、杂烷芳基、卤素、氧基、氰基、硝基、氨基、烷氨基、羟基、烷氧基、烷酰基、羰基、氨基甲酰基、胍基、脲基、脒基、上述任何基团或部分、以及上述任何基团或部分的杂型式。取代基包括但不限于F、Cl、甲基、苯基、苄基、OR、NR2、SR、SOR、SO2R、OCOR、NRCOR、NRCONR2、NRCOOR、OCONR2、RCO、COOR、烷基-OOCR、SO3R、CONR2、SO2NR2、NRSO2NR2、CN、CF3、OCF3、SiR3和NO2，其中每个R独立地为H、烷基、烯基、芳基、杂烷基、杂烯基或杂芳基，并且其中相同或相邻原子上的任选取代基中的两者可以连接以形成含有3-8个成员的稠合的、任选取代的芳族或非芳族的饱和或不饱和环，或者同一原子上的两个任选取代基可以连接以形成含有3-8个成员的任选取代的芳族或非芳族的饱和或不饱和环。
如本文所用的术语“氨基酸”意指天然存在的氨基酸和非天然存在的氨基酸。
如本文所用的术语“天然存在的氨基酸”意指包括Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr和Val的氨基酸。
如本文所用的术语“非天然存在的氨基酸”意指并非在哺乳动物中天然产生或存在的α氨基酸。非天然存在的氨基酸的实例包括D-氨基酸；具有与半胱氨酸的硫原子连接的乙酰氨基甲基基团的氨基酸；聚乙二醇化氨基酸；式NH2(CH2)nCOOH的ω氨基酸，其中n为2-6，中性非极性氨基酸，诸如肌氨酸、叔丁基丙氨酸、叔丁基甘氨酸、N-甲基异亮氨酸和正亮氨酸；氧甲硫氨酸；苯基甘氨酸；瓜氨酸；甲硫氨酸亚砜；磺基丙氨酸；鸟氨酸；二氨基丁酸；3-氨基丙氨酸；3-羟基-D-脯氨酸；2,4-二氨基丁酸；2-氨基戊酸；2-氨基辛酸，2-羧基哌嗪；哌嗪-2-羧酸，2-氨基-4-苯基丁酸；3-(2-萘基)丙氨酸和羟脯氨酸。其他氨基酸是α-氨基丁酸、α-氨基-α-甲基丁酸酯、氨基环丙烷甲酸酯、氨基异丁酸、氨基降冰片基甲酸酯、L-环己基丙氨酸、环戊基丙氨酸、L-N-甲基亮氨酸、L-N-甲基甲硫氨酸、L-N-甲基正缬氨酸、L-N-甲基苯丙氨酸、L-N-甲基脯氨酸、L-N-甲基丝氨酸、L-N-甲基色氨酸、D-鸟氨酸、L-N-甲基乙基甘氨酸、L-正亮氨酸、α-甲基-氨基异丁酸酯、α-甲基环己基丙氨酸、D-α-甲基丙氨酸、D-α-甲基精氨酸、D-α-甲基天冬酰胺、D-α-甲基天冬氨酸酯、D-α-甲基半胱氨酸、D-α-甲基谷氨酰胺、D-α-甲基组氨酸、D-α-甲基异亮氨酸、D-α-甲基亮氨酸、D-α-甲基赖氨酸、D-α-甲基甲硫氨酸、D-α-甲基鸟氨酸、D-α-甲基苯丙氨酸、D-α-甲基脯氨酸、D-α-甲基丝氨酸、D-N-甲基丝氨酸、D-α-甲基苏氨酸、D-α-甲基色氨酸、D-α-甲基酪氨酸、D-α-甲基缬氨酸、D-N-甲基丙氨酸、D-N-甲基精氨酸、D-N-甲基天冬酰胺、D-N-甲基天冬氨酸酯、D-N-甲基半胱氨酸、D-N-甲基谷氨酰胺、D-N-甲基谷氨酸酯、D-N-甲基组氨酸、D-N-甲基异亮氨酸、D-N-甲基亮氨酸、D-N-甲基赖氨酸、N-甲基环己基丙氨酸、D-N-甲基鸟氨酸、N-甲基甘氨酸、N-甲氨基异丁酸酯、N-(1-甲基丙基)甘氨酸、N-(2-甲基丙基)甘氨酸、D-N-甲基色氨酸、D-N-甲基酪氨酸、D-N-甲基缬氨酸、γ-氨基丁酸、L-叔丁基甘氨酸、L-乙基甘氨酸、L-高苯丙氨酸、L-α-甲基精氨酸、L-α-甲基天冬氨酸酯、L-α-甲基半胱氨酸、L-α-甲基谷氨酰胺、L-α-甲基组氨酸、L-α-甲基异亮氨酸、L-α-甲基亮氨酸、L-α-甲基甲硫氨酸、L-α-甲基正缬氨酸、L-α-甲基苯丙氨酸、L-α-甲基丝氨酸、L-α-甲基色氨酸、L-α-甲基缬氨酸、N-(N-(2,2-二苯乙基)氨基甲酰基甲基甘氨酸、1-羧基-1-(2,2-二苯基-乙氨基)环丙烷、4-羟脯氨酸、鸟氨酸、2-氨基苯甲酰基(邻氨基苯甲酰基)、D-环己基丙氨酸、4-苯基-苯丙氨酸、L-瓜氨酸、α-环己基甘氨酸、L-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-羧酸、L-噻唑烷-4-羧酸、L-高酪氨酸、L-2-呋喃基丙氨酸、L-组氨酸(3-甲基)、N-(3-胍基丙基)甘氨酸、O-甲基-L-酪氨酸、O-聚糖-丝氨酸、间酪氨酸、正酪氨酸、L-N,N′,N″-三甲基赖氨酸、高赖氨酸、正赖氨酸、N-聚糖天冬酰胺、7-羟基-1,2,3,4-四氢-4-氟苯丙氨酸、4-甲基苯丙氨酸、双-(2-吡啶甲基)胺、五氟苯丙氨酸、二氢吲哚-2-羧酸、2-氨基苯甲酸、3-氨基-2-萘酸、不对称二甲基精氨酸、L-四氢异喹啉-1-羧酸、D-四氢异喹啉-1-羧酸、1-氨基-环己烷乙酸、D/L-烯丙基甘氨酸、4-氨基苯甲酸、1-氨基-环丁烷羧酸、2或3或4-氨基环己烷羧酸、1-氨基-1-环戊烷羧酸、1-氨基茚满-1-羧酸、4-氨基-吡咯烷-2-羧酸、2-氨基四氢萘-2-羧酸、氮杂环丁烷-3-羧酸、4-苄基-吡咯烷-2-羧酸、叔丁基甘氨酸、b-(苯并噻唑基-2-基)-丙氨酸、b-环丙基丙氨酸、5,5-二甲基-1,3-噻唑烷-4-羧酸、(2R,4S)4-羟基哌啶-2-羧酸、(2S,4S)和(2S,4R)-4-(2-萘基甲氧基)-吡咯烷-2-羧酸、(2S,4S)和(2S,4R)4-苯氧基-吡咯烷-2-羧酸、(2R,5S)和(2S,5R)-5-苯基-吡咯烷-2-羧酸、(2S,4S)-4-氨基-1-苯甲酰基-吡咯烷-2-羧酸、叔丁基丙氨酸、(2S,5R)-5-苯基-吡咯烷-2-羧酸、1-氨基甲基-环己烷-乙酸、3,5-双-(2-氨基)乙氧基-苯甲酸、3,5-二氨基-苯甲酸、2-甲氨基-苯甲酸、N-甲基邻氨基苯甲酸、L-N-甲基丙氨酸、L-N-甲基精氨酸、L-N-甲基天冬酰胺、L-N-甲基天冬氨酸、L-N-甲基半胱氨酸、L-N-甲基谷氨酰胺、L-N-甲基谷氨酸、L-N-甲基组氨酸、L-N-甲基异亮氨酸、L-N-甲基赖氨酸、L-N-甲基正亮氨酸、L-N-甲基鸟氨酸、L-N-甲基苏氨酸、L-N-甲基酪氨酸、L-N-甲基缬氨酸、L-N-甲基-叔丁基甘氨酸、L-正缬氨酸、α-甲基-γ-氨基丁酸酯、4,4′-联苯丙氨酸、α-甲基环戊基丙氨酸、α-甲基-α-萘丙氨酸、α-甲基青霉胺、N-(4-氨基丁基)甘氨酸、N-(2-氨基乙基)甘氨酸、N-(3-氨基丙基)甘氨酸、N-氨基-α-甲基丁酸酯、α-萘丙氨酸、N-苄基甘氨酸、N-(2-氨基甲酰基乙基)甘氨酸、N-(氨基甲酰基甲基)甘氨酸、N-(2-羧乙基)甘氨酸、N-(羧甲基)甘氨酸、N-环丁基甘氨酸、N-环癸基甘氨酸、N-环庚基甘氨酸、N-环己基甘氨酸、N-环癸基甘氨酸、N-环十二烷基甘氨酸、N-环辛基甘氨酸、N-环丙基甘氨酸、N-环十一烷基甘氨酸、N-(2,2-二苯乙基)甘氨酸、N-(3,3-二苯丙基)甘氨酸、N-(3-胍基丙基)甘氨酸、N-(1-羟乙基)甘氨酸、N-(羟乙基)甘氨酸、N-(咪唑乙基)甘氨酸、N-(3-吲哚乙基)甘氨酸、N-甲基-γ-氨基丁酸酯、D-N-甲基甲硫氨酸、N-甲基环戊基丙氨酸、D-N-甲基苯丙氨酸、D-N-甲基脯氨酸、D-N-甲基苏氨酸、N-(1-甲基乙基)甘氨酸、N-甲基-萘丙氨酸、N-甲基青霉胺、N-(p-羟苯基)甘氨酸、N-(硫甲基)甘氨酸、青霉胺、L-α-甲基丙氨酸、L-α-甲基天冬酰胺、L-α-甲基-叔丁基甘氨酸、L-甲基乙基甘氨酸、L-α-甲基谷氨酸酯、L-α-甲基高苯丙氨酸、N-(2-甲硫乙基)甘氨酸、L-α-甲基赖氨酸、L-α-甲基正亮氨酸、L-α-甲基鸟氨酸、L-α-甲基脯氨酸、L-α-甲基苏氨酸、L-α-甲基酪氨酸、L-N-甲基-高苯丙氨酸、N-(N-(3,3-二苯丙基)氨基甲酰基甲基甘氨酸、L-焦谷氨酸、D-焦谷氨酸、O-甲基-L-丝氨酸、O-甲基-L-高丝氨酸、5-羟赖氨酸、α-羧基谷氨酸酯、苯基甘氨酸、L-哌啶酸(高脯氨酸)、L-高亮氨酸、L-赖氨酸(二甲基)、L-2-萘基丙氨酸、L-二甲基多巴(L-dimethyldopa)或L-二甲氧基-苯丙氨酸、L-3-吡啶基丙氨酸、L-组氨酸(苯甲酰基氧甲基)、N-环庚基甘氨酸、L-二苯丙氨酸、O-甲基-L-高酪氨酸、L-β-高赖氨酸、O-聚糖-苏氨酸、邻酪氨酸、L-N,N′-二甲基赖氨酸、L-高精氨酸、新色氨酸、3-苯并噻吩基丙氨酸、异喹啉-3-羧酸、二氨基丙酸、高半胱氨酸、3,4-二甲氧基苯丙氨酸、4-氯苯丙氨酸、L-1,2,3,4-四氢去甲哈尔曼(tetrahydronorharman)-3-羧酸、金刚烷基丙氨酸、对称二甲基精氨酸、3-羧基硫代吗啉、D-1,2,3,4-四氢去甲哈尔曼-3-羧酸、3-氨基苯甲酸、3-氨基-1-羧甲基-吡啶-2-酮、1-氨基-1-环己烷羧酸、2-氨基环戊烷羧酸、1-氨基-1-环丙烷羧酸、2-氨基茚满-2-羧酸、4-氨基-四氢噻喃-4-羧酸、氮杂环丁烷-2-羧酸、b-(苯并噻唑基-2-基)-丙氨酸、新戊基甘氨酸、2-羧甲基哌啶、b-环丁基丙氨酸、烯丙基甘氨酸、二氨基丙酸、高环己基丙氨酸、(2S,4R)-4-羟基哌啶-2-羧酸、八氢吲哚-2-羧酸、(2S,4R)和(2S,4R)-4-(2-萘基)、吡咯烷-2-羧酸、哌啶甲酸(nipecotic acid)、(2S,4R)和(2S,4S)-4-(4-苯基苄基)吡咯烷-2-羧酸、(3S)-1-吡咯烷-3-羧酸、(2S,4S)-4-三苯甲基巯基-吡咯烷-2-羧酸、(2S,4S)-4-巯基脯氨酸、叔丁基甘氨酸、N,N-双(3-氨丙基)甘氨酸、1-氨基-环己烷-1-羧酸、N-巯基乙基甘氨酸和硒代半胱氨酸。在一些实施方案中，氨基酸残基可以是带电荷的或极性的。带电荷的氨基酸包括丙氨酸、赖氨酸、天冬氨酸或谷氨酸、或它们的非天然存在的类似物。极性氨基酸包括谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸或色氨酸、或它们的非天然存在的类似物。特别预期在一些实施方案中，氨基酸中的末端氨基基团可以是酰氨基基团或氨基甲酸酯基团。
如本文所用的术语“接头”、“L”等是指融合蛋白或缀合物中的两种或更多种组分之间的共价联接或连接(例如，在治疗性肽剂与变体Fc结构域单体之间以形成融合蛋白、在两种治疗剂之间、在治疗剂与融合蛋白之间、在一种或多种治疗剂与融合蛋白之间、以及在一种或多种治疗剂与变体Fc结构域单体之间)。在一些实施方案中，接头是二价接头，例如连接治疗性肽剂和变体Fc结构域单体的接头、连接治疗剂与融合蛋白的接头或连接治疗剂与变体Fc结构域的接头。在一些实施方案中，本文所述的缀合物可包含具有三价结构的接头(例如，三价接头)。三价接头具有三个臂，其中每个臂共价连接到缀合物的组分(例如，第一臂与第一治疗剂缀合，第二臂与治疗剂缀合，第三臂与融合蛋白或变体Fc结构域单体缀合)。接头可以是化学接头，其是本领域技术人员已知的，并且在本文中详细描述。化学接头可用于连接两个小分子(例如，以形成二聚体)，将小分子单体或小分子二聚体连接到多肽，或者连接两个多肽以形成融合蛋白。接头也可以是肽接头。肽接头也可用于连接两个小分子，将小分子单体或小分子二聚体连接到多肽，或者连接到多肽以形成融合蛋白。
可用作接头的分子包含至少两个官能团，它们可以是相同或不同的，例如两个羧酸基团、两个胺基团、两个磺酸基团、羧酸基团和马来酰亚胺基团、羧酸基团和炔烃基团、羧酸基团和胺基团、羧酸基团和磺酸基团、胺基团和马来酰亚胺基团、胺基团和炔烃基团、或胺基团和磺酸基团。在二价接头中，第一官能团可与第一组分形成共价键，并且第二官能团可与第二组分形成共价键。在一些实施方案中，当接头是三价接头时，接头的两个臂可含有两个二羧酸，其中第一羧酸可与缀合物中的第一治疗剂形成共价键并且第二羧酸可与缀合物中的第二治疗剂形成共价键，并且接头的第三臂可与缀合物中的变体Fc结构域单体或融合蛋白形成共价键。二羧酸的实例在本文中进一步描述。在一些实施方案中，含有一个或多个马来酰亚胺基团的分子可用作接头，其中马来酰亚胺基团可与缀合物中的组分中的半胱氨酸形成碳-硫键。在一些实施方案中，含有一个或多个炔烃基团的分子可用作接头，其中炔烃基团可与缀合物中的组分中的叠氮基形成1,2,3-三唑键。在一些实施方案中，含有一个或多个叠氮基团的分子可用作接头，其中叠氮基团可与缀合物中的组分中的炔烃形成1,2,3-三唑键。在一些实施方案中，含有一个或多个双砜基团的分子可用作接头，其中双砜基团可与缀合物中的组分的胺基团形成键。在一些实施方案中，含有一个或多个磺酸基团的分子可用作接头，其中磺酸基团可与缀合物中的组分形成磺酰胺键。在一些实施方案中，含有一个或多个异氰酸酯基团的分子可用作接头，其中异氰酸酯基团可与缀合物中的组分形成脲键。在一些实施方案中，含有一个或多个卤代烷基基团的分子可用作接头，其中卤代烷基基团可与缀合物中的组分形成共价键，例如C-N键和C-O键。
在一些实施方案中，接头在两个或更多个组分之间提供空间、刚性和/或柔性。在一些实施方案中，接头可以是键，例如共价键。术语“键”是指化学键，例如酰胺键、二硫键、C-O键、C-N键、N-N键、C-S键或由化学反应形成的任何种类的键，例如化学缀合。在一些实施方案中，接头含有不超过250个原子。在一些实施方案中，接头含有不超过250个非氢原子。在一些实施方案中，接头的主链含有不超过250个原子。接头的“主链”是指接头中一起形成从缀合物的一部分到缀合物的另一部分的最短路径的原子。接头主链中的原子直接参与将缀合物的一部分连接到缀合物的另一部分。例如，与接头主链中的碳连接的氢原子不被认为直接参与将缀合物的一部分连接到缀合物的另一部分。
在一些实施方案中，接头可含有来源于例如合成聚合物(例如，聚乙二醇(PEG)聚合物)的合成基团。在一些实施方案中，接头可包含一个或多个氨基酸残基，例如D-氨基酸残基或L-氨基酸残基。在一些实施方案中，接头可以是氨基酸序列(例如，1-25个氨基酸、1-10个氨基酸、1-9个氨基酸、1-8个氨基酸、1-7个氨基酸、1-6个氨基酸、1-5个氨基酸、1-4个氨基酸、1-3个氨基酸、1-2个氨基酸或1个氨基酸序列)的残基。在一些实施方案中，接头可包含一个或多个(例如，1-100个、1-50个、1-25个、1-10个、1-5个或1-3个)任选取代的亚烷基、任选取代的杂亚烷基(例如，PEG单元)、任选取代的亚烯基、任选取代的杂亚烯基、任选取代的亚炔基、任选取代的杂亚炔基、任选取代的亚环烷基、任选取代的杂亚环烷基、任选取代的亚环烯基、任选取代的杂亚环烯基、任选取代的亚环炔基、任选取代的杂亚环炔基、任选取代的亚芳基、任选取代的杂亚芳基(例如，吡啶)、O、S、NRi(Ri为H、任选取代的烷基、任选取代的杂烷基、任选取代的烯基、任选取代的杂烯基、任选取代的炔基、任选取代的杂炔基、任选取代的环烷基、任选取代的杂环烷基、任选取代的环烯基、任选取代的杂环烯基、任选取代的环炔基、任选取代的杂环炔基、任选取代的芳基或任选取代的杂芳基)、P、羰基、硫代羰基、磺酰基、磷酸酯、磷酰基或亚氨基。例如，接头可包含一个或多个任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C1-C20杂亚烷基(例如，PEG单元)、任选取代的C2-C20亚烯基(例如，C2亚烯基)、任选取代的C2-C20杂亚烯基、任选取代的C2-C20亚炔基、任选取代的C2-C20杂亚炔基、任选取代的C3-C20亚环烷基(例如，亚环丙基、亚环丁基)、任选取代的C2-C20杂亚环烷基、任选取代的C4-C20亚环烯基、任选取代的C4-C20杂亚环烯基、任选取代的C8-C20亚环炔基、任选取代的C8-C20杂亚环炔基、任选取代的C5-C15亚芳基(例如，C6亚芳基)、任选取代的C3-C15杂亚芳基(例如，咪唑、吡啶)、O、S、NRi(Ri为H、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C1-C20杂烷基、任选取代的C2-C20烯基、任选取代的C2-C20杂烯基、任选取代的C2-C20炔基、任选取代的C2-C20杂炔基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基，任选取代的C4-C20环烯基、任选取代的C4-C20杂环烯基、任选取代的C8-C20环炔基、任选取代的C8-C20杂环炔基、任选取代的C5-C15芳基或任选取代的C3-C15杂芳基)、P、羰基、硫代羰基、磺酰基、磷酸酯、磷酰基或亚氨基。
如本文所用，术语“化学接头”包括本文所述的不包含多肽的任何接头。例如，化学接头可包含烃链，其任选地含有一个或多个杂原子(例如，任选取代的亚烷基、杂亚烷基、亚烯基、杂亚烯基、亚炔基或杂亚炔基)。化学接头可包含接头主链内的一个或多个环烷基、杂环炔基、芳基或杂芳基环。化学接头可包含聚乙二醇(PEG)聚合物，例如PEG2-PEG50，更优选地PEG2、PEG3、PEG4、PEG5、PEG6、PEG7、PEG8、PEG9或PEG10。化学接头可以是键。如本文更详细地描述(参见例如缀合化学物质)，化学接头可包含至少两个官能团，它们可以是相同或不同的，例如两个羧酸基团、两个胺基团、两个磺酸基团、羧酸基团和马来酰亚胺基团、羧酸基团和炔烃基团、羧酸基团和胺基团、羧酸基团和磺酸基团、胺基团和马来酰亚胺基团、胺基团和炔烃基团、或胺基团和磺酸基团。在二价接头中，例如，第一官能团可与第一组分形成共价键，并且第二官能团可与第二组分形成共价键。
如本文可互换使用，术语“肽接头”或“多肽接头”包括除包含两个或更多个氨基酸残基之外的任何接头。例如，肽接头可包含2个或更多个、3个或更多个、4个或更多个、5个或更多个、6个或更多个、7个或更多个、8个或更多个、9个或更多个、10个或更多个、15个或更多个、20个或更多个、25个或更多个、30个或更多个、40个或更多个、或50个或更多个氨基酸残基，它们例如通过肽键连接。肽接头的羧基末端可共价缀合(例如，通过肽键)到第一部分(例如，变体Fc结构域单体或治疗性肽剂)，并且肽接头的氨基末端可共价缀合(例如，通过肽键)到第二部分(例如，变体Fc结构域单体或治疗性肽剂)，从而缀合第一部分和第二部分并且允许第一部分与第二部分之间的空间和/或柔性。肽接头可由多核苷酸构建体表达或者化学合成并随后与第一部分和第二部分化学缀合。另选地，肽接头可与第一多肽(例如，变体Fc结构域单体或治疗性肽剂)和第二多肽(例如，变体Fc结构域单体或治疗性肽剂)串联表达，从而连接第一多肽和第二多肽以形成融合蛋白。
如本文所用，术语“同一性百分比(％)”是指候选序列(例如，Fc-IgG或其片段)中在比对所述序列并在必要时引入缺口以实现最大同一性百分比(即，可在候选序列和参考序列中的一者或两者中引入缺口以用于最佳比对，并且出于比较目的可忽略非同源序列)之后与参考序列的氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分比。用于确定同一性百分比目的的比对可以用本领域技术人员已知的各种方式实现，例如使用公众可获得的计算机软件，诸如BLAST、ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件。本领域技术人员可以确定用于测量比对的适当参数，包括在被比较的序列的全长上实现最大比对所需的任何算法。在一些实施方案中，给定候选序列相对于给定参考序列、与给定参考序列或针对给定参考序列(其可另选地表述为具有或包含相对于给定参考序列、与给定参考序列或针对给定参考序列的一些氨基酸序列同一性百分比的给定候选序列)的氨基酸序列同一性百分比如下计算：
100x(A/B的分数)
其中A为在候选序列和参考序列的比对中被评为相同的氨基酸残基的数目，并且其中B为参考序列中氨基酸残基的总数。在其中候选序列的长度不等于参考序列的长度的一些实施方案中，候选序列与参考序列的氨基酸序列同一性百分比将不等于参考序列与候选序列的氨基酸序列同一性百分比。
如果当如上所述进行最大对应性比对时，两个序列中的核苷酸或氨基酸序列是相同的，则认为两个多核苷酸或多肽序列是“相同的”。两个序列之间的比较通常通过在比较窗口上比较序列以鉴定和比较序列相似性的局部区域来进行。如本文所用的“比较窗口”是指至少约15个连续位置、约20个连续位置、约25个连续位置或更多个(例如，约30个至约75个连续位置或约40个至约50个连续位置)的区段，其中在两个序列最佳比对之后，可将序列与具有相同数目的连续位置的参考序列进行比较。
如本文所用，术语“融合蛋白”是指包含共价连接的两个或更多个肽、多肽或蛋白质的任何缀合物。所述两个或更多个肽、多肽或蛋白质可通过接头共价缀合，所述接头例如本文所述的任何接头，包括化学接头、肽接头或键。例如，融合蛋白可包含一种或多种治疗性肽剂和一种或多种变体Fc结构域单体。所述一种或多种治疗性肽剂和所述一种或多种变体Fc结构域单体可以由相同的多核苷酸序列(例如，可操作地连接的单一连续多核苷酸序列)编码并表达为单一多肽构建体。另选地，所述一种或多种治疗性肽剂和所述一种或多种变体Fc结构域单体可以由单独的多核苷酸(例如，不连续的并且可位于同一载体或分开的载体上的多核苷酸序列)编码，表达为单独的多肽构建体，并且随后通过本文所述的任何接头和/或缀合化学物质共价缀合。在一些情况下，融合蛋白的变体Fc结构域单体可通过接头(例如，本文所述的任何接头)与一种或多种(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10种或更多种)小分子治疗剂缀合。
如本文所用，术语“药物组合物”是指包含至少一种活性成分(例如，本文所述的式(1)的缀合物或融合蛋白)以及一种或多种赋形剂和稀释剂以使活性成分适合于施用方法的医药或药物制剂。本公开的药物组合物包含与本文所述的缀合物(例如，式(1)的缀合物)或融合蛋白相容的药学上可接受的组分。
如本文所用，术语“药学上可接受的载体”是指药物组合物中的赋形剂或稀释剂。例如，药学上可接受的载体可以是能够混悬或溶解本文所述的活性缀合物(例如，式(1)的缀合物)或融合蛋白的媒介物。药学上可接受的载体必须与制剂的其他成分相容并且对接受者无害。在本公开中，药学上可接受的载体必须为本文所述的缀合物或融合蛋白提供足够的药物稳定性。载体的性质随施用方式而不同。例如，对于口服施用，固体载体是优选的；对于静脉内施用，通常使用水溶液载体(例如，WFI和/或缓冲溶液)。
如本文所用的术语“药学上可接受的盐”表示本文所述的缀合物(例如，式(1)的缀合物)的盐，其在合理的医学判断范围内适用于本文所述的方法而无不当毒性、刺激和/或过敏反应。药学上可接受的盐是本领域熟知的。例如，药学上可接受的盐描述于以下文献中：Pharmaceutical Salts:Properties,Selection,and Use(P.H.Stahl和C.G.Wermuth编辑),Wiley-VCH,2008。所述盐可在本文所述缀合物的最终分离和纯化期间原位制备，或者通过使游离碱基团与合适的有机酸反应单独制备。
术语“药物与抗体比率”或“DAR”是指与本文所述的变体Fc结构域单体或变体Fc结构域缀合的小分子药物部分的平均数量(例如，小分子药物单体或二聚体的平均数量)。在本文所述的一些实施方案中，DAR由“T”表示(例如，在式(1)中)。如本文所用，与变体Fc结构域缀合的每种治疗剂对应于1.0的DAR值(例如，1.0的“T”值)。DAR也可计算为分子群体诸如变体Fc结构域缀合物群体的平均DAR。DAR值可以影响药物的功效、效力、药代动力学或毒性。
如本文所用，术语“抗病毒剂”是指本文所述的任一种缀合物(例如，式(1)的任一种缀合物)上的表现出抗病毒活性的药剂。抗病毒剂表现出的抗病毒活性可以针对任何病毒感染，例如病毒性脑膜炎、单纯疱疹病毒(HSV)1、HSV 2、爱泼斯坦-巴尔病毒、水痘带状疱疹病毒、脊髓灰质炎病毒、柯萨奇病毒、西尼罗河病毒、拉克罗斯病毒、西方马脑炎、东方马脑炎、玻瓦桑病毒、狂犬病病毒、呼吸道合胞病毒(RSV)、登革热、β冠状病毒(例如，COVID-19)、寨卡病毒或流感病毒的感染。在一些实例中，抗病毒剂通过干扰病毒结合、融合和/或进入细胞而表现出抗病毒活性。
术语“抗细菌剂”是指用于治疗细菌感染和/或预防、稳定或抑制细菌生长或杀死细菌的药剂。抗细菌剂可以是防止细菌进入受试者的细胞、组织或器官，抑制细菌在受试者的细胞、组织或器官中生长和/或杀死受试者的细胞、组织或器官内的细菌的药剂。在一些实例中，抗细菌剂通过干扰细菌的结合、融合和/或进入细胞而表现出抗细菌活性。抗细菌剂的实例在本文中进一步详细描述。
所谓“病毒感染”意指病毒(例如病毒性脑膜炎、单纯疱疹病毒(HSV)1、HSV 2、爱泼斯坦-巴尔病毒、水痘带状疱疹病毒、脊髓灰质炎病毒、柯萨奇病毒、西尼罗河病毒、拉克罗斯病毒、西方马脑炎、东方马脑炎、玻瓦桑病毒、狂犬病病毒、呼吸道合胞病毒(RSV)、登革热、β冠状病毒(例如，COVID-19)、寨卡病毒或流感病毒)在宿主生物体(例如，人类受试者)中的致病性生长。病毒感染可以是其中病毒群体的存在损害宿主身体的任何情况。因此，当过量的病毒群体存在于受试者体内或身体上时，或者当病毒群体的存在损害受试者的细胞或其他组织时，受试者“遭受”病毒感染。
所谓“细菌感染”意指细菌(例如，不动杆菌属(Acinetobacter spp.)(鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumanni))、狄氏拟杆菌(Bacteroides distasonis)、脆弱拟杆菌(Bacteroides fragilis)、卵形拟杆菌(Bacteroides ovatus)、多形拟杆菌(Bacteroidesthetaiotaomicron)、单形拟杆菌(Bacteroides uniformis)、普通拟杆菌(Bacteroidesvulgatus)、弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii)、克氏柠檬酸杆菌(Citrobacterkoser)、梭状梭菌(Clostridium clostridioforme)、产气荚膜梭菌(Clostridiumperfringens)、产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)、阴沟肠杆菌(Enterobactercloacae)、粪肠球菌(Enterococcus faecalis)、肠球菌属(Enterococcus spp.)(万古霉素敏感性和抗性分离株)、大肠杆菌(Escherichia coli)(包括产生ESBL和KPC的分离株)、迟缓真杆菌(Eubacterium lentum)、梭杆菌属(Fusobacterium spp.)、流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae)(包括β-内酰胺酶阳性分离株)、副流感嗜血杆菌(Haemophilusparainfluenzae)、肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)(包括产生ESBL和KPC的分离株)、产酸克雷伯氏菌(Klebsiella oxytoca)(包括产生ESBL和KPC的分离株)、嗜肺军团菌(Legionella pneumophilia)、卡他莫拉菌(Moraxella catarrhalis)、摩氏摩根菌(Morganella morganii)、支原体属(Mycoplasma spp.)、消化链球菌属(Peptostreptococcus spp.)、不解糖卟啉单胞菌(Porphyromonas asaccharolytica)、二路普雷沃氏菌(Prevotella bivia)、奇异变形杆菌(Proteus mirabilis)、普通变形杆菌(Proteus vulgaris)、雷氏普罗威登斯菌(Providencia rettgeri)、斯氏普罗威登斯菌(Providencia stuartii)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)、咽峡炎链球菌(Streptococcus anginosus)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)(甲氧西林敏感性和抗性分离株)、表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)(甲氧西林敏感性和抗性分离株)、嗜麦芽窄食单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)、无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)、星座链球菌(Streptococcus constellatus)、肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)(青霉素敏感性和抗性分离株)、酿脓链球菌(Streptococcus pyogenes))在宿主生物体(例如，人类受试者)中的致病性生长。细菌感染可以是其中细菌群体的存在损害宿主身体的任何情况。因此，当过量的细菌群体存在于受试者体内或身体上时，或者当细菌群体的存在损害受试者的细胞或其他组织时，受试者“遭受”细菌感染。
所谓“真菌感染”意指真菌(例如，毛癣菌属(Trichophyton)物种(例如，艾吉罗毛癣菌(T.ajelloi)、同心毛癣菌(T.concentricum)、马毛癣菌(T.equinum)、刺蝟毛癣菌(T.erinacei)、淡黄毛癣菌(T.flavescens)、光辉发癣菌(T.gloriae)、指间毛癣菌(T.interdigitale)、麦格尼毛癣菌(T.megnini)、须癣毛癣菌(T.mentagrophytes)、豆形毛癣菌(T.phaseoliforme)、红色毛癣菌(T.rubrum)、许兰毛癣菌(T.schoenleini)、猴毛癣菌(T.simii)、苏丹奈斯毛癣菌(T.soudanense)、土毛癣菌(T.terrestre)、断发毛癣菌(T.tonsurans)、范布鲁西米毛癣菌(T.vanbreuseghemii)、疣状毛癣菌(T.verrucosum)、紫色毛癣菌(T.violaceum)或杨德氏毛癣菌(T.yaoundei))、表皮癣菌属(Epidermophyton)物种(例如，絮状麦皮癣菌(E.floccosum)或斯托克表皮癣菌(E.stockdaleae))、念珠菌属(Candida)物种(例如，白色念珠菌(C.albicans)、近平滑念珠菌(C.parapsiliosis)、克柔念珠菌(C.krusei)、热带念珠菌(C.tropicalis)、光滑念珠菌(C.glabrata)、近平滑念珠菌(C.parapsilosis)、葡萄牙念珠菌(C.lusitaniae)、乳酒念珠菌(C.kefyr)、季也蒙念珠菌(C.guilliermondii)或都柏林念珠菌(C.dubliniensis))、小孢子菌属(Microsporum)物种(例如，犬小孢子菌(M.canis)、石膏样小孢子菌(M.gypseum)、奥杜安氏小孢子菌(M.audouini)、鸡小孢子菌(M.gallinae)、铁锈色小孢子菌(M.ferrugineum)、扭曲小孢子菌(M.distortum)、纳米小孢子菌(M.nanum)、库克小孢子菌(M.cookie)或范布瑞西米小孢子菌(M.vanbreuseghemii))、附球菌属(Epicoccum)物种(例如，黑附球菌(E.nigrum))、曲霉属(Aspergillus)物种(例如，萨氏曲霉(A.sydowii)、土曲霉(A.terreus)、黑曲霉(A.niger)、土曲霉(A.terreus)、烟曲霉(A.fumigatus)、黄曲霉(A.flavus)、棒曲霉(A.clavatus)、灰绿曲霉(A.glaucus)群、构巢曲霉(A.nidulans)、米曲霉(A.oryzae)、土曲霉(A.terreus)、焦曲霉(A.ustus)或杂色曲霉(A.versicolor))、拟青霉属(Paecilomyces)物种(例如，淡紫拟青霉(P.lilacinus)或宛氏拟青霉(P.variotii))、镰刀菌属(Fusarium)物种(例如，尖孢镰刀菌(F.oxysporum)、腐皮镰刀菌(F.solani)或半裸镰刀菌(F.semitectum))、枝顶孢属(Acremonium)物种(例如，紧密枝顶孢(A.strictum)、A.roseogiseum、瓜枝顶孢(A.cucurbitacearum)、基利枝顶孢(A.kiliense)、弯曲枝顶孢(A.curvatum)、A.comptosporum、纸细基格孢(Ulocladium chartarum)、互生枝顶孢(A.alternatum)或小翅孢壳(Emercellopsis minima))、毛壳属(Chaetomium)物种(例如，深褐毛壳(C.atrobrunneum)、绳生毛壳(C.funicola)、球毛壳(C.globosum)或瘤突毛壳(C.strumarium))、茎点霉属(Phoma)物种、帚霉属(Scopulariopsis)物种(例如，短柄帚霉(S.brevicaulis)、念珠帚霉(S.candida)、康氏帚霉(S.koningii)、顶孢帚霉(S.acremonium)、黄帚霉(S.flava)、灰质帚霉(S.cinerea)、S.trigonospora、布朗氏帚霉(S.brumptii)、S.chartarum、暗色帚霉(S.fusca)或S.asperula)、链格孢属(Alternaria)物种(例如，互隔链格孢(A.alternate)、纸链格孢(A.chartarum)、石竹链格孢(A.dianthicola)、A.geophilia、感染链格孢(A.infectoria)、匍柄链格孢(A.stemphyloides)或极细链格孢(A.teunissima))以及弯孢霉属(Curvularia)物种(例如，短孢弯孢霉(C.brachyspora)、棒状弯孢霉(C.clavata)、膝弯孢霉(C.geniculata)、新月弯孢霉(C.lunata)、苍白弯孢霉(C.pallescens)、塞内加尔弯孢霉(C.senegalensis)或疣状弯孢霉(C.verruculosa))在宿主生物体(例如，人类受试者)中的致病性生长。真菌感染可以是其中真菌群体的存在损害宿主机体的任何情况。因此，当过量的真菌群体存在于受试者体内或身体上时，或者当真菌群体的存在损害受试者的细胞或其他组织时，受试者“遭受”真菌感染。
如本文所用的术语“治疗(treating)”或“治疗(to treat)”是指对受试者的病症(例如，呼吸病症、肝脏病症、中枢神经系统病症、皮肤病症、眼部病症、血管病症或感染)的治疗性治疗。在一些实施方案中，治疗性治疗可减缓病症的进展，改善受试者的结果和/或消除病症。在一些实施方案中，与不存在治疗性治疗的病症的状态和/或病况相比，受试者的病症的治疗性治疗可减轻或改善与病症相关的一种或多种症状或病况，减轻病症的程度，稳定(即，不恶化)病症的状态，防止病症的扩散，并且/或者延迟或减缓病症的进展。
如本文所用，“组合疗法”或“组合施用”意指将两种或更多种活性剂作为所定义的治疗方案的一部分施用于受试者。治疗方案限定了每种药剂的剂量和施用周期，使得单独药剂对受试者的作用重叠。在一些实施方案中，缀合物和一种或多种药剂的递送是同时的或并行的，并且缀合物和一种或多种药剂可以共同配制。在一些实施方案中，缀合物和一种或多种药剂不是共同配制的，并且作为处方方案的一部分以顺序方式施用。在一些实施方案中，组合施用缀合物和一种或多种药剂或治疗使得症状或与病毒感染相关的其他参数的减少大于用单独递送的一种药剂或治疗或在不存在另一种的情况下观察到的减少。缀合物和一种或多种药剂的作用可以是部分累加的、完全累加的或大于累加的(例如，协同的)。顺序或实质上同时施用每种治疗剂可通过包括但不限于经口途径、静脉内途径、肌内途径以及通过粘膜组织直接吸收的任何适当的途径来实现。可通过相同途径或通过不同途径施用治疗剂。例如，本文所述的缀合物或融合蛋白可通过静脉内注射施用，而组合的第二治疗剂可通过另一途径，例如口服。
如本文所用的术语“受试者”可以是人、非人灵长类动物或其他哺乳动物，诸如但不限于狗、猫、马、牛、猪、火鸡、山羊、鱼、猴、鸡、大鼠、小鼠和绵羊。
如本文所用的术语“治疗有效量”是指能够有效地在受试者中诱导期望作用或治疗患有本文所述的病状或病症(例如，呼吸病症、肝脏病症、中枢神经系统病症、肌肉病症、皮肤病症、眼部病症、血管病症或感染(例如，病毒感染、真菌感染或细菌感染))的受试者的量，例如药物剂量。在本文中还应理解，“治疗有效量”可解释为以一个或多个剂量或以任何剂量或途径服用，和/或单独或与其他治疗剂(例如，本文所述的抗病毒剂)组合服用，给予期望的治疗和/或预防作用的量。例如，在施用用于治疗感染的药物组合物(例如，本文所述的式(1)的缀合物或融合蛋白)的上下文中，缀合物或融合蛋白的有效量是例如与不施用缀合物或融合蛋白获得的反应相比，足以预防、减缓或逆转感染(例如，病毒感染、真菌感染或细菌感染)的进展的量。
如本文所用，术语“小分子”是指大小为大约1nm的低分子量化合物(例如，具有小于900Da的化合物(例如，有机化合物)，其可以调控生物过程。在一些情况下，治疗剂是小分子治疗剂。在一些情况下，小分子药剂介于约300Da和约700Da之间(例如，约325Da、约350Da、约375Da、约400Da、约425Da、约450Da、约475Da、约500Da、约525Da、约550Da、约575Da、约600Da、约625Da、约650Da或约675Da)。
如本文所用的术语“约”表示至多±5％的偏差。例如，约10％是指9.5％至10.5％。
在数值范围内提供的任何数值包括上限和下限，以及包含在上限和下限内的任何数值。
本文所述缀合物的其他特征和优点将从以下详细描述和权利要求书中显而易见。
附图说明
图1是示出人IgG1(PDB ID 4W4N)的Fc结构域的晶体结构的一部分的图像，其示出工程化Fc变体中K246侧链以及M252、S254和T256(它们可以分别突变为Y、T和E)的位置，证明与人FcRn受体的结合增强。K246赖氨酸侧链的末端氮原子紧邻FcRn结合位点中残基252、254和256的侧链原子(约10-14埃)。与K246缀合的大化学基团可干扰FcRn结合。
图2是由具有SEQ ID NO:12的序列的Fc结构域单体形成的Fc结构域的非还原(NR)和还原(R)SDS-PAGE的图像。
具体实施方式
本公开提供了Fc结构域单体、包含Fc结构域单体的缀合物以及包含Fc结构域单体的融合蛋白，其中Fc结构域单体是亲本Fc多肽(例如，IgG1或IgG2多肽)的突变变体。
所述一个或多个突变可促进或维持Fc结构域单体与Fc受体(例如，新生儿Fc受体(FcRn))的相互作用。例如，当Fc结构域单体与一种或多种治疗性分子缀合时，缀合可能会干扰Fc结构域单体与FcRn的相互作用。FcRn结合是理想的，因为它与免疫细胞的募集和增加的半衰期相关。所描述的Fc结构域单体变体促进小分子与变体Fc的氨基酸位点的缀合，其中小分子与变体Fc的缀合使得对FcRn结合的破坏最小化。在一些实施方案中，突变掩盖变体Fc结构域单体上的缀合位点，使得小分子的缀合不发生在将干扰与Fc受体相互作用的位点。
Fc结构域单体可包含一个或多个有助于增加半衰期和/或功效的突变。所述一个或多个突变还可使制造期间的聚集最小化，从而增加生产并降低成本。Fc结构域单体还可优化大小(例如，如通过kDa或氨基酸残基测量)，以使向目标组织的组织分布最大化并且/或者使肾清除率最小化。
具体地，本公开的特征在于包含第246位的氨基酸突变(例如，K246X，其中X是非Lys的任何氨基酸，诸如K246S、K246G、K246A、K246T、K246N、K246Q、K246R、K246H、K246E或K246D)的变体Fc结构域单体。本公开的特征在于包含第246位、第252位、第254位和/或第256位的氨基酸突变(例如，K246X/M252Y/S254T/T256E突变)的变体Fc结构域单体。本公开还包括包含第246位、第309位、第311位和/或第434位的氨基酸突变(例如，K246X/V309D/Q311H/N434S突变)的变体Fc结构域单体。本公开还包括包含第246位、第428位和/或第434位的氨基酸突变(例如，K246X/M428L/N434S突变)的变体Fc结构域单体。本文所述的任何变体Fc结构域单体还可包含第220位氨基酸处的突变(例如，C220S)。
本公开还包括缀合物，其包含与一种或多种治疗剂缀合的一种或多种变体Fc结构域单体。本公开的特征还在于包含至少一种治疗性肽剂和至少一种变体Fc结构域单体或其缀合物的融合蛋白。变体Fc结构域单体(例如，两种缀合物或两种融合蛋白中的每一种的变体Fc结构域单体)可以二聚化以形成变体Fc结构域。
在一些情况下，变体Fc结构域单体结合免疫细胞(例如，嗜中性粒细胞)上的FcγRs(例如，FcRn、FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIc、FcγRIIIa和FcγRIIIb)，以激活吞噬作用和效应功能，诸如抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)，从而导致感染剂(例如，病毒、真菌或细菌)的吞噬和破坏。
变体Fc结构域单体及其缀合物和融合蛋白表现出期望的组织分布。因此，此类组合物可用于治疗病症(例如，呼吸病症、肝脏病症、中枢神经系统病症、皮肤病症、眼部病症、血管病症、抑制感染生长)的方法中，以及用于治疗感染(例如，病毒感染、真菌感染或细菌感染)的方法中。
I.变体Fc结构域单体和变体Fc结构域
变体Fc结构域单体包含铰链结构域、CH2抗体恒定结构域和CH3抗体恒定结构域。在一些实施方案中，变体Fc结构域包含第246位的氨基酸取代(例如，K246X，其中X是非Lys的任何氨基酸，诸如K246S、K246G、K246A、K246T、K246N、K246Q、K246R、K246H、K246E或K246DC220S)。在一些实施方案中，变体Fc结构域单体包含至少以下突变：K246X、M252Y、S254T和T256E，其中X不是Lys。在一些实施方案中，变体Fc结构域单体包含至少以下突变：K246X、V309D、Q311H和N434S，其中X不是Lys。在一些实施方案中，变体Fc结构域单体包含至少以下突变：K246X、M428L和N434S，其中X不是Lys。在一些实施方案中，变体Fc结构域还包含第220位的突变，例如C220S突变。氨基酸取代是相对于野生型Fc单体氨基酸序列的，例如野生型人IgG1或IgG2。
变体Fc结构域单体可以是免疫球蛋白抗体同种型IgG。变体Fc结构域单体也可以是任何免疫球蛋白抗体同种型(例如，IgG1、IgG2a或IgG2b)。变体Fc结构域单体可以是任何免疫球蛋白抗体同种异型(例如，IGHG1*01(即，G1m(za))、IGHG1*07(即，G1m(zax))、IGHG1*04(即，G1m(zav))、IGHG1*03(G1m(f))、IGHG1*08(即，G1m(fa))、IGHG2*01、IGHG2*06或IGHG2*02)(如例如Vidarsson等人，IgG subclasses and allotypes:from structure toeffector function.Frontiers in Immunology.5(520):1-17(2014)中所述)。变体Fc结构域单体也可以是任何物种，例如人、鼠或小鼠。变体Fc结构域单体的二聚体是可结合Fc受体的变体Fc结构域，所述Fc受体是位于白细胞表面上的受体。
在一些实施方案中，变体Fc结构域单体相对于具有SEQ ID NO:1-28中任一者的序列的变体Fc结构域单体包含一个或多个氨基酸取代、添加和/或缺失。
在一些实施方案中，本公开的变体Fc结构域单体或变体Fc结构域是非糖基化Fc结构域单体或Fc结构域(例如，保持与Fc受体(例如，FcRn)接合的Fc结构域单体或Fc结构域)。例如，Fc结构域是保持与Fc受体接合的非糖基化IgG1变体(例如，在糖基化基序的N297和/或T299处具有氨基酸取代的IgG1)。示例性非糖基化Fc结构域和用于制备非糖基化Fc结构域的方法是本领域已知的，例如，如Sazinsky S.L.等人，Aglycosylated immunoglobulinG1 variants productively engage activating Fc receptors,PNAS,2008,105(51):20167-20172中所述，该文献全文并入本文。在一些实施方案中，如本文所述的缀合物中变体Fc结构域单体中的Asn297可被Ala替代以防止N-连接的糖基化。
Fc区的C-末端Lys447可以存在或不存在，而不影响Fc区的结构或稳定性。Fc结构域单体多肽构建体可以由编码C-末端Lys447的核酸表达，其中Lys447在表达时被蛋白水解切割，因此基本上不存在于多肽中。本公开特别设想了还包含对应于Lys447的C-末端Lys的SEQ ID NO:1-28中的任一者。本公开特别设想了SEQ ID NO:1-28中的任一者，其中对应于Lys447的C-末端Lys不存在或基本上不存在。变体Fc结构域单体的N-末端Asn可以存在或不存在，而不影响变体Fc结构域单体的稳定性结构。本公开特别设想了不包含N-末端Asn残基的SEQ ID NO:1-28中的任一者。
在一些实施方案中，变体Fc结构域单体包含附加部分，例如纯化肽(例如，六组氨酸肽)，或连接到变体Fc结构域单体的N-末端或C-末端的信号序列(例如，IL2信号序列)。在一些实施方案中，缀合物中的变体Fc结构域单体不含有任何类型的抗体可变区，例如VH、VL、互补决定区(CDR)或高变区(HVR)。
在一些实施方案中，变体Fc结构域单体具有与下文所示SEQ ID NO:1-28中任一者的序列具有至少95％同一性(例如，97％、99％或99.5％同一性)的序列。在一些实施方案中，变体Fc结构域单体具有下文所示SEQ ID NO:1-28中任一者的序列。
在一些实施方案中，变体Fc结构域单体包含至少以下突变：K246X、M252Y、S254T和T256E，其中X不是Lys。例如，变体Fc结构域单体具有与下文所示SEQ ID NO:9-15中任一者的序列具有至少95％同一性(例如，97％、99％或99.5％同一性)的序列。在一些实施方案中，变体Fc结构域单体具有下文所示SEQ ID NO:9-15中任一者的序列。
在一些实施方案中，变体Fc结构域单体包含至少以下突变：K246X、V309D、Q311H和N434S，其中X不是Lys。例如，变体Fc结构域单体具有与下文所示SEQ ID NO:16-22中任一者的序列具有至少95％同一性(例如，97％、99％或99.5％同一性)的序列。在一些实施方案中，变体Fc结构域单体具有下文所示SEQ ID NO:16-22中任一者的序列。
在一些实施方案中，变体Fc结构域单体包含至少以下突变：K246X、M428L和N434S，其中X不是Lys。例如，变体Fc结构域单体具有与下文所示SEQ ID NO:23-28中任一者的序列具有至少95％同一性(例如，97％、99％或99.5％同一性)的序列。在一些实施方案中，变体Fc结构域单体具有下文所示SEQ ID NO:23-28中任一者的序列。
SEQ ID NO:1：成熟人IgG1 Fc；X1(第201位)为Asn或不存在；X2(第220位)为Cys或Ser；X3(第246位)为Ser、Gly、Ala、Thr、Asn、Gln、Arg、His、Glu或Asp；X4(第252位)为Met或Tyr；X5(第254位)为Ser或Thr；X6(第256位)为Thr或Glu；X7(第297位)为Asn或Ala；X8(第309位)为Leu或Asp；X9(第311位)为Gln或His；X10(第356位)为Asp或Glu；并且X11(第358位)为Leu或Met；X12(第428位)为Met或Leu；X13(第434位)为Asn或Ser；X14(第447位)为Lys或不存在；N-末端Fab残基加下划线；铰链残基用斜体表示
/>
SEQ ID NO:2：成熟人IgG1 Fc；Cys至Ser的取代(#)；X1为Asn或不存在；X2为Ser、Gly、Ala、Thr、Asn、Gln、Arg、His、Glu或Asp；X3为Asn或Ala；X4为Asp或Glu；并且X5为Leu或Met；X6为Lys或不存在；N-末端Fab残基加下划线；铰链残基用斜体表示
在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列，其中X2为Ser。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列，其中X2为Gly。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列，其中X2为Ala。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列，其中X2为Thr。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列，其中X2为Asn。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列，其中X2为Gln。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQID NO:2的氨基酸序列，其中X2为Arg。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列，其中X2为Glu。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列，其中X2为Asp。
在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列，其中X4为Asp，并且X5为Leu(对应于Fc同种异型G1m(fa))。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ IDNO:2的氨基酸序列，其中X4为Glu，并且X5为Met(对应于Fc同种异型G1m(f))。
SEQ ID NO:3：成熟人IgG1 Fc；Cys至Ser的取代(#)；X1为Ser、Gly、Ala、Thr、Asn、Gln、Arg、His、Glu或Asp；X2为Asn或Ala；X3为Asp或Glu；并且X4为Leu或Met；N-末端Fab残基加下划线；铰链残基用斜体表示
在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列，其中X1为Ser。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列，其中X1为Gly。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列，其中X1为Ala。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列，其中X1为Thr。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列，其中X1为Asn。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列，其中X1为Gln。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQID NO:3的氨基酸序列，其中X1为Arg。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列，其中X1为Glu。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列，其中X1为Asp。
在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列，其中X3为Asp，并且X4为Leu(对应于Fc同种异型G1m(fa))。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ IDNO:3的氨基酸序列，其中X3为Glu，并且X4为Met(对应于Fc同种异型G1m(f))。
SEQ ID NO:4：成熟人IgG1 Fc；Cys至Ser的取代(#)；Lys至Ser的取代(*)；X1为Asp或Glu；并且X2为Leu或Met；N-末端Fab残基加下划线；铰链残基用斜体表示
SEQ ID NO:5：成熟人IgG1 Fc；Cys至Ser的取代(#)；Lys至Ser的取代(*)；同种异型G1m(fa)(粗斜体字)；N-末端Fab残基加下划线；铰链残基用斜体表示
SEQ ID NO:6：成熟人IgG1 Fc；Cys至Ser的取代(#)；Lys至Ser的取代(*)；YTE三重突变(粗体和下划线)；同种异型G1m(f)(粗斜体字)；N-末端Fab残基加下划线；铰链残基用斜体表示
/>
SEQ ID NO:7：成熟人IgG1 Fc；Cys至Ser的取代(#)；Asn至Ala的取代(^)；X1为Ser、Gly、Ala、Thr、Asn、Gln、Arg、His、Glu或Asp；X2为Asp或Glu；并且X3为Leu或Met；N-末端Fab残基加下划线；铰链残基用斜体表示
SEQ ID NO:8：成熟人IgG1 Fc；Cys至Ser的取代(#)；Lys至Ser的取代(*)；Asn至Ala的取代(^)；X1为Asp或Glu；并且X2为Leu或Met；N-末端Fab残基加下划线；铰链残基用斜体表示
SEQ ID NO:9：成熟人IgG1 Fc；Cys至Ser的取代(#)；YTE三重突变(粗体和下划线)；X1为Asn或不存在；X2为Ser、Gly、Ala、Thr、Asn、Gln、Arg、His、Glu或Asp；X3为Asn或Ala；X4为Asp或Glu；并且X5为Leu或Met；X6为Lys或不存在；N-末端Fab残基加下划线；铰链残基用斜体表示
在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列，其中X2为Ser。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列，其中X2为Gly。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列，其中X2为Ala。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列，其中X2为Thr。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列，其中X2为Asn。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列，其中X2为Gln。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQID NO:9的氨基酸序列，其中X2为Arg。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列，其中X2为Glu。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列，其中X2为Asp。
在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列，其中X4为Asp，并且X5为Leu(对应于Fc同种异型G1m(fa))。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ IDNO:9的氨基酸序列，其中X4为Glu，并且X5为Met(对应于Fc同种异型G1m(f))。
SEQ ID NO:10：成熟人IgG1 Fc；Cys至Ser的取代(#)；YTE三重突变(粗体和下划线)；X1为Ser、Gly、Ala、Thr、Asn、Gln、Arg、His、Glu或Asp；X2为Asn或Ala；X3为Asp或Glu；并且X4为Leu或Met；N-末端Fab残基加下划线；铰链残基用斜体表示
在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列，其中X1为Ser。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列，其中X1为Gly。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列，其中X1为Ala。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列，其中X1为Thr。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列，其中X1为Asn。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列，其中X1为Gln。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列，其中X1为Arg。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列，其中X1为Glu。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ IDNO:10的氨基酸序列，其中X1为Asp。
在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列，其中X3为Asp，并且X4为Leu(对应于Fc同种异型G1m(fa))。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQID NO:10的氨基酸序列，其中X3为Glu，并且X4为Met(对应于Fc同种异型G1m(f))。
SEQ ID NO:11：成熟人IgG1 Fc；Cys至Ser的取代(#)；Lys至Ser的取代(*)；YTE三重突变(粗体和下划线)；X1为Asp或Glu；并且X2为Leu或Met；N-末端Fab残基加下划线；铰链残基用斜体表示
/>
SEQ ID NO:12：成熟人IgG1 Fc；Cys至Ser的取代(#)；Lys至Ser的取代(*)；YTE三重突变(粗体和下划线)；同种异型G1m(fa)(粗斜体字)；N-末端Fab残基加下划线；铰链残基用斜体表示
SEQ ID NO:13：成熟人IgG1 Fc；Cys至Ser的取代(#)；Lys至Ser的取代(*)；YTE三重突变(粗体和下划线)；同种异型G1m(f)(粗斜体字)；N-末端Fab残基加下划线；铰链残基用斜体表示
SEQ ID NO:14：成熟人IgG1 Fc；Cys至Ser的取代(#)；Asn至Ala的取代(^)；YTE三重突变(粗体和下划线)；X1为Ser、Gly、Ala、Thr、Asn、Gln、Arg、His、Glu或Asp；X2为Asp或Glu；并且X3为Leu或Met；N-末端Fab残基加下划线；铰链残基用斜体表示
SEQ ID NO:15：成熟人IgG1 Fc；Cys至Ser的取代(#)；Lys至Ser的取代(*)；Asn至Ala的取代(^)；YTE三重突变(粗体和下划线)；X1为Asp或Glu；并且X2为Leu或Met；N-末端Fab残基加下划线；铰链残基用斜体表示
SEQ ID NO:16：成熟人IgG1 Fc；Cys至Ser的取代(#)；DHS三重突变(粗体和下划线)；X1为Asn或不存在；X2为Ser、Gly、Ala、Thr、Asn、Gln、Arg、His、Glu或Asp；X3为Asn或Ala；X4为Asp或Glu；并且X5为Leu或Met；X6为Lys或不存在；N-末端Fab残基加下划线；铰链残基用斜体表示
在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列，其中X2为Ser。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列，其中X2为Gly。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列，其中X2为Ala。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列，其中X2为Thr。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列，其中X2为Asn。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列，其中X2为Gln。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列，其中X2为Arg。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列，其中X2为Glu。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ IDNO:1的氨基酸序列，其中X2为Asp。
在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列，其中X4为Asp，并且X5为Leu(对应于Fc同种异型G1m(fa))。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQID NO:16的氨基酸序列，其中X4为Glu，并且X5为Met(对应于Fc同种异型G1m(f))。
SEQ ID NO:17：成熟人IgG1 Fc；Cys至Ser的取代(#)；DHS三重突变(粗体和下划线)；X1为Ser、Gly、Ala、Thr、Asn、Gln、Arg、His、Glu或Asp；X2为Asn或Ala；X3为Asp或Glu；并且X4为Leu或Met；N-末端Fab残基加下划线；铰链残基用斜体表示
在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列，其中X1为Ser。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列，其中X1为Gly。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列，其中X1为Ala。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列，其中X1为Thr。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列，其中X1为Asn。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列，其中X1为Gln。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列，其中X1为Arg。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列，其中X1为Glu。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ IDNO:17的氨基酸序列，其中X1为Asp。
在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列，其中X3为Asp，并且X4为Leu(对应于Fc同种异型G1m(fa))。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQID NO:17的氨基酸序列，其中X3为Glu，并且X4为Met(对应于Fc同种异型G1m(f))。
SEQ ID NO:18：成熟人IgG1 Fc；Cys至Ser的取代(#)；Lys至Ser的取代(*)；DHS三重突变(粗体和下划线)；X1为Asp或Glu；并且X2为Leu或Met；N-末端Fab残基加下划线；铰链残基用斜体表示
SEQ ID NO:19：成熟人IgG1 Fc；Cys至Ser的取代(#)；Lys至Ser的取代(*)；DHS三重突变(粗体和下划线)；同种异型G1m(fa)(粗斜体字)；N-末端Fab残基加下划线；铰链残基用斜体表示
SEQ ID NO:20：成熟人IgG1 Fc；Cys至Ser的取代(#)；Lys至Ser的取代(*)；DHS三重突变(粗体和下划线)；同种异型G1m(f)(粗斜体字)；N-末端Fab残基加下划线；铰链残基用斜体表示
SEQ ID NO:21：成熟人IgG1 Fc；Cys至Ser的取代(#)；Asn至Ala的取代(^)；DHS三重突变(粗体和下划线)；X1为Ser、Gly、Ala、Thr、Asn、Gln、Arg、His、Glu或Asp；X2为Asp或Glu；并且X3为Leu或Met；N-末端Fab残基加下划线；铰链残基用斜体表示
SEQ ID NO:22：成熟人IgG1 Fc；Cys至Ser的取代(#)；Lys至Ser的取代(*)；Asn至Ala的取代(^)；DHS三重突变(粗体和下划线)；X1为Asp或Glu；并且X2为Leu或Met；N-末端Fab残基加下划线；铰链残基用斜体表示
SEQ ID NO:23：成熟人IgG1 Fc；Cys至Ser的取代(#)；LS双重突变(粗体和下划线)；X1为Asn或不存在；X2为Ser、Gly、Ala、Thr、Asn、Gln、Arg、His、Glu或Asp；X3为Asn或Ala；X4为Asp或Glu；并且X5为Leu或Met；X6为Lys或不存在；N-末端Fab残基加下划线；铰链残基用斜体表示
在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列，其中X2为Ser。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列，其中X2为Gly。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列，其中X2为Ala。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列，其中X2为Thr。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列，其中X2为Asn。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列，其中X2为Gln。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列，其中X2为Arg。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列，其中X2为Glu。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ IDNO:23的氨基酸序列，其中X2为Asp。
在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列，其中X4为Asp，并且X5为Leu(对应于Fc同种异型G1m(fa))。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQID NO:23的氨基酸序列，其中X4为Glu，并且X5为Met(对应于Fc同种异型G1m(f))。
SEQ ID NO:24：成熟人IgG1 Fc；Cys至Ser的取代(#)；LS双重突变(粗体和下划线)；X1为Ser、Gly、Ala、Thr、Asn、Gln、Arg、His、Glu或Asp；X2为Asn或Ala；X3为Asp或Glu；并且X4为Leu或Met；N-末端Fab残基加下划线；铰链残基用斜体表示
在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列，其中X1为Ser。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列，其中X1为Gly。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列，其中X1为Ala。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列，其中X1为Thr。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列，其中X1为Asn。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列，其中X1为Gln。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列，其中X1为Arg。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列，其中X1为Glu。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ IDNO:24的氨基酸序列，其中X1为Asp。
在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列，其中X3为Asp，并且X4为Leu(对应于Fc同种异型G1m(fa))。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQID NO:24的氨基酸序列，其中X3为Glu，并且X4为Met(对应于Fc同种异型G1m(f))。
SEQ ID NO:25：成熟人IgG1 Fc；Cys至Ser的取代(#)；Lys至Ser的取代(*)；LS双重突变(粗体和下划线)；X1为Asp或Glu；并且X2为Leu或Met；N-末端Fab残基加下划线；铰链残基用斜体表示
SEQ ID NO:26：成熟人IgG1 Fc；Cys至Ser的取代(#)；Lys至Ser的取代(*)；LS双重突变(粗体和下划线)；同种异型G1m(fa)(粗斜体字)；N-末端Fab残基加下划线；铰链残基用斜体表示
SEQ ID NO:27：成熟人IgG1 Fc；Cys至Ser的取代(#)；Lys至Ser的取代(*)；LS双重突变(粗体和下划线)；同种异型G1m(f)(粗斜体字)；N-末端Fab残基加下划线；铰链残基用斜体表示
SEQ ID NO:28：成熟人IgG1 Fc；Cys至Ser的取代(#)；Asn至Ala的取代(^)；LS双重突变(粗体和下划线)；X1为Ser、Gly、Ala、Thr、Asn、Gln、Arg、His、Glu或Asp；X2为Asp或Glu；并且X3为Leu或Met；N-末端Fab残基加下划线；铰链残基用斜体表示
SEQ ID NO:29：成熟人IgG1 Fc；Cys至Ser的取代(#)；Lys至Ser的取代(*)；Asn至Ala的取代(^)；LS双重突变(粗体和下划线)；X1为Asp或Glu；并且X2为Leu或Met；N-末端Fab残基加下划线；铰链残基用斜体表示
如本文所定义，变体Fc结构域包含通过CH3抗体恒定结构域之间的相互作用二聚化的两个变体Fc结构域单体，以及在两个二聚化变体Fc结构域单体的铰链结构域之间形成的一个或多个二硫键。在一些情况下，变体Fc结构域形成结合Fc受体的最小结构，所述Fc受体例如Fc-γ受体(即，Fcγ受体(FcγR))、Fc-α受体(即，Fcα受体(FcαR))、Fc-ε受体(即，Fcε受体(FcεR))和/或新生儿Fc受体(FcRn)。在一些实施方案中，本公开的Fc结构域结合Fcγ受体(例如，FcRn、FcγRI(CD64)、FcγRIIa(CD32)、FcγRIIb(CD32)、FcγRIIIa(CD16a)、FcγRIIIb(CD16b))和/或FcγRIV和/或新生儿Fc受体(FcRn)。
在一些实施方案中，本公开的变体Fc结构域或变体Fc结构域单体被工程化以增强与新生儿Fc受体(FcRn)的结合。增强与FcRn的结合可增加含Fc结构域的缀合物或融合蛋白的半衰期，例如，相对于具有相应的Fc结构域而不具有K246X突变、K246X/M252Y/S254T/T256E突变、K246X/V309D/Q311H/N434S突变、K246X/M428L/N434S突变、C220S/K246X/M252Y/S254T/T256E突变、C220S/K246X/V309D/Q311H/N434S突变、C220S/K246X/M428L/N434S突变或增强FcRn结合的其他突变的缀合物，所述变体Fc结构域单体或变体Fc结构域可将缀合物的半衰期增加5％、10％、15％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、200％、300％、400％、500％或更多。如本文所用，“对应于”特定氨基酸残基(例如，特定SEQ ID NO.的氨基酸残基)的氨基酸应理解为包括本领域技术人员将理解的与特定残基(例如，特定序列的残基)比对的任何氨基酸残基。例如，SEQ ID NO:1-28中的任一者可通过使氨基酸序列的“相应残基”突变而突变为包含N297(例如，N297A)突变。
在一些实施方案中，本公开的变体Fc结构域或变体Fc结构域单体具有SEQ ID NO:1-28中的任一者的序列，可进一步包含在N-末端(Xaa)x处另外的氨基酸和/或在C-末端(Xaa)z处另外的氨基酸，其中每个Xaa独立地为任何氨基酸，并且x和z为大于或等于零，通常小于100，优选地小于10并且更优选地为0、1、2、3、4或5的整数。
免疫细胞的激活
Fc-γ受体(FcγRs)结合免疫球蛋白G(IgG)的Fc部分并且在免疫激活和调控中起重要作用。例如，免疫复合物(IC)中的IgG Fc结构域以高亲和力接合FcγRs，从而触发调控免疫细胞激活的信号传导级联。人FcγR家族包括若干种激活受体(FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIc、FcγRIIIa和FcγRIIIb)和一种抑制性受体(FcγRIIb)。FcγR信号传导由含有用于激活FcγRs的免疫酪氨酸激活基序(ITAM)和用于抑制性受体FcγRIIb的免疫酪氨酸抑制性基序(ITIM)的细胞内结构域介导。在一些实施方案中，Fc结构域结合FcγR导致Src家族激酶的ITAM磷酸化；这激活Syk家族激酶并诱导包括PI3K和Ras途径的下游信号传导网络。
在一些情况下，在本文所述的缀合物和融合蛋白中，缀合物或融合蛋白的包含治疗剂的单体或二聚体的部分结合传染性病原体(例如，病毒颗粒、真菌或细菌)的表面暴露靶标，而缀合物或融合蛋白的变体Fc结构域部分结合免疫细胞上的FcγRs(例如，FcRn、FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIc、FcγRIIIa和FcγRIIIb)并且激活吞噬作用和效应功能，诸如抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)，从而导致传染性病原体被免疫细胞吞噬和破坏，并进一步增强缀合物的抗致病(例如，抗病毒、抗真菌或抗细菌)活性。可被本文所述缀合物激活的免疫细胞的实例包括但不限于巨噬细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、淋巴细胞、滤泡树突细胞、天然杀伤细胞和肥大细胞。
半衰期
生物半衰期(t1/2)是治疗剂将其最大浓度降低一半所花费的时间。治疗剂半衰期的改善可降低有效剂量。存在从患者变量(例如，年龄、血液循环、饮食、过量流体、低流体、性别、药物使用史、肾功能、肝功能、肥胖症、先前存在的病症等)到治疗特异性变量(例如，治疗制剂、药代动力学、施用方法、药物清除率(例如，肾、肝或肺)、组织分布和累积、治疗剂大小、电荷、pKa等)的影响半衰期的许多变量。对于肽治疗剂，短的血浆半衰期通常是由于快速的肾清除以及全身循环期间发生的酶降解。肽或蛋白质的修饰可导致血浆半衰期延长。在一些情况下，变体Fc结构域或融合蛋白被工程化以增加变体Fc结构域单体、缀合物或融合蛋白的半衰期。在一些实施方案中，本公开的变体Fc结构域或变体Fc结构域单体被工程化以增强与新生儿Fc受体(FcRn)的结合。与FcRn的结合增强可增加含Fc结构域的缀合物或融合蛋白的半衰期，例如，变体Fc结构域单体或变体Fc结构域可将缀合物的半衰期相对于不含突变的具有相应Fc结构域的缀合物增加5％、10％、15％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、200％、300％、400％、500％或更多，所述突变例如K246X突变、K246X/M252Y/S254T/T256E突变、K246X/V309D/Q311H/N434S突变、K246X/M428L/N434S突变、C220S/K246X/M252Y/S254T/T256E 突 变 、C220S/K246X/V309D/Q311H/N434S 突 变、C220S/K246X/M428L/N434S突变或增强FcRn结合的其他突变。在一些情况下，变体Fc结构域单体被工程化以包含至少220个残基。
肾清除
许多治疗性肽由于其大小而在体内具有短的半衰期(分钟)。肽的快速清除和短半衰期限制其发展为成功的药物。肽从体循环中快速清除的主要原因之一是肾清除。肾小球的孔径为约8nm，并且MW<2-25kDa的亲水性肽易于快速滤过肾脏的肾小球。在一些实施方案中，本文所述的变体Fc结构域单体和融合蛋白大于20kDa。在一些实施方案中，两种缀合物或融合蛋白的变体Fc结构域单体和融合蛋白可以二聚化以形成变体Fc结构域。在一些实施方案中，变体Fc结构域单体、缀合物或融合蛋白被工程化以降低肾清除率。降低的肾清除率可增加本文所述的缀合物或融合蛋白的变体Fc结构域单体的半衰期，例如，变体Fc结构域可包含至少约200个氨基酸(例如，至少200个、至少225个、至少约230个、至少约240个、至少约242个、至少约243个、至少约250个、至少约255个、至少约260个、至少约265个、至少约270个、至少约275个、至少约280个、至少约285个、至少约290个、至少约295个或至少约300个氨基酸)。
组织分布
在治疗剂进入体循环后，它被分布到身体的组织中。由于血液灌注、组织结合、区域Ph和细胞膜渗透性的不同，分布通常是不均匀的。药物进入组织的速率取决于流向组织的血流速率、组织质量和血液与组织之间的分配特性。血液与组织之间的分布平衡(当流入和流出速率相同时)在血管丰富的区域中更迅速地达到，除非跨细胞膜的扩散是限速步骤。大小、形状、电荷、靶标结合、FcRn和靶标结合机制、施用途径和制剂影响组织分布。
在一些情况下，变体Fc多肽被优化以分配到肺组织。在一些情况下，变体Fc结构域单体、缀合物和融合蛋白在上皮层流体中的分布浓度比率是施用后2小时内血浆中多肽、缀合物或融合蛋白浓度的至少30％。在某些实施方案中，浓度比率在施用后2小时内为至少45％。在一些实施方案中，浓度比率在施用后2小时内为至少55％。具体地，浓度比率在施用后2小时内为至少60％。
在一些实施方案中，变体Fc结构域单体包含400个氨基酸残基或更少、350个氨基酸残基或更少、300个氨基酸残基或更少、或250个氨基酸残基或更少。
在一些情况下，变体Fc多肽被优化以分布到肝、神经(例如，CNS)、肌肉、皮肤、眼部或血管组织。
在Fc多肽优先地分布到一种或多种特定组织的情况下，该多肽可用于治疗相应组织的病症(例如，将治疗剂递送到组织)。
Fc结构域单体的边界
变体Fc结构域单体的长度(例如，如通过N-末端和C-末端边界确定)可被优化以防止肾清除和增加向期望组织(例如，肺组织)的分布。抗体被划分为两个结构域：Fc(效应子)结构域和抗原结合片段(Fab)结构域，后者含有抗原结合区。本公开提供了变体Fc结构域单体，其包含在Fc结构域的N-末端处的Fab结构域的一部分。较小的Fc构建体(例如，缺乏Fab结构域的一部分的Fc构建体)表现出降低的半衰期，这可能是由于肾消除。为了解决该问题，通过在N-末端的一些Fab结构域中重新添加来反复延长Fc构建体，直到大小的进一步增加不导致改善(例如，在小鼠药代动力学实验中)。本公开提供了变体Fc结构域单体，其已被优化(例如，通过长度、质量、N-末端和/或C-末端边界以及突变变体)以实现期望的增加的半衰期和/或组织分布。
在一些实施方案中，变体Fc结构域单体的N-末端包含Fab结构域的10至20个残基(例如，11、12、13、14、15、16、17、18或19个残基)。在某些实施方案中，变体Fc结构域单体的N-末端是氨基酸残基198-205中的任一者。在一些实施方案中，变体Fc结构域单体的N-末端是氨基酸残基201(例如，Asn 201)。在某些实施方案中，变体Fc结构域单体的N-末端是氨基酸残基202(例如，Val 202)。在其他实施方案中，变体Fc结构域单体的C-末端是氨基酸残基437-447中的任一者。在另一个实施方案中，变体Fc结构域单体的C-末端是氨基酸残基446(例如，Gly 446)。在一些实施方案中，变体Fc结构域单体的C-末端是氨基酸残基447(例如，Lys 447)。
延长构建体需要添加铰链区的含有游离半胱氨酸残基(C220)的一部分，这产生了硫醇介导的聚集问题。C220被突变为丝氨酸(C220S)以避免该问题。
治疗剂递送
抗体分子的大尺寸可使得难以将靶向体系转运穿过细胞膜。在一些情况下，大的靶向体系可导致从血液循环中缓慢消除，这可最终导致骨髓毒性。此外，基于抗体的靶向体系的体内使用很昂贵，并且在重复注射此类制剂后可导致免疫原性。已成功制备比完整抗体小的抗体片段，但在许多情况下仍然过大。片段比完整抗体更容易到达细胞外空间。在一些情况下，变体Fc结构域单体可用于缀合物中以递送治疗剂。在一些情况下，变体Fc结构域形成结合Fc受体的最小结构，所述Fc受体例如Fc-γ受体(即，Fcγ受体(FcγR))、Fc-α受体(即，Fcα受体(FcαR))、Fc-ε受体(即，Fcε受体(FcεR))和/或新生儿Fc受体(FcRn)。在一些实施方案中，本公开的Fc结构域结合Fcγ受体(例如，FcRn、FcγRI(CD64)、FcγRIIa(CD32)、FcγRIIb(CD32)、FcγRIIIa(CD16a)、FcγRIIIb(CD16b))和/或FcγRIV和/或新生儿Fc受体(FcRn)。新生儿Fc受体的结合介导变体Fc结构域单体或其融合蛋白缀合物的内化，从而将治疗剂递送到细胞。内化后，内吞补救途径阻止变体Fc结构域单体或其缀合物或融合蛋白的降解。在一些情况下，变体Fc结构域的变体Fc结构域单体被工程化以增加新生儿Fc受体结合。
II.本公开的缀合物
本文提供了可用于治疗本文所述的病状或病症(例如，呼吸病症、肝脏病症、中枢神经系统病症、肌肉病症、皮肤病症、眼部病症、血管病症或感染(例如，病毒感染、真菌感染或细菌感染))的合成缀合物。本文所公开的缀合物(例如，由式(1)描述的缀合物)包含与一种或多种治疗剂(例如，一种或多种小分子治疗剂)缀合的变体Fc结构域。
不受理论束缚，在一些方面，本文所述的缀合物通过缀合物中的治疗剂与传染性病原体表面上的蛋白质之间的相互作用结合传染性病原体的表面暴露靶标(例如，病毒颗粒、真菌或细菌)。
本公开的缀合物包含与变体Fc结构域或变体Fc结构域单体缀合的治疗剂。本文所述的缀合物中的变体Fc结构域结合免疫细胞上的FcγRs(例如FcRn、FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIc、FcγRIIIa和FcγRIIIb)。本文所述的缀合物中的变体Fc结构域与免疫细胞上的FcγRs的结合激活吞噬作用和效应功能，诸如抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)，从而导致传染性病原体被免疫细胞吞噬和破坏，并进一步增强缀合物的活性。
在一些实施方案中，变体Fc结构域单体或变体Fc结构域与1、2、3、4、5、6、7、8、9、10种或更多种治疗剂缀合。在一些实施方案中，变体Fc结构域单体或变体Fc结构域与1-20、1-10、1-5、2-20、2-10、2-5、3-20、3-10、3-5、5-10、10-15或15-20种治疗剂缀合。在一些实施方案中，每种治疗剂与变体Fc结构域单体或变体Fc结构域的Lys残基缀合。在一些实施方案中，每种治疗剂与变体Fc结构域单体或变体Fc结构域的Cys残基缀合。在一些实施方案中，每种治疗剂与变体Fc结构域单体或变体Fc结构域的Lys或Cys残基缀合。
一种或多种治疗剂与Fc结构域单体或Fc结构域的缀合可干扰与Fc受体(例如，FcRn)的结合。本公开提供了变体Fc结构域单体和Fc结构域，所述变体Fc结构域单体和Fc结构域已被工程化以在与一个或多个小分子缀合(例如，经由与Fc结构域单体或Fc结构域的一个或多个氨基酸残基缀合的接头)时维持或增加与Fc受体(例如，FcRn)的结合。
K246侧链被确定为治疗性分子(例如，经由接头)与Fc结构域单体缀合的位点。K246在空间上邻近FcRn结合位点，并且与K246的缀合可干扰FcRn结合。在一些实施方案中，K246的突变与增强FcRn结合的一个或多个突变组合，诸如M252Y/S254T/T256E(YTE)突变、V309D/Q311H/N434S(DHS)突变或M428L/N434S(LS)突变。在一些实施方案中，K246的突变与促进表达和减少表达的构建体聚集的一个或多个突变组合，诸如C220(例如，C220S)处的突变。
在一些实施方案中，本文提供的缀合物由式(1)描述。在一些实施方案中，当n为2时，E(变体Fc结构域单体)二聚化以形成变体Fc结构域。
在一些实施方案中，缀合物的变体Fc结构域单体包含少于约300个氨基酸残基(例如，少于约300个、少于约295个、少于约290个、少于约285个、少于约280个、少于约275个、少于约270个、少于约265个、少于约260个、少于约255个、少于约250个、少于约245个、少于约240个、少于约235个、少于约230个、少于约225个或少于约220个氨基酸残基)。在一些实施方案中，缀合物的变体Fc结构域单体小于约40kDa(例如，小于约35kDa、小于约30kDa、小于约25kDa)。
在一些实施方案中，缀合物的变体Fc结构域单体包含至少200个氨基酸残基(例如，至少210个、至少220个、至少230个、至少240个、至少250个、至少260个、至少270个、至少280个、至少290个或至少300个氨基残基)。在一些实施方案中，变体Fc结构域单体为至少20kDa(例如，至少25kDa、至少30kDa或至少35kDa)。
在一些实施方案中，缀合物的变体Fc结构域单体包含200个至400个氨基酸残基(例如，200个至250个、250个至300个、300个至350个、350个至400个、200个至300个、250个至350个或300个至400个氨基酸残基)。在一些实施方案中，缀合物的变体Fc结构域单体的长度介于200个和300个氨基酸残基之间(例如，介于210个和300个之间、介于230个和300个之间、介于250个和300个之间、介于270个和300个之间、介于290个和300个之间、介于210个和290个之间、介于220个和280个之间、介于230个和270个之间、介于240个和260个之间、或介于245个和255个氨基酸残基之间)。在一些实施方案中，缀合物的变体Fc结构域单体为20至40kDa(例如，20至25kDa、25至30kDa、35至40kDa、20至30kDa、25至35kDa或30至40kDa)。在一些实施方案中，缀合物的变体Fc结构域单体的质量介于约20kDa和约40kDa之间(例如，20kDa至25kDa、25kDa至30kDa、30kDa至35kDa、35kDa至40kDa)。
在一些实施方案中，每个接头包括聚乙二醇(PEG)接头，其包含约2-10个(例如，2、3、4、5、6、7、8、9或10个)PEG单元。在一些实施方案中，三价接头的至少一个臂包含聚乙二醇(PEG)接头，其包含约2-10个(例如，2、3、4、5、6、7、8、9或10个)PEG单元。
在一些实施方案中，缀合物为至少40kDa(例如，至少45kDa、至少50kDa、至少55kDa、至少60kDa、至少65kDa、至少70kDa、至少75kDa或至少80kDa)。在一些实施方案中，缀合物的质量介于约40kDa和约80kDa之间(例如，40kDa至50kDa、45kDa至55kDa、50kDa至60kDa、55kDa至65kDa、60kDa至70kDa、65kDa至75kDa或70kDa至80kDa)。
在具体的实施方案中，缀合物包含变体Fc结构域单体，其包含230个至250个氨基酸残基(例如，231个氨基酸残基、232个氨基酸残基、233个氨基酸残基、234个氨基酸残基、235个氨基酸残基、236个氨基酸残基、237个氨基酸残基、238个氨基酸残基、239个氨基酸残基、240个氨基酸残基、241个氨基酸残基、242个氨基酸残基、243个氨基酸残基、244个氨基酸残基、245个氨基酸残基、246个氨基酸残基、247个氨基酸残基、248个氨基酸残基、249个氨基酸残基或250个氨基酸残基)，其通过接头(例如，连接到一个或多个(例如，1、2、3、4个或更多个)小分子的二聚接头或三聚接头(例如，包含2-10个PEG单元的接头))连接到平均1至10个(例如，1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0、9.5或10个)小分子。
本文所述的缀合物可使用本领域可用的化学合成技术来合成。在官能团不可用于缀合的情况下，可使用本领域熟知的常规化学合成技术衍生分子。在一些实施方案中，本文所述的缀合物含有一个或多个手性中心。该缀合物包括每种分离的立体异构形式以及不同程度的手性纯度的立体异构体混合物，包括外消旋混合物。其还涵盖可形成的各种非对映异构体、对映异构体和互变异构体。
在本文所述的缀合物中，连接到E的波浪线指示一种或多种(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20种)治疗剂可连接到变体Fc结构域单体。在一些实施方案中，当n为1时，一种或多种(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10种)治疗剂可连接到变体Fc结构域单体或变体Fc结构域。在一些实施方案中，当n为2时，一种或多种(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20种)治疗剂可连接到变体Fc结构域。本文所述的缀合物中的波浪线不能解释为一种或多种治疗剂与变体Fc结构域中的原子之间的单键。在一些实施方案中，当T为1时，一种治疗剂可连接到变体Fc结构域单体或变体Fc结构域中的原子。在一些实施方案中，当T为2时，两种治疗剂可连接到变体Fc结构域单体或变体Fc结构域中的原子。
如本文进一步描述，本文所述的缀合物中的接头(例如，L)可以是分支结构。如本文进一步描述，本文所述的缀合物中的接头(例如，L)可以是多价结构，例如分别具有两个或三个臂的二价或三价结构。在一些实施方案中，当接头具有三个臂时，两个臂可连接到第一治疗剂和第二治疗剂，第三个臂可连接到变体Fc结构域单体或变体Fc结构域。
在具有与一种或多种治疗剂共价连接的变体Fc结构域的缀合物中，如式(1)所示，当n为2时，两个变体Fc结构域单体(每个变体Fc结构域单体由E表示)二聚化以形成变体Fc结构域。
连接到变体Fc结构域的治疗剂的单体的缀合物
在一些实施方案中，本文所述的缀合物包含与治疗剂的一个或多个单体共价连接的变体Fc结构域单体或变体Fc结构域。变体Fc结构域单体和治疗剂的一个或多个单体的缀合物可通过将变体Fc结构域通过接头(诸如本文所述的任何接头)连接到治疗剂的每个单体来形成。
在具有与本文所述治疗剂的一个或多个单体共价连接的变体Fc结构域的缀合物中，连接到E的波浪线指示治疗剂的一个或多个(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个)单体可连接到变体Fc结构域单体或变体Fc结构域。在一些实施方案中，当n为1时，治疗剂的一个或多个(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)单体可连接到变体Fc结构域单体。在一些实施方案中，当n为2时，治疗剂的一个或多个(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个)单体可连接到变体Fc结构域。本文所述的缀合物中的波浪线不能解释为治疗剂的一个或多个单体与变体Fc结构域单体或变体Fc结构域中的原子之间的单键。在一些实施方案中，当T为1时，治疗剂的一个单体可连接到变体Fc结构域单体或变体Fc结构域中的原子。在一些实施方案中，当T为2时，治疗剂的两个单体可连接到变体Fc结构域单体或变体Fc结构域中的原子。在一些实施方案中，缀合的变体Fc结构域是本文所述的融合蛋白的一部分。
在一些实施方案中，第一A-L部分与E的赖氨酸残基(例如，E的表面暴露的赖氨酸残基的氮原子)特异性地缀合，并且第二A-L部分与E的半胱氨酸残基(例如，E的表面暴露的半胱氨酸残基的硫原子)特异性地缀合。在一些实施方案中，第一A-L部分与E的半胱氨酸残基(例如，E的表面暴露的半胱氨酸残基的硫原子)特异性缀合，并且第二A-L部分与E的赖氨酸残基(例如，E的表面暴露的赖氨酸残基的氮原子)特异性缀合。
如本文进一步描述，具有与本文所述的一种或多种治疗剂共价连接的变体Fc结构域单体或变体Fc结构域的缀合物中的接头(例如，L)可以是具有两个臂的二价结构。二价接头中的一个臂可连接到治疗剂，另一个臂可连接到变体Fc结构域单体或变体Fc结构域。
在具有与治疗剂的一个或多个单体共价连接的变体Fc结构域的缀合物中，如本文所述，当n为2时，两个变体Fc结构域单体(每个变体Fc结构域单体由E表示)二聚化以形成变体Fc结构域。
连接到变体Fc结构域的治疗剂的二聚体的缀合物
在一些实施方案中，本文所述的缀合物(例如，式(1)的缀合物)包含与治疗剂的一个或多个二聚体共价连接的变体Fc结构域单体或变体Fc结构域。变体Fc结构域单体和治疗剂的一个或多个二聚体的缀合物可通过将变体Fc结构域通过接头(诸如本文所述的接头)连接到治疗剂的每个二聚体来形成。第一治疗剂和第二治疗剂通过接头(诸如本文所述的接头)彼此连接。在一些实施方案中，在治疗剂是二聚体的情况下，每种治疗剂可以是相同的小分子药剂(例如，同二聚体)或不同的小分子药剂(例如，异二聚体)。
在具有与本文所述治疗剂的一个或多个二聚体共价连接的变体Fc结构域的缀合物中，连接到E的波浪线指示治疗剂的一个或多个(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个)二聚体可连接到变体Fc结构域单体或变体Fc结构域。在一些实施方案中，当n为1时，治疗剂的一个或多个(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)二聚体可连接到变体Fc结构域单体。在一些实施方案中，当n为2时，治疗剂的一个或多个(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个)二聚体可连接到变体Fc结构域。本文所述的缀合物中的波浪线不能解释为治疗剂的一个或多个二聚体与变体Fc结构域单体或变体Fc结构域中的原子之间的单键。在一些实施方案中，当T为1时，治疗剂的一个二聚体可连接到变体Fc结构域单体或变体Fc结构域中的原子。在一些实施方案中，当T为2时，治疗剂的两个单体可连接到变体Fc结构域单体或变体Fc结构域中的原子。在一些实施方案中，变体Fc结构域是本文所述的融合蛋白的一部分。
在一些实施方案中，第一A-L部分与E的赖氨酸残基(例如，E的表面暴露的赖氨酸残基的氮原子)特异性地缀合，并且第二A-L部分与E的半胱氨酸残基(例如，E的表面暴露的半胱氨酸残基的硫原子)特异性地缀合。在一些实施方案中，第一A-L部分与E的半胱氨酸残基(例如，E的表面暴露的半胱氨酸残基的硫原子)特异性缀合，并且第二A-L部分与E的赖氨酸残基(例如，E的表面暴露的赖氨酸残基的氮原子)特异性缀合。
如本文进一步描述，具有与本文所述治疗剂的一个或多个二聚体共价连接的变体Fc结构域单体或变体Fc结构域的缀合物中的接头(例如，L)可以是三价结构(例如，三价接头)。三价接头具有三个臂，其中每个臂共价连接到缀合物的组分(例如，第一臂与第一治疗剂缀合，第二臂与治疗剂缀合，第三臂与融合蛋白或变体Fc结构域单体缀合)。
在具有与治疗剂的一个或多个二聚体共价连接的变体Fc结构域的缀合物中，如本文所述，当n为2时，两个变体Fc结构域单体(每个变体Fc结构域单体由E表示)二聚化以形成变体Fc结构域。
III.融合蛋白
本公开的特征在于包含与至少一种(例如，一种或两种)治疗性肽剂缀合的至少一种变体Fc结构域单体的融合蛋白。本公开的示例性融合蛋白包含以下结构：(P2-L2)n2-B-(L1-P1)n1，其中B为变体Fc结构域单体(例如，包含SEQ ID NO:1-28中任一者的氨基酸序列的Fc结构域单体)或其缀合物；P1和P2各自独立地为治疗性肽剂；L1和L2各自独立地为接头(例如，化学接头或肽接头)；并且n1和n2各自独立地为0或1，其中n1和n2中的至少一者为1(例如，融合蛋白必须包含至少一种治疗性肽剂)。
在一些实施方案中，融合蛋白包含与一种治疗性肽剂缀合的一种变体Fc结构域单体。例如，n1为1，n2为0，并且融合蛋白包含以下结构：B-L1-P1。变体Fc结构域单体和治疗性肽剂可以任何取向缀合。当发生C至N缀合时，变体Fc结构域单体和治疗性肽剂可表达为包含多肽接头的单一多肽构建体，或者可分开表达并随后经由多肽或化学接头缀合。当发生C至C或N至N缀合时，变体Fc结构域单体和治疗性肽剂分开表达并随后例如经由化学或肽接头缀合。例如，接头(L1)可与变体Fc结构域单体(B)的C-末端和治疗性肽剂(P1)的N-末端缀合。另选地，接头(L1)可与变体Fc结构域单体(B)的N-末端和治疗性肽剂(P1)的C-末端缀合。另选地，接头(L1)与变体Fc结构域单体(B)的N-末端和治疗性肽剂(P1)的N-末端缀合。另选地，接头(L1)与变体Fc结构域单体(B)的C-末端和治疗性肽剂(P1)的C-末端缀合。
在一些实施方案中，融合蛋白包含与两种治疗性肽剂缀合的一种变体Fc结构域单体。例如，n1为1，n2为1，并且融合蛋白包含以下结构：P2-L2-B-L1-P1。如上所述，缀合可以任何取向发生，并且融合蛋白可表达为单一多肽构建体，或者可通过化学缀合组装。例如，接头(L2)可与治疗性肽剂(P2)的C-末端和变体Fc结构域单体(B)的N-末端缀合，并且接头(L1)可与变体Fc结构域单体(B)的C-末端和治疗性肽剂(P1)的N-末端缀合。另选地，接头(L2)可与治疗性肽剂(P2)的N-末端和变体Fc结构域单体(B)的N-末端缀合，并且接头(L1)可与治疗性肽剂(P1)的N-末端和变体Fc结构域单体(B)的C-末端缀合。另选地，接头(L2)可与治疗性肽剂(P2)的C-末端和变体Fc结构域单体(B)的N-末端缀合，并且接头(L1)可与治疗性肽剂(P1)的C-末端和变体Fc结构域单体(B)的C-末端缀合。
本公开还提供了一种缀合物，该缀合物包含：第一融合蛋白，该第一融合蛋白选自本文所述的治疗性肽剂-变体Fc结构域单体融合蛋白中的任一种；以及第二融合蛋白，该第二融合蛋白选自本文所述的治疗性肽剂-变体Fc结构域单体融合蛋白中的任一种；其中第一融合蛋白的变体Fc结构域单体(B)和第二融合蛋白的变体Fc结构域单体(B)二聚化以形成变体Fc结构域单体。在一些实施方案中，第一融合蛋白和第二融合蛋白具有相同的结构，并且缀合物是同二聚体。
IV.接头
接头是指本文所述缀合物中的两种或更多种组分之间(例如，本文所述缀合物中的两种治疗剂之间，本文所述缀合物中的治疗剂与变体Fc结构域单体或变体Fc结构域之间，以及本文所述缀合物中的两种治疗剂的二聚体与变体Fc结构域单体或变体Fc结构域之间)的联接或连接。
接头可以是简单的共价键如肽键、合成聚合物如聚乙二醇(PEG)聚合物或由化学反应产生的任何种类的键如化学缀合。在接头是肽键的情况下，一个蛋白质结构域的C-末端的羧酸基团可以与另一个蛋白质结构域的N-末端的氨基基团在缩合反应中反应以形成肽键。具体地，肽键可通过本领域熟知的常规有机化学反应由合成手段形成，或通过从宿主细胞天然产生而形成，其中串联的编码两种蛋白质的DNA序列的多核苷酸序列例如两个变体Fc结构域单体可通过宿主细胞中必需的分子机器例如DNA聚合酶和核糖体直接转录并翻译成编码两种蛋白质的连续多肽。
在接头是合成聚合物(例如，PEG聚合物)的情况下，聚合物可在每一端用反应性化学官能团官能化以与两种蛋白质的连接端处的末端氨基酸反应。
在接头(上述肽键除外)由化学反应制成的情况下，化学官能团例如胺、羧酸、酯、叠氮基或本领域常用的其他官能团可分别合成连接到一种蛋白质的C-末端和另一种蛋白质的N-末端。然后这两个官能团可通过合成化学方法反应以形成化学键，从而将这两种蛋白质连接在一起。此类化学缀合方法对于本领域技术人员是常规的。
肽接头
在本公开中，治疗性肽剂与变体Fc结构域单体之间的接头(例如L1或L2)可以是包含3-200个氨基酸(例如，3-200个、3-180个、3-160个、3-140个、3-120个、3-100个、3-90个、3-80个、3-70个、3-60个、3-50个、3-45个、3-40个、3-35个、3-30个、3-25个、3-20个、3-15个、3-10个、3-9个、3-8个、3-7个、3-6个、3-5个、3-4个、4-200个、5-200个、6-200个、7-200个、8-200个、9-200个、10-200个、15-200个、20-200个、25-200个、30-200个、35-200个、40-200个、45-200个、50-200个、60-200个、70-200个、80-200个、90-200个、100-200个、120-200个、140-200个、160-200个或180-200个氨基酸)的多肽。在一些实施方案中，治疗性肽剂与变体Fc结构域单体之间的接头(例如，L1或L2)是包含至少12个氨基酸诸如12-200个氨基酸(例如，12-200个、12-180个、12-160个、12-140个、12-120个、12-100个、12-90个、12-80个、12-70个、12-60个、12-50个、12-40个、12-30个、12-20个、12-19个、12-18个、12-17个、12-16个、12-15个、12-14个或12-13个氨基酸)(例如，14-200个、16-200个、18-200个、20-200个、30-200个、40-200个、50-200个、60-200个、70-200个、80-200个、90-200个、100-200个、120-200个、140-200个、160-200个、180-200个或190-200个氨基酸)的多肽。在一些实施方案中，治疗性肽剂与变体Fc结构域单体之间的接头(例如L1或L2)是含有12-30个氨基酸(例如，12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个氨基酸)的多肽。
合适的肽接头是本领域已知的，包括例如包含柔性氨基酸残基诸如甘氨酸和丝氨酸的肽接头。在优选的实施方案中，肽接头(例如，L1和L2)是包含(GS)x、(GGS)x、(GGGGS)x、(GGSG)x、(SGGG)x中任一者的氨基酸序列的肽接头，其中x为1至50的整数(例如，1-40、1-30、1-20、1-10或1-5)。
在一些实施方案中，肽接头仅含有甘氨酸残基，例如至少4个甘氨酸残基(例如，4-200个、4-180个、4-160个、4-140个、4-40个、4-100个、4-90个、4-80个、4-70个、4-60个、4-50个、4-40个、4-30个、4-20个、4-19个、4-18个、4-17个、4-16个、4-15个、4-14个、4-13个、4-12个、4-11个、4-10个、4-9个、4-8个、4-7个、4-6个或4-5个甘氨酸残基)(例如，4-200个、6-200个、8-200个、10-200个、12-200个、14-200个、16-200个、18-200个、20-200个、30-200个、40-200个、50-200个、60-200个、70-200个、80-200个、90-200个、100-200个、120-200个、140-200个、160-200个、180-200个或190-200个甘氨酸残基)。在一些实施方案中，接头具有4-30个甘氨酸残基(例如，4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个甘氨酸残基)。在一些实施方案中，与例如含有一个或多个丝氨酸残基的接头相比，仅含有甘氨酸残基的接头可以不是糖基化的(例如，O-连接的糖基化，也称为O-糖基化)或者可具有降低的糖基化水平(例如，降低的O-糖基化水平)(例如，用聚糖如木糖、甘露糖、唾液酸、岩藻糖(Fuc)和/或半乳糖(Gal)(例如，木糖)降低的O-糖基化水平)。
在一些实施方案中，与例如含有一个或多个丝氨酸残基的接头相比，仅含有甘氨酸残基的接头可以不是O-糖基化的(例如，O-木糖化)或者可具有降低的O-糖基化水平(例如，降低的O-木糖化水平)。
在一些实施方案中，与例如含有一个或多个丝氨酸残基的接头相比，仅含有甘氨酸残基的接头可能不经历蛋白水解或者可能具有降低的蛋白水解速率。
化学接头
在一些实施方案中，接头在本文所述缀合物和融合蛋白中的治疗剂与变体Fc结构域单体或变体Fc结构域之间或者在本文所述缀合物中的两种治疗剂之间提供空间、刚性和/或柔性。在一些实施方案中，接头可以是键，例如共价键，例如酰胺键、二硫键、C-O键、C-N键、N-N键、C-S键或由化学反应产生的任何种类的键，例如化学缀合。在一些实施方案中，接头(如式(1)中所示的L)包含不超过250个原子(例如，1-2个、1-4个、1-6个、1-8个、1-10个、1-12个、1-14个、1-16个、1-18个、1-20个、1-25个、1-30个、1-35个、1-40个、1-45个、1-50个、1-55个、1-60个、1-65个、1-70个、1-75个、1-80个、1-85个、1-90个、1-95个、1-100个、1-110个、1-120个、1-130个、1-140个、1-150个、1-160个、1-170个、1-180个、1-190个、1-200个、1-210个、1-220个、1-230个、1-240个或1-250个原子；250个、240个、230个、220个、210个、200个、190个、180个、170个、160个、150个、140个、130个、120个、110个、100个、95个、90个、85个、80个、75个、70个、65个、60个、55个、50个、45个、40个、35个、30个、28个、26个、24个、22个、20个、18个、16个、14个、12个、10个、9个、8个、7个、6个、5个、4个、3个、2个或1个原子)。在一些实施方案中，接头(L)包含不超过250个非氢原子(例如，1-2个、1-4个、1-6个、1-8个、1-10个、1-12个、1-14个、1-16个、1-18个、1-20个、1-25个、1-30个、1-35个、1-40个、1-45个、1-50个、1-55个、1-60个、1-65个、1-70个、1-75个、1-80个、1-85个、1-90个、1-95个、1-100个、1-110个、1-120个、1-130个、1-140个、1-150个、1-160个、1-170个、1-180个、1-190个、1-200个、1-210个、1-220个、1-230个、1-240个或1-250个非氢原子；250个、240个、230个、220个、210个、200个、190个、180个、170个、160个、150个、140个、130个、120个、110个、100个、95个、90个、85个、80个、75个、70个、65个、60个、55个、50个、45个、40个、35个、30个、28个、26个、24个、22个、20个、18个、16个、14个、12个、10个、9个、8个、7个、6个、5个、4个、3个、2个或1个非氢原子)。在一些实施方案中，接头(L)的主链包含不超过250个原子(例如，1-2个、1-4个、1-6个、1-8个、1-10个、1-12个、1-14个、1-16个、1-18个、1-20个、1-25个、1-30个、1-35个、1-40个、1-45个、1-50个、1-55个、1-60个、1-65个、1-70个、1-75个、1-80个、1-85个、1-90个、1-95个、1-100个、1-110个、1-120个、1-130个、1-140个、1-150个、1-160个、1-170个、1-180个、1-190个、1-200个、1-210个、1-220个、1-230个、1-240个或1-250个原子；250个、240个、230个、220个、210个、200个、190个、180个、170个、160个、150个、140个、130个、120个、110个、100个、95个、90个、85个、80个、75个、70个、65个、60个、55个、50个、45个、40个、35个、30个、28个、26个、24个、22个、20个、18个、16个、14个、12个、10个、9个、8个、7个、6个、5个、4个、3个、2个或1个原子)。接头的“主链”是指接头中一起形成从缀合物的一部分到缀合物的另一部分的最短路径的原子。接头主链中的原子直接参与将缀合物的一部分连接到缀合物的另一部分。例如，与接头主链中的碳连接的氢原子不被认为直接参与将缀合物的一部分连接到缀合物的另一部分。
可用于制备接头(L)的分子包含至少两个官能团，例如两个羧酸基团。在三价接头的一些实施方案中，接头的两个臂可含有两个二羧酸，其中第一羧酸可与缀合物中的第一治疗剂形成共价键并且第二羧酸可与缀合物中的第二治疗剂形成共价键，并且接头的第三臂可与本文所述的缀合物或融合蛋白中的变体Fc结构域或变体Fc结构域单体形成共价键(例如，C-O键)。在二价接头的一些实施方案中，二价接头可含有两个羧酸，其中第一羧酸可与缀合物中的一种组分(例如，治疗剂)形成共价键，并且第二羧酸可与缀合物中的另一种组分(例如，变体Fc结构域单体或变体Fc结构域)形成共价键(例如，C-S键或C-N键)。
在一些实施方案中，二羧酸分子可用作接头(例如，二羧酸接头)。例如，在含有与治疗剂的一个或多个二聚体共价连接的变体Fc结构域单体或变体Fc结构域的缀合物中，二羧酸分子中的第一羧酸可与第一治疗剂的羟基或胺基形成共价键，并且第二羧酸可与第二治疗剂的羟基或胺基形成共价键。在一些情况下，当治疗剂上没有反应性基团(例如，羧酸、羟基或胺)可用时，可以不破坏治疗剂活性的方式将反应性基团(例如，羧酸、羟基或胺)引入治疗剂中。
在一些实施方案中，二羧酸分子诸如本文所述的那些可被进一步官能化以包含一个或多个另外的官能团。二羧酸可被进一步官能化，例如以提供与本文所述的变体Fc结构域单体、变体Fc结构域或融合蛋白的连接点(例如，通过接头，诸如PEG接头)。
在一些实施方案中，当治疗剂连接到变体Fc结构域单体或变体Fc结构域时，连接基团可包含含有间隔1至25个原子的羧酸部分和氨基部分的部分。
在一些实施方案中，连接基团可包含含有羧酸部分和氨基部分的部分，诸如本文所述的那些，其可被进一步官能化以包含一个或多个另外的官能团。此类连接基团可被进一步官能化，例如以提供与本文所述的变体Fc结构域单体、变体Fc结构域或融合蛋白的连接点(例如，通过接头，诸如PEG接头)。
在一些实施方案中，当治疗剂连接到变体Fc结构域单体或变体Fc结构域时，连接基团可包含含有间隔1至25个原子的两个或更多个氨基部分(例如，二氨基部分)的部分。
在一些实施方案中，连接基团可包含二氨基部分，诸如本文所述的二氨基部分，其可被进一步官能化以包含一个或多个另外的官能团。此类二氨基连接基团可被进一步官能化，例如以提供与本文所述的变体Fc结构域单体、变体Fc结构域或融合蛋白的连接点(例如，通过接头，诸如PEG接头)。
在一些实施方案中，含有叠氮基的分子可用于形成接头，其中叠氮基可经历与炔烃的环加成以形成1,2,3-三唑键。在一些实施方案中，含有炔烃基的分子可用于形成接头，其中炔烃基可经历与叠氮基的环加成以形成1,2,3-三唑键。在一些实施方案中，含有马来酰亚胺基团的分子可用于形成接头，其中马来酰亚胺基团可与半胱氨酸反应以形成C-S键。在一些实施方案中，含有一个或多个磺酸基团的分子可用于形成接头，其中磺酸基团可与治疗剂中的连接氮形成磺酰胺键。在一些实施方案中，含有一个或多个异氰酸酯基团的分子可用于形成接头，其中异氰酸酯基团可与治疗剂中的连接氮形成脲键。在一些实施方案中，含有一个或多个卤代烷基的分子可用于形成接头，其中卤代烷基可与治疗剂形成共价键，例如C-N键和C-O键。
在一些实施方案中，接头(L)可含有来源于例如合成聚合物(例如，聚乙二醇(PEG)聚合物)的合成基团。在一些实施方案中，接头可包含一个或多个氨基酸残基。在一些实施方案中，接头可以是氨基酸序列(例如，1-25个氨基酸、1-10个氨基酸、1-9个氨基酸、1-8个氨基酸、1-7个氨基酸、1-6个氨基酸、1-5个氨基酸、1-4个氨基酸、1-3个氨基酸、1-2个氨基酸或1个氨基酸序列)。在一些实施方案中，接头(L)可包含一个或多个任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C1-C20杂亚烷基(例如，PEG单元)、任选取代的C2-C20亚烯基(例如，C2亚烯基)、任选取代的C2-C20杂亚烯基、任选取代的C2-C20亚炔基、任选取代的C2-C20杂亚炔基、任选取代的C3-C20亚环烷基(例如，亚环丙基、亚环丁基)、任选取代的C3-C20杂亚环烷基、任选取代的C4-C20亚环烯基、任选取代的C4-C20杂亚环烯基、任选取代的C8-C20亚环炔基、任选取代的C8-C20杂亚环炔基、任选取代的C5-C15亚芳基(例如，C6亚芳基)、任选取代的C2-C15杂亚芳基(例如，咪唑、吡啶)、O、S、NRi(Ri为H、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C1-C20杂烷基、任选取代的C2-C20烯基、任选取代的C2-C20杂烯基、任选取代的C2-C20炔基、任选取代的C2-C20杂炔基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C3-C20杂环烷基，任选取代的C4-C20环烯基、任选取代的C4-C20杂环烯基、任选取代的C8-C20环炔基、任选取代的C8-C20杂环炔基、任选取代的C5-C15芳基或任选取代的C2-C15杂芳基)、P、羰基、硫代羰基、磺酰基、磷酸酯、磷酰基或亚氨基。
缀合化学物质
可使用熟知的有机化学合成技术和方法实现使用接头的缀合物中的两种或更多种组分的共价缀合。两种组分上的互补官能团可彼此反应以形成共价键。互补反应性官能团的实例包括但不限于例如马来酰亚胺和半胱氨酸、胺和活化羧酸、硫醇和马来酰亚胺、活化磺酸和胺、异氰酸酯和胺、叠氮基和炔烃、以及烯烃和四嗪。与多肽(例如，变体Fc结构域单体、变体Fc结构域或融合蛋白)的位点特异性缀合可使用本领域已知的技术实现。小分子与Fc结构域的Fc结构域单体(例如，本文所述的变体Fc结构域单体或变体Fc结构域)的位点特异性缀合的示例性技术提供于Agarwall.P.等人，Bioconjugate Chem.26:176-192(2015)中。
能够与氨基反应的官能团的其他实例包括例如烷基化剂和酰化剂。代表性烷化剂包括：(i)α-卤代乙酰基，例如XCH2CO-(其中X＝Br、Cl或I)；(ii)N-马来酰亚胺基，其可通过Michael型反应或通过与环羰基加成的酰化反应来与氨基反应；(iii)芳基卤，例如硝基卤代芳基；(iv)卤代烷；(v)能够与氨基形成席夫碱的醛或酮；(vi)环氧化物，例如表氯醇和双环氧乙烷，其可与氨基、巯基或酚羟基反应；(vii)含氯的均三嗪，其对亲核试剂如氨基、巯基和羟基具有反应性；(viii)氮丙啶，其通过开环对亲核试剂如氨基具有反应性；(ix)方酸二乙酯；以及(x)α-卤代烷基醚。
氨基反应性酰化基团的实例包括例如(i)异氰酸酯和异硫氰酸酯；(ii)磺酰氯；(iii)酰基卤；(iv)活性酯，例如硝基苯基酯或N-羟基琥珀酰亚胺基酯，或其衍生物(例如，叠氮基-PEG2-PEG40-NHS酯)；(v)酸酐，例如混合的、对称的或N-羧酸酐；(vi)酰叠氮；以及(vii)亚氨酸酯。醛和酮可以与胺反应以形成席夫碱，其可通过还原胺化来稳定。
应当了解，某些官能团可在反应之前转化为其他官能团，例如以赋予额外反应性或选择性。可用于此目的的方法的实例包括使用诸如二羧酸酐的试剂将胺转化为羧基；使用诸如N-乙酰基高半胱氨酸硫代内酯、S-乙酰基巯基琥珀酸酐、2-亚氨基硫杂环戊烷或含硫醇的琥珀酰亚胺基衍生物的试剂将胺转化为硫醇；使用诸如α-卤代乙酸酯的试剂将硫醇转化为羧基；使用诸如乙烯亚胺或2-溴乙胺的试剂将硫醇转化为胺；使用诸如碳二亚胺的试剂，随后使用二胺将羧基转化为胺；以及使用诸如对甲苯磺酰氯的试剂将醇转化为硫醇，随后用硫代乙酸酯进行酯交换并用乙酸钠水解为硫醇。
在一些实施方案中，本公开的接头(例如，L)与变体Fc结构域单体(例如，E)缀合(例如，通过本文所述的任何方法)。在本公开的优选实施方案中，接头通过以下方式缀合：(a)与E的赖氨酸的硫脲键(即，-NH(C＝S)NH-)；(b)与E的赖氨酸的氨基甲酸酯键(即，-NH(C＝O)-O)；(c)赖氨酸与E之间通过还原性胺化的胺键(即，-NHCH2)；(d)与E的赖氨酸的酰胺(即，-NH-(C＝O)CH2)；(e)接头的马来酰亚胺与E的半胱氨酸之间的半胱氨酸-马来酰亚胺缀合物；(f)接头与E的碳水化合物(例如，变体Fc结构域单体或变体Fc结构域的糖基)之间通过还原性胺化的胺键(即，-NHCH2)；(g)再桥接的半胱氨酸缀合物，其中接头与E的两个半胱氨酸缀合；(h)接头与E的碳水化合物之间的肟键(例如，变体Fc结构域单体或变体Fc结构域的糖基)；(i)接头与E的氨基酸残基之间的肟连接；(j)接头与E之间的叠氮键；(k)将接头直接酰化为E；或者(l)接头与E之间的硫醚键。
在一些实施方案中，接头与E缀合，其中连接包括结构-NH(C＝NH)X-，其中X为O、HN或键。在一些实施方案中，接头与E缀合，其中接头的剩余部分与E之间的连接包括结构-NH(C＝O)NH-。
在一些实施方案中，接头(例如，活性酯例如硝基苯基酯或N-羟基琥珀酰亚胺基酯，或其衍生物)(例如，官能化PEG接头(例如，叠氮基-PEG2-PEG40-NHS酯))与E缀合，其中T(例如，DAR)介于0.5和10.0之间，例如0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8.0、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9或10.0。在这些情况下，E-(PEG2-PEG40)-叠氮基可通过点击缀合与具有末端炔烃接头(例如，L)的经修饰的治疗剂反应。在点击缀合期间，叠氮基(例如，Fc-(PEG2-PEG40)-叠氮基)与炔烃(例如，具有末端炔烃接头(例如，L)的经修饰的治疗剂)的铜催化反应形成5元杂原子环。在一些实施方案中，与E缀合的接头是末端炔烃并且与具有末端叠氮基的经修饰的治疗剂缀合。本领域技术人员将容易地理解来自点击化学缀合的最终产物。
V.方法
本文所述的方法包括例如在受试者中预防或治疗本文所述的病状或病症(例如，呼吸病症、肝脏病症、中枢神经系统病症、肌肉病症、皮肤病症、眼部病症、血管病症或感染(例如，病毒感染、真菌感染或细菌感染))的方法以及预防、稳定或抑制传染病原体(例如，病毒颗粒、真菌或细菌)生长的方法。在受试者中治疗本文所述的病状或病症(例如，呼吸病症、肝脏病症、中枢神经系统病症、肌肉病症、皮肤病症、眼部病症、血管病症或感染(例如，病毒感染、真菌感染或细菌感染))的方法包括向受试者施用本文所述的缀合物(例如，式(1)的缀合物)、本文所述的融合蛋白或它们的药物组合物。
病毒感染
本文所述的化合物和药物组合物(例如，本文所述的式(1)的缀合物或融合蛋白)可用于治疗病毒感染(例如，病毒性脑膜炎、单纯疱疹病毒(HSV)1、HSV 2、爱泼斯坦-巴尔病毒、水痘带状疱疹病毒、脊髓灰质炎病毒、柯萨奇病毒、西尼罗河病毒、拉克罗斯病毒、西方马脑炎、东方马脑炎、玻瓦桑病毒、狂犬病病毒、呼吸道合胞病毒(RSV)、登革热、β冠状病毒(例如，COVID-19)、寨卡病毒或流感病毒感染诸如甲型流感、乙型流感、丙型流感或副流感)。
病毒感染是指病毒在宿主生物体(例如，人类受试者)中的致病性生长。病毒感染可以是其中病毒群体的存在损害宿主身体的任何情况。因此，当过量的病毒群体存在于受试者体内或身体上时，或者当病毒群体的存在损害受试者的细胞或其他组织时，受试者遭受病毒感染。
流行性感冒通常称为“流感”，是由流感病毒引起的传染性疾病。症状可以是轻度到重度。最常见的症状包括：高热、流涕、喉咙痛、肌肉疼痛、头痛、咳嗽和感觉疲劳。这些症状通常在暴露于病毒两天后开始，最多持续不到一周。然而，咳嗽可能持续超过两周。在儿童中，可能存在恶心和呕吐，但这些在成人中不常见。流感的并发症可包括病毒性肺炎、继发性细菌性肺炎、鼻窦感染以及先前健康问题如哮喘或心力衰竭的恶化。严重的并发症可能发生在具有减弱的免疫系统的受试者中，诸如年轻人、老人、患有减弱免疫系统的疾病的那些受试者、以及经历导致免疫系统减弱的疗法治疗的那些受试者。
三种类型的流感病毒影响人类受试者，即甲型、乙型和丙型。通常，病毒通过空气由咳嗽或打喷嚏传播。这被认为主要发生在相对短的距离上。它也可通过接触被病毒污染的表面，然后接触嘴或眼睛来传播。人可能在他人表现出症状之前和期间感染他人。感染可通过检测咽喉、唾液或鼻中的病毒来确认。有许多快速测试可用；然而，如果结果是阴性的，人们可能仍然有感染。检测病毒RNA的一类聚合酶链式反应可用于诊断流感感染。
病毒感染可指病毒(例如，RSV，诸如RSV A或RSV B)在宿主生物体(例如，人类受试者)中的致病性生长。人呼吸道合胞病毒(RSV)是中等大小(120-200nm)的有包膜病毒，其含有脂蛋白外壳和线性负义RNA基因组(在翻译前必须转换为正RNA)。前者含有病毒编码的F、G和SH脂蛋白。F和G脂蛋白是靶向细胞膜的唯一两种脂蛋白，并且在RSV分离株中高度保守。基于病毒与抗附着(G)和融合(F)糖蛋白的单克隆抗体的反应性，将人RSV(HRSV)分成两个抗原亚组A和B。B亚型的特征在于大多数人群经历的无症状病毒株。更严重的临床疾病涉及A亚型毒株，其在疾病的大多数爆发中倾向于占优势。
四种病毒基因编码参与基因组转录、复制和颗粒出芽的细胞内蛋白，即N(核蛋白)、P(磷蛋白)、M(基质蛋白)和L(“大”蛋白，含有RNA聚合酶催化基序)。RSV基因组RNA与称为核衣壳的N蛋白形成螺旋核糖核蛋白(RNP)复合物，其用作病毒聚合酶复合物的RNA合成模板。结合RNA的RSV核蛋白(N)的十聚体环状核糖核蛋白复合物的三维晶体结构已经以分辨率测定。该复合物模拟一圈病毒螺旋核衣壳复合物。将其晶体结构与电子显微镜数据组合以提供RSV核衣壳的详细模型。
病毒感染可指无菌性脑膜炎(AM)，其被定义为蛛网膜下腔的炎症，特征在于单核细胞增多和无菌CSF(脑脊液或脑脊液)培养物。AM的主要原因是病毒感染(Ravel R:Clinical Laboratory Medicine:Clinical Application of Laboratory Data:ElsevierHealth Sciences；1994)。病毒性脑膜炎是常见的，通常未报告。非脊髓灰质炎病毒肠道病毒(柯萨奇病毒和艾柯病毒)占病因确定的病毒性脑膜炎病例的80％-90％(Atkinson P,Sharland M,Maguire H:Predominant enteroviral serotypes causingmeningitis.Archives of Disease in Childhood 1998,78:373-374)。
病毒感染可指单纯疱疹病毒1(HSV 1)或HSV 2。HSV 1是唇上的感冒疮(唇疱疹)和眼角膜上的疮(单纯疱疹性角膜炎)的常见病因。HSV 2是生殖器疱疹的常见病因。两者的区别不是绝对的。生殖器感染有时由HSV 1引起。感染也可发生在身体的其他部分，诸如脑(严重疾病)或胃肠道。广泛感染可发生在新生儿或免疫系统减弱的人中，特别是患有HIV感染的那些。HSV是极具传染性的，并且可通过直接接触疮而传播，并且有时通过接触患有HSV感染的人的嘴或生殖器而传播，即使当看不到疮时也是如此。
病毒感染可指柯萨奇病毒。柯萨奇病毒是一些相关的肠道病毒，其属于无包膜、线性、正义单链RNA病毒的小核糖核酸病毒科，以及其肠道病毒属，其也包括脊髓灰质炎病毒和艾柯病毒。柯萨奇病毒虽然是引起无菌性脑膜炎的主要病因，但也可引起手、脚和口腔疾病以及肌肉、肺和心脏疾病。
本公开还提供了一种防止、稳定或抑制病毒颗粒生长或防止病毒复制和传播的方法，该方法包括使病毒或易受病毒生长影响的位点与本文所述的缀合物(例如，式(1)的任一种缀合物)、本文所述的融合蛋白或它们的药物组合物接触。在一些实施方案中，病毒是病毒的抗性株。
此外，本文所述的方法还包括通过向受试者施用本文所述的组合物(例如，式(1)的缀合物)或本文所述的融合蛋白与第二治疗剂(诸如抗病毒剂或抗病毒疫苗)的组合来预防或治疗受试者的病毒感染的方法。
细菌感染
本文所述的化合物和药物组合物(例如，本文所述的式(1)的缀合物或融合蛋白)可用于治疗细菌感染。
细菌感染是指细菌(例如，不动杆菌属(鲍曼不动杆菌)、狄氏拟杆菌、脆弱拟杆菌、卵形拟杆菌、多形拟杆菌、单形拟杆菌、普通拟杆菌、弗氏柠檬酸杆菌、克氏柠檬酸杆菌、梭状梭菌、产气荚膜梭菌、产气肠杆菌、阴沟肠杆菌、粪肠球菌、肠球菌属(万古霉素敏感性和抗性分离株)、大肠杆菌(包括产生ESBL和KPC的分离株)、迟缓真杆菌、梭杆菌属、流感嗜血杆菌(包括β-内酰胺酶阳性分离株)、副流感嗜血杆菌、肺炎克雷伯氏菌(包括产生ESBL和KPC的分离株)、产酸克雷伯氏菌(包括产生ESBL和KPC的分离株)、嗜肺军团菌、卡他莫拉菌、摩氏摩根菌、支原体属、消化链球菌属、不解糖卟啉单胞菌、二路普雷沃氏菌、奇异变形杆菌、普通变形杆菌、雷氏普罗威登斯菌、斯氏普罗威登斯菌、铜绿假单胞菌、粘质沙雷氏菌、咽峡炎链球菌、金黄色葡萄球菌(甲氧西林敏感性和抗性分离株)、表皮葡萄球菌(甲氧西林敏感性和抗性分离株)、嗜麦芽窄食单胞菌、无乳链球菌、星座链球菌、肺炎链球菌(青霉素敏感性和抗性分离株)和酿脓链球菌)在宿主生物体(例如，人类受试者)中的致病性生长。细菌感染可以是其中细菌群体的存在损害宿主身体的任何情况。因此，当过量的细菌群体存在于受试者体内或身体上时，或者当细菌群体的存在损害受试者的细胞或其他组织时，受试者遭受细菌感染。
金黄色葡萄球菌是主要的人类病原体，据估计大约30％的人类是无症状的鼻携带者(Chambers和DeLeo 2009.Nat.Rev.Microbiol.7:629-641)。金黄色葡萄球菌引起皮肤、软组织、呼吸、骨、关节和血管内疾病。由金黄色葡萄球菌引起的危及生命的病例包括菌血症、心内膜炎、败血症和中毒性休克综合征(Lowy 1998.N.Engl.J.Med.339:520-532)。金黄色葡萄球菌的抗生素抗性正日益成为一个紧迫的医学问题。金黄色葡萄球菌的甲氧西林抗性接近流行水平(Chambers和DeLeo，同上；Grundmann等人，2006.Lancet 368:874-885)。据估计，2005年在美国发生了94,360例侵入性MRSA感染，这些感染与18,650例死亡相关(Klevens等人，2007.JAMA 298:1763-1771)。尽管表皮葡萄球菌是正常人上皮细菌菌群的一部分，当皮肤或粘膜受伤时会引起感染。
能够有效对抗繁殖细菌并因此可与本公开的Fc变体缀合的示例性治疗剂是β-内酰胺，诸如青霉素类(例如，青霉素G、青霉素V、甲氧西林、苯唑西林、氯唑西林、双氯西林、萘夫西林、氨苄西林、阿莫西林、羧苄西林、替卡西林、美洛西林、哌拉西林、阿洛西林和替莫西林)、头孢菌素类(例如，头孢噻吩、头孢匹林、头孢拉定、头孢噻啶、头孢唑林、头孢孟多、头孢呋辛、头孢氨苄、头孢丙烯、头孢克洛、氯碳头孢、头孢西丁、头孢美唑、头孢噻肟、头孢唑肟、头孢曲松、头孢哌酮、头孢他啶、头孢克肟、头孢泊肟、头孢布烯、头孢地尼、头孢匹罗、头孢吡肟、BAL5788和BAL9141)、碳青霉烯类(例如，亚胺培南、厄他培南和美罗培南)和单环β-内酰胺类(例如，氨曲南)；β-内酰胺酶抑制剂(例如，克拉维酸、舒巴坦和他唑巴坦)；氨基糖苷类(例如，链霉素、新霉素、卡那霉素、巴龙霉素、嘌呤霉素、庆大霉素、妥布霉素、阿米卡星、奈替米星、大观霉素、西索米星、地贝卡林(dibekalin)和异帕米星)；四环素类(例如，四环素、氯四霉素、地美环素、米诺环素、氧四环素、美他环素和多西环素)；大环内酯类(例如，红霉素、阿奇霉素和克拉霉素)；酮内酯(例如，泰利霉素、ABT-773)；林可酰胺类(例如，林可霉素和克林霉素)；糖肽类(例如，万古霉素、奥利万星、达巴万星和替考拉宁)；链阳性菌素类(例如，奎奴普丁和达福普汀)；磺胺类(例如，磺胺、对氨基苯甲酸、磺胺嘧啶、磺胺异噁唑、磺胺甲噁唑和磺胺杀利定)；噁唑烷酮类(例如，利奈唑胺)；喹诺酮类(例如，萘啶酮酸、奥索利酸、诺氟沙星、培氟沙星、依诺沙星、氧氟沙星、环丙沙星、替马沙星、洛美沙星、氟罗沙星、格帕沙星、司帕沙星、曲伐沙星、克林沙星、加替沙星、莫西沙星、吉米沙星和西他沙星)；甲硝唑；达托霉素；加雷沙星；雷莫拉宁；法罗培南；多粘菌素；替加环素、AZD2563；以及甲氧苄啶。
本文所述的方法包括例如在受试者中预防或治疗感染(例如，细菌感染)的方法以及预防、稳定或抑制感染病原体(例如，细菌)生长的方法。治疗受试者的感染(例如，细菌感染)的方法包括向受试者施用本文所述的缀合物(例如，式(1)的缀合物)、本文所述的融合蛋白或它们的药物组合物。在一些实施方案中，细菌感染由细菌的抗性株引起。一种防止、稳定或抑制细菌生长或防止细菌复制和传播的方法包括使细菌或易受细菌生长影响的位点与本文所述的缀合物(例如，式(1)的任一种缀合物)或其药物组合物接触。
此外，本文所述的方法还包括通过向受试者施用本文所述的缀合物(例如，式(1)的缀合物)或本文所述的融合蛋白与第二治疗剂(诸如抗细菌剂)的组合来预防或治疗受试者的细菌感染的方法。
真菌感染
本文所述的化合物和药物组合物(例如，本文所述的式(1)的缀合物或融合蛋白)可用于治疗真菌感染。
真菌感染是指真菌(例如，毛癣菌属物种(例如，艾吉罗毛癣菌、同心毛癣菌、马毛癣菌、刺蝟毛癣菌、淡黄毛癣菌、光辉发癣菌、指间毛癣菌、麦格尼毛癣菌、须癣毛癣菌、豆形毛癣菌、红色毛癣菌、许兰毛癣菌、猴毛癣菌、苏丹奈斯毛癣菌、土毛癣菌、断发毛癣菌、范布鲁西米毛癣菌、疣状毛癣菌、紫色毛癣菌或杨德氏毛癣菌)、表皮癣菌属物种(例如，絮状麦皮癣菌或斯托克表皮癣菌)、念珠菌属物种(例如，白色念珠菌、近平滑念珠菌、克柔念珠菌、热带念珠菌、光滑念珠菌、近平滑念珠菌、葡萄牙念珠菌、乳酒念珠菌、季也蒙念珠菌或都柏林念珠菌)、小孢子菌属物种(例如，犬小孢子菌、石膏样小孢子菌、奥杜安氏小孢子菌、鸡小孢子菌、铁锈色小孢子菌、扭曲小孢子菌、纳米小孢子菌、库克小孢子菌或范布瑞西米小孢子菌)、附球菌属物种(例如，黑附球菌)、曲霉属物种(例如，萨氏曲霉、土曲霉、黑曲霉、土曲霉、烟曲霉、黄曲霉、棒曲霉、灰绿曲霉群、构巢曲霉、米曲霉、土曲霉、焦曲霉或杂色曲霉)、拟青霉属物种(例如，淡紫拟青霉或宛氏拟青霉)、镰刀菌属物种(例如，尖孢镰刀菌、腐皮镰刀菌或半裸镰刀菌)、枝顶孢属物种(例如，紧密枝顶孢、A.roseogiseum、瓜枝顶孢、基利枝顶孢、弯曲枝顶孢、A.comptosporum、纸细基格孢、互生枝顶孢或小翅孢壳)、毛壳属物种(例如，深褐毛壳、绳生毛壳、球毛壳或瘤突毛壳)、茎点霉属物种、帚霉属物种(例如，短柄帚霉、念珠帚霉、康氏帚霉、顶孢帚霉、黄帚霉、灰质帚霉、S.trigonospora、布朗氏帚霉、S.chartarum、暗色帚霉或S.asperula)、链格孢属物种(例如，互隔链格孢、纸链格孢、石竹链格孢、A.geophilia、感染链格孢、匍柄链格孢或极细链格孢)以及弯孢霉属物种(例如，短孢弯孢霉、棒状弯孢霉、膝弯孢霉、新月弯孢霉、苍白弯孢霉、塞内加尔弯孢霉或疣状弯孢霉))在宿主生物体(例如，人类受试者)中的致病性生长。真菌感染可以是其中真菌群体的存在损害宿主机体的任何情况。因此，当过量的真菌群体存在于受试者体内或身体上时，或者当真菌群体的存在损害受试者的细胞或其他组织时，受试者遭受真菌感染。
真菌在人类中引起多种疾病。虽然一些真菌引起限于皮肤和毛发的最外层的感染(浅表真菌病)，但其他真菌通过渗透到皮肤、毛发和指甲的角质化层并触发宿主的病理变化而引起皮肤真菌病。皮下真菌病引起真皮、皮下组织、肌肉和筋膜感染，并且通常是慢性的。全身性真菌病主要起源于肺，并且可能在身体的其他器官系统中引起继发性感染。具有免疫系统缺陷的患者通常倾向于机会性真菌病。
包括红色毛癣菌和须癣毛癣菌在内的皮肤真菌负责皮肤真菌感染或皮肤真菌病(皮真菌病)。足癣是最常在脚趾之间显现的皮肤感染，从而引起受影响皮肤的鳞屑、剥落和瘙痒。也可能发生水疱和皮肤干裂，导致暴露原始组织、红斑、疼痛、肿胀和炎症。第二类足癣被称为厚皮型足癣(moccasin tinea pedis)，其特征在于慢性足底红斑，伴有轻微的鳞屑至弥漫性角化过度，其可以是无症状的或瘙痒的(例如，不适的、刺激性的感觉)。其他类型包括炎性/水泡性和溃疡性足癣。感染可以扩散到身体的其他区域，并且表现为躯干、手臂和腿中具有凸起边缘、脓疱和囊泡的环形鳞斑(体癣)、手掌和指蹼中的鳞状皮疹(手癣)、腹股沟和耻骨区域中的红斑损伤(股癣)、须部和颈部区域中的红斑、鳞屑和脓疱(须癣或面部癣)、或者头皮中的圆形、秃毛、鳞状斑块(头癣)的形式。花斑癣也称为花斑糠疹，是皮肤的常见真菌感染，其干扰皮肤的正常色素沉着，导致小的变色斑块。甲癣是指甲皮肤真菌感染的另一个术语。继发性细菌感染可由真菌感染发展而来。
癣是非常常见的，尤其是在儿童中，并且可通过皮肤与皮肤的接触，以及经由与受污染的物品诸如梳子接触或通过使用与受感染的个体相同的马桶座圈来传播。癣很容易传播，因为感染者即使在表现出疾病症状之前也是有传染性的。接触性运动诸如摔跤的参与者具有通过皮肤-皮肤接触造成真菌感染的风险。
癣是轻度传染性的。癣也是家畜、尤其是农场动物、狗和猫以及甚至小宠物如仓鼠或豚鼠中的常见感染。当人与这些动物紧密接触时，人可以接触这些动物的癣(通常也称为“癣菌病”)。癣也可通过直接接触和通过与脱落皮肤的碎屑长时间接触(例如，来自共用衣物或来自室内灰尘)而被其他人感染。
人们最知名的癣迹象是一个或多个具有确定边缘的红色凸起发痒斑块的外观，与玫瑰糠疹的带状疹不同。这些斑块通常在中心较浅，呈现具有由黑色素增加引起的周边色素沉着过度的环的外观。如果感染区域涉及头皮或须部区域，则秃斑可能变得明显。受影响区域可能在一段时间内变得发痒。
有时，癣感染可能在远离实际感染的身体部分中引起皮肤损伤。这种损伤被称为“皮肤真菌病”。损伤本身不含真菌，并且通常在治疗实际感染时消失。最常见的实例是由脚的真菌感染引起的手部发疹。皮肤真菌病基本上是对真菌的全身性过敏反应。
因此，真菌和酵母如小孢子菌属物种、毛癣菌属物种、表皮癣菌属物种和念珠菌属物种可引起持久且难以治疗的感染。
小孢子菌属物种包括犬小孢子菌和石膏样小孢子菌。小孢子菌属是引起皮肤真菌病的若干种真菌属之一。皮肤真菌病是用于定义由任何皮肤真菌物种引起的毛发、皮肤或指甲感染的通用术语。与其他皮肤真菌类似，小孢子菌属具有降解角蛋白的能力，因此可存在于皮肤及其附件上，并保持非侵入性。值得注意的是，小孢子菌属物种大部分感染毛发和皮肤。犬小孢子菌是狗和猫中癣菌病的主要病因，并且是引起人类散发性皮肤真菌病的嗜动物真菌物种，尤其是有猫和狗的儿童的头癣。
毛癣菌属物种的皮肤感染主要发生在后颈部、头皮或须部。毛癣菌属物种感染的症状包括头皮发炎病变、颈部发炎病变、须部发炎病变、疤痕和永久性脱发。毛癣菌属物种的实例包括红色毛癣菌、断发毛癣菌和须癣毛癣菌。
断发毛癣菌是一种在欧洲、南美和美国引起流行性皮肤真菌病的嗜人毛内癣真菌物种。它感染一些动物并需要硫胺素来生长。它在美国是头癣的最常见病因，在皮肤表面毛发脱落的地方形成黑点。红色毛癣菌是一种真菌，它是足癣(“运动员脚”)、股癣和癣(癣菌病)的最常见病因。红色毛癣菌是引起指甲真菌感染的最常见的皮肤真菌。虽然大多数真菌皮肤感染是刺激性的并且难以治疗，但是有报道说真菌感染导致死亡。具体地，须癣毛癣菌皮肤感染迁移至淋巴结、睾丸、椎骨和CNS。用灰黄霉素、两性霉素B、克霉唑和转移因子治疗失败，最终导致受试者死亡(Hironaga等人，J.Clin.Microbiol.,2003；5298-5301)。须癣毛癣菌是来自皮肤真菌群的指甲真菌感染的第二最常见来源。
表皮癣菌属含有两个物种；絮状表皮癣菌和斯托克表皮癣菌。斯托克表皮癣菌已知是非致病性的，而絮状表皮癣菌是引起人类感染的唯一物种。絮状表皮癣菌是其他健康个体中皮肤真菌病的常见病因之一。它感染皮肤(体癣、股癣、脚癣)和指甲(甲癣)。感染限于表皮的非活角质化层，因为真菌缺乏穿透免疫活性宿主的活组织的能力。由于对角质化组织的感染的限制，由任何皮肤真菌引起的播散性感染的可能性非常小。
然而，据报道，侵入性絮状表皮癣菌感染在患有白塞氏综合征的免疫受损患者中发生。与所有形式的皮肤真菌病一样，絮状表皮癣菌感染是传染性的，并且通常通过接触传播，特别是在普通淋浴和体育设施中。
念珠菌属物种包括白色念珠菌、近平滑念珠菌和克柔念珠菌。患有慢性粘膜皮肤念珠菌病的患者可能发展指甲念珠菌感染。念珠菌属物种可能侵入先前因感染或创伤而受损的指甲，并且在甲周区域和甲床下方引起感染。甲襞变成红斑、肿胀和触痛，偶有分泌物。该疾病导致表皮脱落、指甲营养不良和甲松离，并且外侧甲襞周围变色。在所有形式的甲癣中，指甲变得不同地变形和扭曲。
本文所述的方法还包括通过向受试者施用本文所述的组合物(例如，式(1)的缀合物)或本文所述的融合蛋白与抗真菌剂的组合来预防或治疗受试者的真菌感染的方法。
VI.药物组合物
包含变体Fc结构域的组合物(例如，本文所述的缀合物或融合蛋白)可被配制在用于本文所述方法的药物组合物中。在一些实施方案中，本文所述的缀合物或融合蛋白可以单独配制在药物组合物中。在一些实施方案中，本文所述的缀合物或融合蛋白可以与抗病毒剂、抗病毒疫苗、抗真菌剂、抗细菌剂或用于治疗病症的治疗剂组合配制在药物组合物中。在一些实施方案中，药物组合物包含本文所述的缀合物(例如，由式(1)描述的缀合物)或本文所述的融合蛋白以及药学上可接受的载体和赋形剂。
药物组合物中可接受的载体和赋形剂在所用剂量和浓度下对接受者是无毒的。可接受的载体和赋形剂可包括缓冲剂如磷酸盐、柠檬酸盐、HEPES和TAE，抗氧化剂如抗坏血酸和甲硫氨酸，防腐剂如氯化六甲双铵、十八烷基二甲基苄基氯化铵、间苯二酚和苯扎氯铵，蛋白质如人血清白蛋白、明胶、葡聚糖和免疫球蛋白，亲水性聚合物如聚乙烯吡咯烷酮，氨基酸残基如甘氨酸、谷氨酰胺、组氨酸和赖氨酸，以及碳水化合物如葡萄糖、甘露糖、蔗糖和山梨糖醇。
其他赋形剂的实例包括但不限于抗粘剂、粘结剂、包衣、压缩助剂、崩解剂、染料、润肤剂、乳化剂、填充剂(稀释剂)、成膜剂或包衣、调味剂、香料、助流剂(流动增强剂)、润滑剂、吸附剂、悬浮剂或分散剂、或甜味剂。示例性赋形剂包括但不限于：丁基化羟基甲苯(BHT)、碳酸钙、磷酸氢钙、硬脂酸钙、交联羧甲纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮、柠檬酸、交聚维酮、半胱氨酸、乙基纤维素、明胶、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、乳糖、硬脂酸镁、麦芽糖醇、甘露糖醇、甲硫氨酸、甲基纤维素、对羟基苯甲酸甲酯、微晶纤维素、聚乙二醇、聚维酮、预糊化淀粉、对羟基苯甲酸丙酯、棕榈酸视黄酯、虫胶、二氧化硅、羧甲基纤维素钠、柠檬酸钠、淀粉乙醇酸钠、山梨糖醇、淀粉(玉米)、硬脂酸、硬脂酸、蔗糖、滑石、二氧化钛、维生素A、维生素E、维生素C和木糖醇。
本文所述的缀合物或融合蛋白可具有可电离基团，以便能够制备为药学上可接受的盐。这些盐可以是涉及无机酸或有机酸的酸加成盐，或者就本文的缀合物的酸性形式而言，所述盐可以由无机碱或有机碱制备。通常，缀合物或融合蛋白作为药学上可接受的盐制备或使用，所述药学上可接受的盐作为药学上可接受的酸或碱的加成产物制备。合适的药学上可接受的酸和碱是本领域熟知的，诸如用于形成酸加成盐的盐酸、硫酸、氢溴酸、乙酸、乳酸、柠檬酸或酒石酸，以及用于形成碱式盐的氢氧化钾、氢氧化钠、氢氧化铵、咖啡因、各种胺等。制备适当的盐的方法是本领域熟知的。
代表性的酸加成盐包括但不限于乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚糖酸盐、己酸盐、氢溴酸盐、盐酸盐、氢碘酸盐、2-羟基-乙磺酸盐、乳糖酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐、十一烷酸盐和戊酸盐。代表性的碱金属或碱土金属盐包括但不限于钠、锂、钾、钙和镁，以及无毒铵、季铵和胺阳离子，包括但不限于铵、四甲铵、四乙铵、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺和乙胺。
根据施用途径和剂量，用于本文所述方法中的本文的缀合物或其药物组合物将配制成合适的药物组合物以允许容易递送。缀合物(例如，式(1)的缀合物)或其药物组合物可被配制为用于肌内、静脉内(例如，作为无菌溶液和在适合静脉内使用的溶剂体系中)、皮内、动脉内、腹膜内、病灶内、颅内、关节内、前列腺内、胸膜内、气管内、鼻内、玻璃体内、阴道内、直肠内、局部、瘤内、腹膜内、皮下、结膜下、膀胱内、粘膜、心包内、脐带内、眼内、口服(例如，片剂、胶囊、微囊、胶囊锭或糖浆)、外用(例如，作为乳膏、凝胶、洗剂或软膏)、局部、通过吸入、通过注射或通过输注(例如，连续输注、局部灌注直接浸泡靶细胞、导管、灌洗、在霜剂或脂质组合物中)施用。根据施用途径，本文的缀合物或其药物组合物可以是例如片剂、胶囊、丸剂、散剂、颗粒剂、混悬剂、乳剂、溶液剂、凝胶剂(包括水凝胶)、糊剂、软膏剂、乳膏剂、硬膏剂、灌服剂、渗透递送装置、栓剂、灌肠剂、注射剂、植入物、喷雾剂、适于离子电渗递送的制剂或气雾剂的形式。组合物可根据常规药物实践配制。
本文所述的组合物可以本领域已知的多种方式配制。为了用作人类和动物受试者的治疗，本文所述的缀合物可被配制为药物或兽药组合物。根据待治疗的受试者(例如，人类)、施用模式和期望的治疗类型(例如，预防或治疗)，以与这些参数一致的方式配制本文所述的缀合物。此类技术的概述可见于Remington:The Science and Practice ofPharmacy，第22版，Lippincott Williams&Wilkins(2012)；以及Encyclopedia ofPharmaceutical Technology，第4版，J.Swarbrick和J.C.Boylan,Marcel Dekker,NewYork(2013)，所述文献中每一篇以引用方式并入本文。
制剂可以适于全身施用或局部施用的方式制备。全身制剂包括被设计用于注射(例如，肌内、静脉内或皮下注射)的那些，或者可被制备用于经皮、经粘膜或口服施用。制剂通常将包含稀释剂，以及在一些情况下包含佐剂、缓冲剂和防腐剂。缀合物也可以脂质体组合物或作为微乳剂施用。全身施用还可包括相对非侵入性的方法，诸如使用栓剂、透皮贴剂、经粘膜递送和鼻内施用。口服施用也适用于本文的缀合物。合适的形式包括糖浆、胶囊和片剂，如本领域所理解的那样。
药物组合物可以可注射制剂的形式肠胃外施用。用于注射的药物组合物可使用无菌溶液或任何药学上可接受的液体作为媒介物来配制。制剂可被制备为适于在注射前溶解或悬浮在液体中的固体形式或制备为乳剂。药学上可接受的媒介物包括但不限于无菌水、生理盐水和细胞培养基(例如，杜尔贝科改良伊格尔培养基(DMEM)、α-改良伊格尔培养基(α-MEM)、F-12培养基)。此类可注射组合物还可含有一定量的无毒辅助物质，诸如润湿剂或乳化剂、pH缓冲剂，诸如乙酸钠和脱水山梨糖醇单月桂酸酯。配制方法是本领域已知的，参见例如Pharmaceutical Preformulation and Formulation，第2版，M.Gibson,Taylor&Francis Group,CRC Press(2009)。
药物组合物可以口服制剂的形式制备。用于口服使用的制剂包括含有与无毒的药学上可接受的赋形剂混合的活性成分的片剂。这些赋形剂可以是例如惰性稀释剂或填充剂(例如，蔗糖、山梨糖醇、糖、甘露糖醇、微晶纤维素、淀粉(包括马铃薯淀粉)、碳酸钙、氯化钠、乳糖、磷酸钙、硫酸钙或磷酸钠)；制粒剂和崩解剂(例如，纤维素衍生物(包括微晶纤维素)、淀粉(包括马铃薯淀粉)、交联羧甲纤维素钠、藻酸盐或藻酸)；粘合剂(例如，蔗糖、葡萄糖、山梨糖醇、阿拉伯胶、藻酸、藻酸钠、明胶、淀粉、预糊化淀粉、微晶纤维素、硅酸铝镁、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮或聚乙二醇)；以及润滑剂、助流剂和抗粘合剂(例如，硬脂酸镁、硬脂酸锌、硬脂酸、二氧化硅、氢化植物油或滑石)。用于口服使用的制剂也可作为咀嚼片提供，或作为硬明胶胶囊提供，其中活性成分与惰性固体稀释剂(例如，马铃薯淀粉、乳糖、微晶纤维素、碳酸钙、磷酸钙或高岭土)混合，或作为软明胶胶囊提供，其中活性成分与水或油介质(例如，花生油、液体石蜡或橄榄油)混合。散剂、颗粒剂和丸剂可使用上文在片剂和胶囊下提及的成分，以常规方式使用例如混合器、流化床设备或喷雾干燥设备来制备。
用于口服制剂的其他药学上可接受的赋形剂包括但不限于着色剂、调味剂、增塑剂、湿润剂和缓冲剂。用于口服使用的制剂也可作为咀嚼片提供，或作为硬明胶胶囊提供，其中活性成分与惰性固体稀释剂(例如，马铃薯淀粉、乳糖、微晶纤维素、碳酸钙、磷酸钙或高岭土)混合，或作为软明胶胶囊提供，其中活性成分与水或油介质(例如，花生油、液体石蜡或橄榄油)混合。散剂、颗粒剂和丸剂可使用上文在片剂和胶囊下提及的成分，以常规方式使用例如混合器、流化床设备或喷雾干燥设备来制备。
本文所述的缀合物(例如，式(1)的缀合物)或其药物组合物的溶解或扩散控制释放可通过缀合物的片剂、胶囊、丸剂或颗粒制剂的适当包衣或通过将缀合物掺入适当基质中来实现。控制释放包衣可包含上文提及的包衣物质和/或例如虫胶、蜂蜡、糖蜡、蓖麻蜡、巴西棕榈蜡、硬脂醇、单硬脂酸甘油酯、二硬脂酸甘油酯、棕榈硬脂酸甘油酯、乙基纤维素、丙烯酸树脂、dl-聚乳酸、乙酸丁酸纤维素、聚氯乙烯、聚乙酸乙烯酯、乙烯基吡咯烷酮、聚乙烯、聚甲基丙烯酸酯、甲基丙烯酸甲酯、2-羟基甲基丙烯酸酯、甲基丙烯酸酯水凝胶、1,3-丁二醇、乙二醇甲基丙烯酸酯和/或聚乙二醇中的一者或多者。在控制释放基质制剂中，基质材料还可包含例如水合甲基纤维素、卡纳瓦蜡和硬脂醇、卡波普934、有机硅、三硬脂酸甘油酯、丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸甲酯、聚氯乙烯、聚乙烯和/或卤化碳氟化合物。
药物组合物可根据需要以单位剂量形式形成。包含在药物组合物中的活性组分例如本文所述的缀合物(例如，式(1)的缀合物)的量使得提供指定范围内的合适剂量(例如，0.01-100mg/kg体重范围内的剂量)。
VII.施用途径和剂量
在本文所述的任何方法中，本文所述的组合物可通过用于治疗或预防感染(例如，病毒感染、真菌感染或细菌感染)或用于预防、稳定或抑制感染(例如，病毒感染、真菌感染或细菌感染)的增殖或扩散的任何适当途径施用。本文所述的组合物可以与药学上可接受的稀释剂、载体或赋形剂一起施用于人、家养宠物、家畜或其他动物。在一些实施方案中，施用包括肌内、静脉内(例如，作为无菌溶液和在适合静脉内使用的溶剂体系中)、皮内、动脉内、腹膜内、病灶内、颅内、关节内、前列腺内、胸膜内、气管内、鼻内、玻璃体内、阴道内、直肠内、局部、瘤内、腹膜内、皮下、结膜下、膀胱内、粘膜、心包内、脐带内、眼内、口服(例如，片剂、胶囊、微囊、胶囊锭或糖浆)、外用(例如，作为乳膏、凝胶、洗剂或软膏)、局部、通过吸入、通过注射或通过输注(例如，连续输注、局部灌注直接浸泡靶细胞、导管、灌洗、在霜剂或脂质组合物中)施用本文所述的任何缀合物(例如，式(1)的缀合物)或组合物。在一些实施方案中，如果除本文所述的缀合物之外还施用第二治疗剂诸如抗病毒剂，则抗病毒剂或其药物组合物也可以本文所述的任何施用途径施用。
本文所述的组合物(例如，式(1)的缀合物)或其药物组合物的剂量取决于以下因素，包括施用途径、待治疗的疾病(例如，感染(例如，病毒感染、真菌感染或细菌感染)的程度和/或状况)以及受试者的身体特征，例如年龄、体重、一般健康状况。通常，包含在单一剂量内的活性物的量可以是能够有效预防、延迟或治疗病症而不诱导显著毒性的量。药物组合物可包含0.01至500mg/kg(例如，0.01、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、1、2、3、4、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、100、150、200、250、300、350、400、450或500mg/kg)，并且在更具体的实施方案中约0.1至约30mg/kg，并且在更具体的实施方案中约1至约30mg/kg范围内的本文所述缀合物的剂量。在一些实施方案中，当本文所述的缀合物(例如，式(1)的缀合物)和抗病毒剂或抗病毒疫苗组合施用(例如，在相同或分开的药物组合物中基本上同时施用，或在同一治疗方案中分开施用)时，本文所述缀合物所需的剂量可低于在治疗方案中单独使用缀合物时缀合物所需的剂量。
本文所述的组合物(例如，式(1)的缀合物)或其药物组合物可例如每天、每周、每月、每半年、每年或根据医学需要一次或多次(例如，1-10次或更多次；1、2、3、4、5、6、7、8、9或10次)施用于对其有需要的受试者。可以单次或多次给药方案提供剂量。施用之间的时间可随着医疗状况的改善而减少，或者随着患者健康状况的下降而增加。施用的剂量和频率可由医师根据常规因素诸如感染程度和受试者的不同参数进行调整。
VIII.组合疗法
还应当理解，本公开的缀合物，融合蛋白和组合物可以配制并用于组合疗法中，即，缀合物、融合蛋白和药物组合物可以与一种或多种其他期望的治疗剂或医疗程序一起配制或在其同时、之前或之后施用。用于以组合方案使用的疗法(治疗剂或程序)的特定组合将考虑到所需治疗剂和/或程序和要实现的所需治疗效果的可相容性。还应当理解，所采用的疗法可实现相同病症的期望效果，或者它们可实现不同的效果(例如，控制任何副作用)。在优选的实施方案中，缀合物或融合蛋白和一种或多种其他期望的治疗剂被配制在分开的药物组合物中(例如，被配制用于不同的施用途径)。在一些实施方案中，缀合物或融合蛋白和一种或多种其他期望的治疗剂同时(例如，在基本上相同的时间，诸如在5分钟、30分钟、1-6小时、1-12小时或1天内)或顺序地(例如，在不同的时间，诸如相距多于1天)施用。如果一种或多种其他期望的治疗剂和缀合物或融合蛋白顺序地施用，则所述一种或多种其他期望的治疗剂在施用缀合物或融合蛋白后(例如，在缀合物或融合蛋白后1天、2天、5天、1周、2周、3周、1个月、2个月、6个月或12个月或更长时间施用)施用1-50次(例如，1-15次、10-25次、20-35次、30-45次或35-50次)。
抗病毒剂
在一些实施方案中，一种或多种抗病毒剂可与本文所述的缀合物(例如，式(1)的任一种缀合物)或本文所述的融合蛋白组合施用。
在一些实施方案中，抗病毒剂选自由以下组成的组：阿糖腺苷、阿昔洛韦、更昔洛韦、缬更昔洛韦、核苷类似物逆转录酶抑制剂(例如，AZT(齐多夫定)、ddI(地达诺新)、ddC(扎西他滨)、d4T(司他夫定)或3TC(拉米夫定))、非核苷逆转录酶抑制剂(例如，(奈韦拉平或地拉韦定)、蛋白酶抑制剂(沙奎那韦、利托那韦、茚地那韦或奈非那韦)、利巴韦林或干扰素)。前述列表意在举例说明本领域技术人员已知的用于治疗感染的抗病毒剂，而不意在限制本发明的范围。
抗病毒疫苗
在一些实施方案中，本文所述的任一种缀合物(例如，式(1)的缀合物)与抗病毒疫苗(例如，在受试者中引发针对病毒的免疫反应的组合物)组合施用。
在一些实施方案中，病毒疫苗包含在受试者中引发针对甲型、乙型、丙型流感病毒或副流感病毒的免疫反应的免疫原。在一些实施方案中，免疫原是灭活病毒(例如，疫苗是包含纯化和灭活材料甲型、乙型、丙型流感病毒或副流感病毒或它们的任何组合的三价流感疫苗)。在一些实施方案中，疫苗作为肌内注射给予。在一些实施方案中，疫苗是已被减毒(减弱)的活病毒的活病毒疫苗。在一些实施方案中，疫苗作为鼻喷雾剂施用。
抗细菌剂
在一些实施方案中，一种或多种抗细菌剂可与本文所述的缀合物(例如，式(1)的任一种缀合物)或本文所述的融合蛋白组合施用。
抗细菌剂可选自由以下组成的组：阿米卡星、庆大霉素、卡那霉素、新霉素、奈替米星、妥布霉素、巴龙霉素、链霉素、大观霉素、格尔德霉素、除莠霉素、利福昔明、氯碳头孢、厄他培南、多利培南、亚胺培南/西司他丁、美罗培南、头孢羟氨苄、头孢唑林、头孢噻吩、头孢氨苄、头孢克洛、头孢孟多、头孢西丁、头孢丙烯、头孢呋辛、头孢克肟、头孢地尼、头孢托仑、头孢哌酮、头孢噻肟、头孢泊肟、头孢他啶、头孢布烯、头孢唑肟、头孢曲松、头孢吡肟、头孢洛林、头孢吡普、替考拉宁、万古霉素、特拉万星、达巴万星、奥利万星、克林霉素、林可霉素、达托霉素、阿奇霉素、克拉霉素、地红霉素、红霉素、罗红霉素、醋竹桃霉素、泰利霉素、螺旋霉素、氨曲南、呋喃唑酮、呋喃妥因、利奈唑胺、泼斯唑来、雷得唑来、特地唑胺、阿莫西林、氨苄西林、阿洛西林、羧苄西林、氯唑西林、双氯西林、氟氯西林、美洛西林、甲氧西林、萘夫西林、苯唑西林、青霉素G、青霉素V、哌拉西林、青霉素G、替莫西林、替卡西林、阿莫西林克拉维酸、氨苄西林/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、替卡西林/克拉维酸、杆菌肽、粘菌素、多粘菌素B、环丙沙星、依诺沙星、加替沙星、吉米沙星、左氧氟沙星、洛美沙星、莫西沙星、萘啶酮酸、诺氟沙星、氧氟沙星、曲伐沙星、格帕沙星、司帕沙星、替马沙星、磺胺米隆、磺胺醋酰、磺胺嘧啶、磺胺嘧啶银、磺胺地索辛、磺胺甲二唑、磺胺甲噁唑、磺胺二甲异噁唑、柳氮磺吡啶、磺胺异噁唑、甲氧苄啶-磺胺甲噁唑(tmp-smx)、磺酰胺柯衣定、地美环素、多西环素、米诺环素、氧四环素、四环素、氯法齐明、氨苯砜、卷曲霉素、环丝氨酸、乙胺丁醇(bs)、乙硫异烟胺、异烟肼、吡嗪酰胺、利福平、利福布汀、利福喷汀、链霉素、砷凡纳明、氯霉素、磷霉素、夫西地酸、甲硝唑、莫匹罗星、平板霉素、奎奴普丁/达福普汀、甲砜霉素、替加环素、替硝唑和甲氧苄啶。前述列表意在举例说明本领域技术人员已知的用于治疗感染的抗细菌剂，而不意在限制本发明的范围。
抗真菌剂
在一些实施方案中，一种或多种抗真菌剂可与本文所述的缀合物(例如，式(1)的任一种缀合物)或本文所述的融合蛋白组合施用。
在用于治疗对其有需要的受试者的感染的上述组合疗法的一些实施方案中，抗真菌剂选自由以下组成的组：雷扎芬净、两性霉素B、杀念珠菌素、菲律宾菌素、哈霉素、纳他霉素、制霉菌素、龟裂霉素、联苯苄唑、布康唑、克霉唑、益康唑、芬替康唑、异康唑、酮康唑、卢立康唑、咪康唑、奥莫康唑、奥昔康唑、舍他康唑、硫康唑、噻康唑、三唑、阿巴康唑、艾氟康唑、氟环唑、氟康唑、艾沙康唑、伊曲康唑、泊沙康唑、丙环唑、雷夫康唑、特康唑、伏立康唑、噻唑、阿巴芬净、阿莫罗芬、布替萘芬、萘替芬、特比萘芬、阿尼芬净、卡泊芬净、米卡芬净、环吡酮、氟胞嘧啶、灰黄霉素、托萘酯和十一碳烯酸。前述列表意在举例说明本领域技术人员已知的用于治疗感染的抗真菌剂，而不意在限制本发明的范围。
实施例
提出以下实施例以便为本领域普通技术人员提供本文所述的组合物和方法可如何使用、制备和评价的描述，并且旨在纯粹是对本发明的举例说明且不旨在限制发明人所认定的发明范围。
实施例1.用于合成在一个或多个赖氨酸残基处与含叠氮基的接头缀合的Fc的一般程序
DMF/PBS中PEG4-叠氮基NHS酯溶液(0.050M)的制备：在0℃下，将16.75mg PEG4-叠氮基NHS酯溶解于0.100mL DMF中，并通过在0℃下添加PBS1x缓冲液稀释至0.837mL。通过调节PEG4-叠氮基NHS酯PBS溶液的当量，将该溶液用于制备具有各种DAR值的其他PEG4-叠氮基Fc。
h-lgG1 Fc(107.2mg，于8.800mL pH 7.4PBS中，MW为约57891Da，1.852μmol)的预处理：将Fc溶液转移到四个离心浓缩器(30,000MWCO，15mL)中，并用PBS x1缓冲液稀释至15mL，并浓缩至约1.5mL的体积。将残余物以1:10稀释于PBS pH 7.4中，并再次浓缩。重复该洗涤步骤总共四次，然后稀释至8.80mL。
PEG4-叠氮基Fc的制备：将0.050M PEG4-叠氮基NHS酯PBS缓冲液(0.593mL，29.6μmol，16当量)添加到上述h-IgG1 Fc溶液中，并将混合物在环境温度下振荡旋转2小时。通过使用四个离心浓缩器(30,000MWCO，15mL)将溶液浓缩至约1.5mL的体积。将粗混合物以1:10稀释于PBS pH 7.4中，并再次浓缩。重复该洗涤步骤总共三次。用pH 7.4PBS缓冲液将浓缩的Fc-PEG4-叠氮基稀释至8.80mL，并准备好用于Click缀合。使用NANODROPTMUV可见分光光度计(使用基于h-IgG1的氨基酸序列计算的消光系数)定量纯化的材料。纯化后定量收率。
实施例2.用于合成包含与一个或多个小分子缀合的Fc的缀合物的一般程序
Click试剂溶液的制备：0.0050M CuSO4的PBS缓冲溶液：将10.0mg CuSO4溶解于12.53mL PBS中，然后取5.00mL该CuSO4溶液并添加43.1mg BTTAA(CAS#1334179-85-9)和247.5mg抗坏血酸钠，得到Click试剂溶液(0.0050M CuSO4、0.020M BTTAA和0.25M抗坏血酸钠)。
向15mL离心管中叠氮基官能化的Fc(实施例1；65.5mg，10.0mL，1.13μmol)中添加炔烃衍生的小分子病毒抑制剂(22.7mg，15.2μmol，3.0当量/每个Fc叠氮基)。轻轻搅拌以溶解所有固体后，将混合物用Click试剂溶液(1.80mL)处理。将所得混合物在环境温度下温和旋转12小时。通过蛋白A柱上的亲和色谱法纯化，随后通过尺寸排阻色谱法纯化。
实施例3.具有K246S取代突变的Fc结构域的表达
通过固相合成来合成包含具有K246S取代突变的Fc结构域单体(SEQ ID NO:12)的氨基酸的反向翻译，并将寡核苷酸模板在克隆位点HindIII和EcoRI(GenScript’sGenSmart基因合成服务)克隆到pcDNA3.1(+)中。该构建体包含来源于小鼠Ig VH链的信号序列，其在表达后被切割。将pcDNA3.1(+)质粒转化到Top10大肠杆菌细胞(Invitrogen)中。使用HiPure Plasmid Filter Maxiprep试剂盒(Invitrogen)扩增、提取和纯化DNA。根据制造商的“最大收率”方案，使用ExpiFectamineTMCHO转染试剂盒(Gibco)将质粒DNA递送到ExpiCHO-S细胞中。将细胞离心，过滤，并使用MabSelect PrismA Resin(Cytiva)纯化上清液。使用4-12％ Bis Tris SDS PAGE凝胶，通过将2μg的每种分子加载到凝胶中，并使用instant Blue染色液进行染色，从而分析纯化的分子。凝胶包括含有指定分子量标准品的分子量梯状标志物。图2示出了由具有SEQ ID NO:12的序列的Fc结构域单体形成的Fc结构域的非还原和还原SDS-PAGE。还原和非还原泳道用“R”和“NR”表示。/>
<110> 奇达拉治疗公司(Cidara Therapeutics, Inc.)
<120> 变体Fc结构域及其用途
<130> 50945-072WO2
<150> US 63/153,695
<151> 2021-02-25
<160> 29
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 247
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> Xaa为Asn或不存在
<220>
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<220>
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<220>
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<220>
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<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (247)..(247)
<223> Xaa为Lys或不存在
<400> 1
Xaa Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu
1 5 10 15
Pro Lys Ser Xaa Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
20 25 30
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Xaa Pro Lys
35 40 45
Asp Thr Leu Xaa Ile Xaa Arg Xaa Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
50 55 60
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
65 70 75 80
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
85 90 95
Xaa Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Xaa His Xaa Asp
100 105 110
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
115 120 125
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
130 135 140
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Xaa Glu Xaa Thr Lys
145 150 155 160
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
165 170 175
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
180 185 190
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
195 200 205
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
210 215 220
Cys Ser Val Xaa His Glu Ala Leu His Xaa His Tyr Thr Gln Lys Ser
225 230 235 240
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Xaa
245
<210> 2
<211> 247
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> Xaa为Asn或不存在
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (46)..(46)
<223> Xaa为Ser、Gly、Ala、Thr、Asn、Gln、Arg、His、Glu或Asp
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (97)..(97)
<223> Xaa为Asn或Ala
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (156)..(156)
<223> Xaa为Asp或Glu
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (158)..(158)
<223> Xaa为Leu或Met
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (247)..(247)
<223> Xaa为Lys或不存在
<400> 2
Xaa Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu
1 5 10 15
Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
20 25 30
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Xaa Pro Lys
35 40 45
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
50 55 60
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
65 70 75 80
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
85 90 95
Xaa Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
100 105 110
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
115 120 125
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
130 135 140
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Xaa Glu Xaa Thr Lys
145 150 155 160
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
165 170 175
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
180 185 190
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
195 200 205
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
210 215 220
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
225 230 235 240
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Xaa
245
<210> 3
<211> 246
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (46)..(46)
<223> Xaa为Ser、Gly、Ala、Thr、Asn、Gln、Arg、His、Glu或Asp
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> Xaa为Asn或Ala
<220>
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<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (158)..(158)
<223> Xaa为Leu或Met
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Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu
1 5 10 15
Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
20 25 30
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Xaa Pro Lys
35 40 45
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
50 55 60
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
65 70 75 80
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
85 90 95
Xaa Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
100 105 110
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
115 120 125
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
130 135 140
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Xaa Glu Xaa Thr Lys
145 150 155 160
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
165 170 175
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
180 185 190
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
195 200 205
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
210 215 220
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
225 230 235 240
Leu Ser Leu Ser Pro Gly
245
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (156)..(156)
<223> Xaa为Asp或Glu
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (158)..(158)
<223> Xaa为Leu或Met
<400> 4
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu
1 5 10 15
Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
20 25 30
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Ser Pro Lys
35 40 45
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
50 55 60
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
65 70 75 80
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
85 90 95
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
100 105 110
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
115 120 125
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
130 135 140
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Xaa Glu Xaa Thr Lys
145 150 155 160
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
165 170 175
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
180 185 190
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
195 200 205
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
210 215 220
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
225 230 235 240
Leu Ser Leu Ser Pro Gly
245
<210> 5
<211> 246
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 5
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu
1 5 10 15
Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
20 25 30
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Ser Pro Lys
35 40 45
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
50 55 60
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
65 70 75 80
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
85 90 95
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100 105 110
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115 120 125
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195 200 205
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210 215 220
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
225 230 235 240
Leu Ser Leu Ser Pro Gly
245
<210> 6
<211> 246
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 6
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu
1 5 10 15
Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
20 25 30
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Ser Pro Lys
35 40 45
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
50 55 60
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
65 70 75 80
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
85 90 95
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
100 105 110
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115 120 125
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145 150 155 160
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165 170 175
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180 185 190
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195 200 205
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210 215 220
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
225 230 235 240
Leu Ser Leu Ser Pro Gly
245
<210> 7
<211> 246
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (46)..(46)
<223> Xaa为Ser、Gly、Ala、Thr、Asn、Gln、Arg、His、Glu或Asp
<220>
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Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
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Leu Ser Leu Ser Pro Gly
245
<210> 8
<211> 246
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<220>
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Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
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Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Ser Pro Lys
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Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
65 70 75 80
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
85 90 95
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Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
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Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Xaa Glu Xaa Thr Lys
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Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
210 215 220
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
225 230 235 240
Leu Ser Leu Ser Pro Gly
245
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> Xaa为Asn或不存在
<220>
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<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> Xaa为Lys或不存在
<400> 9
Xaa Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu
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Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
20 25 30
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Xaa Pro Lys
35 40 45
Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
50 55 60
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
65 70 75 80
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
85 90 95
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100 105 110
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
115 120 125
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
130 135 140
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Xaa Glu Xaa Thr Lys
145 150 155 160
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
165 170 175
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
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Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
195 200 205
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
210 215 220
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
225 230 235 240
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Xaa
245
<210> 10
<211> 246
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (46)..(46)
<223> Xaa为Ser、Gly、Ala、Thr、Asn、Gln、Arg、His、Glu或Asp
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<223> Xaa为Leu或Met
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Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu
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Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
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Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Xaa Pro Lys
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Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
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Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
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Xaa Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
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Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
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Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
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Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Xaa Glu Xaa Thr Lys
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Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
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Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
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Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
195 200 205
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
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Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
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Leu Ser Leu Ser Pro Gly
245
<210> 11
<211> 246
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> Xaa为Asp或Glu
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (158)..(158)
<223> Xaa为Leu或Met
<400> 11
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu
1 5 10 15
Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
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Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Ser Pro Lys
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Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
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Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
65 70 75 80
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
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Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
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Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Xaa Glu Xaa Thr Lys
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Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
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Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
180 185 190
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
195 200 205
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
210 215 220
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
225 230 235 240
Leu Ser Leu Ser Pro Gly
245
<210> 12
<211> 246
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 12
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu
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Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
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Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Ser Pro Lys
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Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
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Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
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Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
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Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
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Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
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Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
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Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys
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Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
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Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
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Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
225 230 235 240
Leu Ser Leu Ser Pro Gly
245
<210> 13
<211> 246
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 13
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu
1 5 10 15
Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
20 25 30
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Ser Pro Lys
35 40 45
Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
50 55 60
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
65 70 75 80
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
85 90 95
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
100 105 110
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
115 120 125
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
130 135 140
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
145 150 155 160
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
165 170 175
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
180 185 190
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
195 200 205
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
210 215 220
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
225 230 235 240
Leu Ser Leu Ser Pro Gly
245
<210> 14
<211> 246
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (46)..(46)
<223> Xaa为Ser、Gly、Ala、Thr、Asn、Gln、Arg、His、Glu或Asp
<220>
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<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> Xaa为Leu或Met
<400> 14
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Leu Ser Leu Ser Pro Gly
245
<210> 15
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (156)..(156)
<223> Xaa为Asp或Glu
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (158)..(158)
<223> Xaa为Leu或Met
<400> 15
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu
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85 90 95
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115 120 125
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
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165 170 175
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195 200 205
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
210 215 220
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
225 230 235 240
Leu Ser Leu Ser Pro Gly
245
<210> 16
<211> 247
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> Xaa为Asn或不存在
<220>
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<222> (46)..(46)
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<221> MISC_FEATURE
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<223> Xaa为Leu或Met
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (247)..(247)
<223> Xaa为Lys或不存在
<400> 16
Xaa Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu
1 5 10 15
Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
20 25 30
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Xaa Pro Lys
35 40 45
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
50 55 60
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
65 70 75 80
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
85 90 95
Xaa Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Asp His His Asp
100 105 110
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
115 120 125
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
130 135 140
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Xaa Glu Xaa Thr Lys
145 150 155 160
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
165 170 175
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
180 185 190
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
195 200 205
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
210 215 220
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Ser His Tyr Thr Gln Lys Ser
225 230 235 240
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Xaa
245
<210> 17
<211> 246
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (46)..(46)
<223> Xaa为Ser、Gly、Ala、Thr、Asn、Gln、Arg、His、Glu或Asp
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> Xaa为Asn或Ala
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (156)..(156)
<223> Xaa为Asp或Glu
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (158)..(158)
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Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu
1 5 10 15
Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
20 25 30
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Xaa Pro Lys
35 40 45
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
50 55 60
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
65 70 75 80
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
85 90 95
Xaa Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Asp His His Asp
100 105 110
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
115 120 125
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
130 135 140
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Xaa Glu Xaa Thr Lys
145 150 155 160
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
165 170 175
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
180 185 190
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
195 200 205
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
210 215 220
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Ser His Tyr Thr Gln Lys Ser
225 230 235 240
Leu Ser Leu Ser Pro Gly
245
<210> 18
<211> 246
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (156)..(156)
<223> Xaa为Asp或Glu
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (158)..(158)
<223> Xaa为Leu或Met
<400> 18
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu
1 5 10 15
Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
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Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Ser Pro Lys
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65 70 75 80
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
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Leu Ser Leu Ser Pro Gly
245
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 19
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Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
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Leu Ser Leu Ser Pro Gly
245
<210> 20
<211> 246
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 20
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu
1 5 10 15
Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
20 25 30
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Ser Pro Lys
35 40 45
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
50 55 60
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85 90 95
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Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Ser His Tyr Thr Gln Lys Ser
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Leu Ser Leu Ser Pro Gly
245
<210> 21
<211> 246
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<220>
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<220>
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<400> 21
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu
1 5 10 15
Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
20 25 30
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Xaa Pro Lys
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Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
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Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
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Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
130 135 140
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145 150 155 160
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
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Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
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Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
195 200 205
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
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Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Ser His Tyr Thr Gln Lys Ser
225 230 235 240
Leu Ser Leu Ser Pro Gly
245
<210> 22
<211> 246
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<220>
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Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu
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Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
20 25 30
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Ser Pro Lys
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Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
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Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
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Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
85 90 95
Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Asp His His Asp
100 105 110
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
115 120 125
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
130 135 140
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Xaa Glu Xaa Thr Lys
145 150 155 160
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
165 170 175
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
180 185 190
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
195 200 205
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
210 215 220
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Ser His Tyr Thr Gln Lys Ser
225 230 235 240
Leu Ser Leu Ser Pro Gly
245
<210> 23
<211> 247
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<220>
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<221> MISC_FEATURE
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<220>
<221> MISC_FEATURE
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<220>
<221> MISC_FEATURE
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<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (158)..(158)
<223> Xaa为Leu或Met
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (247)..(247)
<223> Xaa为Lys或不存在
<400> 23
Xaa Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu
1 5 10 15
Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
20 25 30
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Xaa Pro Lys
35 40 45
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
50 55 60
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
65 70 75 80
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
85 90 95
Xaa Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
100 105 110
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
115 120 125
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
130 135 140
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Xaa Glu Xaa Thr Lys
145 150 155 160
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
165 170 175
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
180 185 190
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
195 200 205
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
210 215 220
Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ser His Tyr Thr Gln Lys Ser
225 230 235 240
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Xaa
245
<210> 24
<211> 246
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<221> MISC_FEATURE
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<220>
<221> MISC_FEATURE
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<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (158)..(158)
<223> Xaa为Leu或Met
<400> 24
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu
1 5 10 15
Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
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Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Xaa Pro Lys
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Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
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Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
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Xaa Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
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Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
115 120 125
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
130 135 140
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Xaa Glu Xaa Thr Lys
145 150 155 160
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
165 170 175
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
180 185 190
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
195 200 205
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
210 215 220
Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ser His Tyr Thr Gln Lys Ser
225 230 235 240
Leu Ser Leu Ser Pro Gly
245
<210> 25
<211> 246
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (156)..(156)
<223> Xaa为Asp或Glu
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (158)..(158)
<223> Xaa为Leu或Met
<400> 25
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu
1 5 10 15
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Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Ser Pro Lys
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Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
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Leu Ser Leu Ser Pro Gly
245
<210> 26
<211> 246
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 26
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu
1 5 10 15
Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
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Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Ser Pro Lys
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Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
65 70 75 80
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
85 90 95
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
100 105 110
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
115 120 125
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
130 135 140
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys
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Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
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180 185 190
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195 200 205
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225 230 235 240
Leu Ser Leu Ser Pro Gly
245
<210> 27
<211> 246
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 27
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu
1 5 10 15
Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
20 25 30
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Ser Pro Lys
35 40 45
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
50 55 60
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
65 70 75 80
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
85 90 95
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
100 105 110
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
115 120 125
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
130 135 140
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
145 150 155 160
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
165 170 175
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
180 185 190
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
195 200 205
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
210 215 220
Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ser His Tyr Thr Gln Lys Ser
225 230 235 240
Leu Ser Leu Ser Pro Gly
245
<210> 28
<211> 246
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (46)..(46)
<223> Xaa为Ser、Gly、Ala、Thr、Asn、Gln、Arg、His、Glu或Asp
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (156)..(156)
<223> Xaa为Asp或Glu
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (158)..(158)
<223> Xaa为Leu或Met
<400> 28
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu
1 5 10 15
Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
20 25 30
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Xaa Pro Lys
35 40 45
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
50 55 60
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
65 70 75 80
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
85 90 95
Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
100 105 110
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
115 120 125
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
130 135 140
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Xaa Glu Xaa Thr Lys
145 150 155 160
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
165 170 175
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
180 185 190
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
195 200 205
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
210 215 220
Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ser His Tyr Thr Gln Lys Ser
225 230 235 240
Leu Ser Leu Ser Pro Gly
245
<210> 29
<211> 246
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (156)..(156)
<223> Xaa为Asp或Glu
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (158)..(158)
<223> Xaa为Leu或Met
<400> 29
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu
1 5 10 15
Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
20 25 30
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Ser Pro Lys
35 40 45
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
50 55 60
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
65 70 75 80
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
85 90 95
Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
100 105 110
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
115 120 125
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
130 135 140
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Xaa Glu Xaa Thr Lys
145 150 155 160
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
165 170 175
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
180 185 190
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
195 200 205
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
210 215 220
Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ser His Tyr Thr Gln Lys Ser
225 230 235 240
Leu Ser Leu Ser Pro Gly
245

Claims (74)

1.一种变体Fc结构域单体，其中所述变体Fc结构域单体包含第246位的氨基酸取代，其中所述第246位的氨基酸不是赖氨酸，并且其中编号是根据如Kabat中的EU索引。
2.如权利要求1所述的变体Fc结构域单体，其中所述变体Fc结构域单体还包含在以下位置处的氨基酸取代：(i)252、254和256，(ii)309、311和434，或(iii)428和434，并且其中所述第252位的取代是酪氨酸，所述第254位的取代是苏氨酸，所述第256位的取代是谷氨酸，所述第309位的取代是天冬氨酸，所述第311位的取代是组氨酸，所述第428位的取代是亮氨酸，并且所述第434位的取代是丝氨酸。
3.如权利要求1或2所述的变体Fc结构域单体，其中所述变体Fc结构域单体包含
第246位的非赖氨酸的氨基酸；
第252位的酪氨酸；
第254位的苏氨酸；以及
第256位的谷氨酸。
4.如权利要求1或2所述的变体Fc结构域单体，其中所述变体Fc结构域单体包含
第246位的非赖氨酸的氨基酸；
第309位的天冬氨酸；
第311位的组氨酸；以及
第434位的丝氨酸。
5.如权利要求1或2所述的变体Fc结构域单体，其中所述变体Fc结构域单体包含
第246位的非赖氨酸的氨基酸；
第428位的甲硫氨酸；以及
第434位的丝氨酸。
6.如权利要求1至5中任一项所述的变体Fc结构域单体，其中所述第246位的氨基酸选自丝氨酸、甘氨酸、丙氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、精氨酸、组氨酸、谷氨酸或天冬氨酸。
7.如权利要求6所述的变体Fc结构域单体，其中所述第246位的氨基酸是丝氨酸。
8.如权利要求6所述的变体Fc结构域单体，其中所述第246位的氨基酸是甘氨酸。
9.如权利要求6所述的变体Fc结构域单体，其中所述第246位的氨基酸是丙氨酸。
10.如权利要求6所述的变体Fc结构域单体，其中所述第246位的氨基酸是苏氨酸。
11.如权利要求6所述的变体Fc结构域单体，其中所述第246位的氨基酸是天冬酰胺。
12.如权利要求6所述的变体Fc结构域单体，其中所述第246位的氨基酸是谷氨酰胺。
13.如权利要求6所述的变体Fc结构域单体，其中所述第246位的氨基酸是精氨酸。
14.如权利要求6所述的变体Fc结构域单体，其中所述第246位的氨基酸是组氨酸。
15.如权利要求6所述的变体Fc结构域单体，其中所述第246位的氨基酸是谷氨酸。
16.如权利要求6所述的变体Fc结构域单体，其中所述第246位的氨基酸是天冬氨酸。
17.如权利要求1至16中任一项所述的变体Fc结构域单体，其中所述变体Fc结构域单体还包含第220位的取代。
18.如权利要求17所述的变体Fc结构域单体，其中所述第220位的氨基酸是丝氨酸。
19.如权利要求1至18中任一项所述的变体Fc结构域单体，其中所述变体Fc结构域单体包含第356位的天冬氨酸和第358位的亮氨酸。
20.如权利要求1至18中任一项所述的变体Fc结构域单体，其中所述变体Fc结构域单体包含第356位的谷氨酸和第358位的甲硫氨酸。
21.如权利要求1至20中任一项所述的变体Fc结构域单体，其中所述变体Fc结构域单体还包含第297位的取代，其中第297位不是天冬酰胺。
22.如权利要求21所述的变体Fc结构域单体，其中所述第297位的氨基酸是丙氨酸。
23.如权利要求1至22中任一项所述的变体Fc结构域单体，其中所述变体Fc结构域单体是人IgG1或人IgG2的变体。
24.如权利要求1至23中任一项所述的变体Fc结构域单体，其中所述变体Fc结构域单体包含少于300个氨基酸残基。
25.如权利要求1至24中任一项所述的变体Fc结构域单体，其中所述变体Fc结构域单体包含至少200个氨基酸残基。
26.如权利要求1至25中任一项所述的变体Fc结构域单体，其中所述变体Fc结构域单体的长度介于240个和255个氨基酸残基之间。
27.如权利要求1至23中任一项所述的变体Fc结构域单体，其中所述变体Fc结构域单体的质量介于约20kDa和约40kDa之间。
28.如权利要求27所述的变体Fc结构域单体，其中所述变体Fc结构域单体的质量介于约25kDa和28kDa之间。
29.如权利要求1至28中任一项所述的变体Fc结构域单体，其中所述变体Fc结构域单体的N-末端包含Fab结构域的10至20个残基。
30.如权利要求29所述的变体Fc结构域单体，其中所述变体Fc结构域单体的N-末端是氨基酸第198-205位中的任一者。
31.如权利要求30所述的变体Fc结构域单体，其中所述变体Fc结构域单体的N-末端是Asn 201。
32.如权利要求30所述的变体Fc结构域单体，其中所述变体Fc结构域单体的N-末端是Val 202。
33.如权利要求1至32中任一项所述的变体Fc结构域单体，其中所述变体Fc结构域单体的C-末端是氨基酸第437-447位中的任一者。
34.如权利要求33所述的变体Fc结构域单体，其中所述变体Fc结构域单体的C-末端是Gly 446。
35.如权利要求33所述的变体Fc结构域单体，其中所述变体Fc结构域单体的C-末端是Lys 447。
36.如权利要求1至35中任一项所述的变体Fc结构域单体，其中所述变体Fc结构域单体包含与SEQ ID NO:1-28中任一者具有至少90％同一性的氨基酸序列。
37.如权利要求36中任一项所述的变体Fc结构域单体，其中所述变体Fc结构域单体包含SEQ ID NO:1-28中任一者的氨基酸序列。
38.一种缀合物，所述缀合物包含如权利要求1至37中任一项所述的变体Fc结构域单体和至少一种治疗剂，其中所述变体Fc结构域单体通过接头与所述治疗剂共价缀合。
39.如权利要求38所述的缀合物，其中所述缀合物由式(1)描述：
其中每个A独立地为治疗剂；
每个E包含如权利要求1至24中任一项所述的变体Fc结构域单体；
L为接头；
n为1或2；
T为1至20的整数；并且
连接到所述E的波浪线表示每个L-A与E共价连接，
或其药学上可接受的盐。
40.如权利要求38或39所述的缀合物，其中每个接头与所述变体Fc结构域单体的赖氨酸残基缀合。
41.一种融合蛋白，所述融合蛋白包含如权利要求1至37中任一项所述的变体Fc结构域单体和至少一种多肽治疗剂，其中所述变体Fc结构域单体通过接头与所述多肽治疗剂共价缀合。
42.如权利要求1至37中任一项所述的变体Fc结构域单体、如权利要求38至41中任一项所述的缀合物或如权利要求42所述的融合蛋白，其中所述Fc结构域单体二聚化以形成Fc结构域。
43.如权利要求1至37中任一项所述的变体Fc结构域单体、如权利要求38至41中任一项所述的缀合物或如权利要求42所述的融合蛋白，其中所述Fc结构域的质量介于约50kDa和约70kDa之间。
44.如权利要求1至37中任一项所述的变体Fc结构域单体、如权利要求38至41中任一项所述的缀合物或如权利要求42所述的融合蛋白，其中所述Fc结构域是同二聚体。
45.一种药物组合物，所述药物组合物包含如权利要求1至37中任一项所述的变体Fc结构域单体、如权利要求38至40中任一项所述的缀合物、如权利要求41所述的融合蛋白或如权利要求42至44中任一项所述的Fc结构域，以及药学上可接受的载体。
46.一种治疗或预防受试者的呼吸病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用如权利要求45所述的药物组合物。
47.如权利要求46所述的方法，其中所述呼吸病症是感染。
48.如权利要求47所述的方法，其中所述感染是病毒感染。
49.如权利要求47所述的方法，其中所述感染是细菌感染。
50.如权利要求49所述的方法，其中所述呼吸病症选自包括慢性阻塞性肺病(COPD)、慢性支气管炎、囊性纤维化、支气管扩张和肺炎的组。
51.如权利要求46至50中任一项所述的方法，其中所述多肽、所述缀合物或所述融合蛋白在上皮层流体中的浓度比率是施用后2小时内血浆中所述多肽、所述缀合物或所述融合蛋白浓度的至少30％。
52.如权利要求51所述的方法，其中所述浓度比率在施用后2小时内为至少45％。
53.如权利要求51或52所述的方法，其中所述浓度比率在施用后2小时内为至少55％。
54.如权利要求51至53中任一项所述的方法，其中所述浓度比率在施用后2小时内为至少60％。
55.一种治疗或预防受试者的肝脏病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用如权利要求45所述的药物组合物。
56.如权利要求55所述的方法，其中所述肝脏病症是感染。
57.如权利要求56所述的方法，其中所述感染是病毒感染。
58.如权利要求57所述的方法，其中所述病毒感染选自包括甲型肝炎、乙型肝炎和丙型肝炎的组。
59.如权利要求58所述的方法，其中所述肝脏病症选自包括原发性胆汁性胆管炎、原发性硬化性胆管炎、肝细胞癌、胆管癌、肝细胞腺瘤、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)、急性肝功能衰竭和肝硬化的组。
60.一种治疗或预防受试者的中枢神经系统(CNS)病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用如权利要求45所述的药物组合物。
61.如权利要求60所述的方法，其中所述CNS病症是感染。
62.如权利要求61所述的方法，其中所述感染是病毒感染。
63.如权利要求61所述的方法，其中所述病毒感染选自包括病毒性脑膜炎、单纯疱疹病毒(HSV)1、HSV 2、爱泼斯坦-巴尔病毒、水痘带状疱疹病毒、脊髓灰质炎病毒、柯萨奇病毒、西尼罗河病毒、拉克罗斯病毒、西方马脑炎病毒、东方马脑炎病毒、玻瓦桑病毒或狂犬病病毒的组。
64.如权利要求63所述的方法，其中所述CNS病症选自包括癌症、阿尔茨海默病、帕金森病、癫痫、多发性硬化症、精神分裂症和脑膜炎的组。
65.一种治疗或预防受试者的肌肉病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用如权利要求45所述的药物组合物。
66.如权利要求65所述的方法，其中所述肌肉病症是癌症或肌炎。
67.如权利要求66所述的方法，其中所述肌炎由损伤、感染或免疫病症引起。
68.一种治疗或预防受试者的皮肤病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用如权利要求45所述的药物组合物。
69.如权利要求68所述的方法，其中所述皮肤病选自包括湿疹、银屑病、痤疮、酒渣鼻、感冒疮、蜂窝组织炎、基底细胞癌、鳞状细胞癌和黑素瘤的组。
70.一种治疗或预防受试者的眼部病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用如权利要求45所述的药物组合物。
71.如权利要求70所述的方法，其中所述眼部病症选自年龄相关性黄斑变性、白内障和青光眼。
72.一种治疗或预防受试者的血管病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用如权利要求45所述的药物组合物。
73.一种治疗或预防受试者的感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用如权利要求45所述的药物组合物。
74.如权利要求73所述的方法，其中所述感染是病毒感染、细菌感染或真菌感染。
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