CN114728937A - 用于治疗呼吸道合胞病毒的组合物及方法 - Google Patents

用于治疗呼吸道合胞病毒的组合物及方法 Download PDF

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Abstract

用于治疗病毒感染的组合物及方法包括含有连接于Fc单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽的病毒RSV F蛋白的抑制剂(例如，普沙托韦、MDT 637、JNJ 179、TMC353121、齐列索韦或其类似物)的缀合物。具体地说，缀合物可用于治疗病毒感染(例如，RSV感染)。

Description

用于治疗呼吸道合胞病毒的组合物及方法
背景技术
对用于呼吸道合胞病毒(RSV)的新型抗病毒治疗的需求意义重大且在医学领域尤其至关重要。RSV是若干类易感患者群体(包括两岁以下儿童、免疫受损的患者及老年人)中呼吸道感染的病原体。病毒感染从上呼吸道进展到下呼吸道，而这会导致气道炎症、细支气管炎、肺炎以及在极端情况下的呼吸衰竭。在美国的老年社区，发现四年多来RSV导致177,500人入院及14,000人死亡。RSV是婴儿常见的感染，几乎所有婴儿都会在生命的前24个月中被感染。据估计，RSV感染导致的严重疾病是全球大约320万人住院及约66,000名5岁以下儿童死亡的原因。
用于RSV的抗病毒治疗的开发已成为一项持续挑战。帕利珠单抗(Palivizumab)是一种单克隆抗体，被批准用于预防性用途，但在降低住院率方面仅为60％有效。利巴韦林(Ribavirin)被批准作为婴儿的吸入治疗选择，但疗效非常有限且对护理人员存在显著安全问题。RSV感染患者的护理标准是支持性的，包括流体及氧气。需要用于治疗RSV的新的更有效疗法。
发明内容
本公开涉及用于抑制病毒生长的缀合物、组合物及方法，及用于治疗病毒感染的方法。具体地说，此类缀合物含有缀合于Fc单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽的抑制呼吸道合胞病毒(RSV)融合蛋白(F蛋白)的部分的单体或二聚体(例如，普沙托韦(Presatovir)、MDT 637、JNJ 179、TMC353121、齐列索韦(Ziresovir)或其类似物)。缀合物中的RSV F蛋白抑制剂(例如，普沙托韦、MDT 637、JNJ 179、TMC353121、齐列索韦或其类似物)靶向病毒粒子的表面上的RSV融合蛋白。所述缀合物中的Fc单体或Fc结构域结合于免疫细胞(例如，嗜中性粒细胞)上的FcγR(例如，FcRn、FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIc、FcγRIIIa及FcγRIIIb)以活化吞噬作用及效应子功能，诸如抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)，因此导致免疫细胞吞没及破坏病毒粒子且进一步增强所述缀合物的抗病毒活性。所述白蛋白或白蛋白结合肽可延长缀合物的半衰期，例如通过使白蛋白结合于再循环新生儿Fc受体。此类组合物适用于抑制病毒生长的方法及治疗病毒感染(诸如由RSV A及RSV B引起的那些)的方法。
在第一方面中，本发明提供一种由以下中任一者来描述的缀合物：式(D-I)、(M-I)、(1)或(2)
Figure BDA0003629760100000021
其中每个A1及每个A2独立地选自以下中任一者：式(A-I)-(A-VI)
Figure BDA0003629760100000022
Figure BDA0003629760100000023
及
Figure BDA0003629760100000024
Q选自任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C2-C20烯基、任选取代的C3-C20环烯基、任选取代的C2-C20炔基、任选取代的C5-C20芳基、任选取代的C2-C15杂芳基及任选取代的C1-C20烷氧基；
R1、每个X1及Y各自独立地选自：
Figure BDA0003629760100000031
Figure BDA0003629760100000032
及
Figure BDA0003629760100000033
R2、每个R3、每个X2、U1、每个M1、每个M2、每个K1及每个K2各自独立地选自OH、卤素、腈、硝基、任选取代的胺、任选取代的亚胺、任选取代的C1-C20烷氨基、任选取代的巯基、任选取代的羧基、任选取代的氰基、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20烯基、任选取代的C3-C20环烯基、任选取代的C2-C20炔基、任选取代的C5-C20芳基、任选取代的C2-C15杂芳基及任选取代的C1-C20烷氧基；
每个X3独立地选自任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C5-C15芳基及任选取代的C1-C15杂芳基；
每个Ua是环原子且独立地选自CH或N；
U2选自任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C3-C20亚环烷基、任选取代的C2-C20亚杂环烷基、任选取代的C5-C15亚芳基、任选取代的C3-C15亚杂芳基及键；
U3是环原子的取代基且选自任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20烯基、任选取代的C3-C20环烯基、任选取代的C2-C20炔基、任选取代的C5-C20芳基、任选取代的C2-C15杂芳基、任选取代的C1-C20烷氧基、醇、任选取代的C1-C20烷氨基、任选取代的羧基、任选取代的C1-C20羰基、任选取代的氰基及任选取代的砜；
M3及M4各自独立地选自任选取代的C1-C20亚烷基及任选取代的C1-C20亚杂烷基；
W选自任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C5-C15芳基及任选取代的C3-C15杂芳基；
其中M3、M4及W各自独立地任选地不存在；
Ar选自任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C5-C15芳基及任选取代的C1-C15杂芳基；
每个R5选自H、任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C3-C20亚环烷基、任选取代的C3-C20亚杂环烷基、任选取代的C5-C15亚芳基及任选取代的C2-C15亚杂芳基；
每个R6选自任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C3-C20亚环烷基、任选取代的C3-C20亚杂环烷基、任选取代的C5-C15亚芳基及任选取代的C2-C15亚杂芳基；
V为-N-或-CH-；
h为0或1，
其中当h为1时，K3为
Figure BDA0003629760100000051
D为-O-、-CH2-或-NH-(例如，-O-或-CH2-)；
Rx及Ry各自独立地为C1-C3烷基；
b、g1及g2各自独立地为0、1、2或3；
p为1、2或3；
其中当h为0时，K3为
Figure BDA0003629760100000052
且Y为氮原子；
Rz选自-OH、卤素、腈、硝基、氨基、任选取代的胺、任选取代的亚胺、任选取代的C1-C20烷氨基、任选取代的巯基、任选取代的羧基、任选取代的氰基、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20烯基、任选取代的C3-C20环烯基、任选取代的C2-C20炔基、任选取代的C5-C20芳基、任选取代的C2-C15杂芳基及任选取代的C1-C20烷氧基；
n为1或2；
当n为1时，每个E包含Fc结构域单体(例如，具有SEQ ID NO:1-138中任一者的序列的Fc结构域单体)、白蛋白(例如，具有SEQ ID NO:139-141中任一者的序列的白蛋白)、白蛋白结合肽或Fc结合肽；
当n为2时，每个E包含Fc结构域单体(例如，具有SEQ ID NO:1-138中任一者的序列的Fc结构域单体)，其中Fc结构域单体二聚以形成Fc结构域；
L为共价附接至E且附接至A1或者A1及A2中的每一者的每个Y的接头；且
T为1至20的整数(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，且式(D-I)、(M-I)、(1)或(2)中的每条波浪线指示L共价附接(例如，借助于共价键或接头)至每个E；或其药学上可接受的盐。当T大于1(例如，T为2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)时，每个A1-L或每个A1-L-A2可以独立地经选择(例如，独立地选自本文所述的A1-L或A1-L-A2结构中任一者)。
在本文所述的任何方面的优选实施方案中，n为2且每个E包含Fc结构域单体(例如，具有SEQ ID NO:1-138中任一者的序列的Fc结构域单体)。在具有两个Fc结构域单体的缀合物(例如，式(1)、式(2)、式(D-I)(其中n等于2)或(M-I)(其中n等于2)缀合物)中，Fc结构域单体二聚以形成Fc结构域。
在一些实施方案中，每个A1及每个A2独立地由式(A-III)描述且U3是环原子Ua的取代基。在一些实施方案中，Ua为CH。在一些实施方案中，Ua为N。
在一些实施方案中，每个A1及每个A2独立地由以下中任一者来描述：式(A-IIIa)-(A-IIIf)
Figure BDA0003629760100000071
或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，每个A1及每个A2独立地由以下中任一者来描述：式(A-IIIb)-(A-IIIf)。在一些实施方案中，每个A1及每个A2独立地由以下来描述：式(A-IIIb)或(A-IIIc)。在一些实施方案中，每个A1及每个A2独立地由以下中任一者来描述：式(A-IIId)-(A-IIIf)。在一些实施方案中，每个A1及每个A2独立地由以下来描述：式(A-IIIc)或(A-IIIf)。在一些实施方案中，每个A1及每个A2独立地由以下来描述：式(A-IIIb)。在一些实施方案中，每个A1及每个A2独立地由以下来描述：式(A-IIIc)。在一些实施方案中，每个A1及每个A2独立地由以下来描述：式(A-IIId)。在一些实施方案中，每个A1及每个A2独立地由以下来描述：式(A-IIIe)。在一些实施方案中，每个A1及每个A2独立地由以下来描述：式(A-IIIf)。
在一些实施方案中，每个A1及每个A2独立地由以下中任一者来描述：式(A-IVa)-(A-IVf)
Figure BDA0003629760100000081
或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，每个A1及每个A2独立地由以下中任一者来描述：式(A-IVa)-(A-IVc)。在一些实施方案中，每个A1及每个A2独立地由以下中任一者来描述：式(A-IVd)-(A-IVf)。在一些实施方案中，每个A1及每个A2独立地由以下来描述：式(A-IVa)或(A-IVd)。在一些实施方案中，每个A1及每个A2独立地由以下来描述：式(A-IVb)或(A-IVe)。在一些实施方案中，每个A1及每个A2独立地由以下来描述：式(A-IVc)或(A-IVf)。在一些实施方案中，每个A1及每个A2独立地由以下来描述：式(A-IVa)。在一些实施方案中，每个A1及每个A2独立地由以下来描述：式(A-IVb)。在一些实施方案中，每个A1及每个A2独立地由以下来描述：式(A-IVc)。在一些实施方案中，每个A1及每个A2独立地由以下来描述：式(A-IVd)。在一些实施方案中，每个A1及每个A2独立地由以下来描述：式(A-IVe)。在一些实施方案中，每个A1及每个A2独立地由以下来描述：式(A-IVf)。
在一些实施方案中，每个A1及每个A2独立地由以下中任一者来描述：式(A-IIIb)-(A-IIIf)、(A-IV)、(A-V)或(A-VI)。在一些实施方案中，每个A1及每个A2独立地由以下中任一者来描述：式(A-IIIb)、(A-IIIc)、(A-IV)、(A-V)或(A-VI)。在某些实施方案中，每个A1及每个A2独立地由以下中任一者来描述：式(A-IIIa)-(A-IIIc)或(A-IVa)-(A-IVc)。
在一些实施方案中，每个A1及每个A2独立地由以下中任一者来描述：式(A-III)或(A-IV)，其中每个p为1；其中每个p为2；或其中每个p独立地为1或2。
在一些实施方案中，每个A1及每个A2独立地由以下来描述：式(A-III)(例如，式(A-IIIa)-(A-IIIf)中任一者或式(A-IIIb)-(A-IIIf)中任一者)，其中每个U3由以下来描述：
Figure BDA0003629760100000091
其中Ub为C或O；且
U4选自任选取代的氨基、任选取代的亚胺、任选取代的C1-C20烷氨基、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C5-C15芳基、任选取代的C3-C15杂芳基及键。
在一些实施方案中，每个A1及每个A2独立地由以下来描述：式(A-III)(例如，式(A-IIIa)-(A-IIIf)中任一者或式(A-IIIb)-(A-IIIf)中任一者)，其中每个U3由以下来描述：
Figure BDA0003629760100000092
Figure BDA0003629760100000101
在一些实施方案中，每个A1及每个A2独立地由以下来描述：式(A-IV)(例如，式(A-IVa)-(A-IVf)中任一者)，其中每个U3是任选取代的C1-C6烷基(例如，-(CH2)4、-(CH2)3CN、-(CH2)4F、-(CH2)4OH、-(CH2)2SO2Me、-(CH2)3SO2CH2Me或-(CH2)3SO2Me)。
在一些实施方案中，R1、每个X1及Y各自独立地选自-O-、-S-、-NR5-、-CH＝N-、-C(C＝O)O-、-(C＝O)NH-、-(C＝O)-、-O(C＝O)NR5-、-O(C＝S)NR5-、-O(C＝O)O-、-O(C＝O)-、-NH(C＝O)O-、-NH(C＝O)-、-NH(C＝NH)-、-NH(C＝O)NR5-、-NH(C＝NH)NR5-、-NH(C＝S)NR5-、-NH(C＝S)-、-OCH2(C＝O)NR5-、-R6OR6C(＝O)NH-、-R6NH(C＝O)-、-R6N-、-NH(SO2)-、-NH(SO2)NR5-、-OR6-、-NHR6-及-SR6-。
在一些实施方案中，每个A1及每个A2独立地由以下来描述：式(A-III)(例如，式(A-IIIa)-(A-IIIf)中任一者或式(A-IIIb)-(A-IIIf)中任一者)，其中每个Y选自-NH(C＝O)-、-SO2-、-O-、-R6O-、-(C＝O)-及-(C＝O)NH-。
在一些实施方案中，每个A1及每个A2独立地由以下来描述：式(A-IV)(例如，式(A-IVa)-(A-IVf)中任一者)，其中每个Y选自–(C＝O)O-、-(C＝O)NH-、-(C＝O)-、-SO2NH(C＝O)O-、-(C＝O)OR6-、-(C＝O)R6-及-(C＝O)OR6NH(C＝O)-。
在一些实施方案中，R1为–(C＝O)-。
在一些实施方案中，每个X1为-CH＝N-。
在以上中任一者的一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-I)或(D-I)。
在另一个方面中，本发明提供一种由以下来描述的缀合物：式(D-I)
Figure BDA0003629760100000111
其中每个E包含Fc结构域单体(例如，具有SEQ ID NO:1-138中任一者的序列的Fc结构域单体)；每个A1-L-A2中的L是共价附接(例如，借助于共价键或接头)至E中铰链半胱氨酸的硫原子且附接至A1及A2中每一者的接头；n为1或2(例如，当n为2时，两个Fc结构域单体二聚以形成Fc结构域)；T为1至20的整数(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，且连接于E的波浪线指示每个A1-L-A2共价附接至E中铰链半胱氨酸的硫原子，或其药学上可接受的盐。当T大于1(例如，T为2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)时，每个A1-L-A2可独立地经选择(例如，独立地选自本文所述的A1-L-A2结构中任一者)。
在另一个方面中，本发明提供一种由以下来描述的缀合物：式(D-I)
Figure BDA0003629760100000112
其中每个E包含Fc结构域单体(例如，具有SEQ ID NO:1-138中任一者的序列的Fc结构域单体)；每个A1-L-A2中的L是共价附接至E中表面暴露赖氨酸的氮原子且附接至A1及A2中每一者的接头；n为1或2(例如，当n为2时，两个Fc结构域单体二聚以形成Fc结构域)；T为1至20的整数(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，且连接于E的波浪线指示每个A1-L-A2共价附接(例如，借助于共价键或接头)至E中表面暴露赖氨酸的氮原子，或其药学上可接受的盐。当T大于1(例如，T为2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)时，每个A1-L-A2可独立地经选择(例如，独立地选自本文所述的A1-L-A2结构中任一者)。
在另一个方面中，本发明提供一种由以下来描述的缀合物：式(M-I)
Figure BDA0003629760100000121
其中每个E包含Fc结构域单体(例如，具有SEQ ID NO:1-138中任一者的序列的Fc结构域单体)；每个L-A1中的L是共价附接至E中铰链半胱氨酸的硫原子且附接至A1的接头；n为1或2(例如，当n为2时，两个Fc结构域单体二聚以形成Fc结构域)；T为1至20的整数(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)；且连接于E的波浪线指示每个L-A1共价附接至E中铰链半胱氨酸的硫原子，或其药学上可接受的盐。当T大于1(例如，T为2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)时，每个A1可独立地选自由式(A-I)-(A-VI)中任一者描述的结构。
在另一个方面中，本发明提供一种由以下来描述的缀合物：式(M-I)
Figure BDA0003629760100000131
其中每个E包含Fc结构域单体(例如，具有SEQ ID NO:1-138中任一者的序列的Fc结构域单体)；每个L-A1中的L是共价附接至E中表面暴露赖氨酸的氮原子且附接至A1的接头；n为1或2(例如，当n为2时，两个Fc结构域单体二聚以形成Fc结构域)；T为1至20的整数(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，连接于E的波浪线指示每个L-A1共价附接(例如，借助于共价键或接头)至E中表面暴露赖氨酸的氮原子，或其药学上可接受的盐。当T大于1(例如，T为2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)时，每个A1可独立地选自由式(A-I)-(A-VI)中任一者描述的结构。
在另一个方面中，本发明提供一种由以下来描述的缀合物：式(1)
Figure BDA0003629760100000132
其中每个E包含Fc结构域单体(例如，具有SEQ ID NO:1-138中任一者的序列的Fc结构域单体)；每个A1-L-A2中的L是共价附接至每个E中铰链半胱氨酸的硫原子且附接至A1及A2中每一者的接头；T为1至20的整数(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，且连接于两个E的两条波浪线指示每个A1-L-A2共价附接至两个E中两个铰链半胱氨酸的一对硫原子，或其药学上可接受的盐。当T大于1(例如，T为2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)时，每个A1-L-A2可独立地经选择(例如，独立地选自本文所述的A1-L-A2结构中任一者)。
在另一个方面中，本发明提供一种由以下来描述的缀合物：式(2)
Figure BDA0003629760100000141
其中每个E包含Fc结构域单体(例如，具有SEQ ID NO:1-138中任一者的序列的Fc结构域单体)；每个L-A1中的L是共价附接至E中铰链半胱氨酸的硫原子且附接至A1的接头；T为1至20的整数(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，且连接于两个硫原子的两条波浪线指示每个L-A1共价附接至两个E中两个铰链半胱氨酸的一对硫原子，或其药学上可接受的盐。当T大于1(例如，T为2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)时，每个A1可独立地选自由式(A-I)-(A-VI)中任一者描述的结构。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，每个E包含具有SEQ ID NO:1-138中任一者的序列的Fc结构域单体。
在一些实施方案中，所述硫原子对中的至少一者是对应于SEQ ID NO:10或SEQ IDNO:11的铰链半胱氨酸(即，SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys10、Cys13、Cys16或Cys18)(例如，其硫原子)的硫原子。在一些实施方案中，所述硫原子对是对应于SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11中的Cys10及Cys13、SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11中的Cys10及Cys16、SEQID NO:10或SEQ ID NO:11中的Cys30及Cys18、SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11中的Cys13及Cys36、SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11中的Cys13及Cys38以及/或者SEQ ID NO:10或SEQ IDNO:11中的Cys36及Cys38(例如，其硫原子)的硫原子。
在一些实施方案中，当T为2时，所述硫原子对是SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11中的Cys10及Cys13或者SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11中的Cys36及Cys38(例如，对应于其的硫原子)。
在一些实施方案中，所述硫原子对包含来自各E的半胱氨酸的一个硫原子，即，L-A连同其所附接的硫原子形成两个Fc结构域(例如，包含SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的序列的两个Fc结构域)之间的桥。在一些实施方案中，所述硫原子对是对应于来自一个E的SEQID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys10(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys10(例如，其硫原子)的硫原子。在一些实施方案中，所述硫原子对是对应于来自一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys13(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys13(例如，其硫原子)的硫原子。在一些实施方案中，所述硫原子对是对应于来自一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys16(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys16(例如，其硫原子)的硫原子。在一些实施方案中，所述硫原子对是对应于来自一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys18(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys18(例如，其硫原子)的硫原子。
在一些实施方案中，当T为2时，所述硫原子对是对应于来自一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys10(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys10(例如，其硫原子)的硫原子以及对应于来自一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys13(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys13(例如，其硫原子)的硫原子。在一些实施方案中，当T为2时，所述硫原子对是对应于来自一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys10(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys10(例如，其硫原子)的硫原子以及对应于来自一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys16(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys16(例如，其硫原子)的硫原子。在一些实施方案中，当T为2时，所述硫原子对是对应于来自一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys10(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys10(例如，其硫原子)的硫原子以及对应于来自一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys18(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys18(例如，其硫原子)的硫原子。
在一些实施方案中，当T为2时，所述硫原子对是对应于来自一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys13(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys13(例如，其硫原子)的硫原子以及对应于来自一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys16(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys16(例如，其硫原子)的硫原子。在一些实施方案中，当T为2时，所述硫原子对是对应于来自一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys13(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys13(例如，其硫原子)的硫原子以及对应于来自一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys18(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys18(例如，其硫原子)的硫原子。
在一些实施方案中，当T为2时，所述硫原子对是对应于来自一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys16(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys16(例如，其硫原子)的硫原子以及对应于来自一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys18(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys18(例如，其硫原子)的硫原子。
在一些实施方案中，当T为3时，所述硫原子对是对应于来自一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys10(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys10(例如，其硫原子)的硫原子；对应于来自一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys13(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys13(例如，其硫原子)的硫原子；以及对应于来自一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys16(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys16(例如，其硫原子)的硫原子。在一些实施方案中，当T为3时，所述硫原子对是对应于来自一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys10(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys10(例如，其硫原子)的硫原子；对应于来自一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys13(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys13(例如，其硫原子)的硫原子；以及对应于来自一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys18(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys18(例如，其硫原子)的硫原子。在一些实施方案中，当T为3时，所述硫原子对是对应于来自一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys10(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys10(例如，其硫原子)的硫原子；对应于来自一个E的SEQ ID NO:10或SEQID NO:11的Cys18(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:10或SEQID NO:11的Cys18(例如，其硫原子)的硫原子；以及对应于来自一个E的SEQ ID NO:10或SEQID NO:11的Cys16(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:10或SEQID NO:11的Cys16(例如，其硫原子)的硫原子。在一些实施方案中，当T为3时，所述硫原子对是对应于来自一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys13(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys13(例如，其硫原子)的硫原子；对应于来自一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys18(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys18(例如，其硫原子)的硫原子；以及对应于来自一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys16(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys16(例如，其硫原子)的硫原子。
在一些实施方案中，当T为3时，所述硫原子对是对应于来自一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys10(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys10(例如，其硫原子)的硫原子；对应于来自一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys13(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys13(例如，其硫原子)的硫原子；对应于来自一个E的SEQ ID NO:10或SEQID NO:11的Cys16(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:10或SEQID NO:11的Cys16(例如，其硫原子)的硫原子；以及对应于来自一个E的SEQ ID NO:10或SEQID NO:11的Cys18(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:10或SEQID NO:11的Cys18(例如，其硫原子)的硫原子。
在一些实施方案中，所述缀合物具有以下结构：
Figure BDA0003629760100000191
其中a、b、c及d各自独立地为0或1且其中当a、b、c或d为0时，两个硫原子形成二硫键。
在一些实施方案中，a为1且b、c及d为0。在一些实施方案中，a及b为1且c及d为0。在一些实施方案中，a及c为1且b及d为0。在一些实施方案中，a及d为1且b及c为0。在一些实施方案中，a、b及c为1且d为0。在一些实施方案中，a、b及d为1且c为0。在一些实施方案中，a、c及d为1且b为0。在一些实施方案中，b及c为1且a及d为0。在一些实施方案中，b及d为1且a及c为0。在一些实施方案中，b、c及d为1且a为0。在一些实施方案中，c及d为1且a及b为0。在一些实施方案中，a、b、c及d为1。
在一些实施方案中，所述硫原子对中的至少一者是对应于SEQ ID NO:4或SEQ IDNO:33的铰链半胱氨酸(即，Cys10及/或Cys13)(例如，其硫原子)的硫原子。在一些实施方案中，所述硫原子对是对应于SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:33中的Cys10及Cys13(例如，其硫原子)的硫原子。
在一些实施方案中，所述硫原子对包含来自各E的半胱氨酸的一个硫原子，即，L-A连同其所附接的硫原子形成两个Fc结构域(例如，包含SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:33的序列的两个Fc结构域)之间的桥。在一些实施方案中，所述硫原子对是对应于来自一个E的SEQID NO:4或SEQ ID NO:33的Cys10(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQID NO:4或SEQ ID NO:33的Cys10(例如，其硫原子)的硫原子。在一些实施方案中，所述硫原子对是对应于来自一个E的SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:33的Cys13(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:33的Cys13(例如，其硫原子)的硫原子。在一些实施方案中，当T为2时，所述硫原子对是对应于来自一个E的SEQ ID NO:4或SEQID NO:33的Cys10(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:4或SEQID NO:33的Cys10(例如，其硫原子)的硫原子以及对应于来自一个E的SEQ ID NO:4或SEQID NO:33的Cys13(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:4或SEQID NO:33的Cys13(例如，其硫原子)的硫原子。
在一些实施方案中，所述缀合物具有以下结构：
Figure BDA0003629760100000201
其中a及b各自独立地为0或1且其中当a或b为0时，两个硫原子形成二硫键。在一些实施方案中，a为1且b为0。在一些实施方案中，a为0且b为1。在一些实施方案中，a及b为1。
在一些实施方案中，所述硫原子对中的至少一者是对应于SEQ ID NO:8的铰链半胱氨酸(即，Cys10及/或Cys13)(例如，其硫原子)的硫原子。在一些实施方案中，所述硫原子对是对应于SEQ ID NO:8中的Cys10及Cys13(例如，其硫原子)的硫原子。
在一些实施方案中，所述硫原子对包含来自各E的半胱氨酸的一个硫原子，即，L-A连同其所附接的硫原子形成两个Fc结构域(例如，包含SEQ ID NO:8的序列的两个Fc结构域)之间的桥。在一些实施方案中，所述硫原子对是对应于来自一个E的SEQ ID NO:8的Cys10(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:8的Cys10(例如，其硫原子)的硫原子。在一些实施方案中，所述硫原子对是对应于来自一个E的SEQ ID NO:8的Cys13(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:8的Cys13(例如，其硫原子)的硫原子。在一些实施方案中，当T为2时，所述硫原子对是对应于来自一个E的SEQ IDNO:8的Cys10(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:8的Cys10(例如，其硫原子)的硫原子以及对应于来自一个E的SEQ ID NO:8的Cys13(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:8的Cys13(例如，其硫原子)的硫原子。
在一些实施方案中，所述缀合物具有以下结构：
Figure BDA0003629760100000211
其中a及b各自独立地为0或1且其中当a或b为0时，两个硫原子形成二硫键。在一些实施方案中，a为1且b为0。在一些实施方案中，a为0且b为1。在一些实施方案中，a及b为1。
在一些实施方案中，所述缀合物具有以下结构：
Figure BDA0003629760100000221
其中a及b各自独立地为0或1且其中当a或b为0时，两个硫原子形成二硫键。在一些实施方案中，a为1且b为0。在一些实施方案中，a为0且b为1。在一些实施方案中，a及b为1。
在一些实施方案中，所述缀合物具有以下结构：
Figure BDA0003629760100000222
其中a及b各自独立地为0或1且其中当a或b为0时，两个硫原子形成二硫键。在一些实施方案中，a为1且b为0。在一些实施方案中，a为0且b为1。在一些实施方案中，a及b为1。
在一些实施方案中，所述缀合物具有以下结构：
Figure BDA0003629760100000223
其中a及b各自独立地为0或1且其中当a或b为0时，所述硫原子为硫醇。在一些实施方案中，a为1且b为0。在一些实施方案中，a为0且b为1。在一些实施方案中，a及b为1。
在先前三个方面的一些实施方案中，所述氮原子为表面暴露赖氨酸的氮，例如对应于SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Lys35、Lys63、Lys77、Lys79、Lys106、Lys123、Lys129、Lys181、Lys203、Lys228或Lys236(例如，其氮原子)的氮原子。在一些实施方案中，所述氮原子是对应于SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Lys65、Lys79、Lys108、Lys230及/或Lys238(例如，其氮原子)的氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物具有以下结构：
Figure BDA0003629760100000231
其中a、b、c、d及e各自独立地为0或1且其中当a、b、c、d或e为0时，两个氮原子为NH2。在一些实施方案中，a为1且b、c、d及e为0。在一些实施方案中，b为1且a、c、d及e为0。在一些实施方案中，c为1且a、b、d及e为0。在一些实施方案中，d为1且a、b、c及e为0。在一些实施方案中，e为1且a、b、c及d为0。在一些实施方案中，a及b为1且c、d及e为0。在一些实施方案中，a及c为1且b、d及e为0。在一些实施方案中，a及d为1且b、c及e为0。在一些实施方案中，a及e为1且b、c及d为0。在一些实施方案中，b及c为1且a、d及e为0。在一些实施方案中，b及d为1且a、c及e为0。在一些实施方案中，b及e为1且a、c及d为0。在一些实施方案中，c及d为1且a、b及e为0。在一些实施方案中，c及e为1且a、b及d为0。在一些实施方案中，d及e为1且a、b及c为0。在一些实施方案中，a、b及c为1且d及e为0。在一些实施方案中，a、b及d为1且c及e为0。在一些实施方案中，a、b及e为1且c及d为0。在一些实施方案中，a、c及d为1且b及e为0。在一些实施方案中，a、c及e为1且b及d为0。在一些实施方案中，a、d及e为1且b及c为0。在一些实施方案中，b、c及d为1且a及e为0。在一些实施方案中，b、d及e为1且a及c为0。在一些实施方案中，c、d及e为1且a及b为0。
在本文所述的缀合物的一些实施方案中，所述缀合物形成包含Fc结构域的同源二聚体。在本文所述的缀合物的一些实施方案中，E与另一个E均二聚以形成Fc结构域。
在另一个方面中，本发明提供一种由以下来描述的缀合物：式(D-I)
Figure BDA0003629760100000241
其中E包含白蛋白(例如，具有SEQ ID NO:139-141中任一者的序列的白蛋白)、白蛋白结合肽或Fc结合肽；每个A1-L-A2中的L是独立地共价附接至E中的表面暴露半胱氨酸的硫原子或表面暴露赖氨酸的氮原子且附接至A1及A2中每一者的接头；n为1；T为1至20的整数(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，且连接于E的波浪线指示每个A1-L-A2独立地共价附接至E中的溶剂暴露半胱氨酸的硫原子或溶剂暴露赖氨酸的氮原子，或其药学上可接受的盐。当T大于1(例如，T为2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)时，每个A1-L-A2可独立地经选择(例如，独立地选自本文所述的A1-L-A2结构中任一者)。
在另一个方面中，本发明提供一种由以下来描述的缀合物：式(M-I)
Figure BDA0003629760100000251
E包含白蛋白(例如，具有SEQ ID NO:139-141中任一者的序列的白蛋白)、白蛋白结合肽或Fc结合肽；每个L-A1中的L是独立地共价附接至E中的表面暴露半胱氨酸的硫原子或表面暴露赖氨酸的氮原子且附接至A1的接头；n为1；T为1至20的整数(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)；且连接于E的波浪线指示每个L-A1独立地共价附接至E中的溶剂暴露半胱氨酸的硫原子或溶剂暴露赖氨酸的氮原子，或其药学上可接受的盐。当T大于1(例如，T为2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)时，每个A1可独立地选自由式(A-I)-(A-VI)中任一者描述的结构。
在一些实施方案中，每个E包含具有SEQ ID NO:139-141中任一者的序列的白蛋白。
在一些实施方案中，T为1且L-A共价附接至对应于SEQ ID NO:139的Cys34的硫原子。
在另一方面中，本发明提供一种表1的中间体(Int)。这些中间体包含RSV F蛋白的一种或多种抑制剂(例如，普沙托韦、MDT 637、JNJ 179、TMC353121、齐列索韦或其类似物)及接头(例如，PEG2-PEG20接头)且可用于合成本文所述的缀合物。表1的中间体可通过本领域技术人员已知的任何合适方法(包括本文所述或例示方法中任一者)(例如，借助于接头)缀合于例如Fc结构域或Fc结构域单体、白蛋白、白蛋白结合肽或Fc结合肽。在一些实施方案中，所述缀合物(例如，由式(1)、(2)、(D-I)-(D-VII)或(M-I)-(M-VII)中任一者描述的缀合物)包含E，其中E为Fc结构域单体或Fc结构域(例如，Fc结构域单体或Fc结构域，每个Fc结构域单体独立地具有SEQ ID NO:1-138中任一者的序列)。在优选实施方案中，E的一个或多个表面暴露赖氨酸残基的一个或多个氮原子或E中的一个或多个表面暴露半胱氨酸的一个或多个硫原子共价缀合于接头(例如，PEG2-PEG20接头)。缀合于E的接头可被官能化，以致其可反应以与本文所述的Int中任一者(例如，表1的Int)形成共价键。在优选实施方案中，E缀合于经叠氮基官能化的接头且Int(例如，表1的Int)经炔基官能化。E的接头-叠氮基及Int的接头-炔缀合(例如，通过点击化学)形成本发明的缀合物，例如由式(1)、(2)、(D-I)-(D-VII)或(M-I)-(M-VII)中任一者描述的缀合物。在其他实施方案中，E缀合于经炔基官能化的接头且Int(例如，表1的Int)经叠氮基官能化。E的接头-炔及Int的接头-叠氮基缀合(例如，通过点击化学)形成本发明的缀合物，例如由式(1)、(2)、(D-I)-(D-VII)或(M-I)-(M-VII)中任一者描述的缀合物。
表1.中间体
Figure BDA0003629760100000261
Figure BDA0003629760100000271
Figure BDA0003629760100000281
Figure BDA0003629760100000291
Figure BDA0003629760100000301
Figure BDA0003629760100000311
Figure BDA0003629760100000321
Figure BDA0003629760100000331
Figure BDA0003629760100000341
Figure BDA0003629760100000351
Figure BDA0003629760100000361
Figure BDA0003629760100000371
Figure BDA0003629760100000381
Figure BDA0003629760100000391
Figure BDA0003629760100000401
Figure BDA0003629760100000411
Figure BDA0003629760100000421
Figure BDA0003629760100000431
Figure BDA0003629760100000441
Figure BDA0003629760100000451
Figure BDA0003629760100000461
Figure BDA0003629760100000471
Figure BDA0003629760100000481
Figure BDA0003629760100000491
Figure BDA0003629760100000501
Figure BDA0003629760100000511
Figure BDA0003629760100000521
*Int-71及Int-72是立体异构体，其中顺式/反式立体化学是指环丁基羟基与酰胺羰基位于同一侧或相反侧。从未为这些异构体指定立体化学。
在另一方面中，本发明提供一种表2的缀合物。如所示，表2的每个缀合物对应于式(M-I)或式(D-I)的缀合物。表2的缀合物包括通过表1的Int与接头的共价反应形成的缀合物，所述接头转而缀合于E(例如，Fc结构域单体、白蛋白、白蛋白结合肽或Fc结合肽)。在一些实施方案中，Int的反应性部分(例如，炔或叠氮基)与共价附接至E的接头(由L’表示)的对应反应性基团(例如，炔或叠氮基)反应，使得表1的Int共价附接至E。如表2所示，L’对应于如(M-I)或(D-I)中定义的L的剩余部分(例如，L’是共价接合Int及E的接头)。例如，L’可包含三唑(通过Int与缀合于E的接头之间的点击化学反应形成)及接头(例如，PEG2-PEG20接头)，所述接头转而缀合于E的氨基酸侧链。
在表2的任何缀合物的一些实施方案中，n为1或2。当n为1时，每个E包含Fc结构域单体(例如，具有SEQ ID NO:1-138中任一者的序列的Fc结构域单体)、白蛋白(例如，具有SEQ ID NO:139-141中任一者的序列的白蛋白)、白蛋白结合肽或Fc结合肽。当n为2时，每个E包含Fc结构域单体(例如，具有SEQ ID NO:1-138中任一者的序列的Fc结构域单体)，且Fc结构域单体二聚以形成Fc结构域。
在表2的任何缀合物的一些实施方案中，T为1至20的整数(例如，n为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)。本公开还提供一种表2的缀合物中任一者的群体，其中T的平均值为1至20(例如，T的平均值为1至2、1至3、1至4、1至5、5至10、10至15或15至20)。在一些实施方案中，T的平均值为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20。
表2的缀合物中的波浪线指示每个L’-Int共价附接至E中的氨基酸侧链(例如，E中表面暴露赖氨酸的氮原子或E中表面暴露半胱氨酸的硫原子)，或其药学上可接受的盐。
表2：对应于表1的中间体的缀合物
Figure BDA0003629760100000531
Figure BDA0003629760100000541
Figure BDA0003629760100000551
Figure BDA0003629760100000561
Figure BDA0003629760100000571
Figure BDA0003629760100000581
Figure BDA0003629760100000591
Figure BDA0003629760100000601
Figure BDA0003629760100000611
Figure BDA0003629760100000621
Figure BDA0003629760100000631
Figure BDA0003629760100000641
Figure BDA0003629760100000651
Figure BDA0003629760100000661
Figure BDA0003629760100000671
Figure BDA0003629760100000681
Figure BDA0003629760100000691
Figure BDA0003629760100000701
Figure BDA0003629760100000711
Figure BDA0003629760100000721
Figure BDA0003629760100000731
Figure BDA0003629760100000741
Figure BDA0003629760100000751
Figure BDA0003629760100000761
Figure BDA0003629760100000771
Figure BDA0003629760100000781
Figure BDA0003629760100000791
Figure BDA0003629760100000801
Figure BDA0003629760100000811
Figure BDA0003629760100000821
Figure BDA0003629760100000831
Figure BDA0003629760100000841
Figure BDA0003629760100000851
Figure BDA0003629760100000861
Figure BDA0003629760100000871
Figure BDA0003629760100000881
Figure BDA0003629760100000891
Figure BDA0003629760100000901
Figure BDA0003629760100000911
Figure BDA0003629760100000921
Figure BDA0003629760100000931
Figure BDA0003629760100000941
Figure BDA0003629760100000951
Figure BDA0003629760100000961
Figure BDA0003629760100000971
Figure BDA0003629760100000981
Figure BDA0003629760100000991
Figure BDA0003629760100001001
在一些实施方案中，每个E包含具有SEQ ID NO:1-138中任一者的序列的Fc结构域单体。在其他实施方案中，每个E包含具有与SEQ ID NO:63或SEQ ID NO:64的氨基酸序列至少95％相同的序列的Fc结构域单体。在其他实施方案中，每个E包含具有SEQ ID NO:63或SEQ ID NO:64的氨基酸序列的Fc结构域单体。在其他实施方案中，每个E包含具有与SEQ IDNO:67或SEQ ID NO:68的氨基酸序列至少95％相同的序列的Fc结构域单体。在其他实施方案中，每个E包含具有SEQ ID NO:67或SEQ ID NO:68的氨基酸序列的Fc结构域单体。在其他实施方案中，每个E包含具有与SEQ ID NO:72或SEQ ID NO:73的氨基酸序列至少95％相同的序列的Fc结构域单体。在其他实施方案中，每个E包含具有SEQ ID NO:72或SEQ ID NO:73的氨基酸序列的Fc结构域单体。在其他实施方案中，每个E包含具有与SEQ ID NO:76或SEQID NO:77的氨基酸序列至少95％相同的序列的Fc结构域单体。在其他实施方案中，每个E包含具有SEQ ID NO:76或SEQ ID NO:77的氨基酸序列的Fc结构域单体。在其他实施方案中，每个E包含具有与SEQ ID NO:81或SEQ ID NO:82的氨基酸序列至少95％相同的序列的Fc结构域单体。在其他实施方案中，每个E包含具有SEQ ID NO:81或SEQ ID NO:82的氨基酸序列的Fc结构域单体。在其他实施方案中，每个E包含具有与SEQ ID NO:85或SEQ ID NO:86的氨基酸序列至少95％相同的序列的Fc结构域单体。在其他实施方案中，每个E包含具有SEQ IDNO:85或SEQ ID NO:86的氨基酸序列的Fc结构域单体。
在另一方面中，本发明提供一种缀合物，其包含(i)第一部分A1；(ii)第二部分A2；(iii)Fc结构域单体或Fc结构域；及(iv)共价附接至A1及A2且附接至所述Fc结构域单体或所述Fc结构域的接头；其中每个A1及每个A2独立地选自由式(A-I)-(A-VI)中任一者描述的结构。
在另一方面中，本发明提供一种缀合物，其包含(i)第一部分Int；(ii)Fc结构域单体或Fc结构域；及(iv)共价附接至Int且附接至所述Fc结构域单体或所述Fc结构域的接头；其中每个Int独立地选自表1的中间体中任一者。
在另一方面中，本发明提供一种缀合物，其包含(i)第一部分A1；(ii)第二部分A2；(iii)白蛋白、白蛋白结合肽或Fc结合肽；及(iv)共价附接至A1及A2且附接至所述Fc结构域单体或所述Fc结构域的接头；其中每个A1及每个A2独立地选自由式(A-I)-(A-VI)中任一者描述的结构。
在另一个方面中，本发明提供一种由以下来描述的缀合物：式(D-I)
Figure BDA0003629760100001011
其中每个A1及每个A2独立地由式(A-I)-(A-VI)描述；
每个E独立地包含Fc结构域单体(例如，具有SEQ ID NO:1-138中任一者的序列的Fc结构域单体)、白蛋白(例如，具有SEQ ID NO:139-141中任一者的序列的白蛋白)、白蛋白结合肽或Fc结合肽；n为1或2；T为1至20的整数(例如，T为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)；且L是共价附接至E、A1及A2中每一者的接头，或其药学上可接受的盐。当T大于1(例如，T为2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)时，每个A1-L-A2可独立地经选择(例如，独立地选自本文所述的A1-L-A2结构中任一者)。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-II)
Figure BDA0003629760100001021
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，缀合物由以下来描述：式(D-II-1)
Figure BDA0003629760100001022
Figure BDA0003629760100001031
其中R7及R8各自独立地选自OH、卤素、腈、硝基、任选取代的胺、任选取代的亚胺、任选取代的C1-C20烷氨基、任选取代的巯基、任选取代的羧基、任选取代的氰基、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20烯基、任选取代的C3-C20环烯基、任选取代的C2-C20炔基、任选取代的C5-C20芳基、任选取代的C2-C15杂芳基及任选取代的C1-C20烷氧基；或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-II-2)
Figure BDA0003629760100001032
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-II-3)
Figure BDA0003629760100001041
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-II-4)
Figure BDA0003629760100001042
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-II-5)
Figure BDA0003629760100001051
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-II-6)
Figure BDA0003629760100001052
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-II-7)
Figure BDA0003629760100001061
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-II-8)
Figure BDA0003629760100001062
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-II-9)
Figure BDA0003629760100001071
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-II-10)
Figure BDA0003629760100001072
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-II-11)
Figure BDA0003629760100001081
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-II-12)
Figure BDA0003629760100001082
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-II-13)
Figure BDA0003629760100001091
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-II-14)
Figure BDA0003629760100001092
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-II-15)
Figure BDA0003629760100001101
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-II-16)
Figure BDA0003629760100001102
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-II-17)
Figure BDA0003629760100001111
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-III)
Figure BDA0003629760100001121
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-III-1)
Figure BDA0003629760100001122
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-III-2)
Figure BDA0003629760100001131
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-III-3)
Figure BDA0003629760100001132
Figure BDA0003629760100001141
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-IV)
Figure BDA0003629760100001142
或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，每个U2是任选取代的C1-C6亚烷基(例如，C1、C2、C3、C4、C5或C6亚烷基)。在一些实施方案中，每个U3由以下来描述：
Figure BDA0003629760100001143
其中Ub为C或O；且U4选自氨基、任选取代的胺、任选取代的亚胺、任选取代的C1-C20烷氨基、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C5-C15芳基、任选取代的C3-C15杂芳基及键。在一些实施方案中，每个U3由以下来描述：
Figure BDA0003629760100001144
Figure BDA0003629760100001151
在一些实施方案中，Ua为N。在一些实施方案中，Ua为CH。在一些实施方案中，p为1、2或3。在一些实施方案中，p为1或2。在一些实施方案中，Ua为N且p为1或2。在一些实施方案中，Ua为CH且p为1、2或3。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-1)
Figure BDA0003629760100001152
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-2)
Figure BDA0003629760100001161
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-3)
Figure BDA0003629760100001162
Figure BDA0003629760100001171
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-4)
Figure BDA0003629760100001172
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-5)
Figure BDA0003629760100001181
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-6)
Figure BDA0003629760100001191
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-7)
Figure BDA0003629760100001192
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-8)
Figure BDA0003629760100001201
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-9)
Figure BDA0003629760100001202
Figure BDA0003629760100001211
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-10)
Figure BDA0003629760100001212
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-11)
Figure BDA0003629760100001213
Figure BDA0003629760100001221
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-12)
Figure BDA0003629760100001222
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-13)
Figure BDA0003629760100001231
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-14)
Figure BDA0003629760100001232
Figure BDA0003629760100001241
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-15)
Figure BDA0003629760100001242
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-16)
Figure BDA0003629760100001251
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-17)
Figure BDA0003629760100001252
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-18)
Figure BDA0003629760100001261
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-19)
Figure BDA0003629760100001271
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-20)
Figure BDA0003629760100001272
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-21)
Figure BDA0003629760100001281
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-22)
Figure BDA0003629760100001282
Figure BDA0003629760100001291
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-23)
Figure BDA0003629760100001292
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-24)
Figure BDA0003629760100001301
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-25)
Figure BDA0003629760100001302
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-26)
Figure BDA0003629760100001311
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-27)
Figure BDA0003629760100001312
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-28)
Figure BDA0003629760100001321
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-29)
Figure BDA0003629760100001331
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-30)
Figure BDA0003629760100001332
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-31)
Figure BDA0003629760100001341
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-32)
Figure BDA0003629760100001342
Figure BDA0003629760100001351
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-33)
Figure BDA0003629760100001352
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-34)
Figure BDA0003629760100001361
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-V)
Figure BDA0003629760100001362
Figure BDA0003629760100001371
或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，U3是任选取代的C1-C6烷基(例如，-(CH2)4、-(CH2)3CN、-(CH2)4F、-(CH2)4OH、-(CH2)2SO2Me、-(CH2)3SO2CH2Me或-(CH2)3SO2Me)。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-V-1)
Figure BDA0003629760100001372
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-V-2)
Figure BDA0003629760100001381
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-V-3)
Figure BDA0003629760100001382
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-V-4)
Figure BDA0003629760100001391
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-V-5)
Figure BDA0003629760100001392
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-V-6)
Figure BDA0003629760100001401
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-V-7)
Figure BDA0003629760100001411
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-V-8)
Figure BDA0003629760100001412
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-V-9)
Figure BDA0003629760100001421
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-V-10)
Figure BDA0003629760100001431
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-V-11)
Figure BDA0003629760100001432
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-V-12)
Figure BDA0003629760100001441
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-V-13)
Figure BDA0003629760100001442
Figure BDA0003629760100001451
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-V-14)
Figure BDA0003629760100001452
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-V-15)
Figure BDA0003629760100001461
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-V-16)
Figure BDA0003629760100001462
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-V-17)
Figure BDA0003629760100001471
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-V-18)
Figure BDA0003629760100001472
Figure BDA0003629760100001481
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-V-19)
Figure BDA0003629760100001482
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-V-20)
Figure BDA0003629760100001491
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-V-21)
Figure BDA0003629760100001492
Figure BDA0003629760100001501
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-V-22)
Figure BDA0003629760100001502
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-V-23)
Figure BDA0003629760100001511
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VI)
Figure BDA0003629760100001512
其中每个Y独立地选自
-O-、-S-、-NR5-、-CH＝N-、-CH3(C＝O)O-、-(C＝O)OR6-、-C(C＝O)OR6-、-(C＝O)R6-、-(C＝O)R6NH(C＝O)-、-(C＝O)NH-、-(C＝O)-、-O(C＝O)NR5-、-O(C＝S)NR5-、-O(C＝O)O-、-O(C＝O)-、-NH(C＝O)O-、-NH(C＝O)-、-NH(C＝NH)-、-NH(C＝O)NR5-、-NH(C＝NH)NR5-、-NH(C＝S)NR5-、-NH(C＝S)-、-OCH2(C＝O)NR5-、-R6OR6C(＝O)NH-、-R5NH(C＝O)-、-R6(SO2)-、-R6O-、-R6N-、-NH(SO2)-、-NH(SO2)NR5-、-OR6-、-NHR6-、-SR6-、-(SO2)-、-(SO2)NH(C＝O)-及-(SO2)NH(C＝O)O-；
每个M1及每个M2各自独立地选自OH、卤素、腈、硝基、任选取代的胺、任选取代的亚胺、任选取代的C1-C20烷氨基、任选取代的巯基、任选取代的羧基、任选取代的氰基、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20烯基、任选取代的C3-C20环烯基、任选取代的C2-C20炔基、任选取代的C5-C20芳基、任选取代的C2-C15杂芳基及任选取代的C1-C20烷氧基；
每个M3及每个M4各自独立地选自任选取代的C1-C20亚烷基及任选取代的C1-C20亚杂烷基；
V为-N-或-CH-；
每个b独立地为0、1、2或3；
L为共价附接至E且附接至A1或者A1及A2中的每一者的每个Y的接头；且
T为1至20的整数；
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VI-1)
Figure BDA0003629760100001531
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VI-2)
Figure BDA0003629760100001532
或其药学上可接受的盐。在优选实施方案中，M4是任选取代的C1-C6亚烷基(例如，-CH2-、-CH2CH2-或-CH2CH2CH2-)。在优选实施方案中，每个M1为H(例如，对应的苯环是未取代的)。在其他实施方案中，每个M1为C1-C3烷基(例如，
-CH3)且b为1或2。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VI-3)
Figure BDA0003629760100001541
或其药学上可接受的盐。在优选实施方案中，M1为C1-C3烷基(例如，
-CH3)且b为1或2。在优选实施方案中，每个M1为H(例如，对应的苯环是未取代的)。在其他实施方案中，每个M1为C1-C3烷基(例如，-CH3)且b为1或2。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VI-4)
Figure BDA0003629760100001551
或其药学上可接受的盐。在优选实施方案中，每个M1为H(例如，对应的苯环是未取代的)。在其他实施方案中，每个M1为C1-C3烷基(例如，
-CH3)且b为1或2。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VI-5)
Figure BDA0003629760100001552
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。在优选实施方案中，每个M1为H(例如，对应的苯环是未取代的)。在其他实施方案中，每个M1为C1-C3烷基(例如，-CH3)且b为1或2。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VI-6)
Figure BDA0003629760100001561
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VI-7)
Figure BDA0003629760100001571
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VI-8)
Figure BDA0003629760100001572
Figure BDA0003629760100001581
或其药学上可接受的盐。在优选实施方案中，每个M1为H(例如，对应的苯环是未取代的)。在其他实施方案中，每个M1为C1-C3烷基(例如，-CH3)且b为1或2。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VI-9)
Figure BDA0003629760100001582
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。在优选实施方案中，每个M1为H(例如，对应的苯环是未取代的)。在其他实施方案中，每个M1为C1-C3烷基(例如，-CH3)且b为1或2。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VI-10)
Figure BDA0003629760100001591
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VI-11)
Figure BDA0003629760100001592
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VI-12)
Figure BDA0003629760100001601
或其药学上可接受的盐。在优选实施方案中，每个M1为H(例如，对应的苯环是未取代的)。在其他实施方案中，每个M1为C1-C3烷基(例如，-CH3)且b为1或2。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VI-13)
Figure BDA0003629760100001611
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。在优选实施方案中，每个M1为H(例如，对应的苯环是未取代的)。在其他实施方案中，每个M1为C1-C3烷基(例如，-CH3)且b为1或2。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VI-14)
Figure BDA0003629760100001612
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VI-15)
Figure BDA0003629760100001621
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VI-16)
Figure BDA0003629760100001631
或其药学上可接受的盐。在优选实施方案中，每个M1为H(例如，对应的苯环是未取代的)。在其他实施方案中，每个M1为C1-C3烷基(例如，-CH3)且b为1或2。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VI-17)
Figure BDA0003629760100001632
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VI-18)
Figure BDA0003629760100001641
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VI-19)
Figure BDA0003629760100001651
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VI-20)
Figure BDA0003629760100001652
Figure BDA0003629760100001661
或其药学上可接受的盐。在优选实施方案中，每个M1为H(例如，对应的苯环是未取代的)。在其他实施方案中，每个M1为C1-C3烷基(例如，-CH3)且b为1或2。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VI-21)
Figure BDA0003629760100001662
或其药学上可接受的盐。在优选实施方案中，每个M1为H(例如，对应的苯环是未取代的)。在其他实施方案中，每个M1为C1-C3烷基(例如，-CH3)且b为1或2。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VI-22)
Figure BDA0003629760100001671
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。在优选实施方案中，每个M1为H(例如，对应的苯环是未取代的)。在其他实施方案中，每个M1为C1-C3烷基(例如，-CH3)且b为1或2。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VI-23)
Figure BDA0003629760100001672
Figure BDA0003629760100001681
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VI-24)
Figure BDA0003629760100001682
或其药学上可接受的盐。在优选实施方案中，每个M1为H(例如，对应的苯环是未取代的)。在其他实施方案中，每个M1为C1-C3烷基(例如，-CH3)且b为1或2。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VI-25)
Figure BDA0003629760100001691
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。在优选实施方案中，每个M1为H(例如，对应的苯环是未取代的)。在其他实施方案中，每个M1为C1-C3烷基(例如，-CH3)且b为1或2。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VI-26)
Figure BDA0003629760100001692
Figure BDA0003629760100001701
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VI-27)
Figure BDA0003629760100001702
或其药学上可接受的盐。在优选实施方案中，每个M1为H(例如，对应的苯环是未取代的)。在其他实施方案中，每个M1为C1-C3烷基(例如，-CH3)且b为1或2。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VI-28)
Figure BDA0003629760100001711
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。在优选实施方案中，每个M1为H(例如，对应的苯环是未取代的)。在其他实施方案中，每个M1为C1-C3烷基(例如，-CH3)且b为1或2。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VI-29)
Figure BDA0003629760100001712
Figure BDA0003629760100001721
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VI-30)
Figure BDA0003629760100001722
或其药学上可接受的盐。在优选实施方案中，每个M1为H(例如，对应的苯环是未取代的)。在其他实施方案中，每个M1为C1-C3烷基(例如，-CH3)且b为1或2。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VI-31)
Figure BDA0003629760100001731
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。在优选实施方案中，每个M1为H(例如，对应的苯环是未取代的)。在其他实施方案中，每个M1为C1-C3烷基(例如，-CH3)且b为1或2。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VI-32)
Figure BDA0003629760100001732
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VI-33)
Figure BDA0003629760100001741
或其药学上可接受的盐。在优选实施方案中，每个M1为H(例如，对应的苯环是未取代的)。在其他实施方案中，每个M1为C1-C3烷基(例如，-CH3)且b为1或2。
在式(D-VI-20)的缀合物的优选实施方案中，M3不存在，W为C2-C20杂环烷基(例如，哌啶)，且M4为C1-C20亚烷基(例如，-CH2CH2-)。在优选实施方案中，Y选自-NR5-(例如，-NH-)、-NH(C＝O)-或-NH(C＝O)NR5-(例如，-NH(C＝O)NH-)。
在式(D-VI-20)的缀合物的优选实施方案中，M3不存在，W不存在，且M4为C1-C20亚烷基(例如，-CH2CH2CH2-)。在优选实施方案中，Y选自-NR5-(例如，-NH-)、-NH(C＝O)-或-NH(C＝O)NR5-(例如，-NH(C＝O)NH-)。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VII)
Figure BDA0003629760100001751
其中每个Y独立地选自-O-、-S-、-NR5-、-CH＝N-、-CH3(C＝O)O-、-(C＝O)OR6-、-C(C＝O)OR6-、-(C＝O)R6-、-(C＝O)R6NH(C＝O)-、-(C＝O)NH-、-(C＝O)-、-O(C＝O)NR5-、-O(C＝S)NR5-、-O(C＝O)O-、-O(C＝O)-、-NH(C＝O)O-、-NH(C＝O)-、-NH(C＝NH)-、-NH(C＝O)NR5-、-NH(C＝NH)NR5-、-NH(C＝S)NR5-、-NH(C＝S)-、-OCH2(C＝O)NR5-、-R6OR6C(＝O)NH-、-R5NH(C＝O)-、-R6(SO2)-、-R6O-、-R6N-、-NH(SO2)-、-NH(SO2)NR5-、-OR6-、-NHR6-、-SR6-、-(SO2)-、-(SO2)NH(C＝O)-及-(SO2)NH(C＝O)O-；
每个K1及每个K2各自独立地选自OH、卤素、腈、硝基、任选取代的胺、任选取代的亚胺、任选取代的C1-C20烷氨基、任选取代的巯基、任选取代的羧基、任选取代的氰基、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20烯基、任选取代的C3-C20环烯基、任选取代的C2-C20炔基、任选取代的C5-C20芳基、任选取代的C2-C15杂芳基及任选取代的C1-C20烷氧基；
h为0或1，
其中当h为1时，K3为
Figure BDA0003629760100001761
D为-O-、-CH2-或-NH-(例如，-O-或-CH2-)；
Rx及Ry各自独立地为C1-C3烷基；
b及g2各自独立地为0、1、2或3；
其中当h为0时，K3为
Figure BDA0003629760100001762
且Y为氮原子；
Rz选自-OH、卤素、腈、硝基、氨基、任选取代的胺、任选取代的亚胺、任选取代的C1-C20烷氨基、任选取代的巯基、任选取代的羧基、任选取代的氰基、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20烯基、任选取代的C3-C20环烯基、任选取代的C2-C20炔基、任选取代的C5-C20芳基、任选取代的C2-C15杂芳基及任选取代的C1-C20烷氧基；
L为共价附接至E且附接至A1或者A1及A2中的每一者的每个Y的接头；且
T为1至20的整数；
或其药学上可接受的盐。在优选实施方案中，每个K1为H(例如，对应的苯基是未取代的)。在优选实施方案中，K2为C1-C3烷基(例如，-CH3)且b为1。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-1)
Figure BDA0003629760100001771
或其药学上可接受的盐。在优选实施方案中，每个K1为H(例如，对应的苯基是未取代的)。在优选实施方案中，K2为C1-C3烷基(例如，-CH3)且b为1。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-2)
Figure BDA0003629760100001772
或其药学上可接受的盐。在优选实施方案中，每个K1为H(例如，对应的苯基是未取代的)。在优选实施方案中，K2为C1-C3烷基(例如，-CH3)且b为1。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-3)
Figure BDA0003629760100001781
或其药学上可接受的盐。在优选实施方案中，每个K1为H(例如，对应的苯基是未取代的)。在优选实施方案中，K2为C1-C3烷基(例如，-CH3)且b为1。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-4)
Figure BDA0003629760100001782
Figure BDA0003629760100001793
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-5)
Figure BDA0003629760100001791
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-6)
Figure BDA0003629760100001792
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-7)
Figure BDA0003629760100001801
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-8)
Figure BDA0003629760100001811
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-9)
Figure BDA0003629760100001812
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-10)
Figure BDA0003629760100001821
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-11)
Figure BDA0003629760100001822
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-12)
Figure BDA0003629760100001831
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-13)
Figure BDA0003629760100001841
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-14)
Figure BDA0003629760100001842
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-15)
Figure BDA0003629760100001851
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-16)
Figure BDA0003629760100001852
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-17)
Figure BDA0003629760100001861
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-18)
Figure BDA0003629760100001871
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-19)
Figure BDA0003629760100001872
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-20)
Figure BDA0003629760100001881
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-21)
Figure BDA0003629760100001882
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-22)
Figure BDA0003629760100001891
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-23)
Figure BDA0003629760100001892
Figure BDA0003629760100001901
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-24)
Figure BDA0003629760100001902
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-25)
Figure BDA0003629760100001911
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-26)
Figure BDA0003629760100001912
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-27)
Figure BDA0003629760100001921
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-28)
Figure BDA0003629760100001922
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-29)
Figure BDA0003629760100001931
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-30)
Figure BDA0003629760100001932
Figure BDA0003629760100001941
或其药学上可接受的盐。在优选实施方案中，每个K1为H(例如，对应的苯基是未取代的)。在优选实施方案中，K2为C1-C3烷基(例如，-CH3)且b为1。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-31)
Figure BDA0003629760100001942
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-32)
Figure BDA0003629760100001951
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-33)
Figure BDA0003629760100001952
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-34)
Figure BDA0003629760100001961
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-35)
Figure BDA0003629760100001962
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-36)
Figure BDA0003629760100001971
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-37)
Figure BDA0003629760100001972
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-38)
Figure BDA0003629760100001981
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-39)
Figure BDA0003629760100001982
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-40)
Figure BDA0003629760100001991
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-41)
Figure BDA0003629760100001992
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-42)
Figure BDA0003629760100002001
或其药学上可接受的盐。在优选实施方案中，每个K1为H(例如，对应的苯基是未取代的)。在优选实施方案中，K2为C1-C3烷基(例如，-CH3)且b为1。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-43)
Figure BDA0003629760100002011
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-44)
Figure BDA0003629760100002012
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-45)
Figure BDA0003629760100002021
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-46)
Figure BDA0003629760100002022
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-47)
Figure BDA0003629760100002031
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-48)
Figure BDA0003629760100002032
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-49)
Figure BDA0003629760100002041
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-50)
Figure BDA0003629760100002042
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-51)
Figure BDA0003629760100002051
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-52)
Figure BDA0003629760100002052
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-53)
Figure BDA0003629760100002061
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-54)
Figure BDA0003629760100002062
或其药学上可接受的盐。在优选实施方案中，Rz为NH2。在优选实施方案中，每个K1为H(例如，对应的苯基是未取代的)。在优选实施方案中，K2为C1-C3烷基(例如，-CH3)且b为1。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-55)
Figure BDA0003629760100002071
或其药学上可接受的盐。在优选实施方案中，Rz为NH2。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-56)
Figure BDA0003629760100002072
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-57)
Figure BDA0003629760100002081
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，L或L’包含一个或多个任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C1-C20亚杂烷基、任选取代的C2-C20亚烯基、任选取代的C2-C20亚杂烯基、任选取代的C2-C20亚炔基、任选取代的C2-C20亚杂炔基、任选取代的C3-C20亚环烷基、任选取代的C2-C20亚杂环烷基、任选取代的C4-C20亚环烯基、任选取代的C4-C20亚杂环烯基、任选取代的C8-C20亚环炔基、任选取代的C8-C20亚杂环炔基、任选取代的C5-C15亚芳基、任选取代的C2-C15亚杂芳基、O、S、NRi、P、羰基、硫羰基、磺酰基、磷酸酯基、磷酰基或亚氨基，其中Ri为H、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C1-C20杂烷基、任选取代的C2-C20烯基、任选取代的C2-C20杂烯基、任选取代的C2-C20炔基、任选取代的C2-C20杂炔基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C4-C20环烯基、任选取代的C4-C20杂环烯基、任选取代的C8-C20环炔基、任选取代的C8-C20杂环炔基、任选取代的C5-C15芳基或任选取代的C2-C15杂芳基。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，L或L’的骨架由一个或多个任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C1-C20亚杂烷基、任选取代的C2-C20亚烯基、任选取代的C2-C20亚杂烯基、任选取代的C2-C20亚炔基、任选取代的C2-C20亚杂炔基、任选取代的C3-C20亚环烷基、任选取代的C2-C20亚杂环烷基、任选取代的C4-C20亚环烯基、任选取代的C4-C20亚杂环烯基、任选取代的C8-C20亚环炔基、任选取代的C8-C20亚杂环炔基、任选取代的C5-C15亚芳基、任选取代的C2-C15亚杂芳基、O、S、NRi、P、羰基、硫羰基、磺酰基、磷酸酯基、磷酰基或亚氨基组成，其中Ri为H、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C1-C20杂烷基、任选取代的C2-C20烯基、任选取代的C2-C20杂烯基、任选取代的C2-C20炔基、任选取代的C2-C20杂炔基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C4-C20环烯基、任选取代的C4-C20杂环烯基、任选取代的C8-C20环炔基、任选取代的C8-C20杂环炔基、任选取代的C5-C15芳基或任选取代的C2-C15杂芳基。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，L或L’经氧代取代。在一些实施方案中，L或L’的骨架包含不超过250个原子。在一些实施方案中，L或L’能够形成酰胺、氨基甲酸酯、磺酰基或脲连接。在一些实施方案中，
L或L’为键。在一些实施方案中，L或L’为原子。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，每个L由以下来描述：式(D-L-I)
Figure BDA0003629760100002101
其中LA由式GA1-(ZA1)g1-(YA1)h1-(ZA2)i1-(YA2)j1-(ZA3)k1-(YA3)l1-(ZA4)m1-(YA4)n1-(ZA5)o1-GA2描述；LB由式GB1-(ZB1)g2-(YB1)h2-(ZB2)i2-(YB2)j2-(ZB3)k2-(YB3)l2-(ZB4)m2-(YB4)n2-(ZB5)o2-GB2描述；LC由式GC1-(ZC1)g3-(YC1)h3-(ZC2)i3-(YC2)j3-(ZC3)k3-(YC3)l3-(ZC4)m3-(YC4)n3-(ZC5)o3-GC2描述；GA1是附接至Qi的键；GA2是附接至A1的键；GB1是附接至Qi的键；GB2是附接至A2的键；GC1是附接至Qi的键；GC2是附接至E的键或能够与缀合于E的官能团反应的官能团(例如，马来酰亚胺及半胱氨酸、胺及经活化羧酸、硫醇及马来酰亚胺、经活化磺酸及胺、异氰酸酯及胺、叠氮化物及炔以及烯烃及四嗪)；ZA1、ZA2、ZA3、ZA4、ZA5、ZB1、ZB2、ZB3、ZB4、ZB5、ZC1、ZC2、ZC3、ZC4及ZC5中的每一者独立地为任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C1-C20亚杂烷基、任选取代的C2-C20亚烯基、任选取代的C2-C20亚杂烯基、任选取代的C2-C20亚炔基、任选取代的C2-C20亚杂炔基、任选取代的C3-C20亚环烷基、任选取代的C2-C20亚杂环烷基、任选取代的C4-C20亚环烯基、任选取代的C4-C20亚杂环烯基、任选取代的C8-C20亚环炔基、任选取代的C8-C20亚杂环炔基、任选取代的C5-C15亚芳基或任选取代的C2-C15亚杂芳基；YA1、YA2、YA3、YA4、YB1、YB2、YB3、YB4、YC1、YC2、YC3及YC4中的每一者独立地为O、S、NRi、P、羰基、硫羰基、磺酰基、磷酸酯基、磷酰基或亚氨基；Ri为H、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C1-C20杂烷基、任选取代的C2-C20烯基、任选取代的C2-C20杂烯基、任选取代的C2-C20炔基、任选取代的C2-C20杂炔基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C4-C20环烯基、任选取代的C4-C20杂环烯基、任选取代的C8-C20环炔基、任选取代的C8-C20杂环炔基、任选取代的C5-C15芳基或任选取代的C2-C15杂芳基；g1、h1、i1、j1、k1、l1、m1、n1、o1、g2、h2、i2、j2、k2、l2、m2、n2、o2、g3、h3、i3、j3、k3、l3、m3、n3及o3中的每一者独立地为0或1；Qi为氮原子、任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C1-C20亚杂烷基、任选取代的C2-C20亚烯基、任选取代的C2-C20亚杂烯基、任选取代的C2-C20亚炔基、任选取代的C2-C20亚杂炔基、任选取代的C3-C20亚环烷基、任选取代的C2-C20亚杂环烷基、任选取代的C4-C20亚环烯基、任选取代的C4-C20亚杂环烯基、任选取代的C8-C20亚环炔基、任选取代的C8-C20亚杂环炔基、任选取代的C5-C15亚芳基或任选取代的C2-C15亚杂芳基。
在一些实施方案中，任选取代包括用聚乙二醇(PEG)取代。PEG具有重复单元结构(-CH2CH2O-)n，其中n为2至100的整数。聚乙二醇可选自PEG2至PEG100中任一者(例如，PEG2、PEG3、PEG4、PEG5、PEG5-PEG10、PEG10-PEG20、PEG20-PEG30、PEG30-PEG40、PEG50-PEG60、PEG60-PEG70、PEG70-PEG80、PEG80-PEG90、PEG90-PEG100)。
在一些实施方案中，LC可具有两个附接至Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽的点(例如，两个GC2)。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，L包括聚乙二醇(PEG)接头。PEG接头包括具有重复单元结构(-CH2CH2O-)n的接头，其中n为2至100的整数。聚乙二醇接头可共价接合RSV F蛋白抑制剂及E(例如，在式(M-I)-(M-IV)中任一者的缀合物中)。聚乙二醇接头可共价接合第一RSV F蛋白抑制剂及第二RSV F蛋白抑制剂(例如，在式(D-I)-(D-VII)中任一者的缀合物中)。聚乙二醇接头可共价接合RSV F蛋白抑制剂二聚体及E(例如，在式(D-I)-(D-VII)中任一者的缀合物中)。聚乙二醇接头可选自PEG2至PEG100中任一者(例如，PEG2、PEG3、PEG4、PEG5、PEG5-PEG10、PEG10-PEG20、PEG20-PEG30、PEG30-PEG40、PEG50-PEG60、PEG60-PEG70、PEG70-PEG80、PEG80-PEG90、PEG90-PEG100)。在一些实施方案中，Lc包括PEG接头，其中LC共价附接至Qi及E中每一者。
可用于本文所述的缀合物的式(D-L-I)接头包括但不限于
Figure BDA0003629760100002121
Figure BDA0003629760100002131
Figure BDA0003629760100002141
Figure BDA0003629760100002151
Figure BDA0003629760100002161
Figure BDA0003629760100002171
Figure BDA0003629760100002181
Figure BDA0003629760100002191
Figure BDA0003629760100002201
Figure BDA0003629760100002211
及
Figure BDA0003629760100002212
其中z1及z2各自独立地为1至20的整数；且R9选自H、C1-C20烷基、C3-C20环烷基、C2-C20杂环烷基；C5-C15芳基及C2-C15杂芳基。
式(D-L-I)接头也可包括以下中任一者：
Figure BDA0003629760100002213
Figure BDA0003629760100002221
Figure BDA0003629760100002231
及
Figure BDA0003629760100002241
在另一个方面中，本发明提供一种由以下来描述的缀合物：式(M-I)
Figure BDA0003629760100002242
其中每个E独立地包含Fc结构域单体(例如，具有SEQ ID NO:1-138中任一者的序列的Fc结构域单体)、白蛋白(例如，具有SEQ ID NO:139-141中任一者的序列的白蛋白)、白蛋白结合肽或Fc结合肽；n为1或2；T为1至20的整数(例如，T为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)；且L为共价附接至E及A1中每一者的接头，或其药学上可接受的盐。当T大于1(例如，T为2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)时，每个A1可独立地选自由式(A-I)-(A-VI)中任一者描述的结构。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-II)
Figure BDA0003629760100002251
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，缀合物由以下来描述：式(M-II-1)
Figure BDA0003629760100002252
其中R7及R8各自独立地选自OH、卤素、腈、硝基、任选取代的胺、任选取代的亚胺、任选取代的C1-C20烷氨基、任选取代的巯基、任选取代的羧基、任选取代的氰基、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20烯基、任选取代的C3-C20环烯基、任选取代的C2-C20炔基、任选取代的C5-C20芳基、任选取代的C2-C15杂芳基及任选取代的C1-C20烷氧基；
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-II-2)
Figure BDA0003629760100002261
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-II-3)
Figure BDA0003629760100002262
Figure BDA0003629760100002271
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-II-4)
Figure BDA0003629760100002272
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-II-5)
Figure BDA0003629760100002281
其中L’是L的剩余部分，且y1为1至20的整数(例如，y1为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-II-6)
Figure BDA0003629760100002282
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-II-7)
Figure BDA0003629760100002291
其中L’是L的剩余部分，且y1为1至20的整数(例如，y1为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-II-8)
Figure BDA0003629760100002301
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-II-9)
Figure BDA0003629760100002302
其中L’是L的剩余部分，且y1为1至20的整数(例如，y1为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-II-10)
Figure BDA0003629760100002311
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-II-11)
Figure BDA0003629760100002312
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-II-12)
Figure BDA0003629760100002321
其中L’是L的剩余部分，且y1为1至20的整数(例如，y1独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-II-13)
Figure BDA0003629760100002331
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-II-14)
Figure BDA0003629760100002332
Figure BDA0003629760100002341
其中L’是L的剩余部分，且y1为1至20的整数(例如，y1为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-II-15)
Figure BDA0003629760100002342
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-II-16)
Figure BDA0003629760100002351
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-II-17)
Figure BDA0003629760100002352
其中L’是L的剩余部分，且y1为1至20的整数(例如，y1独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-III)
Figure BDA0003629760100002361
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-III-1)
Figure BDA0003629760100002362
Figure BDA0003629760100002371
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-III-2)
Figure BDA0003629760100002372
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-III-3)
Figure BDA0003629760100002381
其中L’是L的剩余部分，且y1为1至20的整数(例如，y1为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-IV)
Figure BDA0003629760100002382
Figure BDA0003629760100002391
或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，U2是任选取代的C1-C6亚烷基(例如，C1、C2、C3、C4、C5或C6亚烷基)。在一些实施方案中，U3由以下来描述：
Figure BDA0003629760100002392
其中Ub为C或O；且U4选自氨基、任选取代的胺、任选取代的亚胺、任选取代的C1-C20烷氨基、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C5-C15芳基、任选取代的C3-C15杂芳基及键。在一些实施方案中，U3由以下来描述：
Figure BDA0003629760100002393
Figure BDA0003629760100002394
在一些实施方案中，Ua为N。在一些实施方案中，Ua为CH。在一些实施方案中，p为1、2或3。在一些实施方案中，p为1或2。在一些实施方案中，Ua为N且p为1或2。在一些实施方案中，Ua为CH且p为1、2或3。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-1)
Figure BDA0003629760100002401
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-2)
Figure BDA0003629760100002402
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-3)
Figure BDA0003629760100002411
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-4)
Figure BDA0003629760100002412
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-5)
Figure BDA0003629760100002421
其中L’是L的剩余部分，且y1为1至20的整数(例如，y1为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-6)
Figure BDA0003629760100002431
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-7)
Figure BDA0003629760100002441
其中L’是L的剩余部分，且y1为1至20的整数(例如，y1为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-8)
Figure BDA0003629760100002451
其中U2是任选取代的C1-C6亚烷基(例如，C1、C2、C3、C4、C5或C6亚烷基)，或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-9)
Figure BDA0003629760100002452
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-10)
Figure BDA0003629760100002461
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-11)
Figure BDA0003629760100002462
其中L’是L的剩余部分，且y1为1至20的整数(例如，y1为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-12)
Figure BDA0003629760100002471
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-13)
Figure BDA0003629760100002481
其中L’是L的剩余部分，且y1为1至20的整数(例如，y1为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-14)
Figure BDA0003629760100002482
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-15)
Figure BDA0003629760100002491
其中L’是L的剩余部分，且y1为1至20的整数(例如，y1为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-16)
Figure BDA0003629760100002501
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-17)
Figure BDA0003629760100002502
其中L’是L的剩余部分，且y1为1至20的整数(例如，y1为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-18)
Figure BDA0003629760100002511
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-19)
Figure BDA0003629760100002512
Figure BDA0003629760100002521
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-20)
Figure BDA0003629760100002522
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-21)
Figure BDA0003629760100002531
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-22)
Figure BDA0003629760100002532
Figure BDA0003629760100002541
其中L’是L的剩余部分，且y1为1至20的整数(例如，y1为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-23)
Figure BDA0003629760100002542
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-24)
Figure BDA0003629760100002551
其中L’是L的剩余部分，且y1为1至20的整数(例如，y1为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-25)
Figure BDA0003629760100002552
其中U2是任选取代的C1-C6烷基(例如，C1、C2、C3、C4、C5或C6烷基)，或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-26)
Figure BDA0003629760100002561
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-27)
Figure BDA0003629760100002562
Figure BDA0003629760100002571
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-28)
Figure BDA0003629760100002572
其中L’是L的剩余部分，且y1为1至20的整数(例如，y1为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-29)
Figure BDA0003629760100002581
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-30)
Figure BDA0003629760100002582
其中L’是L的剩余部分，且y1为1至20的整数(例如，y1为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-31)
Figure BDA0003629760100002591
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-32)
Figure BDA0003629760100002601
其中L’是L的剩余部分，且y1为1至20的整数(例如，y1为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-33)
Figure BDA0003629760100002602
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-34)
Figure BDA0003629760100002611
其中L’是L的剩余部分，且y1为1至20的整数(例如，y1为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-V)
Figure BDA0003629760100002621
或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，U3是任选取代的C1-C6烷基(例如，-(CH2)4、-(CH2)3CN、-(CH2)4F、-(CH2)4OH、-(CH2)2SO2Me、-(CH2)3SO2CH2Me或-(CH2)3SO2Me)。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-V-1)
Figure BDA0003629760100002622
Figure BDA0003629760100002631
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-V-2)
Figure BDA0003629760100002632
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-V-3)
Figure BDA0003629760100002633
Figure BDA0003629760100002641
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-V-4)
Figure BDA0003629760100002642
其中L’是L的剩余部分，且每个y1独立地为1至20的整数(例如，每个y1独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-V-5)
Figure BDA0003629760100002651
其中L’是L的剩余部分，且每个y1独立地为1至20的整数(例如，每个y1独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-V-6)
Figure BDA0003629760100002652
Figure BDA0003629760100002661
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-V-7)
Figure BDA0003629760100002662
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-V-8)
Figure BDA0003629760100002671
其中L’是L的剩余部分，且每个y1独立地为1至20的整数(例如，每个y1独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-V-9)
Figure BDA0003629760100002672
Figure BDA0003629760100002681
其中L’是L的剩余部分，且每个y1独立地为1至20的整数(例如，每个y1独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-V-10)
Figure BDA0003629760100002682
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-V-11)
Figure BDA0003629760100002691
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-V-12)
Figure BDA0003629760100002692
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-V-13)
Figure BDA0003629760100002701
其中L’是L的剩余部分，且y1为1至20的整数(例如，y1为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-V-14)
Figure BDA0003629760100002711
其中L’是L的剩余部分，且y1为1至20的整数(例如，y1为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-V-15)
Figure BDA0003629760100002712
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-V-16)
Figure BDA0003629760100002721
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-V-17)
Figure BDA0003629760100002722
Figure BDA0003629760100002731
其中L’是L的剩余部分，且y1为1至20的整数(例如，y1为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-V-18)
Figure BDA0003629760100002732
其中L’是L的剩余部分，且y1为1至20的整数(例如，y1为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-V-19)
Figure BDA0003629760100002741
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-V-20)
Figure BDA0003629760100002742
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-V-21)
Figure BDA0003629760100002751
其中L’是L的剩余部分，且y1为1至20的整数(例如，y1为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-V-22)
Figure BDA0003629760100002752
Figure BDA0003629760100002761
其中L’是L的剩余部分，且y1为1至20的整数(例如，y1为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-V-23)
Figure BDA0003629760100002762
其中L’是L的剩余部分，且y1为1至20的整数(例如，y1为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VI)
Figure BDA0003629760100002771
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VI-1)
Figure BDA0003629760100002772
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VI-2)
Figure BDA0003629760100002781
或其药学上可接受的盐。在优选实施方案中，M4是任选取代的C1-C6亚烷基(例如，-CH2-、-CH2CH2-或-CH2CH2CH2-)。在优选实施方案中，每个M1为H(例如，对应的苯环是未取代的)。在其他实施方案中，每个M1为C1-C3烷基(例如，
-CH3)且b为1或2。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VI-3)
Figure BDA0003629760100002791
或其药学上可接受的盐。在优选实施方案中，M1为C1-C3烷基(例如，
-CH3)且b为1或2。在优选实施方案中，每个M1为H(例如，对应的苯环是未取代的)。在其他实施方案中，每个M1为C1-C3烷基(例如，-CH3)且b为1或2。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VI-4)
Figure BDA0003629760100002801
或其药学上可接受的盐。在优选实施方案中，每个M1为H(例如，对应的苯环是未取代的)。在其他实施方案中，每个M1为C1-C3烷基(例如，
-CH3)且b为1或2。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VI-5)
Figure BDA0003629760100002802
其中L’是L的剩余部分，且每个y1独立地为1至20的整数(例如，每个y1独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。在优选实施方案中，每个M1为H(例如，对应的苯环是未取代的)。在其他实施方案中，每个M1为C1-C3烷基(例如，-CH3)且b为1或2。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VI-6)
Figure BDA0003629760100002811
其中L’是L的剩余部分，且每个y1独立地为1至20的整数(例如，每个y1独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VI-7)
Figure BDA0003629760100002821
其中L’是L的剩余部分，且每个y1独立地为1至20的整数(例如，每个y1独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VI-8)
Figure BDA0003629760100002822
Figure BDA0003629760100002831
或其药学上可接受的盐。在优选实施方案中，每个M1为H(例如，对应的苯环是未取代的)。在其他实施方案中，每个M1为C1-C3烷基(例如，-CH3)且b为1或2。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VI-9)
Figure BDA0003629760100002832
其中L’是L的剩余部分，且每个y1独立地为1至20的整数(例如，每个y1独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。在优选实施方案中，每个M1为H(例如，对应的苯环是未取代的)。在其他实施方案中，每个M1为C1-C3烷基(例如，-CH3)且b为1或2。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VI-10)
Figure BDA0003629760100002841
其中L’是L的剩余部分，且每个y1独立地为1至20的整数(例如，每个y1独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VI-11)
Figure BDA0003629760100002842
其中L’是L的剩余部分，且每个y1独立地为1至20的整数(例如，每个y1独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VI-12)
Figure BDA0003629760100002851
或其药学上可接受的盐。在优选实施方案中，每个M1为H(例如，对应的苯环是未取代的)。在其他实施方案中，每个M1为C1-C3烷基(例如，-CH3)且b为1或2。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VI-13)
Figure BDA0003629760100002861
其中L’是L的剩余部分，且每个y1独立地为1至20的整数(例如，每个y1独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。在优选实施方案中，每个M1为H(例如，对应的苯环是未取代的)。在其他实施方案中，每个M1为C1-C3烷基(例如，-CH3)且b为1或2。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VI-14)
Figure BDA0003629760100002862
Figure BDA0003629760100002871
其中L’是L的剩余部分，且每个y1独立地为1至20的整数(例如，每个y1独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VI-15)
Figure BDA0003629760100002872
其中L’是L的剩余部分，且每个y1独立地为1至20的整数(例如，每个y1独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VI-16)
Figure BDA0003629760100002881
或其药学上可接受的盐。在优选实施方案中，每个M1为H(例如，对应的苯环是未取代的)。在其他实施方案中，每个M1为C1-C3烷基(例如，-CH3)且b为1或2。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VI-17)
Figure BDA0003629760100002882
Figure BDA0003629760100002891
其中L’是L的剩余部分，且每个y1独立地为1至20的整数(例如，每个y1独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VI-18)
Figure BDA0003629760100002892
其中L’是L的剩余部分，且每个y1独立地为1至20的整数(例如，每个y1独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VI-19)
Figure BDA0003629760100002901
其中L’是L的剩余部分，且每个y1独立地为1至20的整数(例如，每个y1独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VI-20)
Figure BDA0003629760100002911
或其药学上可接受的盐。在优选实施方案中，每个M1为H(例如，对应的苯环是未取代的)。在其他实施方案中，每个M1为C1-C3烷基(例如，-CH3)且b为1或2。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VI-21)
Figure BDA0003629760100002912
Figure BDA0003629760100002921
或其药学上可接受的盐。在优选实施方案中，每个M1为H(例如，对应的苯环是未取代的)。在其他实施方案中，每个M1为C1-C3烷基(例如，-CH3)且b为1或2。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VI-22)
Figure BDA0003629760100002922
其中L’是L的剩余部分，且每个y1独立地为1至20的整数(例如，每个y1独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。在优选实施方案中，每个M1为H(例如，对应的苯环是未取代的)。在其他实施方案中，每个M1为C1-C3烷基(例如，-CH3)且b为1或2。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VI-23)
Figure BDA0003629760100002931
其中L’是L的剩余部分，且每个y1独立地为1至20的整数(例如，每个y1独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VI-24)
Figure BDA0003629760100002932
或其药学上可接受的盐。在优选实施方案中，每个M1为H(例如，对应的苯环是未取代的)。在其他实施方案中，每个M1为C1-C3烷基(例如，-CH3)且b为1或2。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VI-25)
Figure BDA0003629760100002941
其中L’是L的剩余部分，且每个y1独立地为1至20的整数(例如，每个y1独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。在优选实施方案中，每个M1为H(例如，对应的苯环是未取代的)。在其他实施方案中，每个M1为C1-C3烷基(例如，-CH3)且b为1或2。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VI-26)
Figure BDA0003629760100002951
其中L’是L的剩余部分，且每个y1独立地为1至20的整数(例如，每个y1独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VI-27)
Figure BDA0003629760100002952
或其药学上可接受的盐。在优选实施方案中，每个M1为H(例如，对应的苯环是未取代的)。在其他实施方案中，每个M1为C1-C3烷基(例如，-CH3)且b为1或2。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VI-28)
Figure BDA0003629760100002961
其中L’是L的剩余部分，且每个y1独立地为1至20的整数(例如，每个y1独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。在优选实施方案中，每个M1为H(例如，对应的苯环是未取代的)。在其他实施方案中，每个M1为C1-C3烷基(例如，-CH3)且b为1或2。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VI-29)
Figure BDA0003629760100002971
其中L’是L的剩余部分，且每个y1独立地为1至20的整数(例如，每个y1独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VI-30)
Figure BDA0003629760100002972
或其药学上可接受的盐。在优选实施方案中，每个M1为H(例如，对应的苯环是未取代的)。在其他实施方案中，每个M1为C1-C3烷基(例如，-CH3)且b为1或2。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VI-31)
Figure BDA0003629760100002981
其中L’是L的剩余部分，且每个y1独立地为1至20的整数(例如，每个y1独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。在优选实施方案中，每个M1为H(例如，对应的苯环是未取代的)。在其他实施方案中，每个M1为C1-C3烷基(例如，-CH3)且b为1或2。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VI-32)
Figure BDA0003629760100002991
其中L’是L的剩余部分，且每个y1独立地为1至20的整数(例如，每个y1独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VI-33)
Figure BDA0003629760100002992
或其药学上可接受的盐。在优选实施方案中，每个M1为H(例如，对应的苯环是未取代的)。在其他实施方案中，每个M1为C1-C3烷基(例如，-CH3)且b为1或2。
在式(M-VI-33)的缀合物的优选实施方案中，M3不存在，W为C2-C20杂环烷基(例如，哌啶)，且M4为C1-C20亚烷基(例如，-CH2CH2-)。在优选实施方案中，Y选自-NR5-(例如，-NH-)、-NH(C＝O)-或-NH(C＝O)NR5-(例如，-NH(C＝O)NH-)。
在式(M-VI-33)的缀合物的优选实施方案中，M3不存在，W不存在，且M4为C1-C20亚烷基(例如，-CH2CH2CH2-)。在优选实施方案中，Y选自-NR5-(例如，-NH-)、-NH(C＝O)-或-NH(C＝O)NR5-(例如，-NH(C＝O)NH-)。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VII)
Figure BDA0003629760100003001
其中每个Y独立地选自-O-、-S-、-NR5-、-CH＝N-、-CH3(C＝O)O-、-(C＝O)OR6-、-C(C＝O)OR6-、-(C＝O)R6-、-(C＝O)R6NH(C＝O)-、-(C＝O)NH-、-(C＝O)-、-O(C＝O)NR5-、-O(C＝S)NR5-、-O(C＝O)O-、-O(C＝O)-、-NH(C＝O)O-、-NH(C＝O)-、-NH(C＝NH)-、-NH(C＝O)NR5-、-NH(C＝NH)NR5-、-NH(C＝S)NR5-、-NH(C＝S)-、-OCH2(C＝O)NR5-、-R6OR6C(＝O)NH-、-R5NH(C＝O)-、-R6(SO2)-、-R6O-、-R6N-、-NH(SO2)-、-NH(SO2)NR5-、-OR6-、-NHR6-、-SR6-、-(SO2)-、-(SO2)NH(C＝O)-及-(SO2)NH(C＝O)O-；
每个K1及每个K2各自独立地选自-OH、卤素、腈、硝基、任选取代的胺、任选取代的亚胺、任选取代的C1-C20烷氨基、任选取代的巯基、任选取代的羧基、任选取代的氰基、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20烯基、任选取代的C3-C20环烯基、任选取代的C2-C20炔基、任选取代的C5-C20芳基、任选取代的C2-C15杂芳基及任选取代的C1-C20烷氧基；
h为0或1，
其中当h为1时，K3为
Figure BDA0003629760100003011
D为-O-、-CH2-或-NH-(例如，-O-或-CH2-)；
Rx及Ry各自独立地为C1-C3烷基；
b及g2各自独立地为0、1、2或3；
其中当h为0时，K3为
Figure BDA0003629760100003012
且Y为氮原子；
Rz选自-OH、卤素、腈、硝基、氨基、任选取代的胺、任选取代的亚胺、任选取代的C1-C20烷氨基、任选取代的巯基、任选取代的羧基、任选取代的氰基、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20烯基、任选取代的C3-C20环烯基、任选取代的C2-C20炔基、任选取代的C5-C20芳基、任选取代的C2-C15杂芳基及任选取代的C1-C20烷氧基；
L为共价附接至E且附接至A1或者A1及A2中的每一者的每个Y的接头；且
T为1至20的整数；
或其药学上可接受的盐。在优选实施方案中，每个K1为H(例如，对应的苯基是未取代的)。在优选实施方案中，K2为C1-C3烷基(例如，-CH3)且b为1。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-1)
Figure BDA0003629760100003021
或其药学上可接受的盐。在优选实施方案中，每个K1为H(例如，对应的苯基是未取代的)。在优选实施方案中，K2为C1-C3烷基(例如，-CH3)且b为1。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-2)
Figure BDA0003629760100003031
或其药学上可接受的盐。在优选实施方案中，每个K1为H(例如，对应的苯基是未取代的)。在优选实施方案中，K2为C1-C3烷基(例如，-CH3)且b为1。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-3)
Figure BDA0003629760100003032
或其药学上可接受的盐。在优选实施方案中，每个K1为H(例如，对应的苯基是未取代的)。在优选实施方案中，K2为C1-C3烷基(例如，-CH3)且b为1。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-4)
Figure BDA0003629760100003041
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-5)
Figure BDA0003629760100003042
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-6)
Figure BDA0003629760100003051
其中L’是L的剩余部分，且每个y1独立地为1至20的整数(例如，每个y1独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-7)
Figure BDA0003629760100003052
其中L’是L的剩余部分，且每个y1独立地为1至20的整数(例如，每个y1独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-8)
Figure BDA0003629760100003061
其中L’是L的剩余部分，且每个y1独立地为1至20的整数(例如，每个y1独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-9)
Figure BDA0003629760100003071
其中L’是L的剩余部分，且每个y1独立地为1至20的整数(例如，每个y1独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-10)
Figure BDA0003629760100003072
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-11)
Figure BDA0003629760100003081
其中L’是L的剩余部分，且每个y1独立地为1至20的整数(例如，每个y1独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-12)
Figure BDA0003629760100003082
其中L’是L的剩余部分，且每个y1独立地为1至20的整数(例如，每个y1独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-13)
Figure BDA0003629760100003091
其中L’是L的剩余部分，且每个y1独立地为1至20的整数(例如，每个y1独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-14)
Figure BDA0003629760100003101
其中L’是L的剩余部分，且每个y1独立地为1至20的整数(例如，每个y1独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-15)
Figure BDA0003629760100003102
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-16)
Figure BDA0003629760100003111
其中L’是L的剩余部分，且每个y1独立地为1至20的整数(例如，每个y1独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-17)
Figure BDA0003629760100003112
其中L’是L的剩余部分，且每个y1独立地为1至20的整数(例如，每个y1独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-18)
Figure BDA0003629760100003121
其中L’是L的剩余部分，且每个y1独立地为1至20的整数(例如，每个y1独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-19)
Figure BDA0003629760100003122
Figure BDA0003629760100003131
其中L’是L的剩余部分，且每个y1独立地为1至20的整数(例如，每个y1独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-20)
Figure BDA0003629760100003132
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-21)
Figure BDA0003629760100003133
Figure BDA0003629760100003141
其中L’是L的剩余部分，且每个y1独立地为1至20的整数(例如，每个y1独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-22)
Figure BDA0003629760100003142
其中L’是L的剩余部分，且每个y1独立地为1至20的整数(例如，每个y1独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-23)
Figure BDA0003629760100003151
其中L’是L的剩余部分，且每个y1独立地为1至20的整数(例如，每个y1独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-24)
Figure BDA0003629760100003152
其中L’是L的剩余部分，且每个y1独立地为1至20的整数(例如，每个y1独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-25)
Figure BDA0003629760100003161
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-26)
Figure BDA0003629760100003162
其中L’是L的剩余部分，且每个y1独立地为1至20的整数(例如，每个y1独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-27)
Figure BDA0003629760100003171
其中L’是L的剩余部分，且每个y1独立地为1至20的整数(例如，每个y1独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-28)
Figure BDA0003629760100003172
Figure BDA0003629760100003181
其中L’是L的剩余部分，且每个y1独立地为1至20的整数(例如，每个y1独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-29)
Figure BDA0003629760100003182
其中L’是L的剩余部分，且每个y1独立地为1至20的整数(例如，每个y1独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-30)
Figure BDA0003629760100003191
或其药学上可接受的盐。在优选实施方案中，每个K1为H(例如，对应的苯基是未取代的)。在优选实施方案中，K2为C1-C3烷基(例如，-CH3)且b为1。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-31)
Figure BDA0003629760100003192
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-32)
Figure BDA0003629760100003201
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-33)
Figure BDA0003629760100003202
其中L’是L的剩余部分，且每个y1独立地为1至20的整数(例如，每个y1独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-34)
Figure BDA0003629760100003211
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-35)
Figure BDA0003629760100003212
其中L’是L的剩余部分，且每个y1独立地为1至20的整数(例如，每个y1独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-36)
Figure BDA0003629760100003221
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-37)
Figure BDA0003629760100003222
其中L’是L的剩余部分，且每个y1独立地为1至20的整数(例如，每个y1独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-38)
Figure BDA0003629760100003231
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-39)
Figure BDA0003629760100003232
其中L’是L的剩余部分，且每个y1独立地为1至20的整数(例如，每个y1独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-40)
Figure BDA0003629760100003241
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-41)
Figure BDA0003629760100003242
其中L’是L的剩余部分，且每个y1独立地为1至20的整数(例如，每个y1独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-42)
Figure BDA0003629760100003251
或其药学上可接受的盐。在优选实施方案中，每个K1为H(例如，对应的苯基是未取代的)。在优选实施方案中，K2为C1-C3烷基(例如，-CH3)且b为1。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-43)
Figure BDA0003629760100003261
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-44)
Figure BDA0003629760100003262
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-45)
Figure BDA0003629760100003271
其中L’是L的剩余部分，且每个y1独立地为1至20的整数(例如，每个y1独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-46)
Figure BDA0003629760100003272
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-47)
Figure BDA0003629760100003281
其中L’是L的剩余部分，且每个y1独立地为1至20的整数(例如，每个y1独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-48)
Figure BDA0003629760100003282
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-49)
Figure BDA0003629760100003291
其中L’是L的剩余部分，且每个y1独立地为1至20的整数(例如，每个y1独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-50)
Figure BDA0003629760100003292
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-51)
Figure BDA0003629760100003301
其中L’是L的剩余部分，且每个y1独立地为1至20的整数(例如，每个y1独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-52)
Figure BDA0003629760100003302
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-53)
Figure BDA0003629760100003311
其中L’是L的剩余部分，且每个y1独立地为1至20的整数(例如，每个y1独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-54)
Figure BDA0003629760100003312
或其药学上可接受的盐。在优选实施方案中，Rz为NH2。在优选实施方案中，每个K1为H(例如，对应的苯基是未取代的)。在优选实施方案中，K2为C1-C3烷基(例如，-CH3)且b为1。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-55)
Figure BDA0003629760100003321
或其药学上可接受的盐。在优选实施方案中，Rz为NH2。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-56)
Figure BDA0003629760100003322
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-57)
Figure BDA0003629760100003331
其中L’是L的剩余部分，且每个y1独立地为1至20的整数(例如，每个y1独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，L或L’包含一个或多个任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C1-C20亚杂烷基、任选取代的C2-C20亚烯基、任选取代的C2-C20亚杂烯基、任选取代的C2-C20亚炔基、任选取代的C2-C20亚杂炔基、任选取代的C3-C20亚环烷基、任选取代的C2-C20亚杂环烷基、任选取代的C4-C20亚环烯基、任选取代的C4-C20亚杂环烯基、任选取代的C8-C20亚环炔基、任选取代的C8-C20亚杂环炔基、任选取代的C5-C15亚芳基、任选取代的C2-C15亚杂芳基、O、S、NRi、P、羰基、硫羰基、磺酰基、磷酸酯基、磷酰基或亚氨基，其中Ri为H、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C1-C20杂烷基、任选取代的C2-C20烯基、任选取代的C2-C20杂烯基、任选取代的C2-C20炔基、任选取代的C2-C20杂炔基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C4-C20环烯基、任选取代的C4-C20杂环烯基、任选取代的C8-C20环炔基、任选取代的C8-C20杂环炔基、任选取代的C5-C15芳基或任选取代的C2-C15杂芳基。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，L或L’的骨架由一个或多个任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C1-C20亚杂烷基、任选取代的C2-C20亚烯基、任选取代的C2-C20亚杂烯基、任选取代的C2-C20亚炔基、任选取代的C2-C20亚杂炔基、任选取代的C3-C20亚环烷基、任选取代的C2-C20亚杂环烷基、任选取代的C4-C20亚环烯基、任选取代的C4-C20亚杂环烯基、任选取代的C8-C20亚环炔基、任选取代的C8-C20亚杂环炔基、任选取代的C5-C15亚芳基、任选取代的C2-C15亚杂芳基、O、S、NRi、P、羰基、硫羰基、磺酰基、磷酸酯基、磷酰基或亚氨基组成，其中Ri为H、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C1-C20杂烷基、任选取代的C2-C20烯基、任选取代的C2-C20杂烯基、任选取代的C2-C20炔基、任选取代的C2-C20杂炔基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C4-C20环烯基、任选取代的C4-C20杂环烯基、任选取代的C8-C20环炔基、任选取代的C8-C20杂环炔基、任选取代的C5-C15芳基或任选取代的C2-C15杂芳基。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，L或L’经氧代取代。在一些实施方案中，L或L’的骨架包含不超过250个原子。在一些实施方案中，L或L’能够形成酰胺、氨基甲酸酯、磺酰基或脲连接。在一些实施方案中，L或L’为键。在一些实施方案中，L或L’为原子。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，每个L由以下来描述：式(M-L-I)
J1-(Q1)g-(T1)h-(Q2)i-(T2)j-(Q3)k-(T3)l-(Q4)m-(T4)n-(Q5)o-J2
其中：J1是附接至A1的键；J2是附接至E的键或能够与缀合于E的官能团反应的官能团(例如，马来酰亚胺及半胱氨酸、胺及经活化羧酸、硫醇及马来酰亚胺、经活化磺酸及胺、异氰酸酯及胺、叠氮化物及炔以及烯烃及四嗪)；Q1、Q2、Q3、Q4及Q5中的每一者独立地为任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C1-C20亚杂烷基、任选取代的C2-C20亚烯基、任选取代的C2-C20亚杂烯基、任选取代的C2-C20亚炔基、任选取代的C2-C20亚杂炔基、任选取代的C3-C20亚环烷基、任选取代的C2-C20亚杂环烷基、任选取代的C4-C20亚环烯基、任选取代的C4-C20亚杂环烯基、任选取代的C8-C20亚环炔基、任选取代的C8-C20亚杂环炔基、任选取代的C5-C15亚芳基或任选取代的C2-C15亚杂芳基；T1、T2、T3、T4中的每一者独立地为O、S、NRi、P、羰基、硫羰基、磺酰基、磷酸酯基、磷酰基或亚氨基；Ri为H、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C1-C20杂烷基、任选取代的C2-C20烯基、任选取代的C2-C20杂烯基、任选取代的C2-C20炔基、任选取代的C2-C20杂炔基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C4-C20环烯基、任选取代的C4-C20杂环烯基、任选取代的C8-C20环炔基、任选取代的C8-C20杂环炔基、任选取代的C5-C15芳基或任选取代的C2-C15杂芳基；且g、h、i、j、k、l、m、n及o各自独立地为0或1；或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，任选取代包括用聚乙二醇(PEG)取代。PEG具有重复单元结构(-CH2CH2O-)n，其中n为2至100的整数。聚乙二醇可选自PEG2至PEG100中任一者(例如，PEG2、PEG3、PEG4、PEG5、PEG5-PEG10、PEG10-PEG20、PEG20-PEG30、PEG30-PEG40、PEG50-PEG60、PEG60-PEG70、PEG70-PEG80、PEG80-PEG90、PEG90-PEG100)。
在一些实施方案中，J2可具有两个附接至Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽的点(例如，两个J2)。
在一些实施方案中，L为
Figure BDA0003629760100003361
其中d为1至20的整数(例如，d为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)。
在一些实施方案中，L为
Figure BDA0003629760100003362
Figure BDA0003629760100003371
Figure BDA0003629760100003381
Figure BDA0003629760100003382
及
Figure BDA0003629760100003383
其中每个R8独立地选自H、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C5-C15芳基及任选取代的C2-C15杂芳基；
每个R9独立地选自任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C5-C15芳基及任选取代的C2-C15杂芳基；且
d、e、y1及x1中的每一者独立地为1至26的整数(例如，d为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或26)。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，L包括(例如，接合A1及E的L的一部分包括)：
Figure BDA0003629760100003391
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，L包括聚乙二醇(PEG)接头。PEG接头包括具有重复单元结构(-CH2CH2O-)n的接头，其中n为2至100的整数。聚乙二醇接头可共价接合RSV F蛋白抑制剂及E(例如，在式中任一者的缀合物中)。聚乙二醇接头可共价接合第一RSV F蛋白抑制剂及第二RSV F蛋白抑制剂(例如，在式中任一者的缀合物中)。聚乙二醇接头可共价接合RSV F蛋白抑制剂二聚体及E(例如，在式中任一者的缀合物中)。聚乙二醇接头可选自PEG2至PEG100中任一者(例如，PEG2、PEG3、PEG4、PEG5、PEG5-PEG10、PEG10-PEG20、PEG20-PEG30、PEG30-PEG40、PEG50-PEG60、PEG60-PEG70、PEG70-PEG80、PEG80-PEG90、PEG90-PEG100)。在一些实施方案中，Lc包括PEG接头，其中LC共价附接至Qi及E中每一者。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，L共价附接至E的表面暴露赖氨酸的氮原子或L共价附接至E的表面暴露半胱氨酸的硫原子。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E为Fc结构域单体。在一些实施方案中，n为2且每个E二聚以形成Fc结构域。
在一些实施方案中，n为2，每个E为Fc结构域单体，每个E二聚以形成Fc结构域，且所述缀合物由以下来描述：式(D-I-1)
Figure BDA0003629760100003401
其中J为Fc结构域；且T为1至20的整数(例如，T为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，n为2，每个E为Fc结构域单体，每个E二聚以形成Fc结构域，且所述缀合物由以下来描述：式(M-I-1)
Figure BDA0003629760100003411
其中J为Fc结构域；且T为1至20的整数(例如，T为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E具有SEQ ID NO:1-138中任一者的序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E为白蛋白、白蛋白结合肽或Fc结合肽。在其中E为白蛋白、白蛋白结合肽或Fc结合肽的一些实施方案中，n为1。
在一些实施方案中，n为1，E为白蛋白、白蛋白结合肽或Fc结合肽且所述缀合物由以下来描述：式(D-I-2)
Figure BDA0003629760100003412
其中E为白蛋白、白蛋白结合肽或Fc结合肽；且T为1至20的整数，或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，n为1，E为白蛋白、白蛋白结合肽或Fc结合肽且所述缀合物由以下来描述：式(M-I-2)
Figure BDA0003629760100003413
其中E为白蛋白、白蛋白结合肽或Fc结合肽；且T为1至20的整数，或其药学上可接受的盐。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E为具有SEQ ID NO:139-141中任一者的序列的白蛋白。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，T为1、2、3、4或5。
在另一方面中，本发明提供一种具有本文所述的缀合物中任一者的结构的缀合物的群体(例如，具有式(1)、(2)、(1)、(2)、(D-I)-(D-VII)或(M-I)-(M-VII)中任一式的缀合物的群体)，其中T的平均值为1至20(例如，T的平均值为1至2、1至3、1至4、1至5、5至10、10至15或15至20)。在一些实施方案中，T的平均值为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20。
在另一方面中，本发明提供一种药物组合物，其包含本文所述的缀合物中任一者(例如，式(1)、(2)、(1)、(2)、(D-I)-(D-VII)或(M-I)-(M-VII)中任一者的缀合物)或其药学上可接受的盐，及药学上可接受的赋形剂。
在另一方面中，本发明提供一种用于治疗具有病毒感染或据推测具有病毒感染的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的本文所述的缀合物或组合物中任一者(例如，式(1)、(2)、(1)、(2)、(D-I)-(D-VII)或(M-I)-(M-VII)中任一者的缀合物)。
在另一方面中，本发明提供一种用于预防性治疗有需要的受试者的病毒感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的本文所述的缀合物或组合物中任一者(例如，式(1)、(2)、(1)、(2)、(D-I)-(D-VII)或(M-I)-(M-VII)中任一者的缀合物)。
在一些实施方案中，所述病毒感染是由RSV引起。在一些实施方案中，所述病毒感染是RSV A或RSV B。
在一些实施方案中，所述受试者是免疫受损的。
在一些实施方案中，所述受试者已经诊断患有体液免疫缺陷、T细胞缺陷、嗜中性粒细胞减少症、无脾或补体缺陷。
在一些实施方案中，所述受试者正在经免疫抑制性疗法治疗或即将经免疫抑制性疗法治疗。
在一些实施方案中，所述受试者已经诊断患有引起免疫抑制的疾病。在一些实施方案中，所述疾病为癌症或获得性免疫缺陷综合征。在一些实施方案中，所述癌症为白血病、淋巴瘤或多发性骨髓瘤。
在一些实施方案中，所述受试者已经受或即将经受造血干细胞移植。
在一些实施方案中，所述受试者已经受或即将经受器官移植。
在一些实施方案中，所述受试者小于60个月大。在一些实施方案中，所述受试者小于24个月大。在一些实施方案中，其中所述受试者是早产儿。
在一些实施方案中，所述缀合物或组合物肌肉内、静脉内、皮内、动脉内、腹膜内、病变内、颅内、关节内、前列腺内、胸膜内、气管内、鼻内、玻璃体内、阴道内、直肠内、经表面、肿瘤内、经腹膜、皮下、结膜下、囊内、经粘膜、心包内、脐内、眼内、经口、经局部、通过吸入、通过注射或通过输注经施用。
在一些实施方案中，所述受试者经第二治疗剂治疗。在一些实施方案中，所述第二治疗剂为抗病毒剂。在一些实施方案中，所述第二治疗剂为病毒疫苗。在一些实施方案中，所述病毒疫苗在所述受试者中引发针对RSV(例如，RSV A或RSV B)的免疫反应。
在一些实施方案中，含Fc结构域组合物可替代Fc结构域，且含Fc结构域单体组合物可替代式(1)、(2)、(1)、(2)、(D-I)-(D-VII)或(M-I)-(M-VII)中任一者(例如，式(1)、(2)、(D-I)、(D-II)、(D-II-1)、(D-II-2)、(D-II-3)、(D-II-4)、(D-II-5)、(D-II-6)、(D-II-7)、(D-II-8)、(D-II-9)、(D-II-10)、(D-II-11)、(D-II-12)、(D-II-13)、(D-II-14)、(D-II-15)、(D-II-16)、(D-II-17)、(D-III)、(D-III-1)、(D-III-2)、(D-III-3)、(D-IV)、(D-IV-1)、(D-IV-2)、(D-IV-3)、(D-IV-4)、(D-IV-5)、(D-IV-6)、(D-IV-7)、(D-IV-8)、(D-IV-9)、(D-IV-10)、(D-IV-11)、(D-IV-12)、(D-IV-13)、(D-IV-14)、(D-IV-15)、(D-IV-16)、(D-IV-17)、(D-V)、(D-V-1)、(D-V-2)、(D-V-3)、(D-V-4)、(D-V-5)、(D-V-6)、(D-V-7)、(D-V-8)、(D-V-9)、(D-V-10)、(D-V-11)、(D-V-12)、(D-V-13)、(D-V-14)、(D-V-15)、(D-V-16)、(D-V-17)、(D-V-18)、(D-V-19)、(D-V-20)、(D-V-21)、(D-V-22)、(D-V-23)、(D-VI)、(D-VI-1)、(D-VI-2)、(D-VI-3)、(D-VI-4)、(D-VI-5)、(D-VI-6)、(D-VI-7)、(D-VI-8)、(D-VI-9)、(D-VI-10)、(D-VI-11)、(D-VI-12)、(D-VI-13)、(D-VI-14)、(D-VI-15)、(D-VI-16)、(D-VI-17)、(D-VI-18)、(D-VI-19)、(D-VI-20)、(D-VI-21)、(D-VI-22)、(D-VI-23)、(D-VI-24)、(D-VI-25)、(D-VI-26)、(D-VI-27)、(D-VI-28)、(D-VI-29)、(D-VI-30)、(D-VI-31)、(D-VI-32)、(D-VI-33)、(D-VII)、(D-VII-1)、(D-VII-2)、(D-VII-3)、(D-VII-4)、(D-VII-5)、(D-VII-6)、(D-VII-7)、(D-VII-8)、(D-VII-9)、(D-VII-10)、(D-VII-11)、(D-VII-12)、(D-VII-13)、(D-VII-14)、(D-VII-15)、(D-VII-16)、(D-VII-17)、(D-VII-18)、(D-VII-19)、(D-VII-20)、(D-VII-21)、(D-VII-22)、(D-VII-23)、(D-VII-24)、(D-VII-25)、(D-VII-26)、(D-VII-27)、(D-VII-28)、(D-VII-29)、(D-VII-30)、(D-VII-31)、(D-VII-32)、(D-VII-33)、(D-VII-34)、(D-VII-35)、(D-VII-36)、(D-VII-37)、(D-VII-38)、(D-VII-39)、(D-VII-40)、(D-VII-41)、(D-VII-42)、(D-VII-43)、(D-VII-44)、(D-VII-45)、(D-VII-46)、(D-VII-48)、(D-VII-49)、(D-VII-50)、(D-VII-51)、(D-VII-52)、(D-VII-53)、(D-VII-54)、(D-VII-55)、(D-VII-56)、(D-VII-57)、(D-VII-47)、(M-I)、(M-II)、(M-II-17)、(M-III)、(M-III-1)、(M-III-2)、(M-III-3)、(M-IV)、(M-IV-1)、(M-IV-2)、(M-IV-3)、(M-IV-4)、(M-IV-5)、(M-IV-6)、(M-IV-7)、(M-IV-8)、(M-IV-9)、(M-IV-10)、(M-IV-11)、(M-IV-12)、(M-IV-13)、(M-IV-14)、(M-IV-15)、(M-IV-16)、(M-IV-17)、(M-V)、(M-V-1)、(M-V-2)、(M-V-3)、(M-V-4)、(M-V-5)、(M-V-6)、(M-V-7)、(M-V-8)、(M-V-9)、(M-V-10)、(M-V-11)、(M-V-12)、(M-V-13)、(M-V-14)、(M-V-15)、(M-V-16)、(M-V-17)、(M-V-18)、(M-V-19)、(M-V-20)、(M-V-21)、(M-V-22)、(M-V-23)、(M-VI)、(M-VI-1)、(M-VI-2)、(M-VI-3)、(M-VI-4)、(M-VI-5)、(M-VI-6)、(M-VI-7)、(M-VI-8)、(M-VI-9)、(M-VI-10)、(M-VI-11)、(M-VI-12)、(M-VI-13)、(M-VI-14)、(M-VI-15)、(M-VI-16)、(M-VI-17)、(M-VI-18)、(M-VI-19)、(M-VI-20)、(M-VI-21)、(M-VI-22)、(M-VI-23)、(M-VI-24)、(M-VI-25)、(M-VI-26)、(M-VI-27)、(M-VI-28)、(M-VI-29)、(M-VI-30)、(M-VI-31)、(M-VI-32)、(M-VI-33)、(M-VII)、(M-VII-1)、(M-VII-2)、(M-VII-3)、(M-VII-4)、(M-VII-5)、(M-VII-6)、(M-VII-7)、(M-VII-8)、(M-VII-9)、(M-VII-10)、(M-VII-11)、(M-VII-12)、(M-VII-13)、(M-VII-14)、(M-VII-15)、(M-VII-16)、(M-VII-17)、(M-VII-18)、(M-VII-19)、(M-VII-20)、(M-VII-21)、(M-VII-22)、(M-VII-23)、(M-VII-24)、(M-VII-25)、(M-VII-26)、(M-VII-27)、(M-VII-28)、(M-VII-29)、(M-VII-30)、(M-VII-31)、(M-VII-32)、(M-VII-33)、(M-VII-34)、(M-VII-35)、(M-VII-36)、(M-VII-37)、(M-VII-38)、(M-VII-39)、(M-VII-40)、(M-VII-41)、(M-VII-42)、(M-VII-43)、(M-VII-44)、(M-VII-45)、(M-VII-46)、(M-VII-47)、(M-VII-48)、(M-VII-49)、(M-VII-50)、(M-VII-51)、(M-VII-52)、(M-VII-53)、(M-VII-54)、(M-VII-55)、(M-VII-56)或(M-VII-57)中任一者)中的Fc结构域单体。在本文所述的式中任一者(例如，式(1)、(2)、(1)、(2)、(D-I)-(D-VII)或(M-I)-(M-VII)中任一者)中，当n为1时，E为含Fc结构域-单体组合物。在本文所述的式中任一者(例如，式(1)、(2)、(D-I)-(D-VII)或(M-I)-(M-VII)中任一者)中，当n为2时，E为含Fc结构域组合物。
在某些实施方案中，所述含Fc结构域组合物为抗体或抗体片段。抗体可包括任何形式的免疫球蛋白、重链抗体、轻链抗体、基于LRR的抗体或具有抗体样特性的其他蛋白骨架，以及本领域中已知的任何其他免疫结合部分，包括抗体片段(例如，Fab、Fab’、Fab’2、F(ab’)2、Fd、Fv、Feb、scFv或SMIP)。不同类别的抗体的亚单元结构及三维组态为本领域中已知的。抗体片段可包含结合部分，所述结合部分包含源于抗体或与抗体具有显著同源性的部分，诸如抗体的抗原决定区。例示性抗体片段包括Fab、Fab’、Fab’2、F(ab’)2、Fd、Fv、Feb、scFv及SMIP。
在特定实施方案中，所述抗体或抗体片段为人、小鼠、骆驼科动物(例如，美洲驼、羊驼或骆驼)、山羊、绵羊、兔、鸡、豚鼠、仓鼠、马或大鼠抗体或抗体片段。在特定实施方案中，所述抗体为IgG、IgA、IgD、IgE、IgM或内体。在某些实施方案中，所述抗体片段包括scFv、sdAb、dAb、Fab、Fab’、Fab’2、F(ab’)2、Fd、Fv、Feb或SMIP。
在一些实施方案中，所述含Fc结构域组合物(例如，抗体或抗体片段)对一种或多种靶标(例如，抗原，诸如RSV相关抗原)赋予结合特异性。RSV靶向抗体是本领域已知的，例如，如以下中所述：Gilman等人Sci.Immunol.1(6),(2006)，其通过引用以其整体并入本文。
在一些实施方案中，由所述含Fc结构域组合物(例如，抗体或抗体片段)结合的所述一种或多种靶标(例如，抗原)为病毒(例如，RSV)蛋白，诸如RSV F蛋白。在一些实施方案中，所述抗体或抗体片段识别病毒表面抗原。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:1的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:2的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:3的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:4的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:5的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:6的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:7的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:8的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:9的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:10的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:11的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:12的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:13的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:14的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:15的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:16的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:17的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:18的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:19的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:20的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:21的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:22的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:23的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:24的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:25的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:26的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:27的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:28的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:29的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:30的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:31的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:32的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:33的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:34的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:35的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:36的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:37的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:38的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:39的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:40的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:41的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:42的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:43的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:45的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:46的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:47的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:48的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:49的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:50的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:51的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:52的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:53的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:54的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:55的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:56的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:56的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:57的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:58的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:59的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:59的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:60的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:61的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:62的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:63的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:64的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:65的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:66的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:67的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:67的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:68的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:69的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:70的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:70的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:71的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:71的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:72的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:72的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:73的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:73的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:74的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:74的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:75的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:75的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:76的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:76的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:77的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:77的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:78的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:78的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:79的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:79的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:80的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:80的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:81的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:81的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:82的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:82的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:83的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:83的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:84的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:84的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:85的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:85的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:86的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:86的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:87的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:87的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:88的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:88的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:89的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:89的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:90的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:90的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:91的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:91的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:92的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:92的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:93的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:93的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:94的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:94的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:95的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:95的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:96的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:96的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:97的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:97的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:98的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:98的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:99的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:99的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:100的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:100的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:101的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:101的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:102的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:102的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:103的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:104的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:105的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:105的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:106的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:106的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:107的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:107的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:108的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:108的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:109的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:109的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:110的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:110的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:111的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:111的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:112的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:112的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:113的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:113的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:114的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:114的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:115的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:115的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:116的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:116的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:117的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:117的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:118的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:118的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:119的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:119的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:120的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:120的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:121的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:121的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:122的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:122的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:123的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:123的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:124的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:124的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:125的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:125的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:126的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:126的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:127的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:127的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:128的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:128的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:129的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:129的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:130的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:130的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:131的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:131的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:132的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:132的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:133的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:133的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:134的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:134的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:135的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:135的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:136的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:136的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:137的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:137的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包含SEQ ID NO:138的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包含与SEQ ID NO:138的氨基酸序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
在其中E包含Fc结构域单体的本文所述的任何方面的一些实施方案中，所述Fc结构域单体(例如，具有SEQ ID NO:1-138中任一者的序列的Fc结构域单体)包含对应于M252Y/S254T/T256E(YTE)的三重突变。如本文所用，应理解“对应于”(例如，特定SEQ IDNO.的)特定氨基酸残基的氨基酸包含本领域技术人员将理解与(例如，所述特定序列的)所述特定残基比对的任何氨基酸残基。例如，SEQ ID NO:1-138中任一者可发生突变以包含YTE突变。
在其中E包含Fc结构域单体的本文所述的任何方面的一些实施方案中，所述Fc结构域单体(例如，具有SEQ ID NO:1-138中任一者的序列的Fc结构域单体)包含对应于M428L/N434S(LS)的双重突变型。如本文所用，应理解“对应于”(例如，特定SEQ ID NO.的)特定氨基酸残基的氨基酸包含本领域技术人员将理解与(例如，所述特定序列的)所述特定残基比对的任何氨基酸残基。例如，SEQ ID NO:1-138中任一者可发生突变以包含LS突变。
在其中E包含Fc结构域单体的本文所述的任何方面的一些实施方案中，所述Fc结构域单体(例如，具有SEQ ID NO:1-138中任一者的序列的Fc结构域单体)包含对应于N434H的突变型。
在其中E包含Fc结构域单体的本文所述的任何方面的一些实施方案中，所述Fc结构域单体(例如，具有SEQ ID NO:1-138中任一者的序列的Fc结构域单体)包含对应于C220S的突变型。如本文所用，应理解“对应于”(例如，特定SEQ ID NO.的)特定氨基酸残基的氨基酸包含本领域技术人员将理解与(例如，所述特定序列的)所述特定残基比对的任何氨基酸残基。例如，SEQ ID NO:1-138中任一者可发生突变以包含C220S突变。
在其中E包含Fc结构域单体的本文所述的任何方面的一些实施方案中，所述Fc结构域单体(例如，具有SEQ ID NO:1-95中任一者的序列的Fc结构域单体)包含对应于L309D/Q311H/N434S(DHS)的三重突变。如本文所用，应理解“对应于”(例如，特定SEQ ID NO.的)特定氨基酸残基的氨基酸包含本领域技术人员将理解与(例如，所述特定序列的)所述特定残基比对的任何氨基酸残基。例如，SEQ ID NO:1-95中任一者可发生突变以包含DHS突变。
如本文所用，应理解“对应于”(例如，特定SEQ ID NO.的)特定氨基酸残基的氨基酸包含本领域技术人员将理解与(例如，所述特定序列的)所述特定残基比对的任何氨基酸残基。例如，SEQ ID NO:1-138中任一者可发生突变以包含N434H突变。
在其中E包含Fc结构域单体的本文所述的任何方面的一些实施方案中，所述Fc结构域单体(例如，具有SEQ ID NO:1-138中任一者的序列的Fc结构域单体)是所述Fc结构域单体的片段(例如，来自SEQ ID NO:1-138的至少25个(例如，20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50个或更多个)、至少50个(例如，51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75个或更多个)、至少75个(例如，75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100个或更多个)连续氨基酸长度的片段)。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中(例如，式(1)、(2)、(D-I)-(D-VII)或(M-I)-(M-VII)中任一者的缀合物)，E的一个或多个表面暴露赖氨酸残基的一个或多个氮原子或E中的一个或多个表面暴露半胱氨酸的一个或多个硫原子共价缀合于接头(例如，PEG2-PEG20接头)。缀合于E的接头可被官能化，以致其可反应以与本文所述的任何A1-L或任何A2-L-A1的L形成共价键。在优选实施方案中，E缀合于经叠氮基官能化的接头且A1-L或任何A2-L-A1的L经炔基官能化。E的接头-叠氮基及A1-L或A2-L-A1的接头-炔缀合(例如，通过点击化学)形成本发明的缀合物，例如由式(1)、(2)、(D-I)-(D-VII)或(M-I)-(M-VII)中任一者描述的缀合物。在其他实施方案中，E缀合于经炔基官能化的接头且A1-L或任何A2-L-A1的L经叠氮基官能化。E的接头-炔及A1-L或任何A2-L-A1的接头-叠氮基缀合(例如，通过点击化学)形成本发明的缀合物，例如由式(1)、(2)、(D-I)-(D-VII)或(M-I)-(M-VII)中任一者描述的缀合物。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，式(1)、(2)、(D-I)-(D-VII)或(M-I)-(M-VII)中任一者的波浪线表示A1-L或A2-L-A1的L之间的共价键。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，式(1)、(2)、(D-I)-(D-VII)或(M-I)-(M-VII)中任一者的波浪线表示E的一个或多个氨基酸侧链(例如，E的一个或多个表面暴露赖氨酸残基的一个或多个氮原子或E中的一个或多个表面暴露半胱氨酸的一个或多个硫原子)已缀合于接头(例如，PEG2-PEG20接头)，其中所述接头已经反应性部分官能化，以致所述反应性部分与本文所述的任何A1-L或任何A2-L-A1的L形成共价键(例如，通过经叠氮基官能化的接头与经炔官能化的接头之间的点击化学，如上文所述)。
在一些实施方案中，缀合物是缀合物1，或其任何区域异构体，且药物与抗体的比率(DAR)(例如，T)是在0.5与10.0之间。在一些实施方案中，DAR是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
在一些实施方案中，缀合物是缀合物2，或其任何区域异构体，且DAR(例如，T)是在0.5与10.0之间。在一些实施方案中，DAR是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
在一些实施方案中，缀合物是缀合物3，或其任何区域异构体，且DAR(例如，T)是在0.5与10.0之间。在一些实施方案中，DAR是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
在一些实施方案中，缀合物是缀合物4，或其任何区域异构体，且药物与抗体的比率(DAR)(例如，T)是在0.5与10.0之间。在一些实施方案中，DAR是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
在一些实施方案中，缀合物是缀合物5，或其任何区域异构体，且DAR(例如，T)是在0.5与10.0之间。在一些实施方案中，DAR是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
在一些实施方案中，缀合物是缀合物6，或其任何区域异构体，且DAR(例如，T)是在0.5与10.0之间。在一些实施方案中，DAR是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
在一些实施方案中，缀合物是缀合物7，或其任何区域异构体，且DAR(例如，T)是在0.5与10.0之间。在一些实施方案中，DAR是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
在一些实施方案中，缀合物是缀合物8，或其任何区域异构体，且DAR(例如，T)是在0.5与10.0之间。在一些实施方案中，DAR是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
在一些实施方案中，缀合物是缀合物9，或其任何区域异构体，且DAR(例如，T)是在0.5与10.0之间。在一些实施方案中，DAR是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
在一些实施方案中，缀合物是缀合物10，或其任何区域异构体，且DAR(例如，T)是在0.5与10.0之间。在一些实施方案中，DAR是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
在一些实施方案中，缀合物是缀合物11，或其任何区域异构体，且DAR(例如，T)是在0.5与10.0之间。在一些实施方案中，DAR是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
在一些实施方案中，缀合物是缀合物12，或其任何区域异构体，且DAR(例如，T)是在0.5与10.0之间。在一些实施方案中，DAR是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
在一些实施方案中，缀合物是缀合物13，或其任何区域异构体，且DAR(例如，T)是在0.5与10.0之间。在一些实施方案中，DAR是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
在一些实施方案中，缀合物是缀合物14，或其任何区域异构体，且DAR(例如，T)是在0.5与10.0之间。在一些实施方案中，DAR是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
在一些实施方案中，缀合物是缀合物15，或其任何区域异构体，且DAR(例如，T)是在0.5与10.0之间。在一些实施方案中，DAR是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
在一些实施方案中，缀合物是缀合物16，或其任何区域异构体，且DAR(例如，T)是在0.5与10.0之间。在一些实施方案中，DAR是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
在一些实施方案中，缀合物是缀合物17，或其任何区域异构体，且DAR(例如，T)是在0.5与10.0之间。在一些实施方案中，DAR是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
在一些实施方案中，缀合物是缀合物18，或其任何区域异构体，且DAR(例如，T)是在0.5与10.0之间。在一些实施方案中，DAR是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
在一些实施方案中，缀合物是缀合物19，或其任何区域异构体，且DAR(例如，T)是在0.5与10.0之间。在一些实施方案中，DAR是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
在一些实施方案中，缀合物是缀合物20，或其任何区域异构体，且DAR(例如，T)是在0.5与10.0之间。在一些实施方案中，DAR是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
在一些实施方案中，缀合物是缀合物21，或其任何区域异构体，且DAR(例如，T)是在0.5与10.0之间。在一些实施方案中，DAR是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
在一些实施方案中，缀合物是缀合物22，或其任何区域异构体，且DAR(例如，T)是在0.5与10.0之间。在一些实施方案中，DAR是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
在一些实施方案中，缀合物是缀合物23，或其任何区域异构体，且DAR(例如，T)是在0.5与10.0之间。在一些实施方案中，DAR是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
在一些实施方案中，缀合物是缀合物24，或其任何区域异构体，且DAR(例如，T)是在0.5与10.0之间。在一些实施方案中，DAR是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
在一些实施方案中，缀合物是缀合物25，或其任何区域异构体，且DAR(例如，T)是在0.5与10.0之间。在一些实施方案中，DAR是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
在一些实施方案中，缀合物是缀合物26，或其任何区域异构体，且DAR(例如，T)是在0.5与10.0之间。在一些实施方案中，DAR是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
在一些实施方案中，缀合物是缀合物27，或其任何区域异构体，且DAR(例如，T)是在0.5与10.0之间。在一些实施方案中，DAR是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
在一些实施方案中，缀合物是缀合物28，或其任何区域异构体，且DAR(例如，T)是在0.5与10.0之间。在一些实施方案中，DAR是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
在一些实施方案中，缀合物是缀合物29，或其任何区域异构体，且DAR(例如，T)是在0.5与10.0之间。在一些实施方案中，DAR是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
在一些实施方案中，缀合物是缀合物30，或其任何区域异构体，且DAR(例如，T)是在0.5与10.0之间。在一些实施方案中，DAR是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
在一些实施方案中，缀合物是缀合物31，或其任何区域异构体，且DAR(例如，T)是在0.5与10.0之间。在一些实施方案中，DAR是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
在一些实施方案中，缀合物是缀合物32，或其任何区域异构体，且DAR(例如，T)是在0.5与10.0之间。在一些实施方案中，DAR是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
在一些实施方案中，缀合物是缀合物33，或其任何区域异构体，且DAR(例如，T)是在0.5与10.0之间。在一些实施方案中，DAR是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
在一些实施方案中，缀合物是缀合物34，或其任何区域异构体，且DAR(例如，T)是在0.5与10.0之间。在一些实施方案中，DAR是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
在一些实施方案中，缀合物是缀合物35，或其任何区域异构体，且DAR(例如，T)是在0.5与10.0之间。在一些实施方案中，DAR是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
在一些实施方案中，缀合物是缀合物36，或其任何区域异构体，且DAR(例如，T)是在0.5与10.0之间。在一些实施方案中，DAR是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
在一些实施方案中，Fc结构域单体包含小于约300个氨基酸残基(例如，小于约300、小于约295、小于约290、小于约285、小于约280、小于约275、小于约270、小于约265、小于约260、小于约255、小于约250、小于约245、小于约240、小于约235、小于约230、小于约225或小于约220个氨基酸残基)。在一些实施方案中，Fc结构域单体小于约40kDa(例如，小于约35kDa、小于约30kDa、小于约25kDa)。
在一些实施方案中，Fc结构域单体包含至少200个氨基酸残基(例如，至少210、至少220、至少230、至少240、至少250、至少260、至少270、至少280、至少290或至少300个氨基酸残基)。在一些实施方案中，Fc结构域单体为至少20kDa(例如，至少25kDa、至少30kDa或至少35kDa)。
在一些实施方案中，Fc结构域单体包含200至400个氨基酸残基(例如，200至250、250至300、300至350、350至400、200至300、250至350或300至400个氨基酸残基)。在一些实施方案中，Fc结构域单体为20至40kDa(例如，20至25kDa、25至30kDa、35至40kDa、20至30kDa、25至35kDa或30至40kDa)。
在一些实施方案中，Fc结构域单体包含与SEQ ID NO:1-138中任一者的序列至少90％(例如，至少95％、至少98％)相同的氨基酸序列，或其区域。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:1-138中任一者的氨基酸序列，或其区域。
在一些实施方案中，Fc结构域单体包含SEQ ID NO:1-138中任一者的区域，其中所述区域包括位置220、252、254及256。在一些实施方案中，所述区域包含至少40个氨基酸残基、至少50个氨基酸残基、至少60个氨基酸残基、至少70个氨基酸残基、至少80个氨基酸残基、至少90个氨基酸残基、至少100个氨基酸残基、至少110个氨基酸残基、至少120个氨基酸残基、至少130个氨基酸残基、至少140个氨基酸残基、至少150个氨基酸残基、至少160个氨基酸残基、至少170个氨基酸残基、至少180个氨基酸残基、至少190个氨基酸残基或至少200个氨基酸残基。
在一些实施方案中，Fc结构域包含Fc结构域单体的二聚体，所述单体各自独立地选自本文所述的Fc结构域单体中任一者，其中Fc结构域的质量是在约50kDa与约70kDa之间(例如，约51kDa、约52kDa、约53kDa、约54kDa、约55kDa、约56kDa、约57kDa、约58kDa、约59kDa、约60kDa、约61kDa、约62kDa、约63kDa、约64kDa、约65kDa、约66kDa、约67kDa、约68kDa或约69kDa)。在一些实施方案中，Fc结构域单体二聚(例如，同源二聚体或异源二聚体)以形成Fc结构域。在一些实施方案中，Fc结构域的质量为至少40kDa(例如，至少45kDa、至少50kDa、至少55kDa、至少60kDa、至少65kDa、至少70kDa、至少75kDa或至少80kDa)。在一些实施方案中，Fc结构域的质量是在40kDa与80kDa之间(例如，在约42kDa与约50kDa之间、在约48kDa与约55kDa之间、在约53kDa与约60kDa之间、在约58kDa与约65kDa之间、在约62kDa与约70kDa之间、在约68kDa与约75kDa之间或在约72kDa与约80kDa之间)。在特定实施方案中，Fc结构域的质量是在55kDa与62kDa之间(例如，约56kDa、约57kDa、约58kDa、约59kDa、约60kDa或约61kDa)。
定义
为了促进理解本发明，下文定义多个术语。本文所定义的术语具有如本发明相关领域中的一般技术者通常所理解的含义。诸如“一(a)”、“一(an)”及“所述(the)”的术语不旨在仅指单一实体，而包括可用于说明的具体实例所属的一般类别。所述术语在本文中用于描述本发明的具体实施方案，但其使用不会限定本发明，除非如权利要求书中所概括。
“病毒感染”意指病毒(例如，RSV诸如RSV A或RSV B)在宿主生物体(例如，人受试者)中的致病性生长。病毒感染可为其中病毒群体的存在正在损害宿主身体的任何情形。因此，当受试者的身体中或身体上存在过量病毒群体时，或当病毒群体的存在正在损害所述受试者的细胞或其他组织时，所述受试者“正在经受”病毒感染。
如本文所用，术语“Fc结构域单体”是指如下多肽链，其包含至少一个铰链结构域及第二及第三抗体恒定结构域(CH2及CH3)或其功能片段(例如，能够(i)与另一Fc结构域单体二聚以形成Fc结构域，及(ii)结合于Fc受体的片段)。所述Fc结构域单体可为任何免疫球蛋白抗体同种型，包括IgG、IgE、IgM、IgA或IgD(例如，IgG)。另外，所述Fc结构域单体可为IgG亚型(例如，IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3或IgG4)(例如，IgG1)。Fc结构域单体不包含免疫球蛋白中能够充当抗原-识别区的任何部分，例如可变结构域或互补决定区(CDR)。如本文所述的缀合物中的Fc结构域单体可含有相对于野生型Fc结构域单体序列的一种或多种改变(例如，1-10、1-8、1-6、1-4种氨基酸取代、添加或缺失)，其改变Fc结构域与Fc受体之间的相互作用。合适改变的实例为本领域中已知的。在某些实施方案中，人Fc结构域单体(例如，IgG重链，诸如IgG1)包含自Asn201或Glu216(例如，Asn201、Val 202、Asn203、His204、Lys205、Pro206、Ser207、Asn208、Thr209、Lys210、Val211、Asp212、Lys 213、Lys214、Val215或Glu216)中任一者延伸至例如Gly446或Lys447处的重链羧基端的区域。所述Fc区的C端Lys447可或可不存在，不影响所述Fc区的结构或稳定性。所述Fc区的C端Lys447可或可不存在，不影响所述Fc区的结构或稳定性。在表达多肽后，C端Lys 447可被蛋白水解切割。在本文所述的任何Fc结构域单体的一些实施方案中，C端Lys 447任选存在或不存在。本公开特别考虑了不包含对应于Lys447的C端Lys的SEQ ID NO:1-4、11、16、19、20、32-37、48-53及60-68中任一者。(例如，SEQ ID NO:60-77中任一者的)Fc区的N端N(Asn)可或可不存在，不影响所述Fc区的结构或稳定性。在表达多肽后，N端Asn可脱酰胺。在本文所述的任何Fc结构域单体的一些实施方案中，N端Asn任选存在或不存在。本公开特别考虑了不包含N端Asn的SEQ ID NO:60-77中任一者。除非本文中另外规定，否则所述IgG或Fc结构域单体中氨基酸残基的编号是根据针对抗体的EU编号系统，所述系统也称为Kabat EU指数，如例如Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版Public HealthService,National Institutes of Health,Bethesda,MD,1991中所述。
如本文所用，术语“Fc结构域”是指两种Fc结构域单体的二聚体，其能够结合Fc受体。在野生型Fc结构域中，两种Fc结构域单体通过两个CH3抗体恒定结构域之间的相互作用二聚，在一些实施方案中，两种二聚化Fc结构域单体的铰链结构域之间形成一个或多个二硫键。
如本文中可互换使用的术语“Fab”或“抗原结合片段”是指抗体上与抗原结合的区域。Fab是一个专门术语，且其含义为本领域技术人员已知的。Fab区由重链及轻链中每一者的一个恒定结构域及一个可变结构域构成。每条重链由一重链可变区(VH)及一重链恒定区(CH)构成。重链恒定区可以由三个结构域CH1、CH2及/或CH3构成。每条轻链由轻链可变区(VL)及轻链恒定区(CL)构成。VH及VL区可进一步细分为称为“互补决定区”(CDR)的高变区，其中散布着更保守的称为“框架区”(FR)的区域。在抗体中，重链(例如，VH及CH区)借助于铰链与Fc结构域单体连接。本文所述的Fc结构域单体可包含Fab结构域及铰链区的10与/或20之间个残基(例如，11、12、13、14、15、16、17、18或19个残基)。在某些实施方案中，Fc结构域单体的N端是氨基酸残基198-205中任一者(对应于Fab结构域的残基)。在一些实施方案中，Fc结构域单体的N端是氨基酸残基201(例如，Asn 201)。在某些实施方案中，Fc结构域单体的N端是氨基酸残基202(例如，Val 202)。
术语“共价附接”是指缀合物中通过共价键彼此连接的两个部分，所述共价键形成于所述缀合物的所述两个部分中的两个原子之间。
如本文所用，术语“Fc结合肽”是指是指具有5至50个(例如，5至40个、5至30个、5至20个、5至15个、5至10个、10至50个、10至30个或10至20个)氨基酸残基的氨基酸序列的多肽，其对Fc结构域(诸如本文所述的任何Fc结构域)具有亲和力且具有结合Fc结构域的功能。Fc结合肽肽可具有不同起源，例如合成、人、小鼠或大鼠。本发明的Fc结合肽包括已被工程改造以包含一个或多个(例如，两个、三个、四个或五个)溶剂暴露半胱氨酸或赖氨酸残基的Fc结合肽，其可提供用于缀合于本发明化合物(例如，缀合于RSV F蛋白抑制剂单体或二聚体，包括借助于接头)的位点。最优选地，所述Fc结合肽将含有单一溶剂暴露半胱氨酸或赖氨酸，因此使得本发明化合物能够位点特异性缀合。Fc结合肽可仅包含天然存在的氨基酸残基，或可包含一个或多个非天然存在的氨基酸残基。在包括时，非天然存在的氨基酸残基(例如，非天然存在的氨基酸残基的侧链)可用作用于本发明化合物(例如，RSV F蛋白抑制剂单体或二聚体，包括借助于接头)的附接点。本发明的Fc结合肽可为线性或环状的。本发明的Fc结合肽包括本领域技术人员已知的任何Fc结合肽。
如本文所用，术语“白蛋白”是指包含对应于天然存在的白蛋白(例如，人血清白蛋白)或其变体(诸如天然存在的白蛋白的经工程改造变体)的氨基酸序列的多肽。白蛋白的变体包括多态物(polymorphisms)、诸如结构域及子结构域的片段及融合蛋白(例如，具有诸如多肽接头的C端或N端融合的白蛋白)。优选地，白蛋白具有人血清白蛋白(HSA)的氨基酸序列或者其变体或片段，最优选地其功能变体或片段。本发明的白蛋白包含与SEQ IDNO:139-141中任一者具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的蛋白质。本发明的白蛋白包括已被工程改造以包含一个或多个(例如，两个、三个、四个或五个)溶剂暴露半胱氨酸或赖氨酸残基的白蛋白，其可提供用于缀合于本发明化合物(例如，缀合于RSV F蛋白抑制剂单体或二聚体，包括借助于接头)的位点。最优选地，所述白蛋白将含有单一溶剂暴露半胱氨酸或赖氨酸，因此使得本发明化合物能够位点特异性缀合。白蛋白可仅包含天然存在的氨基酸残基，或可包含一种或多种非天然存在的氨基酸残基。在包括时，非天然存在的氨基酸残基(例如，非天然存在的氨基酸残基的侧链)可用作用于本发明化合物(例如，RSV F蛋白抑制剂单体或二聚体，包括借助于接头)的附接点。
如本文所用，术语“白蛋白结合肽”是指具有5至50个(例如，5至40个、5至30个、5至20个、5至15个、5至10个、10至50个、10至30个或10至20个)氨基酸残基的氨基酸序列的多肽，其对白蛋白(诸如本文所述的任何白蛋白)具有亲和力且具有结合白蛋白的功能。优选地，白蛋白结合肽结合于天然存在的血清白蛋白，最优选地人血清白蛋白。白蛋白结合肽可具有不同起源，例如合成、人、小鼠或大鼠。本发明的白蛋白结合肽包括已被工程改造以包含一个或多个(例如，两个、三个、四个或五个)溶剂暴露半胱氨酸或赖氨酸残基的白蛋白结合肽，其可提供用于缀合于本发明化合物(例如，缀合于RSV F蛋白抑制剂单体或二聚体，包括借助于接头)的位点。最优选地，所述白蛋白结合肽将含有单一溶剂暴露半胱氨酸或赖氨酸，因此使得本发明化合物能够位点特异性缀合。白蛋白结合肽可仅包含天然存在的氨基酸残基，或可包含一种或多种非天然存在的氨基酸残基。在包括时，非天然存在的氨基酸残基(例如，非天然存在的氨基酸残基的侧链)可用作用于本发明化合物(例如，RSV F蛋白抑制剂单体或二聚体，包括借助于接头)的附接点。本发明的白蛋白结合肽可为线性或环状的。本发明的白蛋白结合肽包括本领域技术人员已知的任何白蛋白结合肽，其实例提供于本文中。进一步例示性白蛋白结合肽提供于美国专利申请号2005/0287153中，所述申请通过引用以其整体并入本文。
如本文所用，诸如表面暴露半胱氨酸或表面暴露赖氨酸的“表面暴露氨基酸”或“溶剂暴露氨基酸”是指如下氨基酸，其易接近围绕所述蛋白质的溶剂。表面暴露氨基酸可为天然存在的，或所述蛋白质的经工程改造变体(例如，取代或插入)。在一些实施方案中，表面暴露氨基酸是如下氨基酸，其在被取代时未实质上改变所述蛋白质的三维结构。
如本文所用，术语“接头”、“L”及“L’”是指缀合物中的两种或更多种组分之间(例如，本文所述的缀合物中的两种RSV F蛋白抑制剂之间、本文所述的缀合物中的RSV F蛋白抑制剂与Fc结构域或白蛋白之间及本文所述的缀合物中的两种RSV F蛋白抑制剂的二聚体与Fc结构域或白蛋白之间)的共价连接。在一些实施方案中，本文所述的缀合物可含有具有三价结构的接头(例如，三价接头)。三价接头具有三个臂，其中每个臂共价连接至所述缀合物的组分(例如，缀合于第一RSV F蛋白抑制剂的第一臂、缀合于第二RSV F蛋白抑制剂的第二臂及缀合于Fc结构域或白蛋白的第三臂)。
可用作接头的分子包含至少两个官能团，所述官能团可为相同或不同的，例如两个羧酸基、两个氨基、两个磺酸基、羧酸基及马来酰亚胺基、羧酸基及炔基、羧酸基及氨基、羧酸基及磺酸基、氨基及马来酰亚胺基、氨基及炔基或氨基及磺酸基。第一官能团可与所述缀合物中的第一组分形成共价连接且第二官能团可与所述缀合物中的第二组分形成共价连接。在三价接头的一些实施方案中，接头的两个臂可含有两种二羧酸，其中第一羧酸可与所述缀合物中的第一RSV F蛋白抑制剂形成共价连接且第二羧酸可与所述缀合物中的第二RSV F蛋白抑制剂形成共价连接且所述接头的第三臂可与所述缀合物中的Fc结构域或白蛋白形成共价连接。二羧酸的实例进一步描述于本文中。在一些实施方案中，含有一个或多个马来酰亚胺基的分子可用作接头，其中所述马来酰亚胺基可与所述缀合物中的组分(例如，Fc结构域或白蛋白)的半胱氨酸形成碳-硫连接。在一些实施方案中，含有一个或多个炔基的分子可用作接头，其中所述炔基可与所述缀合物中的组分(例如，Fc结构域或白蛋白)的叠氮化物形成1,2,3-三唑连接。在一些实施方案中，含有一个或多个叠氮基的分子可用作接头，其中所述叠氮基可与所述缀合物中的组分(例如，Fc结构域或白蛋白)的炔形成1,2,3-三唑连接。在一些实施方案中，含有一个或多个双砜基的分子可用作接头，其中所述双砜基可与所述缀合物中的组分(例如，Fc结构域或白蛋白)的氨基形成连接。在一些实施方案中，含有一个或多个磺酸基的分子可用作接头，其中所述磺酸基可与所述缀合物中的组分形成磺酰胺连接。在一些实施方案中，含有一个或多个异氰酸酯基的分子可用作接头，其中所述异氰酸酯基可与所述缀合物中的组分形成脲连接。在一些实施方案中，含有一个或多个卤烷基的分子可用作接头，其中所述卤烷基可与所述缀合物中的组分形成共价连接，例如C-N及C-O连接。
在一些实施方案中，接头提供两种或更多种组分之间的空间、刚性及/或柔性。在一些实施方案中，接头可为键，例如共价键。术语“键”是指化学键，例如酰胺键、二硫键、C-O键、C-N键、N-N键、C-S键或由化学反应(例如，化学缀合)产生的任何种类的键。在一些实施方案中，接头包含不超过250个原子。在一些实施方案中，接头包含不超过250个非氢原子。在一些实施方案中，接头的骨架包含不超过250个原子。接头的“骨架”是指接头中的原子，其合起来形成自缀合物的一部分至所述缀合物的另一部分的最短路径(例如，连接第一RSVF蛋白抑制剂及第二RSV F蛋白抑制剂的最短路径)。接头的骨架中的原子直接地参与连接缀合物的一部分至所述缀合物的另一部分(例如，连接第一RSV F蛋白抑制剂及第二RSV F蛋白抑制剂)。例如，附接至接头的骨架中的碳的氢原子未被视为直接地参与连接所述缀合物的一部分至所述缀合物的另一部分。
在一些实施方案中，接头可包含源于例如合成聚合物(例如，聚乙二醇(PEG)聚合物)的合成基团。在一些实施方案中，接头可包含一种或多种氨基酸残基，诸如D-或L-氨基酸残基。在一些实施方案中，接头可为氨基酸序列(例如，1-25个氨基酸、1-10个氨基酸、1-9个氨基酸、1-8个氨基酸、1-7个氨基酸、1-6个氨基酸、1-5个氨基酸、1-4个氨基酸、1-3个氨基酸、1-2个氨基酸或1个氨基酸序列)的残基。在一些实施方案中，接头可包含一个或多个(例如，1-100个、1-50个、1-25个、1-10个、1-5个或1-3个)任选取代的亚烷基、任选取代的亚杂烷基(例如，PEG单元)、任选取代的亚烯基、任选取代的亚杂烯基、任选取代的亚炔基、任选取代的亚杂炔基、任选取代的亚环烷基、任选取代的亚杂环烷基、任选取代的亚环烯基、任选取代的亚杂环烯基、任选取代的亚环炔基、任选取代的亚杂环炔基、任选取代的亚芳基、任选取代的亚杂芳基(例如，吡啶)、O、S、NRi(Ri为H、任选取代的烷基、任选取代的杂烷基、任选取代的烯基、任选取代的杂烯基、任选取代的炔基、任选取代的杂炔基、任选取代的环烷基、任选取代的杂环烷基、任选取代的环烯基、任选取代的杂环烯基、任选取代的环炔基、任选取代的杂环炔基、任选取代的芳基或任选取代的杂芳基)、P、羰基、硫羰基、磺酰基、磷酸酯基、磷酰基或亚氨基。例如，接头可包含一个或多个任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C1-C20亚杂烷基(例如，PEG单元)、任选取代的C2-C20亚烯基(例如，C2亚烯基)、任选取代的C2-C20亚杂烯基、任选取代的C2-C20亚炔基、任选取代的C2-C20亚杂炔基、任选取代的C3-C20亚环烷基(例如，亚环丙烷、亚环丁烷)、任选取代的C2-C20亚杂环烷基、任选取代的C4-C20亚环烯基、任选取代的C4-C20亚杂环烯基、任选取代的C8-C20亚环炔基、任选取代的C8-C20亚杂环炔基、任选取代的C5-C15亚芳基(例如，C6亚芳基)、任选取代的C2-C15亚杂芳基(例如，咪唑、吡啶)、O、S、NRi(Ri为H、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C1-C20杂烷基、任选取代的C2-C20烯基、任选取代的C2-C20杂烯基、任选取代的C2-C20炔基、任选取代的C2-C20杂炔基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C4-C20环烯基、任选取代的C4-C20杂环烯基、任选取代的C8-C20环炔基、任选取代的C8-C20杂环炔基、任选取代的C5-C15芳基或任选取代的C2-C15杂芳基)、P、羰基、硫羰基、磺酰基、磷酸酯基、磷酰基或亚氨基。
如本文所用，术语“烷基”、“烯基”及“炔基”包括直链及分支链单价取代基，以及其组合，当未被取代时仅含有C及H。当烷基包含至少一个碳-碳双键或碳-碳三键时，所述烷基可分别称作“烯基”或“炔基”。烷基、烯基或炔基的单价不包含所述烷基、烯基或炔基上的任选取代基。例如，若烷基、烯基或炔基附接至化合物，则所述烷基、烯基或炔基的单价是指其附接至所述化合物且不包含可存在于所述烷基、烯基或炔基上的任何额外取代基。在一些实施方案中，烷基或杂烷基可含有例如1-20、1-18、1-16、1-14、1-12、1-10、1-8、1-6、1-4或1-2个碳原子(例如，C1-C20、C1-C18、C1-C16、C1-C14、C1-C12、C1-C10、C1-C8、C1-C6、C1-C4或C1-C2)。在一些实施方案中，烯基、杂烯基、炔基或杂炔基可含有例如2-20、2-18、2-16、2-14、2-12、2-10、2-8、2-6或2-4个碳原子(例如，C2-C20、C2-C18、C2-C16、C2-C14、C2-C12、C2-C10、C2-C8、C2-C6或C2-C4)。实例包括但不限于甲基、乙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、2-丙烯基及3-丁炔基。杂环烷基、杂环烯基或杂环炔基是指具有一个或多个独立地选自例如N、O及S的杂原子的环烷基、环烯基或环炔基。例示性杂环烷基包括吡咯烷、噻吩、四氢噻吩、四氢呋喃、哌啶及四氢吡喃。
如本文所用，术语“环烷基”表示单价饱和或不饱和非芳族环状烷基。环烷基可具有例如三个至二十个碳(例如，C3-C7、C3-C8、C3-C9、C3-C10、C3-C11、C3-C12、C3-C14、C3-C16、C3-C18或C3-C20环烷基)。环烷基的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基及环庚基。当环烷基包含至少一个碳-碳双键时，所述环烷基可称作“环烯基”。环烯基可具有例如四个至二十个碳(例如，C4-C7、C4-C8、C4-C9、C4-C10、C4-C11、C4-C12、C4-C14、C4-C16、C4-C18或C4-C20环烯基)。例示性环烯基包括但不限于环戊烯基、环己烯基及环庚烯基。当环烷基包含至少一个碳-碳三键时，所述环烷基可称作“环炔基”。环炔基可具有例如八个至二十个碳(例如，C8-C9、C8-C10、C8-C11、C8-C12、C8-C14、C8-C16、C8-C18或C8-C20环炔基)。术语“环烷基”也包括具有桥接多环结构的环状化合物(例如，二环[2.2.1.]庚基及金刚烷)，其中一个或多个碳桥接单环的两个不相邻成员。术语“环烷基”也包括二环、三环及四环稠环结构，例如十氢化萘及螺环化合物。
如本文所用，术语“芳基”是指就电子分布而言在环系统中具有芳香性特征的任何单环或稠环二环或三环系统，例如苯基、萘基或菲。在一些实施方案中，环系统含有5-15个环成员原子或5-10个环成员原子。芳基可具有例如五个至十五个碳(例如，C5-C6、C5-C7、C5-C8、C5-C9、C5-C10、C5-C11、C5-C12、C5-C13、C5-C14或C5-C15芳基)。术语“杂芳基”也指含有一个或多个(例如，1-4、1-3、1、2、3或4个)选自O、S及N的杂原子的所述单环或稠合二环系统。杂芳基可具有例如两个至十五个碳(例如，C2-C3、C2-C4、C2-C5、C2-C6、C2-C7、C2-C8、C2-C9.C2-C10、C2-C11、C2-C12、C2-C13、C2-C14或C2-C15杂芳基)。杂原子的包括允许包括将被视为芳族的5-元环以及6-元环。因此，典型杂芳基系统包括例如吡啶基、嘧啶基、吲哚基、苯并咪唑基、苯并三唑基、异喹啉基、喹啉基、苯并噻唑基、苯并呋喃基、噻吩基、呋喃基、吡咯基、噻唑基、恶唑基、异恶唑基、苯并恶唑基、苯并异恶唑基及咪唑基。因为互变异构体为可能的，故诸如邻苯二甲酰亚胺基的基团也被视为杂芳基。在一些实施方案中，芳基或杂芳基为任选含有1-2个氮原子的5或6元芳环系统。在一些实施方案中，芳基或杂芳基为任选取代的苯基、吡啶基、吲哚基、嘧啶基、哒嗪基、苯并噻唑基、苯并咪唑基、吡唑基、咪唑基、异恶唑基、噻唑基或咪唑并吡啶基。在一些实施方案中，芳基为苯基。在一些实施方案中，芳基可任选被诸如芳基取代基(例如，联苯基)的取代基取代。
术语“烷芳基”是指连接于亚烷基、亚烯基或亚炔基的芳基。一般而言，若化合物附接至烷芳基，则所述烷芳基的亚烷基、亚烯基或亚炔基部分附接至所述化合物。在一些实施方案中，烷芳基为C6-C35烷芳基(例如，C6-C16、C6-C14、C6-C12、C6-C10、C6-C9、C6-C8、C7或C6烷芳基)，其中碳数目指示所述烷芳基的芳基部分及亚烷基、亚烯基或亚炔基部分两者中的碳的总数。烷芳基的实例包括但不限于(C1-C8)亚烷基(C6-C12)芳基、(C2-C8)亚烯基(C6-C12)芳基或(C2-C8)亚炔基(C6-C12)芳基。在一些实施方案中，烷芳基为苯甲基或苯乙基。在杂烷芳基中，一个或多个选自N、O及S的杂原子可存在于所述烷芳基的亚烷基、亚烯基或亚炔基部分中及/或可存在于所述烷芳基的芳基部分中。在任选取代的烷芳基中，取代基可存在于所述烷芳基的亚烷基、亚烯基或亚炔基部分上及/或可存在于所述烷芳基的芳基部分上。
如本文所用，术语“氨基”表示-N(Rx)2或-N+(Rx)3，其中Rx各自独立地为H、烷基、烯基、炔基、芳基、烷芳基、环烷基，或两个Rx组合形成杂环烷基。在一些实施方案中，氨基为-NH2。
如本文所用，术语“烷氨基”是指本文所述的氨基，其附接至亚烷基(例如，C1-C5亚烷基)、亚烯基(例如，C2-C5亚烯基)或亚炔基(例如，C2-C5亚烯基)。一般而言，若化合物附接至烷氨基，则所述烷氨基的亚烷基、亚烯基或亚炔基部分附接至所述化合物。烷氨基的氨基部分是指-N(Rx)2或-N+(Rx)3，其中Rx各自独立地为H、烷基、烯基、炔基、芳基、烷芳基、环烷基，或两个Rx组合形成杂环烷基。在一些实施方案中，烷氨基的氨基部分为-NH2。烷氨基的实例为C1-C5烷氨基，例如C2烷氨基(例如，CH2CH2NH2或CH2CH2N(CH3)2)。在杂烷氨基中，一个或多个(例如，1-4、1-3、1、2、3或4个)选自N、O及S的杂原子可存在于所述杂烷氨基的亚烷基、亚烯基或亚炔基部分中。在一些实施方案中，烷氨基可任选被取代。在取代的烷氨基中，取代基可存在于所述烷氨基的亚烷基、亚烯基或亚炔基部分上及/或可存在于所述烷氨基的氨基部分上。
如本文所用，术语“烷酰胺”是指如下酰胺基，其附接至亚烷基(例如，C1-C5亚烷基)、亚烯基(例如，C2-C5亚烯基)或亚炔基(例如，C2-C5亚烯基)。一般而言，若化合物附接至烷酰胺基，则所述烷酰胺的亚烷基、亚烯基或亚炔基部分附接至所述化合物。烷酰胺的酰胺部分是指-C(O)-N(Rx)2，其中Rx各自独立地为H、烷基、烯基、炔基、芳基、烷芳基、环烷基，或两个Rx组合形成杂环烷基。在一些实施方案中，烷酰胺的酰胺部分为-C(O)NH2。烷酰胺基可为-(CH2)2-C(O)NH2或-CH2-C(O)NH2。在杂烷酰胺基中，一个或多个(例如，1-4、1-3、1、2、3或4个)选自N、O及S的杂原子可存在于所述杂烷酰胺基的亚烷基、亚烯基或亚炔基部分中。在一些实施方案中，烷酰胺基可任选被取代。在取代的烷酰胺基中，取代基可存在于所述烷酰胺基的亚烷基、亚烯基或亚炔基部分上及/或可存在于所述烷酰胺基的酰胺部分上。
如本文所用，术语“亚烷基”、“亚烯基”及“亚炔基”是指具有规定大小的二价基团。在一些实施方案中，亚烷基可含有例如1-20、1-18、1-16、1-14、1-12、1-10、1-8、1-6、1-4或1-2个碳原子(例如，C1-C20、C1-C18、C1-C16、C1-C14、C1-C12、C1-C10、C1-C8、C1-C6、C1-C4或C1-C2)。在一些实施方案中，亚烯基或亚炔基可含有例如2-20、2-18、2-16、2-14、2-12、2-10、2-8、2-6或2-4个碳原子(例如，C2-C20、C2-C18、C2-C16、C2-C14、C2-C12、C2-C10、C2-C8、C2-C6或C2-C4)。亚烷基、亚烯基及/或亚炔基包括直链及分支链形式，以及其组合。亚烷基、亚烯基或亚炔基的二价不包含所述亚烷基、亚烯基或亚炔基上的任选取代基。例如，两种RSV F蛋白抑制剂可借助于包括亚烷基、亚烯基及/或亚炔基或其组合的接头彼此附接。所述接头中的亚烷基、亚烯基及/或亚炔基中每一者关于亚烷基、亚烯基及/或亚炔基的任一末端上的两个附接被视为二价。例如，若接头包含-(任选取代的亚烷基)-(任选取代的亚烯基)-(任选取代的亚烷基)-，则所述亚烯基关于其与所述接头的末端处的两个亚烷基的附接被视为二价。亚烯基上的任选取代基未包括于所述亚烯基的二价中。亚烷基、亚烯基或亚炔基(例如，接头中的亚烷基、亚烯基或亚炔基)的二价性质是指所述基团的两个末端且不包括可存在于亚烷基、亚烯基或亚炔基中的任选取代基。因为它们是二价的，所以它们可将缀合物的多个(例如，两个)部分(例如第一RSV F蛋白抑制剂及第二RSV F蛋白抑制剂)连接在一起。亚烷基、亚烯基及/或亚炔基可由典型地适用作如本文所陈述的烷基、烯基及炔基的取代基的基团取代。例如，C＝O是由氧代(＝O)取代的C1亚烷基。例如，-HCR-C≡C-可被视为任选取代的亚炔基且被视为二价基团，即使其具有任选取代基R。亚杂烷基、亚杂烯基及/或亚杂炔基是指包含一个或多个(例如，1-4、1-3、1、2、3或4个)杂原子(例如，N、O及S)的亚烷基、亚烯基及/或亚炔基。例如，聚乙二醇(PEG)聚合物或PEG聚合物中的PEG单元-(CH2)2-O-被视为含有一个或多个氧原子的亚杂烷基。
如本文所用，术语“亚环烷基”是指使化合物的两个部分连接在一起的二价环状基团。例如，亚环烷基内的一个碳可连接于化合物的一部分，而亚环烷基内的另一个碳可连接于化合物的另一部分。亚环烷基可包括饱和或不饱和非芳族环状基团。亚环烷基可在所述亚环烷基的环状部分中具有例如三个至二十个碳(例如，C3-C7、C3-C8、C3-C9、C3-C10、C3-C11、C3-C12、C3-C14、C3-C16、C3-C18或C3-C20亚环烷基)。当亚环烷基包含至少一个碳-碳双键时，所述亚环烷基可称作“亚环烯基”。亚环烯基可在所述亚环烯基的环状部分中具有例如四个至二十个碳(例如，C4-C7、C4-C8、C4-C9.C4-C10、C4-C11、C4-C12、C4-C14、C4-C16、C4-C18或C4-C20亚环烯基)。当亚环烷基包含至少一个碳-碳三键时，所述亚环烷基可称作“亚环炔基”。亚环炔基可在所述亚环炔基的环状部分中具有例如四个至二十个碳(例如，C4-C7、C4-C8、C4-C9.C4-C10、C4-C11、C4-C12、C4-C14、C4-C16、C4-C18或C8-C20亚环炔基)。亚环烷基可由典型地适用作如本文所陈述的烷基、烯基及炔基的取代基的基团取代。亚杂环烷基是指包含一个或多个(例如，1-4、1-3、1、2、3或4个)杂原子(例如，N、O及S)的亚环烷基。亚环烷基的实例包括但不限于亚环丙基及亚环丁基。四氢呋喃可被视为亚杂环烷基。
如本文所用，术语“亚芳基”是指使化合物的多个(例如，两个或三个)部分连接在一起的多价(例如，二价或三价)芳基。例如，亚芳基内的一个碳可连接于所述化合物的一部分，而所述亚芳基内的另一碳可连接于所述化合物的另一部分。亚芳基可在所述亚芳基的芳基部分中具有例如五个至十五个碳(例如，C5-C6、C5-C7、C5-C8、C5-C9.C5-C10、C5-C11、C5-C12、C5-C13、C5-C14或C5-C15亚芳基)。亚芳基可由典型地适用作如本文所陈述的烷基、烯基及炔基的取代基的基团取代。亚杂芳基是指包含一个或多个(例如，1-4、1-3、1、2、3或4个)杂原子(例如，N、O及S)的芳族基团。亚杂芳基可具有例如两个至十五个碳(例如，C2-C3、C2-C4、C2-C5、C2-C6、C2-C7、C2-C8、C2-C9.C2-C10、C2-C11、C2-C12、C2-C13、C2-C14或C2-C15亚杂芳基)。
如本文所用，术语“任选取代”是指具有0、1或多个取代基，诸如0-25、0-20、0-10或0-5个取代基。取代基包括但不限于烷基、烯基、炔基、芳基、烷芳基、酰基、杂芳基、杂烷基、杂烯基、杂炔基、杂烷芳基、卤素、氧代、氰基、硝基、氨基、烷氨基、羟基、烷氧基、烷酰基、羰基、氨甲酰基、胍基(guanidinyl)、脲基、脒基(amidinyl)、上述基团或部分中任一者及上述基团或部分中任一者的杂形式。取代基包括但不限于F、Cl、甲基、苯基、苯甲基、OR、NR2、SR、SOR、SO2R、OCOR、NRCOR、NRCONR2、NRCOOR、OCONR2、RCO、COOR、烷基-OOCR、SO3R、CONR2、SO2NR2、NRSO2NR2、CN、CF3、OCF3、SiR3及NO2，其中R各自独立地为H、烷基、烯基、芳基、杂烷基、杂烯基或杂芳基，且其中同一或相邻原子上的两个任选取代基可接合以形成含有3-8个成员的稠合、任选取代的芳族或非芳族、饱和或不饱和环，或同一原子上的两个任选取代基可接合以形成含有3-8个成员的任选取代的芳族或非芳族、饱和或不饱和环。
任选取代的基团或部分是指其中一个原子(例如，氢原子)任选被另一取代基置换的基团或部分(例如，上述基团或部分中任一者)。例如，任选取代的烷基可为任选取代的甲基，其中所述甲基的氢原子由例如OH置换。作为另一实例，杂烷基或其二价配对物亚杂烷基上的取代基可置换碳上的氢或诸如N的杂原子上的氢。例如，基团-R-NH-R-中的氢原子可被烷酰胺取代基取代，例如-R-N[(CH2C(O)N(CH3)2]-R。
一般而言，任选取代基为非干扰取代基。“非干扰取代基”是指如下取代基，其保留本文所述的缀合物(例如，式(1)、(2)、(D-I)-(D-VII)或(M-I)-(M-VII)中任一者的缀合物)结合于RSV F蛋白或者抑制RSV的增殖的能力。因此，在一些实施方案中，所述取代基可改变所述活性的程度。然而，只要所述缀合物保留结合于RSV F蛋白或者抑制RSV增殖的能力，所述取代基就将归类为“非干扰”。例如，非干扰取代基将保留所述化合物基于病毒斑块减少测定中10μM或更低的IC50值提供抗病毒功效的能力。因此，基于斑块减少或RSV F蛋白抑制，所述取代基可改变抑制的程度。然而，只要本文的化合物诸如式(A-I)、(A-II)及(A-III)化合物保留抑制RSV F蛋白的能力，所述取代基就将归类为“非干扰”。用于测定病毒斑块减少或任何化合物抑制RSV F蛋白的能力的多种测定在本领域中可获得且一些例示于下文实施例中。
术语“杂”当用于描述化学基团或部分时是指具有至少一个非碳或氢的杂原子，例如N、O及S。若上述基团或部分中任一者含有至少一个杂原子，则其可称为杂。例如，杂环烷基、杂环烯基或杂环炔基是指具有一个或多个独立地选自例如N、O及S的杂原子的环烷基、环烯基或环炔基。杂环烯基的实例为马来酰亚胺基。例如，杂芳基是指具有一个或多个独立地选自例如N、O及S的杂原子的芳族基团。一个或多个杂原子也可包括于置换如本文所述的基团或部分中的氢原子的取代基中。例如，在任选取代的杂芳基中，若所述杂芳基中的氢原子中的一个被取代基(例如，甲基)置换，则所述取代基也可含有一个或多个杂原子(例如，甲醇)。
如本文所用，术语“酰基”是指具有以下结构的基团：
Figure BDA0003629760100003911
其中Rz为任选取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、烷芳基、烷氨基、杂烷基、杂烯基、杂炔基、杂环烷基、杂环烯基、杂环炔基、杂芳基、杂烷芳基或杂烷氨基。
如本文所用，术语“卤基”或“卤素”是指任何卤素原子，例如F、Cl、Br或I。若本文所述的基团或部分中任一者含有至少一个卤素原子，则其可称为“卤基部分”，诸如卤烷基。
如本文所用，术语“羟基”表示-OH基团。
如本文所用，术语“氧代”是指具有结构＝O的取代基，其中在原子与氧原子之间存在双键。
如本文所用，术语“羰基”是指具有以下结构的基团：
Figure BDA0003629760100003921
如本文所用，术语“硫羰基”是指具有以下结构的基团：
Figure BDA0003629760100003922
如本文所用，术语“磷酸酯基”表示具有以下结构的基团：
Figure BDA0003629760100003923
如本文所用，术语“磷酰基”表示具有以下结构的基团：
Figure BDA0003629760100003924
Figure BDA0003629760100003925
如本文所用，术语“磺酰基”表示具有以下结构的基团：
Figure BDA0003629760100003926
如本文所用，术语“亚氨基”表示具有以下结构的基团：
Figure BDA0003629760100003927
其中R为任选取代基。
如本文所用，术语“N-保护基”表示旨在保护氨基免受合成程序期间不希望的反应的那些基团。通常使用的N-保护基公开于Greene,“Protective Groups in OrganicSynthesis,”第5版(John Wiley&Sons,New York,2014)中，其通过引用并入本文。N-保护基包括例如酰基、芳酰基及氨甲酰基，诸如甲酰基、乙酰基、丙酰基、特戊酰基、叔丁基乙酰基、2-氯乙酰基、2-溴乙酰基、三氟乙酰基、三氯乙酰基、邻苯二甲酰基、邻硝基苯氧基乙酰基、α-氯丁酰基、苯甲酰基、羧基苯甲基(CBz)、4-氯苯甲酰基、4-溴苯甲酰基、4-硝基苯甲酰基，及手性助剂，诸如经保护或未经保护D、L或D,L-氨基酸残基，诸如丙氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸；含磺酰基的基团，诸如苯磺酰基及对甲苯磺酰基；氨基甲酸酯形成基团，诸如苯甲氧基羰基、对氯苯甲氧基羰基、对甲氧基苯甲氧基羰基、对硝基苯甲氧基羰基、2-硝基苯甲氧基羰基、对溴苯甲氧基羰基、3,4-二甲氧基苯甲氧基羰基、3,5-二甲氧基苯甲氧基羰基、2,4-二甲氧基苯甲氧基羰基、4-甲氧基苯甲氧基羰基、2-硝基-4,5-二甲氧基苯甲氧基羰基、3,4,5-三甲氧基苯甲氧基羰基、1-(对联苯基)-1-甲基乙氧基羰基、α,α-二甲基-3,5-二甲氧基苯甲氧基羰基、二苯甲氧基羰基(benzhydryloxy carbonyl)、叔丁基氧基羰基(BOC)、二异丙基甲氧基羰基、异丙氧基羰基、乙氧基羰基、甲氧基羰基、烯丙氧基羰基、2,2,2,-三氯乙氧基羰基、苯氧基羰基、4-硝基苯氧基羰基、芴基-9-甲氧基羰基(Fmoc)、环戊基氧基羰基、金刚烷基氧基羰基、环己基氧基羰基及苯基硫羰基；烷芳基，诸如苯甲基、三苯基甲基及苯甲氧基甲基；及甲硅烷基，诸如三甲基甲硅烷基。
如本文所用，术语“氨基酸”意指天然存在的氨基酸及非天然存在的氨基酸。
如本文所用，术语“天然存在的氨基酸”意指包括Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr及Val的氨基酸。
如本文所用，术语“非天然存在的氨基酸”意指非天然产生或发现于哺乳动物中的α氨基酸。非天然存在的氨基酸的实例包括D-氨基酸；具有附接至半胱氨酸的硫原子的乙酰基氨基甲基的氨基酸；聚乙二醇化氨基酸；式NH2(CH2)nCOOH的ω氨基酸，其中n为2-6，中性非极性氨基酸，诸如肌氨酸、叔丁基丙氨酸、叔丁基甘氨酸、N-甲基异亮氨酸及正亮氨酸；氧基蛋氨酸；苯基甘氨酸；瓜氨酸；蛋氨酸亚砜；磺基丙氨酸；鸟氨酸；二氨基丁酸；3-氨基丙氨酸；3-羟基-D-脯氨酸；2,4-二氨基丁酸；2-氨基戊酸；2-氨基辛酸、2-羧基哌嗪；哌嗪-2-羧酸、2-氨基-4苯基丁酸；3-(2-萘基)丙氨酸，及羟基脯氨酸。其他氨基酸为α-氨基丁酸、α-氨基-α-甲基丁酸盐、氨基环丙烷-羧酸酯、氨基异丁酸、氨基降冰片基-羧酸盐、L-环己基丙氨酸、环戊基丙氨酸、L-N-甲基亮氨酸、L-N-甲基蛋氨酸、L-N-甲基正缬氨酸、L-N-甲基苯基丙氨酸、L-N-甲基脯氨酸、L-N-甲基丝氨酸、L-N-甲基色氨酸、D-鸟氨酸、L-N-甲基乙基甘氨酸、L-正亮氨酸、α-甲基-氨基异丁酸盐、α-甲基环己基丙氨酸、D-α-甲基丙氨酸、D-α-甲基精氨酸、D-α-甲基天冬酰胺、D-α-甲基天冬氨酸盐、D-α-甲基半胱氨酸、D-α-甲基谷氨酰胺、D-α-甲基组氨酸、D-α-甲基异亮氨酸、D-α-甲基亮氨酸、D-α-甲基赖氨酸、D-α-甲基蛋氨酸、D-α-甲基鸟氨酸、D-α-甲基苯丙氨酸、D-α-甲基脯氨酸、D-α-甲基丝氨酸、D-N-甲基丝氨酸、D-α-甲基苏氨酸、D-α-甲基色氨酸、D-α-甲基酪氨酸、D-α-甲基缬氨酸、D-N-甲基丙氨酸、D-N-甲基精氨酸、D-N-甲基天冬酰胺、D-N-甲基天冬氨酸盐、D-N-甲基半胱氨酸、D-N-甲基谷氨酰胺、D-N-甲基谷氨酸盐、D-N-甲基组氨酸、D-N-甲基异亮氨酸、D-N-甲基亮氨酸、D-N-甲基赖氨酸、N-甲基环己基丙氨酸、D-N-甲基鸟氨酸、N-甲基甘氨酸、N-甲基氨基异丁酸盐、N-(1-甲基丙基)甘氨酸、N-(2-甲基丙基)甘氨酸、D-N-甲基色氨酸、D-N-甲基酪氨酸、D-N-甲基缬氨酸、γ-氨基丁酸、L-叔丁基甘氨酸、L-乙基甘氨酸、L-高苯丙氨酸、L-α-甲基精氨酸、L-α-甲基天冬氨酸盐、L-α-甲基半胱氨酸、L-α-甲基谷氨酰胺、L-α-甲基组氨酸、L-α-甲基异亮氨酸、L-α-甲基亮氨酸、L-α-甲基蛋氨酸、L-α-甲基正缬氨酸、L-α-甲基苯丙氨酸、L-α-甲基丝氨酸、L-α-甲基色氨酸、L-α-甲基缬氨酸、N-(N-(2,2-二苯基乙基)氨甲酰基甲基甘氨酸、1-羧基-1-(2,2-二苯基-乙基氨基)环丙烷、4-羟基脯氨酸、鸟氨酸、2-氨基苯甲酰基(邻氨基苯甲酰基)、D-环己基丙氨酸、4-苯基-苯丙氨酸、L-瓜氨酸、α-环己基甘氨酸、L-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-甲酸、L-噻唑烷-4-甲酸、L-高酪氨酸、L-2-呋喃基丙氨酸、L-组氨酸(3-甲基)、N-(3-胍基丙基)甘氨酸、O-甲基-L-酪氨酸、O-聚糖-丝氨酸、间-酪氨酸、正-酪氨酸、L-N,N′,N″-三甲基赖氨酸、高赖氨酸、正赖氨酸、N-聚糖天冬酰胺、7-羟基-1,2,3,4-四氢-4-氟苯丙氨酸、4-甲基苯丙氨酸、双-(2-吡啶甲基)胺、五氟苯丙氨酸、吲哚啉-2-甲酸、2-氨基苯甲酸、3-氨基-2-萘甲酸、不对称二甲基精氨酸、L-四氢异喹啉-1-甲酸、D-四氢异喹啉-1-甲酸、1-氨基-环己烷乙酸、D/L-烯丙基甘氨酸、4-氨基苯甲酸、1-氨基-环丁烷甲酸、2或3或4-氨基环己烷甲酸、1-氨基-1-环戊烷甲酸、1-氨基茚满-1-甲酸、4-氨基-吡咯烷-2-甲酸、2-氨基萘满-2-甲酸、氮杂环丁烷-3-甲酸、4-苯甲基-吡咯烷-2-甲酸、叔丁基甘氨酸、b-(苯并噻唑基-2-基)-丙氨酸、b-环丙基丙氨酸、5,5-二甲基-1,3-噻唑烷-4-甲酸、(2R,4S)4-羟基哌啶-2-甲酸、(2S,4S)及(2S,4R)-4-(2-萘基甲氧基)-吡咯烷-2-甲酸、(2S,4S)及(2S,4R)4-苯氧基-吡咯烷-2-甲酸、(2R,5S)及(2S,5R)-5-苯基-吡咯烷-2-甲酸、(2S,4S)-4-氨基-1-苯甲酰基-吡咯烷-2-甲酸、叔丁基丙氨酸、(2S,5R)-5-苯基-吡咯烷-2-甲酸、1-氨基甲基-环己烷-乙酸、3,5-双-(2-氨基)乙氧基-苯甲酸、3,5-二氨基-苯甲酸、2-甲基氨基-苯甲酸、N-甲基邻氨基苯甲酸、L-N-甲基丙氨酸、L-N-甲基精氨酸、L-N-甲基天冬酰胺、L-N-甲基天冬氨酸、L-N-甲基半胱氨酸、L-N-甲基谷氨酰胺、L-N-甲基谷氨酸、L-N-甲基组氨酸、L-N-甲基异亮氨酸、L-N-甲基赖氨酸、L-N-甲基正亮氨酸、L-N-甲基鸟氨酸、L-N-甲基苏氨酸、L-N-甲基酪氨酸、L-N-甲基缬氨酸、L-N-甲基-叔丁基甘氨酸、L-正缬氨酸、α-甲基-γ-氨基丁酸盐、4,4′-二苯基丙氨酸、α-甲基环戊基丙氨酸、α-甲基-α-萘基丙氨酸、α-甲基青霉胺、N-(4-氨基丁基)甘氨酸、N-(2-氨基乙基)甘氨酸、N-(3-氨基丙基)甘氨酸、N-氨基-α-甲基丁酸盐、α-萘基丙氨酸、N-苯甲基甘氨酸、N-(2-氨甲酰基乙基)甘氨酸、N-(氨甲酰基甲基)甘氨酸、N-(2-羧基乙基)甘氨酸、N-(羧基甲基)甘氨酸、N-环丁基甘氨酸、N-环癸基甘氨酸、N-环庚基甘氨酸、N-环己基甘氨酸、N-环癸基甘氨酸、N-环十二烷基甘氨酸、N-环辛基甘氨酸、N-环丙基甘氨酸、N-环十一烷基甘氨酸、N-(2,2-二苯基乙基)甘氨酸、N-(3,3-二苯基丙基)甘氨酸、N-(3-胍基丙基)甘氨酸、N-(1-羟基乙基)甘氨酸、N-(羟基乙基))甘氨酸、N-(咪唑基乙基))甘氨酸、N-(3-吲哚基乙基)甘氨酸、N-甲基-γ-氨基丁酸盐、D-N-甲基蛋氨酸、N-甲基环戊基丙氨酸、D-N-甲基苯丙氨酸、D-N-甲基脯氨酸、D-N-甲基苏氨酸、N-(1-甲基乙基)甘氨酸、N-甲基-萘基丙氨酸、N-甲基青霉胺、N-(p-羟基苯基)甘氨酸、N-(硫甲基)甘氨酸、青霉胺、L-α-甲基丙氨酸、L-α-甲基天冬酰胺、L-α-甲基-叔丁基甘氨酸、L-甲基乙基甘氨酸、L-α-甲基谷氨酸盐、L-α-甲基高苯丙氨酸、N-(2-甲基硫乙基)甘氨酸、L-α-甲基赖氨酸、L-α-甲基正亮氨酸、L-α-甲基鸟氨酸、L-α-甲基脯氨酸、L-α-甲基苏氨酸、L-α-甲基酪氨酸、L-N-甲基-高苯丙氨酸、N-(N-(3,3-二苯基丙基)氨甲酰基甲基甘氨酸、L-焦谷氨酸、D-焦谷氨酸、O-甲基-L-丝氨酸、O-甲基-L-高丝氨酸、5-羟基赖氨酸、α-羧基谷氨酸盐、苯基甘氨酸、L-哌可酸(高脯氨酸)、L-高亮氨酸、L-赖氨酸(二甲基)、L-2-萘基丙氨酸、L-二甲基多巴或L-二甲氧基-苯丙氨酸、L-3-吡啶基丙氨酸、L-组氨酸(苯甲酰基氧基甲基)、N-环庚基甘氨酸、L-二苯丙氨酸、O-甲基-L-高酪氨酸、L-β-高赖氨酸、O-聚糖-苏氨酸、邻-酪氨酸、L-N,N′-二甲基赖氨酸、L-高精氨酸、新色氨酸、3-苯并噻吩基丙氨酸、异喹啉-3-甲酸、二氨基丙酸、高半胱氨酸、3,4-二甲氧基苯丙氨酸、4-氯苯丙氨酸、L-1,2,3,4-四氢去甲哈尔满-3-甲酸、金刚烷基丙氨酸、对称二甲基精氨酸、3-羧基硫代吗啉、D-1,2,3,4-四氢去甲哈尔满-3-甲酸、3-氨基苯甲酸、3-氨基-1-羧基甲基-吡啶-2-酮、1-氨基-1-环己烷甲酸、2-氨基环戊烷甲酸、1-氨基-1-环丙烷甲酸、2-氨基茚满-2-甲酸、4-氨基-四氢噻喃-4-甲酸、氮杂环丁烷-2-甲酸、b-(苯并噻唑-2-基)-丙氨酸、新戊基甘氨酸、2-羧基甲基哌啶、b-环丁基丙氨酸、烯丙基甘氨酸、二氨基丙酸、高-环己基丙氨酸、(2S,4R)-4-羟基哌啶-2-甲酸、八氢吲哚-2-甲酸、(2S,4R)及(2S,4R)-4-(2-萘基)、吡咯烷-2-甲酸、哌啶甲酸、(2S,4R)及(2S,4S)-4-(4-苯基苯甲基)吡咯烷-2-甲酸、(3S)-1-吡咯烷-3-甲酸、(2S,4S)-4-三苯甲基巯基-吡咯烷-2-甲酸、(2S,4S)-4-巯基脯氨酸、叔丁基甘氨酸、N,N-双(3-氨基丙基)甘氨酸、1-氨基-环己烷-1-甲酸、N-巯基乙基甘氨酸及硒代半胱氨酸。在一些实施方案中，氨基酸残基可为带电或极性的。带电氨基酸包括丙氨酸、赖氨酸、天冬氨酸或谷氨酸，或其非天然存在的类似物。极性氨基酸包括谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、蛋氨酸或色氨酸，或其非天然存在的类似物。具体而言，预期在一些实施方案中，氨基酸中的末端氨基可为酰胺基或氨基甲酸酯基。
如本文所用，术语“百分比(％)同一性”是指候选序列(例如，Fc-IgG或其片段)中的氨基酸残基的百分率，所述氨基酸残基在比对所述序列且必要时引入间隙以实现最大百分比同一性之后与参考序列的氨基酸残基相同(即，可在所述候选及参考序列中的一或两者中引入间隙以进行最佳比对且出于比较目的可忽略非同源序列)。用于达成测定百分比同一性的目的的比对可以在此项技术的技能内的多种方式实现，例如使用公开可得的计算机软件，诸如BLAST、ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件。本领域技术人员可以确定用于测量比对的适当参数，包括在所比较序列的全长上实现最大比对所需的任何算法。在一些实施方案中，既定候选序列相对、与或针对既定参考序列的百分比氨基酸序列同一性(其或者可表述为具有或包括相对、与或针对既定参考序列的某一百分比氨基酸序列同一性的既定候选序列)计算如下：
100×(A/B的分数)
其中A是在候选序列与参考序列的比对中经评分为相同的氨基酸残基的数目，且其中B是参考序列中的氨基酸残基的总数。在其中候选序列的长度不等于参考序列的长度的一些实施方案中，候选序列与参考序列的百分比氨基酸序列同一性将不等于参考序列与候选序列的百分比氨基酸序列同一性。
当如上文所述针对最大对应进行比对时，若两个聚核苷酸或多肽序列中的核苷酸或氨基酸的序列相同，则所述两个序列被称为“相同”。两个序列之间的比较典型地通过在比较窗中比较所述序列来执行以鉴别且比较具有序列相似性的局部区。如本文所用，“比较窗”是指至少约15个邻近位置、约20个邻近位置、约25个邻近位置或更多(例如，约30个至约75个邻近位置或约40个至约50个邻近位置)的区段，其中在序列及相同数目的邻近位置的参考序列经最佳比对之后，所述两个序列可进行比较。
如本文所用，术语“治疗(treating)”或“以治疗(to treat)”是指受试者的病毒感染(例如病毒感染，诸如RSV感染)的治疗性治疗。在一些实施方案中，治疗性治疗可减慢病毒感染的进展、改善受试者的预后及/或消除所述感染。在一些实施方案中，受试者的病毒感染的治疗性治疗可缓解或改善与所述病毒感染相关的一种或多种症状或病状，削弱病毒程度，稳定(即，不恶化)病毒感染的状态，预防病毒感染的扩散，及/或延迟或减慢病毒感染的进展，如与所述治疗性治疗不存在下所述病毒感染的状态及/或病状相比。
如本文所用，术语“T的平均值”是指缀合物群体内缀合于Fc结构域或白蛋白的RSVF蛋白抑制剂单体或RSV F蛋白抑制剂二聚体的平均数。在一些实施方案中，在缀合物群体内，缀合于Fc结构域单体的RSV F蛋白抑制剂单体或RSV F蛋白抑制剂二聚体的平均数可为1至20(例如，T的平均值为1至2、1至3、1至4、1至5、5至10、10至15或15至20)。在一些实施方案中，T的平均值为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20。
如本文所用，术语“受试者”可为人或非人灵长类动物。
如本文所用，术语“治疗有效量”是指有效诱导受试者的所需效应或治疗具有本文所述的病状或病症(例如病毒感染，诸如RSV感染)的受试者的量，例如药物剂量。本文中也应了解，“治疗有效量”可解释为给出所需治疗及/或预防效应，以一个或多个剂量或以任何剂量或途径服用，及/或单独或与其他治疗剂(例如，本文所述的抗病毒剂)组合服用的量。例如，在施用用于治疗病毒感染的本文所述的缀合物(例如，式(1)、(2)、(D-I)-(D-VII)或(M-I)-(M-VII)中任一者的缀合物)的情况下，缀合物的治疗有效量为例如如下量，如与不施用所述缀合物时获得的反应相比，所述量足以预防、减慢或逆转病毒感染的进展。
如本文所用，术语“药物组合物”是指含有至少一种活性成分(例如，式(1)、(2)、(D-I)-(D-VII)或(M-I)-(M-VII)中任一者的缀合物)以及一种或多种赋形剂及稀释剂以使所述活性成分能够适用于施用方法的药用或药物制剂。本公开的药物组合物包含可与本文所述的缀合物(例如，式(1)、(2)、(D-I)-(D-VII)或(M-I)-(M-VII)中任一者的缀合物)相容的药学上可接受的组分。
如本文所用，术语“药学上可接受的载剂”是指药物组合物中的赋形剂或稀释剂。例如，药学上可接受的载剂可为能够悬浮或溶解活性缀合物(例如，式(1)、(2)、(D-I)-(D-VII)或(M-I)-(M-VII)中任一者的缀合物)的媒介物。药学上可接受的载剂必须与所述制剂的其他成分相容且对接受者无害。在本公开中，药学上可接受的载剂必须对本文所述的缀合物提供足够的药物稳定性。载剂的性质随施用方式变化。例如，对于经口施用，固体载剂为优选的；对于静脉内施用，一般使用水溶液载剂(例如，WFI及/或缓冲溶液)。
如本文所用，术语“药学上可接受的盐”表示本文所述的缀合物(例如，式(1)、(2)、(D-I)-(D-VII)或(M-I)-(M-VII)中任一者的缀合物)的盐，其在合理医学判断的范围内适用于本文所述的方法而无不当毒性、刺激性及/或过敏性反应。药学上可接受的盐在本领域中是熟知的。例如，药学上可接受的盐描述于以下中：Pharmaceutical Salts:Properties,Selection,and Use(编辑P.H.Stahl及C.G.Wermuth),Wiley-VCH,2008。所述盐可在本文所述的缀合物的最终分离及纯化期间当场制备，或通过使游离碱基与合适有机酸反应而单独制备。
如本文所用，术语“约”指示±5％的偏差。例如，约10％是指9.5％至10.5％。
以值的范围提供的任何值均包括上限及下限两者，及含于所述上限及下限内的任何值。
本文所述的缀合物的其他特征及优势将由以下具体实施方式及权利要求书而显而易见。
如本文所用，术语“(1)、(2)、(D-I)-(D-VII)或(M-I)-(M-VII)”表示(1)、(2)、(D-I)-(D-VII)或(M-I)-(M-VII)中任一式(例如，式(1)、(2)、(D-I)、(D-II)、(D-II-17)、(D-III)、(D-III-1)、(D-III-2)、(D-III-3)、(D-IV)、(D-IV-1)、(D-IV-2)、(D-IV-3)、(D-IV-4)、(D-IV-5)、(D-IV-6)、(D-IV-7)、(D-IV-8)、(D-IV-9)、(D-IV-10)、(D-IV-11)、(D-IV-12)、(D-IV-13)、(D-IV-14)、(D-IV-15)、(D-IV-16)、(D-IV-17)、(D-IV-18)、(D-IV-19)、(D-IV-20)、(D-IV-21)、(D-IV-22)、(D-IV-23)、(D-IV-24)、(D-IV-25)、(D-IV-26)、(D-IV-27)、(D-IV-28)、(D-IV-29)、(D-IV-30)、(D-IV-31)、(D-IV-32)、(D-IV-33)、(D-IV-34)、(D-V)、(D-V-1)、(D-V-2)、(D-V-3)、(D-V-4)、(D-V-5)、(D-V-6)、(D-V-7)、(D-V-8)、(D-V-9)、(D-V-10)、(D-V-11)、(D-V-12)、(D-V-13)、(D-V-14)、(D-V-15)、(D-V-16)、(D-V-17)、(D-V-18)、(D-V-19)、(D-V-20)、(D-V-21)、(D-V-22)、(D-V-23)、(D-VI)、(D-VI-1)、(D-VI-2)、(D-VI-3)、(D-VI-4)、(D-VI-5)、(D-VI-6)、(D-VI-7)、(D-VI-8)、(D-VI-9)、(D-VI-10)、(D-VI-11)、(D-VI-12)、(D-VI-13)、(D-VI-14)、(D-VI-15)、(D-VI-16)、(D-VI-17)、(D-VI-18)、(D-VI-19)、(D-VI-20)、(D-VI-21)、(D-VI-22)、(D-VI-23)、(D-VI-24)、(D-VI-25)、(D-VI-26)、(D-VI-27)、(D-VI-28)、(D-VI-29)、(D-VI-30)、(D-VI-31)、(D-VI-32)、(D-VI-33)、(D-VII)、(D-VII-1)、(D-VII-2)、(D-VII-3)、(D-VII-4)、(D-VII-5)、(D-VII-6)、(D-VII-7)、(D-VII-8)、(D-VII-9)、(D-VII-10)、(D-VII-11)、(D-VII-12)、(D-VII-13)、(D-VII-14)、(D-VII-15)、(D-VII-16)、(D-VII-17)、(D-VII-18)、(D-VII-19)、(D-VII-20)、(D-VII-21)、(D-VII-22)、(D-VII-23)、(D-VII-24)、(D-VII-25)、(D-VII-26)、(D-VII-27)、(D-VII-28)、(D-VII-29)、(D-VII-30)、(D-VII-31)、(D-VII-32)、(D-VII-33)、(D-VII-34)、(D-VII-35)、(D-VII-36)、(D-VII-37)、(D-VII-38)、(D-VII-39)、(D-VII-40)、(D-VII-41)、(D-VII-42)、(D-VII-43)、(D-VII-44)、(D-VII-45)、(D-VII-46)、(D-VII-47)、(D-VII-48)、(D-VII-49)、(D-VII-50)、(D-VII-51)、(D-VII-52)、(D-VII-53)、(D-VII-54)、(D-VII-55)、(D-VII-56)、(D-VII-57)、(M-I)、(M-II)、(M-II-17)、(M-III)、(M-III-1)、(M-III-2)、(M-III-3)、(M-IV)、(M-IV-1)、(M-IV-2)、(M-IV-3)、(M-IV-4)、(M-IV-5)、(M-IV-6)、(M-IV-7)、(M-IV-8)、(M-IV-9)、(M-IV-10)、(M-IV-11)、(M-IV-12)、(M-IV-13)、(M-IV-14)、(M-IV-15)、(M-IV-16)、(M-IV-17)、(M-IV-18)、(M-IV-19)、(M-IV-20)、(M-IV-21)、(M-IV-22)、(M-IV-23)、(M-IV-24)、(M-IV-25)、(M-IV-26)、(M-IV-27)、(M-IV-28)、(M-IV-29)、(M-IV-30)、(M-IV-31)、(M-IV-32)、(M-IV-33)、(M-IV-34)、(M-V)、(M-V-1)、(M-V-2)、(M-V-3)、(M-V-4)、(M-V-5)、(M-V-6)、(M-V-7)、(M-V-8)、(M-V-9)、(M-V-10)、(M-V-11)、(M-V-12)、(M-V-13)、(M-V-14)、(M-V-15)、(M-V-16)、(M-V-17)、(M-V-18)、(M-V-19)、(M-V-20)、(M-V-21)、(M-V-22)、(M-V-23)、(M-VI)、(M-VI-1)、(M-VI-2)、(M-VI-3)、(M-VI-4)、(M-VI-5)、(M-VI-6)、(M-VI-7)、(M-VI-8)、(M-VI-9)、(M-VI-10)、(M-VI-11)、(M-VI-12)、(M-VI-13)、(M-VI-14)、(M-VI-15)、(M-VI-16)、(M-VI-17)、(M-VI-18)、(M-VI-19)、(M-VI-20)、(M-VI-21)、(M-VI-22)、(M-VI-23)、(M-VI-24)、(M-VI-25)、(M-VI-26)、(M-VI-27)、(M-VI-28)、(M-VI-29)、(M-VI-30)、(M-VI-31)、(M-VI-32)、(M-VI-33)、(M-VII)、(M-VII-1)、(M-VII-2)、(M-VII-3)、(M-VII-4)、(M-VII-5)、(M-VII-6)、(M-VII-7)、(M-VII-8)、(M-VII-9)、(M-VII-10)、(M-VII-11)、(M-VII-12)、(M-VII-13)、(M-VII-14)、(M-VII-15)、(M-VII-16)、(M-VII-17)、(M-VII-18)、(M-VII-19)、(M-VII-20)、(M-VII-21)、(M-VII-22)、(M-VII-23)、(M-VII-24)、(M-VII-25)、(M-VII-26)、(M-VII-27)、(M-VII-28)、(M-VII-29)、(M-VII-30)、(M-VII-31)、(M-VII-32)、(M-VII-33)、(M-VII-34)、(M-VII-35)、(M-VII-36)、(M-VII-37)、(M-VII-38)、(M-VII-39)、(M-VII-40)、(M-VII-41)、(M-VII-42)、(M-VII-43)、(M-VII-44)、(M-VII-45)、(M-VII-46)、(M-VII-47)、(M-VII-48)、(M-VII-49)、(M-VII-50)、(M-VII-51)、(M-VII-52)、(M-VII-53)、(M-VII-54)、(M-VII-55)、(M-VII-56)或(M-VII-57)中任一者)。
附图说明
图1是描绘例如借助于接头使RSV F蛋白抑制剂单体或二聚体缀合于Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽的例示性方法的图像。
图2是描绘例如借助于接头使RSV F蛋白抑制剂单体或二聚体缀合于Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽，通过肟缀合于氨基酸残基(例如，表面暴露赖氨酸的氮原子)的方法的图像。
图3是描绘例如借助于接头使RSV F蛋白抑制剂单体或二聚体缀合于Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽，通过硫醚缀合于氨基酸残基(例如，表面暴露赖氨酸的氮原子)的方法的图像。
图4是描绘例如借助于接头使RSV F蛋白抑制剂单体或二聚体缀合于Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽，通过再桥接半胱氨酸缀合，例如再桥接半胱氨酸缀合于Fc结构域单体或Fc结构域中的两个铰链半胱氨酸的一对硫原子的方法的图像。
图5显示由具有SEQ ID NO:1的序列的Fc结构域单体形成的Fc结构域的非还原及还原SDS-PAGE及示意图。
图6显示由具有SEQ ID NO:3的序列的Fc结构域单体形成的Fc结构域的非还原及还原SDS-PAGE及示意图。
图7显示由具有SEQ ID NO:5的序列的Fc结构域单体形成的Fc结构域的非还原及还原SDS-PAGE及示意图。
图8显示由具有SEQ ID NO:7的序列的Fc结构域单体形成的Fc结构域的非还原及还原SDS-PAGE及示意图。
图9显示由具有SEQ ID NO:9的序列的Fc结构域单体形成的Fc结构域的非还原及还原SDS-PAGE及示意图。
图10显示由具有SEQ ID NO:12的序列的Fc结构域单体形成的Fc结构域的非还原及还原SDS-PAGE及示意图。
图11显示由具有SEQ ID NO:14的序列的Fc结构域单体形成的Fc结构域的非还原及还原SDS-PAGE及示意图。
图12是显示缀合物6与RSV F蛋白的结合与未缀合的Fc分子阴性对照的结合相比的图表。
图13是显示在由Fc捕获测定的非人灵长类动物PK研究中的包含具有C220S突变的Fc结构域的缀合物(SEQ ID NO:73)(2mpk IV)的血浆水平与包含具有C220S突变及YTE三重突变的Fc结构域的缀合物(SEQ ID NO:76)(2mpk IV)相比的图表。此研究如实施例38所述来执行。
图14是显示在小鼠中的包含具有C220S突变的Fc结构域的缀合物(SEQ ID NO:73)的血浆浓度水平与缀合物的上皮衬液(ELF)水平相比的图表。此研究如实施例40所述来执行。
图15是描绘RSV F蛋白抑制剂单体或二聚体及Fc结构域单体或Fc结构域的例示性缀合物的图像。“T”代表药物:抗体比率(DAR)，且描绘了多个单体或二聚体可缀合于每个Fc结构域单体或Fc结构域。
图16是描绘RSV F蛋白抑制剂单体或二聚体(例如，具有由式(A-III)描述的结构的RSV F蛋白抑制剂)及Fc结构域单体或Fc结构域的例示性缀合物的图像。“T”代表药物:抗体比率(DAR)，且描绘了多个单体或二聚体可缀合于每个Fc结构域单体或Fc结构域。
图17是描绘RSV F蛋白抑制剂单体或二聚体(例如，具有由式(A-IV)描述的结构的RSV F蛋白抑制剂)及Fc结构域单体或Fc结构域的例示性缀合物的图像。“T”代表药物:抗体比率(DAR)，且描绘了多个单体或二聚体可缀合于每个Fc结构域单体或Fc结构域。
具体实施方式
本公开提供用于治疗病毒感染(例如，RSV诸如RSV A或RSV B)的缀合物、组合物及方法。本文公开的缀合物包含缀合于Fc单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽的病毒RSV F蛋白抑制剂(例如，普沙托韦、MDT 637、JNJ 179、TMC353121、齐列索韦或其类似物)的单体或二聚体。缀合物中的RSV F蛋白抑制剂(例如，普沙托韦、MDT 637、JNJ 179、TMC353121、齐列索韦或其类似物)靶向病毒粒子的表面上的RSV F蛋白。所述缀合物中的Fc单体或Fc结构域结合于免疫细胞(例如，嗜中性粒细胞)上的FcγR(例如，FcRn、FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIc、FcγRIIIa及FcγRIIIb)以活化吞噬作用及效应子功能，诸如抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)，因此导致免疫细胞吞没及破坏病毒粒子且进一步增强所述缀合物的抗病毒活性。所述白蛋白或白蛋白结合肽可延长缀合物的半衰期，例如通过使白蛋白结合于再循环新生儿Fc受体。此类组合物适用于抑制病毒生长的方法及治疗病毒感染(诸如由RSV A及RSV B引起的那些)的方法。
提供的缀合物表现出希望的组织分布(例如，肺分布)。因此，此类组合物适用于治疗病症(例如，呼吸系统病症)、抑制感染生长的方法及适用于治疗感染(例如，病毒感染，例如，RSV诸如RSV A或RSV B)的方法。
I.病毒感染
本文所述的化合物及药物组合物(例如，式(1)、(2)、(D-I)-(D-VII)或(M-I)-(M-VII)中任一者的缀合物)可用于治疗病毒感染(例如，RSV A或RSV B病毒感染)。
病毒感染是指病毒(例如，RSV诸如RSV A或RSV B)在宿主生物体(例如，人受试者)中的致病性生长。病毒感染可为其中病毒群体的存在正在损害宿主身体的任何情形。因此，当受试者的身体中或身体上存在过量病毒群体时，或当病毒群体的存在正在损害所述受试者的细胞或其他组织时，所述受试者正在经受病毒感染。
人呼吸道合胞病毒(RSV)是一种中等大小(120-200nm)的包膜病毒，其含有脂蛋白外壳及线性负义RNA基因组(必须在翻译之前转化为正义RNA)。前者含有病毒编码的F、G及SH脂蛋白。F及G脂蛋白是仅有的靶向细胞膜的两种脂蛋白，并且在RSV分离物中高度保守。根据病毒与针对附着(G)及融合(F)糖蛋白的单克隆抗体的反应性，将人RSV(HRSV)分为两个抗原亚组A及B。B亚型的特征在于大多数人群经历的无症状病毒菌株。更严重的临床疾病涉及A亚型菌株，其在大多数暴发中往往占主导地位。
病毒基因中的四种编码参与基因组转录、复制及粒子出芽的细胞内蛋白，即N(核蛋白)、P(磷蛋白)、M(基质蛋白)及L(“大”蛋白，含有RNA聚合酶催化基序)。RSV基因组RNA与N蛋白形成螺旋状核糖核蛋白(RNP)复合物，称为核衣壳，其用作病毒聚合酶复合物合成RNA的模板。已在
Figure BDA0003629760100004051
分辨率下确定了与RNA结合的RSV核蛋白(N)的十聚体环状核糖核蛋白复合物的三维晶体结构。此复合物模拟病毒螺旋状核衣壳复合物的一圈。其晶体结构与电子显微镜数据相结合，为RSV核衣壳提供详细的模型。
II.本公开的缀合物
本文提供适用于治疗病毒感染(例如，RSV感染)的合成缀合物。本文公开的缀合物包含缀合于一种或多种单体RSV F蛋白抑制剂或一种或多种两种RSV F蛋白抑制剂的二聚体(例如，选自普沙托韦、MDT 637、JNJ 179、TMC353121、齐列索韦或其类似物的RSV F蛋白抑制剂)的Fc结构域或白蛋白。两种RSV F蛋白抑制剂的二聚体包含RSV F蛋白抑制剂(例如，式(A-I)、(A-II)、(A-III)、(A-IV)、(A-V)或(A-VI)的第一RSV F蛋白抑制剂)及第二RSVF蛋白抑制剂(例如，式(A-I)、(A-II)、(A-III)、(A-IV)、(A-V)或(A-VI)的第二RSV F蛋白抑制剂)。在一些实施方案中，两种RSV F蛋白抑制剂的二聚体包含RSV F蛋白抑制剂(例如，式(A-IIIa)、(A-III-b)、(A-IIIc)、(A-IIId)、(A-III-e)或(A-IIIf)的第一RSV F蛋白抑制剂)及第二RSV F蛋白抑制剂(例如，式(A-IIIa)、(A-III-b)、(A-IIIc)、(A-IIId)、(A-III-e)或(A-IIIf)的第二RSV F蛋白抑制剂)。在一些实施方案中，两种RSV F蛋白抑制剂的二聚体包含RSV F蛋白抑制剂(例如，式(A-IVa)、(A-IVb)、(A-IVc)、(A-IVd)、(A-IVe)或(A-IVf)的第一RSV F蛋白抑制剂)及第二RSV F蛋白抑制剂(例如，式(A-IVa)、(A-IVb)、(A-IVc)、(A-IVd)、(A-IVe)或(A-IVf)的第二RSV F蛋白抑制剂)。在某些实施方案中，两种RSV F蛋白抑制剂的二聚体包含RSV F蛋白抑制剂(例如，式(A-IIIb)、(A-IIIc)、(A-IV)、(A-V)或(A-VI)的第一RSV F蛋白抑制剂)及第二RSV F蛋白抑制剂(例如，式(A-IIIb)、(A-IIIc)、(A-IV)、(A-V)或(A-VI)的第二RSV F蛋白抑制剂)。所述第一及第二RSV F蛋白抑制剂借助于接头彼此连接。
不受理论的束缚，在一些方面中，本文所述的缀合物经由缀合物中的RSV F蛋白抑制剂部分与病毒粒子的表面上的蛋白质之间的相互作用结合到病毒粒子的表面(例如，结合到RSV粒子表面上的病毒RSV F蛋白)。RSV F蛋白抑制剂破坏RSV F蛋白介导的与宿主细胞膜的融合，阻止病毒进入。一旦预融合RSV F蛋白被未知机制触发，引发剧烈的构象变化、重折叠且将RSV及宿主细胞膜结合在一起，膜融合过程就开始了。
本发明缀合物包含缀合于Fc结构域、Fc单体或Fc结合肽的RSV F蛋白抑制剂单体及二聚体。本文所述的缀合物中的Fc结构域结合于免疫细胞上的FcγR(例如，FcRn、FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIc、FcγRIIIa及FcγRIIIb)。本文所述的缀合物中的Fc结构域结合于免疫细胞上的FcγR会活化吞噬作用及效应子功能，诸如抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)，因此导致免疫细胞吞没及破坏病毒粒子且进一步增强所述缀合物的抗病毒活性。
本发明缀合物包含缀合于白蛋白或白蛋白结合肽的RSV F蛋白抑制剂单体及二聚体。所述白蛋白或白蛋白结合肽可例如通过使白蛋白结合于再循环的新生儿Fc受体而延长所述缀合物的半衰期。
本文所提供的缀合物由式(1)、(2)、(D-I)-(D-VII)或(M-I)-(M-VII)中任一者来描述。在一些实施方案中，本文所述的缀合物包含缀合于Fc结构域或白蛋白的一种或多种RSV F蛋白抑制剂单体。在一些实施方案中，本文所述的缀合物包含缀合于Fc结构域或白蛋白的一种或多种RSV F蛋白抑制剂二聚体。在一些实施方案中，当n为2时，E(Fc结构域单体)二聚以形成Fc结构域。
本文所述的缀合物可使用本领域中可获得的化学合成技术来合成。在无法获得用于缀合的官能团的情况下，分子可使用本领域中熟知的常规化学合成技术衍生化。在一些实施方案中，本文所述的缀合物含有一个或多个手性中心。所述缀合物包括经分离立体异构体形式中每一者，以及不同手性纯度程度的立体异构体的混合物，包括外消旋混合物。其也涵盖可形成的各种非对映异构体、对映异构体及互变异构体。
RSV F蛋白抑制剂
本文所述的缀合物的组分为RSV F蛋白抑制剂部分。RSV F蛋白抑制剂破坏RSV F蛋白，这是一种包膜糖蛋白，可导致病毒体膜与靶细胞膜融合。病毒体膜中的功能性F蛋白三聚体处于亚稳态预融合形式。目前尚不清楚是什么原因导致F蛋白触发，但结果是主要重折叠成其融合后形式。每个F1亚单元的N端是融合肽(FP)，它是一段插入靶膜的疏水残基。FP与靠近F1的C端的跨膜(TM)结构域互为镜像，且各自按此顺序连接到七肽重复(HR)：FP-HRA-HRB-TM。在触发之后，前HRA重折叠成长HRA螺旋且三聚。当靶标与病毒膜彼此靠近时，RSV F蛋白在中心折叠，使HRB能够结合于HRA三聚体中的凹槽，形成发夹6螺旋束(6HB)。RSVF蛋白抑制剂的实例包括普沙托韦、MDT 637、JNJ 179、TMC353121或齐列索韦。此外，普沙托韦、MDT 637、JNJ 179、TMC353121及齐列索韦的衍生物(诸如文献中发现的那些)具有RSV F蛋白抑制剂活性且可用作本文化合物的RSV F蛋白抑制剂部分(参见例如，Cockerill等人J.Med.Chem.62(7):3206-3227,2018)。
本文所述的缀合物分为两种类型：(1)缀合于Fc结构域或白蛋白的一种或多种RSVF蛋白抑制剂二聚体及(2)缀合于Fc结构域或白蛋白的一种或多种RSV F蛋白抑制剂单体。RSV F蛋白抑制剂二聚体借助于接头(诸如本文所述的接头)彼此连接。
本发明的病毒RSV F蛋白抑制剂包括普沙托韦、MDT 637、JNJ179、TMC353121、齐列索韦及其类似物，诸如式(A-I)-(A-VI)的病毒RSV F蛋白抑制剂。
优选地，RSV F蛋白抑制剂选自普沙托韦(例如，在美国专利号8,486,938中描述为化合物202)、MDT 637(例如，在美国专利号6,495,580的实施例13中描述)、JNJ 179(例如，描述为国际专利公开号WO 2014/060411的化合物179)、TMC353121或其类似物(例如，以下的类似物1、2或3)或齐列索韦：
Figure BDA0003629760100004091
连接于Fc结构域或白蛋白的RSV F蛋白抑制剂二聚体的缀合物
本文所述的缀合物包含共价连接于RSV F蛋白抑制剂的一种或多种二聚体的Fc结构域、Fc单体、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽。两种RSV F蛋白抑制剂的二聚体包含第一RSV F蛋白抑制剂(例如，式(A-I)-(A-VI)的第一病毒RSV F蛋白抑制剂)及第二RSV F蛋白抑制剂(例如，式(A-I)-(A-VI)的第二病毒RSV F蛋白抑制剂)。所述第一及第二RSV F蛋白抑制剂借助于接头(诸如本文所述的接头)彼此连接。在RSV F蛋白抑制剂二聚体的一些实施方案中，所述第一及第二RSV F蛋白抑制剂是相同的。在一些实施方案中，所述第一及第二RSV F蛋白抑制剂是不同的。
在一些实施方案中，当T大于1(例如，T为2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)时，每个A1-L-A2可独立地经选择(例如，独立地选自本文所述的A1-L-A2结构中任一者)。在一些实施方案中，E可缀合于2、3、4、5、6、7、8、9、10个或更多个不同的A1-L-A2部分。在一些实施方案中，E缀合于第一A1-L-A2部分及第二A1-L-A2部分。在一些实施方案中，第一A1-L-A2部分及第二A1-L-A2部分的A1及A2中每一者独立地选自式(A-I)-(A-VI)中任一者。
在一些实施方案中，第一A1-L-A2部分特异性地缀合于E的赖氨酸残基(例如，E的表面暴露赖氨酸残基的氮原子)，且第二A1-L-A2部分特异性地缀合于E的半胱氨酸残基(例如，E的表面暴露半胱氨酸残基的硫原子)。在一些实施方案中，第一A1-L-A2部分特异性地缀合于E的半胱氨酸残基(例如，E的表面暴露半胱氨酸残基的硫原子)，且第二A1-L-A2部分特异性地缀合于E的赖氨酸残基(例如，E的表面暴露赖氨酸残基的氮原子)。
在本文所述的缀合物中，连接至E的波浪线指示一种或多种(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20种)RSV F蛋白抑制剂二聚体可附接至Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽。在一些实施方案中，当n为1时，一种或多种(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10种)RSV F蛋白抑制剂二聚体可附接至Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽。在一些实施方案中，当n为2时，一种或多种(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20种)RSV F蛋白抑制剂二聚体可附接至Fc结构域。本文所述的缀合物中的波浪线不应解释为一种或多种RSV F蛋白抑制剂二聚体与Fc结构域或白蛋白中的原子之间的单键。在一些实施方案中，当T为1时，一种RSV F蛋白抑制剂二聚体可附接至Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽中的原子。在一些实施方案中，当T为2时，两种RSV F蛋白抑制剂二聚体可附接至Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽中的原子。
如本文进一步描述，本文所述的缀合物中的接头(例如，L或L’)可为分支链结构。如本文进一步描述，本文所述的缀合物中的接头(例如，L或L’)可为多价结构，例如分别具有两个或三个臂的二价或三价结构。在一些实施方案中，当所述接头具有三个臂时，所述臂中的两者可附接至第一及第二RSV F蛋白抑制剂且第三臂可附接至Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽。
在如由以上各式表示的具有共价连接于一种或多种RSV F蛋白抑制剂二聚体的Fc结构域的缀合物中，当n为2时，两种Fc结构域单体(每个Fc结构域单体由E表示)二聚以形成Fc结构域。
连接于Fc结构域或白蛋白的RSV F蛋白抑制剂单体的缀合物
在一些实施方案中，本文所述的缀合物包含共价连接于一种或多种RSV F蛋白抑制剂单体的Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽。Fc结构域单体或白蛋白与一种或多种RSV F蛋白抑制剂单体的缀合物可由将Fc结构域或白蛋白经由接头(诸如本文所述的接头中任一者)连接到RSV F蛋白抑制剂单体中每一者来形成。
在本文所述的具有共价连接于一种或多种RSV F蛋白抑制剂单体的Fc结构域或白蛋白的缀合物中，连接至E的波浪线指示一种或多种(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20种)RSV F蛋白抑制剂单体可附接至Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽。在一些实施方案中，当n为1时，一种或多种(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10种)RSV F蛋白抑制剂单体可附接至Fc结构域单体或白蛋白。在一些实施方案中，当n为2时，一种或多种(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20种)RSV F蛋白抑制剂单体可附接至Fc结构域。本文所述的缀合物中的波浪线不应解释为一种或多种RSV F蛋白抑制剂单体与Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽中的原子之间的单键。在一些实施方案中，当T为1时，一种RSV F蛋白抑制剂单体可附接至Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽中的原子。在一些实施方案中，当T为2时，两种RSV F蛋白抑制剂单体可附接至Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽中的原子。
在一些实施方案中，当T大于1(例如，T为2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)时，每个A1-L可独立地经选择(例如，独立地选自本文所述的A1-L结构中任一者)。在一些实施方案中，E可缀合于2、3、4、5、6、7、8、9、10个或更多个不同的A1-L部分。在一些实施方案中，E缀合于第一A1-L部分及第二A1-L部分。在一些实施方案中，第一Al-L部分及第二Al-L部分中每一者的A1独立地选自式(A-I)-(A-VI)中任一者。
在一些实施方案中，第一A1-L部分特异性地缀合于E的赖氨酸残基(例如，E的表面暴露赖氨酸残基的氮原子)，且第二A1-L部分特异性地缀合于E的半胱氨酸残基(例如，E的表面暴露半胱氨酸残基的硫原子)。在一些实施方案中，第一A1-L部分特异性地缀合于E的半胱氨酸残基(例如，E的表面暴露半胱氨酸残基的硫原子)，且第二A1-L部分特异性地缀合于E的赖氨酸残基(例如，E的表面暴露赖氨酸残基的氮原子)。
如本文进一步描述，本文所述的具有共价连接于一种或多种RSV F蛋白抑制剂单体的Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽的缀合物中的接头(例如，L或L’)可为具有两个臂的二价结构。二价接头中的一个臂可附接至RSV F蛋白抑制剂单体且另一臂可附接至Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽。
在如由以上各式表示的具有共价连接于一种或多种RSV F蛋白抑制剂单体的Fc结构域的缀合物中，当n为2时，两种Fc结构域单体(每个Fc结构域单体由E表示)二聚以形成Fc结构域。
III.Fc结构域单体及Fc结构域
Fc结构域单体包含铰链结构域、CH2抗体恒定结构域及CH3抗体恒定结构域。所述Fc结构域单体可具有免疫球蛋白抗体同种型IgG、IgE、IgM、IgA或IgD。所述Fc结构域单体也可具有任何免疫球蛋白抗体同种型(例如，IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3或IgG4)。所述Fc结构域单体可具有任何免疫球蛋白抗体同种异型(例如，IGHG1*01(即，G1m(za))、IGHG1*07(即，G1m(zax))、IGHG1*04(即，G1m(zav))、IGHG1*03(G1m(f))、IGHG1*08(即，G1m(fa))、IGHG2*01、IGHG2*06、IGHG2*02、IGHG3*01、IGHG3*05、IGHG3*10、IGHG3*04、IGHG3*09、IGHG3*11、IGHG3*12、IGHG3*06、IGHG3*07、IGHG3*08、IGHG3*13、IGHG3*03、IGHG3*14、IGHG3*15、IGHG3*16、IGHG3*17、IGHG3*18、IGHG3*19、IGHG2*04、IGHG4*01、IGHG4*03或IGHG4*02)(如描述于例如Vidarsson等人IgG subclasses and allotypes:from structure toeffector function.Frontiers in Immunology.5(520):1-17(2014)中)。所述Fc结构域单体也可属任何物种，例如人、鼠科动物或小鼠。Fc结构域单体的二聚体是可结合于Fc受体的Fc结构域，所述Fc受体是位于白细胞表面上的受体。
在一些实施方案中，本文所述的缀合物中的Fc结构域单体可相对于具有SEQ IDNO:1-138中任一者的序列的Fc结构域单体含有一种或多种氨基酸取代、添加及/或缺失。在一些实施方案中，如本文所述的缀合物中的Fc结构域单体中的Asn可由Ala置换以便预防N连接的糖基化(参见例如，SEQ ID NO:12-15，其中Asn至Ala取代用*标记)。在一些实施方案中，本文所述的缀合物中的Fc结构域单体也可含有额外Cys添加(参见例如，SEQ ID NO:9、10及11，其中Cys添加用*标记)。
在一些实施方案中，如本文所述的缀合物中的Fc结构域单体包含附接至Fc结构域单体的N端或C端的额外部分，例如白蛋白结合肽、纯化肽(例如，六组氨酸肽HHHHHH(SEQ IDNO:99))或信号序列(例如，IL2信号序列MYRMQLLSCIALSLALVTNS(SEQ ID NO:100))。在一些实施方案中，所述缀合物中的Fc结构域单体不含任何类型的抗体可变区，例如VH、VL、互补决定区(CDR)或高变区(HVR)。
在一些实施方案中，如本文所述的缀合物中的Fc结构域单体可具有与下文所示的SEQ ID NO:1-138中任一者的序列至少95％相同(例如，97％、99％或99.5％相同)的序列。在一些实施方案中，如本文所述的缀合物中的Fc结构域单体可具有下文所示的SEQ ID NO:1-138中任一者的序列。
SEQ ID NO:1：N端具有IL2信号序列(粗体)的鼠科动物Fc-IgG2a
Figure BDA0003629760100004141
SEQ ID NO:2：成熟鼠科动物Fc-IgG2a
PRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK
SEQ ID NO:3：N端具有IL2信号序列(粗体)且添加有N端MVRS氨基酸残基(加下划线)的人Fc-IgG1
Figure BDA0003629760100004151
SEQ ID NO:4：添加有N端MVRS氨基酸残基(加下划线)的成熟人Fc-IgG1
MVRSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:5：N端具有IL2信号序列(粗体)且C端具有六组氨酸肽(斜体)的鼠科动物Fc-IgG2a
Figure BDA0003629760100004152
Figure BDA0003629760100004161
SEQ ID NO:6：C端具有六组氨酸肽(斜体)的成熟鼠科动物Fc-IgG2a
Figure BDA0003629760100004162
SEQ ID NO:7：N端具有IL2信号序列(粗体)、添加有N端MVRS氨基酸残基(加下划线)且C端具有六组氨酸肽(斜体)的人Fc-IgG1
Figure BDA0003629760100004163
SEQ ID NO:8：C端具有六组氨酸肽(斜体)且添加有N端MVRS氨基酸残基(加下划线)的成熟人Fc-IgG1
Figure BDA0003629760100004164
SEQ ID NO:9：N端具有IL2信号序列(粗体)、添加有N端MVRS氨基酸残基(加下划线)、铰链区中具有两个额外半胱氨酸(*)且C端具有六组氨酸肽(斜体)的人Fc-IgG1
Figure BDA0003629760100004171
SEQ ID NO:10：添加有N端MVRS氨基酸残基(加下划线)、铰链区中具有两个额外半胱氨酸(*)且C端具有六组氨酸肽(斜体)的成熟人Fc-IgG1
Figure BDA0003629760100004172
SEQ ID NO:11：添加有N端MVRS氨基酸残基(加下划线)且铰链区中具有两个额外半胱氨酸(*)的成熟人Fc-IgG1
MVRSDKTHTCPPCPPC*KC*PAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:12：N端具有IL2信号序列(粗体)、具有Asn至Ala取代(*)且C端具有六组氨酸肽(斜体)的鼠科动物Fc-IgG2a
Figure BDA0003629760100004181
SEQ ID NO:13：具有Asn至Ala取代(*)且C端具有六组氨酸肽(斜体)的成熟鼠科动物Fc-IgG2a
Figure BDA0003629760100004182
SEQ ID NO:14：N端具有IL2信号序列(粗体)、添加有N端MVRS氨基酸残基(加下划线)、具有Asn至Ala取代(*)且C端具有六组氨酸肽(斜体)的人Fc-IgG1
Figure BDA0003629760100004183
SEQ ID NO:15：具有Asn至Ala取代(*)、添加有N端MVRS氨基酸残基(加下划线)且C端具有六组氨酸肽(斜体)的成熟人Fc-IgG1
Figure BDA0003629760100004191
SEQ ID NO:16：N端具有人血清白蛋白信号序列(粗体)且添加有N端ISAMVRS氨基酸残基(加下划线)的人IgG1 Fc
Figure BDA0003629760100004192
SEQ ID NO:17：N端具有人血清白蛋白信号序列(粗体)、添加有N端ISAMVRS氨基酸残基(加下划线)、具有C端G4S接头(斜体)且具有C端c-Myc标签(加下划线、斜体)的人IgG1Fc
Figure BDA0003629760100004193
SEQ ID NO:18：添加有N端ISAMVRS氨基酸残基(加下划线)、具有C端G4S接头(斜体)且具有C端c-Myc标签(加下划线、斜体)的成熟人IgG1 Fc
Figure BDA0003629760100004201
SEQ ID NO:19：具有人血清白蛋白信号序列(粗体)、添加有N端ISAMVRS氨基酸残基(加下划线)且具有赖氨酸至丝氨酸修饰(*)以预防此位点处的赖氨酸缀合的人IgG1 Fc
Figure BDA0003629760100004202
SEQ ID NO:20：添加有N端ISAMVRS氨基酸残基(加下划线)且具有赖氨酸至丝氨酸修饰(*)以预防此位点处的赖氨酸缀合的成熟人IgG1 Fc
ISAMVRSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPS*DTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:21：N端具有人血清白蛋白信号序列(粗体)、添加有N端ISAMVRS氨基酸残基(加下划线)、具有赖氨酸至丝氨酸修饰(*)以预防此位点处的赖氨酸缀合、具有C端G4S接头(斜体)且具有C端C-Myc标签(加下划线、斜体)的人IgG1 Fc
Figure BDA0003629760100004211
SEQ ID NO:22：添加有N端ISAMVRS氨基酸残基(加下划线)、具有赖氨酸至丝氨酸修饰(*)以预防此位点处的赖氨酸缀合、具有C端G4S接头(斜体)且具有C端C-Myc标签(加下划线、斜体)的成熟人IgG1 Fc
Figure BDA0003629760100004212
SEQ ID NO:23：N端具有人血清白蛋白信号序列(粗体)、添加有N端ISAMVRS氨基酸残基(加下划线)、具有Asn至Ala取代(*)、具有C端G4S接头(斜体)且具有C端C-myc标签(加下划线、斜体)的人IgG1 Fc
Figure BDA0003629760100004213
Figure BDA0003629760100004221
SEQ ID NO:24：添加有N端ISAMVRS氨基酸残基(加下划线)、具有Asn至Ala取代(*)、具有C端G4S接头(斜体)且具有C端C-myc标签(加下划线、斜体)的成熟人IgG1 Fc
Figure BDA0003629760100004222
SEQ ID NO:25：N端具有人血清白蛋白信号序列(粗体)、添加有N端ISAMVRS氨基酸残基(加下划线)、具有H310A(*)及H435A(*)突变以妨碍FcRn结合、具有C端G4S(斜体)且具有C端C-myc标签(加下划线、斜体)的人IgG1 Fc
Figure BDA0003629760100004223
SEQ ID NO:26：N端具有人血清白蛋白信号序列(粗体)、添加有N端ISAMVRS氨基酸残基(加下划线)、具有H310A(*)及H435A(*)突变以妨碍FcRn结合、具有C端G4S(斜体)且具有C端C-myc标签(加下划线、斜体)的成熟人IgG1 Fc
Figure BDA0003629760100004231
SEQ ID NO:27：N端具有人血清白蛋白信号序列(粗体)、添加有N端ISAMVRS氨基酸残基(加下划线)、具有C端G4S接头(斜体)且具有C端突变型(赖氨酸至苯丙氨酸，粗体)C-myc标签(加下划线、斜体)的人IgG1 Fc
Figure BDA0003629760100004232
SEQ ID NO:28：添加有N端ISAMVRS氨基酸残基(加下划线)、具有C端G4S接头(斜体)且具有C端突变型(赖氨酸至苯丙氨酸，粗体)C-myc标签(加下划线、斜体)的成熟人IgG1Fc
Figure BDA0003629760100004233
SEQ ID NO:29：N端具有人血清白蛋白信号序列(粗体)、添加有N端ISAMVRS氨基酸残基(加下划线)、具有Asn至Ala取代(*)、具有C端G4S接头(斜体)且具有C端突变型(赖氨酸至苯丙氨酸，粗体)C-myc标签(加下划线、斜体)的人IgG1 Fc
Figure BDA0003629760100004241
SEQ ID NO:30：添加有N端MVRS氨基酸残基(加下划线)、具有Asn至Ala取代(*)、具有C端G4S接头(斜体)且具有C端突变型(赖氨酸至苯丙氨酸，粗体)C-myc标签(加下划线、斜体)的成熟人IgG1 Fc
Figure BDA0003629760100004242
SEQ ID NO:31：N端具有人血清白蛋白信号序列(粗体)、具有同种异型G1m(fa)(粗斜体)、具有C端G4S接头(斜体)且具有C端突变型(赖氨酸至苯丙氨酸，粗体)C-myc标签(加下划线)的人IgG1 Fc
Figure BDA0003629760100004243
Figure BDA0003629760100004251
SEQ ID NO:32：N端具有人血清白蛋白信号序列(粗体)、具有同种异型G1m(fa)(粗斜体)的人IgG1 Fc
Figure BDA0003629760100004252
SEQ ID NO:33：具有YTE三重突变(粗体及加下划线)且添加有N端MVRS氨基酸残基(加下划线)的成熟人IgG1 Fc
Figure BDA0003629760100004253
SEQ ID NO:34：N端具有人血清白蛋白信号序列(粗体)、含有在成熟人IgG1 Fc的N端包含全铰链区的残基EPKSS(加下划线)、具有Cys至Ser取代(#)、具有同种异型G1m(fa)(粗斜体)的人IgG1 Fc
Figure BDA0003629760100004254
Figure BDA0003629760100004261
SEQ ID NO:35：N端具有鼠科动物IgG信号序列(粗体)、自成熟人IgG1 Fc的N端移除EPKSSD铰链残基、具有同种异型G1m(fa)(粗斜体)的人IgG1 Fc
Figure BDA0003629760100004262
SEQ ID NO:36：具有YTE三重突变(粗体及加下划线)、自成熟人IgG1 Fc的N端移除EPKSSD铰链残基、具有同种异型G1m(fa)(粗斜体)的成熟人IgG1 Fc
Figure BDA0003629760100004263
Figure BDA0003629760100004264
SEQ ID NO:37：具有LS双重突变(粗体及加下划线)、自成熟人IgG1 Fc的N端移除EPKSSD铰链残基、具有同种异型G1m(fa)(粗斜体)的成熟人IgG1 Fc
Figure BDA0003629760100004265
Figure BDA0003629760100004274
Figure BDA0003629760100004271
SEQ ID NO:38：N端具有人血清白蛋白信号序列(粗体)、具有YTE三重突变(粗体及加下划线)、具有同种异型G1m(fa)(粗斜体)、具有C端G4S接头(斜体)且具有C端C-myc标签(加下划线)的成熟人IgG1 Fc
Figure BDA0003629760100004272
SEQ ID NO:39：成熟人Fc IgG1，其中X1为Met或Trp，X2为Ser或Thr，X3为Thr或Glu，X4为Asp或Glu，且X5为Leu或Met，X6为Met或Leu，且X7为Asn或Ser
Figure BDA0003629760100004273
SEQ ID NO:40：成熟人Fc IgG1，其中X4为Asp或Glu，且X5为Leu或Met
Figure BDA0003629760100004281
SEQ ID NO:41：具有YTE三重突变(粗体及加下划线)的成熟人Fc IgG1，且其中X4为Asp或Glu，且X5为Leu或Met
Figure BDA0003629760100004282
SEQ ID NO:42：具有YTE三重突变(粗体及加下划线)、具有同种异型G1m(fa)(粗斜体)的成熟人Fc IgG1
Figure BDA0003629760100004283
SEQ ID NO:43：具有YTE三重突变(粗体及加下划线)、具有同种异型G1m(f)(粗斜体)的成熟人Fc IgG1
Figure BDA0003629760100004284
Figure BDA0003629760100004291
SEQ ID NO:44：具有LS双重突变(粗体及加下划线)的成熟人FcIgG1，且其中X4为Asp或Glu，且X5为Leu或Met
Figure BDA0003629760100004292
SEQ ID NO:45：具有LS双重突变(粗体及加下划线)、具有同种异型G1m(fa)(粗斜体)的成熟人Fc IgG1
Figure BDA0003629760100004293
SEQ ID NO:46：具有LS双重突变(粗体及加下划线)、具有同种异型G1m(f)(粗斜体)的成熟人Fc IgG1
Figure BDA0003629760100004294
Figure BDA0003629760100004301
SEQ ID NO:47：具有小鼠重链MIgG Vh信号序列(粗体)、具有Asp缺失([D])、具有Cys至Ser取代(#)的成熟人Fc IgG1，且其中X1为Met或Trp，X2为Ser或Thr，X3为Thr或Glu，X4为Asp或Glu，且X5为Leu或Met，X6为Met或Leu，且X7为Asn或Ser
Figure BDA0003629760100004302
Figure BDA0003629760100004303
SEQ ID NO:48：具有小鼠重链MIgG Vh信号序列(粗体)、具有Cys至Ser取代(#)、具有同种异型G1m(fa)(粗斜体)的成熟人IgG1 Fc
Figure BDA0003629760100004304
SEQ ID NO:49：具有小鼠重链MIgG Vh信号序列(粗体)、具有Cys至Ser取代(#)、具有同种异型G1m(f)(粗斜体)的成熟人IgG1 Fc
Figure BDA0003629760100004305
Figure BDA0003629760100004311
SEQ ID NO:50：具有小鼠重链MIgG Vh信号序列(粗体)、具有Cys至Ser取代(#)、具有M428L、N434S突变(粗体/加下划线)、具有同种异型G1m(fa)(粗斜体)的成熟人IgG1 Fc
Figure BDA0003629760100004312
SEQ ID NO:51：具有小鼠重链MIgG Vh信号序列(粗体)、具有Cys至Ser取代(#)、具有M428L、N434S突变(粗体/加下划线)、具有同种异型G1m(f)(粗斜体)的成熟人IgG1 Fc
Figure BDA0003629760100004313
SEQ ID NO:52：具有小鼠重链MIgG Vh信号序列(粗体)、具有Cys至Ser取代(#)、具有YTE三重突变(粗体及加下划线)、具有同种异型G1m(fa)(粗斜体)的成熟人IgG1 Fc
Figure BDA0003629760100004321
SEQ ID NO:53：具有小鼠重链MIgG Vh信号序列(粗体)、具有Cys至Ser取代(#)、具有YTE三重突变(粗体及加下划线)、具有同种异型G1m(f)(粗斜体)的成熟人IgG1 Fc
Figure BDA0003629760100004322
SEQ ID NO:54：具有小鼠重链MIgG Vh信号序列(粗体)、添加有N端ISAMVRS氨基酸残基(斜体)、具有M428L、N434S突变(粗体/加下划线)、具有G4S接头(斜体)且具有C端C-myc-标签(加下划线)、具有同种异型G1m(f)(粗斜体)的成熟人IgG1 Fc
Figure BDA0003629760100004323
Figure BDA0003629760100004331
SEQ ID NO:55：具有小鼠重链MIgG Vh信号序列(粗体)、添加有N端ISAMVRS氨基酸残基(斜体)、具有M428L、N434S突变(粗体/加下划线)、具有G4S接头(斜体)、具有C端C-myc-标签(加下划线)、具有同种异型G1m(fa)(粗斜体)的成熟人IgG1 Fc
Figure BDA0003629760100004332
SEQ ID NO:56：具有小鼠重链MIgG Vh信号序列(粗体)、添加有N端ISAMVRS氨基酸残基(斜体)、具有YTE三重突变体(粗体/加下划线)、具有G4S接头(斜体)且具有C端C-myc-标签(加下划线)、具有同种异型G1m(f)(粗斜体)的成熟人IgG1 Fc
Figure BDA0003629760100004333
SEQ ID NO:57：具有小鼠重链MIgG Vh信号序列(粗体)、添加有N端ISAMVRS氨基酸残基(斜体)、具有YTE三重突变体(粗体/加下划线)、具有G4S接头(斜体)、具有C端C-myc-标签(加下划线)、具有同种异型G1m(fa)(粗斜体)的成熟人IgG1 Fc
Figure BDA0003629760100004341
SEQ ID NO:58：具有小鼠重链MIgG1信号序列(粗体)、具有Cys至Ser取代(#)、具有C端G4S(斜体)且具有C端IgA肽(加下划线)、具有同种异型G1m(fa)(粗斜体)的成熟人IgG1
Figure BDA0003629760100004342
SEQ ID NO:59：具有小鼠重链MIgG1信号序列(粗体)、具有Cys至Ser取代(#)、具有M428L、N434S突变(粗体/加下划线)、具有C端G4S(斜体)且具有C端IgA肽(加下划线)、具有同种异型G1m(fa)(粗斜体)的成熟人IgG1
Figure BDA0003629760100004343
Figure BDA0003629760100004351
SEQ ID NO:60：成熟人Fc IgG1，Z1为Cys或Ser，且其中X1为Met或Tyr，X2为Ser或Thr，X3为Thr或Glu，X4为Asp或Glu，且X5为Leu或Met，X6为Met或Leu，且X7为Asn或Ser
Figure BDA0003629760100004352
SEQ ID NO:61：成熟人Fc IgG1，Cys至Ser取代(#)，且其中X1为Met或Tyr，X2为Ser或Thr，X3为Thr或Glu，X4为Asp或Glu，且X5为Leu或Met，X6为Met或Leu，且X7为Asn或Ser
Figure BDA0003629760100004353
SEQ ID NO:62：成熟人IgG1 Fc，Cys至Ser取代(#)，X4为Asp或Glu，且X5为Leu或Met
Figure BDA0003629760100004354
Figure BDA0003629760100004361
SEQ ID NO:63：成熟人IgG1 Fc，Cys至Ser取代(#)、同种异型G1m(f)(粗斜体)
Figure BDA0003629760100004362
SEQ ID NO:64：成熟人IgG1 Fc，Cys至Ser取代(#)、同种异型G1m(fa)(粗斜体)
Figure BDA0003629760100004363
SEQ ID NO:65：成熟人IgG1 Fc，Cys至Ser取代(#)、M428L、N434S突变(粗体/加下划线)、同种异型G1m(fa)(粗斜体)
Figure BDA0003629760100004364
SEQ ID NO:66：成熟人IgG1 Fc，Cys至Ser取代(#)、M428L、N434S突变(粗体/加下划线)、同种异型G1m(f)(粗斜体)
Figure BDA0003629760100004371
SEQ ID NO:67：成熟人IgG1 Fc，Cys至Ser取代(#)、YTE三重突变(粗体及加下划线)、同种异型G1m(fa)(粗斜体)
Figure BDA0003629760100004372
SEQ ID NO:68：成熟人IgG1 Fc，Cys至Ser取代(#)、YTE三重突变(粗体及加下划线)、同种异型G1m(f)(粗斜体)
Figure BDA0003629760100004373
SEQ ID NO:69：成熟人Fc IgG1，Z1为Cys或Ser，且其中X1为Met或Tyr，X2为Ser或Thr，X3为Thr或Glu，X4为Asp或Glu，且X5为Leu或Met，X6为Met或Leu，且X7为Asn或Ser
Figure BDA0003629760100004381
SEQ ID NO:70：成熟人Fc IgG1，Cys至Ser取代(#)，且其中X1为Met或Tyr，X2为Ser或Thr，X3为Thr或Glu，X4为Asp或Glu，且X5为Leu或Met，X6为Met或Leu，且X7为Asn或Ser
Figure BDA0003629760100004382
SEQ ID NO:71：成熟人IgG1 Fc，Cys至Ser取代(#)，X4为Asp或Glu，且X5为Leu或Met
Figure BDA0003629760100004383
SEQ ID NO:72：成熟人IgG1 Fc，Cys至Ser取代(#)、同种异型G1m(f)(粗斜体)
Figure BDA0003629760100004391
SEQ ID NO:73：成熟人IgG1 Fc，Cys至Ser取代(#)、同种异型G1m(fa)(粗斜体)
Figure BDA0003629760100004392
SEQ ID NO:74：成熟人IgG1 Fc，Cys至Ser取代(#)、M428L、N434S突变(粗体/加下划线)、同种异型G1m(fa)(粗斜体)
Figure BDA0003629760100004393
SEQ ID NO:75：成熟人IgG1 Fc，Cys至Ser取代(#)、M428L、N434S突变(粗体/加下划线)、同种异型G1m(f)(粗斜体)
Figure BDA0003629760100004394
Figure BDA0003629760100004401
SEQ ID NO:76：成熟人IgG1 Fc，Cys至Ser取代(#)、YTE三重突变(粗体及加下划线)、同种异型G1m(fa)(粗斜体)
Figure BDA0003629760100004402
SEQ ID NO:77：成熟人IgG1 Fc，Cys至Ser取代(#)、YTE三重突变(粗体及加下划线)、同种异型G1m(f)(粗斜体)
Figure BDA0003629760100004403
SEQ ID NO:78：成熟人Fc IgG1，Z1为Cys或Ser，且其中X1为Met或Tyr，X2为Ser或Thr，X3为Thr或Glu，X4为Asp或Glu，且X5为Leu或Met，X6为Met或Leu，且X7为Asn或Ser
Figure BDA0003629760100004404
Figure BDA0003629760100004411
SEQ ID NO:79：成熟人Fc IgG1，Cys至Ser取代(#)，且其中X1为Met或Tyr，X2为Ser或Thr，X3为Thr或Glu，X4为Asp或Glu，且X5为Leu或Met，X6为Met或Leu，且X7为Asn或Ser
Figure BDA0003629760100004412
SEQ ID NO:80：成熟人IgG1 Fc，Cys至Ser取代(#)，X4为Asp或Glu，且X5为Leu或Met
Figure BDA0003629760100004413
SEQ ID NO:81：成熟人IgG1 Fc，Cys至Ser取代(#)、同种异型G1m(f)(粗斜体)
Figure BDA0003629760100004414
Figure BDA0003629760100004421
SEQ ID NO:82：成熟人IgG1 Fc，Cys至Ser取代(#)、同种异型G1m(fa)(粗斜体)
Figure BDA0003629760100004422
SEQ ID NO:83：成熟人IgG1 Fc，Cys至Ser取代(#)、M428L、N434S突变(粗体/加下划线)、同种异型G1m(fa)(粗斜体)
Figure BDA0003629760100004423
SEQ ID NO:84：成熟人IgG1 Fc，Cys至Ser取代(#)、M428L、N434S突变(粗体/加下划线)、同种异型G1m(f)(粗斜体)
Figure BDA0003629760100004424
SEQ ID NO:85：成熟人IgG1 Fc，Cys至Ser取代(#)、YTE三重突变(粗体及加下划线)、同种异型G1m(fa)(粗斜体)
Figure BDA0003629760100004431
SEQ ID NO:86：成熟人IgG1 Fc，Cys至Ser取代(#)、YTE三重突变(粗体及加下划线)、同种异型G1m(f)(粗斜体)
Figure BDA0003629760100004432
SEQ ID NO:87：成熟人Fc IgG1，Z1为Cys或Ser，且其中X1为Met或Tyr，X2为Ser或Thr，X3为Thr或Glu，X4为Asp或Glu，且X5为Leu或Met，X6为Met或Leu，且X7为Asn或Ser
Figure BDA0003629760100004433
SEQ ID NO:88：成熟人Fc IgG1，Cys至Ser取代(#)，且其中X1为Met或Tyr，X2为Ser或Thr，X3为Thr或Glu，X4为Asp或Glu，且X5为Leu或Met，X6为Met或Leu，且X7为Asn或Ser
Figure BDA0003629760100004441
SEQ ID NO:89：成熟人IgG1 Fc，Cys至Ser取代(#)，X4为Asp或Glu，且X5为Leu或Met
Figure BDA0003629760100004442
SEQ ID NO:90：成熟人IgG1 Fc，Cys至Ser取代(#)、同种异型G1m(f)(粗斜体)
Figure BDA0003629760100004443
SEQ ID NO:91：成熟人IgG1 Fc，Cys至Ser取代(#)、同种异型G1m(fa)(粗斜体)
Figure BDA0003629760100004451
SEQ ID NO:92：成熟人IgG1 Fc，Cys至Ser取代(#)、M428L、N434S突变(粗体/加下划线)、同种异型G1m(fa)(粗斜体)
Figure BDA0003629760100004452
SEQ ID NO:93：成熟人IgG1 Fc，Cys至Ser取代(#)、M428L、N434S突变(粗体/加下划线)、同种异型G1m(f)(粗斜体)
Figure BDA0003629760100004453
SEQ ID NO:94：成熟人IgG1 Fc，Cys至Ser取代(#)、YTE三重突变(粗体及加下划线)、同种异型G1m(fa)(粗斜体)
Figure BDA0003629760100004454
Figure BDA0003629760100004461
SEQ ID NO:95：成熟人IgG1 Fc，Cys至Ser取代(#)、YTE三重突变(粗体及加下划线)、同种异型G1m(f)(粗斜体)
Figure BDA0003629760100004462
SEQ ID NO:96：成熟人Fc IgGl，J1为Asn或不存在，J2为Lys或不存在，Z1为Cys或Ser，且其中X1为Met或Tyr，X2为Ser或Thr，X3为Thr或Glu，X4为Asn或Ala，X5为Leu或Asp，X6为Gln或His，X7为Asp或Glu，且X8为Leu或Met，X9为Met或Leu，且X10为Asn或Ser
Figure BDA0003629760100004463
SEQ ID NO:97：成熟人Fc IgGl，Cys至Ser取代(#)，J1为Asn或不存在，J2为Lys或不存在，且其中X4为Asn或Ala，X5为Leu或Asp，X6为Gln或His，X7为Asp或Glu，且X8为Leu或Met，且X10为Asn或Ser
Figure BDA0003629760100004471
SEQ ID NO:98：成熟人Fc IgG1，Cys至Ser取代(#)，DHS三重突变(粗体及加下划线)，J1为Asn或不存在，J2为Lys或不存在，其中X4为Asn或Ala，X7为Asp或Glu，且X8为Leu或Met
Figure BDA0003629760100004472
SEQ ID NO:99：成熟人Fc IgG1，Cys至Ser取代(#)，DHS三重突变(粗体及加下划线)，其中X4为Asn或Ala，X7为Asp或Glu，且X8为Leu或Met
Figure BDA0003629760100004473
SEQ ID NO:100：成熟人Fc IgG1，Cys至Ser取代(#)，DHS三重突变(粗体及加下划线)，其中X7为Asp或Glu，且X8为Leu或Met
Figure BDA0003629760100004481
SEQ ID NO:101：成熟人Fc IgG1，Cys至Ser取代(#)、DHS三重突变(粗体及加下划线)、同种异型G1m(fa)(粗斜体)
Figure BDA0003629760100004482
SEQ ID NO:102：成熟人Fc IgG1，Cys至Ser取代(#)、DHS三重突变(粗体及加下划线)、同种异型G1m(f)(粗斜体)
Figure BDA0003629760100004483
SEQ ID NO:103：成熟人Fc IgG1，Cys至Ser取代(#)、DHS三重突变(粗体及加下划线)、同种异型G1m(fa)(粗斜体)
Figure BDA0003629760100004484
Figure BDA0003629760100004491
SEQ ID NO:104：成熟人Fc IgG1，Cys至Ser取代(#)、DHS三重突变(粗体及加下划线)、同种异型G1m(f)(粗斜体)
Figure BDA0003629760100004492
SEQ ID NO:105：成熟人Fc IgG1，Cys至Ser取代(#)、DHS三重突变(粗体及加下划线)、同种异型G1m(fa)(粗斜体)
Figure BDA0003629760100004493
SEQ ID NO:106：成熟人Fc IgG1，Cys至Ser取代(#)、DHS三重突变(粗体及加下划线)、同种异型G1m(f)(粗斜体)
Figure BDA0003629760100004494
Figure BDA0003629760100004501
SEQ ID NO:107：成熟人Fc IgG1，Cys至Ser取代(#)、DHS三重突变(粗体及加下划线)、同种异型G1m(fa)(粗斜体)
Figure BDA0003629760100004502
SEQ ID NO:108：成熟人Fc IgG1，Cys至Ser取代(#)、DHS三重突变(粗体及加下划线)、同种异型G1m(f)(粗斜体)
Figure BDA0003629760100004503
SEQ ID NO:109：成熟人Fc IgG1，Cys至Ser取代(#)，Asn至Ala取代(*)，DHS三重突变(粗体及加下划线)，其中X7为Asp或Glu且X8为Leu或Met
Figure BDA0003629760100004504
Figure BDA0003629760100004511
SEQ ID NO:110：成熟人Fc IgG1，Cys至Ser取代(#)，Asn至Ala取代(*)，DHS三重突变(粗体及加下划线)，同种异型G1m(fa)(粗斜体)
Figure BDA0003629760100004512
SEQ ID NO:111：成熟人Fc IgG1，Cys至Ser取代(#)，Asn至Ala取代(*)，DHS三重突变(粗体及加下划线)，同种异型G1m(f)(粗斜体)
Figure BDA0003629760100004513
SEQ ID NO:112：成熟人Fc IgG1，Cys至Ser取代(#)，Asn至Ala取代(*)，DHS三重突变(粗体及加下划线)，同种异型G1m(fa)(粗斜体)
Figure BDA0003629760100004514
Figure BDA0003629760100004521
SEQ ID NO:113：成熟人Fc IgG1，Cys至Ser取代(#)，Asn至Ala取代(*)，DHS三重突变(粗体及加下划线)，同种异型G1m(f)(粗斜体)
Figure BDA0003629760100004522
SEQ ID NO:114：成熟人Fc IgG1，Cys至Ser取代(#)，Asn至Ala取代(*)，DHS三重突变(粗体及加下划线)，同种异型G1m(fa)(粗斜体)
Figure BDA0003629760100004523
SEQ ID NO:115：成熟人Fc IgG1，Cys至Ser取代(#)，Asn至Ala取代(*)，DHS三重突变(粗体及加下划线)，同种异型G1m(f)(粗斜体)
Figure BDA0003629760100004524
Figure BDA0003629760100004531
SEQ ID NO:116：成熟人Fc IgG1，Cys至Ser取代(#)，Asn至Ala取代(*)，DHS三重突变(粗体及加下划线)，同种异型G1m(fa)(粗斜体)
Figure BDA0003629760100004532
SEQ ID NO:117：成熟人Fc IgG1，Cys至Ser取代(#)，Asn至Ala取代(*)，DHS三重突变(粗体及加下划线)，同种异型G1m(f)(粗斜体)
Figure BDA0003629760100004533
SEQ ID NO:118：成熟人Fc IgGl，J1为Asn或不存在，J2为Lys或不存在，且其中X4为Asn或Ala，X5为Leu或Asp，X6为Gln或His，X7为Asp或Glu，且X8为Leu或Met，且X10为Asn或Ser
Figure BDA0003629760100004534
Figure BDA0003629760100004541
SEQ ID NO:119：成熟人Fc IgG1，DHS三重突变(粗体及加下划线)，J1为Asn或不存在，J2为Lys或不存在，且其中X4为Asn或Ala，X7为Asp或Glu，且X8为Leu或Met
Figure BDA0003629760100004542
SEQ ID NO:120：成熟人Fc IgG1，DHS三重突变(粗体及加下划线)，其中X4为Asn或Ala，且X7为Asp或Glu，且X8为Leu或Met
Figure BDA0003629760100004543
SEQ ID NO:121：成熟人Fc IgG1，DHS三重突变(粗体及加下划线)，其中X7为Asp或Glu，且X8为Leu或Met
Figure BDA0003629760100004544
Figure BDA0003629760100004551
SEQ ID NO:122：成熟人Fc IgG1，DHS三重突变(粗体及加下划线)、同种异型G1m(fa)(粗斜体)
Figure BDA0003629760100004552
SEQ ID NO:123：成熟人Fc IgG1，DHS三重突变(粗体及加下划线)、同种异型G1m(f)(粗斜体)
Figure BDA0003629760100004553
SEQ ID NO:124：成熟人Fc IgG1，DHS三重突变(粗体及加下划线)、同种异型G1m(fa)(粗斜体)
Figure BDA0003629760100004554
Figure BDA0003629760100004561
SEQ ID NO:125：成熟人Fc IgG1，DHS三重突变(粗体及加下划线)、同种异型G1m(f)(粗斜体)
Figure BDA0003629760100004562
SEQ ID NO:126：成熟人Fc IgG1，DHS三重突变(粗体及加下划线)、同种异型G1m(fa)(粗斜体)
Figure BDA0003629760100004563
SEQ ID NO:127：成熟人Fc IgG1，DHS三重突变(粗体及加下划线)、同种异型G1m(f)(粗斜体)
Figure BDA0003629760100004564
SEQ ID NO:128：成熟人Fc IgG1，DHS三重突变(粗体及加下划线)、同种异型G1m(fa)(粗斜体)
Figure BDA0003629760100004571
SEQ ID NO:129：成熟人Fc IgG1，DHS三重突变(粗体及加下划线)、同种异型G1m(f)(粗斜体)
Figure BDA0003629760100004572
SEQ ID NO:130：成熟人Fc IgG1，Asn至Ala取代(*)，DHS三重突变(粗体及加下划线)，其中X7为Asp或Glu，且X8为Leu或Met
Figure BDA0003629760100004573
SEQ ID NO:131：成熟人Fc IgG1，Asn至Ala取代(*)、DHS三重突变(粗体及加下划线)、同种异型G1m(fa)(粗斜体)
Figure BDA0003629760100004574
Figure BDA0003629760100004581
SEQ ID NO:132：成熟人Fc IgG1，Asn至Ala取代(*)、DHS三重突变(粗体及加下划线)、同种异型G1m(f)(粗斜体)
Figure BDA0003629760100004582
SEQ ID NO:133：成熟人Fc IgG1，Asn至Ala取代(*)、DHS三重突变(粗体及加下划线)、同种异型G1m(fa)(粗斜体)
Figure BDA0003629760100004583
SEQ ID NO:134：成熟人Fc IgG1，Asn至Ala取代(*)、DHS三重突变(粗体及加下划线)、同种异型G1m(f)(粗斜体)
Figure BDA0003629760100004584
Figure BDA0003629760100004591
SEQ ID NO:135：成熟人Fc IgG1，Asn至Ala取代(*)、DHS三重突变(粗体及加下划线)、同种异型G1m(fa)(粗斜体)
Figure BDA0003629760100004592
SEQ ID NO:136：成熟人Fc IgG1，Asn至Ala取代(*)、DHS三重突变(粗体及加下划线)、同种异型G1m(f)(粗斜体)
Figure BDA0003629760100004593
SEQ ID NO:137：成熟人Fc IgG1，Asn至Ala取代(*)、DHS三重突变(粗体及加下划线)、同种异型G1m(fa)(粗斜体)
Figure BDA0003629760100004594
Figure BDA0003629760100004601
SEQ ID NO:138：成熟人Fc IgG1，Asn至Ala取代(*)、DHS三重突变(粗体及加下划线)、同种异型G1m(f)(粗斜体)
Figure BDA0003629760100004602
如本文所定义，Fc结构域包含通过CH3抗体恒定结构域之间的相互作用二聚化的两个Fc结构域单体，以及在两个二聚化Fc结构域单体的铰链结构域之间形成的一个或多个二硫键。Fc结构域形成结合于Fc受体，例如Fc-γ受体(即，Fcγ受体(FcγR))、Fc-α受体(即，Fcα受体(FcαR))、Fc-ε受体(即，Fcε受体(FcεR))及/或新生儿Fc受体(FcRn)的最小结构。在一些实施方案中，本发明的Fc结构域结合于Fcγ受体(例如，FcRn、FcγRI(CD64)、FcγRIIa(CD32)、FcγRIIb(CD32)、FcγRIIIa(CD16a)、FcγRIIIb(CD16b))及/或FcγRIV及/或新生儿Fc受体(FcRn)。
在一些实施方案中，本发明的Fc结构域单体或Fc结构域为无糖基化Fc结构域单体或Fc结构域(例如，维持衔接于Fc受体(例如，FcRn)的Fc结构域单体或Fc结构域)。例如，所述Fc结构域是维持衔接于Fc受体的无糖基化IgG1变体(例如，在糖基化基序的N297及/或T299处具有氨基酸取代的IgG1)。例示性无糖基化Fc结构域及用于制备无糖基化Fc结构域的方法为本领域中已知的，例如，如描述于Sazinsky S.L.等人,Aglycosylatedimmunoglobulin G1 variants productively engage activating Fc receptors,PNAS,2008,105(51):20167-20172中，所述文献以其整体并入本文。
在一些实施方案中，本发明的Fc结构域或Fc结构域单体经工程改造以增强与新生儿Fc受体(FcRn)的结合。例如，所述Fc结构域可包含对应于M252Y/S254T/T256E(YTE)的三重突变(例如IgG1，诸如具有YTE突变的人或人化IgG1，例如SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:56或SEQ ID NO:57)。所述Fc结构域可包括对应于M428L/N434S(LS)的双重突变体(例如IgG1，诸如具有LS突变的人或人化IgG1，诸如SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:55或SEQ ID NO:59)。所述Fc结构域可包含对应于N434H的单一突变体(例如IgG1，诸如具有N434H突变的人或人化IgG1)。所述Fc结构域可包含对应于C220S的单一突变体(例如IgG1，诸如具有C220S突变的人或人化IgG1，诸如SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQ IDNO:63、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67或SEQ ID NO:68)。所述Fc结构域可包含对应于C220S/L309D/Q311H/N434S(CDHS)的四重突变体(例如IgG1，诸如具有CDHS突变的人或人化IgG1，诸如SEQ ID NO:96、SEQ ID NO:97、SEQ ID NO:98、SEQ IDNO:99、SEQ ID NO:100、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:102、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:104、SEQ ID NO:105、SEQ ID NO:106、SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:108、SEQ ID NO:109、SEQ IDNO:110、SEQ ID NO:111、SEQ ID NO:112、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:114、SEQ ID NO:115、SEQ ID NO:116及SEQ ID NO:117)。所述Fc结构域可包括对应于L309D/Q211H/N434S(DHS)的三重突变体(例如IgG1，诸如具有DHS突变的人或人化IgG1，诸如SEQ ID NO:118、SEQ IDNO:119、SEQ ID NO:120、SEQ ID NO:121、SEQ ID NO:122、SEQ ID NO:123、SEQ ID NO:124、SEQ ID NO:125、SEQ ID NO:126、SEQ ID NO:127、SEQ ID NO:128、SEQ ID NO:129、SEQ IDNO:130、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:132、SEQ ID NO:133、SEQ ID NO:134、SEQ ID NO:135、SEQ ID NO:136、SEQ ID NO:137及SEQ ID NO:138)。所述Fc结构域可包含增强与FcRn的结合的上述突变中的一种或多种的组合。增强的与FcRn的结合可增加含Fc结构域的缀合物的半衰期。例如，掺入一种或多种增加与FcRn的结合的氨基酸突变(例如，YTE突变、LS突变或N434H突变)可相对于具有对应的没有增强FcRn结合的突变的Fc结构域的缀合物增加缀合物的半衰期达5％、10％、15％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、200％、300％、400％、500％或更多。具有增强的与FcRN的结合的例示性Fc结构域及用于制备具有增强的与FcRN的结合的Fc结构域的方法为本领域中已知的，例如，如描述于Maeda,A.等人,Identification of human IgG1variant with enhanced FcRn binding andwithout increased binding to rheumatoid factor autoantibody,MABS,2017,9(5):844-853中，所述文献以其整体并入本文。如本文所用，应理解“对应于”(例如，特定SEQ IDNO.的)特定氨基酸残基的氨基酸包含本领域技术人员将理解与(例如，所述特定序列的)所述特定残基比对的任何氨基酸残基。例如，SEQ ID NO:1-138中任一者可通过使所述氨基酸序列的“对应残基”突变而发生突变以包含YTE突变、LS突变及/或N434H突变。
在一些实施方案中，含有Fc结构域的组合物包含Fc结构域单体。在某些实施方案中，Fc结构域单体是变体Fc结构域(例如，亲本Fc多肽的变体)。Fc结构域单体可包含在位置220处的氨基酸取代。Fc结构域单体可包含在位置220及位置252、254及256处的氨基酸取代。Fc结构域单体可包含在位置309、311及434处的氨基酸取代。在一些实施方案中，在位置220处的取代是丝氨酸，在位置252处的取代是酪氨酸，在位置254处的取代是苏氨酸，在位置256处的取代是谷氨酸，在位置309处的取代是天冬氨酸，在位置311处的取代是组氨酸，及/或在位置434处的取代是丝氨酸。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含在位置220、252、254及256处的取代，其中编号是根据如Kabat中的EU索引，且其中在位置220处的取代是丝氨酸，在位置252处的取代是酪氨酸，在位置254处的取代是苏氨酸，及在位置256处的取代是谷氨酸。在一些实施方案中，在位置220处的取代是半胱氨酸至丝氨酸(C220S)。在一些实施方案中，在位置252处的取代是蛋氨酸至酪氨酸(M252Y)。在一些实施方案中，在位置254处的取代是丝氨酸至苏氨酸(S254T)。在一些实施方案中，在位置252处的取代是苏氨酸至谷氨酸(T256E)。在一些实施方案中，在位置309处的取代是缬氨酸至天冬氨酸(V309D)。在一些实施方案中，在位置311处的取代是谷氨酰胺至组氨酸(Q311H)。在一些实施方案中，在位置434处的取代是天冬酰胺至丝氨酸(N434S)。如上文及整个公开内容所示的变体Fc单体的氨基酸编号是根据如Kabat中的EU索引。氨基酸取代相对于野生型Fc单体氨基酸序列，例如野生型人IgG1或IgG2。
在一些实施方案中，Fc结构域单体包含小于约300个氨基酸残基(例如，小于约300、小于约295、小于约290、小于约285、小于约280、小于约275、小于约270、小于约265、小于约260、小于约255、小于约250、小于约245、小于约240、小于约235、小于约230、小于约225或小于约220个氨基酸残基)。在一些实施方案中，Fc结构域单体小于约40kDa(例如，小于约35kDa、小于约30kDa、小于约25kDa)。
在一些实施方案中，Fc结构域单体包含至少200个氨基酸残基(例如，至少210、至少220、至少230、至少240、至少250、至少260、至少270、至少280、至少290或至少300个氨基酸残基)。在一些实施方案中，Fc结构域单体为至少20kDa(例如，至少25kDa、至少30kDa或至少35kDa)。
在一些实施方案中，Fc结构域单体包含200至400个氨基酸残基(例如，200至250、250至300、300至350、350至400、200至300、250至350或300至400个氨基酸残基)。在一些实施方案中，Fc结构域单体的长度在200与300个氨基酸残基之间(例如，210与300个氨基酸残基之间、230与300个氨基酸残基之间、250与300个氨基酸残基之间、270与300个氨基酸残基之间、290与300个氨基酸残基之间、210与290个氨基酸残基之间、220与280个氨基酸残基之间、230与270个氨基酸残基之间、240与260个氨基酸残基之间或245与255个氨基酸残基之间)。在特定实施方案中，Fc结构域单体为在240与255个氨基酸残基之间(例如，241个氨基酸残基、242个氨基酸残基、243个氨基酸残基、244个氨基酸残基、245个氨基酸残基、246个氨基酸残基、247氨基酸残基、248个氨基酸残基、249个氨基酸残基、250个氨基酸残基、251个氨基酸残基、252个氨基酸残基、253个氨基酸残基或254个氨基酸残基)。在甚至更特定实施方案中，Fc结构域单体的长度为246个氨基酸残基。在一些实施方案中，Fc结构域单体为20至40kDa(例如，20至25kDa、25至30kDa、35至40kDa、20至30kDa、25至35kDa或30至40kDa)。在一些实施方案中，Fc结构域单体的质量为在约20kDa与约40kDa之间(例如，20kDa至25kDa、25kDa至30kDa、30kDa至35kDa、35kDa至40kDa)。
在一些实施方案中，Fc结构域单体在氨基酸位置220处包含丝氨酸，其中氨基酸编号是根据如Kabat中的EU索引，且其中Fc结构域单体的长度在200与300个氨基酸残基之间(例如，210与300个氨基酸残基之间、230与300个氨基酸残基之间、250与300个氨基酸残基之间、270与300个氨基酸残基之间、290与300个氨基酸残基之间、210与290个氨基酸残基之间、220与280个氨基酸残基之间、230与270个氨基酸残基之间、240与260个氨基酸残基之间或245与255个氨基酸残基之间)。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含在氨基酸位置220处的丝氨酸、在位置252处的酪氨酸、在位置254处的苏氨酸及/或在位置256处的谷氨酸。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含在氨基酸位置220处的丝氨酸、在位置309处的天冬氨酸、在位置311处的组氨酸及/或在位置434处的丝氨酸。在一些实施方案中，Fc结构域单体进一步包含相对于对应的人野生型Fc序列的一个或多个(一、二、三、四、五、六、七、八、九、十或更多个)额外突变(例如，氨基酸缺失、添加及/或取代)。
在另一实施方案中，Fc结构域单体在氨基酸位置220处包含丝氨酸，其中氨基酸编号是根据如Kabat中的EU索引，且其中Fc结构域单体的质量为在约20kDa及约40kDa之间(例如，20kDa至25kDa、25kDa至30kDa、30kDa至35kDa、35kDa至40kDa)。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含在氨基酸位置220处的丝氨酸、在位置252处的酪氨酸、在位置254处的苏氨酸及/或在位置256处的谷氨酸。在一些实施方案中，Fc结构域单体包含在氨基酸位置220处的丝氨酸、在位置309处的天冬氨酸、在位置311处的组氨酸及/或在位置434处的丝氨酸。
在一些实施方案中，Fc结构域单体的N端包含10与20个残基之间(例如，11、12、13、14、15、16、17、18或19个残基)的Fab结构域。在某些实施方案中，Fc结构域单体的N端是氨基酸残基198-205中任一者。在一些实施方案中，Fc结构域单体的N端是氨基酸残基201(例如，Asn 201)。在某些实施方案中，Fc结构域单体的N端是氨基酸残基202(例如，Val 202)。在其他实施方案中，变体Fc结构域单体的C端是氨基酸残基437-447中任一者。在另一实施方案中，变体Fc结构域单体的C端是氨基酸残基446(例如，Gly 446)。在一些实施方案中，变体Fc结构域单体的C端是氨基酸残基447(例如，Lys 447)。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，含有Fc结构域的组合物包含这样的Fc结构域，所述Fc结构域包含各自独立地选自本文所述的Fc结构域单体中任一者的Fc结构域单体的二聚体，其中所述Fc结构域的质量为在约50kDa与约70kDa之间(例如，约51kDa、约52kDa、约53kDa、约54kDa、约55kDa、约56kDa、约57kDa、约58kDa、约59kDa、约60kDa、约61kDa、约62kDa、约63kDa、约64kDa、约65kDa、约66kDa、约67kDa、约68kDa或约69kDa)。在一些实施方案中，Fc结构域单体二聚(例如，同源二聚体或异源二聚体)以形成Fc结构域。在一些实施方案中，Fc结构域为至少40kDa(例如，至少45kDa、至少50kDa、至少55kDa、至少60kDa、至少65kDa、至少70kDa、至少75kDa或至少80kDa)。在一些实施方案中，Fc结构域的质量为在40kDa与80kDa之间(例如，在约42kDa与约50kDa之间、在约48kDa与约55kDa之间、在约53kDa与约60kDa之间、在约58kDa与约65kDa之间、在约62kDa与约70kDa之间、在约68kDa与约75kDa之间或在约72kDa与约80kDa之间)。在特定实施方案中，Fc结构域是在55kDa与62kDa之间(例如，约56kDa、约57kDa、约58kDa、约59kDa、约60kDa或约61kDa)。在优选实施方案中，变体Fc结构域是包含两个Fc结构域单体的同源二聚体(例如，其中每个变体Fc结构域单体包含SEQ ID NO:1-138中任一者的序列的同源二聚体)。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，Fc结构域单体包含与SEQ ID NO:1-138中任一者的序列至少90％(例如，至少95％、至少98％)相同的氨基酸序列。
如本文所用，应理解“对应于”特定SEQ ID NO.的特定半胱氨酸残基的硫原子包括本领域技术人员将理解与所述特定序列的特定半胱氨酸比对的任何半胱氨酸残基的硫原子。人IgG1(UniProtKB:P01857；SEQ ID NO:164)、人IgG2(UniProtKB:P01859；SEQ ID NO:165)、人IgG3(UniProtKB:P01860；SEQ ID NO:166)及人IgG4(UniProtKB:P01861；SEQ IDNO:167)的蛋白质序列比对提供如下(用Clustal Omega多对比对对齐)。所述比对指示彼此“对应”的半胱氨酸残基(例如，半胱氨酸残基的硫原子)(在盒中且由·符号指示)。本领域技术人员将能够容易地执行与本发明的任何IgG变体的此种比对以确定半胱氨酸中对应于本文所述的特定SEQ ID NO.(例如，SEQ ID NO:1-138中任一者)的特定半胱氨酸的任何硫原子的硫原子。例如，本领域技术人员将能够容易地确定SEQ ID NO:10的Cys10(Fc结构域铰链区保守CPPC基序的第一半胱氨酸)对应于例如IgG1的Cys109、IgG2的Cys106、IgG3的Cys156、SEQ ID NO:1的Cys29、SEQ ID NO:2的Cys9、SEQ ID NO:3的Cys30或SEQ ID NO:10的10。
在一些实施方案中，具有SEQ ID NO:39-138中任一者的序列的本发明的Fc结构域或Fc结构域单体可进一步包含N端额外氨基酸(Xaa)x及/或C端额外氨基酸(Xaa)z，其中Xaa为任何氨基酸且x及z为大于或等于零的整数，一般地小于100，优选地小于10且更优选地为0、1、2、3、4或5。在一些实施方案中，所述额外氨基酸与SEQ ID NO:94的一个或多个连续氨基酸至少70％(例如，70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)相同。例如，所述额外氨基酸可为C端处对应于IgG1(SEQ ID NO:161)的Lys447的单一氨基酸。
如本文所用，应理解“对应于”特定SEQ ID NO.的特定赖氨酸残基的氮原子包含本领域技术人员将理解与所述特定序列的特定赖氨酸比对的任何赖氨酸残基的氮原子。人IgG1(UniProtKB:P01857；SEQ ID NO:164)、人IgG2(UniProtKB:P01859；SEQ ID NO:165)、人IgG3(UniProtKB:P01860；SEQ ID NO:166)及人IgG4(UniProtKB:P01861；SEQ ID NO:167)的蛋白质序列比对提供如下(用Clustal Omega多对比对对齐)。所述比对指示彼此“对应”的赖氨酸残基(例如，赖氨酸残基的氮原子)(在盒中且由*符号指示)。本领域技术人员将能够容易地执行与本发明的任何IgG变体的此种比对以确定赖氨酸中对应于本文所述的特定SEQ ID NO.(例如，SEQ ID NO:1-138中任一者)的特定赖氨酸的任何氮原子的氮原子。例如，本领域技术人员将能够容易地确定SEQ ID NO:10的Lys35对应于例如IgG1的Lys129、IgG2的Lys126、IgG3的Lys176、SEQ ID NO:1的Lys51、SEQ ID NO:2的Lys31、SEQ ID NO:3的Lys50或SEQ ID NO:10的Lys30。
IgG1(SEQ ID NO:164)、IgG2(SEQ ID NO:165)、IgG3(SEQ ID NO:166)及IgG4(SEQID NO:167)的蛋白质序列比对
Figure BDA0003629760100004681
免疫细胞的活化
Fc-γ受体(FcγR)结合免疫球蛋白G(IgG)的Fc部分且在免疫活化及调节中发挥重要作用。例如，免疫复合物(IC)中的IgG Fc结构域以高亲合力衔接FcγR，因此触发调节免疫细胞活化的信号传导级联。人FcγR家族含有数种活化受体(FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIc、FcγRIIIa及FcγRIIIb)及一种抑制受体(FcγRIIb)。FcγR信号传导通过细胞内结构域介导，所述细胞内结构域含有用于活化FcγR的免疫酪氨酸活化基序(ITAM)及用于抑制受体FcγRIIb的免疫酪氨酸抑制基序(ITIM)。在一些实施方案中，Fc结构域与FcγR的结合使Src家族激酶进行ITAM磷酸化；此活化Syk家族激酶且诱导包括PI3K及Ras路径的下游信号传导网路。
在本文所述的缀合物中，缀合物中包含RSV F蛋白抑制剂单体或二聚体的部分结合于且抑制病毒RSV F蛋白，导致抑制病毒复制，而所述缀合物的Fc结构域部分结合于免疫细胞上的FcγR(例如，FcRn、FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIc、FcγRIIIa及FcγRIIIb)且活化吞噬作用及效应子功能，诸如抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)，因此导致免疫细胞吞没及破坏病毒粒子且进一步增强所述缀合物的抗病毒活性。可通过本文所述的缀合物活化的免疫细胞的实例包括但不限于巨噬细胞、嗜中性粒细胞、嗜曙红细胞、嗜碱细胞、淋巴细胞、滤泡性树突状细胞、自然杀伤细胞及肥大细胞。
组织分布
在进入体循环之后，治疗剂被分配到身体的组织。由于血液灌注、组织结合、区域pH及细胞膜通透性的不同，分布通常不均匀。药物进入组织的速率取决于血液流向组织的速度、组织质量及血液与组织之间的分配特征。在血管丰富的区域，血液与组织之间的分布平衡(当进入及退出速率相同时)会更快地达到，除非跨细胞膜扩散是限速步骤。大小、形状、电荷、靶标结合、FcRn及靶标结合机制、施用途径以及配方会影响组织分布。
在一些情况下，可优化本文所述的缀合物以分布至肺组织。在一些情况下，缀合物在施用之后2小时内在上皮衬液中的分布浓度比率为血浆中缀合物浓度的至少30％。在某些实施方案中，施用之后2小时内的浓度比率为至少45％。在一些实施方案中，施用之后2小时内的浓度比率为至少55％。特别地，施用之后2小时内的浓度比率为至少60％。如实施例40及图14所示，到注射后2小时，如在其余时间过程中通过AUC所测量，具有用一种或多种小分子抗病毒抑制剂修饰的Fc结构域(SEQ ID NO:73)的缀合物ELF水平令人惊讶地为血浆暴露水平的约60％，表明缀合物几乎立即从血浆分配到肺中的ELF。这表明含有Fc的缀合物迅速分布到肺中，且相对于血浆中的水平在肺中保持高浓度。
IV.白蛋白及白蛋白结合肽
白蛋白
本发明的白蛋白可为天然存在的白蛋白或其变体，诸如天然存在的白蛋白的经工程改造变体。变体包括多态物、诸如结构域及子结构域的片段及融合蛋白。白蛋白可包含自任何来源获得的白蛋白的序列。优选地，所述来源为哺乳动物，诸如人或牛。最优选地，所述白蛋白为人血清白蛋白(HSA)或其变体。人血清白蛋白包括具有天然存在于人中的氨基酸序列的任何白蛋白及其变体。白蛋白编码序列可通过本领域技术人员已知用于分离对应于人基因的cDNA且对所述cDNA进行测序的方法获得。本发明的白蛋白可包含SEQ ID NO:96或SEQ ID NO:97中提供的人血清白蛋白(HSA)的氨基酸序列，或者SEQ ID NO:98中提供的小鼠血清白蛋白(MSA)的氨基酸序列，或者其变体或片段(优选其功能变体或片段)。片段或变体可或可不为功能性的，或可在某种程度上保持白蛋白的功能。例如，片段或变体可保持与白蛋白受体(诸如HSA或MSA)结合的能力，达亲本白蛋白(例如，产生所述片段或变体的亲本白蛋白)的所述能力的至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％或105％。相对结合能力可通过本领域中已知的方法，诸如通过表面等离子体共振来测定。
所述白蛋白可为白蛋白诸如人血清白蛋白的天然存在的多态变体。一般而言，人血清白蛋白的变体或片段将具有人血清白蛋白或小鼠血清白蛋白的配体结合活性的至少5％、10％、15％、20％、30％、40％、50％、60％或70％，且优选地80％、90％、95％、100％或105％或更高。
所述白蛋白可包含牛血清白蛋白的氨基酸序列。牛血清白蛋白包括具有天然存在于牛中的氨基酸序列的任何白蛋白(例如，如通过Swissprot登录号P02769所描述)及如本文所定义的其变体。牛血清白蛋白也包括如本文所定义的全长牛血清白蛋白或其变体的片段。
所述白蛋白可包含源自来自以下的血清白蛋白中的一者的白蛋白的序列：狗(例如，Swissprot登录号P49822-1)、猪(例如，Swissprot登录号P08835-1)、山羊(例如，Sigma产品号A2514或A4164)、猫(例如，Swissprot登录号P49064-1)、鸡(例如，Swissprot登录号P19121-1)、卵清蛋白(例如，鸡卵清蛋白)(例如，Swissprot登录号P01012-1)、火鸡卵清蛋白(例如，Swissprot登录号O73860-1)、驴(例如，Swissprot登录号Q5XLE4-1)、豚鼠(例如，Swissprot登录号Q6WDN9-1)、仓鼠(例如，如DeMarco等人International Journal forParasitology 37(11):1201-1208(2007)中所描述)、马(例如，Swissprot登录号P35747-1)、恒河猴(例如，Swissprot登录号Q28522-1)、小鼠(例如，Swissprot登录号P07724-1)、鸽子(例如，如由Khan等人Int.J.Biol.Macromol.30(3-4),171-8(2002)所定义)、兔(例如，Swissprot登录号P49065-1)、大鼠(例如，Swissprot登录号P02770-1)或绵羊(例如，Swissprot登录号P14639-1)，且包括如本文定义的其变体及片段。
本领域技术人员已知白蛋白的多种天然存在的突变体形式。白蛋白的天然存在的突变体形式在例如Peters等人All About Albumin:Biochemistry,Genetics and MedicalApplications,Academic Press,Inc.,San Diego,Calif.,第170页-181页(1996)中描述。
本发明的白蛋白包括天然存在的白蛋白的变体。变体白蛋白是指具有至少一种氨基酸突变，诸如通过插入、缺失或取代生成的氨基酸突变(保守或非保守)的白蛋白，其限制条件在于所述改变产生尚未显著改变至少一种基础特性(例如，尚未改变超过5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％或40％)的白蛋白。可定义白蛋白的活性的例示性特性包括结合活性(例如，包括对胆红素或诸如长链脂肪酸的脂肪酸的结合特异性或亲和力)、容积渗透浓度或在某个pH范围内的行为。
典型地，白蛋白变体将与天然存在的白蛋白(诸如SEQ ID NO:139-141中任一者的白蛋白)具有至少40％、至少50％、至少60％，且优选至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性。
用于生产及纯化重组人白蛋白的方法为充分确立的(Sleep等人Biotechnology,8(1):42-6(1990))，且包括用于制药应用的重组人白蛋白的生产(Bosse等人J ClinPharmacol 45(1):57-67(2005))。HSA的三维结构已由X射线晶体学阐明(Carter等人Science.244(4909):1195-8(1998)；Sugio等人Protein Eng.12(6):439-46(1999))。HSA多肽链具有35个半胱氨酸残基，所述残基形成17个二硫键；及在成熟蛋白质的位置34处的一个未配对(例如，游离)半胱氨酸。HSA的Cys-34已被用于将分子缀合于白蛋白(Leger等人Bioorg Med Chem Lett 14(17):4395-8(2004)；Thibaudeau等人Bioconjug Chem 16(4):1000-8(2005))，且为位点特异性缀合提供位点。
SEQ ID NO:139(人血清白蛋白(HSA)，变体1)
DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQCPFEDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSVVLLLRLAKTYETTLEKCCAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSVVLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASQAALGL
SEQ ID NO:140(人血清白蛋白(HSA)，变体2)
RGVFRRDAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQCPFEDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSVVLLLRLAKTYETTLEKCCAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSVVLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASQAALGL
SEQ ID NO:141(小鼠血清白蛋白(MSA))
RGVFRREAHKSEIAHRYNDLGEQHFKGLVLIAFSQYLQKCSYDEHAKLVQEVTDFAKTCVADESAANCDKSLHTLFGDKLCAIPNLRENYGELADCCTKQEPERNECFLQHKDDNPSLPPFERPEAEAMCTSFKENPTTFMGHYLHEVARRHPYFYAPELLYYAEQYNEILTQCCAEADKESCLTPKLDGVKEKALVSSVRQRMKCSSMQKFGERAFKAWAVARLSQTFPNADFAEITKLATDLTKVNKECCHGDLLECADDRAELAKYMCENQATISSKLQTCCDKPLLKKAHCLSEVEHDTMPADLPAIAADFVEDQEVCKNYAEAKDVFLGTFLYEYSRRHPDYSVSLLLRLAKKYEATLEKCCAEANPPACYGTVLAEFQPLVEEPKNLVKTNCDLYEKLGEYGFQNAILVRYTQKAPQVSTPTLVEAARNLGRVGTKCCTLPEDQRLPCVEDYLSAILNRVCLLHEKTPVSEHVTKCCSGSLVERRPCFSALTVDETYVPKEFKAETFTFHSDICTLPEKEKQIKKQTALAELVKHKPKATAEQLKTVMDDFAQFLDTCCKAADKDTCFSTEGPNLVTRCKDALA
白蛋白的缀合
本发明的白蛋白可缀合于(例如，借助于共价键)任何本发明化合物(例如，借助于RSV F蛋白抑制剂单体或二聚体的接头部分)。所述白蛋白可通过本领域技术人员熟知用于产生小分子-蛋白缀合物的任何方法缀合于任何本发明化合物。此可包括共价缀合于溶剂暴露氨基酸，诸如溶剂暴露半胱氨酸或赖氨酸。例如，人血清白蛋白可通过共价连接于对应于SEQ ID NO:136的Cys34或SEQ ID NO:140的Cys40的硫原子缀合于本发明化合物。
本发明的白蛋白可借助于位于所述白蛋白的C端或N端的10个氨基酸残基内的氨基酸缀合于任何本发明化合物。白蛋白可包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15或20个或更多个氨基酸的C端或N端多肽融合。所述C端或N端多肽融合可包含一个或多个溶剂暴露半胱氨酸或赖氨酸残基，所述残基可用于共价缀合本发明化合物(例如，缀合于RSV F蛋白抑制剂单体或二聚体，包括借助于接头)。
本发明的白蛋白包括已被工程改造以包含一个或多个溶剂暴露半胱氨酸或赖氨酸残基的任何白蛋白，其可提供用于缀合于本发明化合物(例如，缀合于RSV F蛋白抑制剂单体或二聚体，包括借助于接头)的位点。最优选地，所述白蛋白将含有单一溶剂暴露半胱氨酸或赖氨酸，因此使得本发明化合物能够位点特异性缀合。
用于产生包含一个或多个缀合胜任半胱氨酸残基的经工程改造白蛋白变体的例示性方法提供于美国专利申请号2017/0081389中，所述申请通过引用以其整体并入本文。简单来说，优选白蛋白变体是包括单一、溶剂暴露、未配对(例如，游离)半胱氨酸残基，因此使得接头能够位点特异性缀合于所述半胱氨酸残基的那些变体。
已被工程改造以使得能够化学缀合于溶剂暴露、未配对半胱氨酸残基的白蛋白包括以下白蛋白变体：
(a)在对应于SEQ ID NO:139的L585、D1、A2、D562、A364、A504、E505、T79、E86、D129、D549、A581、D121、E82、S270、Q397及A578中任一者的氨基酸残基处具有半胱氨酸对非半胱氨酸氨基酸残基的取代的白蛋白；
(b)在邻近对应于SEQ ID NO:139的L585、D1、A2、D562、A364、A504、E505、T79、E86、D129、D549、A581、D121、E82、S270、Q397及A578中任一者的氨基酸残基的N端或C端侧的位置处具有半胱氨酸插入的白蛋白；
(c)经工程改造以具有未配对半胱氨酸的白蛋白，其在对应于SEQ ID NO:139的C369、C361、C91、C177、C567、C316、C75、C169、C124或C558中任一者的残基处具有游离硫醇基团，且所述白蛋白可由或不由对应于SEQ ID NO:139的C360、C316、C75、C168、C558、C361、C91、C124、C169或C567的残基的缺失或取代而生成；及/或
(d)添加半胱氨酸至白蛋白的N端或C端。
在本发明的一些实施方案中，(a)、(b)、(c)及/或(d)的取代、缺失、添加或插入事件的净结果是所述多肽序列的缀合胜任半胱氨酸残基的数目相对于亲本白蛋白序列有所增加。在本发明的一些实施方案中，(a)、(b)、(c)及/或(d)的取代、缺失、添加或插入事件的净结果是所述多肽序列的缀合胜任半胱氨酸残基的数目为一，因此使得能够位点特异性缀合。
优选白蛋白变体也包括具有单一溶剂暴露赖氨酸残基，因此使得接头能够位点特异性缀合于所述赖氨酸残基的白蛋白。所述变体可通过工程改造白蛋白，包括任何前述方法(例如，插入、缺失、取代或C端或N端融合)来生成。
白蛋白结合肽
生物活性化合物与白蛋白结合肽的缀合可改变所述生物活性化合物的药效，包括组织摄取、渗透及扩散的改变。在优选实施方案中，如与单独本发明化合物相比，白蛋白结合肽与所述化合物(例如，RSVF蛋白抑制剂单体或二聚体，借助于接头)的缀合会增加所述化合物的功效或减少毒性。
本发明的白蛋白结合肽包括具有5至50个(例如，5至40个、5至30个、5至20个、5至15个、5至10个、10至50个、10至30个或10至20个)氨基酸残基的氨基酸序列的任何多肽，其对白蛋白(诸如本文所述的任何白蛋白)具有亲和力且具有结合所述白蛋白的功能。优选地，白蛋白结合肽结合于天然存在的血清白蛋白，最优选地人血清白蛋白。白蛋白结合肽可具有不同起源，例如合成、人、小鼠或大鼠。本发明的白蛋白结合肽包括已被工程改造以包含一个或多个(例如，两个、三个、四个或五个)溶剂暴露半胱氨酸或赖氨酸残基的白蛋白结合肽，其可提供用于缀合于本发明化合物(例如，缀合于RSVF蛋白抑制剂单体或二聚体，包括借助于接头)的位点。最优选地，所述白蛋白结合肽将含有单一溶剂暴露半胱氨酸或赖氨酸，因此使得本发明化合物能够位点特异性缀合。白蛋白结合肽可仅包含天然存在的氨基酸残基，或可包含一种或多种非天然存在的氨基酸残基。在包括时，非天然存在的氨基酸残基(例如，非天然存在的氨基酸残基的侧链)可用作用于本发明化合物(例如，RSV F蛋白抑制剂单体或二聚体，包括借助于接头)的附接点。本发明的白蛋白结合肽可为线性或环状的。本发明的白蛋白结合肽包括本领域技术人员已知的任何白蛋白结合肽，其实例提供于本文中。
白蛋白结合肽及包含白蛋白结合肽的缀合物优选地以如下亲和力结合白蛋白(例如，人血清白蛋白)，所述亲和力的特征在于小于约100μM，优选地小于约100nM，且最优选地不会实质上结合其他血浆蛋白质的解离常数Kd。此类化合物的特定实例为线性或环状肽，其长度优选地在约10与20个氨基酸残基之间，任选在N端或C端或所述两端处经修饰。
白蛋白结合肽包括线性及环状肽，其包括以下通式，其中Xaa为任何氨基酸：
SEQ ID NO:144
Xaa-Xaa-Cys-Xaa-Xaa-Xaa-Xaa-Xaa-Cys-Xaa-Xaa-Phe-Cys-Xaa-Asp-Trp-Pro-Xaa-Xaa-Xaa-Ser-Cys
SEQ ID NO:145
Val-Cys-Tyr-Xaa-Xaa-Xaa-Ile-Cys-Phe
SEQ ID NO:146
Cys-Tyr-Xaa-Pro-Gly-Xaa-Cys
SEQ ID NO:147
Asp-Xaa-Cys-Leu-Pro-Xaa-Trp-Gly-Cys-Leu-Trp
SEQ ID NO:148
Trp-Cys-Asp-Xaa-Xaa-Leu-Xaa-Ala-Xaa-Asp-Leu-Cys
SEQ ID NO:149
Asp-Leu-Val-Xaa-Leu-Gly-Leu-Glu-Cys-Trp
本发明的白蛋白结合肽进一步包含以下肽序列中任一者，其可为线性或环状的：
SEQ ID NO:150 DLCLRDWGCLW
SEQ ID NO:151 DICLPRWGCLW
SEQ ID NO:152 MEDICLPRWGCLWGD
SEQ ID NO:153 QRLMEDICLPRWGCLWEDDE
SEQ ID NO:154 QGLIGDICLPRWGCLWGRSV
SEQ ID NO:155 QGLIGDICLPRWGCLWGRSVK
SEQ ID NO:156 EDICLPRWGCLWEDD
SEQ ID NO:157 RLMEDICLPRWGCLWEDD
SEQ ID NO:158 MEDICLPRWGCLWEDD
SEQ ID NO:159 MEDICLPRWGCLWED
SEQ ID NO:160 RLMEDICLARWGCLWEDD
SEQ ID NO:161 EVRSFCTRWPAEKSCKPLRG
SEQ ID NO:162 RAPESFVCYWETICFERSEQ
SEQ ID NO:163 EMCYFPGICWM
SEQ ID NO:144-163的白蛋白结合肽可进一步包含N端处的额外氨基酸(Xaa)x及/或C端处的额外氨基酸(Xaa)z，其中Xaa为任何氨基酸且x及z为大于或等于零的整数，一般地小于100，优选地小于10且更优选地为0、1、2、3、4或5。
进一步例示性白蛋白结合肽提供于美国专利申请号2005/0287153中，所述申请通过引用以其整体并入本文。
白蛋白结合肽的缀合
本发明的白蛋白结合肽可缀合于(例如，借助于共价键)任何本发明化合物(例如，借助于RSV F蛋白抑制剂单体或二聚体的接头部分)。所述白蛋白结合肽可通过本领域技术人员已知用于产生肽-小分子缀合物的任何方法缀合于任何本发明化合物。此可包括共价缀合于氨基酸残基(诸如半胱氨酸、赖氨酸或非天然氨基酸)的侧链基团。或者，共价缀合可出现于C端(例如，缀合于C端羧酸，或缀合于C端残基的侧链基团)或N端(例如，缀合于N端氨基，或缀合于N端氨基酸的侧链基团)。
V.接头
接头是指本文所述缀合物中的两种或更多种组分之间(例如，本文所述的缀合物中的两种RSV F蛋白抑制剂之间、本文所述的缀合物中的RSV F蛋白抑制剂与Fc结构域或白蛋白之间及本文所述的缀合物中的两种RSV F蛋白抑制剂的二聚体与Fc结构域或白蛋白之间)的连接。
具有共价连接于RSV F蛋白抑制剂二聚体的Fc结构域或白蛋白的缀合物中的接头
在如本文所述的含有共价连接于一种或多种RSV F蛋白抑制剂二聚体的Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽的缀合物中，所述缀合物中的接头(例如，L或L’)可为分支链结构。如本文进一步描述，本文所述的缀合物中的接头(例如，L或L’)可为多价结构，例如分别具有两个或三个臂的二价或三价结构。在一些实施方案中，当所述接头具有三个臂时，所述臂中的两者可附接至第一及第二RSV F蛋白抑制剂且第三臂可附接至Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽。在一些实施方案中，当所述接头具有两个臂时，一个臂可附接至Fc结构域或白蛋白且另一臂可附接至两种RSV F蛋白抑制剂之一。在其他实施方案中，具有两个臂的接头可用于将两种RSV F蛋白抑制剂附接到含有共价连接于一种或多种RSV F蛋白抑制剂二聚体的Fc结构域或白蛋白的缀合物上。
在一些实施方案中，具有共价连接于一种或多种RSV F蛋白抑制剂二聚体的Fc结构域或白蛋白的缀合物中的接头由以下来描述：式(D-L-I)
Figure BDA0003629760100004801
其中LA由式GA1-(ZA1)g1-(YA1)h1-(ZA2)i1-(YA2)j1-(ZA3)k1-(YA3)l1-(ZA4)m1-(YA4)n1-(ZA5)o1-GA2描述；LB由式GB1-(ZB1)g2-(YB1)h2-(ZB2)i2-(YB2)j2-(ZB3)k2-(YB3)l2-(ZB4)m2-(YB4)n2-(ZB5)o2-GB2描述；LC由式GC1-(ZC1)g3-(YC1)h3-(ZC2)i3-(YC2)j3-(ZC3)k3-(YC3)l3-(ZC4)m3-(YC4)n3-(ZC5)o3-GC2描述；GA1是附接至式(D-L-I)中的Qi的键；GA2是附接至第一RSV F蛋白抑制剂(例如，A1)的键；GB1是附接至式(D-L-I)中的Qi的键；GB2是附接至第二RSV F蛋白抑制剂(例如，A2)的键；GC1是附接至式(D-L-I)中的Qi的键；GC2是附接至Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽的键或能够与缀合于E的官能团反应的官能团(例如，马来酰亚胺及半胱氨酸、胺及经活化羧酸、硫醇及马来酰亚胺、经活化磺酸及胺、异氰酸酯及胺、叠氮化物及炔以及烯烃及四嗪)；ZA1、ZA2、ZA3、ZA4、ZA5、ZB1、ZB2、ZB3、ZB4、ZB5、ZC1、ZC2、ZC3、ZC4及ZC5中每一者独立地为任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C1-C20亚杂烷基、任选取代的C2-C20亚烯基、任选取代的C2-C20亚杂烯基、任选取代的C2-C20亚炔基、任选取代的C2-C20亚杂炔基、任选取代的C3-C20亚环烷基、任选取代的C2-C20亚杂环烷基、任选取代的C4-C20亚环烯基、任选取代的C4-C20亚杂环烯基、任选取代的C8-C20亚环炔基、任选取代的C8-C20亚杂环炔基、任选取代的C5-C15亚芳基或任选取代的C2-C15亚杂芳基；YA1、YA2、YA3、YA4、YB1、YB2、YB3、YB4、YC1、YC2、YC3及YC4中每一者独立地为O、S、NRi、P、羰基、硫羰基、磺酰基、磷酸酯基、磷酰基或亚氨基；Ri为H、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C1-C20杂烷基、任选取代的C2-C20烯基、任选取代的C2-C20杂烯基、任选取代的C2-C20炔基、任选取代的C2-C20杂炔基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C4-C20环烯基、任选取代的C4-C20杂环烯基、任选取代的C8-C20环炔基、任选取代的C8-C20杂环炔基、任选取代的C5-C15芳基或任选取代的C2-C15杂芳基；g1、h1、i1、j1、k1、l1、m1、n1、o1、g2、h2、i2、j2、k2、l2、m2、n2、o2、g3、h3、i3、j3、k3、l3、m3、n3及o3中的每一者独立地为0或1；Q为氮原子、任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C1-C20亚杂烷基、任选取代的C2-C20亚烯基、任选取代的C2-C20亚杂烯基、任选取代的C2-C20亚炔基、任选取代的C2-C20亚杂炔基、任选取代的C3-C20亚环烷基、任选取代的C2-C20亚杂环烷基、任选取代的C4-C20亚环烯基、任选取代的C4-C20亚杂环烯基、任选取代的C8-C20亚环炔基、任选取代的C8-C20亚杂环炔基、任选取代的C5-C15亚芳基或任选取代的C2-C15亚杂芳基。
在一些实施方案中，任选取代包括用PEG取代。PEG具有重复单元结构(-CH2CH2O-)n，其中n为2至100的整数。聚乙二醇可选自PEG2至PEG100中任一者(例如，PEG2、PEG3、PEG4、PEG5、PEG5-PEG10、PEG10-PEG20、PEG20-PEG30、PEG30-PEG40、PEG50-PEG60、PEG60-PEG70、PEG70-PEG80、PEG80-PEG90、PEG90-PEG100)。
在一些实施方案中，LC可具有两个附接至Fc结构域的点(例如，两个GC2)。
在一些实施方案中，L包括聚乙二醇(PEG)接头。PEG接头包括具有重复单元结构(-CH2CH2O-)n的接头，其中n为2至100的整数。聚乙二醇接头可共价接合RSV F蛋白抑制剂及E(例如，在式(M-I)-(M-IV)中任一者的缀合物中)。聚乙二醇接头可共价接合第一RSV F蛋白抑制剂及第二RSV F蛋白抑制剂(例如，在式(D-I)-(D-VII)中任一者的缀合物中)。聚乙二醇接头可共价接合RSV F蛋白抑制剂二聚体及E(例如，在式(D-I)-(D-VII)中任一者的缀合物中)。聚乙二醇接头可选自PEG2至PEG100中任一者(例如，PEG2、PEG3、PEG4、PEG5、PEG5-PEG10、PEG10-PEG20、PEG20-PEG30、PEG30-PEG40、PEG50-PEG60、PEG60-PEG70、PEG70-PEG80、PEG80-PEG90、PEG90-PEG100)。在一些实施方案中，Lc包括PEG接头，其中LC共价附接至Qi及E中每一者。
具有共价连接于RSV F蛋白抑制剂单体的Fc结构域或白蛋白的缀合物中的接头
在如本文所述的含有共价连接于一种或多种RSV F蛋白抑制剂单体的Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽的缀合物中，所述缀合物中的接头(例如，L或L’)可为具有两个臂的二价结构。二价接头中的一个臂可附接至RSV F蛋白抑制剂单体且另一臂可附接至Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽。在一些实施方案中，本文所述的缀合物中的一种或多种RSV F蛋白抑制剂单体可各自独立地连接于Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽中的原子。
在一些实施方案中，接头由式(M-L-I)描述：
J1-(Q1)g-(T1)h-(Q2)i-(T2)j-(Q3)k-(T3)l-(Q4)m-(T4)n-(Q5)o-J2
其中J1是附接至RSV F蛋白抑制剂的键；J2是附接至Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽的键或能够与缀合于Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽的官能团反应的官能团(例如，马来酰亚胺及半胱氨酸、胺及经活化羧酸、硫醇及马来酰亚胺、经活化磺酸及胺、异氰酸酯及胺、叠氮化物及炔以及烯烃及四氮烯)；Q1、Q2、Q3、Q4及Q5中每一者独立地为任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C1-C20亚杂烷基、任选取代的C2-C20亚烯基、任选取代的C2-C20亚杂烯基、任选取代的C2-C20亚炔基、任选取代的C2-C20亚杂炔基、任选取代的C3-C20亚环烷基、任选取代的C2-C20亚杂环烷基、任选取代的C4-C20亚环烯基、任选取代的C4-C20亚杂环烯基、任选取代的C8-C20亚环炔基、任选取代的C8-C20亚杂环炔基、任选取代的C5-C15亚芳基或任选取代的C2-C15亚杂芳基；T1、T2、T3、T4中的每一者独立地为O、S、NRi、P、羰基、硫羰基、磺酰基、磷酸酯基、磷酰基或亚氨基；Ri为H、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C1-C20杂烷基、任选取代的C2-C20烯基、任选取代的C2-C20杂烯基、任选取代的C2-C20炔基、任选取代的C2-C20杂炔基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C4-C20环烯基、任选取代的C4-C20杂环烯基、任选取代的C8-C20环炔基、任选取代的C8-C20杂环炔基、任选取代的C5-C15芳基或任选取代的C2-C15杂芳基；且g、h、i、j、k、l、m、n及o各自独立地为0或1。
在一些实施方案中，任选取代包括用聚乙二醇(PEG)取代。PEG具有重复单元结构(-CH2CH2O-)n，其中n为2至100的整数。聚乙二醇可选自PEG2至PEG100中任一者(例如，PEG2、PEG3、PEG4、PEG5、PEG5-PEG10、PEG10-PEG20、PEG20-PEG30、PEG30-PEG40、PEG50-PEG60、PEG60-PEG70、PEG70-PEG80、PEG80-PEG90、PEG90-PEG100)。
在一些实施方案中，J2可具有两个附接至Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽的点(例如，两个J2)。
连接基团
在一些实施方案中，接头提供此处所述的缀合物中的RSV F蛋白抑制剂与Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽之间或者本文所述的缀合物中的两种RSV F蛋白抑制剂之间的空间、刚性及/或柔性。在一些实施方案中，接头可为键，例如共价键，例如酰胺键、二硫键、C-O键、C-N键、N-N键、C-S键或由化学反应(例如，化学缀合)产生的任何种类的键。在一些实施方案中，接头(如式(1)、(2)、(D-I)-(D-VII)或(M-I)-(M-VII)中任一者所示的L或L’)包含不超过250个原子(例如，1-2、1-4、1-6、1-8、1-10、1-12、1-14、1-16、1-18、1-20、1-25、1-30、1-35、1-40、1-45、1-50、1-55、1-60、1-65、1-70、1-75、1-80、1-85、1-90、1-95、1-100、1-110、1-120、1-130、1-140、1-150、1-160、1-170、1-180、1-190、1-200、1-210、1-220、1-230、1-240或1-250个原子；250、240、230、220、210、200、190、180、170、160、150、140、130、120、110、100、95、90、85、80、75、70、65、60、55、50、45、40、35、30、28、26、24、22、20、18、16、14、12、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个原子)。在一些实施方案中，接头(L或L)包含不超过250个非氢原子(例如，1-2、1-4、1-6、1-8、1-10、1-12、1-14、1-16、1-18、1-20、1-25、1-30、1-35、1-40、1-45、1-50、1-55、1-60、1-65、1-70、1-75、1-80、1-85、1-90、1-95、1-100、1-110、1-120、1-130、1-140、1-150、1-160、1-170、1-180、1-190、1-200、1-210、1-220、1-230、1-240或1-250个非氢原子；250、240、230、220、210、200、190、180、170、160、150、140、130、120、110、100、95、90、85、80、75、70、65、60、55、50、45、40、35、30、28、26、24、22、20、18、16、14、12、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个非氢原子)。在一些实施方案中，接头(L或L)的骨架包含不超过250个原子(例如，1-2、1-4、1-6、1-8、1-10、1-12、1-14、1-16、1-18、1-20、1-25、1-30、1-35、1-40、1-45、1-50、1-55、1-60、1-65、1-70、1-75、1-80、1-85、1-90、1-95、1-100、1-110、1-120、1-130、1-140、1-150、1-160、1-170、1-180、1-190、1-200、1-210、1-220、1-230、1-240或1-250个原子；250、240、230、220、210、200、190、180、170、160、150、140、130、120、110、100、95、90、85、80、75、70、65、60、55、50、45、40、35、30、28、26、24、22、20、18、16、14、12、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个原子)。接头的“骨架”是指接头中的原子，其合起来形成自缀合物的一部分至所述缀合物的另一部分的最短路径。接头的骨架中的原子直接地参与连接所述缀合物的一部分至所述缀合物的另一部分。例如，附接至接头的骨架中的碳的氢原子未被视为直接地参与连接所述缀合物的一部分至所述缀合物的另一部分。
可用于制备接头(L或L’)的分子包含至少两个官能团，例如两个羧酸基。在三价接头的一些实施方案中，接头的两个臂可含有两种二羧酸，其中第一羧酸可与所述缀合物中的第一RSV F蛋白抑制剂形成共价连接且第二羧酸可与所述缀合物中的第二RSV F蛋白抑制剂形成共价连接且所述接头的第三臂可与所述缀合物中的Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽形成共价连接(例如，C-O键)。在二价接头的一些实施方案中，所述二价接头可含有两种羧酸，其中第一羧酸可与所述缀合物中的一种组分(例如，RSVF蛋白抑制剂)形成共价连接且第二羧酸可与所述缀合物中的另一组分(例如，Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽)形成共价连接(例如，C-S键或C-N键)。
在一些实施方案中，二羧酸分子可用作接头(例如，二羧酸接头)。例如，在含有共价连接于一种或多种RSV F蛋白抑制剂二聚体的Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽的缀合物中，二羧酸分子中的第一羧酸可与第一RSV F蛋白抑制剂的羟基或氨基形成共价连接且第二羧酸可与第二RSV F蛋白抑制剂的羟基或氨基形成共价连接。
可用于形成接头的二羧酸分子的实例包括但不限于：
Figure BDA0003629760100004851
Figure BDA0003629760100004861
及
Figure BDA0003629760100004871
其中n为1至20的整数(例如，n为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)。
可用于形成接头的二羧酸分子的其他实例包括但不限于：
Figure BDA0003629760100004872
Figure BDA0003629760100004881
Figure BDA0003629760100004882
及
Figure BDA0003629760100004883
在一些实施方案中，二羧酸分子(诸如本文所述者)可进一步官能化以含有一个或多个额外官能团。二羧酸可进一步官能化，例如以提供与Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽的附接点(例如，借助于接头，诸如PEG接头)。
在一些实施方案中，当所述RSV F蛋白抑制剂附接至Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽时，连接基团可包含有包含由1至25个原子间隔的羧酸部分及氨基部分的部分。此类连接基团的实例包括但不限于：
Figure BDA0003629760100004891
其中n为1至20的整数(例如，n为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)。
在一些实施方案中，可包含有包含羧酸部分及氨基部分的部分的连接基团(诸如本文所述者)可进一步官能化以含有一个或多个额外官能团。所述连接基团可进一步官能化，例如以提供与Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽的附接点(例如，借助于接头，诸如PEG接头)。
在一些实施方案中，当所述RSV F蛋白抑制剂附接至Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽时，连接基团可包含有包含由1至25个原子间隔的两个或氨基部分(例如，二氨基部分)的部分。此类连接基团的实例包括但不限于：
Figure BDA0003629760100004901
其中n为1至20的整数(例如，n为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)。
在一些实施方案中，可包含二氨基部分的连接基团(诸如本文所述者)可进一步官能化以含有一个或多个额外官能团。此类二氨基连接基团可进一步官能化，例如以提供与Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽的附接点(例如，借助于接头，诸如PEG接头)。
在一些实施方案中，含有叠氮基的分子可用于形成接头，其中所述叠氮基可与炔进行环加成以形成1,2,3-三唑连接。在一些实施方案中，含有炔基的分子可用于形成接头，其中所述炔基可与叠氮化物进行环加成以形成1,2,3-三唑连接。在一些实施方案中，含有马来酰亚胺基的分子可用于形成接头，其中所述马来酰亚胺基可与半胱氨酸反应以形成C-S连接。在一些实施方案中，含有一个或多个卤烷基的分子可用于形成接头，其中所述卤烷基可与RSV F蛋白抑制剂形成共价连接，例如C-N及C-O连接。
在一些实施方案中，接头(L或L’)可包含源于例如合成聚合物(例如，聚乙二醇(PEG)聚合物)的合成基团。在一些实施方案中，接头可包含一个或多个氨基酸残基。在一些实施方案中，接头可为氨基酸序列(例如，1-25个氨基酸、1-10个氨基酸、1-9个氨基酸、1-8个氨基酸、1-7个氨基酸、1-6个氨基酸、1-5个氨基酸、1-4个氨基酸、1-3个氨基酸、1-2个氨基酸或1个氨基酸的序列)。在一些实施方案中，接头(L或L’)可包含一个或多个任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C1-C20亚杂烷基(例如，PEG单元)、任选取代的C2-C20亚烯基(例如，C2亚烯基)、任选取代的C2-C20亚杂烯基、任选取代的C2-C20亚炔基、任选取代的C2-C20亚杂炔基、任选取代的C3-C20亚环烷基(例如，亚环丙烷、亚环丁烷)、任选取代的C2-C20亚杂环烷基、任选取代的C4-C20亚环烯基、任选取代的C4-C20亚杂环烯基、任选取代的C8-C20亚环炔基、任选取代的C8-C20亚杂环炔基、任选取代的C5-C15亚芳基(例如，C6亚芳基)、任选取代的C2-C15亚杂芳基(例如，咪唑、吡啶)、O、S、NRi(Ri为H、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C1-C20杂烷基、任选取代的C2-C20烯基、任选取代的C2-C20杂烯基、任选取代的C2-C20炔基、任选取代的C2-C20杂炔基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C4-C20环烯基、任选取代的C4-C20杂环烯基、任选取代的C8-C20环炔基、任选取代的C8-C20杂环炔基、任选取代的C5-C15芳基或任选取代的C2-C15杂芳基)、P、羰基、硫羰基、磺酰基、磷酸酯基、磷酰基或亚氨基。
缀合化学
RSV F蛋白抑制剂单体或二聚体(例如，在式(1)、(2)、(D-I)-(D-VII)或(M-I)-(M-VII)中任一者的缀合物中)可例如借助于接头，通过本领域技术人员已知的任何标准缀合化学缀合于Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽。特定地考虑了以下缀合化学，例如关于使PEG接头(例如，官能化PEG接头)缀合于Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽。
使用接头使缀合物中的两种或更多种组分共价缀合可使用熟知有机化学合成技术及方法来实现。两种组分上的互补官能团可彼此反应以形成共价键。互补反应性官能团的实例包括但不限于例如马来酰亚胺及半胱氨酸、胺及经活化羧酸、硫醇及马来酰亚胺、经活化磺酸及胺、异氰酸酯及胺、叠氮化物及炔以及烯烃及四嗪。与多肽(例如，Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽)的位点特异性缀合可使用本领域中已知的技术来实现。用于使小分子位点特异性缀合于Fc结构域的例示性技术提供于Agarwall.P.,等人Bioconjugate Chem.26:176-192(2015)。
能够与氨基反应的官能团的其他实例包括例如烷基化剂及酰化剂。代表性的烷基化剂包括：(i)α-卤基乙酰基，例如XCH2CO-(其中X＝Br、Cl或I)；(ii)N-马来酰亚胺基，其可经由Michael类型反应或经由通过与环羰基加成进行酰化而与氨基反应；(iii)芳基卤化物，例如硝基卤基芳族基团；(iv)烷基卤化物；(v)能够与氨基形成席夫氏碱(Schiff’sbase)的醛或酮；(vi)可与氨基、巯基或酚式羟基反应的环氧化物，例如表氯醇及双环氧乙烷；(vii)含氯s-三嗪，其可对诸如氨基、巯基及羟基的亲核试剂具反应性；(viii)氮丙啶，其可通过开环对诸如氨基的亲核试剂具反应性；(ix)方酸二乙酯；及(x)α-卤基烷基醚。
氨基反应性酰化基团的实例包括例如(i)异氰酸酯及异硫氰酸酯；(ii)磺酰氯；(iii)酰基卤；(iv)活性酯，例如硝基苯酯或N-羟基丁二酰亚胺酯；(v)酸酐，例如混合、对称或N-羧基酐；(vi)酰基叠氮化物；及(vii)亚氨酸酯。醛及酮可与胺反应以形成席夫氏碱，席夫氏碱可经由还原胺化稳定化。
应理解，某些官能团可在反应之前转化为其他官能团，例如以赋予额外反应性或选择性。可用于此目的的方法的实例包括使用诸如二羧酸酐的试剂将胺转化为羧基；使用诸如N-乙酰基同型半胱氨酸硫代内酯、S-乙酰基巯基丁二酸酐、2-亚氨基四氢噻吩或含硫醇的丁二酰亚胺基衍生物的试剂将胺转化为硫醇；使用诸如α-卤代乙酸酯的试剂将硫醇转化为羧基；使用诸如乙烯亚胺或2-溴乙胺的试剂将硫醇转化为胺；使用诸如碳二亚胺的试剂将羧基转化为胺，接着再转化为二胺；以及使用诸如甲苯磺酰氯的试剂将醇转化为硫醇，接着用硫代乙酸酯进行酯交换反应，且用乙酸钠水解为硫醇。
在一些实施方案中，本发明的接头(例如L或L’，诸如D-L-I的LC)缀合(例如，通过本文所述的任何方法)于E(例如，Fc结构域或白蛋白)。在本发明的优选实施方案中，所述接头借助于以下进行缀合：(a)硫脲连接(即，-NH(C＝S)NH-)于E的赖氨酸；(b)氨基甲酸酯连接(即，-NH(C＝O)-O)于E的赖氨酸；(c)在赖氨酸与E之间通过还原胺化实现的胺连接(即，-NHCH2)；(d)酰胺(即，-NH-(C＝O)CH2)于E的赖氨酸；(e)接头的马来酰亚胺至E的半胱氨酸之间的半胱氨酸-马来酰亚胺缀合；(f)在接头与E的碳水化合物(例如，Fc结构域单体或Fc结构域的糖基)之间通过还原胺化实现的胺连接(即，-NHCH2)；(g)再桥接半胱氨酸缀合，其中所述接头缀合于E的两个半胱氨酸；(h)在接头与E的碳水化合物(例如，Fc结构域单体或Fc结构域的糖基)之间的肟连接；(i)在接头与E的氨基酸残基之间的肟连接；(j)在接头与E之间的叠氮基连接；(k)接头直接酰化为E；或(l)在接头与E之间的硫醚连接。
在一些实施方案中，接头缀合于E，其中所述连接包含结构-NH(C＝NH)X-，其中X为O、HN或键。在一些实施方案中，接头缀合于E，其中在接头的剩余部分与E之间的连接包含结构-NH(C＝O)NH-。
在一些实施方案中，接头缀合于E，其中连接包含结构-R9OR9C(＝O)NH-，其中R9为H、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C5-C15芳基或任选取代的C2-C15杂芳基。在一些实施方案中，接头缀合于E，其中在接头的剩余部分与E之间的连接包含结构-CH2OCH2C(＝O)NH-。
例示性连接策略(例如，用于使RSV F蛋白抑制剂单体或二聚体连接于E的方法，诸如借助于接头)进一步描绘于图1-4中。
在一些实施方案中，接头(例如活性酯，例如硝基苯酯或N-羟基丁二酰亚胺酯或其衍生物；例如官能化PEG接头，例如叠氮基-PEG2-PEG40-NHS酯)缀合于E，其中T(例如，DAR)在0.5与10.0之间，例如0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8.0、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9或10.0。在这些情况下，E-(PEG2-PEG40)-叠氮化物可经由点击缀合与具有末端炔接头(例如L或L’，诸如D-L-I的LC)的Int反应。在点击缀合期间，铜催化的叠氮化物(例如，Fc-(PEG2-PEG40)-叠氮化物)与炔(例如，具有末端炔接头(例如L或L’，诸如D-L-I的LC)的Int)的反应形成5元杂原子环。在一些实施方案中，缀合于E的接头为末端炔且缀合于具有末端叠氮化物的Int。E-(PEG2-PEG40)-叠氮化物的制备的例示性制备描述于实施例2、3及12中。本领域技术人员将容易了解来自点击化学缀合的最终产物。
例示性连接策略(例如，用于使神经氨酸酶抑制剂单体或二聚体连接于E的方法，诸如借助于接头)进一步描绘于图1-4中。
VI.组合疗法
抗病毒剂
在一些实施方案中，一种或多种抗病毒剂可与本文所述的缀合物(例如，式(1)、(2)、(D-I)-(D-VII)或(M-I)-(M-VII)中任一者的缀合物)组合施用(例如，实质上同时施用(例如，在同一药物组合物中或在独立药物组合物中)或在不同时间独立地施用)。
在一些实施方案中，所述抗病毒剂是用于治疗RSV的抗病毒剂。例如，所述抗病毒剂可为病毒复制抑制剂、RSV F蛋白抑制剂、聚合酶抑制剂或融合蛋白抑制剂。所述抗病毒剂可靶向病毒或宿主受试者。用于与本文所述的缀合物(例如，式(1)、(2)、(D-I)-(D-VII)或(M-I)-(M-VII)中任一者的缀合物)组合使用来治疗RSV的抗病毒剂可选自普沙托韦、MDT637、JNJ 179、TMC353121或齐列索韦。此外，普沙托韦、MDT 637、JNJ 179、TMC353121或齐列索韦的衍生物(诸如文献中发现的那些)具有RSV F蛋白抑制剂活性且可与本文化合物组合用作RSV F蛋白抑制剂(参见例如，Cockerill等人J.Med.Chem.62(7):3206-3227,2018)。
抗病毒疫苗
在一些实施方案中，本文所述的缀合物中任一者(例如，式(1)、(2)、(D-I)-(D-VII)或(M-I)-(M-VII)中任一者的缀合物)与抗病毒疫苗(例如，在受试者中针对病毒引起免疫反应的组合物)组合施用。所述抗病毒疫苗可与所述缀合物实质上同时施用(例如，在同一药物组合物中或在独立药物组合物中)，或可在所述缀合物之前或之后(例如，在1天、2天、5天、1周、2周、3周、1个月、2个月、6个月或12个月或更久时期内)经施用。
在一些实施方案中，病毒疫苗包括在受试者中针对RSV A或RSV B引起免疫反应的免疫原。在一些实施方案中，疫苗作为鼻喷雾剂施用。
VII.方法
本文所述的方法包括例如进行保护以抵御或治疗受试者的病毒感染(例如，RSV感染)的方法及预防、稳定化或抑制病毒粒子的生长的方法。治疗受试者的病毒感染(例如，RSV感染)的方法包括向所述受试者施用本文所述的缀合物(例如，式(1)、(2)、(D-I)-(D-VII)或(M-I)-(M-VII)中任一者的缀合物)或其药物组合物。在一些实施方案中，所述病毒感染是由呼吸道合胞病毒(例如，RSV A或RSV B)引起。在一些实施方案中，所述病毒感染是由抗性病毒菌株引起。预防、稳定化或抑制病毒粒子的生长或预防病毒的复制及扩散的方法包括使所述病毒或易经受病毒生长的位点与本文所述的缀合物(例如，式(1)、(2)、(D-I)-(D-VII)或(M-I)-(M-VII)中任一者的缀合物)或其药物组合物接触。
此外，本文所述的方法也包括通过向受试者施用本文所述的缀合物(例如，式(1)、(2)、(D-I)-(D-VII)或(M-I)-(M-VII)中任一者的缀合物)来进行保护以抵御或治疗所述受试者的病毒感染的方法。在一些实施方案中，所述方法进一步包括向所述受试者施用抗病毒剂或抗病毒疫苗。
本文所述的方法也包括通过向受试者施用(1)本文所述的缀合物(例如，式(1)、(2)、(D-I)-(D-VII)或(M-I)-(M-VII)中任一者的缀合物)及(2)抗病毒剂或抗病毒疫苗来进行保护以抵御或治疗所述受试者的病毒感染的方法。本文所述的方法也包括通过使病毒或易经受病毒生长的位点与(1)本文所述的缀合物(例如，式(1)、(2)、(D-I)-(D-VII)或(M-I)-(M-VII)中任一者的缀合物)及(2)抗病毒剂或抗病毒疫苗接触来预防、稳定化或抑制病毒粒子的生长或预防病毒的复制或扩散的方法。
在一些实施方案中，首先施用本文所述的缀合物(例如，式(1)、(2)、(D-I)-(D-VII)或(M-I)-(M-VII)中任一者的缀合物)，随后单独施用抗病毒剂或抗病毒疫苗。在一些实施方案中，首先施用抗病毒剂或抗病毒疫苗，随后单独施用本文所述的缀合物。在一些实施方案中，实质上同时施用本文所述的缀合物及抗病毒剂或抗病毒疫苗(例如，在同一药物组合物中或在独立药物组合物中)。在一些实施方案中，首先施用本文所述的缀合物或抗病毒剂或抗病毒疫苗，随后实质上同时施用本文所述的缀合物及抗病毒剂或抗病毒疫苗(例如，在同一药物组合物中或在独立药物组合物中)。在一些实施方案中，首先实质上同时施用本文所述的缀合物及抗病毒剂或抗病毒疫苗(例如，在同一药物组合物中或在独立药物组合物中)，随后单独施用本文所述的缀合物或抗病毒剂或抗病毒疫苗。在一些实施方案中，当本文所述的缀合物(例如，式(1)、(2)、(D-I)-(D-VII)或(M-I)-(M-VII)中任一者的缀合物)及抗病毒剂或抗病毒疫苗合起来(例如，在同一或独立药物组合物中实质上同时，或在同一治疗方案中独立地)经施用时，所述缀合物及所述抗病毒剂或抗病毒疫苗中每一者对病毒复制的抑制可大于(例如，在较低浓度下出现)当在治疗方案中单独使用每一者时所述缀合物及所述抗病毒剂或抗病毒疫苗中每一者对病毒复制的抑制。
VIII.药物组合物及制剂
本文所述的缀合物可被配制于用于本文所述的方法的药物组合物中。在一些实施方案中，本文所述的缀合物可单独被配制于药物组合物中。在一些实施方案中，本文所述的缀合物可与抗病毒剂或抗病毒疫苗组合被配制于药物组合物中。在一些实施方案中，所述药物组合物包含本文所述的缀合物(例如，由式(1)、(2)、(D-I)-(D-VII)或(M-I)-(M-VII)中任一者描述的缀合物)及药学上可接受的载剂及赋形剂。
所述药物组合物中可接受的载剂及赋形剂在所采用的剂量及浓度下对接受者无毒。可接受的载剂及赋形剂可包括缓冲液，诸如磷酸盐、柠檬酸盐、HEPES及TAE；抗氧化剂，诸如抗坏血酸及蛋氨酸；防腐剂，诸如氯化六烃季铵、十八烷基二甲基苯甲基氯化铵、间苯二酚及苯扎氯铵；蛋白质，诸如人血清白蛋白、明胶、葡聚糖及免疫球蛋白；亲水性聚合物，诸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸残基，诸如甘氨酸、谷氨酰胺、组氨酸及赖氨酸；及碳水化合物，诸如葡萄糖、甘露糖、蔗糖及山梨糖醇。
其他赋形剂的实例包括但不限于抗粘剂、粘合剂、包衣、压缩助剂、崩解剂、染料、滑润剂、乳化剂、填充剂(稀释剂)、成膜剂或包衣、调味剂、芳香剂、助流剂(流动增强剂)、润滑剂、吸附剂、悬浮或分散剂或甜味剂。例示性赋形剂包括但不限于：丁基化羟基甲苯(BHT)、碳酸钙、磷酸钙(一氢)、硬脂酸钙、交联羧甲纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮、柠檬酸、交联聚维酮、半胱氨酸、乙基纤维素、明胶、羟基丙基纤维素、羟基丙基甲基纤维素、乳糖、硬脂酸镁、麦芽糖醇、甘露糖醇、蛋氨酸、甲基纤维素、对羟基苯甲酸甲酯、微晶纤维素、聚乙二醇、聚维酮、预胶化淀粉、对羟基苯甲酸丙酯、视黄醇棕榈酸酯、虫胶、二氧化硅、羧基甲基纤维素钠、柠檬酸钠、乙醇酸淀粉钠、山梨糖醇、淀粉(玉米)、硬脂酸、硬脂酸、蔗糖、滑石、二氧化钛、维他命A、维他命E、维他命C及木糖醇。
本文中的缀合物可具有可离子化基团以便能够呈药学上可接受的盐形式制备。这些盐可为涉及无机或有机酸的酸加成盐，或所述盐在本文中的缀合物的酸性形式的情况下可由无机或有机碱制备。所述缀合物经常地呈药学上可接受的盐形式经制备或使用，所述药学上可接受的盐呈药学上可接受的酸或碱的加成产物形式经制备。合适的药学上可接受的酸及碱在本领域中是熟知的，诸如盐酸、硫酸、氢溴酸、乙酸、乳酸、柠檬酸或酒石酸，用于形成酸加成盐，以及氢氧化钾、氢氧化钠、氢氧化铵、咖啡因、各种胺等，用于形成碱性盐。用于制备适当的盐的方法在本领域中是充分确立的。
代表性酸加成盐包括但不限于乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙烷磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢溴酸盐、盐酸盐、氢碘酸盐、2-羟基-乙烷磺酸盐、乳糖酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟碱酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、特戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐、十一烷酸盐及戊酸盐。代表性碱金属或碱土金属盐包括但不限于钠、锂、钾、钙及镁；以及无毒铵、季铵及胺阳离子，包括但不限于铵、四甲基铵、四乙基铵、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺及乙胺。
视施用途径及剂量而定，用于本文所述的方法中的本文中的缀合物或其药物组合物将被配制成合适药物组合物以允许容易递送。缀合物(例如，式(1)、(2)、(D-I)-(D-VII)或(M-I)-(M-VII)中任一者的缀合物)或其药物组合物可被配制以肌肉内、静脉内(例如，呈无菌溶液形式且在适用于静脉内使用的溶剂系统中)、皮内、动脉内、腹膜内、病变内、颅内、关节内、前列腺内、胸膜内、气管内、鼻内、玻璃体内、阴道内、直肠内、经表面、肿瘤内、经腹膜、皮下、结膜下、囊内、经粘膜、心包内、脐内、眼内、经口(例如，片剂、胶囊、囊片、囊形片或糖浆)、经表面(例如，呈乳膏、凝胶、洗剂或软膏形式)、经局部、通过吸入、通过注射或通过输注(例如，连续输注、直接地浸泡靶标细胞的局部灌注、置管、灌洗、呈乳膏或脂质组合物形式)经施用。视施用途径而定，本文中的缀合物或其药物组合物可呈例如片剂、胶囊、丸剂、粉剂、颗粒剂、混悬剂、乳剂、溶液剂、凝胶剂(包括水凝胶剂)、糊剂、软膏剂、乳膏剂、膏药、灌药、渗透递送器件、栓剂、灌肠剂、可注射剂、植入物、喷雾剂、适用于离子导入递送的制剂或气雾剂的形式。可以根据常规医药实践来配制组合物。
本文所述的缀合物可以本领域中已知的多种方式进行配制。关于用作人及动物受试者的治疗，本文所述的缀合物可被配制为药物或兽医学组合物。视待治疗的受试者(例如，人)、施用方式及所需治疗类型(例如，预防或疗法)而定，本文所述的缀合物以与这些参数一致的方式进行配制。所述技术的概述发现于Remington:The Science and Practiceof Pharmacy,第22版,Lippincott Williams&Wilkins(2012)；及Encyclopedia ofPharmaceutical Technology,第4版,J.Swarbrick及J.C.Boylan,Marcel Dekker,NewYork(2013)中，所述文献各自通过引用并入本文。
可以适用于全身施用或局部(topical)或局部(local)施用的方式制备制剂。全身性制剂包括设计用于注射(例如，肌肉内、静脉内或皮下注射)的那些制剂，或者可以制备成用于透皮、透粘膜或口服施用。所述制剂一般将包含稀释剂以及在一些情况下佐剂、缓冲液及防腐剂。所述缀合物也可呈脂质体组合物形式或呈微乳液形式经施用。全身性施用也可以包括相对无创的方法，诸如使用栓剂、透皮贴剂、透粘膜递送及鼻内施用。经口施用也适用于本文中的缀合物。如本领域所理解的，合适的形式包括糖浆、胶囊及片剂。
所述药物组合物可呈可注射制剂形式非经肠施用。用于注射的药物组合物可使用无菌溶液或任何药学上可接受的液体作为媒介物进行配制。制剂可被制备为适用于在注射之前溶解或悬浮于液体中的固体形式或制备为乳液。药学上可接受的媒介物包括但不限于无菌水、生理盐水及细胞培养基(例如，杜氏改良伊格尔培养基(Dulbecco’s ModifiedEagle Medium)(DMEM)、α改良伊格尔培养基(α-Modified Eagles Medium)(α-MEM)、F-12培养基)。所述可注射组合物也可含有一定量的无毒辅助物质，诸如湿润或乳化剂、pH缓冲剂，诸如乙酸钠及山梨醇酐单月桂酸酯。配制方法为本领域中已知的，参见例如Pharmaceutical Preformulation and Formulation,第2版,M.Gibson,Taylor&FrancisGroup,CRC Press(2009)。
所述药物组合物可呈口服制剂形式经制备。用于口服使用的制剂包括含有与无毒的药学上可接受的赋形剂混合的活性成分的片剂。这些赋形剂可以是例如惰性稀释剂或填充剂(例如，蔗糖、山梨糖醇、糖、甘露糖醇、微晶纤维素、包括马铃薯淀粉的淀粉、碳酸钙、氯化钠、乳糖、磷酸钙、硫酸钙或磷酸钠)；制粒剂及崩解剂(例如，包括微晶纤维素的纤维素衍生物、包括马铃薯淀粉的淀粉、交联羧甲纤维素钠、藻酸盐或藻酸)；粘合剂(例如，蔗糖、葡萄糖、山梨糖醇、阿拉伯胶、藻酸、藻酸钠、明胶、淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素、硅酸镁铝、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮或聚乙二醇)；以及润滑剂、助流剂及抗粘剂(例如，硬脂酸镁、硬脂酸锌、硬脂酸、二氧化硅、氢化植物油或滑石)。用于口服使用的制剂也可呈可咀嚼片剂形式，或呈硬明胶胶囊形式(其中活性成分与惰性固体稀释剂(例如，马铃薯淀粉、乳糖、微晶纤维素、碳酸钙、磷酸钙或高岭土)混合)，或呈软明胶胶囊形式(其中活性成分与水或油介质(例如，花生油、液体石蜡或橄榄油)混合)经提供。粉剂、颗粒剂及丸剂可以使用上文在片剂及胶囊下提到的成分以常规方式使用例如混合器、流化床设备或喷雾干燥设备来制备。
用于口服制剂的其他药学上可接受的赋形剂包括但不限于着色剂、调味剂、增塑剂、保湿剂及缓冲剂。用于口服使用的制剂也可呈可咀嚼片剂形式，或呈硬明胶胶囊形式(其中活性成分与惰性固体稀释剂(例如，马铃薯淀粉、乳糖、微晶纤维素、碳酸钙、磷酸钙或高岭土)混合)，或呈软明胶胶囊形式(其中活性成分与水或油介质(例如，花生油、液体石蜡或橄榄油)混合)经提供。粉剂、颗粒剂及丸剂可以使用上文在片剂及胶囊下提到的成分以常规方式使用例如混合器、流化床设备或喷雾干燥设备来制备。
本文所述的缀合物(例如，式(1)、(2)、(D-I)-(D-VII)或(M-I)-(M-VII)中任一者的缀合物)或其药物组合物的溶解或扩散受控释放可通过所述缀合物的片剂、胶囊、丸剂或颗粒剂制剂的适当涂覆，或通过将所述缀合物掺入至适当基质中来实现。受控释放包衣可以包含一种或多种以上提到的包衣物质及/或例如虫胶、蜂蜡、糖蜡、蓖麻蜡、巴西棕榈蜡、硬脂醇、单硬脂酸甘油酯、二硬脂酸甘油酯、棕榈硬脂酸甘油酯、乙基纤维素、丙烯酸树脂、dl-聚乳酸、乙酸丁酸纤维素、聚氯乙烯、聚乙酸乙烯酯、乙烯基吡咯烷酮、聚乙烯、聚甲基丙烯酸酯、甲基丙烯酸甲酯、2-羟基甲基丙烯酸酯、甲基丙烯酸酯水凝胶、1,3-丁二醇、乙二醇甲基丙烯酸酯及/或聚乙二醇。在受控释放基质制剂中，基质材料还可包括例如水合的甲基纤维素、巴西棕榈蜡及硬脂醇、卡波姆934(carbopol 934)、硅酮、三硬脂酸甘油酯、丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸甲酯、聚氯乙烯、聚乙烯及/或卤化碳氟化合物。
所述药物组合物可如所需呈单位剂型形成。包括于所述药物组合物中的活性组分(例如，本文所述的缀合物(例如，式(1)、(2)、(D-I)-(D-VII)或(M-I)-(M-VII)中任一者的缀合物))的量使得提供在指定范围内的合适剂量(例如，在0.01-100mg/kg体重范围内的剂量)。
IX.施用途径及剂量
在本文所述的任何方法中，本文中的缀合物可通过用于治疗或保护以抵御病毒感染(例如，RSV感染)，或用于预防、稳定化或抑制病毒(例如，RSV病毒)的增殖或扩散的任何适当途径经施用。本文所述的缀合物可与药学上可接受的稀释剂、载剂或赋形剂施用于人、家养宠物、家畜或其他动物。在一些实施方案中，施用包括经肌肉内、静脉内(例如，呈无菌溶液形式且在适用于静脉内使用的溶剂系统中)、皮内、动脉内、腹膜内、病变内、颅内、关节内、前列腺内、胸膜内、气管内、鼻内、玻璃体内、阴道内、直肠内、经表面、肿瘤内、经腹膜、皮下、结膜下、囊内、经粘膜、心包内、脐内、眼内、经口(例如，片剂、胶囊、囊片、囊形片或糖浆)、经表面(例如，呈乳膏、凝胶、洗剂或软膏形式)、经局部、通过吸入、通过注射或通过输注(例如，连续输注、直接地浸泡靶标细胞的局部灌注、置管、灌洗、呈乳膏或脂质组合物形式)施用本文所述的缀合物(例如，式(1)、(2)、(D-I)-(D-VII)或(M-I)-(M-VII)中任一者的缀合物)或组合物中任一者。在一些实施方案中，若除了本文所述的缀合物以外也施用抗病毒剂，则所述抗病毒剂或其药物组合物也可以本文所述的施用途径中任一者经施用。
本文所述的缀合物(例如，式(1)、(2)、(D-I)-(D-VII)或(M-I)-(M-VII)中任一者的缀合物)或其药物组合物的剂量取决于如下因素，包括施用途径、待治疗的疾病(例如，病毒感染的程度及/或病状)及物理特征，例如受试者的年龄、重量、一般健康状况。典型地，含于单一剂量内的所述缀合物或其药物组合物的量可为有效地预防、延迟或治疗病毒感染而不诱导显著毒性的量。药物组合物可包含介于0.01至500mg/kg范围内(例如，0.01、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、1、2、3、4、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、100、150、200、250、300、350、400、450或500mg/kg)且在一更特定实施方案中介于约0.1至约30mg/kg范围内且在一更特定实施方案中介于约1至约30mg/kg范围内的剂量的本文所述的缀合物。在一些实施方案中，当本文所述的缀合物(例如，式(1)、(2)、(D-I)-(D-VII)或(M-I)-(M-VII)中任一者的缀合物)及抗病毒剂或抗病毒疫苗组合(例如，在同一或独立药物组合物中实质上同时，或在同一治疗方案中独立地)经施用时，本文所述的缀合物的所需剂量可低于若所述缀合物单独用于治疗方案中所述缀合物的所需剂量。
本文所述的缀合物(例如，式(1)、(2)、(D-I)-(D-VII)或(M-I)-(M-VII)中任一者的缀合物)或其药物组合物可例如每天、每周、每个月、每半年、每年一或多次(例如，1至10次或更多次；1、2、3、4、5、6、7、8、9或10次)，或如医学上必要时经施用至有需要的受试者。剂量可以单一或多剂量方案经提供。施用之间的时间安排可在医学病状改善时减少，或在患者的健康状况下降时增加。施用的剂量及频率可由医师根据诸如感染程度及受试者的不同参数的常规因素来调适。
实施例
提出以下实施例以便向本领域一般技术者提供可如何使用、制备及评估本文所述的组合物及方法的描述，且旨在仅例示本发明而不旨在限制被本发明者视为其发明的发明的范围。
实施例1.制备Fc构建体
包含蛋白构建体的氨基酸(SEQ ID NO:1、3、5、7、9、12及14)的逆翻译通过固相合成来合成。寡核苷酸模板经克隆至克隆位点BamHI及XhoI(New England Biolabs,Ipswich,MA,USA)处的pcDNA3.1(Life Technologies,Carlsbad,CA,USA)且包括源于人白介素-2或人白蛋白的信号序列。所述pcDNA3.1质粒被转化至Top10大肠杆菌细胞(LifeTech)中。扩增DNA，萃取，且使用
Figure BDA0003629760100005041
HiPure Plasmid Filter Maxiprep试剂盒(LifeTech)纯化。所述质粒DNA使用EXPIFECTAMINETM293转染试剂盒(LifeTech)根据制造商的方案经递送至HEK-293细胞中。细胞经离心，过滤，且使用MabSelect Sure Resin(GE Healthcare,Chicago,IL,USA)纯化上清液。经纯化分子使用4-12％Bis Tris SDS PAGE凝胶通过将1-2μg每种分子装载至所述凝胶中且使用instant Blue染色进行染色而经分析。每种凝胶包括具有经指示分子量标准的分子量梯。还原及非还原泳道由“R”及“NR”表示。图5-11显示由分别具有SEQ ID NO:1、3、5、7、9、12及14的序列的Fc结构域单体形成的Fc结构域的非还原及还原SDS-PAGE。
实施例2.用于合成叠氮基Fc的一般程序
制备DMF/PBS中的PEG4-叠氮基NHS酯溶液(0.050M)：91.85mg PEG4-叠氮基NHS酯在0℃下溶解于0.500mL DMF中且在0℃下通过添加PBS 1x缓冲液经稀释至4.635mL。使用此溶液，通过调节此PEG4-叠氮基NHS酯PBS溶液的当量数来制备具有多种DAR值的其他PEG4-叠氮基Fc。
制备PEG4-叠氮基Fc：0.050M PEG4-叠氮基NHS酯PBS缓冲溶液(1.803mL，90.13μmol，9.5当量)经添加到h-IgG1 Fc(SEQ ID NO:4)溶液(552.2mg在33.75mL的pH 7.4PBS中，MW约58,200Da，9.487μmol)中且混合物在环境温度下轻柔地经振荡持续2小时。所述溶液通过使用六个离心浓缩机(30,000MWCO，15mL)经浓缩至约1.5mL的体积。粗混合物1:10稀释于PBS pH 7.4中，且再次经浓缩。重复此洗涤程序，共计三次。经浓缩Fc-PEG4-叠氮化物用pH7.4PBS 1x缓冲液稀释至33.75mL且准备用于点击缀合。经纯化材料使用NANODROPTM UV可见光光谱仪(使用基于h-IgG1(SEQ ID NO:4)的氨基酸序列计算的消光系数)经量化。产率是在纯化之后定量的。
编码本文所述的任何缀合物的Fc的核酸构建体可包含编码Fc的氨基酸序列的核酸序列，所述Fc的氨基酸序列包含Lys447(例如，C端赖氨酸残基)及/或N端鼠科动物IgG信号序列。在表达后，Fc的C端赖氨酸及(当存在时)N端鼠科动物IgG信号序列被蛋白水解切割，导致Fc具有缺少Lys447(例如，缺少C端赖氨酸残基)及(当存在于表达构建体中时)N端鼠科动物IgG信号序列的氨基酸序列。C端赖氨酸的存在与否不会改变Fc或对应缀合物的特性。
制备DMF/PBS中的0.05M叠氮基-乙酸酯NHS酯溶液：50.01mg的2-叠氮基乙酸NHS酯在0℃下溶解在DMF(2.445mL)中，且在0℃下用PBS(4.946mL)缓冲液稀释。使用此溶液，通过调节此叠氮基乙酸酯NHS酯溶液的当量数来制备具有多种DAR值的其他叠氮基Fc。
制备叠氮基乙酸酯Fc：0.05M叠氮基乙酸酯NHS酯PBS缓冲溶液(4.723mL，236.1μmol，12.6当量)经添加到h-IgG1 Fc溶液(552.2mg在47.92mL的pH 7.4PBS中，MW约53360Da，18.74μmol)中，接着混合物在环境温度下经振荡旋转持续2小时。所述溶液通过使用六个离心浓缩机(30,000MWCO，15mL)经浓缩至约1.5mL的体积。粗混合物1:10稀释于PBS pH 7.4中，且再次经浓缩。重复此洗涤程序，共计三次。经浓缩叠氮基乙酸酯Fc用pH 7.4PBS缓冲液稀释至47.92mL。此材料使用NANODROPTMUV可见光光谱仪使用基于h-IgG1(SEQ ID NO:4)的氨基酸序列计算的消光系数经定量。产率是在纯化之后定量的。
实施例3.合成重组小鼠血清白蛋白(MSA)-PEG4-叠氮化物
PEG4-叠氮基NHS酯(98％，81.7μmol，4.5当量，32.4mg在0.3mL的DMF中且用pH7.4PBS 1x缓冲溶液稀释至1.63mL)经添加到重组小鼠血清白蛋白(SEQ ID NO:71)溶液(1200mg在75.0mL的pH7.4PBS中，MW约66,000Da，18.2μmol)中且混合物在环境温度下轻柔地经振荡持续12小时。所述溶液使用离心浓缩机(30,000MWCO)经浓缩至约1.5mL的体积。粗混合物1:10稀释于PBS pH 7.4中，且再次经浓缩。重复此洗涤程序，共计三次。用此洗涤程序移除小分子试剂。经浓缩MSA-PEG4-叠氮化物用pH 7.4PBS 1x缓冲液稀释至75.0mL且准备用于点击缀合。经纯化材料使用NANODROPTM UV可见光光谱仪(使用基于h-IgG1的氨基酸序列计算的消光系数)经量化。产率是在纯化之后定量的。通过MALDI测定，DAR＝3.5。DAR值可类似于h-IgG1 Fc(实施例2)通过改变PEG4-叠氮基NHS酯的当量数经调节。
实施例4.合成Int-1
Figure BDA0003629760100005071
步骤a.
Figure BDA0003629760100005072
向吡唑并嘧啶中间体(3.32g，10mmol，描述于PCT公开WO2011163518A1)在无水THF(10ml)中的溶液中添加在二恶烷(10ml)中的4N HCl溶液。反应物变成凝胶状。反应物在室温下经搅拌持续1天，接着通过旋转蒸发经浓缩。残余物溶解在MeOH(20ml)中且在45℃下经加热持续30分钟以驱动反应完成。混合物接着再次经浓缩且在高真空下进一步经干燥。粗产物无需进一步纯化继续用于后续步骤。产量2.7g，定量产率。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝233。
步骤b.
Figure BDA0003629760100005073
向5-氯-2-甲烷磺酰胺基苯甲酸(499.4mg，2mmol)及HATU(798.4mg，2.1mmol)在无水DMF(4ml)中的溶液中添加DIPEA(520mg，4mmol)及步骤-a产物(537.6mg，2mmol)。反应混合物经搅拌持续30分钟，接着滴入水(50ml)中。白色产物经过滤，用水洗涤，且在高真空下进一步经干燥。粗产物无需进一步纯化继续用于后续步骤。产量738.7mg，产率82.8％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝464.0。
步骤c.
Figure BDA0003629760100005081
向步骤-b产物(104.6mg，0.226mmol)在无水DMF(1ml)中的溶液中添加DIPEA(65mg，0.5mmol)及BOP试剂(104.9mg，0.238mmol)。所得混合物在70℃下经加热持续10分钟，接着添加3-Boc-氨基甲基氮杂环丁烷(63mg，0.27mmol)。反应在70℃下继续1小时。产物通过RPLC(25％至75％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。产量124.8mg，产率87.3％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝6332.2。
步骤d.
Figure BDA0003629760100005082
向DCM(1.5ml)中的步骤-c产物添加TFA(0.5ml)。混合物经搅拌持续40分钟，接着经浓缩且通过RPLC(5％至60％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。产量113.2mg，产率89.3％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝532.2。
步骤e.
Figure BDA0003629760100005091
向步骤-d产物(111.3mg，0.173mmol)在无水THF(1ml)中的溶液中添加炔丙基-PEG4-溴化物(62mg，0.21mmol)及碳酸钠(20mg，0.19mmol)。所得混合物在50℃下经加热过夜。所得混合物接着通过HPLC(5％至60％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。产量23.3mg，产率15.7％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝746.2。
实施例5.合成Int-2
Figure BDA0003629760100005092
步骤a.
Figure BDA0003629760100005101
向起始材料(231.5mg，0.5mmol，在实施例4，Int-1中描述)在无水DMF(1ml)中的溶液中添加DIPEA(129.2mg，1mmol)及BOP试剂(243.3mg，0.55mmol)。所得混合物在70℃下经加热持续10分钟，接着添加(3R,4S)-(4-羟基-吡咯烷-3-基)-氨基甲酸叔丁酯(132mg，0.65mmol)。反应在70℃下继续1小时。反应物通过RPLC(25％至65％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。产量207.8mg，产率64.2％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝648.2。
步骤b.
Figure BDA0003629760100005102
经火焰干燥的反应烧瓶用氮气吹扫且馈入步骤-a产物(50mg，0.0772mmol)及无水DMF(1ml)。溶液在冰水浴中经冷却之后，用氢化钠(60％悬浮液在油中，12.5mg，0.31mmol)处理，随后用炔丙基-PEG4-溴化物(45.6mg，0.154mmol)处理。移除冰水浴且反应物经搅拌持续3小时。所得混合物接着通过RPLC(5％至80％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。产量14.2mg的次要所需产物，21.4％(通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝862.2)及23.4mg的主要副产物，38.5％(通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝788.2)。
步骤c.
Figure BDA0003629760100005111
步骤-b中的次要产物(14.2mg，0.0165mmol)溶解在TFA(0.5ml)中，且溶液经搅拌持续20分钟。所得混合物接着通过HPLC(5％至50％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。产量11.9mg，产率82.3％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝762.2。
实施例6.合成Int-3
Figure BDA0003629760100005112
来自实施例5的步骤-b的主要产物(Int-2)(23.4mg，0.0297mmol)溶解在MeOH(2ml)中，且溶液用水(0.5ml)中的30％NaOH及1ml的水处理。所得混合物在70℃下加热持续3小时。所得混合物接着经冷却至室温且用二恶烷(0.2ml)中的4N HCl溶液酸化。通过旋转蒸发浓缩之后，反应混合物通过制备型HPLC(5％至50％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。产量12.9mg，产率49.6％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝762.2。
实施例7.合成Int-4
Figure BDA0003629760100005121
步骤a.
Figure BDA0003629760100005122
向起始材料(231.5mg，0.5mmol，在实施例4，Int-1中描述)在无水DMF(1ml)中的溶液中添加DIPEA(129.2mg，1mmol)及BOP试剂(243.3mg，0.55mmol)。所得混合物在70℃下经加热持续10分钟，接着添加(3R,4S)-(4-羟基-吡咯烷-3-基)-氨基甲酸叔丁酯(132mg，0.65mmol)。反应在70℃下继续1小时。反应物直接地通过RPLC(50g，25％至65％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。产量264.4mg，产率81.7％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝648.2。
步骤b.
Figure BDA0003629760100005131
向步骤-a产物(104mg，0.162mmol)在无水DMF(1ml)中的溶液中添加炔丙基-PEG4-溴化物(95.6mg，0.324mmol)及碳酸钾(44.8mg，0.324mmol)。所得混合物在100℃下加热持续5小时。所得混合物接着通过制备型HPLC(5％至60％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。产量48.9mg，产率35.1％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝862.2。
步骤c.
Figure BDA0003629760100005132
步骤-b产物(48.9mg，0.0568mmol)溶解在TFA(0.5ml)中，且溶液在室温下经搅拌持续20分钟。所得混合物经浓缩且通过制备型HPLC(5％至50％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。产量28.5mg，产率57.3％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝762.2。
实施例8.合成Int-5
Figure BDA0003629760100005133
步骤a.
Figure BDA0003629760100005141
向六甘醇(5.6g，20mmol)在无水甲苯(60ml)中的溶液中添加THF中的叔丁醇钾(1.0M，22ml，22mmol)及4-氯丁醛缩二乙醇(3.6g，20mmol)。混合物在氮气气氛下在95℃-100℃下经搅拌过夜。冷却至室温之后，混合物经浓缩且通过柱色谱法在硅胶上用0％至30％乙酸乙酯及甲醇洗脱经纯化。产量6.1g，产率77％。通过LCMS发现的离子：M+H＝398.3。
步骤b.
Figure BDA0003629760100005142
在冰水浴下向来自先前步骤的产物(0.8g，2.0mmol)在无水DMF中的溶液中添加氢化钠(200mg，60％在油中，5mmol)及炔丙基溴(80重量％在甲苯中，0.45ml，4mmol)。反应物在氮气气氛下在室温下经搅拌持续4小时，接着混合物经浓缩且通过柱色谱法在硅胶上用0％至20％乙酸乙酯及甲醇洗脱经纯化。产量0.7g，产率80％。通过LCMS发现的离子：M+H＝437.3。
步骤c.
Figure BDA0003629760100005143
向来自先前步骤的产物(0.7g，1.6mmol)在10ml丙酮中的溶液中添加HCl溶液(3.0M，3.0ml，9.0mmol)。反应进程通过LCMS监测，且反应在4小时之后完成，且反应溶液经浓缩至干燥且无需进一步纯化即用于下一步骤。此步骤的产率为定量的。通过LCMS发现的离子：M/2+H＝391.3。
步骤d.
Figure BDA0003629760100005151
向来自先前步骤的产物(0.4g，1mmol)及普沙托韦(0.53g，1mmol)在DCM(10mL)中的溶液中添加乙酸(0.12g，2mmol)。所得溶液在室温下经搅拌持续1小时，接着在剧烈搅拌下用三乙酰氧基硼氢化钠(0.42g，2mmol)处理。此混合物经搅拌过夜，接着经浓缩且通过反相液体色谱法(RPLC)使用以5％至80％乙腈及水洗脱的Isco
Figure BDA0003629760100005152
液体色谱仪用0.1％TFA作为修饰剂经纯化。产物的产量700mg，产率77.5％。通过LCMS发现的离子：M/2+H＝906.4。
实施例9.合成缀合物4
制备点击试剂溶液：PBS缓冲溶液中的0.0050M CuSO4：10.0mg CuSO4溶解在12.53mL PBS中，接着采用6.00mL此CuSO4溶液且添加BTTAA(51.7mg，CAS#1334179-85-9)及抗坏血酸钠(297.2mg)以得到点击试剂溶液(0.0050M CuSO4、0.020M BTTAA及0.25M抗坏血酸钠)。此点击试剂溶液用于所有缀合。
叠氮基官能化Fc(50.0mg，3.056mL，0.859μmol，用PEG4-叠氮化物官能化的SEQ IDNO:18)的溶液经添加到含有炔衍生小分子(4.62mg，5.67μmol，Int-6，Fc上的每个叠氮基2当量)的15mL离心管中。在轻柔地振荡以溶解所有固体之后，所述混合物用点击试剂溶液(1.37mL的L-抗坏血酸钠，0.25M，344μmol，硫酸铜(II)0.0050M，6.87μmol，及BTTAA0.020M，27.5μmol)处理。所得混合物在环境温度下轻柔地经旋转持续6小时。其相继通过在蛋白A柱上的亲和力色谱法、尺寸排阻色谱法(参见一般缀合物纯化方案)经纯化。经纯化最终产物的Maldi TOF分析给出62021Da的平均质量(DAR＝3.9)。产量8.59mg，17％产率。
实施例10.合成缀合物
剩余缀合物的制备类似于实施例9缀合物4进行。基于DAR值调整TM的当量(Fc上每个叠氮基2当量)，且相应地使用点击试剂溶液。DAR值、分子量及产率列于下表中。
编码本文所述的任何缀合物的Fc的核酸构建体可包含编码Fc的氨基酸序列的核酸序列，所述Fc的氨基酸序列包含Lys447(例如，C端赖氨酸残基)及/或N端鼠科动物IgG信号序列(例如，SEQ ID NO:35)。在表达后，Fc的C端赖氨酸及(当存在时)N端鼠科动物IgG信号序列被蛋白水解切割，导致Fc具有缺少Lys447(例如，缺少C端赖氨酸残基)及(当存在于表达构建体中时)N端鼠科动物IgG信号序列的氨基酸序列。C端赖氨酸的存在与否不会改变Fc或对应缀合物的特性。
表3：缀合物及特性
Figure BDA0003629760100005161
Figure BDA0003629760100005171
实施例11.RSV细胞病变效应(CPE)测定中预缀合中间体(Int)及缀合物的活性
抗RSV化合物及缀合物的活性是按照本领域中标准方案使用基于细胞的体外测定来确定。简而言之，从10μM开始，每种测试物件(TA)的十个四倍连续稀释液一式两份制备，且用感染复数(MOI)为0.01的RSV(呼吸道合胞病毒菌株A2)孵育持续一小时。RSV-TA混合物接着经添加到接种在96孔板中的HEp-2细胞中且孵育持续一小时。在孵育后第四天，细胞用结晶紫染色且读取光密度以供使用XLfit剂量反应模型计算每个TA的50百分比有效浓度(EC50)。
在CPE测定的同时，还确定了数种测试物件的固有细胞毒性。简而言之，从10μM开始，每种TA的十个四倍连续稀释液一式三份制备以供在96孔培养板中的HEp-2细胞接种。在处理四天后使用CellTiter-Glo试剂盒测定细胞活力。使用XLfit剂量反应模型计算50％细胞毒性浓度(CC50)。
所述测定的结果总结在表4中。将测试物件与两种基准化合物利巴韦林及普沙托韦进行了比较。重要的是，所有测试物件均具有比FDA批准的药物利巴韦林更优的EC50值。两种化合物Int-7及Int-8显著比小组的其余化合物更有效，且接近普沙托韦的活性。同样重要的是，缀合物2本身在4倍TM内保留活性。最后，化合物Int-7及Int-9的细胞毒性(CC50)相对于它们的EC50值大于180倍。
表4：RSV CPE测定
Figure BDA0003629760100005181
实施例12.RSV F蛋白结合测定
Nunc MaxiSorp平底96孔板(12-565-136,Fisher Scientific)在轨道微孔板振荡器上(BT908,BT LabSystems)以500rpm在室温下用以1μg/mL在Seracare KPL包被溶液(50-674-4,Fisher Scientific)中的重组RSV F蛋白(11049-V08B,Sino Biological)包被持续1小时(100μL，0.1μg/孔)。板用洗涤缓冲液(PBS 0.05％Tween 20)洗涤(5x300μL)且在振荡下在室温下用洗涤缓冲液中的5％脱脂奶粉(9999S,Cell Signaling Technology)封闭持续1小时。移除封闭剂，且孔在室温下在振荡下用以2μM开始的样品稀释剂(2.5％脱脂奶在PBS中，0.025％Tween 20)中的RVC的3倍连续稀释液孵育持续2小时。5x300μL洗涤之后，板在室温下在振荡下用在样品稀释剂中按1:1,000稀释的HRP缀合的驴抗人IgG Fc F(ab’)2(709-036-098,Jackson ImmunoResearch)二抗孵育持续1小时。接着洗涤(8x300μL)板且在室温下用TMB底物(BD555214,Fisher Scientific)显色3-5分钟。用1NH2SO4终止反应，且使用EnSpire多模式读板器(PerkinElmer)在450nm处读取吸光度。使用结合曲线的非线性回归分析(S型，4PL)以GraphPad Prism版本8计算半数最大有效浓度(EC50)。在每次结合测定中，未缀合的Fc分子作为阴性对照运行。结果在图12及表5中提供。
表5.RSV F蛋白结合EC50(nM)
Figure BDA0003629760100005191
实施例13.用于合成叠氮基Fc的一般程序
制备DMF/PBS中的PEG4-叠氮基NHS酯溶液(0.050M)：16.75mg的PEG4-叠氮基NHS酯在0℃下溶解于0.100mL DMF中且在0℃下通过添加PBS 1x缓冲液经稀释至0.837mL。使用此溶液，通过调节此PEG4-叠氮基NHS酯PBS溶液的当量数来制备具有多种DAR值的其他PEG4-叠氮基Fc。
预处理h-lgG1 Fc，SEQ ID NO:48(107.2mg在8.800mL的pH 7.4PBS中，MW约57891Da，1.852μmol)：所述Fc溶液经转移至四个离心浓缩机(30,000MWCO，15mL)中且用PBSx1缓冲液稀释至15mL且经浓缩至约1.5mL的体积。残余物1:10稀释于PBS pH 7.4中，且再次经浓缩。重复此洗涤程序，共计四次，随后稀释至8.80mL。
制备PEG4-叠氮基Fc：0.050M PEG4-叠氮基NHS酯PBS缓冲溶液(0.593mL，29.6μmol，16当量)经添加到以上的h-IgG1 Fc(SEQ ID NO:48)溶液中且混合物在环境温度下经振荡旋转持续2小时。所述溶液通过使用四个离心浓缩机(30,000MWCO，15mL)经浓缩至约1.5mL的体积。粗混合物1:10稀释于PBS pH 7.4中，且再次经浓缩。重复此洗涤程序，共计三次。经浓缩Fc-PEG4-叠氮化物用pH 7.4PBS缓冲液稀释至8.80mL且准备用于点击缀合。经纯化材料使用NANODROPTMUV可见光光谱仪(使用基于h-IgG1的氨基酸序列计算的消光系数)经量化。产率是在纯化之后定量的。
实施例14.合成缀合物6
叠氮基官能化Fc(75mg，7.5mL，1.406umol，实施例13；用PEG4-叠氮化物官能化的SEQ ID NO:35)的溶液经添加到含有炔官能化小分子(12.2mg，13.49umol，描述在实施例8，Int-5中)的40mL离心管中。轻柔地搅拌以溶解所有固体之后，所述溶液经添加到L-抗坏血酸钠盐(22.2mg，112.4umol)、硫酸铜(II)(4.3mg，27.0umol)及THPTA(46.9mg，108.0umol)在PBS 7.4缓冲液(15.5mL，1X)中的溶液中。所得溶液轻柔地经旋转过夜。其相继通过在蛋白A柱上的亲和力色谱法、尺寸排阻色谱法(参见缀合物纯化方案)经纯化。经纯化最终产物的Maldi TOF分析给出60,658Da的平均质量(DAR＝6.1)。产量15.0mg，25％产率。
编码缀合物6的Fc的核酸构建体包含编码SEQ ID NO:35的氨基酸序列的核酸，所述Fc包含C端赖氨酸残基及N端鼠科动物IgG信号序列。在表达后，缀合物6的Fc的C端赖氨酸及N端鼠科动物IgG信号序列被蛋白水解切割，导致Fc具有缺少Lys447(例如，缺少C端赖氨酸残基)及N端鼠科动物IgG信号序列的序列。C端赖氨酸的存在与否不会改变Fc或对应缀合物的特性。
实施例15.合成Int-8
Figure BDA0003629760100005211
普沙托韦(100mg，0.212mmol)、炔丙基-PEG8-溴化物(169mg，0.318mmol)及N,N-二异丙基乙胺(74uL，0.424mmol)的搅拌溶液经加热至70℃持续12小时。添加额外的炔丙基-PEG8-溴化物(169mg，0.318mmol)及N,N-二异丙基乙胺(148uL，0.848mmol)且在50℃下继续加热持续24小时。通过真空技术移除所有挥发物。残余物通过HPLC(0％至90％甲醇及水)经纯化。产量109mg，产率50％。通过LCMS发现的离子：[(M+H)]+＝922.2。
实施例16.合成缀合物3a
叠氮基官能化Fc(100mg，10mL，1.790umol，实施例13；用PEG4-叠氮化物官能化的SEQ ID NO:35)的溶液经添加到含有炔官能化小分子(11.7mg，11.24umol，描述在实施例15，Int-8中)的40mL离心管中。轻柔地搅拌以溶解所有固体之后，所述溶液用L-抗坏血酸钠盐(37.1mg，187.4umol)、硫酸铜(II)(4.0mg，25.0umol)及BTTAA(38.73mg，89.95umol)在PBS 7.4缓冲液(15.0mL)中的溶液处理。所得混合物轻柔地经旋转过夜。其相继通过在蛋白A柱上的亲和力色谱法、尺寸排阻色谱法(参见缀合物纯化方案)经纯化。经纯化最终产物的Maldi TOF分析给出58,395Da的平均质量(DAR＝4.1)。产量25.5mg，51％产率。
编码缀合物3a的Fc的核酸构建体包含编码SEQ ID NO:35的氨基酸序列的核酸，所述Fc包含C端赖氨酸残基及N端鼠科动物IgG信号序列。在表达后，缀合物3a的Fc的C端赖氨酸及N端鼠科动物IgG信号序列被蛋白水解切割，导致Fc具有缺少Lys447(例如，缺少C端赖氨酸残基)及N端鼠科动物IgG信号序列的序列。C端赖氨酸的存在与否不会改变Fc或对应缀合物的特性。
实施例17.合成缀合物3b
叠氮基官能化Fc(75mg，7.5mL，1.406umol，实施例13；用PEG4-叠氮化物官能化的SEQ ID NO:35)的溶液经添加到含有炔官能化小分子(17.5mg，16.87umol，描述在实施例15，Int-8中)的40mL离心管中。轻柔地搅拌以溶解所有固体之后，所述溶液经添加到L-抗坏血酸钠盐(27.8mg，140.6umol)、硫酸铜(II)(5.4mg，33.7umol)及THPTA(58.6mg，134.9umol)在PBS 7.4缓冲液(15.5mL，1X)中的溶液中。所得溶液轻柔地经旋转过夜。其相继通过在蛋白A柱上的亲和力色谱法、尺寸排阻色谱法(参见缀合物纯化方案)经纯化。经纯化最终产物的Maldi TOF分析给出62,279Da的平均质量(DAR＝7.4)。产量30.6mg，41％产率。
实施例18.合成缀合物5
叠氮基官能化Fc(75mg，7.5mL，1.406umol，实施例2；用PEG4-叠氮基乙酸酯官能化的SEQ ID NO:35)的溶液经添加到含有炔官能化小分子(17.5mg，16.87umol，描述在实施例15，Int-8中)的40mL离心管中。轻柔地搅拌以溶解所有固体之后，所述溶液经添加到L-抗坏血酸钠盐(27.8mg，140.6umol)、硫酸铜(II)(5.4mg，33.7umol)及THPTA(58.6mg，134.9umol)在PBS 7.4缓冲液(15.5mL，1X)中的溶液中。所得溶液轻柔地经旋转过夜。其相继通过在蛋白A柱上的亲和力色谱法、尺寸排阻色谱法(参见缀合物纯化方案)经纯化。经纯化最终产物的Maldi TOF分析给出58,660Da的平均质量(DAR＝5.2)。产量29.7mg，40％产率。
编码缀合物3b的Fc的核酸构建体包含编码SEQ ID NO:35的氨基酸序列的核酸，所述Fc包含C端赖氨酸残基及N端鼠科动物IgG信号序列。在表达后，缀合物3b的Fc的C端赖氨酸及N端鼠科动物IgG信号序列被蛋白水解切割，导致Fc具有缺少Lys447(例如，缺少C端赖氨酸残基)及N端鼠科动物IgG信号序列的序列。C端赖氨酸的存在与否不会改变Fc或对应缀合物的特性。
实施例19.合成Int-10
Figure BDA0003629760100005231
步骤a.
Figure BDA0003629760100005232
Cbz-哌嗪(3.5g，15.9mmol)、3-溴-1-丙醇(2.7g，19.1mmol)及三乙胺(1.9g，19.1mmol)在室温下在DMF(15mL)中经搅拌持续12小时。通过旋转蒸发仪移除一半溶剂。添加DI水且混合物用乙酸乙酯(3x30mL)萃取。经合并的有机萃取物用盐水洗涤且经硫酸钠干燥。移除溶剂且残余物通过硅胶色谱法(0％至80％乙酸乙酯及己烷)经纯化，提供呈浓稠澄清油状物的产物。产率87％。LC/MS[M+H]+＝279.2。
步骤b.
Figure BDA0003629760100005241
来自步骤a的中间体(4g，14.4mmol)、对甲苯磺酰氯(3.6g，18.7mmol)及三乙胺(2.6g，25.9mmol)在室温下在DCM(50mL)中经搅拌持续12小时。添加DI水且混合物用DCM(3x30mL)萃取。经合并的有机萃取物用盐水洗涤且经硫酸钠干燥。移除溶剂且残余物通过硅胶色谱法(0％至10％甲醇在DCM中)经纯化，提供呈白色固体状的产物。产率67％。LC/MS[M+H]+＝433.2。
步骤c.
Figure BDA0003629760100005242
来自步骤b的中间体(0.35g，0.81mmol)、普沙托韦TFA盐(0.26g，0.41mmol)及三乙胺(0.16g，1.6mmol)在室温至80℃下在DMF(3mL)中经搅拌持续45分钟。通过LC/MS观察到的产物，[M+H]+＝792.2。混合物经冷却至室温且添加Boc酸酐(57mg，0.81mmol)。混合物在室温下经搅拌持续1小时，接着移除溶剂，且残余物通过反相Isco
Figure BDA0003629760100005243
色谱法(20％至95％乙腈在DI水中，0.1％TFA，30分钟梯度)经纯化。汇集纯洗脱份且冻干以提供呈淡粉色固体状的产物。产率81％。LC/MS[M+H]+＝892.2。
步骤d.
Figure BDA0003629760100005251
来自步骤c的中间体(0.21g，0.21mmol)在5％Pd/C(50mg)的存在下在1个大气压的氢气下在甲醇中经搅拌持续30分钟。混合物经由硅藻土过滤，经浓缩且在高真空下经干燥。产率＝99％。LC/MS[M+H]+＝758.2。
步骤e.
Figure BDA0003629760100005252
来自此实施例的步骤d的中间体溶解在DMF(2mL)中，与炔丙基-PEG4-溴化物(91mg，0.28mmol)及N,N-二异丙基乙胺(71mg，0.55mmol)混合，接着在80℃下经搅拌持续3小时。混合物经冷却且直接地通过反相Isco
Figure BDA0003629760100005253
色谱法(20％至95％乙腈在DI水中，0.1％TFA，30分钟梯度)经纯化。汇集纯洗脱份且冻干以提供呈淡粉色固体状的产物。LC/MS[M+H]+＝972.2。
此boc保护的中间体在室温下在TFA(3mL)中经搅拌持续30分钟。通过旋转蒸发移除溶剂且中间体通过反相HPLC色谱法ISCO ACQ半制备型(20％-95％乙腈在DI水中，0.1％TFA，30分钟梯度)经纯化。汇集纯洗脱份且冻干以提供呈淡粉色固体状的产物。产率41％。LC/MS[M+H]+＝872.2。
实施例20.合成Int-11
Figure BDA0003629760100005261
步骤a.合成1-苯甲基螺[哌啶-4,3'-吡咯并[2,3-c]吡啶]-2'(1'H)-酮的
Figure BDA0003629760100005262
盐酸盐1,3-二氢-2H-吡咯并[2,3-c]吡啶-2-酮(1.34g，10mmol，1eq.)在-78℃下经添加到THF(40ml，40mmol，4eq.)中的1M LiHMDS溶液中。在升温至0℃之后，添加N-苯甲基-2-氯-N-(2-氯乙基)乙-I-胺盐酸盐(2.3g，10mmol，1eq.)。所述混合物经加温至20℃，且接着经回流过夜。在冷却至室温之后，所述反应混合物用饱和氯化铵溶液(20ml)淬灭，且用乙酸乙酯(2x50ml)萃取。经合并的有机层用盐水(30ml)洗涤且经无水硫酸钠干燥。在过滤后，所得滤液经浓缩且通过反相液体色谱法(RPLC)使用以2％至50％乙腈及水洗脱的Isco
Figure BDA0003629760100005271
液体色谱仪使用0.1％TFA作为修饰剂经纯化。产物的产量0.645g，产率22％。通过LCMS发现的离子：M+H＝294.2。
步骤b.合成2'-氧代-1',2'-二氢-1H-螺[哌啶-4,3'-吡咯并[2,3-c]吡啶]-1-羧酸叔丁酯
Figure BDA0003629760100005272
来自步骤a的化合物(0.6g，2mmol)在5％钯炭(0.2g)的情况下溶解在甲醇(10ml)中，且接着在氢气气氛下在室温下经搅拌过夜。在反应完成之后通过过滤移除钯，如由LCMS所示。向滤液中添加饱和NaHCO3溶液(5ml)及Boc酸酐(0.44g，2.1mmol)。所得混合物在室温下经搅拌持续2小时。所述反应溶液经浓缩，且通过反相液体色谱法(RPLC)使用以2％至50％乙腈及水洗脱的Isco
Figure BDA0003629760100005274
液体色谱仪使用0.1％TFA作为修饰剂经纯化。两个步骤的所需产物的产量为0.55g，产率为90％。通过LCMS发现的离子：M+H＝304.2。
步骤c.合成4-氯-N-(4-氟丁基)-2-硝基苯胺
Figure BDA0003629760100005273
向5-氯-2-氟-硝基苯(1.40g，7.8mmol)在异丙醇(30ml)中的溶液中添加4-氟丁-1-胺HCl盐(1.0g，7.8mmol)及三乙胺(1.4ml，10mmol)。所得溶液在80℃下经加热持续4小时。反应进程由LCMS监测。在完成后，反应物经浓缩至干燥，且所得残余物用乙酸乙酯(100ml)及盐水(50ml)分配。有机层经分离且用盐水(20ml)洗涤，且经无水硫酸钠干燥。在过滤后，所得滤液经浓缩且无需进一步纯化即用于下一步骤。产量1.35g，产率69.3％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝247.0。
步骤d.合成4-氯-N-1-(4-氟丁基)苯-1,2-二胺
Figure BDA0003629760100005281
向来自先前步骤的产物(1.3g，5.3mmol)在乙醇(30ml)中的溶液中添加饱和铵溶液(12ml)。所得溶液经加热至60℃且添加锌粉(3.3g，5mmol)。所述悬浮液在60℃下经搅拌持续2小时，且使所述悬浮液冷却至室温且经由硅藻土垫使用乙酸乙酯洗涤(3x30mL)经过滤。所述有机层经分离且用盐水(50mL)洗涤，接着经无水硫酸钠干燥。在过滤后，所得滤液经浓缩且无需进一步纯化即用于下一步骤。产量0.95g，产率83.0％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝217.1。
步骤e.合成5-氯-2-(氯甲基)-1-(4-氟丁基)-1H-苯并咪唑
Figure BDA0003629760100005282
向来自先前步骤的产物(0.5g，2.3mmol)在二氯甲烷(10ml)中的溶液中添加2-氯-1,1,1-三甲氧基乙烷(5ml)及对甲苯磺酸(0.1g，0.05mml)。所得混合物在室温下经搅拌过夜。所得溶液经浓缩且通过硅胶色谱法(洗脱液：10％-50％乙酸乙酯在己烷中)经纯化，提供呈白色粉末状的产物。产量0.43g，产率68％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝275.1。
步骤f.合成1-{[5-氯-1-(4-氟丁基)-1H-苯并咪唑-2-基]甲基}-2-氧代-1,2-二氢-1'H-螺[吲哚-3,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯
Figure BDA0003629760100005291
在冰水浴的冷却下向来自先前步骤的产物(0.21g，0.8mmol，1.2eq.)及来自步骤b的产物(0.2g，0.65mmol，1eq.)的溶液中添加无水DMF(5ml)中的氢化钠(0.2g，4mmol，60％在油中)。所得混合物经加温至室温且经搅拌持续2小时，且用乙酸淬灭，经浓缩且通过反相液体色谱法(RPLC)使用以2％至100％乙腈及水洗脱的Isco
Figure BDA0003629760100005292
液体色谱仪使用0.1％TFA作为修饰剂经纯化。产量0.33g，产率91％。通过LCMS发现的离子：M+H＝542.2。
步骤g.合成1-{[5-氯-1-(4-氟丁基)-1H-苯并咪唑-2-基]甲基}螺[吲哚-3,4'-哌啶]-2(1H)-酮
Figure BDA0003629760100005293
步骤-f产物(0.3g，0.65mmol)在室温下溶解于2ml TFA持续0.5小时，接着经浓缩至干燥且无需任何进一步纯化即用于下一步骤。此步骤的产率为定量的。通过LCMS发现的离子：M/2+H＝442.2。
步骤h.合成Int-11
Figure BDA0003629760100005301
在冰水浴下向来自先前步骤的产物(0.05g，0.11mmol，1.0eq.)及4-硝基苯基炔丙基-PEG4碳酸酯(0.05g，0.14mmol，1.2eq.)在无水DMF(3ml)中的溶液中添加三乙胺(0.1ml，0.7mmol)。所得混合物经加温至室温且经搅拌持续2小时。当如通过LCMS确定反应完成时，所述反应物经浓缩且通过反相液体色谱法(RPLC)使用以2％至100％乙腈及水洗脱的Isco
Figure BDA0003629760100005303
液体色谱仪使用0.1％TFA作为修饰剂经纯化。产量0.031g，产率42％。通过LCMS发现的离子：M+H＝656.3。
实施例21.合成Int-12
Figure BDA0003629760100005302
在冰水浴下向1-{[5-氯-1-(4-氟丁基)-1H-苯并咪唑-2-基]甲基}螺[吲哚-3,4'-哌啶]-2(1H)-酮(0.05g，0.11mmol，1.0eq.，制备于实施例12步骤g中，Int-11)及4-硝基苯基炔丙基-PEG4氨基甲酸酯(0.05g，0.14mmol，1.2eq.)在无水DMF(3ml)中的溶液中添加三乙胺(0.1ml，0.7mmol)。所得混合物经加温至室温且经搅拌持续2小时，经浓缩且通过反相液体色谱法(RPLC)使用以2％至100％乙腈及水洗脱的Isco
Figure BDA0003629760100005311
液体色谱仪使用TFA作为修饰剂经纯化。产量0.033g，产率44％。通过LCMS发现的离子：M+H＝699.3。
实施例22.合成Int-23
Figure BDA0003629760100005312
步骤a.
Figure BDA0003629760100005313
氯甲酸苯甲酯经滴加到磺基丙氨酸及三乙胺在ACN/饱和碳酸氢钠水溶液(1/1)中的冷却至0℃的搅拌混合物中。反应物在0℃下经搅拌持续40分钟且在旋转蒸发仪上移除大部分溶剂。粗材料通过反相Isco
Figure BDA0003629760100005314
HPLC色谱法(5％至80％ACN在DI水中，0.1％TFA，30分钟梯度)经纯化。汇集纯洗脱份且浓缩以提供呈澄清粘性油状物的粗产物。产率58％。通过LC/MS发现的离子，[M-H]-＝302.2。
步骤b.
Figure BDA0003629760100005315
HATU(156mg，0.41mmol)经添加到此实施例的步骤a中描述的中间体(125mg，0.41mmol)、实施例19的步骤d中描述的中间体Int-10(240mg，0.32mmol)及三乙胺(127mg，1.27mmol)在DMF(4mL)中的搅拌混合物中。反应物在室温下经搅拌持续4小时。在旋转蒸发仪上减半溶剂且残余物通过反相色谱法使用Isco
Figure BDA0003629760100005323
(5％-80％ACN在DI水中，0.1％TFA，30分钟梯度)经纯化。汇集纯洗脱份且浓缩以提供呈油状物的产物，LC/MS([M/2)＝H]+＝522.2。
此中间体在5％Pd/C(30mg)的存在下在1个大气压的氢气下在甲醇(15ml)中经搅拌持续2小时。混合物经由硅藻土过滤且经浓缩以提供呈粘性油状物的产物。产率43％，2个步骤。通过LC/MS发现的离子，[M+H]+＝909.2。
步骤c.
Figure BDA0003629760100005321
HATU(92mg，0.24mmol)经添加到此实施例的步骤b.中描述的中间体(170mg，0.19mmol)、炔丙基-peg4-羧酸(63mg，0.24mmol)及三乙胺(94mg，0.93mmol)在DMF(3mL)中的搅拌混合物中。反应物在环境温度下经搅拌持续4小时。在旋转蒸发仪上减半溶剂且残余物通过反相色谱法Isco
Figure BDA0003629760100005322
HPLC(10％至90％乙腈在DI水中，0.1％TFA，30分钟梯度)经纯化。通过LC/MS发现的离子，[(M/2)+H]+＝576.2。
boc保护的中间体在DCM/TFA的1/1混合物(5mL)中经搅拌持续45分钟。通过旋转蒸发仪移除溶剂且残余物通过在ISCO ACCQ半制备型上的反相HPLC(5％至75％CAN在DI水中，0.1％TFA，30分钟梯度)经纯化。汇集纯洗脱份且冻干以提供呈灰白色固体状的产物。产率48％，2个步骤。通过LC/MS发现的离子，[(M/2)+H]+＝526.2。
实施例23.合成Int-24
Figure BDA0003629760100005331
步骤a.
Figure BDA0003629760100005332
CBZ-哌嗪(4g，18.2mmol)、n-溴-丁醇(4.2g，27.2mmol)及三乙胺(3.7g，36.3mmol)在60℃下在DMF(15mL)中经搅拌持续12小时。通过旋转蒸发仪移除一半溶剂。添加DI水且用乙酸乙酯(3x，30mL)萃取混合物。经合并的有机萃取物用盐水洗涤且经硫酸钠干燥。移除溶剂且残余物通过硅胶色谱法(0％至5％甲醇在DCM中)经纯化，提供呈浓稠澄清油状物的产物。产率77％。LC/MS[M+H]+＝293.2。
步骤b.
Figure BDA0003629760100005333
乙二酰氯在氮气的气氛下经添加到冷却至-78℃(干冰/丙酮浴)的DCM(15mL)中。DMSO(801mg，10.26mmol，在5m的DCM中)在5分钟的时段内通过注射器经滴加到乙二酰氯溶液中。混合物在-78℃下经搅拌持续10分钟，在此时间点，此实施例的步骤a中描述的中间体醇(1.5g，5.13mmol，在5mL DCM中)在5分钟的时段内通过注射器经滴加。所述混合物在-78℃下经搅拌持续30分钟。三乙胺(2.6g，25.7mmol，在10mL DCM中)在10分钟时段内通过注射器经滴加。反应物在-78℃下额外经搅拌持续10分钟，且接着在1小时的时段内逐渐加温至环境温度。混合物用DI水稀释且萃取到DCM(3x30mL)中。经合并的有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤且浓缩以提供呈粘性油状物的产物，其无需进一步纯化即用于后续操作。产率91％。LC/MS[M+H]+＝291.2。
步骤c.
Figure BDA0003629760100005341
来自此实施例的步骤b的中间体(327mg，0.75mmol)、普沙托韦TFA盐(400mg，0.75mmol)、三乙胺(151mg，1.5mmol)及三乙酰氧基硼氢化钠(397mg，1.88mmol)在室温下在甲醇(25mL)中经搅拌持续1小时。添加冰乙酸(约1mL)且通过旋转蒸发仪移除溶剂。残余物通过Isco
Figure BDA0003629760100005342
反相色谱法(5％至95％ACN在DI水中，0.1％TFA)经纯化。通过旋转蒸发仪移除溶剂。通过LC/MS发现的离子，[M+H]+＝806.4。
此中间体溶解在甲醇(20mL)、三乙胺(81mg，0.81mmol)及boc酸酐(328mg，0.81mmol)中，接着在室温下经搅拌持续1小时。移除溶剂，且接着所得残余物通过反相色谱法Isco
Figure BDA0003629760100005343
(20％至95％乙腈在DI水中，0.1％TFA，30分钟梯度)经纯化。汇集纯洗脱份且冻干以提供呈白色固体状的所需产物。产量490mg，产率72％，2个步骤。通过LC/MS发现的离子，[M+H]+＝906.4。
步骤d.
Figure BDA0003629760100005351
来自此实施例的步骤c的中间体(490mg，0.54mmol)在5％Pd/C(90mg)的存在下在1个大气压的氢气下在甲醇中经搅拌持续30分钟。混合物经由硅藻土过滤，经浓缩且在高真空下经干燥。粗物质产量391mg，产率94％。通过LC/MS发现的离子，[M+H]+＝772.2。
步骤e.
Figure BDA0003629760100005352
来自步骤d的中间体(282mg，0.37mmol)溶解在DMF(2mL)中，接着用炔丙基-peg4-溴化物(140mg，0.47mmol)及N,N-二异丙基乙胺(188mg，1.5mmol)处理，且在80℃下经搅拌持续3小时。混合物经冷却且直接地通过反相Isco
Figure BDA0003629760100005353
色谱法(10％至95％乙腈在DI水中，0.1％TFA，30分钟梯度)经纯化。汇集纯洗脱份且浓缩。通过LC/MS发现的离子，[(M/2)+H]+＝493.8。
boc保护的中间体在室温下在TFA(3mL)中经搅拌持续30分钟。通过旋转蒸发仪移除溶剂且残余物通过反相HPLC色谱法ISCO ACCQ半制备型(20％-95％乙腈在DI水中，0.1％TFA，30分钟梯度)经纯化。汇集纯洗脱份且冻干以提供呈灰白色固体状的所需产物。产量137mg，产率42％，2个步骤。通过LC/MS发现的离子，[M+H]+＝886.4。
实施例24.合成Int-25
Figure BDA0003629760100005361
步骤a.
Figure BDA0003629760100005362
向Fmoc-N-(叔丁氧羰基甲基)-甘氨酸(336mg，0.818mmol)、炔丙基-PEG8-胺(333mg，0.818mmol)及DIPEA(356uL，2.045mmol)在DMF(2.0mL)及DCM(2.0mL)中的0℃搅拌溶液中添加HATU(317mg，0.834mmol)。温度升至环境温度且继续搅拌直至通过LCMS确定反应完成。通过旋转蒸发移除所有挥发物。残余物通过RP-C18柱使用以0％至100％水及甲醇洗脱的Isco
Figure BDA0003629760100005363
液体色谱法经纯化。通过旋转蒸发来蒸发含有所需产物的洗脱份，提供720mg的含有所需产物的材料，但纯度不高(通过LCMS发现的主要观察离子：[(M+H)]+＝801.2)。此材料吸收在DMF(10mL)中的5％哌啶中。通过旋转蒸发移除所有挥发物。残余物通过RP-C18柱使用以0％至100％水及甲醇洗脱的Isco
Figure BDA0003629760100005371
液体色谱法经纯化。产量0.392g，产率83％。通过LCMS发现的离子：[(M+H)]+＝579.2。
步骤b.
Figure BDA0003629760100005372
向来自步骤a的产物(250mg，0.432mmol)、5,5-二甲氧基戊酸(77mg，0.475mmol)及DIPEA(226uL，1.296mmol)在DMF(3.0mL)及DCM(0.5mL)中的0℃搅拌溶液中添加HATU(168mg，0.440mmol)。温度升至环境温度且继续搅拌过夜。通过旋转蒸发移除所有挥发物。残余物通过RP-C18柱使用以0％至100％水及甲醇洗脱的Isco
Figure BDA0003629760100005373
液体色谱法经纯化。产量0.294g，产率94％。通过LCMS发现的离子：[(M+H)-MeOH]+＝692.1。
步骤c.
Figure BDA0003629760100005374
来自步骤b的产物(294mg，0.407mmol)溶解在乙酸(3.0mL)及水(1.5mL)中，且经搅拌直至通过分析型HPLC观察到完全转化为所需的醛。蒸发所有挥发物。所述醛无需进一步纯化即用于下一步骤。产量0.275g，定量。通过LCMS发现的离子：[(M+H)]+＝677.2。
向醛(64mg，0.094mmol)及普沙托韦(50mg，0.094mmol)在1,2-二氯乙烷(3.0mL)中的搅拌溶液中添加三乙酰氧基硼氢化钠(30mg，0.141mmol)。12小时之后的LC-MS分析显示所需产物的正确质量，([(M+2H)/2]+＝596.8)。通过旋转蒸发移除所有挥发物。获得的残余物吸收在TFA(2.0mL)中，且继续搅拌直至通过HPLC观察到叔丁酯的完全脱保护。通过旋转蒸发移除所有挥发物。残余物通过RP-C18柱使用以0％至100％水及甲醇洗脱的Isco
Figure BDA0003629760100005381
液体色谱法经纯化。产量115mg，产率86％。通过LCMS发现的离子：[(M+2H)/2]+＝568.8。
实施例25.合成缀合物7
叠氮基官能化Fc(100mg，10mL，1.874umol，实施例13；用PEG4-叠氮化物官能化的SEQ ID NO:35)的溶液经添加到含有炔官能化小分子(28.1mg，22.49umol，描述在实施例24，Int-25中)的40mL离心管中。轻柔地搅拌以溶解所有固体之后，所述溶液经添加到L-抗坏血酸钠盐(37.1mg，187.4umol)、硫酸铜(II)(7.2mg，45.0umol)及THPTA(78.2mg，179.9umol)在PBS 7.4缓冲液(20.62mL，1X)中的溶液中。所得溶液轻柔地经旋转过夜。其相继通过在蛋白A柱上的亲和力色谱法、尺寸排阻色谱法(参见缀合物纯化方案)经纯化。经纯化最终产物的Maldi TOF分析给出61,201Da的平均质量(DAR＝5.5)。产量39.2mg，31％产率。
编码缀合物7的Fc的核酸构建体包含编码SEQ ID NO:35的氨基酸序列的核酸，所述Fc包含C端赖氨酸残基及N端鼠科动物IgG信号序列。在表达后，缀合物7的Fc的C端赖氨酸及N端鼠科动物IgG信号序列被蛋白水解切割，导致Fc具有缺少Lys447(例如，缺少C端赖氨酸残基)及N端鼠科动物IgG信号序列的序列。C端赖氨酸的存在与否不会改变Fc或对应缀合物的特性。
实施例26.合成缀合物8
叠氮基官能化Fc(100mg，10mL，1.874umol，实施例2；用PEG4-叠氮基乙酸酯官能化的SEQ ID NO:35)的溶液经添加到含有炔官能化小分子(28.1mg，22.49umol，描述在实施例24，Int-25中)的40mL离心管中。轻柔地搅拌以溶解所有固体之后，所述溶液经添加到L-抗坏血酸钠盐(37.1mg，187.4umol)、硫酸铜(II)(7.2mg，45.0umol)及THPTA(78.2mg，179.9umol)在PBS 7.4缓冲液(20.62mL，1X)中的溶液中。所得溶液轻柔地经旋转过夜。其相继通过在蛋白A柱上的亲和力色谱法、尺寸排阻色谱法(参见缀合物纯化方案)经纯化。经纯化最终产物的Maldi TOF分析给出58,289Da的平均质量(DAR＝3.9)。产量44.1mg，44％产率。
编码缀合物8的Fc的核酸构建体包含编码SEQ ID NO:35的氨基酸序列的核酸，所述Fc包含C端赖氨酸残基及N端鼠科动物IgG信号序列。在表达后，缀合物8的Fc的C端赖氨酸及N端鼠科动物IgG信号序列被蛋白水解切割，导致Fc具有缺少Lys447(例如，缺少C端赖氨酸残基)及N端鼠科动物IgG信号序列的序列。C端赖氨酸的存在与否不会改变Fc或对应缀合物的特性。
实施例27.合成Int-26
Figure BDA0003629760100005401
步骤a.
Figure BDA0003629760100005402
向Fmoc-N-(叔丁氧羰基甲基)-甘氨酸(672mg，1.636mmol)、炔丙基-PEG8-胺(667mg，1.636mmol)及DIPEA(712uL，4.090mmol)在DMF(4.0mL)及DCM(4.0mL)中的0℃搅拌溶液中添加HATU(634mg，1.668mmol)。温度升至环境温度且继续搅拌直至通过LCMS确定完成。通过旋转蒸发移除所有挥发物。所得残余物通过RP-C18柱使用以0％至100％水及甲醇洗脱的Isco
Figure BDA0003629760100005412
液体色谱法经纯化。通过真空技术蒸发含有所需产物的洗脱份，提供1.44g的含有所需产物的材料，但纯度不高(通过LCMS发现的主要观察离子：[(M+H)]+＝801.2)。
此材料溶解在TFA(5.0mL)中。2小时之后的LCMS分析显示叔丁酯完全转化为对应的酸[(M+H)]+＝745.2。通过旋转蒸发来蒸发所有挥发物且残余物吸收在DMF(5.0mL)及DCM(5.0mL)中。此溶液经冷却至0℃，其中添加甲基-PEG12-胺(1.007g，1.799mmol)、DIPEA(2.507mL，14.39mmol)及HATU(698mg，1.835mmol)。通过LCMS确定反应完成后，通过旋转蒸发移除所有挥发物。残余物通过RP-C18柱使用以0％至100％水及甲醇洗脱的Isco
Figure BDA0003629760100005413
液体色谱法经纯化。产量0.915g，产率39％。通过LCMS发现的离子：[(M+2H)/2]+＝643.8。
步骤b.
Figure BDA0003629760100005411
来自步骤a的产物(915mg，0.711mmol)溶解在DMF(5mL)中的5％哌啶中。10分钟之后，通过旋转蒸发移除所有挥发物。残余物通过RP-C18柱使用以0％至100％水及甲醇洗脱的Isco
Figure BDA0003629760100005422
液体色谱法经纯化。产量649mg，产率86％。通过LCMS发现的离子：[(M+2H)/2]+＝532.8。
步骤c.
Figure BDA0003629760100005421
向来自步骤b的产物(325mg，0.305mmol)、5,5-二甲氧基戊酸(54mg，0.336mmol)及DIPEA(160uL，0.916mmol)在DMF(2.0mL)及DCM(2.0mL)中的0℃搅拌溶液中添加HATU(118mg，0.311mmol)。温度升至环境温度且继续搅拌过夜。通过旋转蒸发移除所有挥发物。所得残余物通过RP-C18柱使用以0％至100％水及甲醇洗脱的Isco
Figure BDA0003629760100005423
液体色谱法经纯化。产量305mg，产率83％。通过LCMS发现的离子：[((M+2H)-MeOH)/2]+＝588.8。
步骤d.
Figure BDA0003629760100005431
来自此实施例的步骤c的产物(300mg，0.248mmol)溶解在乙酸(4.0mL)及水(2.0mL)中，且经搅拌直至通过分析型HPLC观察到完全转化为所需产物。通过旋转蒸发来蒸发所有挥发物。此材料无需进一步纯化即用于下一步骤。产量290mg，定量。
步骤e.
Figure BDA0003629760100005432
向来自步骤d的产物(109mg，0.094mmol)及普沙托韦(50mg，0.094mmol)在1,2-二氯乙烷(3.0mL)中的搅拌溶液中添加三乙酰氧基硼氢化钠(30mg，0.141mmol)，同时搅拌过夜。通过旋转蒸发移除所有挥发物。残余物通过RP-C18柱使用以0％至100％水及甲醇洗脱的Isco
Figure BDA0003629760100005433
液体色谱法经纯化。产量115mg，产率73％。通过LCMS发现的离子：[(M+2H)/2]+＝839.4。
实施例28.合成Int-27
Figure BDA0003629760100005441
步骤a.
Figure BDA0003629760100005442
向PEG-普沙托韦(200mg，0.221mmol，描述在实施例8，Int-5中)及DIPEA(162uL，0.926mmol)在二氯甲烷(3.0mL)中的搅拌溶液中添加二碳酸二叔丁酯(72mg，0.331mmol)。继续搅拌直至通过HPLC确定反应完成，同时允许气体逸出通过起泡器。通过旋转蒸发来蒸发所有挥发物。此材料无需进一步纯化即用于下一步骤。产量224mg，定量。通过LCMS发现的离子：[((M+2H)+Na)/2]+＝514.9；[((M+2H)-Boc)/2]+＝453.7。
步骤b.
Figure BDA0003629760100005451
向Fmoc-N-(叔丁氧羰基甲基)-甘氨酸(2.00g，4.861mmol)、2-叠氮基乙胺盐酸盐(626mg，5.104mmol)及DIPEA(3.387mL，19.44mmol)在DMF(10mL)及DCM(10mL)中的0℃搅拌溶液中添加HATU(1.885g，4.958mmol)。温度升至环境温度且继续搅拌直至通过LCMS确定完成。通过旋转蒸发移除所有挥发物。残余物通过硅胶柱使用以二氯甲烷中的0％至25％甲醇洗脱的Isco
Figure BDA0003629760100005452
液体色谱法经纯化。产量2.260g，97％产率。通过LCMS发现的离子：通过LCMS发现的离子：[(M+H)-tBu]+＝424.2。
步骤c.
Figure BDA0003629760100005453
来自步骤b的产物(2.260g，4.713mmol)吸收在TFA(10mL)中，且经搅拌直至通过HPLC观察到完全转化为产物。通过旋转蒸发移除所有挥发物。所得残余物通过硅胶柱使用以二氯甲烷中的0％至20％甲醇洗脱的Isco
Figure BDA0003629760100005454
液体色谱法使用1％乙酸作为修饰剂经纯化。产量990mg，45％产率。通过LCMS发现的离子：通过LCMS发现的离子：[(M+H)+Na]+＝446.2。，[(M+H)]+＝424.2。
步骤d.
Figure BDA0003629760100005461
向来自步骤c的产物(990mg，2.338mmol)、甲基-PEG12-胺(1.335g，2.385mmol)及DIPEA(1.018mL，5.845mmol)在DMF(5.0mL)及DCM(5.0mL)中的0℃搅拌溶液中添加HATU(907mg，2.385mmol)。温度升至环境温度且继续搅拌直至通过HPLC显示完成。通过旋转蒸发移除所有挥发物。残余物通过硅胶柱使用以二氯甲烷中的0％至15％甲醇洗脱的Isco
Figure BDA0003629760100005462
液体色谱法经纯化。产量1.704g，76％产率。通过LCMS发现的离子：通过LCMS发现的离子：[(M+H)]+＝965.2；[(M+2H)/2]+＝483.2。
步骤e.
Figure BDA0003629760100005463
向来自步骤a的产物(222mg，0.221mmol)、来自步骤d的产物(213mg，0.221mmol)、TBTA(12mg，0.022mmol)及硫酸铜(4mg，0.023mmol)在乙醇(4.0mL)及水(2.0mL)中的搅拌溶液中添加抗坏血酸钠(22mg，0.110mmol)。通过LCMS确认形成了所需产物，[((M+2H)+Na)/2]+＝996.9,[(M+2H)/2]+＝986.0,[((M+3H)+Na)/3]+＝665.2,[(M+3H)/3]+＝657.8。完成之后，添加铜清除剂SiliaMetS TAAcONa(200mg，负载量0.45mmol/g)且继续搅拌过夜。混合物在乙醇的帮助下经过滤且得到所得溶液(约30mL)。通过旋转蒸发浓缩滤液且残余物吸收在DMF(7.0mL)中的5％哌啶中。反应完成之后，通过旋转蒸发移除所有挥发物。残余物通过RP-C18柱使用以0％至100％水及甲醇洗脱的Isco
Figure BDA0003629760100005471
液体色谱法经纯化。产量112mg，产率29％。通过LCMS发现的离子：[((M+2H)+Na)/2]+＝885.8,[(M+2H)/2]+＝874.8,[(M+3H)/3]+＝583.8。
步骤f.
Figure BDA0003629760100005472
向来自步骤e的产物(112mg，0.064mmol)、炔丙基-PEG4-酸(17mg，0.064mmol)及DIPEA(33uL，0.192mmol)在DMF(3.0mL)及DCM(0.5mL)中的0℃搅拌溶液中添加HATU(25mg，0.065mmol)。反应物的温度升至环境温度且继续搅拌直至通过HPLC显示完成。通过旋转蒸发移除所有挥发物。残余物通过RP-C18柱使用以0％至100％水及甲醇洗脱的Isco
Figure BDA0003629760100005473
液体色谱法经纯化。产量98mg，产率77％。通过LCMS发现的离子：[(M+2H)/2]+＝996.4,[((M+3H)+2Na)/3]+＝679.2,[((M+3H)+Na)/3]+＝671.8,[(M+3H)/3]+＝664.6。
步骤g.
Figure BDA0003629760100005481
向来自步骤f的产物(98mg，0.049mmol)在二氯甲烷(4.0mL)中的0℃搅拌溶液中添加TFA(2.0mL)。继续搅拌直至通过HPLC观察到起始材料完全转化为产物。通过旋转蒸发移除所有挥发物。残余物通过RP-C18柱使用以0％至100％水及甲醇洗脱的Isco
Figure BDA0003629760100005482
液体色谱法使用0.1％TFA作为修饰剂经纯化。产量100mg，定量。通过LCMS发现的离子：[((M+2H)+Na)/2]+＝957.0,[(M+2H)/2]+＝946.4,[(M+3H)/3]+＝631.0。
实施例29.合成缀合物9
L-抗坏血酸钠盐(4.685mL，100mM在水中)的水溶液经添加到含有以下溶液的50mL离心管中：PEG4-叠氮基官能化Fc(100mg，10mL的pH 7.4PBS缓冲液，1.874umol，实施例13；用PEG4-叠氮化物官能化的SEQ ID NO:35)、炔官能化小分子(75.2mg，37.48umol，描述在实施例28，Int-27中)、2-氨基胍盐酸盐(4.685mL，100mM在水中)、THPTA(0.937mL，50mM在水中)及硫酸铜(II)(0.468mL，20mM在水中)在pH 8.5EPPS缓冲液(40mL，10mM)中的溶液。所得混合物轻柔地经旋转过夜。所得混合物接着相继通过在蛋白A柱上的亲和力色谱法、尺寸排阻色谱法(参见缀合物纯化方案)经纯化。经纯化最终产物的Maldi TOF分析给出69,887Da的平均质量(DAR＝7.6)。产量75.2mg，75％产率。
编码缀合物9的Fc的核酸构建体包含编码SEQ ID NO:35的氨基酸序列的核酸，所述Fc包含C端赖氨酸残基及N端鼠科动物IgG信号序列。在表达后，缀合物9的Fc的C端赖氨酸及N端鼠科动物IgG信号序列被蛋白水解切割，导致Fc具有缺少Lys447(例如，缺少C端赖氨酸残基)及N端鼠科动物IgG信号序列的序列。C端赖氨酸的存在与否不会改变Fc或对应缀合物的特性。
实施例30.合成Int-28
Figure BDA0003629760100005491
类似于实施例8，Int-5制备标题化合物，其中在序列的步骤a中用PEG12二醇取代六甘醇。通过LCMS发现的离子：[M/2]+1＝563.8。
实施例31.合成Int-29
Figure BDA0003629760100005492
步骤a.
Figure BDA0003629760100005501
向胺TFA盐(0.25g，0.28mmol，描述在实施例19，Int-10中)及炔丙基-PEG-8-溴化物(0.21g，0.43mmol)在无水DMF(2.8mL)中的溶液中添加DIEA(0.20mL)，1.13mmol)。所述溶液在90℃下经加热持续16小时。冷却至室温之后，反应混合物直接地经装载到柱上且通过反相液体色谱法(Isco，10％至80％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。产量0.21g，产率48.8％，呈TFA盐的形式。通过LCMS发现的离子：[M+18+H]+＝574.8。
步骤b.
Figure BDA0003629760100005502
先前步骤中的Boc-胺产物(0.21g，0.28mmol)在CH2Cl2(3mL)中的溶液经添加到TFA(3mL)中。所得溶液经搅拌持续3小时接着经浓缩。残余物通过反相液体色谱法(ACCQ，5％至50％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。产量0.051g，产率22.7％，呈TFA盐的形式。通过LCMS发现的离子：[(M+2H)/2]+＝524.8。
实施例32.合成Int-30
Figure BDA0003629760100005511
步骤a.
Figure BDA0003629760100005512
在氮气下在0℃下向3-氨基-3-氨基甲酰基氮杂环丁烷羧酸叔丁酯(1.56g，5.99mmol)在CH2Cl2(46mL)中的溶液中添加三乙胺(2.53mL，17.98mmol)及N-(苯甲氧基羰基氧基)丁二酰亚胺(1.83g，7.19mmol)。使所得溶液加温至室温过夜。反应混合物用水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且接着浓缩。残余物通过正相液体色谱法(Isco，10％至100％乙酸乙酯及己烷)经纯化。产量0.2.06g，产率98.4％，呈白色泡沫状。通过LCMS发现的离子：[M+Na]+＝372.2。
步骤b.
Figure BDA0003629760100005513
来自先前步骤的伯酰胺(1.4g，4.01mmol)在无水THF(8.5mL)中的溶液在氮气下在0℃下用BH3-THF(12.02mL，12.02mmol)逐滴处理。反应混合物在0℃下经搅拌持续1小时，接着移除冰浴。所述混合物额外经搅拌持续30分钟，之后用甲醇缓慢淬灭。所得溶液在减压下经浓缩。残余物通过反相液体色谱法(Isco，5％至50％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。产量0.89g，产率39.2％，呈TFA盐的形式。通过LCMS发现的离子：[M+H-Boc]+＝236.2。
步骤c.
Figure BDA0003629760100005521
在氮气下向来自前一步骤的产物(0.61g，1.36mmol)在无水THF(5mL)中的溶液中添加三乙胺(0.59mL，4.21mmol)。反应混合物经冷却至10℃，接着缓慢添加2,4-二氯-6-甲基喹唑啉(0.28g，1.31mmol)以保持内部温度低于30℃。在添加之后，所得溶液经升温至室温且搅拌持续16小时。反应混合物经浓缩且通过正相液体色谱法(Isco，0％至50％乙酸乙酯及己烷)经纯化。产量0.69g，产率103％，呈白色固体状。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝512.2。
步骤d.
Figure BDA0003629760100005522
无水DMF(7mL)中的来自先前步骤的氯化物产物(0.69g，1.35mmol)、2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂卓-1,1-二酮盐酸盐(0.36g，1.49mmol)、DIEA(0.48mL，2.71mmol)及NH4Cl(3.62mg，0.068mmol)在100℃下经加热持续16小时。反应混合物用乙酸乙酯稀释且用水及盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，过滤且经浓缩。残余物通过正相液体色谱法(Isco，0％至45％乙酸乙酯及己烷)经纯化。产量0.79g，产率87％，呈淡黄色固体状。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝673.2。
步骤e.
Figure BDA0003629760100005531
来自先前步骤的Boc-胺产物(0.54g，0.81mmol)及HCl在CH2Cl2(10mL)中的二恶烷(4M，5mL)中的溶液在室温下经搅拌持续16小时。所述反应混合物经浓缩且残余物通过反相液体色谱法(Isco，5％至50％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。产量0.28g，产率59.9％，呈TFA盐的形式。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝573.2。
步骤f.
Figure BDA0003629760100005532
来自先前步骤的胺产物(0.15g，0.22mmol)、炔丙基-PEG-4-甲苯磺酸盐(0.097g，0.25mmol)、NaI(3.27mg，0.022mmol)及K2CO3(0.091g，0.66mmol)在无水乙腈(4mL)中的溶液在80℃下经加热持续16小时。所述反应混合物经过滤且浓缩，接着通过反相液体色谱法(Isco，5％至45％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。产量0.53g，产率31.1％，呈TFA盐的形式。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝787.2。
步骤g.
Figure BDA0003629760100005541
在氮气下在0℃下向茴香硫醚(0.41g，3.29mmol)及溴三甲基硅烷(43.1μL，0.33mmol)在TFA(5mL)中的溶液中添加来自先前步骤的产物(0.054g，0.059mmol)在TFA(4.24mL)中的溶液。反应混合物在0℃下经搅拌持续1小时，接着用乙醚(约5mL)淬灭。过滤白色沉淀且用乙醚洗涤。在减压下浓缩母液；所得残余物通过反相液体色谱法(ACCQ，0％至30％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。产量0.029g，产率55.4％，呈TFA盐的形式。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝653.2。
实施例33.合成Int-31
Figure BDA0003629760100005542
类似于实施例32(Int-30)制备标题化合物，其中炔丙基-PEG4-甲苯磺酸盐在反应的序列的步骤f中用炔丙基-PEG8-甲苯磺酸盐取代。产量0.10g，产率71.0％，呈TFA盐的形式。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝830.2。
实施例34.合成Int-32
Figure BDA0003629760100005551
步骤a.
Figure BDA0003629760100005552
向Cbz保护的胺(0.25g，0.37mmol，在实施例32，Int-30中描述)在无水甲醇(4mL)中的溶液中馈入Pd/C(0.04g，0.037mmol)及来自气球的H2。所得混合物在室温下经搅拌直至完成，接着经由硅藻土垫过滤且用甲醇洗涤。在减压下移除溶剂以得到黄色油状物。所述材料无需进一步纯化继续用于下一步骤。产量0.21g，产率107.1％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝539.2。
步骤b.
Figure BDA0003629760100005561
来自先前步骤的胺(0.13g，0.24mmol)、炔丙基-PEG-4-溴化物(0.077g，0.26mmol)及K2CO3(0.032g，0.24mmol)在无水MeCN(3mL)中的溶液在70℃下经加热持续16小时。过滤反应混合物且浓缩。残余物通过反相液体色谱法(Isco，5％至45％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。产量0.13g，产率74.6％，呈TFA盐的形式。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝753.2。
步骤c.
Figure BDA0003629760100005562
向来自先前步骤的Boc-胺(0.13g，0.15mmol)在CH2Cl2(3mL)中的溶液中添加TFA(3mL)。所得溶液在室温下经搅拌持续3小时，接着经浓缩。残余物通过反相液体色谱法(ACCQ，0％-30％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。产量0.092g，产率68.7％，呈TFA盐的形式。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝653.2。
实施例35.合成Int-33.
Figure BDA0003629760100005571
螺环哌啶(100mg，0.226mmol，在实施例20，Int-11中描述)、炔丙基-PEG4-酸(59mg，0.226mmol)、EDC(43mg，0.226mmol)及HOBT(31mg，0.226mmol)溶解在DMF(2mL)中的溶液在室温下经搅拌持续12小时。LCMS显示完全转化。粗产物直接地通过RPLC(10％至100％甲醇/水)经纯化。产量48mg，产率31％。通过LCMS发现的离子：(M+H)+＝684.3。
实施例36.合成缀合物10
缀合物10通过使叠氮基官能化Fc(用PEG4-叠氮化物官能化的SEQ ID NO:73)与炔衍生小分子(Int-33，在实施例35中描述)缀合来制备。缀合类似于缀合物4的方式来执行，如实施例9中所述。产率27％。Maldi质量＝64141，DAR＝6.4。
编码缀合物10的Fc的核酸构建体包含编码SEQ ID NO:64的氨基酸序列(其包含C端赖氨酸残基)的核酸。在表达后，缀合物10的Fc的C端赖氨酸被蛋白水解切割，产生具有SEQ ID NO:73的序列的Fc。C端赖氨酸的存在与否不会改变Fc或对应缀合物的特性。
实施例37.用于量化RSV中和化合物的微中和测定
HEp-2细胞(ATCC#CCL-23)以5E4/孔/200μL接种在96孔组织培养处理的板(Fishercat#08-772-17)中的补充有10％热灭活(HI)胎牛血清(HI-FBS；Fisher cat#10-082-147)、1X青霉素-链霉素(P/S，100μg/mL；Fisher cat#MT30002C)及1X L-谷氨酰胺(L-Gln，2mM；Fisher cat#25030-164)的DMEM(Fisher cat#11965118)中且在37℃及5％CO2下孵育过夜。具有2％HI-FBS、1X P/S、2mM L-Gln的DMEM中的化合物的重复10倍连续稀释液以60μL/孔经制备在96孔组织培养板中。RSV Long菌株(RetroVirox,San Diego)、RSV A2菌株(Virapur,San Diego)、RSV B1菌株(RetroVirox,San Diego)或RSV菌株CH18537(RetroVirox,SanDiego)稀释于具有2％HI-FBS、1X P/S、2mM L-Gln的DMEM中且以60μL/孔添加到60μL化合物中，感染复数(MOI)为0.002(Long，A2)、0.003(B1)或0.004(CH18537)。每个板上包含仅病毒(无药物)及仅细胞(无病毒，无药物)对照。化合物-病毒混合物在37℃及5％CO2下孵育持续1小时。在1小时之后，通过抽吸从HEp-2细胞中移除培养基，且以100μL/孔用1X PBS pH 7.4(Fisher cat#MT21040CM)洗涤孔一次。化合物-病毒混合物(100μL/孔)经添加到细胞中且在37℃及5％CO2下孵育持续1小时，接着以100μL/孔添加具有2％HI-FBS、1X P/S、2mM L-Gln的DMEM(200μL终体积)且在37°及5％CO2下孵育。在感染后第6天，抽吸出上清液且细胞在4℃下以100μL/孔用1X PBS中的冰冷80％丙酮固定持续20分钟。抽吸出丙酮且板在室温下经风干持续20分钟。板以200μL/孔用1XPBS、0.05％Tween-20(PBST)洗涤3次，且在轨道板振荡器上振荡(500rpm)下以200μL/孔用PBST中的5％脱脂奶粉(Fisher cat#50-195-952)封闭持续1小时。弃去封闭溶液，且细胞在振荡下以100μL/孔用以1:2,000稀释于稀释剂(以1:1稀释于1X PBS pH 7.4中的封闭溶液)中的小鼠抗F蛋白抗体(MilliporeSigma cat#MAB8599)孵育持续2小时。板以300μL/孔用PBST洗涤5次，且在振荡下以100μL/孔用以1:1,000稀释于稀释剂中的HRP缀合的山羊抗小鼠IgG抗体(SouthernBiotech cat#1030-05)孵育持续1小时。板以300μL/孔用PBST洗涤5次，且以100μL/孔用TMB底物(Fisher cat#BDB555214)孵育持续约5分钟。反应以100μL/孔用1N H2SO4终止。吸光度用EnSpire多模式读板器(PerkinElmer)在450nm处读取。从所有A450值中减去仅细胞对照的平均A450，且计算每种化合物浓度相对于仅病毒对照的病毒中和百分比。半数最大有效浓度(EC50)用GraphPad Prism版本8使用％中和对比log10浓度图的非线性回归分析来计算。
测定感染之后第6天的50％细胞毒性浓度(CC50)，用于与微中和测定平行进行的测定。简而言之，通过抽吸移除培养基，且细胞在室温下以60μL/孔用结晶紫溶液(0.1％结晶紫，20％甲醇，3％多聚甲醛)固定/染色持续1小时。移除染色剂且孔以100μL/孔用1X PBSpH 7.4洗涤3次。板在室温下经风干持续2小时，且吸光度用EnSpire多模式读板器(PerkinElmer)在570nm处读取。细胞活力降低50％所需的化合物浓度(μM)(CC50)用GraphPad Prism版本8使用非线性回归分析来计算。
在微中和测定中，Int-33(JNJ179衍生物)比基准化合物普沙托韦(GS-5806)及VP-14637更有效，但不比母体化合物JNJ179更有效(表6)。
表6.MOI＝0.002(Long，A2)、0.003(B1)或0.004(CH18537)时的RSV微中和EC50。
Figure BDA0003629760100005591
Figure BDA0003629760100005601
nr，不运行。
实施例38.合成包含具有C220S/YTE四重突变的Fc结构域的缀合物
制备点击试剂溶液：PBS缓冲溶液中的0.0050M CuSO4：10.0mg CuSO4溶解在12.53mL PBS中，接着采用5.00mL此CuSO4溶液且添加43.1mg BTTAA(CAS#1334179-85-9)及247.5mg抗坏血酸钠以得到点击试剂溶液(0.0050M CuSO4、0.020M BTTAA及0.25M抗坏血酸钠)。
向具有C220S突变及YTE突变的叠氮基官能化Fc(65.5mg，10.0mL，1.13μmol，叠氮基DAR约5.9，SEQ ID NO:76)在15mL离心管中的溶液中添加炔衍生小分子(根据Fc的每个叠氮基3.0当量)。在轻柔地搅拌以溶解所有固体之后，混合物用点击试剂溶液(1.80mL)处理。所得混合物在环境温度下轻柔地经旋转持续12小时。其相继通过在蛋白A柱上的亲和力色谱法、尺寸排阻色谱法(参见一般缀合物纯化方案)经纯化。经纯化最终产物的Maldi TOF分析给出66,420Da的平均质量(DAR＝5.8)。产量57mg，具有98％纯度。
包含具有C220S/YTE四重突变(CYTE)的Fc结构域单体的缀合物可替代地使用具有SEQ ID NO:77的氨基酸序列的Fc结构域来制备，对应于Fc同种异型的差异。预期不同的同种异型在本文所述的特性方面表现相同。
编码具有CYTE突变的Fc的核酸构建体包含编码SEQ ID NO:67的氨基酸序列(其包含C端赖氨酸残基)的核酸。在表达后，Fc的C端赖氨酸被蛋白水解切割，产生具有SEQ IDNO:76的序列的Fc。C端赖氨酸的存在与否不会改变Fc或对应缀合物的特性。
实施例39.IV施用包含具有C220S/YTE四重突变的Fc结构域的缀合物后的30天比较非人灵长类动物PK研究
如实施例38中描述合成包含具有C220S突变及YTE突变的Fc结构域的缀合物(SEQID NO:76)。执行非人灵长类动物PK研究以比较C220S/YTE Fc缀合物(SEQ ID NO:76)与包含单独具有C220S突变的Fc结构域的缀合物(SEQ ID NO:73)的IV施用。
由BTS Research(San Diego,CA)使用体重介于3.5-8.5kg范围内的5-9岁雄性及雌性食蟹猕猴执行非人灵长类动物(NHP)PK研究。NHP经IV注射2mg/kg的测试物件(0.4mL/kg的剂量体积)。动物经圈养于标准IACUC批准的圈养条件下。在适当时间，对动物进行非末端放血(通过股静脉或头静脉)，其中血液经收集于K2EDTA管中以预防凝血。所收集的血液经离心(2,000xg，持续10分钟)且抽出血浆以随时间分析测试物件浓度。C220S/YTE Fc缀合物及C220S缀合物在每个时间点的血浆浓度通过夹心ELISA测量。简而言之，测试物件经捕获于Fc包被的板上且接着使用HRP缀合的抗人IgG-Fc抗体进行检测。在GraphPad Prism中使用C220S/YTE Fc缀合物或C220S缀合物标准曲线的4PL非线性回归计算蛋白质浓度。更详细的方法描述提供于上文。对应的曲线显示在图13中。与C220S Fc缀合物的约10天相比，C220S/YTE Fc缀合物表现出约45天的显著改进的终末半衰期。C220S/YTE Fc缀合物的AUC是C220S缀合物的AUC的2倍大(表7)。
Figure BDA0003629760100005631
实施例40.比较包含Fc结构域的缀合物的血浆及上皮衬液(ELF)浓度的14天小鼠PK研究。
在研究开始之前，让来自Charles River Laboratories的雌性BALB/c小鼠适应5天。每笼圈养3-6只动物，自由进食及饮水。所有程序均按照NeoSome IACUC政策及指南执行。小鼠经皮下(SC)注射20mg/kg的具有用一种或多种小分子抗病毒抑制剂修饰的Fc结构域的缀合物(SEQ ID NO:73)(10mL/kg剂量体积)。在选定的时间点，通过吸入CO2对3只小鼠实施安乐死。血液经由心脏穿刺经收集到K2EDTA管中用于血浆保留。血液收集之后，通过暴露气管、插入23G管连接物且用无菌1X PBS pH 7.4执行2x0.5mL冲洗来执行支气管肺泡灌洗(BAL)。记录回收的流体体积且保留。BAL程序完成之后，移除肺，称重且储存在-80℃下。倾倒出血浆及BAL液(BALF)的等分试样，之后在-80℃下储存样品，用于尿素量化测定。经收集的BALF在室温下以12,000RPM离心持续5分钟以沉淀肺泡巨噬细胞，沉淀及上清液两者均储存在-80℃下直至发货给赞助商。如上所述通过间接ELISA测量缀合物在每个时间点的血浆浓度。简而言之，在包被有神经氨酸酶(NA)的板上捕获缀合物分子，且接着使用HRP缀合的抗人IgG Fcγ特异性F(ab')2进行检测。对如上所述收集的BALF执行相同的ELISA。缀合物血浆浓度在GraphPad Prism中使用缀合物标准曲线的4PL非线性回归来计算。ELF体积及ELF中的缀合物浓度使用尿素作为稀释标记物进行测定，如前所述(Rennard等人，1986JAppl Physiol 60:532-538)。图14中显示了比较缀合物与ELF水平的曲线。到注射后2小时，缀合物上皮衬液(ELF)水平在剩余的时间过程中为血浆暴露水平(AUC)的约60％，这表明缀合物45在肺中几乎立即从血浆分配到ELF(图14，表8)。
Figure BDA0003629760100005651
实施例41.合成5-氯-2-(氯甲基)-1-[3-(甲烷磺酰基)丙基]-1H-苯并咪唑
Figure BDA0003629760100005661
步骤a.
Figure BDA0003629760100005662
5-氯-2-氟硝基苯(0.918g，5.23mmol)在DMF(10mL)中的溶液用3-甲烷磺酰基-丙基-氯化铵(1.000g，5.757mmol)及粉状碳酸钾(2.17g，15.70mmol)处理，接着在70℃油浴中加热。在12小时之后，LCMS显示完全转化。橙色反应物经过滤以移除碳酸钾及其他不溶性材料，通过旋转蒸发经浓缩，且无需进一步纯化即用于下一步骤。
步骤b.
Figure BDA0003629760100005663
来自先前步骤的粗产物溶解在乙酸(10mL)中，用70℃油浴加热，且以若干份用锌粉(1.711g，26.17mmol)处理，同时快速搅拌。10分钟之后橙色变为无色，且LCMS表明反应完成。过滤反应混合物，得到绿色溶液，其无需进一步纯化立即用于下一步骤。
步骤c.
Figure BDA0003629760100005671
仍溶解在乙酸中的来自先前步骤b的粗产物用2-氯-1,1,1-三甲氧基乙烷(4.85g，31.40mmol)处理，且在50℃油浴中加热。1小时之后的LCMS显示完全转化为所需产物。通过旋转蒸发移除所有挥发物。剩余油状物通过快速色谱法(0％至10％甲醇/DCM)经纯化。三个步骤的产量1.32g，产率78.5％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝321.0。
实施例42.合成6-氯-2-(氯甲基)-3-[3-(甲烷磺酰基)丙基]-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶
Figure BDA0003629760100005672
类似于实施例41的化合物制备标题化合物，其中使用5-氯-2-氟-3-硝基吡啶代替5-氯-2-氟硝基苯。
实施例43.合成5-氯-2-(氯甲基)-1-[2-(甲烷磺酰基)乙基]-1H-苯并咪唑
Figure BDA0003629760100005673
类似于实施例41的化合物制备标题化合物，其中使用2-(甲烷磺酰基)乙-1-胺-氯化氢代替3-甲烷磺酰基-丙基-氯化铵。
实施例44.合成6-氯-2-(氯甲基)-3-[2-(甲烷磺酰基)乙基]-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶
Figure BDA0003629760100005681
类似于实施例43的化合物制备标题化合物，其中使用5-氯-2-氟-3-硝基吡啶代替5-氯-2-氟硝基苯。
实施例45.合成1-丁基-5-氯-2-(氯甲基)-1H-苯并咪唑
Figure BDA0003629760100005682
类似于实施例41的化合物制备标题化合物，其中使用1-丁胺代替3-甲烷磺酰基-丙基-氯化铵。
实施例46.合成3-丁基-6-氯-2-(氯甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶
Figure BDA0003629760100005683
类似于实施例45的化合物制备标题化合物，其中使用5-氯-2-氟-3-硝基吡啶代替5-氯-2-氟硝基苯。
实施例47.合成5-氯-2-(氯甲基)-1-(4,7,10,13,16-pentaoxaicos-1-炔-20-基)-1H-苯并咪唑
Figure BDA0003629760100005691
步骤a.
Figure BDA0003629760100005692
炔丙基-PEG4-醇(2.00g，8.61mmol)及1,4-二溴丁烷(5.57g，25.83mmol)溶解在DMSO(20mL)中的搅拌溶液在室温下用粉状KOH(0.966g，17.22mmol)处理。反应物开始变热且转为深黄色。搅拌持续1小时之后，LCMS显示醇完全消耗。反应物经过滤，用乙酸乙酯稀释，且用水萃取三次。水洗液用乙酸乙酯萃取三次。经合并的乙酸乙酯萃取物经硫酸钠干燥，浓缩，且通过RPLC(10％至100％ACN/水)经纯化。产量1.10g，产率34.9％。
步骤b.
Figure BDA0003629760100005693
向来自先前步骤a的产物(1.100g，3.00mmol)及邻苯二甲酰亚胺(0.881g，6.00mmol)在DMF(7mL)中的搅拌溶液中添加粉状碳酸钾(1.66g，11.98mmol)。混合物在70℃油浴中经搅拌持续1小时，此时LCMS显示起始溴化物完全消失。反应混合物经过滤、浓缩且通过RPLC(10％至100％ACN/水)经纯化。产量1.28g，96.6％产率。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝434.0。
步骤c.
Figure BDA0003629760100005701
来自先前步骤b的产物(1.10g，2.54mmol)溶解在乙醇(3mL)中的溶液用40％甲胺水溶液(3mL)处理且在70℃油浴中经加热持续1小时，此时LCMS显示起始材料完全消耗。反应物通过旋转蒸发经浓缩，接着在高真空下储存过夜，且无需进一步纯化即在下一步骤中用作N-甲基-邻苯二甲酰亚胺及所需产物的混合物。
步骤d.
Figure BDA0003629760100005702
来自先前步骤c的粗产物(2.538mmol)溶解在DMF(5mL)中，用DIEA(1.81mL，4eq)及5-氯-2-氟硝基苯(0.535g，3.046mmol)处理，且在50℃油浴中经加热。搅拌过夜之后，LCMS显示氨基-PEG起始材料完全消耗。粗混合物经浓缩且通过RPLC(10％至100％ACN/水)经纯化。两个步骤的产量0.62g，产率52％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝459.0。
步骤e.
Figure BDA0003629760100005703
来自先前步骤d的产物(0.620g，1.35mmol)溶解在乙酸(4mL)中，在50℃油浴中经加热，且在15分钟内用锌粉(1.77g，27.02mmol)逐份处理。20分钟之后，反应物颜色从橙色变为无色，且LCMS显示起始材料完全消耗。反应混合物经过滤以移除锌粉且在下一步骤中用作乙酸中的溶液。
步骤f.
Figure BDA0003629760100005711
来自先前步骤e的粗产物(1.35mmol)在50℃油浴中经加热，且用2-氯-1,1,1-三甲氧基乙烷(1.25g，8.10mmol)处理。1小时之后的LCMS显示起始材料完全消耗。反应物通过旋转蒸发经浓缩，接着通过快速色谱法(0％至10％MeOH/DCM)经纯化。两个步骤的产量0.45g，产率68.3％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝486.8。
实施例48.2'-氧代-1',2'-二氢螺[哌啶-4,3'-吡咯并[2,3-c]吡啶]-1-羧酸叔丁酯
Figure BDA0003629760100005712
步骤a.
Figure BDA0003629760100005713
T3P(41.6mL，69.9mmol，50％wt.在乙酸乙酯中)在10分钟内经滴加到2-氨基-2-溴-吡啶(11g，63.6mmol)、N-Boc-哌嗪羧酸(16g，69.9mmol)及DIPEA(16.4g，127.2mmol)在乙酸乙酯(75mL)中的冷却至0℃的搅拌混合物中。移除冰浴且反应物经搅拌持续24小时。反应混合物用水稀释，经萃取到乙酸乙酯(3x，25mL)中。经合并的有机萃取物经硫酸钠干燥，且在旋转蒸发仪上经浓缩。粗产物通过在ISCO
Figure BDA0003629760100005721
上的硅胶色谱法(15％至100％乙酸乙酯在己烷中，25分钟)经纯化。汇集纯洗脱份且浓缩以提供呈淡橙黄色油状物的中间体。产率61％。LC/MS[M+H]+＝384.2。
步骤b.
Figure BDA0003629760100005722
对甲氧基苯甲氯(11.6g，74.2mmol)经添加到来自此实施例的步骤a的中间体(19.1g，49.4mmol)及碳酸铯(24.1g，74.1mmol)在DMF(30mL)中的混合物中。反应物在室温下经搅拌持续12小时，此时反应物用水稀释且萃取到乙酸乙酯(3x，30ml)中。经合并的有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，且在旋转蒸发仪上经浓缩。粗产物通过在ISCO COMBI
Figure BDA0003629760100005724
上的硅胶色谱法(10％至100％乙酸乙酯在己烷中，25分钟)经纯化。汇集纯洗脱份且浓缩以提供呈淡橙黄色油状物的中间体。产率68％。LC/MS[M+Na]+＝526.0。
步骤c.
Figure BDA0003629760100005723
描述在此实施例中的中间体b.(17.0g，33.7mmol)、乙酸钯(II)(0.76g，3.4mmol)、三环己基膦(1.9g，6.7mmol)的混合物溶解在密封管中的二恶烷(40mL)中。轻柔地鼓入氮气通过混合物持续10分钟，在此时间点，添加叔丁醇钠(4.9g，50.5mmol)且再次鼓入氮气通过反应混合物持续10分钟。管经密封且在120℃下经加热持续16小时。混合物经冷却且在旋转蒸发仪上经浓缩。深色粘性产物混合物通过在ISCO COMBI
Figure BDA0003629760100005731
上的硅胶色谱法(0％至10％甲醇在DCM中，25分钟)经纯化。汇集纯洗脱份且浓缩以提供呈淡黄色油状物的中间体。产率84％。LC/MS[M+H]+＝424.2。
步骤d.
Figure BDA0003629760100005732
来自此实施例的步骤c的中间体(3g，7.1mmol)及苯甲醚(3.8g，35.4mmol)在70℃下在10％三氟甲磺酸在TFA(25mL)中的溶液中经搅拌持续12小时(LC/MS[M+H]+＝204.2)。混合物经冷却且在旋转蒸发仪上经浓缩且与甲苯共沸(3x)。深色粘性产物混合物吸收在乙腈(50mL)中且经冷却至0℃。pH通过滴加DIPEA经调整至8且添加boc酸酐(1.5g，7.1mmoL)且反应物经搅拌持续40分钟。通过旋转蒸发仪移除溶剂，且粗产物混合物通过RP HPLC(ISCOCOMBI
Figure BDA0003629760100005733
10％-95％乙腈在DI水中，0.1％TFA，40分钟梯度)经纯化。汇集纯洗脱份且冻干以提供呈白色固体状的产物。产率69％。LC/MS[M+H]+＝304.2。
实施例49.合成2'-氧代-1',2'-二氢螺[哌啶-4,3'-吡咯并[2,3-c]吡啶]-1-羧酸丙-2-基酯
Figure BDA0003629760100005734
步骤a.
Figure BDA0003629760100005741
来自实施例48的产物的步骤c.的中间体(0.75g，1.8mmol)及苯甲醚(0.96g，8.9mmol)在70℃下在10％三氟甲磺酸在TFA(10mL)中的溶液中经搅拌持续12小时(LC/MS[M+H]+＝204.2)。混合物经冷却且在旋转蒸发仪上经浓缩且与甲苯共沸(3x)。深色粘性产物混合物吸收在乙腈(20mL)中且经冷却至0℃。pH通过滴加DIPEA经调整至8且添加氯甲酸异丙酯(0.25g，2mmoL)且反应物经搅拌持续40分钟。通过旋转蒸发仪移除溶剂，且粗产物混合物通过RP HPLC(ISCO COMBI
Figure BDA0003629760100005742
10％-95％乙腈在DI水中，0.1％TFA，40分钟梯度)经纯化。汇集纯洗脱份且冻干以提供呈白色固体状的产物。产率69％。LC/MS[M+H]+＝290.2。
实施例50.合成5-氯-2-(氯甲基)-1-(3,6,9,12-四氧杂十五烷(pentadec)-14-炔-1-基)-1H-苯并咪唑
Figure BDA0003629760100005743
步骤a.
Figure BDA0003629760100005744
炔丙基peg-4胺(395mg，1.71mmol)经添加到2-氟-5-氯-硝基苯(200mg，1.39mmol)及三乙胺(230mg，2.28mmol)在乙醇(10mL)中的混合物中，且反应物在90℃下经搅拌持续12小时，在此时间点，起始材料已完全转化为产物。混合物经浓缩且通过硅胶色谱法(ISCOCOMBI
Figure BDA0003629760100005751
0％-100％乙酸乙酯在己烷中，25分钟梯度)经纯化。汇集纯洗脱份且冻干以提供呈澄清油状物的产物，(LC/MS[M+H]+＝387.2)。硝基中间体吸收在冰乙酸(10ml)中且添加锌(50mg，0.78mmol)且混合物经搅拌持续1小时。反应混合物经过滤且在旋转蒸发仪上经浓缩。产物无需进一步纯化即用于后续操作。产率63％，2个步骤。LC/MS[M+H]+＝357.2。
步骤b.
Figure BDA0003629760100005752
2-氯甲基-1,1,1-三甲氧基乙烷(550mg，3.56mmol)经添加到在冰乙酸(5mL)中的描述在此实施例的步骤a中的二胺中间体(254mg，0.71mmol)中且反应物在70℃下经搅拌持续2小时。混合物在旋转蒸发仪上经浓缩且通过硅胶色谱法(ISCO COMBI
Figure BDA0003629760100005754
0％-8％甲醇在DCM中，25分钟梯度)经纯化。汇集纯洗脱份且浓缩以提供呈棕色油状物的产物。产率69％。LC/MS[M+H]+＝414.9。
实施例51.合成3-{2-[4-(3,6,9,12-四氧杂十五烷-14-炔-1-基)哌嗪-1-基]乙氧基}丙酸
Figure BDA0003629760100005753
步骤a.
Figure BDA0003629760100005761
cbz-哌嗪(1.697g，7.703mmol)、3-(2-溴乙氧基)丙酸叔丁酯(1.95g，7.703mmol)及DIEA(2.68mL，15.41mmol)溶解在乙腈(20mL)中的溶液在75℃油浴中经加热过夜。粗混合物通过旋转蒸发经浓缩，用TFA制成微酸性，且通过RPLC(5％-100％ACN/水，在0.1％TFA下)经纯化。单TFA盐的产量为3.71g，产率为95％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝393.2。
步骤b.
Figure BDA0003629760100005762
来自先前步骤a的溶液产物(3.71g，7.33mmol)及5％Pd/C(1.5g)溶解在甲醇(30mL)中，且用氢气真空吹扫且在来自气球的氢气下经搅拌持续1小时。经由硅藻土过滤反应物。滤液通过旋转蒸发经浓缩，且接着无需进一步纯化即用于下一步骤。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝259.2。
步骤c.
Figure BDA0003629760100005763
来自先前步骤b的产物(2.73g，7.33mmol)及炔丙基-PEG4-甲磺酸酯(2.50g，8.06mmol)溶解在乙腈(20mL)中，接着用DIEA(3.831mL，22.0mmol)处理，且在75℃油浴中经加热持续24小时。粗反应物通过旋转蒸发经浓缩，用TFA制成微酸性，且通过RPLC(10％-100％ACN/水，在0.1％TFA下)经纯化。产量3.24g，产率63.1％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝473.3。
步骤d.
Figure BDA0003629760100005771
来自先前步骤c的产物(3.24g，4.62mmol)用TFA(15mL)处理且经搅拌持续1小时。反应物通过旋转蒸发去除挥发物，随后在高真空下储存持续12小时。粗产物无需进一步纯化即使用。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝417.2。
实施例52.合成1-[4-(丙-2-炔-1-基)哌嗪-1-基]-3,6,9,12-四氧杂十五烷-15-酸
Figure BDA0003629760100005772
步骤a.
Figure BDA0003629760100005773
溴-PEG4-叔丁酯(1.00g，2.60mmol)、炔丙基哌嗪8TFA盐(3.20g，3.89mmol)的溶液用粉状碳酸钾(3.59g，25.9mmol)处理，接着在75℃油浴中经加热持续12小时。反应物经过滤，浓缩成油状物，且用TFA制成微酸性，接着通过RPLC(0％至100％ACN/水，在0.1％TFA下)经纯化。双TFA盐，产量0.911g，产率53.5％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝429.3。
步骤b.
Figure BDA0003629760100005774
来自先前步骤a的产物(0.911g，1.39mmol)溶解在二恶烷中的4M HCL中且经搅拌持续1小时。反应物通过旋转蒸发经浓缩，且在高真空下储存过夜。9HCl盐的粗产量为0.92g，粗产率为98％。
实施例53.合成Int-39
Figure BDA0003629760100005781
步骤a.
Figure BDA0003629760100005782
向四甘醇(3.8g，20mmol)在无水DMF中的溶液中缓慢添加氢化钠(0.48g，12mmol，60％在矿物油中)。溶液在冰浴上经搅拌持续10分钟，且接着添加2-(4-溴丁基)异吲哚啉-1,3-二酮(2.8g，10mmol)。反应溶液在室温下经搅拌持续16小时，用叔丁醇(1ml)淬灭且经浓缩。残余物溶解在DCM(50ml)中且溶液用水(3x，10ml)、盐水(10ml)洗涤，接着经硫酸钠干燥，过滤且浓缩。粗产物通过在ISCO COMBI
Figure BDA0003629760100005783
上的硅胶色谱法(15％至100％乙酸乙酯在己烷中)经纯化。产量1.32g，产率35％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝396.0。
步骤b.
Figure BDA0003629760100005791
向来自步骤a的产物(1g，2.5mmol)在DCM(25ml)中的溶液中添加三乙胺(0.7ml，5mmol)，随后添加甲烷磺酰氯(0.3ml，3.75mmol)。反应溶液经搅拌持续2小时，且接着用aqHCl(1N，2x，5ml)、水(10ml)、盐水洗涤，且经浓缩以得到粗产物。产量1.12g，产率95％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝474.8。
步骤c.
Figure BDA0003629760100005792
来自步骤b的产物(1.12g，2.3mmol)、1-(丙-2-炔-1-基)哌嗪(2.6g，2.5mmol)及三乙胺(2.7ml，20mmol)在无水DMF中的混合物在90℃下经加热持续3小时。溶液经冷却、浓缩且通过RPLC(5％至50％乙腈/水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。两个步骤的产量617mg，产率51％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝502.3。
步骤d.
Figure BDA0003629760100005793
来自步骤c的产物(450mg，0.9mmol)溶解在浓NH4OH(5mL的40％水溶液)中，且溶液在50℃下经加热过夜。溶液经冷却，浓缩且残余物溶解在水中，用DCM洗涤，经浓缩且冻干以得到粗产物，其无需进一步纯化即使用。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝372.2。
步骤e.
Figure BDA0003629760100005801
来自步骤d的产物、5-氯-2-氟硝基苯(210mg，1.2mmol)及K2CO3(496mg，3.6mmol)在无水乙腈中的混合物在70℃下经加热持续2小时。溶液经冷却、过滤、浓缩且通过RPLC(5％至40％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。两个步骤的产量160mg，产率34％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝527.2。
步骤f.
Figure BDA0003629760100005802
来自步骤e的产物(160mg，0.212mmol)在乙酸(5ml)中的溶液在70℃下加热，且添加锌(70mg，1.06mmol)。溶液在70℃下经搅拌持续10分钟，通过LCMS得出此时反应完成。粗混合物经过滤，且无需进一步纯化即用于下一步骤。LC/MS[M+H]+＝497.3。
步骤g.
Figure BDA0003629760100005803
向来自步骤f的产物在乙酸(5ml)中的溶液中添加2-氯-1,1,1-三甲氧基乙烷(197mg，1.28mmol)。反应物在70℃下经搅拌持续1小时。溶液经冷却、浓缩且通过RPLC(5％至50％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。产量38mg，产率32％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝555.2。
步骤h.
Figure BDA0003629760100005811
向来自实施例48的产物(28mg，0.094mmol)在无水乙腈中的溶液中添加Cs2CO3(65.2mg，0.2mmol)，随后添加步骤-g产物(38mg，0.047mmol)。反应溶液在80℃下经搅拌持续20分钟，冷却，浓缩且通过RPLC(5％至50％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。产量25mg，产率64％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝822.2。
实施例54.合成Int-29
Figure BDA0003629760100005812
步骤a.
Figure BDA0003629760100005821
在室温下向来自实施例19的胺TFA盐Int-10(247.4mg，0.284mmol)及炔丙基-PEG8-溴化物(206.7mg，0.425mmol)在无水DMF(2.8mL)中的溶液中添加DIEA(0.20mL，1.13mmol)。所得混合物在90℃下加热持续16小时。所得混合物接着经冷却至室温且通过RPLC(ISCO，10％至80％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。产量208.2mg，产率48.8％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝574.8。
步骤b:
Figure BDA0003629760100005822
来自先前步骤的产物(208.2mg，0.176mmol)在室温下在TFA(3mL)及二氯甲烷(3mL)中经搅拌。反应完成之后，混合物在减压下经浓缩。残余物通过RPLC(ACCQ，5％至50％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。产量51.0mg，产率22.7％，呈TFA盐的形式。通过LCMS发现的离子：[(M+2H)/2]+＝524.8。
实施例55.合成Int-43
Figure BDA0003629760100005831
步骤a.
Figure BDA0003629760100005832
炔丙基-peg4-硫醇(1.0g，4.0mmol)经添加到N-boc-氨基-丙基溴化物(1.1g，4.4mmol)及碳酸铯(1.1g，4.4mmol)中，在回流乙腈(10mL)中经搅拌持续4小时。混合物经过滤且浓缩以提供中间体(LCMS[M+Na]+＝428.2)。粗中间体溶解在甲醇(25mL)中且添加硫酸氢钾(7.4g，12.1mmol)，且反应物在50℃下经搅拌持续3小时。混合物经过滤且在旋转蒸发仪上经浓缩。砜中间体通过RP HPLC(ISCO COMBI
Figure BDA0003629760100005834
5％-95％乙腈在DI水中，0.1％TFA，40分钟梯度)经纯化。汇集纯洗脱份且冻干以提供呈澄清油状物的中间体(LCMS[M+Na]+＝460.2)。Boc保护的中间体在环境温度下在二恶烷(25mL)中的4NHCl中经搅拌持续30分钟。在旋转蒸发仪上移除溶剂，残余物与甲苯(3x，10mL)共沸，且在高真空下经干燥以提供呈黄色油状物的产物。产率69％，3个步骤。LC/MS[M+H]+＝338.2。
步骤b.
Figure BDA0003629760100005833
来自此实施例的步骤a.的中间体(625mg，1.85mmol)经添加到2-氟-5-氯-硝基苯(295mg，1.68mmol)及DIPEA(434mg，3.3mmol)在乙醇(10mL)中的混合物中，且反应物在90℃下经搅拌持续12小时，在此时间点，起始材料已完全转化为产物。混合物经浓缩且通过硅胶色谱法(ISCO COMBI
Figure BDA0003629760100005841
0％-100％乙酸乙酯在己烷中，25分钟梯度)经纯化。汇集纯洗脱份且冻干以提供呈澄清油状物的产物，(LC/MS[M+H]+＝493.2)。硝基中间体吸收在冰乙酸(20ml)中且添加锌(150mg，2.30mmol)，且混合物在50℃下经搅拌持续1小时。反应混合物经过滤且在旋转蒸发仪上经浓缩。产物无需进一步纯化即用于后续操作。产率63％，2个步骤。LC/MS[M+H]+＝463.2。
步骤c.
Figure BDA0003629760100005842
2-氯甲基-1,1,1-三甲氧基乙烷(1.08g，7.02mmol)经添加到溶解在冰乙酸(15mL)中的描述在此实施例的步骤-b中的二胺中间体(650mg，1.40mmol)中且反应物在70℃下经搅拌持续2小时。混合物在旋转蒸发仪上经浓缩且通过硅胶色谱法(ISCO COMBI
Figure BDA0003629760100005844
0％至4％甲醇/DCM，25分钟梯度)经纯化。汇集纯洗脱份且浓缩以提供呈棕色油状物的产物。产率71％。LC/MS[M+H]+＝521.2。
步骤d.
Figure BDA0003629760100005843
实施例48的产物(149mg，0.49mmol)、来自此实施例的步骤-c的中间体(307mg，0.59mmol)及碳酸铯(192mg，0.59mmol)在环境温度下在DMF(2mL)中一起经搅拌持续12小时。反应混合物直接施加到RP HPLC(ACCQ半制备型，5％至95％乙腈/水，无修饰剂，35分钟梯度)。汇集纯洗脱份且冻干以提供呈黄色吸湿固体状的产物。产率51％。LC/MS[M+H]+＝788.4。
实施例56.合成Int-36
Figure BDA0003629760100005851
实施例49的产物(66mg，0.23mmol)、来自实施例55(合成Int-43)的步骤c.的中间体(120mg，0.23mmol)及碳酸铯(75mg，0.23mmol)在环境温度下在DMF(2mL)中一起经搅拌持续12小时。反应混合物直接施加到RP HPLC(ACCQ半制备型，5％-95％乙腈在DI水中，无修饰剂，35分钟梯度)。汇集纯洗脱份且冻干以提供呈黄色吸湿固体状的产物。产率39％。LC/MS[M+H]+＝773.8。
实施例57.合成Int-41
Figure BDA0003629760100005852
向2-氧代螺[2-吡咯啉并[2,3-c]吡啶-3,4'-哌啶]-10-羧酸叔丁酯(31mg，0.10mmol，如实施例48中描述制备)在CH3CN(10mL)中的溶液中添加Cs2CO3(100mg，0.30mmol)。溶液经搅拌持续20分钟。向溶液中添加1-{2-[5-氯-2-(氯甲基)苯并咪唑基]乙氧基}-2-[2-(2-丙-2-炔氧基乙氧基)乙氧基]乙烷(42mg，0.10mmol，如实施例50中描述制备)且溶液经搅拌持续16小时。移除过量CH3CN，且粗材料通过反相HPLC(0％-100％CH3CN/H2O，使用0.1％TFA)经纯化。产量34mg，产率50.0％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝682.2。
实施例58.合成Int-42
Figure BDA0003629760100005861
类似于实施例57(Int-41)由2-氧代螺[2-吡咯啉并[2,3-c]吡啶-3,4'-哌啶]-10-羧酸叔丁酯及1-{4-[5-氯-2-(氯甲基)苯并咪唑基]丁氧基}-2-{2-[2-(2-丙-2-炔氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙烷(如实施例47中描述制备)来制备标题化合物。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝754.2。
实施例59.合成Int-44
Figure BDA0003629760100005862
步骤a.
Figure BDA0003629760100005871
向2-氧代螺[2-吡咯啉并[2,3-c]吡啶-3,4'-哌啶]-10-羧酸叔丁酯(52mg，0.17mmol，如实施例48中描述制备)在CH3CN(10mL)中的溶液中添加Cs2CO3(140mg，0.43mmol)。溶液经搅拌持续20分钟。向溶液中添加1-({3-[5-氯-2-(氯甲基)苯并咪唑基]丙基}磺酰基)-2-{2-[2-(2-丙-2-炔氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙烷(90mg，0.17mmol，如实施例55Int-43中描述制备)且溶液经搅拌持续16小时。移除过量CH3CN，且粗混合物经吸附到
Figure BDA0003629760100005873
上且通过快速色谱法(0％-50％MeOH及乙酸乙酯)经纯化。产量56mg，产率41％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝788.6。
步骤b.
Figure BDA0003629760100005872
二恶烷(6mL)中的4N HCl经添加到1-[(5-氯-1-{3-[(2-{2-[2-(2-丙-2-炔氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙基)磺酰基]丙基}苯并咪唑-2-基)甲基]-2-氧代螺[2-吡咯啉并[2,3-c]吡啶-3,4'-哌啶]-10-羧酸叔丁酯(28mg，0.04mmol)中且溶液经搅拌持续3小时。移除过量溶剂，且粗材料无需进一步纯化即用于下一步骤。LCMS：[M+H]+＝688.2。
步骤c.
Figure BDA0003629760100005881
向DMF(5mL)中的粗1-[(5-氯-1-{3-[(2-{2-[2-(2-丙-2-炔氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙基)磺酰基]丙基}苯并咪唑-2-基)甲基]螺[2-吡咯啉并[2,3-c]吡啶-3,4'-哌啶]-2-酮(25mg，0.040mmol，假定产率100％)中添加Boc-Thr-OH(10mg，0.05mmol)，随后添加Hünigs碱(2滴)。接着添加EDCI(15mg，0.08mmol)及HOBt(15mg，0.08mmol)且溶液经搅拌持续16小时。移除过量溶剂，且粗材料通过反相HPLC(0％-100％CH3CN/H2O，使用0.1％TFA)经纯化。产量28mg，产率79％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝889.1。
实施例60.合成Int-45
Figure BDA0003629760100005882
类似于实施例59(Int-44)由粗1-[(5-氯-1-{3-[(2-{2-[2-(2-丙-2-炔氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙基)磺酰基]丙基}苯并咪唑-2-基)甲基]螺[2-吡咯啉并[2,3-c]吡啶-3,4'-哌啶]-2-酮及Boc-Gly-OH来制备标题化合物。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝845.2。
实施例61.合成Int-37
Figure BDA0003629760100005891
二恶烷(6mL)中的4N HCl经添加到N-(1-((1R)-1-羟乙基)(1S)-2-{1-[(5-氯-1-{3-[(2-{2-[2-(2-丙-2-炔氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙基)磺酰基]丙基}苯并咪唑-2-基)甲基]-2-氧代螺[2-吡咯啉并[2,3-c]吡啶-3,4'-哌啶]-10-基}-2-氧代乙基)(叔丁氧基)甲酰胺(15mg，0.020mmol，描述在实施例59Int-43中)且溶液经搅拌持续1小时。移除过量溶剂以提供纯产物。产量14mg，定量。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝789.2。
实施例62.合成Int-38
Figure BDA0003629760100005892
类似于实施例61(Int-37)由粗(叔丁氧基)-N-(2-{1-[(5-氯-1-{3-[(2-{2-[2-(2-丙-2-炔氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙基)磺酰基]丙基}苯并咪唑-2-基)甲基]-2-氧代螺[2-吡咯啉并[2,3-c]吡啶-3,4'-哌啶]-10-基}-2-氧代乙基)甲酰胺(描述在实施例60Int-45中)来制备标题化合物。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝745.2。
实施例63.合成缀合物19
根据一般缀合程序使用具有叠氮基官能化Fc(SEQ ID NO:72)(DAR 6.0)的实施例58Int-42中描述的炔衍生小分子来制备。产量21.0mg，产率18.0％。MALDI-TOF＝61283。
实施例64.合成Int-32
Figure BDA0003629760100005901
步骤a.
Figure BDA0003629760100005902
在0℃下向3-氨基-3-氨基甲酰基氮杂环丁烷羧酸叔丁酯(1.56g，5.99mmol)在DCM(46mL)中的溶液中添加三乙胺(2.53mL，17.98mmol)及1-{[(苯甲氧基)羰基]氧基}吡咯烷-2,5-二酮(1.83g，7.19mmol)。所述反应混合物升温至室温且经搅拌持续16小时。混合物用二氯甲烷稀释且用水及盐水洗涤。有机层经硫酸钠干燥且经过滤，接着经浓缩。残余物通过正相液体色谱法(Isco，10％至100％乙酸乙酯及己烷)经纯化。呈白色泡沫状，产量2.06g，产率98.4％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝372.2。
步骤b.
Figure BDA0003629760100005911
无水THF(8.5mL)中的来自步骤-a的产物(1.4g，4.01mmol)在氮气下在0℃下用BH3-THF(1M，12mL，12.02mmol)处理。反应混合物在0℃下经搅拌持续1小时，接着移除冰浴且再搅拌持续30分钟。在反应完成之前用甲醇淬灭反应。残余物通过RPLC(ISCO COMBI
Figure BDA0003629760100005912
5％至50％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。产量885.6mg。通过LCMS发现的离子：[M+H-Boc]+＝263.2。
步骤c.
Figure BDA0003629760100005913
在氮气下向来自步骤-b的产物(608.34mg，1.35mmol)在无水THF(5mL)中的溶液中添加三乙胺(0.59mL，4.21mmol)。所得溶液经冷却至10℃，接着缓慢添加6-甲基-2,4-二氯喹唑啉(280mg，1.31mmol)以保持反应温度低于30℃。所得反应混合物经升温至室温过夜。反应混合物在减压下经浓缩，接着通过正相液体色谱法(ISCO COMBI
Figure BDA0003629760100005914
0％至50％乙酸乙酯及己烷)经纯化。产量694.4mg，产率103％。通过LCMS发现的离子：[M+H-Boc]+＝512.2。
步骤d.
Figure BDA0003629760100005915
无水DMF(7mL)中的来自步骤-c的产物(0.69g，1.35mmol)、2,3,4,5-四氢苯并[f][1,4]硫氮杂卓1,1-二氧化物盐酸盐(358.7mg，1.49mmol)、DIEA(0.48mL，2.71mmol)及NH4Cl(3.6mg，0.06mmol)在100℃下经加热持续16小时。冷却至室温之后，反应混合物用乙酸乙酯稀释且用水及盐水洗涤。有机层经硫酸钠干燥且经过滤，接着经浓缩。残余物通过正相液体色谱法(ISCO COMBI
Figure BDA0003629760100005924
0％至45％乙酸乙酯及己烷)经纯化。产量793.6mg，产率87.2％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝673.2。
步骤e.
Figure BDA0003629760100005921
向来自步骤-d的产物(0.25g，0.37mmol)在无水甲醇(4mL)中的溶液中馈入Pd/C(39.5mg，0.037mmol)及来自气球的氢气。所得混合物在室温下经搅拌持续16小时。反应完成之后，反应物经过滤且用甲醇洗涤，得到黄色油状物。所述材料无需纯化继续用于下一步骤。产量201mg。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝539.2。
步骤f.
Figure BDA0003629760100005922
无水乙腈(3mL)中的来自步骤-e的产物(125.8mg，0.23mmol)、炔丙基-PEG4-溴化物(77.4mg，0.26mmol)及碳酸钾(32.3mg，0.23mmol)在70℃下经加热持续16小时。反应混合物经过滤，接着通过RPLC(ISCO COMBI
Figure BDA0003629760100005923
5％至45％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。产量131.1mg，产率74.6％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝753.2。
步骤g.
Figure BDA0003629760100005931
来自步骤-f的产物(131.2mg，0.15mmol)在TFA(3mL)及DCM(3mL)中的溶液在室温下经搅拌3小时，接着在减压下经浓缩。残余物通过RPLC(ISCO COMBI
Figure BDA0003629760100005932
0％至30％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。产量91.6mg。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝653.2。
实施例65.合成Int-30
Figure BDA0003629760100005933
步骤a.
Figure BDA0003629760100005934
向来自实施例64(Int-32)的步骤-d的产物(543.8mg，0.81mmol)在DCM(10mL)中的溶液中添加HCl(4N在二恶烷中，5.02mL，20.08mmol)，在室温下搅拌持续16小时。Dowex66游离碱经添加到反应混合物中以中和pH，接着混合物经过滤且用甲醇洗涤。残余物无需纯化继续用于下一步骤。产量277.43mg，产率59.9％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝573.2。
步骤b.
Figure BDA0003629760100005941
乙腈(4mL)中的来自先前步骤的产物(150mg，0.22mmol)、炔丙基-PEG4-甲苯磺酰基(97.1mg，0.025mmol)、碳酸钾(90.6mg，0.66mmol)及NaI(3.3mg，0.022mmol)在100℃下经加热持续16小时。反应混合物经过滤，接着通过RPLC(ACCQ，5％至45％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。产量53.4mg，产率31.1％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝787.2。
步骤c.
Figure BDA0003629760100005942
在0℃下向来自先前步骤的产物(53.5mg，0.059mmol)在TFA(4.24mL)中的溶液中添加茴香硫醚(0.39mL，3.29mmol)及溴三甲基硅烷(0.043mL，0.33mmol)的混合溶液。所得溶液在0℃下经搅拌持续1小时，接着用乙醚(5mL)淬灭且经搅拌持续10分钟。反应混合物经过滤且用乙醚洗涤。沉淀通过RPLC(ACCQ，0％至30％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。产量29.0mg，产率55.4％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝653.2。
实施例66.合成Int-31
Figure BDA0003629760100005951
步骤a.
Figure BDA0003629760100005952
乙腈(4mL)中的来自实施例65(Int-30)的步骤-c的产物(217.4mg，0.27mmol)、炔丙基-PEG8-溴化物(140.6mg，0.029mmol)、碳酸钾(91.8mg，0.66mmol)及NaI(3.98mg，0.027mmol)在80℃下经加热持续16小时。反应混合物经过滤，接着通过RPLC(ACCQ，0％至40％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。产量147.0mg，产率51.4％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝963.2。
步骤b.
Figure BDA0003629760100005961
在0℃下向来自先前步骤的产物(147.0mg，0.134mmol)在TFA(4.24mL)中的溶液中添加茴香硫醚(0.89mL，7.41mmol)及溴三甲基硅烷(0.1mL，0.74mmol)的溶液。所得溶液在0℃下经搅拌持续1小时，接着用乙醚(5mL)淬灭且经搅拌持续10分钟。所述反应混合物在减压下经浓缩，接着通过RPLC(ACCQ，0％至35％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。产量100.4mg，产率71.0％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝830.2。
实施例67.合成Int-46
Figure BDA0003629760100005962
步骤a.
Figure BDA0003629760100005963
向6-氯吡啶-2,3-二胺(0.5g，3.41mmol)在DCM(19mL)中的溶液中添加乙酸(0.2mL，3.4mmol)及丁醛(0.29mL，3.41mmol)。所得溶液在氮气下在室温下经搅拌持续1小时，接着用三乙酰氧基硼氢化钠(2.24g，10.24mmol)逐份处理。反应混合物经搅拌持续16小时，接着用50％碳酸钠水溶液缓慢淬灭直至没有气体逸出。有机层经分离，经硫酸钠干燥，且过滤，接着经浓缩。残余物通过正相液体色谱法(ISCO COMBI
Figure BDA0003629760100005973
0％至40％乙酸乙酯及己烷)经纯化。产量370.2mg，产率54.3％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝200.2。
步骤b.
Figure BDA0003629760100005971
在0℃下向溶解在DCM(5mL)中的来自先前步骤的产物(370.4mg，1.82mmol)中添加2-氯-1,1,1-三甲氧基乙烷(1.75mL，12.7mmol)及浓HCl水溶液(0.23mL，2.73mmol)。移除冰浴且所述反应混合物在室温下经搅拌过夜。所述反应混合物经倒入饱和NaHCO3水溶液，接着用DCM萃取。有机层经分离，经硫酸钠干燥，且过滤，接着经浓缩。残余物通过正相液体色谱法(ISCO COMBI
Figure BDA0003629760100005974
0％至25％乙酸乙酯及二氯甲烷)经纯化。产量449.4mg，产率95.8％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝259.15。
步骤c.
Figure BDA0003629760100005972
向来自先前步骤的产物(151.0mg，0.57mmol)及来自实施例Int-的步骤-d的材料(147.9mg，0.48mmol)的溶液中添加乙腈(4mL)中的碳酸铯(311.4mg，0.96mmol)，接着加热至80℃持续2小时。反应完成之后，混合物经过滤且通过正相液体色谱法(ISCO COMBI
Figure BDA0003629760100005981
0％至6.5％甲醇及二氯甲烷)经纯化。产量137.4mg，产率51.0％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝526.2。
步骤d.
Figure BDA0003629760100005982
来自先前步骤的产物(132.74mg，0.24mmol)在HCl(4N在二恶烷中，1.2mL)及DCM(4ml)中的溶液在室温下经搅拌持续16小时。通过倾倒移除溶剂，接着沉淀在高真空下经干燥。所述材料无需进一步纯化继续用于下一步骤。产量132.1mg，产率112.2％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝425.2。
步骤e.
Figure BDA0003629760100005983
向来自先前步骤的产物(65.6mg，0.14mmol)在无水DMF(3mL)中的溶液中添加炔丙基-PEG4-酸(56.1mg，0.21mmol)、HATU(110.3mg，0.28mmol)及DIEA(0.1mL，0.57mmol)。所得混合物在室温下经搅拌持续2小时，接着通过RPLC(ACCQ，5％至35％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。产量44.0mg，产率39.6％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝667.2。
实施例68.合成Int-47
Figure BDA0003629760100005991
步骤a.
Figure BDA0003629760100005992
在氮气下在0℃下向5-氯-2-氟-硝基苯(3.62g，20.61mmol)在DCM(60mL)中的溶液中缓慢添加DIEA(4.3mL，24.2mmol)及4-氨基-1-丁醇(2mL，20.61mmol)在DCM(9mL)中的溶液。反应混合物经搅拌持续1小时且接着通过旋转蒸发经浓缩50％。剩余溶液用乙酸乙酯稀释，接着用水及盐水洗涤。有机层经硫酸钠干燥，过滤且浓缩。残余物通过正相液体色谱法(ISCO COMBI
Figure BDA0003629760100005993
0％至80％乙酸乙酯及己烷)经纯化。产量2.54g，产率50.4％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝245.2。
步骤b.
Figure BDA0003629760100006001
在室温下向来自先前步骤的产物(0.52g，2.09mmol)在MeOH:乙酸乙酯:THF(1:1:1，42mL)中的溶液中馈入悬浮在异丙醇中的Raney Nickel(2.0g，34.08mmol，先前用异丙醇冲洗)及来自气球的氢气。所得混合物经搅拌持续16小时，接着经由硅藻土垫经过滤。所述材料无需纯化继续用于下一步骤。产量433.5mg，产率96.8％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝215.0。
步骤c.
Figure BDA0003629760100006002
在0℃下向溶解在DCM(12mL)中的来自先前步骤的产物(534.4mg，2.44mmol)中添加2-氯-1,1,1-三甲氧基乙烷(2.0mL，14.6mmol)及浓HCl水溶液(0.3mL，3.66mmol)。移除冰浴且所述反应混合物在0℃下经搅拌直至完成。所述反应混合物经倒入饱和NaHCO3水溶液，接着用DCM萃取。有机层经分离，经硫酸钠干燥，过滤，接着经浓缩。残余物通过正相液体色谱法(ISCO COMBI
Figure BDA0003629760100006004
0％至3％甲醇及二氯甲烷)经纯化。呈黄色固体状，产量449.4mg，产率75.3％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝274.1。
步骤d.
Figure BDA0003629760100006003
向来自先前步骤的产物(75.6mg，0.27mmol)及来自实施例48中描述的步骤-d的产物(70mg，0.23mmol)的溶液中添加乙腈(4mL)中的碳酸铯(147.4mg，0.45mmol)，接着在80℃下加热持续2小时。反应完成之后，混合物经过滤且通过正相液体色谱法(ISCO COMBI
Figure BDA0003629760100006011
0％至10％甲醇及二氯甲烷)经纯化。产量68.2mg，产率55.9％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝541.2。
步骤e.
Figure BDA0003629760100006012
来自先前步骤的产物(61.2mg，0.11mmol)在HCl(4N在二恶烷中，0.6mL)及DCM(4ml)中的溶液在室温下经搅拌持续16小时。通过倾倒移除溶剂，接着剩余沉淀在高真空下经干燥。所述材料无需纯化继续用于下一步骤。产量54.0mg，产率100％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝441.0。
步骤f.
Figure BDA0003629760100006013
向来自先前步骤的产物(53.98mg，0.11mmol)在无水DMF(2mL)中的溶液中添加炔丙基-PEG4-酸(36.1mg，0.14mmol)、HATU(52.7mg，0.14mmol)及DIEA(0.07mL，0.40mmol)。所得混合物在室温下经搅拌持续2小时，接着通过RPLC(ACCQ，0％至30％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。产量38.4mg，产率39.3％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝683.25。
实施例69.合成Int-48
Figure BDA0003629760100006021
步骤a.
Figure BDA0003629760100006022
向1-哌嗪羧酸苯甲酯(660.9mg，3mmol)在无水DMF(4.5ml)中的溶液中添加K2CO3(622mg，4.5mmol)及溴-PEG3-叔丁酯(1.024g，3mmol)。所得混合物在70℃下经加热持续24小时。盐经过滤出且用乙腈洗涤，且滤液通过旋转蒸发经浓缩。残余物通过RPLC(100g，5％至85％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。呈TFA盐形式，产量1.672g，产率93.8％。LCMS：[M+H]+＝481.0。
步骤b.
Figure BDA0003629760100006023
DCM(7ml)中的步骤-a产物(1.1g，1.852mmol)用TFA(3ml)处理。所述溶液在室温下经搅拌持续6小时。所述溶液接着经浓缩且通过RPLC(100g，5％至100％乙腈及水)经纯化。呈TFA盐形式，产量961mg，产率96.4％。LCMS：[M+H]+＝425.0。
步骤c.
Figure BDA0003629760100006031
向螺环哌啶起始材料(如WO 201406411中描述制备，129.9mg，0.272mmol)在无水DMF(1.5ml)中的溶液中添加步骤-b产物(138mg，0.326mmol)、DIPEA(130mg，1mmol)及HATU(123.9mg，0.326mmol)。反应物经搅拌持续30分钟，接着直接地通过RPLC(100g，5％至80％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。呈TFA盐形式，产量271.7mg，产率93％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝848.4,[(M+2H)/2]+＝424.8,[(M+3H)/3]+＝283.6。
步骤d.
Figure BDA0003629760100006032
向步骤-c产物(271.7mg，0.253mmol)在DCM(2ml)中的溶液中添加TFA(0.5ml)、茴香硫醚(0.2ml)及溴三甲基硅烷(0.2ml)。所述反应混合物在室温下经搅拌持续3小时。所述混合物接着通过旋转蒸发经浓缩且通过RPLC(100g，5％至60％乙腈及水)经纯化。产量152.8mg，产率84.6％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝713.8,[(M+2H)/2]+＝375.5,[(M+3H)/3]+＝238.8。
步骤e.
Figure BDA0003629760100006041
向步骤-d产物(29mg，0.0275mmol)及K2CO3(14.5mg，0.105mmol)在无水DMF(0.8ml)中的混合物中添加溴-PEG8-叔丁酯(35.4mg，0.063mmol)。所得混合物在40℃下经加热持续22小时。所述混合物接着通过RPLC(50g，5％-75％乙腈及水，0.1％TFA)经纯化。产量42.1mg，产率99.6％。通过LCMS发现的离子：[(M+2H)/2]+＝597.4,[(M-tBu+3H)/3]+＝380.0。
步骤f.
Figure BDA0003629760100006042
步骤-e产物溶解在TFA(约0.8ml)中，且溶液在室温下经搅拌持续1.5小时。通过旋转蒸发移除TFA，且残余物通过RPLC(50g，5％-50％乙腈及水)经纯化。产量30.1mg，产率96.5％。通过LCMS发现的离子：[(M+2H)/2]+＝569.4,[(M+3H)/3]+＝380.0。
实施例70.合成Int-49
Figure BDA0003629760100006043
来自实施例69Int-48的步骤-d产物(29.5mg，0.0356mmol)溶解在无水DMF(0.5ml)中。在冰水中冷却之后，溶液用K2CO3(17.1mg，0.123mmol)及炔丙基溴(8.8mg，5.6μl，0.074mmol)处理。移除冰水浴且反应混合物经搅拌持续1.5小时。所述混合物接着通过HPLC(0％至40％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。产量26.8mg，产率68.8％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝751.8,[(M+2H)/2]+＝376.6,[(M+3H)/3]+＝251.4。
实施例71.合成Int-50
Figure BDA0003629760100006051
向起始材料(如WO 201406411中描述制备，30mg，0.0627mmol)及实施例50的产物(1-[4-(丙-2-炔-1-基)哌嗪-1-基]-3,6,9,12-四氧杂十五烷-15-酸(60mg，0.135mmol)在无水DMF(0.5ml)中的溶液中添加DIPEA(65mg，0.5mmol)及HATU(38mg，01mmol)。反应混合物经搅拌持续30分钟，接着直接地通过HPLC(5％至40％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。产量46.2mg，产率58.8％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝795.8,[(M+2H)/2]+＝398.4,[(M+3H)/3]+＝266.2。
实施例72.合成Int-51
Figure BDA0003629760100006061
步骤a.
Figure BDA0003629760100006062
向1-(叔丁氧基羰基)氮杂环丁烷-3-羧酸(10.9g，54.17mmol)在无水DCM(150ml)中的溶液中添加3-氨基-4-溴吡啶(8.95g，51.73mmol)、DMAP(8.2g，67.25mmol)及EDC HCl(12.9g，67.25mmol)。所得混合物在室温下经搅拌持续3天。所述混合物接着用水(100ml)萃取。水层用乙酸乙酯(100ml)反萃取。通过旋转蒸发浓缩经合并的有机层。残余物通过硅胶柱色谱法(330g，0％至50％乙酸乙酯在DCM中)经纯化。产量17.39g，产率90.1％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝356.0。
步骤b.
Figure BDA0003629760100006071
2,4-二甲氧基苯甲醇(5.223g，31mmol)溶解在无水THF(50ml)中。在冰水浴中冷却之后，向溶液中添加吡啶(5ml，62mmol)，随后在约5分钟内滴加亚硫酰氯(6.2ml，85.25mmol)。反应混合物经搅拌持续1.5小时，接着倒入1.5g的冰中且用己烷(50ml)萃取。水层用乙酸乙酯(50ml)反萃取。经合并的有机层用100ml的NaCl(33g)及NaHCO3(6.6g)在200ml的冰水中的混合物洗涤两次。有机层经Na2SO4干燥且在不加热的情况下通过旋转蒸发经浓缩。澄清油状残余物(5.41g)无需进一步纯化立即用于下一步骤。
步骤c.
Figure BDA0003629760100006072
向步骤-a产物(4.8g，13.5mmol)在无水DMF(15ml)中的溶液中添加Cs2CO3(11g，33.75mmol)。所得混合物在室温下经搅拌持续30分钟，接着用苯(15ml)中的步骤-b产物处理。所述反应物经搅拌持续2小时之后，用水(100ml)及乙酸乙酯(100mlx3)萃取。经合并的有机层经Na2SO4干燥且通过旋转蒸发经浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法(220g，10％至50％乙酸乙酯在DCM中)经纯化。产量4.2g，产率70.2％。LCMS：[M-tBu+H]+＝450.0。
步骤d.
Figure BDA0003629760100006081
经火焰干燥的反应烧瓶用氮气吹扫且馈入步骤-c产物(3.15g，7.41mmol)、叔丁醇钠(1.07g，11.1mmol)、乙酸Pd(II)(499.1mg，2.223mmol)、三环己基膦(626.1mg，2.223mmol)及二恶烷(14ml)。所得混合物在氮气下在100℃下经加热持续2小时。冷却至室温之后，所述混合物用饱和氯化铵溶液(70ml)稀释且用DCM(100mlx4)萃取。经合并的有机层经Na2SO4干燥且通过旋转蒸发经浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法(220g，10％至50％乙酸乙酯在DCM中)经纯化。产量1.86g，产率59％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝426.0。
步骤e.
Figure BDA0003629760100006082
步骤-d产物(880mg，2.07mmol)溶解在THF(4ml)中且用二恶烷(5ml)中的4N HCl溶液处理。所述反应混合物经搅拌持续3小时。添加己烷(10ml)，且沉淀经过滤且用乙酸乙酯洗涤。固体进一步在高真空下经干燥且无需进一步纯化继续用于后续步骤。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝326.0。
步骤f.
Figure BDA0003629760100006083
向炔丙基-PEG4酸(286.3mg，1.1mmol)在无水DMF(1.5ml)中的溶液中添加HATU(456mg，1.2mmol)及DIEA(426.7mg，3.3mmol)。在搅拌持续5分钟之后，所述反应混合物经添加到步骤-e产物(397.9mg，1mmol)在DMF(1ml)中的溶液中。所得混合物经搅拌持续30分钟，接着直接地通过RPLC(5％至70％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。产量361.3mg，产率53％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝568.2。
步骤g.
Figure BDA0003629760100006091
步骤-f产物(361.3mg，0.53mmol)在乙腈(3ml)中的溶液在冰水浴中经冷却，且向其中添加硝酸铈铵(CAN)(350.9mg，0.64mmol)在水(1ml)中的预冷溶液及用于冲洗CAN玻璃器皿的额外的水(0.5mlx3)。所得混合物在室温下经搅拌持续2小时。所述混合物在冰水浴中经冷却且与额外的CAN(116.2mg，0.212mmol)混合。所述反应在室温下再继续两小时。通过旋转蒸发移除乙腈，且残余物水溶液通过RPLC(100g，0％至60％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。产量116.2mg，产率41.3％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝418.9。
步骤h.
Figure BDA0003629760100006092
向步骤-g产物(37.3mg，0.0702mmol)在无水乙腈(1ml)中的溶液中添加Cs2CO3(91.6mg，0.14mmol)及来自实施例45的产物1-丁基-5-氯-2-(氯甲基)-1H-苯并咪唑(79mg，0.21mmol)。所得混合物在80℃下经加热持续3.5小时。所述混合物接着经冷却至室温且通过HPLC(5％至70％乙腈及水)经纯化。产量23.3mg，产率52.1％。通过LCMS发现的离子：[M+Na]+＝659.8,[M+H]+＝637.8,[(M+2H)/2]+＝319.6。
实施例73.合成缀合物20
向叠氮基官能化Fc(2.76ml，38.3mg，0.6592μmol，SEQ ID NO:72)的溶液中添加1.0M的氨基胍溶液(165μl，0.165mmol)及1.0M的氯化锌溶液(49.4μl，0.0494mmol)。所得混合物的pH通过20x硼酸盐缓冲液(150μl)经调整至约6.5。向此溶液中添加DMF(0.15ml)中的炔官能化小分子(5.95mg，0.00791mmol，描述于实施例72(Int-51)中)，随后添加BTTAA(37.5mg，0.087mmol)及Cu2SO4(2.7mg，0.017mmol)在水(1ml)及抗坏血酸钠(32.7mg，0.165mmol)中的预混合溶液。所述反应物轻柔地经振荡持续4小时。其相继通过在蛋白A柱上的亲和力色谱法、尺寸排阻色谱法(参见一般缀合物纯化方案)经纯化。经纯化最终产物的Maldi TOF分析给出62043Da的平均质量(DAR＝4.2)。产量(产率)：25mg，66％。
实施例74.合成缀合物21
类似于实施例73(缀合物20)制备标题化合物，其中实施例72(Int-51)中描述的炔官能化小分子用实施例71(Int-50)中描述的炔官能化小分子置换。经纯化最终产物的Maldi TOF分析给出63,007Da的平均质量(DAR＝4.5)。产量(产率)：26.9mg，70％。
实施例75.合成Int-52
Figure BDA0003629760100006101
向实施例69(Int-48)的步骤-d中描述的哌嗪中间体(28.7mg，0.0402mmol)及K2CO3(16.6mg，0.12mmol)在无水DMF(0.5ml)中的溶液中添加炔丙基-PEG4-溴化物(21.3mg，0.072mmol)。反应混合物在40℃下经搅拌持续5小时。所述混合物接着通过HPLC(0％至40％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。产量33mg，产率64.6％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝928.4,[(M+2H)/2]+＝464.5,[(M+3H)/3]+＝310.2。
实施例76.合成Int-53
Figure BDA0003629760100006111
步骤a.
Figure BDA0003629760100006112
向2-氧代螺[2-吡咯啉并[2,3-c]吡啶-3,4'-哌啶]-10-羧酸叔丁酯(74mg，0.24mmol，如实施例48中描述制备)在CH3CN(10mL)中的溶液中添加Cs2CO3(238mg，0.73mmol)。溶液经搅拌持续20分钟。向溶液中添加1-丁基-5-氯-2-(氯甲基)苯并咪唑(62mg，0.24mmol，如实施例45中描述制备)且溶液经搅拌持续16小时。移除过量CH3CN，且粗混合物经吸附到
Figure BDA0003629760100006123
上且通过快速色谱法(0％-50％MeOH/乙酸乙酯)经纯化。产量35mg，产率27.5％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝524.2。
步骤b.
Figure BDA0003629760100006121
二恶烷(6mL)中的4N HCl经添加到1-[(1-丁基-5-氯苯并咪唑-2-基)甲基]-2-氧代螺[2-吡咯啉并[2,3-c]吡啶-3,4'-哌啶]-10-羧酸叔丁酯(35mg，0.07mmol)中且溶液经搅拌持续3小时。移除过量溶剂，且粗材料无需进一步纯化即用于下一步骤。
步骤c.
Figure BDA0003629760100006122
向DMF(5mL)中的粗1-[(1-丁基-5-氯苯并咪唑-2-基)甲基]螺[2-吡咯啉并[2,3-c]吡啶-3,4'-哌啶]-2-酮(28mg，0.07mmol，假定产率100％)中添加炔丙基-PEG4-酸(20mg，0.08mmol)，随后添加Hünigs碱(36mg，0.28mmol)及HATU(40mg，0.10mmol)。溶液经搅拌持续16小时。移除过量溶剂，且粗材料通过反相HPLC(0％-100％CH3CN/H2O，使用0.1％TFA)经纯化。产量30mg，产率64.3％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝666.4。
实施例77.合成Int-54
Figure BDA0003629760100006131
类似于实施例76(Int-53)由2-氧代螺[2-吡咯啉并[2,3-c]吡啶-3,4'-哌啶]-10-羧酸叔丁酯及2-[5-氯-2-(氯甲基)苯并咪唑基]-1-(甲基磺酰基)乙烷(如Int-AB3中描述制备)来制备标题化合物。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝716.2。
实施例78.合成Int-55
Figure BDA0003629760100006132
类似于实施例76(Int-53)由2-氧代螺[2-吡咯啉并[2,3-c]吡啶-3,4'-哌啶]-10-羧酸叔丁酯及3-[5-氯-2-(氯甲基)苯并咪唑基]-1-(甲基磺酰基)丙烷(如实施例41中描述制备)来制备标题化合物。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝730.2。
实施例79.合成缀合物22
根据一般缀合程序使用具有Fc(SEQ ID NO:72)叠氮基(DAR 6.0)的实施例76(Int-53)中描述的炔衍生小分子来制备。产量25.0mg，产率23.0％。MALDI-TOF＝61332。
实施例80.合成Int-56
Figure BDA0003629760100006141
步骤a.
Figure BDA0003629760100006142
来自实施例72(Int-51)的步骤-a的中间体(8g，22.5mmol)在无水DMF(15ml)中的溶液在冰水浴中经冷却且用Cs2CO3(10g，33.6mmol)处理。所得混合物经搅拌持续30分钟之后，用4-甲氧基苯甲氯(5.27g，33.6mmol)处理。移除冰水浴且反应物经搅拌持续2小时。所述反应物接着用水(100ml)及乙酸乙酯(100mlx3)萃取。经合并的有机层经Na2SO4干燥且通过旋转蒸发经浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法(330g，0％至40％乙酸乙酯在DCM中)经纯化。产量7.1g，产率66.2％。通过LCMS发现的离子：[M-tbu+H]+＝419.8。
步骤b.
Figure BDA0003629760100006143
经火焰干燥的反应烧瓶用氮气吹扫，接着馈入步骤-a产物(7.1g，14.9mmol)、叔丁醇钠(2.86g，29.8mmol)、乙酸Pd(II)(669mg，2.98mmol)、三环己基膦(835.6mg，2.98mmol)及二恶烷(75ml)。所得混合物在氮气下在100℃下经加热持续4小时。经冷却至室温之后，所述混合物用水(50ml)及2:1乙酸乙酯/己烷(150ml)萃取。水层用DCM(100mlx3)反萃取。经合并的有机层经Na2SO4干燥且通过旋转蒸发经浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法(330g，15％至100％乙酸乙酯在DCM中)经纯化。产量4.34g，产率73.8％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝396.0。
步骤c.
Figure BDA0003629760100006151
步骤-b产物(1.85mg，4.68mmol)在乙腈(15ml)中的溶液在冰水浴中经冷却且向其中添加硝酸铈铵(IV)(5.14g，9.37mmol)在水(10ml)中的预冷溶液。所得混合物在0℃至室温下经搅拌持续2.5小时。所述混合物在冰水浴中经冷却且用额外量的CAN(1.28g，2.34mmol)处理。所述反应在室温下再继续两小时。所述反应物接着用乙酸乙酯(50ml)稀释且用K2CO3(1.6g)在水(30ml)中的溶液萃取。水层中的悬浮液经过滤，且澄清滤液用乙酸乙酯(50mlx3)萃取。经合并的有机层经Na2SO4干燥且通过旋转蒸发经浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法(80g，0％至20％MeOH在DCM中)经纯化。产量1.1g，产率85％。通过LCMS发现的离子：[M+Na]+＝298,[M+H]+＝276。
步骤d.
Figure BDA0003629760100006161
向步骤-c产物(138.2mg，0.5mmol)在无水乙腈(2ml)中的溶液中添加Cs2CO3(325.8mg，1.0mmol)及来自实施例48的产物(241mg，0.75mmol)。所得混合物在80℃下经加热持续1.5小时。添加额外量的实施例48产物(112mg，0.59mmol)，且反应再继续持续2小时。所述混合物接着经冷却至室温且通过HPLC(5％至80％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。产量160mg，产率47.5％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝559.8。
实施例81.合成Int-57
Figure BDA0003629760100006162
步骤a.
Figure BDA0003629760100006163
N,N-二苯甲胺(46.2mL，234.3mmol)、1-溴-4-氟丁烷(7.82mL，72.85mmol)及DIEA(10.4mL，58.65mmol)在85℃下经加热持续16小时。冷却至室温之后，反应混合物用乙酸乙酯稀释，接着用水及盐水洗涤。有机层经硫酸钠干燥，过滤，接着浓缩。油状物通过正相液体色谱法(ISCO COMBI
Figure BDA0003629760100006164
0％至20％的10％乙酸乙酯及己烷)经纯化。产量7.7g，产率39％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝272.2。
步骤b.
Figure BDA0003629760100006171
向来自先前步骤的产物(4.41g，15.26mmol)在乙醇(39mL)及HCl(2N在乙醇中，15.26mL)中的溶液中馈入Pd/C(3.25g，1.53mmol)及来自气球的氢气。所得混合物在室温下经搅拌持续16小时，接着经由
Figure BDA0003629760100006172
垫经过滤。
在0℃下向上述溶液中添加4-氯-1-氟-2-硝基苯(2.68g，15.26mmol)，随后添加DIEA(5.3mL，30.45mmol)。所得混合物在室温下经搅拌直至通过LCMS显示完成，接着用乙酸中和。在减压下移除溶剂。残余物用二氯甲烷稀释且用水及盐水洗涤。有机层经硫酸钠干燥且经过滤，接着经浓缩。残余物通过正相液体色谱法(Isco，0％至10％乙酸乙酯及己烷)经纯化。产量352.9mg，产率9.4％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝247.2。
步骤c.
Figure BDA0003629760100006173
在0℃下向来自先前步骤的产物(693.1mg，2.81mmol)在乙醇(7.4ml)及乙酸(0.81mL，14.05mmol)中的溶液中添加锌粉(735.1mg，11.24mmol)。移除冰浴，接着反应混合物经升温至50℃直至反应完成。所述混合物经过滤且用甲醇洗涤。残余物无需纯化继续用于下一步骤。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝217.2。
步骤d.
Figure BDA0003629760100006181
在0℃下向溶解在DCM(3.8mL)中的来自先前步骤的产物(621.3mg，2.81mmol)中添加2-氯-1,1,1-三甲氧基乙烷(3.09mL，22.48mmol)及浓HCl水溶液(0.35mL，4.22mmol)。移除冰浴且所述反应混合物在室温下经搅拌过夜。所述反应混合物经倒入饱和NaHCO3水溶液，接着用DCM萃取。有机层经硫酸钠干燥且经过滤，接着经浓缩。残余物通过正相液体色谱法(ISCO COMBI
Figure BDA0003629760100006184
0％至40％乙酸乙酯及己烷)经纯化。产量256.4mg，产率33.2％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝276.2。
步骤e.
Figure BDA0003629760100006182
向来自先前步骤的产物(27.85mg，0.10mmol)及来自实施例80(合成Int-56)的步骤-c的产物(32.5mg，0.076mmol)的溶液中添加乙腈(2mL)中的碳酸铯(49.72mg，0.15mmol)，接着在80℃下加热持续2小时。所述反应完成之后，反应物经过滤，接着通过RPLC(ACCQ，5％至35％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。产量29.2mg，产率58.3％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝656.2。
实施例82.合成
Figure BDA0003629760100006183
步骤a.
Figure BDA0003629760100006191
实施例80(Int-56)中描述的Boc保护的氮杂环丁烷(160mg，0.238mmol)溶解在TFA(约0.8ml)及DCM(1ml)中。所得溶液在室温下经搅拌持续2小时，接着在室温下通过旋转蒸发经浓缩。残余物通过RPLC(100g，0％至60％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。产量85.6mg，产率53.4％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝459.8,[(M+2H)/2]+＝230.6。
步骤b.
Figure BDA0003629760100006192
向步骤-a产物(26.5mg，0.04mmol)在无水THF(0.5ml)中的溶液中添加1滴管的DIPEA及氯甲酸异丙酯(36mg，0.088mmol)30％在甲苯中的溶液。所述反应物在室温下经搅拌持续30分钟，接着直接地通过HPLC(5％至50％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。产量19.6mg，产率55.2％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝545.8。
实施例83.合成Int-59
Figure BDA0003629760100006201
向炔丙基PEG-4酸(18.9mg，0.073mmol)及HATU(32mg，0.0842mmol)的混合物在无水DMF(0.5ml)中的溶液中添加DIPEA(13mg，0.1mmol)。所得混合物在室温下经搅拌持续5分钟，接着用来自实施例82(Int-58)的步骤-a的产物(32.2mg，0.0486mmol)处理。继续反应持续30分钟，且反应物直接地通过HPLC(5％至50％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。产量26.5mg，产率66.8％。通过LCMS发现的离子：[M+Na]+＝723.6,[M+H]+＝701.6,[(M+2H)/2]+＝351.4。
实施例84.合成Int-60
Figure BDA0003629760100006202
由来自实施例72(Int-51)的步骤-g产物(19mg，0.0358mmol)制备的标题化合物溶解在无水乙腈(1ml)中。接着添加Cs2CO3(23.3mg，0.0716mmol)及来自实施例43的产物(26mg，0.1mmol)。所得混合物在80℃下经加热持续3.5小时。所述混合物接着经冷却至室温且通过HPLC(5％至70％乙腈及水)经纯化。产量16.2mg，产率56.4％。通过LCMS发现的离子：[M+Na]+＝709.6,[M+H]+＝687.8,[(M+2H)/2]+＝344.4。
实施例85.合成Int-61
Figure BDA0003629760100006211
向来自实施例80的步骤-c产物(Int-56)(82.5mg，0.3mmol)在无水乙腈(1ml)中的溶液中添加Cs2CO3(195.5mg，0.6mmol)及来自实施例47的产物(175.5mg，0.36mmol)。所得混合物在80℃下加热持续1.5小时。添加额外量的来自实施例47的产物(175.5mg，0.36mmol)，且反应再继续持续2小时。所述反应物接着经冷却至室温且通过HPLC(5％至60％乙腈及水，0.1％TFA)经纯化。产量119.7mg，产率47.5％。通过LCMS发现的离子：[M+Na]+＝747.7,[M+H]+＝725.8。
实施例86.一般缀合程序
叠氮基官能化Fc(50mg，56.5kDa，9.05微摩尔，17mg/mL，DAR＝4.4，缓冲液＝10mMMES/150mM NaCl，pH 6.0)及炔官能化小分子(10.8微摩尔，12eq)的溶液用BTTAA(19.4mg，50eq)、CuSO4(3.6mg，25eq)、氨基胍HCl(25mg，250eq)、氯化锌(9.3mg，75eq)及抗坏血酸钠(44.8mg，250eq)溶解在1mL的水中的溶液(pH约6，用氢氧化钾调整(水溶液))处理。MaldTOF分析显示缀合在2小时之后完成。根据缀合物的一般纯化程序纯化产物。
实施例87.来自点击反应的缀合物的一般纯化程序
粗Fc缀合物使用Mab选择PrismA树脂以缓冲液(25nM精氨酸，120nM NaCL，pH 6.3)来纯化，且使用Slide-d-lyzer G2渗析盒(10,000MWCO)将含有产物的洗脱份渗析到25nM精氨酸，120nM NaCL及1％蔗糖，pH 6.3缓冲液中，随后使用储存缓冲液(200nM精氨酸，137nMNaCL，pH 5.5)进行尺寸排阻色谱法。经纯化的材料使用Nanodrop紫外可见分光光度计(蛋白Bradford测定)来量化，且使用离心浓缩机(10,000MWCO)经浓缩至大约10mg/ml。通过Maldi TOF质谱法测定DAR。
实施例88.合成Int-62
Figure BDA0003629760100006221
步骤a.
Figure BDA0003629760100006222
来自实施例85的产物(Int-61，0.443g，0.610mmol)与4N HCl在二恶烷(4mL)中经搅拌持续15分钟，接着去除溶剂且通过RPLC(5％至100％乙腈/水，使用0.1％TFA)经纯化。双TFA盐的产量为0.221g，产率为49.3％。LC/MS[M+H]+＝626.2。
步骤b.
Figure BDA0003629760100006223
步骤a产物(0.030g，0.0479mmol)、乙酸环丙酯(0.00959g，0.0958mmol)及DIEA(0.037g，0.287mmol)在DMF(1mL)中的溶液用HATU(0.0364g，0.0958mmol)处理。10分钟之后的LCMS显示完全转化为产物。粗混合物直接地经装载到C18柱上，且通过RPLC(10％至100％乙腈/水，使用0.1％TFA)经纯化。产量0.028g，产率82％。LC/MS[M+H]+＝708.2。
实施例89.合成Int-63
Figure BDA0003629760100006231
标题化合物类似于实施例88(Int-62)来制备。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝737.2。
实施例90.合成Int-64
Figure BDA0003629760100006232
标题化合物类似于实施例88(Int-62)来制备。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝751.3。
实施例91.合成Int-65
Figure BDA0003629760100006233
标题化合物类似于实施例88(Int-62)来制备。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝719.8。
实施例92.合成缀合物23
根据一般缀合程序使用具有Fc(SEQ ID NO:72)叠氮基(DAR 4.0)的实施例88(Int-62)中描述的炔衍生小分子来制备。产量25.1mg，产率50％。MALDI-TOF＝62,089。
实施例93.合成缀合物24
根据一般缀合程序使用具有Fc(SEQ ID NO:72)叠氮基(DAR 4.5)的实施例89(Int-63)中描述的炔衍生小分子来制备。产量20.5mg，产率41％。MALDI-TOF＝62,706。
实施例94.合成缀合物25
根据一般缀合程序使用具有Fc(SEQ ID NO:72)叠氮基(DAR 4.6)的实施例90(Int-64)中描述的炔衍生小分子来制备。产量26.9mg，产率54％。MALDI-TOF＝62,887。
实施例95.合成缀合物26
根据一般缀合程序使用具有Fc(SEQ ID NO:72)叠氮基(DAR 4.4)的实施例91(Int-65)中描述的炔衍生小分子来制备。产量22.5mg，产率45％。MALDI-TOF＝62,520。
实施例96.合成Int-66
Figure BDA0003629760100006251
步骤a.
Figure BDA0003629760100006252
5-氯-2-氟硝基苯(1.00g，5.697mmol)、GABA(705mg，6.836mmol)及DIPEA(3.473mL，19.94mmol)在DMF(10mL)中的搅拌溶液在120℃下经加热过夜。通过旋转蒸发移除所有挥发物。残余物悬浮在30mL的水中且经搅拌持续15分钟，接着过滤，且固体用额外的30mL等分的水洗涤3次。固体吸收在丙酮(50mL)中且用MgSO4干燥。过滤混合物且通过旋转蒸发移除所有挥发物且在高真空下储存。这样，获得1.301g的所需加合物，且此材料无需进一步纯化即用于下一步骤。向羧酸产物(50mg，1.933mmol)、炔丙基-PEG4-胺(469mg，2.030mmol)及DIPEA(1.010mL，5.799mmol)在DMF(3.0mL)及DCM(3.0mL)中的0℃搅拌溶液中添加HATU(772mg，2.030mmol)。5分钟之后，温度升至环境温度。在通过LCMS确定反应完成后，通过旋转蒸发移除所有挥发物。残余物通过在Isco Combi Flash上的硅胶色谱法(0％至100％乙酸乙酯在己烷中)经纯化。产量0.767g，产率84％。通过LCMS发现的离子：[(M+H)+Na]+＝494.2,[(M+H)]+＝472.2。
步骤b.
Figure BDA0003629760100006261
向来自步骤a的产物(617mg，1.307mmol)在乙醇(20mL)及水(10mL)中的搅拌溶液中添加连二亚硫酸钠(5.552g，26.15mmol)且温度升至60℃。完成后，混合物通过旋转蒸发经浓缩至其体积的约三分之一，接着用水(40mL)稀释且用DCM(3x50mL)萃取。经合并的有机物用硫酸镁干燥，过滤且在真空下通过旋转蒸发蒸发所有挥发物。这样，获得1.301g的所需加合物的高纯度材料，且此材料无需进一步纯化即用于下一步骤。向双苯胺(479mg，1.084mmol)及2-氯-1,1,1-三甲氧基乙烷(1.274mL，7.587mmol)在DCM(3.0mL)中的0℃搅拌溶液中滴加12N HCl(135uL，1.626mmol)。5分钟之后，温度升至环境温度。完成后，通过旋转蒸发移除所有挥发物。残余物通过在ISCO COMBI
Figure BDA0003629760100006262
上的硅胶色谱法(0％至20％甲醇在二氯甲烷中)经纯化。产量0.410g，产率76％。通过LCMS发现的离子：[(M+H)]+＝500.2。
步骤c.
Figure BDA0003629760100006271
来自步骤b的化合物(91mg，0.181mmol)、来自实施例49的产物(50mg，0.173mmol)及碳酸铯(141mg，0.432mmol)在乙腈(5mL)中的搅拌溶液在80℃下经加热过夜。混合物借助乙腈经由短硅藻土垫经过滤，且通过旋转蒸发移除所有挥发物。残余物通过RP-C18柱色谱法使用以0％至100％水及甲醇洗脱的ISCO
Figure BDA0003629760100006272
液体色谱仪经纯化，不使用修饰剂。产量0.080g，产率62％。通过LCMS发现的离子：[(M+H)+Na]+＝775.3,[(M+H)]+＝753.3。
实施例97.合成Int-67
Figure BDA0003629760100006273
步骤a.
Figure BDA0003629760100006274
在密封管中，3-硝基-4-氯吡啶(6.00g，37.84mmol)、环丙胺(5.244mL，75.69mmol)及DIPEA(13.18mL，9.782mmol)在乙醇(30mL)中的搅拌溶液在80℃下经加热过夜。反应经冷却至0℃且通过过滤收集获得的晶体。溶液经浓缩且吸收在EtOAc(50mL)中，且用水(50mL)洗涤。水层用EtOAc等分试样(50mL)额外洗涤两次。经合并的有机物用硫酸镁干燥，过滤且在真空下通过旋转蒸发蒸发所有挥发物。此粗物质及先前获得的晶体经合并且无需任何进一步纯化即用于下一步骤。产量6.30g，产率93％。通过LCMS发现的离子：[(M+H)]+＝180.2。
步骤b.
Figure BDA0003629760100006281
来自步骤b的产物(2.00g，11.16mmol)及20％碳载氢氧化钯(2.0g)在甲醇(50mL)中的搅拌悬浮液用氢气(1个大气压)处理过夜。反应混合物借助甲醇经由短硅藻土垫经过滤，且通过旋转蒸发移除所有挥发物且残余物在高真空下经储存。此物质无需进一步纯化即用于下一步骤，如下所述。向所述粗产物在乙腈(20mL)中的0℃搅拌悬浮液中添加CDI(1.90g，11.72mmol)在乙腈(20mL)中的溶液。继续搅拌过夜同时使温度温和地达到环境温度。通过旋转蒸发移除所有挥发物。残余物通过RP-C18柱使用以0％至100％水及甲醇洗脱的ISCO
Figure BDA0003629760100006282
液体色谱法经纯化，不使用修饰剂。产量1.187g，产率61％。1HNMR(DMSO-d6)δ：8.15(m,2H),7.15(d,J＝5.2Hz,1H),2.87(tt,J＝7.2,3.7Hz,1H),1.00(m,2H),0.85(m,2H)
步骤c.
Figure BDA0003629760100006291
来自步骤b的化合物(40mg，0.228mmol)、来自实施例96的步骤b化合物(120mg，0.120mmol)及碳酸铯(186mg，0.571mmol)在乙腈(10mL)中的搅拌溶液在80℃下经加热过夜。混合物借助乙腈经由短硅藻土垫经过滤，且通过旋转蒸发移除所有挥发物。残余物通过RP-C18柱使用以0％至100％水及甲醇洗脱的ISCO
Figure BDA0003629760100006292
液体色谱法经纯化，不使用修饰剂。产量0.092g，产率63％。通过LCMS发现的离子：[(M+H)]+＝639.2,[(M+2H)/2]+＝320.2。
实施例98.合成缀合物27
根据一般缀合程序使用具有Fc(SEQ ID NO:72)(DAR 5.75)的实施例96(Int-66)中描述的炔衍生小分子来制备。产量50.4mg，产率50％。MALDI-TOF＝62,767。
实施例99.合成Int-68
Figure BDA0003629760100006301
步骤a.
Figure BDA0003629760100006302
向辛甘醇(5g，13.5mmol)在无水DMF中的0℃溶液中缓慢添加氢化钠(0.32g，13.5mmol，60％在矿物油中)。溶液在冰浴上经搅拌持续10分钟，且接着添加2-(4-溴丁基)异吲哚啉-1,3-二酮(3.8g，13.5mmol)。反应溶液在室温下经搅拌持续16小时，用叔丁醇(1ml)淬灭且经浓缩。残余物溶解在DCM(50ml)中且溶液用水(3x，10ml)、盐水(10ml)洗涤，接着经硫酸钠干燥，过滤且浓缩。粗产物通过RPLC(5％至60％乙腈/水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。产量2.78g，产率36％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝572.8。
步骤b.
Figure BDA0003629760100006311
向步骤-a产物(1.78g，3.1mmol)在DCM(20ml)中的溶液中添加三乙胺(0.86ml，6.2mmol)，随后添加甲烷磺酰氯(0.26ml，3.43mmol)。反应溶液经搅拌持续2小时，且接着用aq HCl(1N，2x，5ml)、水(10ml)、盐水洗涤，且经浓缩以得到粗产物。产量1.9g，产率97％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝649.8。
步骤c.
Figure BDA0003629760100006312
步骤-b产物(0.65g，1mmol)、3-(哌嗪-1-基)丙酸甲酯(0.63g，1mmol)、K2CO3(0.55g，4mmol)在无水乙腈(10ml)中的混合物在70℃下经加热过夜。溶液经冷却、过滤、浓缩且通过RPLC(5％至90％乙腈/水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。产量0.54g，产率74％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝726.8。
步骤d.
Figure BDA0003629760100006321
向步骤-c产物(600mg，0.82mmol)在EtOH(5mL)中的溶液中添加水合肼(205mg，4.1mmol)且溶液在50℃下经搅拌持续2小时。溶液经冷却、过滤、浓缩，得到粗产物，其无需进一步纯化即使用。产量281mg，产率57％，通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝596.0。
步骤e.
Figure BDA0003629760100006322
步骤-d产物(140mg，0.24mmol)、5-氯-2-氟硝基苯(165mg，0.94mmol)、K2CO3(100mg，0.72mmol)在无水DMF中的混合物在70℃下经加热持续2小时。溶液经冷却、过滤、浓缩且通过RPLC(5％至40％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。产量100mg，产率57％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝751.1。
步骤f.
Figure BDA0003629760100006331
步骤-e产物(190mg，0.25mmol)在乙酸(5ml)中的溶液在70℃下经加热，且小心地添加锌(82mg，1.26mmol)。溶液在70℃下经搅拌持续10分钟，此时LCMS显示反应完成。粗混合物经过滤，且无需进一步纯化即用于下一步骤。LC/MS[M+H]+＝720.8。
步骤g.
Figure BDA0003629760100006332
向步骤-f产物在乙酸(5ml)中的溶液中添加2-氯-1,1,1-三甲氧基乙烷(300mg，1.5mmol)。反应物在70℃下经搅拌持续1.5小时。溶液经冷却、浓缩且通过RPLC(5％至50％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。产量154mg，产率79％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝778.8。
步骤h.
Figure BDA0003629760100006333
向来自实施例48的产物(2'-氧代-1',2'-二氢螺[哌啶-4,3'-吡咯并[2,3-c]吡啶]-1-羧酸叔丁酯，53.7mg，0.178mmol)在无水DMF(2ml)中的溶液中添加Cs2CO3(116mg，0.35mmol)，随后添加步骤-g产物(69mg，0.088mmol)。反应物在室温下经搅拌持续4小时，且溶液经过滤，浓缩且通过RPLC(5％至50％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。产量71mg，产率76％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝1046.6。
步骤i.
Figure BDA0003629760100006341
向步骤-h产物(71mg，0.068mmol)在冰上的THF:MeOH:H2O(v:v:v＝3:1:1)的溶剂混合物中的溶液中添加LiOH(3.3mg，0.14mmol)。溶液在室温下经搅拌持续1小时，经浓缩且通过RPLC(5％至50％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。产量50mg，产率72％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝1031.8。
步骤j.
Figure BDA0003629760100006342
向步骤-i产物(50mg，0.049mmol)在DCM(3ml)中的溶液中添加EDCI(27mg，0.145mmol)及四氟苯基(32.5mg，0.196mmol)。溶液在室温下经搅拌持续2小时，经浓缩且通过ACCQ及RPLC(5％至50％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。产量17.3mg，产率31％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝1180.4。
实施例100.合成Int-69
Figure BDA0003629760100006351
步骤a.
Figure BDA0003629760100006352
向来自实施例80(Int-56)的步骤-c产物(32mg，0.19mmol)在无水DMF中的溶液中添加Cs2CO3(142mg，0.35mmol)，随后添加实施例99中的步骤-g产物(60mg，0.08mmol)。反应溶液在室温下经搅拌持续4小时，且溶液经过滤，浓缩且通过RPLC(5％至50％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。产量58mg，产率71％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝1018.4。
步骤b.
Figure BDA0003629760100006361
向步骤-a产物(58mg，0.057mmol)在冰上的THF:MeOH:H2O(v:v:v＝3:1:1)的溶剂混合物中的溶液中添加LiOH(2.7mg，0.114mmol)。溶液接着在室温下经搅拌持续1小时，经浓缩且通过RPLC(5％至50％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。产量41mg，产率71％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝1004.4。
步骤c.
Figure BDA0003629760100006362
向步骤-b产物(41mg，0.04mmol)在DCM(3ml)中的溶液中添加EDCI(23mg，0.12mmol)及四氟苯基(26.5mg，0.16mmol)。溶液接着在室温下经搅拌持续2小时，经浓缩且通过制备型HPLC(5％至50％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。产量21mg，产率45％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝1152.2。
实施例101.合成Int-71及Int-72
Figure BDA0003629760100006371
步骤a.
Figure BDA0003629760100006372
向4-溴-3-吡啶胺(5.43g，30.79mmol)、3-(苯基甲氧基)环丁烷羧酸(5.4g，25.66mmol)及N-甲基吗啉(14.1mL，128.29mmol)在DMF(16mL)中的溶液中在氮气下在0℃下滴加二苯基次膦酰氯(7.43g，30.79mmol)。所述反应混合物在室温下经搅拌持续16小时。反应混合物用乙酸乙酯稀释且用5％柠檬酸、水及盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，过滤，接着经浓缩。残余物通过正相液体色谱法(ISCO
Figure BDA0003629760100006373
0％至50％乙酸乙酯及己烷)经纯化。产量4.86g，产率52.5％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝361.0。
步骤b.
Figure BDA0003629760100006374
在室温下向无水DMF(10mL)中的来自先前步骤的产物(2.87g，4.68mmol)中添加Cs2CO3(3.05g，9.35mmol)。所得混合物在室温下经搅拌持续30分钟，接着经冷却至0℃，之后滴加PMB-Cl(0.72mL，5.14mmol)。移除冰浴，接着反应物在室温下经搅拌持续1小时。反应用水淬灭且反应物用乙酸乙酯(2x)萃取。有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，接着经浓缩。残余物通过正相液体色谱法(ISCO
Figure BDA0003629760100006381
0％至35％乙酸乙酯及己烷)经纯化。产量2.76g，产率122.4％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝481.0。
步骤c.
Figure BDA0003629760100006382
标题化合物类似于实施例72(Int-51)步骤d来制备。材料通过正相液体色谱法(ISCO
Figure BDA0003629760100006383
0％至5％甲醇及二氯甲烷)经纯化。产量652.0mg，产率28.5％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝400.1。
步骤d.
Figure BDA0003629760100006384
标题化合物类似于实施例72(Int-51)步骤g来制备。材料通过正相液体色谱法(ISCO
Figure BDA0003629760100006385
0％至5.5％甲醇及二氯甲烷)经纯化。产量120.0mg，产率26.3％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝281.2。
步骤e.
Figure BDA0003629760100006391
向先前步骤中的产物(125.0mg，0.446mmol)在甲醇(4.5mL)中的溶液中馈入Pd(OH)2(125.2mg，0.18mmol)、甲酸铵(8.6mg，0.134mmol)及来自气球的H2气体，接着在40℃下加热持续3天。反应混合物经由硅藻土垫经过滤，用甲醇洗涤，接着经浓缩。残余物通过反相液体色谱法(ACCQ，0％至30％乙腈及水，不使用修饰剂)经纯化。产量34.5mg，产率40.7％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝191.2。
步骤f.
Figure BDA0003629760100006392
标题化合物类似于实施例55(Int-43)步骤d来制备，其中使用来自先前步骤的产物。材料通过反相液体色谱法(ACCQ，5％至30％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。顺式/反式极性峰：产量14.13mg，产率11.8％；顺式/反式极性较小的峰：产量14.66mg，产率12.2％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝675.2。
实施例102.合成Int-73
Figure BDA0003629760100006401
步骤a.
Figure BDA0003629760100006402
2-(乙硫基)乙胺(1.0g，7.06mmol)在水(0.71M，10mL)中的溶液经冷却至0℃且用水(0.42M，28.7mL)中的KMnO4(1.9g，12.0mmol)及HCl(1.00mL，12.00mmol)处理。反应在0℃下经搅拌直至完成，接着经由硅藻土垫经过滤。滤液在减压下经浓缩。残余物经吸收到DCM中，接着用KOH(1.5eq，594mg)在水(21.2M，0.5mL)中的溶液处理且经浓缩。残余物与DCM一起经研磨，接着倾倒，得到带有一些棕色的澄清油状残余物。此材料无需纯化继续用于下一步骤。产量887mg，产率91.7％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝138.2。
步骤b.
Figure BDA0003629760100006403
EtOH(20mL)中的来自先前步骤的产物(0.6g，4.15mmol)、5-氯-2-氟-硝基苯(0.73g，4.15mmol)及Et3N(1.75mL，12.46mmol)在室温下经搅拌持续16小时。反应混合物经浓缩，接着残余物溶解在DCM中且用饱和NH4Cl溶液洗涤。水层用DCM(1x)反萃取。经合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤，接着经浓缩。此材料无需纯化继续用于下一步骤，产量1.48g，产率122％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝293.0。
步骤c.
Figure BDA0003629760100006411
在0℃下向来自先前步骤的产物(1.48g，4.07mmol)在EtOH(16mL)及AcOH(1.46mL，25.35mmol)中的溶液中添加Zn粉(1.02g，15.2mmol)。移除冰浴，接着在35℃下持续40分钟。反应混合物经由硅藻土垫经过滤，得到棕色固体P。此材料无需纯化继续用于下一步骤。产量1.33g，产率99.8％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝263.05。
步骤d.
Figure BDA0003629760100006412
标题化合物类似于实施例81(Int-57)中的步骤d来制备，其中使用2-氯-1,1,1-三甲氧基乙烷(7当量)且反应在70℃下经加热持续6小时。材料通过正相液体色谱法(ISCO
Figure BDA0003629760100006415
0％至100％乙酸乙酯及己烷)经纯化。产量448.5mg，产率27.6％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝323.0。
步骤e.
Figure BDA0003629760100006413
标题化合物类似于实施例68(Int-47)步骤d来制备，其中使用来自先前步骤的产物及来自实施例48的步骤-d的产物。材料通过正相液体色谱法(ISCO
Figure BDA0003629760100006414
0％至6％甲醇及二氯甲烷)经纯化。产量84.42mg，产率53.2％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝588.2。
步骤f.
Figure BDA0003629760100006421
标题化合物类似于实施例68(Int-47)步骤e来制备，其中使用来自先前步骤的产物。产量80.0mg，产率105.1％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝487.14。
步骤g：
Figure BDA0003629760100006422
标题化合物类似于实施例68(Int-47)步骤f来制备，其中使用来自先前步骤的产物。材料通过制备型HPLC(5％至32％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。产量56.2mg，产率46.4％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝731.2。
实施例103.合成Int-101
Figure BDA0003629760100006431
步骤a.
Figure BDA0003629760100006432
2-(乙硫基)乙胺(1.0g，7.06mmol)在水(0.71M，10mL)中的溶液经冷却至0℃且用水(0.42M，28.7mL)中的KMnO4(1.9g，12.0mmol)及HCl(1.00mL，12.00mmol)处理。反应在0℃下经搅拌直至完成，接着经由硅藻土垫经过滤。滤液在减压下经浓缩。残余物经吸收到DCM中，接着用KOH(1.5eq，594mg)在水(21.2M，0.5mL)中的溶液处理且经浓缩。残余物与DCM一起经研磨，接着倾倒，得到带有一些棕色的澄清油状残余物。此材料无需纯化继续用于下一步骤。产量887mg，产率91.7％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝138.2。
步骤b.
Figure BDA0003629760100006433
EtOH(20mL)中的来自先前步骤的产物(0.6g，4.15mmol)、5-氯-2-氟-硝基苯(0.73g，4.15mmol)及Et3N(1.75mL，12.46mmol)在室温下经搅拌持续16小时。反应混合物经浓缩，接着残余物溶解在DCM中且用饱和NH4Cl溶液洗涤。水层用DCM(1x)反萃取。经合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤，接着经浓缩。此材料无需纯化继续用于下一步骤。产量1.48g，产率122％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝293.0。
步骤c.
Figure BDA0003629760100006441
在0℃下向来自先前步骤的产物(1.48g，4.07mmol)在EtOH(16mL)及AcOH(1.46mL，25.35mmol)中的溶液中添加Zn粉(1.02g，15.2mmol)。移除冰浴，接着在35℃下持续40分钟。反应混合物经由硅藻土垫经过滤，得到棕色固体P。此材料无需纯化继续用于下一步骤。产量1.33g，产率99.8％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝263.05。
步骤d.
Figure BDA0003629760100006442
标题化合物类似于实施例81(Int-57)中的步骤d来制备，其中使用2-氯-1,1,1-三甲氧基乙烷(7当量)且反应在70℃下经加热持续6小时。材料通过正相液体色谱法(ISCO
Figure BDA0003629760100006443
0％至100％乙酸乙酯及己烷)经纯化。产量448.5mg，产率27.6％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝323.0。
步骤e.
Figure BDA0003629760100006444
标题化合物类似于实施例68(Int-47)步骤d来制备，其中使用来自实施例102(Int-73)步骤d的产物及来自实施例80(Int-56)步骤c的产物。材料通过正相液体色谱法(ISCO
Figure BDA0003629760100006445
0％至6％甲醇及二氯甲烷)经纯化。产量37.6mg，产率26.9％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝560.2。
步骤f.
Figure BDA0003629760100006451
标题化合物类似于实施例68(Int-47)步骤e来制备，其中使用来自先前步骤的产物。产量34.6mg，产率101.9％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝459.8。
步骤g.
Figure BDA0003629760100006452
标题化合物类似于实施例68(Int-47)步骤f来制备，其中使用来自先前步骤的产物及作为溶剂的无水DMF。材料通过反相液体色谱法(5％至35％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。产量14.7mg，产率28.3％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝703.25。
实施例104.合成缀合物28
向Fc(SEQ ID NO:72，50mg，2.81ml，0.0008593mmol)在MES(10mM)及NaCl(150mM)中的溶液中添加0.81ml的BTTA(200mM，5.0ml)、Cu2SO4(80nM，6.25ml)、ZnCl2(1.0M，1.5ml)、2-氨基胍(1.0M，5.0ml)及NaOH(1.0M，1.2ml)的预混合溶液。接着添加抗坏血酸钠(42.6mg，0.215mmol)。在所有抗坏血酸钠通过轻柔地旋转反应混合物而溶解之后，Int-61(实施例85，14.4mg，0.0172mmol)在DMF(1.1ml)中的溶液分4等份每15分钟经添加。反应物继续再轻柔地经振荡持续3小时。所述反应物接着相继通过在蛋白A柱上的亲和力色谱法、尺寸排阻色谱法(参见一般缀合物纯化方案)经纯化。经纯化最终产物的Maldi TOF分析给出62,943Da的平均质量(DAR＝4.8)。产量(产率)：12.7mg，25.4％。
实施例105.合成Int-74
Figure BDA0003629760100006461
向来自实施例55(Int-43)的步骤-d产物(105mg，0.2mmol)在无水DMF(1ml)中的溶液中添加来自实施例80(Int-56)的步骤-c产物(55.6mg，0.2mmol)及Cs2CO3(97.7mg，0.3mmol)。所得混合物在室温下经搅拌持续5小时。所述混合物接着通过制备型HPLC(5％至70％乙腈及水)经纯化。产量125.9mg，产率82.9％。通过LCMS发现的离子：[M+Na]+＝782.2,[M+H]+＝760.2,[(M+2H)/2]+＝380.6。
实施例106.合成缀合物29
向叠氮基Fc(SEQ ID NO:72，5.54ml，95mg，1.627μmol)的溶液中添加DMF(1.4ml)、1.0M的氨基胍溶液(408μl，0.408mmol)及1.0M的氯化锌溶液(122μl，0.122mmol)、BTTAA(35mg，0.0814mmol)及Cu2SO4(6.5mg，0.0407mmol)在水(1ml)中的预混合溶液及抗坏血酸钠(80.8mg，0.408mmol)。在所得混合物的pH用硼酸盐缓冲液(500μl，1.0M)调整至约6.5之后，分四等份添加DMF(400μl)中的实施例105(Int-74)(21.4mg，0.0244mmol)，其中反应混合物在每次添加之后轻柔地经混合。反应物再轻柔地经振荡持续3小时。所述反应物接着相继通过在蛋白A柱上的亲和力色谱法、尺寸排阻色谱法(参见一般缀合物纯化方案)经纯化。经纯化最终产物的Maldi TOF分析给出62,601Da的平均质量(DAR＝4.3)。产量(产率)：34.8mg，36.6％。
实施例107.合成Int-75
Figure BDA0003629760100006471
向来自实施例80(Int-56)的步骤-c产物(20.8mg，0.0757mmol)在无水乙腈(0.5ml)中的溶液中添加无水乙腈(1ml)中的Cs2CO3(59.4mg，0.4790.182mmol)及来自实施例53(Int-39)的苯并咪唑(35mg，0.063mmol)。所得混合物在40℃至80℃下经加热持续2小时。所述反应物接着经冷却至室温且通过HPLC(5％至60％乙腈及水，0.1％TFA)经纯化。产量16.4mg，产率22.9％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝793.8,[(M+2H)/2]+＝397.4。
实施例108.合成缀合物30
标题化合物类似于实施例106(缀合物29)来制备，其中用Int-75(实施例107)置换Int-74(实施例105)。经纯化最终产物的Maldi TOF分析给出63,438Da的平均质量(DAR＝4.9)。产量(产率)：22.1mg，46.2％。
实施例109.合成Int-76
Figure BDA0003629760100006481
步骤a.
Figure BDA0003629760100006482
经火焰干燥的反应烧瓶用氮气填充且馈入3-(氯磺酰基)丙酸甲酯(1.87g，10mmol)及无水THF(10ml)。所述溶液在冰水浴中经冷却之后，添加(R)-(-)-氨基-2-丙醇(826.1mg，11mmol)，随后添加DIPEA(1.29g，10mmol)。反应物在室温下经搅拌过夜。所述反应物接着经浓缩且直接地通过硅胶柱色谱法(120g，10％至90％EtOAC及己烷)经纯化。产量1.52g，产率67.5％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝226。
步骤b.
Figure BDA0003629760100006483
向步骤-a产物(1.52g，6.75mmol)在MeOH(5ml)中的溶液中添加水(5ml)中的KOH(841.7mg，15mmol)。所得混合物在室温下经搅拌过夜。所述混合物接着通过二恶烷(4ml)中的4N HCl溶液经酸化。通过旋转蒸发移除有机溶剂。剩余的水层经冻干以产生所需产物及NaCl的白色混合物。粗产物再溶解在MeOH(约10ml)中，且过滤出KCl。滤液通过旋转蒸发经浓缩，且产物进一步在高真空中经干燥。产量1.43g，定量产率。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝212.0,[M＝H]-＝210.0。
步骤c.
Figure BDA0003629760100006491
向步骤-b产物(422.5mg，2mmol)及HATU(817.4mg，2.15mmol)在无水DMF(2ml)中的溶液中添加己-5-炔-1-胺HCl(293.9mg，2.2mmol)及DIPEA(413.2mg，3.2mmol)。反应混合物经搅拌持续3小时，接着直接地通过HPLC(5％至40％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。产量378mg，产率65％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝291.0,[M-H]-＝290.0。
步骤d.
Figure BDA0003629760100006492
向步骤-c产物(378mg，1.3mmol)在DCM(5ml)中的溶液中添加吡啶(237.3mg，3mmol)及氯甲酸4-硝基苯酯(325.2mg，3.1mmol)。反应混合物经搅拌持续5小时，接着通过旋转蒸发经浓缩且通过硅胶柱色谱法(0％至100％EtOAc及己烷)经纯化。产量252.7mg，产率42.7％。通过LCMS发现的离子：[M+Na]+＝477.8,[(M+H]+＝455.8。
步骤e.
Figure BDA0003629760100006493
向螺-哌啶(如WO 2015158653中描述制备，26.7mg，0.04mmol)在无水DMF(0.5ml)中的溶液中添加步骤-d产物(27.3mg，0.06mmol)及DIPEA(8mg，0.06mmol)。反应混合物经搅拌持续1小时，接着直接地通过HPLC经纯化：5％至45％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂。产量15.2mg，产率43.5％。通过LCMS发现的离子：[M+Na]+＝779.6,[M+H]+＝757.6,[(M+2H)/2]+＝379.4。
实施例110.合成Int-77
Figure BDA0003629760100006501
步骤a.
Figure BDA0003629760100006502
经火焰干燥的反应烧瓶用氮气填充且馈入3-(氯磺酰基)丙酸甲酯(1.87g，10mmol)及无水THF(10ml)。所述溶液在冰水浴中经冷却之后，添加(R)-(-)-氨基-2-丙醇(826.1mg，11mmol)，随后添加DIPEA(1.29g，10mmol)。反应物在室温下经搅拌过夜。所述反应物接着通过旋转蒸发经浓缩且通过硅胶柱色谱法(10％至90％EtOAc及己烷)经纯化。产量1.52g，67.5mmol。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝226。
步骤b.
Figure BDA0003629760100006511
在5分钟内分批向步骤-a产物(1.29g，5.73mmol)在无水DCM(25ml)中的溶液中添加吡啶(474.6mg，6mmol)及氯甲酸4-硝基苯酯(3.44g，17.2mmol)。所得混合物在室温下经搅拌过夜。所述反应物接着通过旋转蒸发经浓缩且通过硅胶柱色谱法(0％至90％EtOAc及己烷)经纯化。产量1.09g，产率48.7％。通过LCMS发现的离子：[M+Na]+＝412.8,[M+H]+＝390.8。
步骤c.
Figure BDA0003629760100006512
向螺-哌啶(如在WO 2015158653中描述制备，221mg，0.5mmol)在无水DMF:THF(1:1，1ml)中的溶液中添加吡啶(94mg，1.2mmol)及步骤-b产物(234mg，0.6mmol)。所得混合物在40℃下经加热过夜。所述混合物接着通过旋转蒸发经浓缩且通过RPLC(5％至70％乙腈及水)经纯化。产量284.2mg，产率82％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝692.6,[(M+2H)/2]+＝347.0。
步骤d.
Figure BDA0003629760100006513
步骤-c产物(284.3mg，0.41mmol)溶解在MeOH(5ml)中，在冰水浴中经冷却且用LiOH(20mg，0.82mmol)在水(2ml)中的溶液处理。反应混合物经搅拌持续6小时。所述混合物的pH接着用二恶烷(100ml)中的4N HCl溶液调整至约6.5，接着所述溶液通过旋转蒸发经干燥。产物及LiCl的混合物再溶解在MeOH中。过滤出盐，且滤液经浓缩且进一步在高真空下经干燥。产量278mg，定量产率。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝679.2,[(M+2H)/2]+＝340.0。
步骤e.
Figure BDA0003629760100006521
向步骤-d产物(25.5mg，0.0375mmol)及HATU(17.1mg，0.045mmol)在无水DMF(0.5ml)中的溶液中添加2-[2-(2-丙炔氧基)乙氧基]乙胺(8.6mg，0.06mmol)及DIPEA(12.9mg，0.1mmol)。所述反应物在室温下经搅拌持续30分钟。所述反应物接着直接地通过HPLC(5％至45％乙腈及水)经纯化。产量27.9mg，产率90.7％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝803.6,[(M+2H)/2]+＝402.4。
实施例111.合成Int-78
Figure BDA0003629760100006522
标题化合物类似于实施例109(Int-77)来制备，其中3-(氯磺酰基)丙酸甲酯用氯磺酰基乙酸乙酯置换。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝789.6,[(M+2H)/2]+＝395.4。
实施例112.合成Int-79
Figure BDA0003629760100006531
步骤a.
Figure BDA0003629760100006532
来自实施例55(Int-43)的产物(50mg，0.07mol)在室温下在二恶烷(5mL)中的4NHCl中经搅拌持续30分钟。通过旋转蒸发仪移除溶剂，且残余物在高真空下经干燥持续4小时，提供呈澄清油状物的胺HCl盐。产率100％。LC/MS[M+H]+＝788.2。
步骤b.
Figure BDA0003629760100006541
向氯磺酰基异氰酸酯(21mg，0.15mmol)在无水DCM(1mL)中的通过冰水浴冷却至0℃的搅拌溶液中添加叔丁醇(11mg，0.15mmol，在0.5mL DCM中)。所述混合物在0℃下经搅拌持续30分钟。来自先前步骤的中间体(50mg，0.07mmol)及DIPEA(37mg，0.29mmol)溶解在DCM(2mL)中且在5分钟的时段内经滴加到异氰酸酯/叔丁醇混合物中。反应物经搅拌持续30分钟(逐渐加温至室温)。移除溶剂，且粗反应混合物通过反相HPLC(10％-85％乙腈/水，30分钟梯度，不使用修饰剂)经纯化。汇集纯洗脱份且冻干以提供产物。产率50％。LC/MS[M+H]+＝868.2。
实施例113.合成Int-102
Figure BDA0003629760100006542
步骤a.
Figure BDA0003629760100006551
boc-保护的螺中间体(150mg，0.28mmol，如在WO 2015158653中描述制备)在室温下在1:1TFA/DCM(8mL)中经搅拌持续30分钟。通过旋转蒸发仪移除溶剂且残余物在高真空下经干燥以提供中间体，其无需进一步纯化即继续用于后续操作。产率100％。LC/MS[M+H]+＝442.2。
步骤b.
Figure BDA0003629760100006552
羟基-Peg8-叔丁基羧酸酯(508mg，1.01mmol)经添加到氯磺酰基异氰酸酯(144mg，1.01mmol)在无水二氯甲烷(2mL)中的通过冰水浴冷却至0℃的搅拌溶液中。反应经搅拌持续30分钟，此时DIPEA(200mg，2.38mmol)及来自此实施例的步骤a.的中间体(150mg，0.28mmol，TFA盐)在DCM(3mL)中的混合物经滴加到搅拌异氰酸酯/醇混合物中。使所得反应物在1小时的时段内加温至室温。添加甲醇(1mL)且通过旋转蒸发仪移除溶剂。粗材料通过反相HPLC(5％-95％乙腈在DI水中，含有0.1％TFA，30分钟梯度)经纯化。产率38％。LC/MS[M-tBu+2H]/2＝.494.6
实施例114.合成Int-80
Figure BDA0003629760100006561
DMF(0.5mL)中的HATU(17mg，0.04mmol)经滴加到来自实施例112(Int-79)的中间体(20mg，0.03mmol)、环丙基乙酸(4.0mg，0.04mmol)、HATU(17mg，0.04mmol)及DIPEA(15mg，0.12mmol)在DMF(1mL)中的搅拌溶液中。所述反应经搅拌持续45分钟。粗混合物通过反相HPLC(5％-85％乙腈在DI水中，含有0.1％TFA，30分钟梯度)经纯化。汇集纯洗脱份且冻干以提供呈澄清薄膜状的产物。产率80％。LC/MS[M+H]+＝770.2。
实施例115.合成Int-81
Figure BDA0003629760100006562
标题化合物类似于Int-80(实施例114)由实施例112(Int-79)中描述的化合物及5-甲基异恶唑-3-羧酸来制备。产率56％。LC/MS[M+H]+＝797.2。
实施例116.合成Int-82
Figure BDA0003629760100006563
标题化合物类似于Int-80(实施例114)由实施例112(Int-79)中描述的化合物及环丁基羧酸来制备。产率80％。LC/MS[M+H]+＝770.2。
实施例117.合成Int-83
Figure BDA0003629760100006571
标题化合物类似于Int-80(实施例114)由实施例112步骤a.中描述的化合物及3-吡咯烷-1-基丙酸来制备。产率64％。LC/MS[M+H]+＝813.4。
实施例118.合成Int-84
Figure BDA0003629760100006572
向CH2Cl2(2mL)中的来自实施例59步骤B的粗1-[(5-氯-1-{3-[(2-{2-[2-(2-丙-2-炔氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙基)磺酰基]丙基}苯并咪唑-2-基)甲基]螺[2-吡咯啉并[2,3-c]吡啶-3,4'-哌啶]-2-酮(50mg，0.07mmol)中添加Hünigs碱(0.04mL，0.28mmol)，随后添加环丙烷磺酰氯(0.01mL，0.10mmol)。所述溶液经搅拌持续4小时。移除过量溶剂，且粗材料通过反相HPLC(0％-100％CH3CN/H2O，使用0.1％TFA)经纯化。产量25mg，产率45％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝792.2。
实施例119.合成Int-85
Figure BDA0003629760100006581
类似于实施例118(Int-84)由粗1-[(5-氯-1-{3-[(2-{2-[2-(2-丙-2-炔氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙基)磺酰基]丙基}苯并咪唑-2-基)甲基]螺[2-吡咯啉并[2,3-c]吡啶-3,4'-哌啶]-2-酮及乙烷磺酰氯来制备标题化合物。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝780.2。
实施例120.合成Int-86
Figure BDA0003629760100006582
类似于实施例118(Int-84)由粗1-[(5-氯-1-{3-[(2-{2-[2-(2-丙-2-炔氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙基)磺酰基]丙基}苯并咪唑-2-基)甲基]螺[2-吡咯啉并[2,3-c]吡啶-3,4'-哌啶]-2-酮及2-丙烷磺酰氯来制备标题化合物。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝794.2。
实施例121.合成Int-87
Figure BDA0003629760100006583
类似于实施例118(Int-84)由粗1-[(5-氯-1-{3-[(2-{2-[2-(2-丙-2-炔氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙基)磺酰基]丙基}苯并咪唑-2-基)甲基]螺[2-吡咯啉并[2,3-c]吡啶-3,4'-哌啶]-2-酮及氯甲酸异丁酯来制备标题化合物。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝788.2。
实施例122.合成Int-88
Figure BDA0003629760100006591
类似于实施例59(Int-44)由粗1-[(5-氯-1-{3-[(2-{2-[2-(2-丙-2-炔氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙基)磺酰基]丙基}苯并咪唑-2-基)甲基]螺[2-吡咯啉并[2,3-c]吡啶-3,4'-哌啶]-2-酮及1-三氟甲基环丙烷-1-羧酸来制备标题化合物。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝824.2。
实施例123.合成Int-89
Figure BDA0003629760100006592
类似于实施例59(Int-44)由粗1-[(5-氯-1-{3-[(2-{2-[2-(2-丙-2-炔氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙基)磺酰基]丙基}苯并咪唑-2-基)甲基]螺[2-吡咯啉并[2,3-c]吡啶-3,4'-哌啶]-2-酮及1-(boc-氨基)环丙烷羧酸来制备标题化合物。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝871.2。
实施例124.合成Int-90
Figure BDA0003629760100006601
类似于实施例59(Int-44)由粗1-[(5-氯-1-{3-[(2-{2-[2-(2-丙-2-炔氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙基)磺酰基]丙基}苯并咪唑-2-基)甲基]螺[2-吡咯啉并[2,3-c]吡啶-3,4'-哌啶]-2-酮及N-Boc-1-氨基环丁烷羧酸来制备标题化合物。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝885.2。
实施例125.合成Int-91
Figure BDA0003629760100006602
类似于实施例118(Int-84)由粗1-({5-氯-1-[4-(2-{2-[2-(2-丙-2-炔氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)丁基]苯并咪唑-2-基}甲基)螺[2-吡咯啉并[2,3-c]吡啶-3,4'-哌啶]-2-酮及氯甲酸异丁酯来制备标题化合物。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝754.2。
实施例126.合成Int-92
Figure BDA0003629760100006603
类似于实施例118(Int-84)由粗1-({5-氯-1-[4-(2-{2-[2-(2-丙-2-炔氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)丁基]苯并咪唑-2-基}甲基)螺[2-吡咯啉并[2,3-c]吡啶-3,4'-哌啶]-2-酮及氯甲酸异丙酯来制备标题化合物。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝740.4。
实施例127.合成Int-93
Figure BDA0003629760100006611
类似于实施例118(Int-84)由粗1-({5-氯-1-[4-(2-{2-[2-(2-丙-2-炔氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)丁基]苯并咪唑-2-基}甲基)螺[2-吡咯啉并[2,3-c]吡啶-3,4'-哌啶]-2-酮及焦碳酸二叔戊酯来制备标题化合物。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝768.4。
实施例128.合成Int-94
Figure BDA0003629760100006612
类似于实施例118(Int-84)由粗1-({5-氯-1-[4-(2-{2-[2-(2-丙-2-炔氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)丁基]苯并咪唑-2-基}甲基)螺[2-吡咯啉并[2,3-c]吡啶-3,4'-哌啶]-2-酮及氯甲酸新戊酯来制备标题化合物。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝768.3。
实施例129.合成Int-95
Figure BDA0003629760100006621
类似于实施例118(Int-84)由粗1-({5-氯-1-[4-(2-{2-[2-(2-丙-2-炔氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)丁基]苯并咪唑-2-基}甲基)螺[2-吡咯啉并[2,3-c]吡啶-3,4'-哌啶]-2-酮及异氰酸异丙酯来制备标题化合物。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝739.2。
实施例130.合成Int-96
Figure BDA0003629760100006622
类似于实施例118(Int-84)由粗1-({5-氯-1-[4-(2-{2-[2-(2-丙-2-炔氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)丁基]苯并咪唑-2-基}甲基)螺[2-吡咯啉并[2,3-c]吡啶-3,4'-哌啶]-2-酮及异氰酸叔丁酯来制备标题化合物。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝753.4。
实施例131.合成Int-97
Figure BDA0003629760100006623
类似于实施例118(Int-84)由粗1-({5-氯-1-[4-(2-{2-[2-(2-丙-2-炔氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)丁基]苯并咪唑-2-基}甲基)螺[2-吡咯啉并[2,3-c]吡啶-3,4'-哌啶]-2-酮及异氰酸环丙酯来制备标题化合物。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝737.2。
实施例132.合成Int-98
Figure BDA0003629760100006631
向CH3CN(10mL)中的来自实施例80(Int-56)步骤c的2-氧代螺[2-吡咯啉并[2,3-c]吡啶-3,3'-氮杂环丁烷]-10-羧酸叔丁酯(40mg，0.14mmol)中添加Cs2CO3(118mg，0.36mmol)，随后添加1-{4-[5-溴-2-(氯甲基)苯并咪唑基]丁氧基}-2-{2-[2-(2-丙-2-炔氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙烷(85mg，0.15mmol，类似于实施例50来制备)。溶液经搅拌持续16小时。移除过量溶剂，且粗材料通过反相HPLC(0％-100％CH3CN/H2O，使用0.1％TFA)经纯化。产量59mg，产率53％。通过LC/MS发现的离子，[M+H]+＝770.2。
实施例133.合成Int-99
Figure BDA0003629760100006632
步骤a.
Figure BDA0003629760100006641
来自实施例132(Int-98)的1-({5-溴-1-[4-(2-{2-[2-(2-丙-2-炔氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)丁基]苯并咪唑-2-基}甲基)-2-氧代螺[2-吡咯啉并[2,3-c]吡啶-3,3'-氮杂环丁烷]-10-羧酸叔丁酯(40mg，0.05mmol)及二恶烷(6mL)中的4N HCl的溶液经搅拌持续2小时。移除过量溶剂，且粗材料无需进一步纯化即用于下一步骤。通过LC/MS发现的离子，[M+H]+＝670.2。
步骤b.
Figure BDA0003629760100006642
向CH2Cl2(2mL)中的粗1-({5-溴-1-[4-(2-{2-[2-(2-丙-2-炔氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)丁基]苯并咪唑-2-基}甲基)螺[2-吡咯啉并[2,3-c]吡啶-3,3'-氮杂环丁烷]-2-酮(35mg，0.05mmol)中添加Hünigs碱(0.04mL，0.30mmol)，随后添加氯甲酸异丙酯(0.01mL，0.10mmol)。所述溶液经搅拌持续4小时。移除过量溶剂，且粗材料通过反相HPLC(0％-100％CH3CN/H2O，使用0.1％TFA)经纯化。产量20mg，产率50％。通过LC/MS发现的离子，[M+H]+＝756.2。
实施例134.合成Int-100
Figure BDA0003629760100006651
向CH3CN(4mL)中的来自实施例97(Int-67步骤b)的1-环丙基-4-咪唑啉并[4,5-c]吡啶-2-酮(14mg，0.08mmol)中添加Cs2CO3(82mg，0.25mmol)，随后添加1-{4-[5-溴-2-(氯甲基)苯并咪唑基]丁氧基}-2-{2-[2-(2-丙-2-炔氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙烷(45mg，0.08mmol，类似于实施例50来制备)。溶液经搅拌持续16小时。移除过量溶剂，且粗材料通过反相HPLC(0％-100％CH3CN/H2O，使用0.1％TFA)经纯化。产量25mg，产率44％。通过LC/MS发现的离子，[M+H]+＝670.2。
实施例135.合成缀合物31
根据一般缀合程序使用具有Fc(SEQ ID NO:72)叠氮基(DAR 6.0)的实施例120(Int-86)中描述的炔衍生小分子来制备。产量1.9mg，产率5.0％。MALDI-TOF＝60,340。
实施例136.合成缀合物32
根据一般缀合程序使用具有Fc(SEQ ID NO:72)(DAR 6.0)的实施例122(Int-88)中描述的炔衍生小分子来制备。产量10.7mg，产率15.0％。Maldi-TOF＝61,227。
实施例137.合成缀合物33
根据一般缀合程序使用具有Fc(SEQ ID NO:72)(DAR 6.0)的实施例130(Int-96)中描述的炔衍生小分子来制备。产量22.7mg，产率57.0％。Maldi-TOF＝62,080。
实施例138.RSV斑块减少测定
根据以下方案执行RSV斑块减少测定。第1天，HEP-2细胞以5x10E5个细胞/孔/500ul接种在24孔板中。第2天，细胞处于100％汇合度下之后，细胞以每孔大约30个斑块的病毒稀释度在DMEM+2％FBS感染缓冲液中感染且用化合物处理。抽吸出培养基且细胞用每孔90ul的病毒稀释液感染。接着，细胞用10ul的10X化合物处理，使化合物的终浓度在1nM-10uM之间。细胞在室温下孵育持续2小时，每15分钟摇动一次。2小时之后，移除接种物/化合物混合物。450ul的覆盖培养基(1份Avicel 2.5％；1份DMEM+2％FBS)经添加到孔中，且细胞用50ul的10X化合物处理，使化合物的终浓度为1nM-10uM。细胞在37℃下孵育持续6天。
对于染色及量化：感染的细胞板用100％甲醇固定持续10至30分钟。板用5％奶/PBS洗涤三次，1mL/孔。以1:1000稀释于5％奶/PBS中的一抗山羊抗RSV多克隆抗体(Chemicon Cat#AB1128)经置于每个孔上。板经置于振荡器中且在室温下孵育持续1小时，之后板用5％奶/PBS洗涤三次。过氧化物酶缀合二抗ImmunoPure兔抗山羊抗体IgG(H+L)(ThermoScientific,Cat#31402)以1:1000稀释于5％奶/PBS中且经添加到板上，之后板在室温下经置于振荡器上持续1小时。接着板用1xPBS洗涤三次，之后True Blue底物(KPL)以0.3ml/孔(对于12孔板)在室温下经添加持续10分钟。板用去离子水冲洗3次，经风干且计数斑块数。
斑块减少测定的结果提供在表9中。
表9.RSV斑块减少测定
Figure BDA0003629760100006661
Figure BDA0003629760100006671
实施例139.合成Int-110
Figure BDA0003629760100006672
步骤a.
Figure BDA0003629760100006673
经火焰干燥的反应烧瓶用氮气填充且馈入3-(氯磺酰基)丙酸甲酯(1.87g，10mmol)及无水THF(10ml)。所述溶液在冰水浴中经冷却之后，添加(R)-(-)-氨基-2-丙醇(826.1mg，11mmol)，随后添加DIPEA(1.29g，10mmol)。反应物在室温下经搅拌过夜。所述反应物接着通过旋转蒸发经浓缩且经由硅胶柱色谱法(120g，10％至90％EtOAc及己烷)经纯化。产量1.52g，67.5mmol。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝226。
步骤b.
Figure BDA0003629760100006681
在5分钟内分批向步骤-a产物(1.29g，5.73mmol)在无水DCM(25ml)中的溶液中添加吡啶(474.6mg，6mmol)及氯甲酸4-硝基苯酯(3.44g，17.2mmol)。所得混合物在室温下经搅拌过夜。所述混合物接着通过旋转蒸发经浓缩且经由硅胶柱色谱法(80g，0％至90％EtOAc及己烷)经纯化。产量1.09g，产率48.7％。通过LCMS发现的离子：[M+Na]+＝412.8,[M+H]+＝390.8。
步骤c.
Figure BDA0003629760100006682
向螺环哌啶起始材料(如在WO 201406411(通过引用以其整体并入)中描述制备，221mg，0.5mmol)在无水DMF:THF(1:1，1ml)中的溶液中添加吡啶(94mg，1.2mmol)及步骤-b产物(234mg，0.6mmol)。所得混合物在40℃下经加热过夜。所述混合物接着通过旋转蒸发经浓缩，且残余物通过RPLC(100g，5％至70％乙腈及水)经纯化。产量284.2mg，产率82％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝692.6,[(M+2H)/2]+＝347.0。
步骤d.
Figure BDA0003629760100006691
步骤-c产物(284.3mg，0.41mmol)溶解在MeOH(5ml)中，在冰水浴中经冷却且用LiOH(20mg，0.82mmol)在水(2ml)中的溶液处理。反应混合物经搅拌持续6小时。所述混合物的pH用二恶烷(100ml)中的4N HCl溶液调整至约6.5。通过旋转蒸发移除溶剂。粗产物再溶解在MeOH中，且过滤出NaCl。滤液经浓缩且进一步在高真空下经干燥。产量278mg，定量产率。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝679.2,[(M+2H)/2]+＝340.0。
步骤e.
Figure BDA0003629760100006692
向步骤-d产物(54.3mg，0.08mmol)在无水DMF(0.5ml)中的溶液中添加己-5-炔-1-胺HCl(16mg，0.12mmol)、HATU(38mg，0.1mmol)及DIPEA(65mg，0.5mmol)。反应混合物经搅拌持续1小时，接着直接地通过HPLC经纯化：5％至50％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂。产量59.2mg，产率85％。通过LCMS发现的离子：[M+Na]+＝779.6,[M+H]+＝757.6,[(M+2H)/2]+＝379.4。
步骤f.
Figure BDA0003629760100006701
反应烧瓶用氮气吹扫且馈入步骤-e产物(34.4mg，0.0394mmol)、DMF(0.5ml)及叠氮基-PEG4-TFP酯(20.8mg，0.0473mmol)。所述混合物接着用THPTA(6.8mg，0.0158mmol)、抗坏血酸钠(7.8mg，0.0394mmol)及Cu2SO4(1.6mg，0.01mmol)在水(0.5ml)中的预混合溶液处理。反应混合物经搅拌持续30分钟，接着与AcOH(0.06ml)混合且通过RPLC(50g，10％至100％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。合并收集的洗脱份且冻干。产量28.3mg，产率54.8％。通过LCMS发现的离子：[(M+2H)/2]+＝598.8。
实施例140.合成缀合物34
向Fc(83.6mg，0.001438mmol，SEQ ID NO:72)在PBS 7.4(4.29ml)中的溶液中添加活性酯(28mg，0.0216mmol，在实施例139Int-110中描述)在DMF(1.75ml)中的溶液。反应混合物的pH用硼酸盐缓冲液(0.2ml，pH 8.5，1.0M)调整至pH约8.0。所述反应物轻柔地经旋转持续5小时。缀合物通过使用Slide-d-lyzer G2渗析盒(10,000MWCO)渗析到25nM精氨酸，120nM NaCL及1％蔗糖pH 6.3缓冲液中经纯化。经纯化最终产物的Maldi TOF分析给出62,854Da的平均质量(DAR＝3.6)。产量50.3mg，产率60％。
实施例141.合成Int-115
Figure BDA0003629760100006702
标题化合物类似于实施例110(Int-77)来制备，其中2-[2-(2-丙炔氧基)乙氧基]乙胺用1-(2-丙炔基)哌嗪置换。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝784.6,[(M+2H)/2]+＝393.0。
实施例142.合成缀合物35
标题化合物类似于实施例106(缀合物29)来制备，其中实施例105Int-74中描述的炔衍生小分子用实施例141Int-115中描述的类似小分子置换。经纯化最终产物的MaldiTOF分析给出61,634Da的平均质量(DAR＝3.3)。产量(产率)：41.5mg，32％。
实施例143.合成Int-128
Figure BDA0003629760100006721
步骤a.
Figure BDA0003629760100006722
吡唑起始材料(305mg，2.42mmol)及炔丙基-PEG4-甲磺酸酯(0.50g，1.61mmol)溶解在乙腈(8mL)中的溶液在室温下用碳酸铯(0.787g，2.42mmol)处理过夜。搅拌持续12小时之后，LCMS显示起始材料完全消耗且形成烷基化吡唑异构体的1:1混合物。异构体通过RPLC(5％至100％乙腈/水，使用0.1％TFA)经分离。所需的异构体是首先通过RPLC洗脱的异构体。所述异构体的结构在质子NMR中通过NOE分析确定。产量为0.230g，41％产率。LC/MS[M+H]+＝341.2。
步骤b.
Figure BDA0003629760100006731
来自先前步骤的产物(0.230g，0.676mmol)溶解在MeOH(2.0mL)中，且用氢氧化钾(0.152g，2.70mmol)溶解在水(2.0mL)中的溶液处理。3小时之后LCMS显示完全水解。产物用乙酸酸化，且接着直接地装载到C18柱上且通过RPLC(10％至100％乙腈/水，使用0.1％TFA)经纯化。产量0.232g，产率105％。LC/MS[M+H]+＝327.2
步骤c.
Figure BDA0003629760100006732
来自先前步骤的产物(0.024g，0.0747mmol)、先前描述的哌啶核(描述在WO2015158653中，以其整体并入本文)(0.030g，0.068mmol)及二异丙基乙胺(0.071mL，0.407mmol)溶解在DMF(100μL)中，且在室温下用HATU(0.034g，0.088mmol)处理。LCMS在10分钟之后显示完全转化。粗反应物直接地经装载到C18柱上，且通过RPLC(10％至100％乙腈/水，使用0.1％TFA)经纯化。产量0.033g，产率56％。LC/MS[M+H]+＝749.8
步骤d.
Figure BDA0003629760100006741
来自先前步骤的产物(0.030g，0.0400mmol)及1-[15-氧代-15-(2,4,6-三氟苯氧基)-3,6,9,12-四氧杂十五烷-1-基]叠氮化物(0.020g，0.048mmol)溶解在DMF(750μL)中的溶液在室温下用THPTA(0.0069g，0.016mmol)、抗坏血酸钠(0.0079g，0.040mmol)及硫酸铜(0.0016g，0.010mmol)溶解在水(750μL)中的溶液处理。LCMS在20分钟之后显示完全转化。粗反应物直接地经装载到C18柱上，且通过RPLC(5％至100％乙腈/水，使用0.1％TFA)经纯化。汇集含有产物的洗脱份且通过旋转蒸发干燥。产量0.035g，产率68％。LC/MS[(M+2H)/2]+＝586.2
实施例144.合成缀合物36.
2,4,6-三氟苯基活性酯(0.0056g，0.0043mmol，描述在实施例143Int-128中)在DMF(0.5mL)中的溶液经添加到Fc(0.030g在1.56mL PBS中，pH 7.4，SEQ ID NO:72)中，接着用硼酸盐缓冲液(60μL，pH 8.5，1.0M)调整pH至约8.0。反应物是均质的。4小时之后的MaldiTOF质谱法显示平均MW＝65,345(DAR为7.0)。通过添加浓氢氧化铵(10μL)终止缀合反应。缀合物通过使用Slide-d-lyzer G2渗析盒(10,000MWCO)渗析到25nM精氨酸，120nM NaCL及1％蔗糖pH 6.3缓冲液中经纯化。
实施例145.合成Int-130
Figure BDA0003629760100006751
步骤a.
Figure BDA0003629760100006752
向螺环哌啶核(151.7mg，0.5mmol，先前在实施例68Int-47中描述)在无水DMF(1ml)中的溶液中添加Cs2CO3(244.4mg，0.75mmol)。混合物经搅拌持续10分钟之后，添加氯甲基苯并咪唑(136.6mg，0.5mmol，类似于实施例102Int-73来制备)。所得混合物在室温下经搅拌过夜且接着直接地通过HPLC(5％至80％乙腈及水)经纯化。产量136.4mg，产率50.5％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝539.8。
步骤b.
Figure BDA0003629760100006753
步骤-a产物(136.4mg，0.253mmol)溶解在TFA(1ml)中。所述溶液在室温下经搅拌持续1小时，接着通过旋转蒸发经浓缩且通过RPLC(100g，5％至80％乙腈及水)经纯化。呈TFA盐形式，产量131mg，定量产率。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝440.0。
步骤c.
Figure BDA0003629760100006761
向步骤-b产物(131mg，0.243mmol)在无水THF(2ml)及DMF(0.5ml)中的溶液中添加来自实施例110(Int-77)的步骤-b产物(123.6mg，0.3mmol)及吡啶(192.2mg，2.43mmol)。所得混合物在40℃下经搅拌持续20小时。粗反应混合物无需纯化即用于后续步骤。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝690.8。
步骤d.
Figure BDA0003629760100006762
步骤-c的溶液在冰水浴中经冷却且用水(1.5ml)中的LiOH(24mg，1mmol)处理。经搅拌持续1.5小时之后，所述反应混合物通过二恶烷(0.25ml)中的4N HCl溶液中和。所述混合物接着通过RPLC(100g，5％至80％乙腈及水)经纯化。经两个步骤，产量135.4mg，产率82.3％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝676.7,[(M+2H)/2]+＝339.0。
步骤e.
Figure BDA0003629760100006771
向步骤-d产物(40mg，0.0592mmol)在无水DMF(0.5ml)中的溶液中添加己-5-炔-1-胺HCl(13.4mg，0.1mmol)、HATU(27mg，0.071mmol)及DIPEA(65mg，0.5mmol)。所述反应混合物在室温下经搅拌持续1小时，且直接地通过HPLC(5％至50％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。产量42.5mg，产率82.5％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝755.6,[(M+2H)/2]+＝378.4。
实施例146.合成Int-131
Figure BDA0003629760100006772
标题化合物类似于实施例145(Int-83)来制备，其中螺环-哌啶核用类似的螺环-氮杂环丁烷核置换。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝727.6,[(M+2H)/2]+＝364.5。
编号的实施方案
1.一种由以下中任一者来描述的缀合物：式(D-I)、(M-I)、(1)或(2)
Figure BDA0003629760100006781
其中每个A1及每个A2独立地选自以下中任一者：式(A-I)-(A-VI)
Figure BDA0003629760100006782
其中
Q选自任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C2-C20烯基、任选取代的C3-C20环烯基、任选取代的C2-C20炔基、任选取代的C5-C20芳基、任选取代的C2-C15杂芳基及任选取代的C1-C20烷氧基；
R1、X1及Y各自独立地选自
Figure BDA0003629760100006791
Figure BDA0003629760100006792
及
Figure BDA0003629760100006793
R2、R3、X2、U1、M1、M2、K1及K2各自独立地选自OH、卤素、腈、硝基、任选取代的胺、任选取代的亚胺、任选取代的C1-C20烷氨基、任选取代的巯基、任选取代的羧基、任选取代的氰基、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20烯基、任选取代的C3-C20环烯基、任选取代的C2-C20炔基、任选取代的C5-C20芳基、任选取代的C2-C15杂芳基及任选取代的C1-C20烷氧基；
每个X3独立地选自任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C5-C15芳基及任选取代的C1-C15杂芳基；
每个Ua是环原子且独立地选自CH或N；
U2是环氮原子的取代基且选自任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C3-C20亚环烷基、任选取代的C2-C20亚杂环烷基、任选取代的C5-C15亚芳基、任选取代的C3-C15亚杂芳基及键；
U3是环原子的取代基且选自任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20烯基、任选取代的C3-C20环烯基、任选取代的C2-C20炔基、任选取代的C5-C20芳基、任选取代的C2-C15杂芳基、任选取代的C1-C20烷氧基、醇、任选取代的C1-C20烷氨基、任选取代的羧基、任选取代的C1-C20羰基、任选取代的氰基及任选取代的砜；
M3及M4各自独立地选自任选取代的C1-C20亚烷基及任选取代的C1-C20亚杂烷基；
W选自任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C5-C15芳基及任选取代的C3-C15杂芳基；
其中M3、M4及W各自独立地任选地不存在；
Ar选自任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C5-C15芳基及任选取代的C1-C15杂芳基；
每个R5选自H、任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C3-C20亚环烷基、任选取代的C3-C20亚杂环烷基、任选取代的C5-C15亚芳基及任选取代的C2-C15亚杂芳基；
每个R6选自任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C3-C20亚环烷基、任选取代的C3-C20亚杂环烷基、任选取代的C5-C15亚芳基及任选取代的C2-C15亚杂芳基；
V为-N-或-CH-；
h为0或1，
其中当h为1时，K3为
Figure BDA0003629760100006811
D为-O-、-CH2-或-NH-；
Rx及Ry各自独立地为C1-C3烷基；
b、g1及g2各自独立地为0、1、2或3；
p为1、2或3；
其中当h为0时，K3为
Figure BDA0003629760100006812
且Y为氮原子；
Rz选自-OH、卤素、腈、硝基、氨基、任选取代的胺、任选取代的亚胺、任选取代的C1-C20烷氨基、任选取代的巯基、任选取代的羧基、任选取代的氰基、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20烯基、任选取代的C3-C20环烯基、任选取代的C2-C20炔基、任选取代的C5-C20芳基、任选取代的C2-C15杂芳基及任选取代的C1-C20烷氧基；
n为1或2；
每个E独立地包含Fc结构域单体、白蛋白、白蛋白结合肽或Fc结合肽；
L为共价附接至E且附接至A1或者A1及A2中的每一者的每个Y的接头；且
T为1至20的整数；
式(D-I)、(M-I)、(1)及(2)中的每条波浪线指示每个L与每个E之间的共价连接；
或其药学上可接受的盐。
2.如实施方案1所述的缀合物，其中每个A1及每个A2独立地选自以下中任一者：式(A-IIIa)-(A-IIIf)
Figure BDA0003629760100006821
或其药学上可接受的盐。
3.如实施方案2所述的缀合物，其中每个A1及每个A2独立地选自以下中任一者：式(A-IIIb)-(A-IIIf)。
4.如实施方案1所述的缀合物，其中每个A1及每个A2独立地选自以下中任一者：式(A-IVa)-(A-IVf)
Figure BDA0003629760100006831
或其药学上可接受的盐。
5.如实施方案1至4中任一项所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-I)
Figure BDA0003629760100006832
其中每个A1及每个A2独立地选自式(A-I)-(A-VI)中任一者；
每个E独立地包含Fc结构域单体；
n为1或2；
T为1至20的整数；且
连接至E的波浪线指示每个A1-L-A2共价附接至E；
或其药学上可接受的盐。
6.如实施方案5所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-II)
Figure BDA0003629760100006841
或其药学上可接受的盐。
7.如实施方案6所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-II-1)
Figure BDA0003629760100006851
其中R7及R8各自独立地选自OH、卤素、腈、硝基、任选取代的胺、任选取代的亚胺、任选取代的C1-C20烷氨基、任选取代的巯基、任选取代的羧基、任选取代的氰基、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20烯基、任选取代的C3-C20环烯基、任选取代的C2-C20炔基、任选取代的C5-C20芳基、任选取代的C2-C15杂芳基及任选取代的C1-C20烷氧基；
或其药学上可接受的盐。
8.如实施方案7所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-II-2)
Figure BDA0003629760100006861
或其药学上可接受的盐。
9.如实施方案8所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-II-3)
Figure BDA0003629760100006862
或其药学上可接受的盐。
10.如实施方案9所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-II-4)
Figure BDA0003629760100006871
或其药学上可接受的盐。
11.如实施方案10所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-II-5)
Figure BDA0003629760100006872
其中L’是L的剩余部分，且
y1及y2各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
12.如实施方案9所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-II-6)
Figure BDA0003629760100006881
或其药学上可接受的盐。
13.如实施方案12所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-II-7)
Figure BDA0003629760100006882
Figure BDA0003629760100006891
其中L’是L的剩余部分，且
y1及y2各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
14.如9所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-II-8)
Figure BDA0003629760100006892
或其药学上可接受的盐。
15.如实施方案14所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-II-9)
Figure BDA0003629760100006901
其中L’是L的剩余部分，且
y1及y2各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
16.如实施方案8所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-II-10)
Figure BDA0003629760100006902
或其药学上可接受的盐。
17.如实施方案16所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-II-11)
Figure BDA0003629760100006911
或其药学上可接受的盐。
18.如实施方案17所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-II-12)
Figure BDA0003629760100006912
其中L’是L的剩余部分，且
y1及y2各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
19.如实施方案5所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-II-13)
Figure BDA0003629760100006921
或其药学上可接受的盐。
20.如实施方案19所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-II-14)
Figure BDA0003629760100006931
其中L’是L的剩余部分，且
y1及y2各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
21.如实施方案8所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-II-15)
Figure BDA0003629760100006932
Figure BDA0003629760100006941
或其药学上可接受的盐。
22.如实施方案21所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-II-16)
Figure BDA0003629760100006942
或其药学上可接受的盐。
23.如实施方案21所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-II-17)
Figure BDA0003629760100006951
其中L’是L的剩余部分，且
y1及y2各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
24.如实施方案5所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-III)
Figure BDA0003629760100006952
Figure BDA0003629760100006961
或其药学上可接受的盐。
25.如实施方案24所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-III-1)
Figure BDA0003629760100006962
或其药学上可接受的盐。
26.如实施方案25所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-III-2)
Figure BDA0003629760100006971
或其药学上可接受的盐。
27.如实施方案26所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-III-3)
Figure BDA0003629760100006972
Figure BDA0003629760100006981
其中L’是L的剩余部分，且
y1及y2各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
28.如实施方案5所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-IV)
Figure BDA0003629760100006982
或其药学上可接受的盐。
29.如实施方案28所述的缀合物，其中每个U3由以下来描述：
Figure BDA0003629760100006983
其中Ub为CH或O；且U4选自氨基、任选取代的胺、任选取代的亚胺、任选取代的C1-C20烷氨基、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C5-C15芳基、任选取代的C3-C15杂芳基及键。
30.如实施方案28所述的缀合物，其中每个U3选自：
Figure BDA0003629760100006991
31.如实施方案28至30中任一项所述的缀合物，其中Ua为N且p为1或2；或Ua为CH且p为1、2或3。
32.如实施方案28所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-1)
Figure BDA0003629760100006992
Figure BDA0003629760100007001
或其药学上可接受的盐。
33.如实施方案32所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-2)
Figure BDA0003629760100007002
或其药学上可接受的盐。
34.如实施方案28所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-3)
Figure BDA0003629760100007011
或其药学上可接受的盐。
35.如实施方案34所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-4)
Figure BDA0003629760100007012
或其药学上可接受的盐。
36.如实施方案35所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-5)
Figure BDA0003629760100007021
其中L’是L的剩余部分，且
y1及y2各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
37.如实施方案34所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-6)
Figure BDA0003629760100007031
或其药学上可接受的盐。
38.如实施方案37所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-7)
Figure BDA0003629760100007032
Figure BDA0003629760100007041
其中L’是L的剩余部分，且
y1及y2各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
39.如实施方案28所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-8)
Figure BDA0003629760100007042
或其药学上可接受的盐。
40.如实施方案39所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-9)
Figure BDA0003629760100007051
或其药学上可接受的盐。
41.如实施方案40所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-10)
Figure BDA0003629760100007052
或其药学上可接受的盐。
42.如实施方案41所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-11)
Figure BDA0003629760100007061
其中L’是L的剩余部分，且
y1及y2各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
43.如实施方案40所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-12)
Figure BDA0003629760100007071
或其药学上可接受的盐。
44.如实施方案43所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-13)
Figure BDA0003629760100007072
其中L’是L的剩余部分，且
y1及y2各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
45.如实施方案40所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-14)
Figure BDA0003629760100007081
或其药学上可接受的盐。
46.如实施方案45所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-15)
Figure BDA0003629760100007091
其中L’是L的剩余部分，且
y1及y2各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
47.如实施方案340所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-16)
Figure BDA0003629760100007092
Figure BDA0003629760100007101
或其药学上可接受的盐。
48.如实施方案47所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-17)
Figure BDA0003629760100007102
其中L’是L的剩余部分，且
y1及y2各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
49.如实施方案28所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-18)
Figure BDA0003629760100007111
或其药学上可接受的盐。
50.如实施方案49所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-19)
Figure BDA0003629760100007112
或其药学上可接受的盐。
51.如实施方案50所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-20)
Figure BDA0003629760100007121
或其药学上可接受的盐。
52.如实施方案51所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-21)
Figure BDA0003629760100007122
Figure BDA0003629760100007131
或其药学上可接受的盐。
53.如实施方案52所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-22)
Figure BDA0003629760100007132
其中L’是L的剩余部分，且
y1及y2各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
54.如实施方案51所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-23)
Figure BDA0003629760100007141
或其药学上可接受的盐。
55.如实施方案54所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-24)
Figure BDA0003629760100007142
Figure BDA0003629760100007151
其中L’是L的剩余部分，且
y1及y2各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
56.如实施方案28所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-25)
Figure BDA0003629760100007152
或其药学上可接受的盐。
57.如实施方案56所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-26)
Figure BDA0003629760100007161
或其药学上可接受的盐。
58.如实施方案57所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-27)
Figure BDA0003629760100007162
或其药学上可接受的盐。
59.如实施方案58所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-28)
Figure BDA0003629760100007171
其中L’是L的剩余部分，且
y1及y2各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
60.如实施方案57所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-29)
Figure BDA0003629760100007181
或其药学上可接受的盐。
61.如实施方案60所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-30)
Figure BDA0003629760100007182
其中L’是L的剩余部分，且
y1及y2各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
62.如实施方案57所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-31)
Figure BDA0003629760100007191
或其药学上可接受的盐。
63.如实施方案62所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-32)
Figure BDA0003629760100007201
其中L’是L的剩余部分，且
y1及y2各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
64.如实施方案57所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-33)
Figure BDA0003629760100007202
Figure BDA0003629760100007211
或其药学上可接受的盐。
65.如实施方案64所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-34)
Figure BDA0003629760100007212
其中L’是L的剩余部分，且
y1及y2各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
66.如实施方案28至65中任一项所述的缀合物，其中U2为C1-C6亚烷基。
67.如实施方案5所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-V)
Figure BDA0003629760100007221
或其药学上可接受的盐。
68.如实施方案67所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-V-1)
Figure BDA0003629760100007222
或其药学上可接受的盐。
69.如实施方案68所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-V-2)
Figure BDA0003629760100007231
或其药学上可接受的盐。
70.如实施方案69所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-V-3)
Figure BDA0003629760100007241
或其药学上可接受的盐。
71.如实施方案70所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-V-4)
Figure BDA0003629760100007242
其中L’是L的剩余部分，且
y1及y2各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
72.如实施方案68至71中任一项所述的缀合物，其中U3为任选取代的C1-C6亚烷基。
73.如实施方案72所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-V-5)
Figure BDA0003629760100007251
其中L’是L的剩余部分，且
y1及y2各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
74.如实施方案67所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-V-6)
Figure BDA0003629760100007261
或其药学上可接受的盐。
75.如实施方案74所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-V-7)
Figure BDA0003629760100007262
或其药学上可接受的盐。
76.如实施方案75所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-V-8)
Figure BDA0003629760100007271
其中L’是L的剩余部分，且
y1及y2各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
77.如实施方案74至76中任一项所述的缀合物，其中U3为任选取代的C1-C6烷基。
78.如实施方案77所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-V-9)
Figure BDA0003629760100007281
或其药学上可接受的盐。
79.如实施方案67所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-V-10)
Figure BDA0003629760100007282
或其药学上可接受的盐。
80.如实施方案79所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-V-11)
Figure BDA0003629760100007291
或其药学上可接受的盐。
81.如实施方案80所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-V-12)
Figure BDA0003629760100007301
或其药学上可接受的盐。
82.如实施方案81所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-V-13)
Figure BDA0003629760100007302
Figure BDA0003629760100007311
其中L’是L的剩余部分，且
y1及y2各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
83.如实施方案80至81中任一项所述的缀合物，其中U3为任选取代的C1-C6烷基。
84.如实施方案83所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-V-14)
Figure BDA0003629760100007312
或其药学上可接受的盐。
85.如实施方案79所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-V-15)
Figure BDA0003629760100007321
或其药学上可接受的盐。
86.如实施方案85所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-V-16)
Figure BDA0003629760100007322
或其药学上可接受的盐。
87.如实施方案86所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-V-17)
Figure BDA0003629760100007331
其中L’是L的剩余部分，且
y1及y2各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
88.如实施方案85至87中任一项所述的缀合物，其中U3为任选取代的C1-C6烷基。
89.如实施方案88所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-V-18)
Figure BDA0003629760100007341
或其药学上可接受的盐。
90.如实施方案79所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-V-19)
Figure BDA0003629760100007342
或其药学上可接受的盐。
91.如实施方案90所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-V-20)
Figure BDA0003629760100007351
或其药学上可接受的盐。
92.如实施方案91所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-V-21)
Figure BDA0003629760100007352
其中L’是L的剩余部分，且
y1及y2各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
93.如实施方案90至92中任一项所述的缀合物，其中U3为任选取代的C1-C6烷基。
94.如实施方案93所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-V-22)
Figure BDA0003629760100007361
或其药学上可接受的盐。
95.如实施方案93所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-V-23)
Figure BDA0003629760100007371
或其药学上可接受的盐。
96.如实施方案5所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VI)
Figure BDA0003629760100007372
或其药学上可接受的盐。
97.如实施方案96所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VI-1)
Figure BDA0003629760100007381
或其药学上可接受的盐。
98.如实施方案97所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VI-2)
Figure BDA0003629760100007391
或其药学上可接受的盐。
99.如实施方案98所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VI-3)
Figure BDA0003629760100007392
或其药学上可接受的盐。
100.如实施方案99所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VI-4)
Figure BDA0003629760100007401
或其药学上可接受的盐。
101.如实施方案100所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VI-5)
Figure BDA0003629760100007402
其中L’是L的剩余部分，且
y1及y2各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
102.如实施方案96至101中任一项所述的缀合物，其中每个M1为H。
103.如实施方案96至101中任一项所述的缀合物，其中每个M1为C1-C3烷基，且
其中b为1或2。
104.如实施方案101所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VI-6)
Figure BDA0003629760100007411
或其药学上可接受的盐。
105.如实施方案101所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VI-7)
Figure BDA0003629760100007421
或其药学上可接受的盐。
106.如实施方案99所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VI-8)
Figure BDA0003629760100007422
或其药学上可接受的盐。
107.如实施方案106所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VI-9)
Figure BDA0003629760100007431
其中L’是L的剩余部分，且
y1及y2各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
108.如实施方案106或107所述的缀合物，其中每个M1为H。
109.如实施方案106或107所述的缀合物，其中每个M1为C1-C3烷基，且其中b为1或2。
110.如实施方案107所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VI-10)
Figure BDA0003629760100007441
或其药学上可接受的盐。
111.如实施方案107所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VI-11)
Figure BDA0003629760100007442
或其药学上可接受的盐。
112.如实施方案99所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VI-12)
Figure BDA0003629760100007451
或其药学上可接受的盐。
113.如实施方案112所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VI-13)
Figure BDA0003629760100007452
其中L’是L的剩余部分，且
y1及y2各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
114.如实施方案113所述的缀合物，其中每个M1为H。
115.如实施方案113所述的缀合物，其中每个M1为C1-C3烷基，且
其中b为1或2。
116.如实施方案113所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VI-14)
Figure BDA0003629760100007461
或其药学上可接受的盐。
117.如实施方案113所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VI-15)
Figure BDA0003629760100007471
或其药学上可接受的盐。
118.如实施方案99所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VI-16)
Figure BDA0003629760100007472
或其药学上可接受的盐。
119.如实施方案118所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VI-17)
Figure BDA0003629760100007481
其中L’是L的剩余部分，且
y1及y2各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
120.如实施方案119所述的缀合物，其中每个M1为H。
121.如实施方案119所述的缀合物，其中每个M1为C1-C3烷基，且
其中b为1或2。
122.如实施方案119所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VI-18)
Figure BDA0003629760100007491
或其药学上可接受的盐。
123.如实施方案119所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VI-19)
Figure BDA0003629760100007492
或其药学上可接受的盐。
124.如实施方案97所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VI-20)
Figure BDA0003629760100007501
或其药学上可接受的盐。
125.如实施方案124所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VI-21)
Figure BDA0003629760100007511
或其药学上可接受的盐。
126.如实施方案125所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VI-22)
Figure BDA0003629760100007512
其中L’是L的剩余部分，且
y1及y2各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
127.如实施方案125或126所述的缀合物，其中每个M1为H。
128.如实施方案125或126所述的缀合物，其中每个M1为C1-C3烷基，且其中b为1或2。
129.如实施方案126所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VI-23)
Figure BDA0003629760100007521
或其药学上可接受的盐。
130.如实施方案124所述的缀合物，所述缀合物由以下来描述：式(D-VI-24)
Figure BDA0003629760100007531
或其药学上可接受的盐。
131.如实施方案130所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VI-25)
Figure BDA0003629760100007532
其中L’是L的剩余部分，且
y1及y2各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
132.如实施方案130或131所述的缀合物，其中每个M1为H。
133.如实施方案130或131所述的缀合物，其中每个M1为C1-C3烷基，且其中b为1或2。
134.如131所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VI-26)
Figure BDA0003629760100007541
或其药学上可接受的盐。
135.如124所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VI-27)
Figure BDA0003629760100007551
或其药学上可接受的盐。
136.如实施方案135所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VI-28)
Figure BDA0003629760100007552
其中L’是L的剩余部分，且
y1及y2各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
137.如实施方案135或136所述的缀合物，其中每个M1为H。
138.如实施方案135或136所述的缀合物，其中每个M1为C1-C3烷基，且其中b为1或2。
139.如实施方案136所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VI-29)
Figure BDA0003629760100007561
或其药学上可接受的盐。
140.如实施方案124所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VI-30)
Figure BDA0003629760100007571
或其药学上可接受的盐。
141.如实施方案140所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VI-31)
Figure BDA0003629760100007572
其中L’是L的剩余部分，且
y1及y2各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
142.如实施方案140或141所述的缀合物，其中每个M1为H。
143.如实施方案140或141所述的缀合物，其中每个M1为C1-C3烷基，且其中b为1或2。
144.如实施方案141所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VI-32)
Figure BDA0003629760100007581
或其药学上可接受的盐。
145.如实施方案96所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VI-33)
Figure BDA0003629760100007591
或其药学上可接受的盐。
146.如实施方案5所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VII)
Figure BDA0003629760100007592
或其药学上可接受的盐。
147.如实施方案146所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-1)
Figure BDA0003629760100007601
或其药学上可接受的盐。
148.如实施方案147所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-2)
Figure BDA0003629760100007602
或其药学上可接受的盐。
149.如实施方案148所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-3)
Figure BDA0003629760100007611
或其药学上可接受的盐。
150.如实施方案149所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-4)
Figure BDA0003629760100007612
Figure BDA0003629760100007621
或其药学上可接受的盐。
151.如实施方案150所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-5)
Figure BDA0003629760100007622
或其药学上可接受的盐。
152.如实施方案149所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-6)
Figure BDA0003629760100007623
Figure BDA0003629760100007631
其中L’是L的剩余部分，且
y1及y2各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
153.如实施方案152所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-7)
Figure BDA0003629760100007632
或其药学上可接受的盐。
154.如实施方案152所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-8)
Figure BDA0003629760100007641
或其药学上可接受的盐。
155.如实施方案152所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-9)
Figure BDA0003629760100007642
或其药学上可接受的盐。
156.如实施方案148所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-10)
Figure BDA0003629760100007651
或其药学上可接受的盐。
157.如实施方案156所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-11)
Figure BDA0003629760100007652
其中L’是L的剩余部分，且
y1及y2各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
158.如实施方案157所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-12)
Figure BDA0003629760100007661
或其药学上可接受的盐。
159.如实施方案157所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-13)
Figure BDA0003629760100007662
或其药学上可接受的盐。
160.如实施方案157所述的缀合物，所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-14)
Figure BDA0003629760100007671
或其药学上可接受的盐。
161.如实施方案150所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-15)
Figure BDA0003629760100007672
或其药学上可接受的盐。
162.如实施方案161所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-16)
Figure BDA0003629760100007681
其中L’是L的剩余部分，且
y1及y2各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
163.如实施方案162所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-17)
Figure BDA0003629760100007691
或其药学上可接受的盐。
164.如实施方案162所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-18)
Figure BDA0003629760100007692
或其药学上可接受的盐。
165.如实施方案162所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-19)
Figure BDA0003629760100007701
或其药学上可接受的盐。
166.如实施方案150所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-20)
Figure BDA0003629760100007702
或其药学上可接受的盐。
167.如实施方案166所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-21)
Figure BDA0003629760100007711
其中L’是L的剩余部分，且
y1及y2各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
168.如实施方案167所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-22)
Figure BDA0003629760100007712
或其药学上可接受的盐。
169.如实施方案167所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-23)
Figure BDA0003629760100007721
或其药学上可接受的盐。
170.如实施方案167所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-24)
Figure BDA0003629760100007722
或其药学上可接受的盐。
171.如实施方案150所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-25)
Figure BDA0003629760100007731
或其药学上可接受的盐。
172.如实施方案171所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-26)
Figure BDA0003629760100007732
其中L’是L的剩余部分，且
y1及y2各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
173.如实施方案172所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-27)
Figure BDA0003629760100007741
或其药学上可接受的盐。
174.如实施方案172所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-28)
Figure BDA0003629760100007742
或其药学上可接受的盐。
175.如实施方案172所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-29)
Figure BDA0003629760100007751
或其药学上可接受的盐。
176.如实施方案146所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-30)
Figure BDA0003629760100007752
或其药学上可接受的盐。
177.如实施方案176所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-31)
Figure BDA0003629760100007761
或其药学上可接受的盐。
178.如实施方案177所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-32)
Figure BDA0003629760100007762
或其药学上可接受的盐。
179.如实施方案178所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-33)
Figure BDA0003629760100007771
其中L’是L的剩余部分，且
y1及y2各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
180.如实施方案176所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-34)
Figure BDA0003629760100007781
或其药学上可接受的盐。
181.如实施方案180所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-35)
Figure BDA0003629760100007782
其中L’是L的剩余部分，且
y1及y2各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
182.如实施方案176所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-36)
Figure BDA0003629760100007791
或其药学上可接受的盐。
183.如实施方案182所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-37)
Figure BDA0003629760100007792
或其药学上可接受的盐。
184.如实施方案176所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-38)
Figure BDA0003629760100007801
或其药学上可接受的盐。
185.如实施方案184所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-39)
Figure BDA0003629760100007802
其中L’是L的剩余部分，且
y1及y2各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
186.如实施方案176所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-40)
Figure BDA0003629760100007811
或其药学上可接受的盐。
187.如实施方案186所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-41)
Figure BDA0003629760100007821
其中L’是L的剩余部分，且
y1及y2各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
188.如实施方案146所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-42)
Figure BDA0003629760100007822
或其药学上可接受的盐。
189.如实施方案188所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-43)
Figure BDA0003629760100007831
或其药学上可接受的盐。
190.如实施方案189所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-44)
Figure BDA0003629760100007832
Figure BDA0003629760100007841
或其药学上可接受的盐。
191.如实施方案190所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-45)
Figure BDA0003629760100007842
其中L’是L的剩余部分，且
y1及y2各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
192.如实施方案189所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-46)
Figure BDA0003629760100007851
或其药学上可接受的盐。
193.如实施方案192所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-47)
Figure BDA0003629760100007852
其中L’是L的剩余部分，且
y1及y2各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
194.如实施方案189所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-48)
Figure BDA0003629760100007861
或其药学上可接受的盐。
195.如实施方案194所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-49)
Figure BDA0003629760100007862
其中L’是L的剩余部分，且
y1及y2各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
196.如实施方案189所述的缀合物，所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-50)
Figure BDA0003629760100007871
或其药学上可接受的盐。
197.如实施方案196所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-51)
Figure BDA0003629760100007881
其中L’是L的剩余部分，且
y1及y2各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
198.如实施方案189所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-52)
Figure BDA0003629760100007882
或其药学上可接受的盐。
199.如实施方案198所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-53)
Figure BDA0003629760100007891
其中L’是L的剩余部分，且
y1及y2各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
200.如实施方案146所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-54)
Figure BDA0003629760100007892
Figure BDA0003629760100007901
或其药学上可接受的盐。
201.如实施方案200所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-55)
Figure BDA0003629760100007902
或其药学上可接受的盐。
202.如实施方案201所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-56)
Figure BDA0003629760100007903
Figure BDA0003629760100007911
或其药学上可接受的盐。
203.如实施方案202所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VII-57)
Figure BDA0003629760100007912
其中L’是L的剩余部分，且
y1及y2各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
204.如实施方案1至203中任一项所述的缀合物，其中L或L’包含一个或多个任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C1-C20亚杂烷基、任选取代的C2-C20亚烯基、任选取代的C2-C20亚杂烯基、任选取代的C2-C20亚炔基、任选取代的C2-C20亚杂炔基、任选取代的C3-C20亚环烷基、任选取代的C2-C20亚杂环烷基、任选取代的C4-C20亚环烯基、任选取代的C4-C20亚杂环烯基、任选取代的C8-C20亚环炔基、任选取代的C8-C20亚杂环炔基、任选取代的C5-C15亚芳基、任选取代的C2-C15亚杂芳基、O、S、NRi、P、羰基、硫羰基、磺酰基、磷酸酯基、磷酰基或亚氨基，
其中Ri为H、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C1-C20杂烷基、任选取代的C2-C20烯基、任选取代的C2-C20杂烯基、任选取代的C2-C20炔基、任选取代的C2-C20杂炔基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C4-C20环烯基、任选取代的C4-C20杂环烯基、任选取代的C8-C20环炔基、任选取代的C8-C20杂环炔基、任选取代的C5-C15芳基或任选取代的C2-C15杂芳基。
205.如实施方案204所述的缀合物，其中L或L’的骨架由以下组成：一个或多个任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C1-C20亚杂烷基、任选取代的C2-C20亚烯基、任选取代的C2-C20亚杂烯基、任选取代的C2-C20亚炔基、任选取代的C2-C20亚杂炔基、任选取代的C3-C20亚环烷基、任选取代的C2-C20亚杂环烷基、任选取代的C4-C20亚环烯基、任选取代的C4-C20亚杂环烯基、任选取代的C8-C20亚环炔基、任选取代的C8-C20亚杂环炔基、任选取代的C5-C15亚芳基、任选取代的C2-C15亚杂芳基、O、S、NRi、P、羰基、硫羰基、磺酰基、磷酸酯基、磷酰基或亚氨基，
其中Ri为H、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C1-C20杂烷基、任选取代的C2-C20烯基、任选取代的C2-C20杂烯基、任选取代的C2-C20炔基、任选取代的C2-C20杂炔基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C4-C20环烯基、任选取代的C4-C20杂环烯基、任选取代的C8-C20环炔基、任选取代的C8-C20杂环炔基、任选取代的C5-C15芳基或任选取代的C2-C15杂芳基。
206.如实施方案204或205所述的缀合物，其中L经氧代取代。
207.如实施方案1至206中任一项所述的缀合物，其中L或L’的骨架包含不超过250个原子。
208.如实施方案1至207中任一项所述的缀合物，其中L或L’能够形成酰胺、氨基甲酸酯、磺酰基或脲连接。
209.如实施方案1至203中任一项所述的缀合物，其中L或L’为键。
210.如实施方案1至203中任一项所述的缀合物，其中L或L’为原子。
211.如实施方案1至210中任一项所述的缀合物，其中每个L由以下来描述：式(D-L-I)
Figure BDA0003629760100007931
其中
LA由式GA1-(ZA1)g1-(YA1)h1-(ZA2)i1-(YA2)j1-(ZA3)k1-(YA3)l1-(ZA4)m1-(YA4)n1-(ZA5)o1-GA2描述；
LB由式GB1-(ZB1)g2-(YB1)h2-(ZB2)i2-(YB2)j2-(ZB3)k2-(YB3)l2-(ZB4)m2-(YB4)n2-(ZB5)o2-GB2描述；
LC由式GC1-(ZC1)g3-(YC1)h3-(ZC2)i3-(YC2)j3-(ZC3)k3-(YC3)l3-(ZC4)m3-(YC4)n3-(ZC5)o3-GC2描述；
GA1是附接至Qi的键；
GA2是附接至A1的键；
GB1是附接至Qi的键；
GB2是附接至A2的键；
GC1是附接至Qi的键；
GC2是附接至E的键；
ZA1、ZA2、ZA3、ZA4、ZA5、ZB1、ZB2、ZB3、ZB4、ZB5、ZC1、ZC2、ZC3、ZC4及ZC5中的每一者独立地为任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C1-C20亚杂烷基、任选取代的C2-C20亚烯基、任选取代的C2-C20亚杂烯基、任选取代的C2-C20亚炔基、任选取代的C2-C20亚杂炔基、任选取代的C3-C20亚环烷基、任选取代的C2-C20亚杂环烷基、任选取代的C4-C20亚环烯基、任选取代的C4-C20亚杂环烯基、任选取代的C8-C20亚环炔基、任选取代的C8-C20亚杂环炔基、任选取代的C5-C15亚芳基或任选取代的C2-C15亚杂芳基；
YA1、YA2、YA3、YA4、YB1、YB2、YB3、YB4、YC1、YC2、YC3及YC4中的每一者独立地为O、S、NRi、P、羰基、硫羰基、磺酰基、磷酸酯基、磷酰基或亚氨基；
Ri为H、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C1-C20杂烷基、任选取代的C2-C20烯基、任选取代的C2-C20杂烯基、任选取代的C2-C20炔基、任选取代的C2-C20杂炔基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C4-C20环烯基、任选取代的C4-C20杂环烯基、任选取代的C8-C20环炔基、任选取代的C8-C20杂环炔基、任选取代的C5-C15芳基或任选取代的C2-C15杂芳基；
g1、h1、i1、j1、k1、l1、m1、n1、o1、g2、h2、i2、j2、k2、l2、m2、n2、o2、g3、h3、i3、j3、k3、l3、m3、n3及o3中的每一者独立地为0或1；
Qi为氮原子、任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C1-C20亚杂烷基、任选取代的C2-C20亚烯基、任选取代的C2-C20亚杂烯基、任选取代的C2-C20亚炔基、任选取代的C2-C20亚杂炔基、任选取代的C3-C20亚环烷基、任选取代的C2-C20亚杂环烷基、任选取代的C4-C20亚环烯基、任选取代的C4-C20亚杂环烯基、任选取代的C8-C20亚环炔基、任选取代的C8-C20亚杂环炔基、任选取代的C5-C15亚芳基或任选取代的C2-C15亚杂芳基。
212.如实施方案211所述的缀合物，其中L选自
Figure BDA0003629760100007951
Figure BDA0003629760100007961
Figure BDA0003629760100007971
Figure BDA0003629760100007981
Figure BDA0003629760100007991
Figure BDA0003629760100008001
Figure BDA0003629760100008011
Figure BDA0003629760100008021
Figure BDA0003629760100008031
Figure BDA0003629760100008041
其中z1、z2、y1、y2、y3及y4各自独立地为1至20的整数；且
R9选自H、C1-C20烷基、C3-C20环烷基、C2-C20杂环烷基、任选取代的C5-C15芳基及C3-C15杂芳基。
213.一种由以下来描述的缀合物：式(M-I)
Figure BDA0003629760100008042
其中每个A1独立地选自式(A-I)-(A-VI)中任一者；
每个E独立地包含Fc结构域单体、白蛋白、白蛋白结合肽或Fc结合肽；
n为1或2；
T为1至20的整数；且
L为共价附接至E及A1中的每一者的接头，
或其药学上可接受的盐。
214.如实施方案213所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-II)
Figure BDA0003629760100008051
或其药学上可接受的盐。
215.如实施方案214所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-II-1)
Figure BDA0003629760100008052
其中R7及R8各自独立地选自OH、卤素、腈、硝基、任选取代的胺、任选取代的亚胺、任选取代的C1-C20烷氨基、任选取代的巯基、任选取代的羧基、任选取代的氰基、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20烯基、任选取代的C3-C20环烯基、任选取代的C2-C20炔基、任选取代的C5-C20芳基、任选取代的C2-C15杂芳基及任选取代的C1-C20烷氧基；
或其药学上可接受的盐。
216.如实施方案215所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-II-2)
Figure BDA0003629760100008061
或其药学上可接受的盐。
217.如实施方案216所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-II-3)
Figure BDA0003629760100008071
或其药学上可接受的盐。
218.如实施方案217所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-II-4)
Figure BDA0003629760100008072
或其药学上可接受的盐。
219.如实施方案218所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-II-5)
Figure BDA0003629760100008081
其中L’是L的剩余部分，且
y1为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
220.如实施方案217所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-II-6)
Figure BDA0003629760100008091
或其药学上可接受的盐。
221.如实施方案220所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-II-7)
Figure BDA0003629760100008092
其中L’是L的剩余部分，且
y1为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
222.如实施方案217所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-II-8)
Figure BDA0003629760100008101
或其药学上可接受的盐。
223.如实施方案222所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-II-9)
Figure BDA0003629760100008111
其中L’是L的剩余部分，且
y1为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
224.如实施方案216所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-II-10)
Figure BDA0003629760100008121
或其药学上可接受的盐。
225.如实施方案224所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-II-11)
Figure BDA0003629760100008122
或其药学上可接受的盐。
226.如实施方案225所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-II-12)
Figure BDA0003629760100008131
其中L’是L的剩余部分，且
y1为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
227.如实施方案213所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-II-13)
Figure BDA0003629760100008141
或其药学上可接受的盐。
228.如实施方案227所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-II-14)
Figure BDA0003629760100008142
其中L’是L的剩余部分，且
y1为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
229.如实施方案216所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-II-15)
Figure BDA0003629760100008151
或其药学上可接受的盐。
230.如实施方案229所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-II-16)
Figure BDA0003629760100008161
或其药学上可接受的盐。
231.如实施方案230所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-II-17)
Figure BDA0003629760100008162
Figure BDA0003629760100008171
其中L’是L的剩余部分，且
y1各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
232.如实施方案213所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-III)
Figure BDA0003629760100008172
或其药学上可接受的盐。
233.如实施方案232所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-III-1)
Figure BDA0003629760100008181
或其药学上可接受的盐。
234.如实施方案233所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-III-2)
Figure BDA0003629760100008182
或其药学上可接受的盐。
235.如实施方案234所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-III-3)
Figure BDA0003629760100008191
其中L’是L的剩余部分，且
y1各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
236.如实施方案213所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-IV)
Figure BDA0003629760100008201
或其药学上可接受的盐。
237.如实施方案236所述的缀合物，其中U3由以下来描述：
Figure BDA0003629760100008202
其中Ub为C或O；且
U4选自氨基、任选取代的胺、任选取代的亚胺、任选取代的C1-C20烷氨基、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C5-C15芳基、任选取代的C3-C15杂芳基及键。
238.如实施方案236所述的缀合物，其中U3选自：
Figure BDA0003629760100008203
Figure BDA0003629760100008211
239.如实施方案236至238中任一项所述的缀合物，其中Ua为N且p为1或2；或Ua为CH且p为1、2或3。
240.如实施方案236所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-1)
Figure BDA0003629760100008212
或其药学上可接受的盐。
241.如实施方案240所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-2)
Figure BDA0003629760100008221
或其药学上可接受的盐。
242.如实施方案236所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-3)
Figure BDA0003629760100008222
或其药学上可接受的盐。
243.如实施方案242所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-4)
Figure BDA0003629760100008231
或其药学上可接受的盐。
244.如实施方案243所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-5)
Figure BDA0003629760100008241
其中L’是L的剩余部分，且
y1为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
245.如实施方案242所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-6)
Figure BDA0003629760100008251
或其药学上可接受的盐。
246.如实施方案245所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-7)
Figure BDA0003629760100008252
其中L’是L的剩余部分，且
y1为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
247.如实施方案236所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-8)
Figure BDA0003629760100008261
或其药学上可接受的盐。
248.如实施方案247所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-9)
Figure BDA0003629760100008271
或其药学上可接受的盐。
249.如实施方案248所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-10)
Figure BDA0003629760100008272
或其药学上可接受的盐。
250.如实施方案249所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-11)
Figure BDA0003629760100008281
其中L’是L的剩余部分，且
y1为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
251.如实施方案248所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-12)
Figure BDA0003629760100008291
或其药学上可接受的盐。
252.如实施方案251所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-13)
Figure BDA0003629760100008292
其中L’是L的剩余部分，且
y1为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
253.如实施方案248所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-14)
Figure BDA0003629760100008301
或其药学上可接受的盐。
254.如实施方案253所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-15)
Figure BDA0003629760100008311
其中L’是L的剩余部分，且
y1为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
255.如实施方案248所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-16)
Figure BDA0003629760100008321
或其药学上可接受的盐。
256.如实施方案255所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-17)
Figure BDA0003629760100008322
其中L’是L的剩余部分，且
y1为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
257.如实施方案236所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-18)
Figure BDA0003629760100008331
或其药学上可接受的盐。
258.如实施方案257所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-19)
Figure BDA0003629760100008341
或其药学上可接受的盐。
259.如实施方案258所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-20)
Figure BDA0003629760100008342
或其药学上可接受的盐。
260.如实施方案259所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-21)
Figure BDA0003629760100008351
或其药学上可接受的盐。
261.如实施方案260所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-22)
Figure BDA0003629760100008361
其中L’是L的剩余部分，且
y1为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
262.如实施方案259所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-23)
Figure BDA0003629760100008371
或其药学上可接受的盐。
263.如实施方案262所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-24)
Figure BDA0003629760100008381
其中L’是L的剩余部分，且
y1为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
264.如实施方案236所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-25)
Figure BDA0003629760100008391
或其药学上可接受的盐。
265.如实施方案264所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-26)
Figure BDA0003629760100008392
或其药学上可接受的盐。
266.如实施方案265所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-27)
Figure BDA0003629760100008401
或其药学上可接受的盐。
267.如实施方案266所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-28)
Figure BDA0003629760100008402
Figure BDA0003629760100008411
其中L’是L的剩余部分，且
y1为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
268.如实施方案265所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-29)
Figure BDA0003629760100008412
或其药学上可接受的盐。
269.如实施方案268所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-30)
Figure BDA0003629760100008421
其中L’是L的剩余部分，且
y1为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
270.如实施方案265所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-31)
Figure BDA0003629760100008431
或其药学上可接受的盐。
271.如实施方案270所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-32)
Figure BDA0003629760100008432
其中L’是L的剩余部分，且
y1为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
272.如实施方案265所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-33)
Figure BDA0003629760100008441
或其药学上可接受的盐。
273.如实施方案272所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-34)
Figure BDA0003629760100008451
其中L’是L的剩余部分，且
y1为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
274.如实施方案236至273中任一项所述的缀合物，其中U2为C1-C6亚烷基。
275.如实施方案213所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-V)
Figure BDA0003629760100008461
或其药学上可接受的盐。
276.如实施方案275所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-V-1)
Figure BDA0003629760100008462
或其药学上可接受的盐。
277.如实施方案276所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-V-2)
Figure BDA0003629760100008471
或其药学上可接受的盐。
278.如实施方案277所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-V-3)
Figure BDA0003629760100008472
或其药学上可接受的盐。
279.如实施方案278所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-V-4)
Figure BDA0003629760100008481
其中L’是L的剩余部分，且
y1各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
280.如实施方案276至279中任一项所述的缀合物，其中U3为任选取代的C1-C6烷基。
281.如实施方案280所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-V-5)
Figure BDA0003629760100008491
其中L’是L的剩余部分，且
y1各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
282.如实施方案275所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-V-6)
Figure BDA0003629760100008501
或其药学上可接受的盐。
283.如实施方案282所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-V-7)
Figure BDA0003629760100008502
或其药学上可接受的盐。
284.如实施方案283所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-V-8)
Figure BDA0003629760100008511
其中L’是L的剩余部分，且
y1各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
285.如实施方案282至284中任一项所述的缀合物，其中U3为任选取代的C1-C6烷基。
286.如实施方案285所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-V-9)
Figure BDA0003629760100008521
或其药学上可接受的盐。
287.如实施方案275所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-V-10)
Figure BDA0003629760100008522
或其药学上可接受的盐。
288.如实施方案287所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-V-11)
Figure BDA0003629760100008531
或其药学上可接受的盐。
289.如实施方案288所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-V-12)
Figure BDA0003629760100008541
或其药学上可接受的盐。
290.如实施方案289所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-V-13)
Figure BDA0003629760100008542
Figure BDA0003629760100008551
其中L’是L的剩余部分，且
y1各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
291.如实施方案288至290中任一项所述的缀合物，其中U3为任选取代的C1-C6烷基。
292.如实施方案287所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-V-14)
Figure BDA0003629760100008552
其中L’是L的剩余部分，且
y1各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
293.如实施方案292所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-V-15)
Figure BDA0003629760100008561
或其药学上可接受的盐。
293.如实施方案292所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-V-16)
Figure BDA0003629760100008562
或其药学上可接受的盐。
294.如实施方案293所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-V-17)
Figure BDA0003629760100008571
其中L’是L的剩余部分，且
y1各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
295.如实施方案292至294中任一项所述的缀合物，其中U3为任选取代的C1-C6烷基。
296.如实施方案295所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-V-18)
Figure BDA0003629760100008581
其中L’是L的剩余部分，且
y1各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
297.如实施方案287所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-V-19)
Figure BDA0003629760100008582
或其药学上可接受的盐。
298.如实施方案297所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-V-20)
Figure BDA0003629760100008591
或其药学上可接受的盐。
299.如实施方案298所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-V-21)
Figure BDA0003629760100008601
其中L’是L的剩余部分，且
y1各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
300.如实施方案297至299中任一项所述的缀合物，其中U3为任选取代的C1-C6烷基。
301.如实施方案300所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-V-22)
Figure BDA0003629760100008611
其中L’是L的剩余部分，且
y1各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
302.如实施方案300所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-V-23)
Figure BDA0003629760100008612
Figure BDA0003629760100008621
其中L’是L的剩余部分，且
y1各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
303.如实施方案213所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VI)
Figure BDA0003629760100008622
或其药学上可接受的盐。
304.如实施方案303所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VI-1)
Figure BDA0003629760100008631
或其药学上可接受的盐。
305.如实施方案304所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VI-2)
Figure BDA0003629760100008632
或其药学上可接受的盐。
306.如实施方案305所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VI-3)
Figure BDA0003629760100008641
或其药学上可接受的盐。
307.如实施方案306所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VI-4)
Figure BDA0003629760100008642
Figure BDA0003629760100008651
或其药学上可接受的盐。
308.如实施方案307所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VI-5)
Figure BDA0003629760100008652
其中L’是L的剩余部分，且
y1各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
309.如实施方案302至308中任一项所述的缀合物，其中每个M1为H。
310.如实施方案302至308中任一项所述的缀合物，其中每个M1为C1-C3烷基，且
其中b为1或2。
311.如实施方案308所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VI-6)
Figure BDA0003629760100008661
或其药学上可接受的盐。
312.如实施方案308所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VI-7)
Figure BDA0003629760100008662
或其药学上可接受的盐。
313.如实施方案306所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VI-8)
Figure BDA0003629760100008671
或其药学上可接受的盐。
314.如实施方案313所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VI-9)
Figure BDA0003629760100008672
Figure BDA0003629760100008681
其中L’是L的剩余部分，且
y1各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
315.如实施方案313或314所述的缀合物，其中每个M1为H。
316.如实施方案313或314所述的缀合物，其中每个M1为C1-C3烷基，且
其中b为1或2。
317.如实施方案314所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VI-10)
Figure BDA0003629760100008682
或其药学上可接受的盐。
318.如实施方案314所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VI-11)
Figure BDA0003629760100008691
或其药学上可接受的盐。
319.如实施方案306所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VI-12)
Figure BDA0003629760100008692
或其药学上可接受的盐。
320.如实施方案319所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VI-13)
Figure BDA0003629760100008701
其中L’是L的剩余部分，且
y1各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
321.如实施方案319或320所述的缀合物，其中每个M1为H。
322.如实施方案319或320所述的缀合物，其中每个M1为C1-C3烷基，且
其中b为1或2。
323.如实施方案320所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VI-14)
Figure BDA0003629760100008711
或其药学上可接受的盐。
324.如实施方案320所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VI-15)
Figure BDA0003629760100008712
Figure BDA0003629760100008721
或其药学上可接受的盐。
325.如实施方案306所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VI-16)
Figure BDA0003629760100008722
或其药学上可接受的盐。
326.如实施方案325所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VI-17)
Figure BDA0003629760100008731
其中L’是L的剩余部分，且
y1各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
327.如实施方案325或326所述的缀合物，其中每个M1为H。
328.如实施方案325或326所述的缀合物，其中每个M1为C1-C3烷基，且
其中b为1或2。
329.如实施方案326所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VI-18)
Figure BDA0003629760100008741
或其药学上可接受的盐。
330.如实施方案326所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VI-19)
Figure BDA0003629760100008742
Figure BDA0003629760100008751
或其药学上可接受的盐。
331.如实施方案304所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VI-20)
Figure BDA0003629760100008752
或其药学上可接受的盐。
332.如实施方案331所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VI-21)
Figure BDA0003629760100008761
或其药学上可接受的盐。
333.如实施方案332所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VI-22)
Figure BDA0003629760100008762
其中L’是L的剩余部分，且
y1各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
334.如实施方案332或333所述的缀合物，其中每个M1为H。
335.如实施方案332或333所述的缀合物，其中每个M1为C1-C3烷基，且
其中b为1或2。
336.如实施方案333所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VI-23)
Figure BDA0003629760100008771
或其药学上可接受的盐。
337.如实施方案331所述的缀合物，所述缀合物由以下来描述：式(M-VI-24)
Figure BDA0003629760100008781
或其药学上可接受的盐。
338.如实施方案337所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VI-25)
Figure BDA0003629760100008782
其中L’是L的剩余部分，且
y1各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
339.如实施方案337或338所述的缀合物，其中每个M1为H。
240.如实施方案337或338所述的缀合物，其中每个M1为C1-C3烷基，且
其中b为1或2。
341.如342所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VI-26)
Figure BDA0003629760100008791
或其药学上可接受的盐。
342.如331所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VI-27)
Figure BDA0003629760100008801
或其药学上可接受的盐。
343.如342所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VI-28)
Figure BDA0003629760100008802
其中L’是L的剩余部分，且
y1各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
344.如实施方案342或343所述的缀合物，其中每个M1为H。
345.如实施方案342或343所述的缀合物，其中每个M1为C1-C3烷基，且
其中b为1或2。
346.如实施方案343所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VI-29)
Figure BDA0003629760100008811
或其药学上可接受的盐。
347.如实施方案331所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VI-30)
Figure BDA0003629760100008821
或其药学上可接受的盐。
348.如实施方案347所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VI-31)
Figure BDA0003629760100008822
其中L’是L的剩余部分，且
y1各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
349.如实施方案347或348所述的缀合物，其中每个M1为H。
350.如实施方案347或348所述的缀合物，其中每个M1为C1-C3烷基，且
其中b为1或2。
351.如实施方案348所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VI-32)
Figure BDA0003629760100008831
或其药学上可接受的盐。
352.如实施方案303所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VI-33)
Figure BDA0003629760100008841
或其药学上可接受的盐。
353.如实施方案213所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VII)
Figure BDA0003629760100008842
或其药学上可接受的盐。
354.如实施方案353所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-1)
Figure BDA0003629760100008851
或其药学上可接受的盐。
355.如实施方案354所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-2)
Figure BDA0003629760100008852
或其药学上可接受的盐。
356.如实施方案357所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-3)
Figure BDA0003629760100008861
或其药学上可接受的盐。
357.如实施方案356所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-4)
Figure BDA0003629760100008862
或其药学上可接受的盐。
358.如实施方案357所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-5)
Figure BDA0003629760100008871
或其药学上可接受的盐。
359.如实施方案358所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-6)
Figure BDA0003629760100008872
其中L’是L的剩余部分，且
y1各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
360.如实施方案359所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-7)
Figure BDA0003629760100008881
或其药学上可接受的盐。
361.如实施方案359所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-8)
Figure BDA0003629760100008882
Figure BDA0003629760100008891
或其药学上可接受的盐。
362.如实施方案359所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-9)
Figure BDA0003629760100008892
或其药学上可接受的盐。
363.如实施方案357所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-10)
Figure BDA0003629760100008893
Figure BDA0003629760100008901
或其药学上可接受的盐。
364.如实施方案363所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-11)
Figure BDA0003629760100008902
其中L’是L的剩余部分，且
y1各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
365.如实施方案364所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-12)
Figure BDA0003629760100008911
或其药学上可接受的盐。
366.如实施方案364所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-13)
Figure BDA0003629760100008912
或其药学上可接受的盐。
367.如实施方案364所述的缀合物，所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-14)
Figure BDA0003629760100008921
或其药学上可接受的盐。
368.如实施方案357所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-15)
Figure BDA0003629760100008922
或其药学上可接受的盐。
369.如实施方案368所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-16)
Figure BDA0003629760100008931
其中L’是L的剩余部分，且
y1各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
370.如实施方案369所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-17)
Figure BDA0003629760100008932
或其药学上可接受的盐。
371.如实施方案369所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-18)
Figure BDA0003629760100008941
或其药学上可接受的盐。
372.如实施方案369所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-19)
Figure BDA0003629760100008942
或其药学上可接受的盐。
373.如实施方案357所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-20)
Figure BDA0003629760100008951
或其药学上可接受的盐。
374.如实施方案373所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-21)
Figure BDA0003629760100008952
其中L’是L的剩余部分，且
y1各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
375.如实施方案374所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-22)
Figure BDA0003629760100008961
或其药学上可接受的盐。
376.如实施方案374所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-23)
Figure BDA0003629760100008962
或其药学上可接受的盐。
377.如实施方案374所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-24)
Figure BDA0003629760100008971
或其药学上可接受的盐。
378.如实施方案357所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-25)
Figure BDA0003629760100008972
或其药学上可接受的盐。
379.如实施方案378所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-26)
Figure BDA0003629760100008981
其中L’是L的剩余部分，且
y1各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
380.如实施方案379所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-27)
Figure BDA0003629760100008982
Figure BDA0003629760100008991
或其药学上可接受的盐。
381.如实施方案379所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-28)
Figure BDA0003629760100008992
或其药学上可接受的盐。
382.如实施方案379所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-29)
Figure BDA0003629760100008993
或其药学上可接受的盐。
383.如实施方案354所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-30)
Figure BDA0003629760100009001
或其药学上可接受的盐。
384.如实施方案383所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-31)
Figure BDA0003629760100009002
Figure BDA0003629760100009011
或其药学上可接受的盐。
385.如实施方案384所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-32)
Figure BDA0003629760100009012
或其药学上可接受的盐。
386.如实施方案385所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-33)
Figure BDA0003629760100009013
Figure BDA0003629760100009021
其中L’是L的剩余部分，且
y1各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
387.如实施方案384所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-34)
Figure BDA0003629760100009022
或其药学上可接受的盐。
388.如实施方案387所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-35)
Figure BDA0003629760100009031
其中L’是L的剩余部分，且
y1各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
389.如实施方案384所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-36)
Figure BDA0003629760100009032
或其药学上可接受的盐。
390.如实施方案389所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-37)
Figure BDA0003629760100009041
或其药学上可接受的盐。
391.如实施方案384所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-38)
Figure BDA0003629760100009042
或其药学上可接受的盐。
392.如实施方案391所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-39)
Figure BDA0003629760100009051
其中L’是L的剩余部分，且
y1各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
393.如实施方案384所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-40)
Figure BDA0003629760100009052
Figure BDA0003629760100009061
或其药学上可接受的盐。
394.如实施方案393所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-41)
Figure BDA0003629760100009062
其中L’是L的剩余部分，且
y1各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
395.如实施方案354所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-42)
Figure BDA0003629760100009071
或其药学上可接受的盐。
396.如实施方案395所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-43)
Figure BDA0003629760100009072
或其药学上可接受的盐。
397.如实施方案396所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-44)
Figure BDA0003629760100009081
或其药学上可接受的盐。
398.如实施方案397所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-45)
Figure BDA0003629760100009082
其中L’是L的剩余部分，且
y1各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
399.如实施方案396所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-46)
Figure BDA0003629760100009091
或其药学上可接受的盐。
400.如实施方案399所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-47)
Figure BDA0003629760100009092
Figure BDA0003629760100009101
其中L’是L的剩余部分，且
y1各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
401.如实施方案396所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-48)
Figure BDA0003629760100009102
或其药学上可接受的盐。
402.如实施方案401所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-49)
Figure BDA0003629760100009111
其中L’是L的剩余部分，且
y1各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
403.如实施方案396所述的缀合物，所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-50)
Figure BDA0003629760100009112
或其药学上可接受的盐。
404.如实施方案403所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-51)
Figure BDA0003629760100009121
其中L’是L的剩余部分，且
y1各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
405.如实施方案396所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-52)
Figure BDA0003629760100009122
Figure BDA0003629760100009131
或其药学上可接受的盐。
406.如实施方案405所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-53)
Figure BDA0003629760100009132
其中L’是L的剩余部分，且
y1各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
407.如实施方案353所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-54)
Figure BDA0003629760100009141
或其药学上可接受的盐。
408.如实施方案407所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-55)
Figure BDA0003629760100009142
或其药学上可接受的盐。
409.如实施方案408所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-56)
Figure BDA0003629760100009151
或其药学上可接受的盐。
410.如实施方案409所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VII-57)
Figure BDA0003629760100009152
其中L’是L的剩余部分，且
y1及y2各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
411.如实施方案213至410中任一项所述的缀合物，其中L或L’包含一个或多个任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C1-C20亚杂烷基、任选取代的C2-C20亚烯基、任选取代的C2-C20亚杂烯基、任选取代的C2-C20亚炔基、任选取代的C2-C20亚杂炔基、任选取代的C3-C20亚环烷基、任选取代的C2-C20亚杂环烷基、任选取代的C4-C20亚环烯基、任选取代的C4-C20亚杂环烯基、任选取代的C8-C20亚环炔基、任选取代的C8-C20亚杂环炔基、任选取代的C5-C15亚芳基、任选取代的C2-C15亚杂芳基、O、S、NRi、P、羰基、硫羰基、磺酰基、磷酸酯基、磷酰基或亚氨基，
其中Ri为H、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C1-C20杂烷基、任选取代的C2-C20烯基、任选取代的C2-C20杂烯基、任选取代的C2-C20炔基、任选取代的C2-C20杂炔基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C4-C20环烯基、任选取代的C4-C20杂环烯基、任选取代的C8-C20环炔基、任选取代的C8-C20杂环炔基、任选取代的C5-C15芳基或任选取代的C2-C15杂芳基。
412.如实施方案411所述的缀合物，其中L或L’的骨架由以下组成：一个或多个任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C1-C20亚杂烷基、任选取代的C2-C20亚烯基、任选取代的C2-C20亚杂烯基、任选取代的C2-C20亚炔基、任选取代的C2-C20亚杂炔基、任选取代的C3-C20亚环烷基、任选取代的C2-C20亚杂环烷基、任选取代的C4-C20亚环烯基、任选取代的C4-C20亚杂环烯基、任选取代的C8-C20亚环炔基、任选取代的C8-C20亚杂环炔基、任选取代的C5-C15亚芳基、任选取代的C2-C15亚杂芳基、O、S、NRi、P、羰基、硫羰基、磺酰基、磷酸酯基、磷酰基或亚氨基，
其中Ri为H、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C1-C20杂烷基、任选取代的C2-C20烯基、任选取代的C2-C20杂烯基、任选取代的C2-C20炔基、任选取代的C2-C20杂炔基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C4-C20环烯基、任选取代的C4-C20杂环烯基、任选取代的C8-C20环炔基、任选取代的C8-C20杂环炔基、任选取代的C5-C15芳基或任选取代的C2-C15杂芳基。
413.如实施方案411或412所述的缀合物，其中L或L’经氧代取代。
414.如实施方案213至413中任一项所述的缀合物，其中L或L’的骨架包含不超过250个原子。
415.如实施方案213至414中任一项所述的缀合物，其中L或L’能够形成酰胺、氨基甲酸酯、磺酰基或脲连接。
416.如实施方案213至410中任一项所述的缀合物，其中L或L’为键。
417.如实施方案213至410中任一项所述的缀合物，其中L或L’为原子。
418.如实施方案213至417中任一项所述的缀合物，其中每个L由以下来描述：式(M-L-I)
J1-(Q1)g-(T1)h-(Q2)i-(T2)j-(Q3)k-(T3)l-(Q4)m-(T4)n-(Q5)o-J2
其中J1是附接A1的键；
J2是附接至E的键或者是能够与缀合于E的官能团反应的官能团；
Q1、Q2、Q3、Q4及Q5中的每一者独立地为任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C1-C20亚杂烷基、任选取代的C2-C20亚烯基、任选取代的C2-C20亚杂烯基、任选取代的C2-C20亚炔基、任选取代的C2-C20亚杂炔基、任选取代的C3-C20亚环烷基、任选取代的C2-C20亚杂环烷基、任选取代的C4-C20亚环烯基、任选取代的C4-C20亚杂环烯基、任选取代的C8-C20亚环炔基、任选取代的C8-C20亚杂环炔基、任选取代的C5-C15亚芳基或任选取代的C2-C15亚杂芳基；
T1、T2、T3、T4中的每一者独立地为O、S、NRi、P、羰基、硫羰基、磺酰基、磷酸酯基、磷酰基或亚氨基；
Ri为H、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C1-C20杂烷基、任选取代的C2-C20烯基、任选取代的C2-C20杂烯基、任选取代的C2-C20炔基、任选取代的C2-C20杂炔基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C4-C20环烯基、任选取代的C4-C20杂环烯基、任选取代的C8-C20环炔基、任选取代的C8-C20杂环炔基、任选取代的C5-C15芳基或任选取代的C2-C15杂芳基；且g、h、i、j、k、l、m、n及o中的每一者独立地为0或1。
419.如实施方案418所述的缀合物，其中L选自
Figure BDA0003629760100009181
Figure BDA0003629760100009191
Figure BDA0003629760100009192
及
Figure BDA0003629760100009193
其中每个R8独立地选自H、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C5-C15芳基及任选取代的C2-C15杂芳基；
每个R9独立地选自任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C5-C15芳基及任选取代的C2-C15杂芳基；且
d及e各自独立地为1至26的整数。
420.如实施方案213至417中任一项所述的缀合物，其中L包括
Figure BDA0003629760100009194
Figure BDA0003629760100009201
421.如实施方案1至420中任一项所述的缀合物，其中连接至E的波浪线指示每个A1-L或每个A1-L-A2的L共价附接至E的溶剂暴露赖氨酸的氮原子。
422.如权利要求1至420中任一项所述的缀合物，其中连接至E的波浪线指示每个A1-L或每个A1-L-A2的L共价附接至E的溶剂暴露半胱氨酸的硫原子。
423.如实施方案1至422中任一项所述的缀合物，其中每个E为Fc结构域单体。
424.如实施方案423所述的缀合物，其中n为2，且每个E二聚以形成Fc结构域。
425.如实施方案2所述的缀合物，其中n为2，每个E为Fc结构域单体，每个E二聚以形成Fc结构域，且所述缀合物由以下来描述：式(D-I-1)
Figure BDA0003629760100009211
其中J为Fc结构域；且
T为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
426.如实施方案213所述的缀合物，其中n为2，每个E为Fc结构域单体，每个E二聚以形成Fc结构域，且所述缀合物由以下来描述：式(M-I-1)
Figure BDA0003629760100009212
其中J为Fc结构域；且
T为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
427.如实施方案1至424中任一项所述的缀合物，其中每个E独立地具有SEQ IDNO:1-138中任一者的序列。
428.如实施方案1至426中任一项所述的缀合物，其中T为1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
429.一种如实施方案1至426中任一项所述的缀合物的群体，其中T的平均值为1至10。
430.如实施方案429所述的缀合物的群体，其中T的平均值为1至5。
431.一种药物组合物，其包含如实施方案1至426中任一项所述的缀合物、如实施方案429或430中任一项所述的缀合物的群体或其药学上可接受的盐，及药学上可接受的赋形剂。
432.一种用于治疗具有病毒感染或据推测具有病毒感染的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的如实施方案1至426中任一项所述的缀合物、如实施方案429或430中任一项所述的缀合物的群体或如实施方案431所述的药物组合物。
433.一种用于预防性治疗有需要的受试者的病毒感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的如实施方案1至426中任一项所述的缀合物、如实施方案429或430中任一项所述的缀合物的群体或如实施方案431所述的药物组合物。
434.如实施方案432或433所述的方法，其中所述病毒感染是由呼吸道合胞病毒引起。
435.如实施方案434所述的方法，其中所述RSV是RSV A或RSV B。
436.如实施方案432至435中任一项所述的方法，其中所述受试者是免疫受损的。
437.如实施方案432至436中任一项所述的方法，其中所述受试者已经诊断患有体液免疫缺陷、T细胞缺陷、嗜中性粒细胞减少症、无脾或补体缺陷。
438.如实施方案432至437中任一项所述的方法，其中所述受试者正在经免疫抑制性疗法治疗或即将经免疫抑制性疗法治疗。
439.如实施方案432至437中任一项所述的方法，其中所述受试者已经诊断患有引起免疫抑制的疾病。
440.如实施方案439所述的方法，其中所述疾病是癌症或获得性免疫缺陷综合征。
441.如实施方案440所述的方法，其中所述癌症为白血病、淋巴瘤或多发性骨髓瘤。
442.如实施方案432至441中任一项所述的方法，其中所述受试者已经受或即将经受造血干细胞移植。
443.如实施方案432至441中任一项所述的方法，其中所述受试者已经受或即将经受器官移植。
444.如实施方案432至443中任一项所述的方法，其中所述受试者小于60个月大。
445.如实施方案432至444中任一项所述的方法，其中所述受试者小于24个月大。
446.如实施方案432至445所述的方法，其中所述受试者是早产儿。
447.如实施方案432至446中任一项所述的方法，其中所述缀合物或组合物是肌肉内、静脉内、皮内、动脉内、腹膜内、病变内、颅内、关节内、前列腺内、胸膜内、气管内、鼻内、玻璃体内、阴道内、直肠内、经表面、肿瘤内、经腹膜、皮下、结膜下、囊内、经粘膜、心包内、脐内、眼内、经口、经局部、通过吸入、通过注射或通过输注施用。
448.如实施方案432至447中任一项所述的方法，其中所述受试者用第二治疗剂治疗。
449.如实施方案448所述的方法，其中所述第二治疗剂为抗病毒剂。
450.如实施方案449所述的方法，其中所述抗病毒剂选自普沙托韦、卢米西他滨(lumcitabine)及利巴韦林。
451.如实施方案448所述的方法，其中所述第二治疗剂为抗病毒疫苗。
452.如实施方案451所述的方法，其中所述抗病毒疫苗在所述受试者中引发针对呼吸道合胞病毒的免疫反应。
其他实施方案
尽管本发明已经结合其具体的实施方案进行了描述，但应当了解能够对它进行进一步的修改并且本申请旨在涵盖任何基本根据本发明的原理而对本发明进行的变动、使用或适应性调整，并且包括虽然不属于本发明但属于本发明所属领域的已知或习用实施手段的和属于上文所述的实质特征的以及符合权利要求范围之内的变更。在以上说明书中提及的所有公布、专利和专利申请均以引用方式并入本文，其程度就如同每个单独的公布、专利或专利申请被具体和单独地指出以引用方式整体并入一般。
本文提供一个或多个优选实施方案的详细描述。然而，应理解，本发明可以不同形式来体现。因此，本文公开的具体细节不应被解释为是限制性的，而是解释为权利要求书的基础以及解释为教导本领域中的技术人员以任何适当的方式采用本发明的代表性基础。

Claims (54)

1.一种由以下中任一者来描述的缀合物：式(D-I)、(M-I)、(1)或(2)
Figure FDA0003629760090000011
其中每个A1及每个A2独立地选自以下中任一者：式(A-I)-(A-VI)
Figure FDA0003629760090000012
Figure FDA0003629760090000013
及
Figure FDA0003629760090000014
其中
Q选自任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C2-C20烯基、任选取代的C3-C20环烯基、任选取代的C2-C20炔基、任选取代的C5-C20芳基、任选取代的C2-C15杂芳基及任选取代的C1-C20烷氧基；
R1、X1及Y各自独立地选自
Figure FDA0003629760090000021
Figure FDA0003629760090000022
及
Figure FDA0003629760090000023
R2、R3、X2、U1、M1、M2、K1及K2各自独立地选自OH、卤素、腈、硝基、任选取代的胺、任选取代的亚胺、任选取代的C1-C20烷氨基、任选取代的巯基、任选取代的羧基、任选取代的氰基、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20烯基、任选取代的C3-C20环烯基、任选取代的C2-C20炔基、任选取代的C5-C20芳基、任选取代的C2-C15杂芳基及任选取代的C1-C20烷氧基；
每个X3独立地选自任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C5-C15芳基及任选取代的C1-C15杂芳基；
每个Ua是环原子且独立地选自CH或N；
U2是环氮原子的取代基且选自任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C3-C20亚环烷基、任选取代的C2-C20亚杂环烷基、任选取代的C5-C15亚芳基、任选取代的C3-C15亚杂芳基及键；
U3是环原子的取代基且选自任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20烯基、任选取代的C3-C20环烯基、任选取代的C2-C20炔基、任选取代的C5-C20芳基、任选取代的C2-C15杂芳基、任选取代的C1-C20烷氧基、醇、任选取代的C1-C20烷氨基、任选取代的羧基、任选取代的C1-C20羰基、任选取代的氰基及任选取代的砜；
M3及M4各自独立地选自任选取代的C1-C20亚烷基及任选取代的C1-C20亚杂烷基；
W选自任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C5-C15芳基及任选取代的C3-C15杂芳基；
其中M3、M4及W各自独立地任选地不存在；
Ar选自任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C5-C15芳基及任选取代的C1-C15杂芳基；
每个R5选自H、任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C3-C20亚环烷基、任选取代的C3-C20亚杂环烷基、任选取代的C5-C15亚芳基及任选取代的C2-C15亚杂芳基；
每个R6选自任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C3-C20亚环烷基、任选取代的C3-C20亚杂环烷基、任选取代的C5-C15亚芳基及任选取代的C2-C15亚杂芳基；
V为-N-或-CH-；
h为0或1，
其中当h为1时，K3为
Figure FDA0003629760090000041
D为-O-、-CH2-或-NH-；
Rx及Ry各自独立地为C1-C3烷基；
b、g1及g2各自独立地为0、1、2或3；
p为1、2或3；
其中当h为0时，K3为
Figure FDA0003629760090000042
且Y为氮原子；
Rz选自-OH、卤素、腈、硝基、氨基、任选取代的胺、任选取代的亚胺、任选取代的C1-C20烷氨基、任选取代的巯基、任选取代的羧基、任选取代的氰基、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20烯基、任选取代的C3-C20环烯基、任选取代的C2-C20炔基、任选取代的C5-C20芳基、任选取代的C2-C15杂芳基及任选取代的C1-C20烷氧基；
n为1或2；
每个E独立地包含Fc结构域单体、白蛋白、白蛋白结合肽或Fc结合肽；
L为共价附接至E且附接至A1或者A1及A2中的每一者的每个Y的接头；且
T为1至20的整数；
式(D-I)、(M-I)、(1)及(2)中的每条波浪线指示每个L与每个E之间的共价连接；
或其药学上可接受的盐。
2.如权利要求1所述的缀合物，其中每个A1及每个A2独立地选自以下中任一者：式(A-IIIa)-(A-IIIf)
Figure FDA0003629760090000051
或其药学上可接受的盐。
3.如权利要求2所述的缀合物，其中每个A1及每个A2独立地选自以下中任一者：式(A-IIIb)-(A-IIIf)。
4.如权利要求1所述的缀合物，其中每个A1及每个A2独立地选自以下中任一者：式(A-IVa)-(A-IVf)
Figure FDA0003629760090000061
或其药学上可接受的盐。
5.如权利要求1所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-I)
Figure FDA0003629760090000062
其中每个A1独立地选自式(A-I)-(A-VI)中任一者；
每个E独立地包含Fc结构域单体、白蛋白、白蛋白结合肽或Fc结合肽；
n为1或2；
T为1至20的整数；且
L为共价附接至E及A1中的每一者的接头，
或其药学上可接受的盐。
6.如权利要求5所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-II)
Figure FDA0003629760090000071
或其药学上可接受的盐。
7.如权利要求5所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-III)
Figure FDA0003629760090000081
或其药学上可接受的盐。
8.如权利要求5所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-IV)
Figure FDA0003629760090000082
或其药学上可接受的盐。
9.如权利要求8所述的缀合物，其中Ua为N且p为1或2；或Ua为CH且p为1、2或3。
10.如权利要求8所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-1)
Figure FDA0003629760090000091
或其药学上可接受的盐。
11.如权利要求8所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-8)
Figure FDA0003629760090000092
Figure FDA0003629760090000101
或其药学上可接受的盐。
12.如权利要求8所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-18)
Figure FDA0003629760090000102
或其药学上可接受的盐。
13.如权利要求8所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-IV-25)
Figure FDA0003629760090000111
或其药学上可接受的盐。
14.如权利要求8至13中任一项所述的缀合物，其中U3由以下来描述：
Figure FDA0003629760090000112
其中Ub为C或O；且U4选自氨基、任选取代的胺、任选取代的亚胺、任选取代的C1-C20烷氨基、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C5-C15芳基、任选取代的C3-C15杂芳基及键。
15.如权利要求8至13中任一项所述的缀合物，其中U3选自：
Figure FDA0003629760090000113
Figure FDA0003629760090000121
16.如权利要求8至15中任一项所述的缀合物，其中U2为C1-C6亚烷基。
17.如权利要求5所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-V)
Figure FDA0003629760090000122
或其药学上可接受的盐。
18.如权利要求17所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-V-1)
Figure FDA0003629760090000131
或其药学上可接受的盐。
19.如权利要求17所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-V-10)
Figure FDA0003629760090000132
或其药学上可接受的盐。
20.如权利要求5所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VI)
Figure FDA0003629760090000141
或其药学上可接受的盐。
21.如权利要求5所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(M-VII)
Figure FDA0003629760090000151
或其药学上可接受的盐。
22.如权利要求5至21中任一项所述的缀合物，其中L或L’包含一个或多个任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C1-C20亚杂烷基、任选取代的C2-C20亚烯基、任选取代的C2-C20亚杂烯基、任选取代的C2-C20亚炔基、任选取代的C2-C20亚杂炔基、任选取代的C3-C20亚环烷基、任选取代的C2-C20亚杂环烷基、任选取代的C4-C20亚环烯基、任选取代的C4-C20亚杂环烯基、任选取代的C8-C20亚环炔基、任选取代的C8-C20亚杂环炔基、任选取代的C5-C15亚芳基、任选取代的C2-C15亚杂芳基、O、S、NRi、P、羰基、硫羰基、磺酰基、磷酸酯基、磷酰基或亚氨基，
其中Ri为H、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C1-C20杂烷基、任选取代的C2-C20烯基、任选取代的C2-C20杂烯基、任选取代的C2-C20炔基、任选取代的C2-C20杂炔基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C4-C20环烯基、任选取代的C4-C20杂环烯基、任选取代的C8-C20环炔基、任选取代的C8-C20杂环炔基、任选取代的C5-C15芳基或任选取代的C2-C15杂芳基。
23.如权利要求5至22中任一项所述的缀合物，其中每个L由以下来描述：式(M-L-I)
J1-(Q1)g-(T1)h-(Q2)i-(T2)j-(Q3)k-(T3)l-(Q4)m-(T4)n-(Q5)o-J2
其中J1是附接A1的键；
J2是附接至E的键或者是能够与缀合于E的官能团反应的官能团；
Q1、Q2、Q3、Q4及Q5中的每一者独立地为任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C1-C20亚杂烷基、任选取代的C2-C20亚烯基、任选取代的C2-C20亚杂烯基、任选取代的C2-C20亚炔基、任选取代的C2-C20亚杂炔基、任选取代的C3-C20亚环烷基、任选取代的C2-C20亚杂环烷基、任选取代的C4-C20亚环烯基、任选取代的C4-C20亚杂环烯基、任选取代的C8-C20亚环炔基、任选取代的C8-C20亚杂环炔基、任选取代的C5-C15亚芳基或任选取代的C2-C15亚杂芳基；
T1、T2、T3、T4中的每一者独立地为O、S、NRi、P、羰基、硫羰基、磺酰基、磷酸酯基、磷酰基或亚氨基；
Ri为H、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C1-C20杂烷基、任选取代的C2-C20烯基、任选取代的C2-C20杂烯基、任选取代的C2-C20炔基、任选取代的C2-C20杂炔基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C4-C20环烯基、任选取代的C4-C20杂环烯基、任选取代的C8-C20环炔基、任选取代的C8-C20杂环炔基、任选取代的C5-C15芳基或任选取代的C2-C15杂芳基；且g、h、i、j、k、l、m、n及o中的每一者独立地为0或1。
24.如权利要求1所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-I)
Figure FDA0003629760090000171
其中每个A1及每个A2独立地选自式(A-I)-(A-VI)中任一者；
每个E独立地包含Fc结构域单体；
n为1或2；
T为1至20的整数；且
连接至E的波浪线指示每个A1-L-A2共价附接至E；
或其药学上可接受的盐。
25.如权利要求24所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-II)
Figure FDA0003629760090000172
或其药学上可接受的盐。
26.如权利要求24所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-III)
Figure FDA0003629760090000181
或其药学上可接受的盐。
27.如权利要求24所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-IV)
Figure FDA0003629760090000182
或其药学上可接受的盐。
28.如权利要求27所述的缀合物，其中Ua为N且p为1或2；或Ua为CH且p为1、2或3。
29.如权利要求27所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-1)
Figure FDA0003629760090000191
或其药学上可接受的盐。
30.如权利要求27所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-8)
Figure FDA0003629760090000201
或其药学上可接受的盐。
31.如权利要求27所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-18)
Figure FDA0003629760090000202
或其药学上可接受的盐。
32.如权利要求27所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-IV-25)
Figure FDA0003629760090000211
或其药学上可接受的盐。
33.如权利要求27至32中任一项所述的缀合物，其中每个U3由以下来描述：
Figure FDA0003629760090000212
其中Ub为C或O；且U4选自氨基、任选取代的胺、任选取代的亚胺、任选取代的C1-C20烷氨基、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C5-C15芳基、任选取代的C3-C15杂芳基及键。
34.如权利要求27至32中任一项所述的缀合物，其中每个U3选自：
Figure FDA0003629760090000213
Figure FDA0003629760090000221
35.如权利要求27至34中任一项所述的缀合物，其中U2为C1-C6亚烷基。
36.如权利要求24所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-V)
Figure FDA0003629760090000222
或其药学上可接受的盐。
37.如权利要求36所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-V-1)
Figure FDA0003629760090000231
或其药学上可接受的盐。
38.如权利要求36所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-V-10)
Figure FDA0003629760090000232
或其药学上可接受的盐。
39.如权利要求36至38中任一项所述的缀合物，其中U3为任选取代的C1-C6烷基。
40.如权利要求24所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VI)
Figure FDA0003629760090000241
或其药学上可接受的盐。
41.如权利要求24所述的缀合物，其中所述缀合物由以下来描述：式(D-VII)
Figure FDA0003629760090000251
或其药学上可接受的盐。
42.如权利要求24至41中任一项所述的缀合物，其中L或L’包含一个或多个任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C1-C20亚杂烷基、任选取代的C2-C20亚烯基、任选取代的C2-C20亚杂烯基、任选取代的C2-C20亚炔基、任选取代的C2-C20亚杂炔基、任选取代的C3-C20亚环烷基、任选取代的C2-C20亚杂环烷基、任选取代的C4-C20亚环烯基、任选取代的C4-C20亚杂环烯基、任选取代的C8-C20亚环炔基、任选取代的C8-C20亚杂环炔基、任选取代的C5-C15亚芳基、任选取代的C2-C15亚杂芳基、O、S、NRi、P、羰基、硫羰基、磺酰基、磷酸酯基、磷酰基或亚氨基，
其中Ri为H、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C1-C20杂烷基、任选取代的C2-C20烯基、任选取代的C2-C20杂烯基、任选取代的C2-C20炔基、任选取代的C2-C20杂炔基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C4-C20环烯基、任选取代的C4-C20杂环烯基、任选取代的C8-C20环炔基、任选取代的C8-C20杂环炔基、任选取代的C5-C15芳基或任选取代的C2-C15杂芳基。
43.如权利要求24至42中任一项所述的缀合物，其中每个L由以下来描述：式(D-L-I)
Figure FDA0003629760090000261
其中
LA由式GA1-(ZA1)g1-(YA1)h1-(ZA2)i1-(YA2)j1-(ZA3)k1-(YA3)l1-(ZA4)m1-(YA4)n1-(ZA5)o1-GA2描述；
LB由式GB1-(ZB1)g2-(YB1)h2-(ZB2)i2-(YB2)j2-(ZB3)k2-(YB3)l2-(ZB4)m2-(YB4)n2-(ZB5)o2-GB2描述；
LC由式GC1-(ZC1)g3-(YC1)h3-(ZC2)i3-(YC2)j3-(ZC3)k3-(YC3)l3-(ZC4)m3-(YC4)n3-(ZC5)o3-GC2描述；
GA1是附接至Qi的键；
GA2是附接至A1的键；
GB1是附接至Qi的键；
GB2是附接至A2的键；
GC1是附接至Qi的键；
GC2是附接至E的键；
ZA1、ZA2、ZA3、ZA4、ZA5、ZB1、ZB2、ZB3、ZB4、ZB5、ZC1、ZC2、ZC3、ZC4及ZC5中的每一者独立地为任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C1-C20亚杂烷基、任选取代的C2-C20亚烯基、任选取代的C2-C20亚杂烯基、任选取代的C2-C20亚炔基、任选取代的C2-C20亚杂炔基、任选取代的C3-C20亚环烷基、任选取代的C2-C20亚杂环烷基、任选取代的C4-C20亚环烯基、任选取代的C4-C20亚杂环烯基、任选取代的C8-C20亚环炔基、任选取代的C8-C20亚杂环炔基、任选取代的C5-C15亚芳基或任选取代的C2-C15亚杂芳基；
YA1、YA2、YA3、YA4、YB1、YB2、YB3、YB4、YC1、YC2、YC3及YC4中的每一者独立地为O、S、NRi、P、羰基、硫羰基、磺酰基、磷酸酯基、磷酰基或亚氨基；
Ri为H、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C1-C20杂烷基、任选取代的C2-C20烯基、任选取代的C2-C20杂烯基、任选取代的C2-C20炔基、任选取代的C2-C20杂炔基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C4-C20环烯基、任选取代的C4-C20杂环烯基、任选取代的C8-C20环炔基、任选取代的C8-C20杂环炔基、任选取代的C5-C15芳基或任选取代的C2-C15杂芳基；
g1、h1、i1、j1、k1、l1、m1、n1、o1、g2、h2、i2、j2、k2、l2、m2、n2、o2、g3、h3、i3、j3、k3、l3、m3、n3及o3中的每一者独立地为0或1；
Qi为氮原子、任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C1-C20亚杂烷基、任选取代的C2-C20亚烯基、任选取代的C2-C20亚杂烯基、任选取代的C2-C20亚炔基、任选取代的C2-C20亚杂炔基、任选取代的C3-C20亚环烷基、任选取代的C2-C20亚杂环烷基、任选取代的C4-C20亚环烯基、任选取代的C4-C20亚杂环烯基、任选取代的C8-C20亚环炔基、任选取代的C8-C20亚杂环炔基、任选取代的C5-C15亚芳基或任选取代的C2-C15亚杂芳基。
44.如权利要求1至43中任一项所述的缀合物，其中连接至E的波浪线指示每个A1-L或每个A1-L-A2的L共价附接至E的溶剂暴露赖氨酸的氮原子。
45.如权利要求1至43中任一项所述的缀合物，其中连接至E的波浪线指示每个A1-L或每个A1-L-A2的L共价附接至E的溶剂暴露半胱氨酸的硫原子。
46.如权利要求1至45中任一项所述的缀合物，其中每个E为Fc结构域单体。
47.如权利要求46所述的缀合物，其中n为2，且每个E二聚以形成Fc结构域。
48.如权利要求1至47中任一项所述的缀合物，其中每个E独立地具有SEQ ID NO:1-138中任一者的序列。
49.如权利要求1至48中任一项所述的缀合物，其中T为1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
50.一种如权利要求1至49中任一项所述的缀合物的群体，其中T的平均值为1至10。
51.一种药物组合物，其包含如权利要求1至49中任一项所述的缀合物或如权利要求50所述的缀合物的群体，或其药学上可接受的盐，及药学上可接受的赋形剂。
52.一种用于治疗具有病毒感染或据推测具有病毒感染的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的如权利要求1至49中任一项所述的缀合物、如权利要求50所述的缀合物的群体或如权利要求51所述的药物组合物。
53.一种用于预防性治疗有需要的受试者的病毒感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的如权利要求1至49中任一项所述的缀合物、如权利要求50所述的缀合物的群体或如权利要求51所述的药物组合物。
54.如权利要求52或53所述的方法，其中所述病毒感染是由呼吸道合胞病毒引起。
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