CN114401731A - 用于治疗人类免疫缺陷病毒的组合物及方法 - Google Patents

用于治疗人类免疫缺陷病毒的组合物及方法 Download PDF

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陈志勇
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Abstract

用于治疗病毒感染的组合物及方法包括含有连接于Fc单体、Fc结构域及Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽的病毒gp120受体(例如，替米沙韦、BMS‑818251、DMJ‑II‑121、BNM‑IV‑147或其类似物)的抑制剂的缀合物。具体地说，缀合物可用于治疗病毒感染(例如，HIV感染)。

Description

用于治疗人类免疫缺陷病毒的组合物及方法
背景技术
对用于人类免疫缺陷病毒(HIV)的新型抗病毒治疗的需求意义重大且在医学领域尤其至关重要。自30多年前发现第一例HIV病例以来，已有7800万人感染了HIV且已有3500万死于与获得性免疫缺陷综合征(AIDS)相关的疾病。目前，全世界有3690万人感染HIV或患有AIDS，其中包括180万名15岁以下的儿童。2017年，全世界估计有180万个体新感染了HIV。
用于HIV的抗病毒治疗的开发已成为一项持续挑战。自1987年第一个美国FDA批准的抗HIV药物以来，已经开发了一系列抗逆转录病毒疗法。然而，出现了耐药菌株，限制了可以使用这些抗逆转录病毒疗法的患者数量。
HIV抗病毒抑制剂分为多种类别，针对HIV循环的不同步骤。一类抗病毒药物，核苷逆转录酶抑制剂(NRTI)在通过HIV逆转录酶掺入生长的DNA链后，通过链终止抑制病毒复制。另一类，非核苷逆转录抑制剂(NNRTI)，类似地靶向逆转录，但位于与核苷逆转录抑制剂不同的位点。再另一类抗病毒药物，整合酶抑制剂抑制病毒DNA插入宿主细胞基因组。蛋白酶抑制剂是抑制蛋白酶的剂，蛋白酶是组装新病毒粒子的关键酶。一类被称为病毒进入抑制剂的抗病毒药物含有通过与HIV包膜(Env)糖蛋白结合来干扰病毒进入细胞的剂。特别是，病毒进入抑制剂靶向HIV病毒的表面亚基gp120受体。
然而，这些剂中有许多是由肾脏分泌或清除的，因此需要对肾功能受损的患者进行剂量调整，且它们具有药物相互作用，可能增加不良反应的影响，尤其是在经历器官移植的HIV阳性个体中。此外，这些剂中有许多已被证明具有直接的肾毒性，可诱发多种肾脏病症。需要用于治疗HIV的新的更有效疗法。
发明内容
本公开涉及用于抑制病毒生长的缀合物、组合物及方法，及用于治疗病毒感染的方法。具体地说，此类缀合物含有抑制人类免疫缺陷病毒的部分的单体或二聚体，例如通过与gp120糖蛋白(例如，gp120结合剂诸如替米沙韦(temsavir)、BMS-818251、DMJ-II-121、BNM-IV-147或其类似物)结合；与Fc单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽缀合。在优选的实施方案中，缀合物中的HIV靶向部分(例如，替米沙韦、BMS-818251、DMJ-II-121、BNM-IV-147或其类似物)靶向由HIV Env基因编码的蛋白质，特别是在病毒粒子的表面上的gp120糖蛋白，从而防止病毒附着到宿主CD4+T细胞且进入宿主免疫细胞。所述缀合物中的Fc单体或Fc结构域结合于免疫细胞(例如，嗜中性粒细胞)上的FcγR(例如，FcRn、FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIc、FcγRIIIa及FcγRIIIb)以活化吞噬作用及效应子功能，诸如抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)，因此由免疫细胞吞没及破坏病毒粒子且进一步增强所述缀合物的抗病毒活性。所述白蛋白或白蛋白结合肽可例如通过使白蛋白缀合于再循环的新生儿Fc受体而延长所述缀合物的半衰期。所述组合物适用于抑制病毒生长的方法及治疗病毒感染(诸如由HIV-1及HIV-2引起的那些)的方法。
在第一方面中，本发明提供一种由式(D-I)、(M-I)、(1)或(2)中任一者描述的缀合物：
Figure BDA0003487201460000021
其中每个A1及每个A2独立地由式(A-I)或式(A-II)描述：
Figure BDA0003487201460000031
其中Q选自由以下组成的组：
Figure BDA0003487201460000032
Figure BDA0003487201460000033
及
Figure BDA0003487201460000034
S选自由以下组成的组：
Figure BDA0003487201460000035
及
Figure BDA0003487201460000036
R1、R2、R3各自独立地选自H、OH、卤素、腈、硝基、任选取代的氨基、任选取代的巯基、任选取代的羧基、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20烯基、任选取代的C3-C20环烯基、任选取代的C2-C20炔基、任选取代的C5-C20芳基、任选取代的C3-C15杂芳基及任选取代的C1-C20烷氧基；
R4选自任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C5-C15芳基、任选取代的C3-C15杂芳基及键；
R5选自H或任选取代的C1-C6烷基；
R6选自任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C5-C15芳基及任选取代的C3-C15杂芳基；
R7及Y各自独立地选自
Figure BDA0003487201460000041
Figure BDA0003487201460000051
每个R8独立地选自H、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C5-C15芳基及任选取代的C2-C15杂芳基；
每个R9独立地选自任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C5-C15芳基及任选取代的C2-C15杂芳基；
x为1或2；
k为0、1、2、3、4或5；
Ar选自由以下组成的组：任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C5-C15芳基及任选取代的C3-C15杂芳基；
n为1或2；
在一些实施方案中，n为1且每个E包括Fc结构域单体(例如，具有SEQ ID NO:1-95中任一者的序列的Fc结构域单体)、白蛋白(例如，具有SEQ ID NO:96-98中任一者的序列的白蛋白)、白蛋白结合肽或Fc结合肽；
在一些实施方案中，n为2且每个E包括Fc结构域单体(例如，具有SEQ ID NO:1-95中任一者的序列的Fc结构域单体)，其中Fc结构域单体二聚以形成Fc结构域；
L是共价附接至每个E且附接至每个A1及/或A2的每个Y的接头；
T为1至20的整数(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，且式(D-I)、(M-I)、(1)或(2)中的每条波浪线指示L共价附接(例如，通过共价键或接头)至每个E；或其药学上可接受的盐。当T大于1(例如，T为2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)时，每个A1-L或每个A1-L-A2可以独立地经选择(例如，独立地选自本文所述的A1-L或A1-L-A2结构中任一者)。
在本文所述的任何方面的优选实施方案(例如，式(1)、(2)、(D-I)-(D-XVII)或(M-I)-(M-XVII)中任一者的缀合物)中，当A1及/或A2选自由(A-I)描述的结构时，x为2。
在本文所述的任何方面的优选实施方案(例如，式(1)、(2)、(D-I)-(D-XVII)或(M-I)-(M-XVII)中任一者的缀合物)中，当A1及/或A2选自由(A-II)描述的结构时，x为2。
在本文所述的任何方面的优选实施方案中，n为2且每个E包含Fc结构域单体(例如，具有SEQ ID NO:1-95中任一者的序列的Fc结构域单体)。在具有两个Fc结构域单体的缀合物(例如，式(1)、式(2)、式(D-I)(其中n等于2)或(M-I)(其中n等于2))中，Fc结构域单体二聚以形成Fc结构域。
在某些实施方案中，每个A1及每个A2独立地由式(A-Ia)-(A-Ih)中任一者描述：
Figure BDA0003487201460000071
Figure BDA0003487201460000072
及
Figure BDA0003487201460000073
其中每个X独立地为C或N；
或其药学上可接受的盐。
在其他实施方案中，每个A1及每个A2独立地由式(A-Ia-i)-(A-Ih-i)中任一者描述：
Figure BDA0003487201460000081
Figure BDA0003487201460000082
及
Figure BDA0003487201460000083
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，每个A1及每个A2独立地由式(A-Ii)-(A-Ip)中任一者描述：
Figure BDA0003487201460000084
Figure BDA0003487201460000085
及
Figure BDA0003487201460000086
其中每个X独立地为C或N；
或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中，每个A1及每个A2独立地由式(A-Iq)-(A-Ix)中任一者描述：
Figure BDA0003487201460000091
Figure BDA0003487201460000092
及
Figure BDA0003487201460000093
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，每个A1及每个A2独立地由式(A-Iq-i)-(A-Ix-i)中任一者描述：
Figure BDA0003487201460000101
Figure BDA0003487201460000107
及
Figure BDA0003487201460000103
或其药学上可接受的盐。
在又一个实施方案中，每个A1及每个A2独立地由式(A-Iaa)-(A-Ihh)中任一者描述：
Figure BDA0003487201460000104
Figure BDA0003487201460000105
及
Figure BDA0003487201460000108
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，每个A1及每个A2独立地由式(A-Iii)-(A-Ipp)中任一者描述：
Figure BDA0003487201460000111
Figure BDA0003487201460000112
及
Figure BDA0003487201460000113
其中每个X独立地为C或N；
或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中，每个A1及每个A2独立地由式(A-Iii-i)-(A-Ipp-i)中任一者描述：
Figure BDA0003487201460000121
Figure BDA0003487201460000122
及
Figure BDA0003487201460000125
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，R1为H。在某些实施方案中，R2为H。在优选实施方案中，R2为-OCH3。在特定实施方案中，R3为H。在另一个实施方案中，R4为H。在一些实施方案中，R5为H。在特定实施方案中，R7为羰基。在某些实施方案中，X为N。在其他实施方案中，X为C。
在某些实施方案中，每个A1及每个A2独立地由式(A-IIa)-(A-IId)中任一者描述：
Figure BDA0003487201460000124
Figure BDA0003487201460000131
或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中，每个A1及每个A2独立地由式(A-IIa-i)-(A-IId-i)中任一者描述：
Figure BDA0003487201460000132
其中U5为C1-C10烷基；
或其药学上可接受的盐。
在另一方面中，本发明提供一种由式(D-I)描述的缀合物：
Figure BDA0003487201460000141
其中每个E包括Fc结构域单体(例如，具有SEQ ID NO:1-95中任一者的序列的Fc结构域单体)；每个A1-L-A2中的L是共价附接至E中铰链半胱氨酸的硫原子且附接至A1及A2中每一者的接头；n为1或2(例如，当n为2时，两个Fc结构域单体二聚以形成Fc结构域)；T为1至20的整数(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，且连接于E的波浪线指示每个A1-L-A2共价附接(例如，通过共价键或接头)至E中铰链半胱氨酸的硫原子，或其药学上可接受的盐。当T大于1(例如，T为2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)时，每个A1-L-A2可独立地经选择(例如，独立地选自本文所述的A1-L-A2结构中任一者)。
在另一方面中，本发明提供一种由式(D-I)描述的缀合物：
Figure BDA0003487201460000142
其中每个E包括Fc结构域单体(例如，具有SEQ ID NO:1-95中任一者的序列的Fc结构域单体)；每个A1-L-A2中的L是共价附接至E中表面暴露赖氨酸的氮原子且附接至A1及A2中每一者的接头；n为1或2(例如，当n为2时，两个Fc结构域单体二聚以形成Fc结构域)；T为1至20的整数(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，且连接于E的波浪线指示每个A1-L-A2共价附接(例如，通过共价键或接头)至E中表面暴露赖氨酸的氮原子，或其药学上可接受的盐。当T大于1(例如，T为2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)时，每个A1-L-A2可独立地经选择(例如，独立地选自本文所述的A1-L-A2结构中任一者)。
在另一方面中，本发明提供一种由式(M-I)描述的缀合物：
Figure BDA0003487201460000151
其中每个E包括Fc结构域单体(例如，具有SEQ ID NO:1-95中任一者的序列的Fc结构域单体)；每个L-A1中的L是共价附接至E中铰链半胱氨酸的硫原子且附接至A1的接头；n为1或2(例如，当n为2时，两个Fc结构域单体二聚以形成Fc结构域)；T为1至20的整数(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)；且连接于E的波浪线指示每个L-A1共价附接(例如，通过共价键或接头)至E中铰链半胱氨酸的硫原子，或其药学上可接受的盐。当T大于1(例如，T为2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)时，每个A1可独立地选自由式(A-I)描述的任何结构。
在另一方面中，本发明提供一种由式(M-I)描述的缀合物：
Figure BDA0003487201460000152
Figure BDA0003487201460000161
其中每个E包含Fc结构域单体(例如，具有SEQ ID NO:1-95中任一者的序列的Fc结构域单体)；每个L-A1中的L是共价附接至E中表面暴露赖氨酸的氮原子且附接至A1的接头；n为1或2(例如，当n为2时，两个Fc结构域单体二聚以形成Fc结构域)；T为1至20的整数(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，连接于E的波浪线指示每个L-A1共价附接(例如，通过共价键或接头)至E中表面暴露赖氨酸的氮原子，或其药学上可接受的盐。当T大于1(例如，T为2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)时，每个A1可独立地选自由式(A-I)描述的任何结构。
在另一方面中，本发明提供一种由式(1)描述的缀合物：
Figure BDA0003487201460000162
其中每个E包括Fc结构域单体(例如，具有SEQ ID NO:1-95中任一者的序列的Fc结构域单体)；每个A1-L-A2中的L是共价附接至每个E中铰链半胱氨酸的硫原子且附接至A1及A2中每一者的接头；T为1至20的整数(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，且连接于两个E的两条波浪线指示每个A1-L-A2共价附接(例如，通过共价键或接头)至两个E中两个铰链半胱氨酸的一对硫原子，或其药学上可接受的盐。当T大于1(例如，T为2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)时，每个A1-L-A2可独立地经选择(例如，独立地选自本文所述的A1-L-A2结构中任一者)。
在另一方面中，本发明提供一种由式(2)描述的缀合物：
Figure BDA0003487201460000171
其中每个E包括Fc结构域单体(例如，具有SEQ ID NO:1-95中任一者的序列的Fc结构域单体)；每个L-A1中的L是共价附接至E中铰链半胱氨酸的硫原子且附接至A1的接头；T为1至20的整数(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，且连接于两个硫原子的两条波浪线指示每个L-A1共价附接至两个E中两个铰链半胱氨酸的一对硫原子，或其药学上可接受的盐。当T大于1(例如，T为2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)时，每个A可独立地选自由式(A-I)描述的结构。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，每个E包括具有SEQ ID NO:1-95中任一者的序列的Fc结构域单体。
在一些实施方案中，所述硫原子对中的至少一者是对应于SEQ ID NO:10或SEQ IDNO:11的铰链半胱氨酸(即，SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys10、Cys13、Cys16或Cys18)(例如，其硫原子)的硫原子。在一些实施方案中，所述硫原子对是对应于以下(例如，其硫原子)的硫原子：SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11中的Cys10及Cys13、SEQ ID NO:10或SEQ IDNO:11中的Cys10及Cys16、SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11中的Cys30及Cys18、SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11中的Cys13及Cys36、SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11中的Cys13及Cys38及/或SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11中的Cys36及Cys38。
在一些实施方案中，当T为2时，所述硫原子对是SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11中的Cys10及Cys13或者SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys36及Cys38(例如，对应于其的硫原子)。
在一些实施方案中，所述硫原子对包括来自各E的半胱氨酸的一硫原子，即，L-A连同其所附接的硫原子形成两个Fc结构域(例如，包含SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的序列的两个Fc结构域)之间的桥。在一些实施方案中，所述硫原子对是对应于来自一个E的SEQID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys10(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys10(例如，其硫原子)的硫原子。在一些实施方案中，所述硫原子对是对应于来自一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys13(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys13(例如，其硫原子)的硫原子。在一些实施方案中，所述硫原子对是对应于来自一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys16(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys16(例如，其硫原子)的硫原子。在一些实施方案中，所述硫原子对是对应于来自一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys18(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys18(例如，其硫原子)的硫原子。
在一些实施方案中，当T为2时，所述硫原子对是对应于来自一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys10(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys10的硫原子以及对应于来自一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys13(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys13(例如，其硫原子)的硫原子。在一些实施方案中，当T为2时，所述硫原子对是对应于来自一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys10(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys10的硫原子以及对应于来自一个E的SEQID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys16(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys16(例如，其硫原子)的硫原子。在一些实施方案中，当T为2时，所述硫原子对是对应于来自一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys10(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys10的硫原子以及对应于来自一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys18(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys18(例如，其硫原子)的硫原子。
在一些实施方案中，当T为2时，所述硫原子对是对应于来自一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys13(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys13的硫原子以及对应于来自一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys16(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys16(例如，其硫原子)的硫原子。在一些实施方案中，当T为2时，所述硫原子对是对应于来自一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys13(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys13的硫原子以及对应于来自一个E的SEQID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys18(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys18(例如，其硫原子)的硫原子。
在一些实施方案中，当T为2时，所述硫原子对是对应于来自一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys16(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys16的硫原子以及对应于来自一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys18(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys18(例如，其硫原子)的硫原子。
在一些实施方案中，当T为3时，所述硫原子对是对应于来自一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys10(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys10的硫原子；对应于来自一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys13(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys13的硫原子；以及对应于来自一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys16(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys16(例如，其硫原子)的硫原子。在一些实施方案中，当T为3时，所述硫原子对是对应于来自一个E的SEQID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys10(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys10的硫原子；对应于来自一个E的SEQ ID NO:10或SEQ IDNO:11的Cys13(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:10或SEQ IDNO:11的Cys13的硫原子；以及对应于来自一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys18(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys18(例如，其硫原子)的硫原子。在一些实施方案中，当T为3时，所述硫原子对是对应于来自一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys10(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys10的硫原子；对应于来自一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys18(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys18的硫原子；以及对应于来自一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys16(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys16(例如，其硫原子)的硫原子。在一些实施方案中，当T为3时，所述硫原子对是对应于来自一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys13(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys13的硫原子；对应于来自一个E的SEQ IDNO:10或SEQ ID NO:11的Cys18(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ IDNO:10或SEQ ID NO:11的Cys18的硫原子；以及对应于来自一个E的SEQ ID NO:10或SEQ IDNO:11的Cys16(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:10或SEQ IDNO:11的Cys16(例如，其硫原子)的硫原子。
在一些实施方案中，当T为3时，所述硫原子对是对应于来自一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys10(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys10的硫原子；对应于来自一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys13(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys13的硫原子；对应于来自一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys16(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys16的硫原子；以及对应于来自一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys18(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Cys18(例如，其硫原子)的硫原子。
在一些实施方案中，所述缀合物具有结构：
Figure BDA0003487201460000211
其中a、b、c及d各自独立地为0或1且其中当a、b、c或d为0时，两个硫原子形成二硫键。
在一些实施方案中，a为1且b、c及d为0。在一些实施方案中，a及b为1且c及d为0。在一些实施方案中，a及c为1且b及d为0。在一些实施方案中，a及d为1且b及c为0。在一些实施方案中，a、b及c为1且d为0。在一些实施方案中，a、b及d为1且c为0。在一些实施方案中，a、c及d为1且b为0。在一些实施方案中，b及c为1且a及d为0。在一些实施方案中，b及d为1且a及c为0。在一些实施方案中，b、c及d为1且a为0。在一些实施方案中，c及d为1且a及b为0。在一些实施方案中，a、b、c及d为1。
在一些实施方案中，所述硫原子对中的至少一者是对应于SEQ ID NO:4或SEQ IDNO:33的铰链半胱氨酸(即，Cys10及/或Cys13)(例如，其硫原子)的硫原子。在一些实施方案中，所述硫原子对是对应于SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:33中的Cys10及Cys13(例如，其硫原子)的硫原子。
在一些实施方案中，所述硫原子对包括来自各E的半胱氨酸的一硫原子，即，L-A连同其所附接的硫原子形成两个Fc结构域(例如，包含SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:33的序列的两个Fc结构域)之间的桥。在一些实施方案中，所述硫原子对是对应于来自一个E的SEQ IDNO:4或SEQ ID NO:33的Cys10(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ IDNO:4或SEQ ID NO:33的Cys10(例如，其硫原子)的硫原子。在一些实施方案中，所述硫原子对是对应于来自一个E的SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:33的Cys13(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:33的Cys13(例如，其硫原子)的硫原子。在一些实施方案中，当T为2时，所述硫原子对是对应于来自一个E的SEQ ID NO:4或SEQ IDNO:33的Cys10(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:4或SEQ IDNO:33的Cys10的硫原子以及对应于来自一个E的SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:33的Cys13(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:33的Cys13(例如，其硫原子)的硫原子。
在一些实施方案中，所述缀合物具有结构：
Figure BDA0003487201460000231
其中a及b各自独立地为0或1且其中当a或b为0时，两个硫原子形成二硫键。在一些实施方案中，a为1且b为0。在一些实施方案中，a为0且b为1。在一些实施方案中，a及b为1。
在一些实施方案中，所述硫原子对中的至少一者是对应于SEQ ID NO:8的铰链半胱氨酸(即，Cys10及/或Cys13)(例如，其硫原子)的硫原子。在一些实施方案中，所述硫原子对是对应于SEQ ID NO:8中的Cys10及Cys13(例如，其硫原子)的硫原子。
在一些实施方案中，所述硫原子对包括来自各E的半胱氨酸的一硫原子，即，L-A连同其所附接的硫原子形成两个Fc结构域(例如，包含SEQ ID NO:8的序列的两个Fc结构域)之间的桥。在一些实施方案中，所述硫原子对是对应于来自一个E的SEQ ID NO:8的Cys10(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:8的Cys10(例如，其硫原子)的硫原子。在一些实施方案中，所述硫原子对是对应于来自一个E的SEQ ID NO:8的Cys13(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:8的Cys13(例如，其硫原子)的硫原子。在一些实施方案中，当T为2时，所述硫原子对是对应于来自一个E的SEQ ID NO:8的Cys10(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:8的Cys10的硫原子以及对应于来自一个E的SEQ ID NO:8的Cys13(例如，其硫原子)的硫原子及对应于来自另一个E的SEQ ID NO:8的Cys13(例如，其硫原子)的硫原子。
在一些实施方案中，所述缀合物具有结构：
Figure BDA0003487201460000241
其中a及b各自独立地为0或1且其中当a或b为0时，两个硫原子形成二硫键。在一些实施方案中，a为1且b为0。在一些实施方案中，a为0且b为1。在一些实施方案中，a及b为1。
在一些实施方案中，所述缀合物具有结构：
Figure BDA0003487201460000242
其中a及b各自独立地为0或1且其中当a或b为0时，两个硫原子形成二硫键。在一些实施方案中，a为1且b为0。在一些实施方案中，a为0且b为1。在一些实施方案中，a及b为1。
在一些实施方案中，所述缀合物具有结构：
Figure BDA0003487201460000251
其中a及b各自独立地为0或1且其中当a或b为0时，两个硫原子形成二硫键。在一些实施方案中，a为1且b为0。在一些实施方案中，a为0且b为1。在一些实施方案中，a及b为1。
在一些实施方案中，所述缀合物具有结构：
Figure BDA0003487201460000252
其中a及b各自独立地为0或1且其中当a或b为0时，所述硫原子为硫醇。在一些实施方案中，a为1且b为0。在一些实施方案中，a为0且b为1。在一些实施方案中，a及b为1。
在一些实施方案中，所述氮原子为表面暴露赖氨酸的氮，例如对应于SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的Lys35、Lys63、Lys77、Lys79、Lys106、Lys123、Lys129、Lys181、Lys203、Lys228或Lys236(例如，其氮原子)的氮原子。在一些实施方案中，所述氮原子是对应于SEQID NO:10或SEQ ID NO:11的Lys65、Lys79、Lys108、Lys230及/或Lys238(例如，其氮原子)的氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物具有结构：
Figure BDA0003487201460000261
其中a、b、c、d及e各自独立地为0或1且其中当a、b、c、d或e为0时，两个氮原子为NH2。在一些实施方案中，a为1且b、c、d及e为0。在一些实施方案中，b为1且a、c、d及e为0。在一些实施方案中，c为1且a、b、d及e为0。在一些实施方案中，d为1且a、b、c及e为0。在一些实施方案中，e为1且a、b、c及d为0。在一些实施方案中，a及b为1且c、d及e为0。在一些实施方案中，a及c为1且b、d及e为0。在一些实施方案中，a及d为1且b、c及e为0。在一些实施方案中，a及e为1且b、c及d为0。在一些实施方案中，b及c为1且a、d及e为0。在一些实施方案中，b及d为1且a、c及e为0。在一些实施方案中，b及e为1且a、c及d为0。在一些实施方案中，c及d为1且a、b及e为0。在一些实施方案中，c及e为1且a、b及d为0。在一些实施方案中，d及e为1且a、b及c为0。在一些实施方案中，a、b及c为1且d及e为0。在一些实施方案中，a、b及d为1且c及e为0。在一些实施方案中，a、b及e为1且c及d为0。在一些实施方案中，a、c及d为1且b及e为0。在一些实施方案中，a、c及e为1且b及d为0。在一些实施方案中，a、d及e为1且b及c为0。在一些实施方案中，b、c及d为1且a及e为0。在一些实施方案中，b、d及e为1且a及c为0。在一些实施方案中，c、d及e为1且a及b为0。
在本文所述的缀合物中任一者的一些实施方案中，所述缀合物形成包括Fc结构域的均二聚体。在本文所述的缀合物的一些实施方案中，E与另一E均二聚以形成Fc结构域。
在另一方面中，本发明提供一种由(D-I)描述的缀合物：
Figure BDA0003487201460000271
其中E包括白蛋白(例如，具有SEQ ID NO:96-98中任一者的序列的白蛋白)、白蛋白结合肽或Fc结合肽；每个A1-L-A2中的L是独立地共价附接至E中的表面暴露半胱氨酸的硫原子或表面暴露赖氨酸的氮原子且附接至A1及A2中每一者的接头；n为1；T为1至20的整数(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，且连接至E的波浪线指示每个A1-L-A2独立地共价附接至E中的溶剂暴露半胱氨酸的硫原子或溶剂暴露赖氨酸的氮原子，或其药学上可接受的盐。当T大于1(例如，T为2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)时，每个A1-L-A2可独立地经选择(例如，独立地选自本文所述的A1-L-A2结构中任一者)。在以上的优选实施方案中，x为2。
在另一方面中，本发明提供一种由式(M-I)描述的缀合物：
Figure BDA0003487201460000272
其中E包括白蛋白(例如，具有SEQ ID NO:96-98中任一者的序列的白蛋白)、白蛋白结合肽或Fc结合肽；每个L-A1中的L是独立地共价附接至E中的表面暴露半胱氨酸的硫原子或表面暴露赖氨酸的氮原子且附接至A1的接头；n为1；T为1至20的整数(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，且连接至E的波浪线指示每个L-A1独立地共价附接至E中的溶剂暴露半胱氨酸的硫原子或溶剂暴露赖氨酸的氮原子，或其药学上可接受的盐。当T大于1(例如，T为2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)时，每个A1可独立地选自由式(A-I)描述的任何结构。在以上的优选实施方案中，x为2。
在一些实施方案中，每个E包括具有SEQ ID NO:96-98中任一者的序列的白蛋白。
在一些实施方案中，T为1且L-A1共价附接至对应于SEQ ID NO:96的Cys34的硫原子。
在另一方面中，本发明提供一种表1的中间体(Int)。这些中间体包含一种或多种gp120结合剂及接头(例如，PEG2-PEG20接头)且可用于合成本文所述的缀合物。表1的中间体可通过本领域技术人员已知的任何合适方法，包括本文所述或例示方法中任一者缀合于例如Fc结构域或Fc结构域单体、白蛋白、白蛋白结合肽或Fc结合肽(例如，借助于接头)。在一些实施方案中，所述缀合物(例如，由式(1)、(2)、(D-I)-(D-XVII)或(M-I)-(M-XVII)中任一者描述的缀合物)包括E，其中E为Fc结构域单体或Fc结构域(例如，Fc结构域单体或Fc结构域，每个Fc结构域单体独立地具有SEQ ID NO:1-95中任一者的序列)。在优选实施方案中，E的一个或多个表面暴露赖氨酸残基的一个或多个氮原子或E中的一个或多个表面暴露半胱氨酸的一个或多个硫原子共价缀合于接头(例如，PEG2-PEG20接头)。缀合于E的接头可被官能化，以致其可反应以与本文所述的任何Int(例如，表1的Int)形成共价键。在优选实施方案中，E缀合于经叠氮基官能化的接头且Int(例如，表1的Int)经炔基官能化。E的接头-叠氮基及Int的接头-炔缀合(例如，通过点击化学)形成本发明的缀合物，例如由式(1)、(2)、(D-I)-(D-XVII)或(M-I)-(M-XVII)中任一者描述的缀合物。在其他实施方案中，E缀合于经炔基官能化的接头且Int(例如，表1的Int)经叠氮基官能化。E的接头-炔及Int的接头-叠氮基缀合(例如，通过点击化学)形成本发明的缀合物，例如由式(1)、(2)、(D-I)-(D-XVII)或(M-I)-(M-XVII)中任一者描述的缀合物。
表1：中间体
Figure BDA0003487201460000291
Figure BDA0003487201460000301
Figure BDA0003487201460000311
Figure BDA0003487201460000321
Figure BDA0003487201460000331
Figure BDA0003487201460000341
在另一方面中，本发明提供一种表2的缀合物。如所示，表2的每个缀合物对应于式(M-I)或式(D-I)的缀合物。表2的缀合物包括通过表1的Int与接头的共价反应形成的缀合物，所述接头转而缀合于E(例如，Fc结构域单体、白蛋白、白蛋白结合肽或Fc结合肽)。在一些实施方案中，Int的反应性部分(例如，炔或叠氮基)与共价附接至E的接头(由L’表示)的对应反应性基团(例如，炔或叠氮基)反应，使得表1的Int共价附接至E。如表2所示，L’对应于如(M-I)或(D-I)中定义的L的剩余部分(例如，L’是共价接合Int及E的接头)。例如，L’可以包括三唑(通过Int与缀合于E的接头之间的点击化学反应形成)及接头(例如，PEG2-PEG20接头)，所述接头转而缀合于E的氨基酸侧链。
在表2的任何缀合物的一些实施方案中，n为1或2。当n为1时，每个E包括Fc结构域单体(例如，具有SEQ ID NO:1-95中任一者的序列的Fc结构域单体)、白蛋白(例如，具有SEQID NO:96-98中任一者的序列的白蛋白)、白蛋白结合肽或Fc结合肽。当n为2时，每个E包括Fc结构域单体(例如，具有SEQ ID NO:1-95中任一者的序列的Fc结构域单体)，且Fc结构域单体二聚以形成Fc结构域。
在表2的任何缀合物的一些实施方案中，T为1至20的整数(例如，n为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)。本公开还提供一种表2的缀合物中任一者的群体，其中T的平均值为1至20(例如，T的平均值为1至2、1至3、1至4、1至5、5至10、10至15或15至20)。在一些实施方案中，T的平均值为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20。在某些实施方案中，平均的T为1至10(例如，1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5或10)。在某些实施方案中，平均的T为1至5(例如，1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9或5)。在一些实施方案中，平均的T为5至10(例如，5、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9或10)。在一些实施方案中，平均的T为2.5至7.5(例如，2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7、7.1、7.2、7.3、7.4或7.5)。
表2的缀合物中的波浪线指示每个L’-Int共价附接至E中的氨基酸侧链(例如，E中表面暴露赖氨酸的氮原子或E中表面暴露半胱氨酸的硫原子)，或其药学上可接受的盐。
表2：对应于表1的中间体的缀合物
Figure BDA0003487201460000361
Figure BDA0003487201460000371
Figure BDA0003487201460000381
Figure BDA0003487201460000391
Figure BDA0003487201460000401
Figure BDA0003487201460000411
Figure BDA0003487201460000421
Figure BDA0003487201460000431
Figure BDA0003487201460000441
Figure BDA0003487201460000451
在另一方面中，本发明提供一种缀合物，其包括(i)第一部分A1；(ii)第二部分A2；(iii)Fc结构域单体或Fc结构域；及(iv)共价附接至A1及A2且附接至所述Fc结构域单体或所述Fc结构域的接头；其中每个A1及每个A2独立地选自由式(A-I)或(A-II)描述的任何结构。在以上的优选实施方案中，x为2。
在另一方面中，本发明提供一种缀合物，其包括(i)第一部分Int；(ii)Fc结构域单体或Fc结构域；及(iv)共价附接至Int且附接至所述Fc结构域单体或所述Fc结构域的接头；其中每个Int独立地选自表1的中间体中任一者。
在另一方面中，本发明提供一种缀合物，其包括(i)第一部分A1；(ii)第二部分A2；(iii)白蛋白、白蛋白结合肽或Fc结合肽；及(iv)共价附接至A1及A2且附接至所述Fc结构域单体或所述Fc结构域的接头；其中每个A1及每个A2独立地选自由式(A-I)或(A-II)描述的任何结构。在以上的优选实施方案中，x为2。
在另一方面中，本发明提供一种由式(D-I)描述的缀合物：
Figure BDA0003487201460000452
其中每个A1及每个A2独立地由式(A-I)或(A-II)描述；每个E包括Fc结构域单体(例如，具有SEQ ID NO:1-95中任一者的序列的Fc结构域单体)、白蛋白(例如，具有SEQ ID NO:96-98中任一者的序列的白蛋白)、白蛋白结合肽或Fc结合肽；n为1或2；T为1至20的整数(例如，T为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)；且L是共价附接至E、A1及A2中每一者的接头，或其药学上可接受的盐。当T大于1(例如，T为2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)时，每个A1-L-A2可独立地经选择(例如，独立地选自本文所述的A1-L-A2结构中任一者)。在以上的优选实施方案中，x为2。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-II)描述：
Figure BDA0003487201460000461
其中X为C、O或N，或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-III)描述：
Figure BDA0003487201460000471
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-III-1)描述：
Figure BDA0003487201460000472
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-III-2)描述：
Figure BDA0003487201460000481
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-III-3)描述：
Figure BDA0003487201460000491
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-III-4)描述：
Figure BDA0003487201460000492
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-III-5)描述：
Figure BDA0003487201460000501
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-III-6)描述：
Figure BDA0003487201460000502
Figure BDA0003487201460000511
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-IV)描述：
Figure BDA0003487201460000512
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-IV-1)描述：
Figure BDA0003487201460000521
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-IV-2)描述：
Figure BDA0003487201460000522
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-IV-3)描述：
Figure BDA0003487201460000531
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-IV-4)描述：
Figure BDA0003487201460000532
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-IV-5)描述：
Figure BDA0003487201460000541
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-IV-6)描述：
Figure BDA0003487201460000551
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-V)描述：
Figure BDA0003487201460000552
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-V-1)描述：
Figure BDA0003487201460000561
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-V-2)描述：
Figure BDA0003487201460000562
Figure BDA0003487201460000571
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-V-3)描述：
Figure BDA0003487201460000572
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-V-4)描述：
Figure BDA0003487201460000573
Figure BDA0003487201460000581
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-V-5)描述：
Figure BDA0003487201460000582
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-V-6)描述：
Figure BDA0003487201460000591
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-VI)描述：
Figure BDA0003487201460000592
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-VI-1)描述：
Figure BDA0003487201460000601
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-VI-2)描述：
Figure BDA0003487201460000602
Figure BDA0003487201460000611
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-VI-3)描述：
Figure BDA0003487201460000612
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-VI-4)描述：
Figure BDA0003487201460000621
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-VI-5)描述：
Figure BDA0003487201460000622
Figure BDA0003487201460000631
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-VI-6)描述：
Figure BDA0003487201460000632
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-VII)描述：
Figure BDA0003487201460000641
其中X为C、O或N，或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-VIII)描述：
Figure BDA0003487201460000642
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-VIII-1)描述：
Figure BDA0003487201460000651
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-IX)描述：
Figure BDA0003487201460000652
Figure BDA0003487201460000661
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-IX-1)描述：
Figure BDA0003487201460000662
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-X)描述：
Figure BDA0003487201460000671
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-X-1)描述：
Figure BDA0003487201460000672
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-XI)描述：
Figure BDA0003487201460000681
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-XI-1)描述：
Figure BDA0003487201460000682
其中L’是L的剩余部分，且y1及y2各自独立地为1至20的整数(例如，y1及y2各自独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-XII)描述：
Figure BDA0003487201460000691
其中X为C、O或N，
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-XII-1)描述：
Figure BDA0003487201460000692
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-XII-2)描述：
Figure BDA0003487201460000701
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-XIII)描述：
Figure BDA0003487201460000702
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-XIII-1)描述：
Figure BDA0003487201460000711
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-XIII-2)描述：
Figure BDA0003487201460000712
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，本发明提供一种由式(D-I)描述的缀合物：
Figure BDA0003487201460000713
其中每个A1及每个A2独立地由式(A-II)描述；
每个E包含Fc结构域单体；
连接至E的波浪线指示每个A1-L-A2共价附接至E；
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-XIV)描述：
Figure BDA0003487201460000721
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-XIV-1)描述：
Figure BDA0003487201460000731
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-XIV-2)描述：
Figure BDA0003487201460000732
其中L’为L的剩余部分，
y1及y2各自独立地为1至20的整数
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-XIV-3)描述：
Figure BDA0003487201460000741
其中L’是L的剩余部分，且
e1及e2各自独立地为1至10的整数
y1及y2各自独立地为1至20的整数
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-XIV-4)描述：
Figure BDA0003487201460000751
其中L’是L的剩余部分，且
e1、e2、e3及e4各自独立地为1至10的整数
y1及y2各自独立地为1至20的整数
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-XIV-5)描述：
Figure BDA0003487201460000761
其中L’是L的剩余部分，且
e1、e2、e3及e4各自独立地为1至10的整数
y1及y2各自独立地为1至20的整数
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-XV)描述：
Figure BDA0003487201460000771
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-XV-1)描述：
Figure BDA0003487201460000772
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-XV-2)描述：
Figure BDA0003487201460000781
其中L’为L的剩余部分，
y1及y2各自独立地为1至20的整数
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-XV-3)描述：
Figure BDA0003487201460000782
其中L’是L的剩余部分，且
e1及e2各自独立地为1至10的整数
y1及y2各自独立地为1至20的整数
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-XV-4)描述：
Figure BDA0003487201460000791
其中L’是L的剩余部分，且
e1、e2、e3及e4各自独立地为1至10的整数
y1及y2各自独立地为1至20的整数
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-XV-5)描述：
Figure BDA0003487201460000801
其中L’是L的剩余部分，且
e1、e2、e3及e4各自独立地为1至10的整数
y1及y2各自独立地为1至20的整数
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-XVI)描述：
Figure BDA0003487201460000811
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-XVI-1)描述：
Figure BDA0003487201460000812
其中U5为C1-C10烷基；
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-XVI-2)描述：
Figure BDA0003487201460000821
其中L’为L的剩余部分，
y1及y2各自独立地为1至20的整数
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-XVI-3)描述：
Figure BDA0003487201460000822
Figure BDA0003487201460000831
其中L’是L的剩余部分，且
e1及e2各自独立地为1至10的整数
y1及y2各自独立地为1至20的整数
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-XVI-4)描述：
Figure BDA0003487201460000832
其中L’是L的剩余部分，且
e1、e2、e3及e4各自独立地为1至10的整数
y1及y2各自独立地为1至20的整数
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-XVI-5)描述：
Figure BDA0003487201460000841
其中L’是L的剩余部分，且
e1、e2、e3及e4各自独立地为1至10的整数
y1及y2各自独立地为1至20的整数
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-XVII)描述：
Figure BDA0003487201460000851
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-XVII-1)描述：
Figure BDA0003487201460000852
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-XVII-2)描述：
Figure BDA0003487201460000861
其中L’为L的剩余部分，
y1及y2各自独立地为1至20的整数
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-XVII-3)描述：
Figure BDA0003487201460000862
其中L’是L的剩余部分，且
e1及e2各自独立地为1至10的整数
y1及y2各自独立地为1至20的整数
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-XVII-4)描述：
Figure BDA0003487201460000871
其中L’是L的剩余部分，且
e1、e2、e3及e4各自独立地为1至10的整数
y1及y2各自独立地为1至20的整数
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(D-XVII-5)描述：
Figure BDA0003487201460000881
其中L’是L的剩余部分，且
e1、e2、e3及e4各自独立地为1至10的整数
y1及y2各自独立地为1至20的整数
或其药学上可接受的盐。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，L或L’包括一个或多个任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C1-C20亚杂烷基、任选取代的C2-C20亚烯基、任选取代的C2-C20亚杂烯基、任选取代的C2-C20亚炔基、任选取代的C2-C20亚杂炔基、任选取代的C3-C20亚环烷基、任选取代的C2-C20亚杂环烷基、任选取代的C4-C20亚环烯基、任选取代的C4-C20亚杂环烯基、任选取代的C8-C20亚环炔基、任选取代的C8-C20亚杂环炔基、任选取代的C5-C15亚芳基、任选取代的C3-C15亚杂芳基、O、S、NRi、P、羰基、硫羰基、磺酰基、磷酸酯基、磷酰基或亚氨基，其中Ri为H、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C1-C20杂烷基、任选取代的C2-C20烯基、任选取代的C2-C20杂烯基、任选取代的C2-C20炔基、任选取代的C2-C20杂炔基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C4-C20环烯基、任选取代的C4-C20杂环烯基、任选取代的C8-C20环炔基、任选取代的C8-C20杂环炔基、任选取代的C5-C15芳基或任选取代的C3-C15杂芳基。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，L或L’的骨架由一个或多个任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C1-C20亚杂烷基、任选取代的C2-C20亚烯基、任选取代的C2-C20亚杂烯基、任选取代的C2-C20亚炔基、任选取代的C2-C20亚杂炔基、任选取代的C3-C20亚环烷基、任选取代的C2-C20亚杂环烷基、任选取代的C4-C20亚环烯基、任选取代的C4-C20亚杂环烯基、任选取代的C8-C20亚环炔基、任选取代的C8-C20亚杂环炔基、任选取代的C5-C15亚芳基、任选取代的C3-C15亚杂芳基、O、S、NRi、P、羰基、硫羰基、磺酰基、磷酸酯基、磷酰基或亚氨基组成，其中Ri为H、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C1-C20杂烷基、任选取代的C2-C20烯基、任选取代的C2-C20杂烯基、任选取代的C2-C20炔基、任选取代的C2-C20杂炔基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C4-C20环烯基、任选取代的C4-C20杂环烯基、任选取代的C8-C20环炔基、任选取代的C8-C20杂环炔基、任选取代的C5-C15芳基或任选取代的C3-C15杂芳基。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，L或L’经氧代取代。在一些实施方案中，L或L’的骨架包括不超过250个原子。在一些实施方案中，L或L’能够形成酰胺、氨基甲酸酯、磺酰基或脲连接。在一些实施方案中，
L或L’为键。在一些实施方案中，L或L’为原子。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，每个L由式(D-L-I)描述：
Figure BDA0003487201460000901
其中LA由式GA1-(ZA1)g1-(YA1)h1-(ZA2)i1-(YA2)j1-(ZA3)k1-(YA3)l1-(ZA4)m1-(YA4)n1-(ZA5)o1-GA2描述；LB由式GB1-(ZB1)g2-(YB1)h2-(ZB2)i2-(YB2)j2-(ZB3)k2-(YB3)l2-(ZB4)m2-(YB4)n2-(ZB5)o2-GB2描述；LC由式GC1-(ZC1)g3-(YC1)h3-(ZC2)i3-(YC2)j3-(ZC3)k3-(YC3)l3-(ZC4)m3-(YC4)n3-(ZC5)o3-GC2描述；GA1是附接至Qi的键；GA2是附接至A1的键；GB1是附接至Qi)的键；GB2是附接至A2的键；GC1是附接至Qi的键；GC2是附接至E的键或能够与缀合于E的官能团反应的官能团(例如，马来酰亚胺及半胱氨酸、胺及经活化羧酸、硫醇及马来酰亚胺、经活化磺酸及胺、异氰酸酯及胺、叠氮化物及炔以及烯烃及四嗪)；ZA1、ZA2、ZA3、ZA4、ZA5、ZB1、ZB2、ZB3、ZB4、ZB5、ZC1、ZC2、ZC3、ZC4及ZC5中的每一者独立地为任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C1-C20亚杂烷基、任选取代的C2-C20亚烯基、任选取代的C2-C20亚杂烯基、任选取代的C2-C20亚炔基、任选取代的C2-C20亚杂炔基、任选取代的C3-C20亚环烷基、任选取代的C2-C20亚杂环烷基、任选取代的C4-C20亚环烯基、任选取代的C4-C20亚杂环烯基、任选取代的C8-C20亚环炔基、任选取代的C8-C20亚杂环炔基、任选取代的C5-C15亚芳基或任选取代的C3-C15亚杂芳基；YA1、YA2、YA3、YA4、YB1、YB2、YB3、YB4、YC1、YC2、YC3及YC4中的每一者独立地为O、S、NRi、P、羰基、硫羰基、磺酰基、磷酸酯基、磷酰基或亚氨基；Ri为H、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C1-C20杂烷基、任选取代的C2-C20烯基、任选取代的C2-C20杂烯基、任选取代的C2-C20炔基、任选取代的C2-C20杂炔基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C4-C20环烯基、任选取代的C4-C20杂环烯基、任选取代的C8-C20环炔基、任选取代的C8-C20杂环炔基、任选取代的C5-C15芳基或任选取代的C3-C15杂芳基；g1、h1、i1、j1、k1、l1、m1、n1、o1、g2、h2、i2、j2、k2、l2、m2、n2、o2、g3、h3、i3、j3、k3、l3、m3、n3及o3中的每一者独立地为0或1；Q为氮原子、任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C1-C20亚杂烷基、任选取代的C2-C20亚烯基、任选取代的C2-C20亚杂烯基、任选取代的C2-C20亚炔基、任选取代的C2-C20亚杂炔基、任选取代的C3-C20亚环烷基、任选取代的C2-C20亚杂环烷基、任选取代的C4-C20亚环烯基、任选取代的C4-C20亚杂环烯基、任选取代的C8-C20亚环炔基、任选取代的C8-C20亚杂环炔基、任选取代的C5-C15亚芳基或任选取代的C3-C15亚杂芳基。
在一些实施方案中，任选取代包括用聚乙二醇(PEG)取代。PEG具有重复单元结构(-CH2CH2O-)n，其中n为2至100的整数。聚乙二醇可选自PEG2至PEG100中任一者(例如，PEG2、PEG3、PEG4、PEG5、PEG5-PEG10、PEG10-PEG20、PEG20-PEG30、PEG30-PEG40、PEG50-PEG60、PEG60-PEG70、PEG70-PEG80、PEG80-PEG90、PEG90-PEG100)。
在一些实施方案中，LC可具有两个附接至Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽的点(例如，两个GC2)。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，L包括聚乙二醇(PEG)接头。PEG接头包括具有重复单元结构(-CH2CH2O-)n的接头，其中n为2至100的整数。聚乙二醇接头可共价接合gp120结合剂及E(例如，在式(M-I)-(M-XVII)中任一者的缀合物中)。聚乙二醇接头可共价接合第一gp120结合剂及第二gp120结合剂(例如，在式(D-I)-(D-XVII)中任一者的缀合物中)。聚乙二醇接头可共价接合gp120结合剂二聚体及E(例如，在式(D-I)-(D-XVII)中任一者的缀合物中)。聚乙二醇接头可选自PEG2至PEG100中任一者(例如，PEG2、PEG3、PEG4、PEG5、PEG5-PEG10、PEG10-PEG20、PEG20-PEG30、PEG30-PEG40、PEG50-PEG60、PEG60-PEG70、PEG70-PEG80、PEG80-PEG90、PEG90-PEG100)。在一些实施方案中，Lc包括PEG接头，其中LC共价附接至Qi及E中每一者。
在一些实施方案中，L为
Figure BDA0003487201460000921
Figure BDA0003487201460000931
Figure BDA0003487201460000941
Figure BDA0003487201460000951
Figure BDA0003487201460000961
Figure BDA0003487201460000971
Figure BDA0003487201460000981
Figure BDA0003487201460000991
Figure BDA0003487201460001001
Figure BDA0003487201460001011
其中z1、z2、y1、y2、y3及y4各自独立地为1至20的整数；且R9选自H、C1-C20烷基、C3-C20环烷基、C2-C20杂环烷基、任选取代的C5-C15芳基及C3-C15杂芳基。
在一些实施方案中，L为
Figure BDA0003487201460001021
Figure BDA0003487201460001031
Figure BDA0003487201460001041
其中R*为键或包括一个或多个任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C1-C20亚杂烷基、任选取代的C2-C20亚烯基、任选取代的C2-C20亚杂烯基、任选取代的C2-C20亚炔基、任选取代的C2-C20亚杂炔基、任选取代的C3-C20亚环烷基、任选取代的C2-C20亚杂环烷基、任选取代的C4-C20亚环烯基、任选取代的C4-C20亚杂环烯基、任选取代的C8-C20亚环炔基、任选取代的C8-C20亚杂环炔基、任选取代的C5-C15亚芳基、任选取代的C3-C15亚杂芳基、O、S、NRi、P、羰基、硫羰基、磺酰基、磷酸酯基、磷酰基或亚氨基，且其中Ri为H、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C1-C20杂烷基、任选取代的C2-C20烯基、任选取代的C2-C20杂烯基、任选取代的C2-C20炔基、任选取代的C2-C20杂炔基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C4-C20环烯基、任选取代的C4-C20杂环烯基、任选取代的C8-C20环炔基、任选取代的C8-C20杂环炔基、任选取代的C5-C15芳基或任选取代的C3-C15杂芳基。
在另一方面中，本发明提供一种由式(M-I)描述的缀合物：
Figure BDA0003487201460001051
其中每个A1独立地由式(A-I)描述；
每个E包括Fc结构域单体(例如，具有SEQ ID NO:1-95中任一者的序列的Fc结构域单体)、白蛋白(例如，具有SEQ ID NO:96-98中任一者的序列的白蛋白)、白蛋白结合肽或Fc结合肽；n为1或2；T为1至20的整数(例如，T为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)；且L为共价附接至E及A1中每一者的接头，或其药学上可接受的盐。当T大于1(例如，T为2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)时，每个A1可独立地选自由式(A-I)描述的任何结构。在以上的优选实施方案中，x为2。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-II)描述：
Figure BDA0003487201460001061
其中X为C、O或N，或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-III)描述：
Figure BDA0003487201460001062
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-III-1)描述：
Figure BDA0003487201460001071
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-III-2)描述：
Figure BDA0003487201460001072
其中L’是L的剩余部分，且y1为1至20的整数(例如，y1为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-III-3)描述：
Figure BDA0003487201460001081
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-III-4)描述：
Figure BDA0003487201460001082
Figure BDA0003487201460001091
其中L’是L的剩余部分，且y1为1至20的整数(例如，y1为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-III-5)描述：
Figure BDA0003487201460001092
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-III-6)描述：
Figure BDA0003487201460001101
其中L’是L的剩余部分，且y1为1至20的整数(例如，y1为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-IV)描述：
Figure BDA0003487201460001102
Figure BDA0003487201460001111
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-IV-1)描述：
Figure BDA0003487201460001112
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-IV-2)描述：
Figure BDA0003487201460001121
其中L’是L的剩余部分，且y1为1至20的整数(例如，y1为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-IV-3)描述：
Figure BDA0003487201460001122
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-IV-4)描述：
Figure BDA0003487201460001131
其中L’是L的剩余部分，且y1为1至20的整数(例如，y1为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-IV-5)描述：
Figure BDA0003487201460001132
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-IV-6)描述：
Figure BDA0003487201460001141
其中L’是L的剩余部分，且y1为1至20的整数(例如，y1为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-V)描述：
Figure BDA0003487201460001142
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-V-1)描述：
Figure BDA0003487201460001151
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-V-2)描述：
Figure BDA0003487201460001152
其中L’是L的剩余部分，且y1为1至20的整数(例如，y1为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-V-3)描述：
Figure BDA0003487201460001161
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-V-4)描述：
Figure BDA0003487201460001162
其中L’是L的剩余部分，且y1为1至20的整数(例如，y1为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-V-5)描述：
Figure BDA0003487201460001171
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-V-6)描述：
Figure BDA0003487201460001181
其中L’是L的剩余部分，且y1为1至20的整数(例如，y1为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-VI)描述：
Figure BDA0003487201460001182
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-VI-1)描述：
Figure BDA0003487201460001191
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-VI-2)描述：
Figure BDA0003487201460001192
其中L’是L的剩余部分，且y1为1至20的整数(例如，y1为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-VI-3)描述：
Figure BDA0003487201460001201
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-VI-4)描述：
Figure BDA0003487201460001202
Figure BDA0003487201460001211
其中L’是L的剩余部分，且y1为1至20的整数(例如，y1为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-VI-5)描述：
Figure BDA0003487201460001212
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-VI-6)描述：
Figure BDA0003487201460001221
其中L’是L的剩余部分，且y1为1至20的整数(例如，y1为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-VII)描述：
Figure BDA0003487201460001222
其中X为C、O或N，或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-VIII)描述：
Figure BDA0003487201460001231
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-VIII-1)描述：
Figure BDA0003487201460001232
其中L’是L的剩余部分，且y1为1至20的整数(例如，y1为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-IX)描述：
Figure BDA0003487201460001241
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-IX-1)描述：
Figure BDA0003487201460001242
其中L’是L的剩余部分，且y1为1至20的整数(例如，y1为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-X)描述：
Figure BDA0003487201460001251
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-X-1)描述：
Figure BDA0003487201460001252
其中L’是L的剩余部分，且y1为1至20的整数(例如，y1为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-XI)描述：
Figure BDA0003487201460001261
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-XI-1)描述：
Figure BDA0003487201460001262
其中L’是L的剩余部分，且y1为1至20的整数(例如，y1为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-XII)描述：
Figure BDA0003487201460001271
其中X为C、O或N，
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-XII-1)描述：
Figure BDA0003487201460001272
Figure BDA0003487201460001281
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-XII-2)描述：
Figure BDA0003487201460001282
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-XIII)描述：
Figure BDA0003487201460001283
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-XIII-1)描述：
Figure BDA0003487201460001291
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-XIII-2)描述：
Figure BDA0003487201460001292
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，本发明提供一种由式(M-I)描述的缀合物：
Figure BDA0003487201460001293
其中每个A1独立地由式(A-II)描述；
每个E包含Fc结构域单体；
连接至E的波浪线指示每个A1-L-A2共价附接至E；
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-XIV)描述：
Figure BDA0003487201460001301
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-XIV-1)描述：
Figure BDA0003487201460001311
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-XIV-2)描述：
Figure BDA0003487201460001312
其中L’为L的剩余部分；
y1为1至20的整数；
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-XIV-3)描述：
Figure BDA0003487201460001321
其中L’为L的剩余部分；
e1为1至10的整数；且
y1为1至20的整数；
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-XIV-4)描述：
Figure BDA0003487201460001331
其中L’为L的剩余部分；
e1及e3各自独立地为1至10的整数；且
y1为1至20的整数；
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-XIV-5)描述：
Figure BDA0003487201460001341
其中L’为L的剩余部分；
e1及e3各自独立地为1至10的整数；且
y1为1至20的整数；
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-XV)描述：
Figure BDA0003487201460001351
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-XV-1)描述：
Figure BDA0003487201460001352
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-XV-2)描述：
Figure BDA0003487201460001361
其中L’为L的剩余部分；
y1为1至20的整数；
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-XV-3)描述：
Figure BDA0003487201460001362
Figure BDA0003487201460001371
其中L’为L的剩余部分；
e1为1至10的整数；且
y1为1至20的整数；
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-XV-4)描述：
Figure BDA0003487201460001372
其中L’为L的剩余部分；
e1及e3各自独立地为1至10的整数；且
y1为1至20的整数；
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-XV-5)描述：
Figure BDA0003487201460001381
其中L’为L的剩余部分；
e1及e3各自独立地为1至10的整数；且
y1为1至20的整数；
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-XVI)描述：
Figure BDA0003487201460001391
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-XVI-1)描述：
Figure BDA0003487201460001392
其中U5为C1-C10烷基；
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-XVI-2)描述：
Figure BDA0003487201460001401
其中L’为L的剩余部分；
y1为1至20的整数；
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-XVI-3)描述：
Figure BDA0003487201460001411
其中L’为L的剩余部分；
e1为1至10的整数；且
y1为1至20的整数；
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-XVI-4)描述：
Figure BDA0003487201460001421
其中L’为L的剩余部分；
e1及e3各自独立地为1至10的整数；
y1为1至20的整数；
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-XVI-5)描述：
Figure BDA0003487201460001431
其中L’为L的剩余部分；
e1及e3各自独立地为1至10的整数；
y1为1至20的整数；
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-XVII)描述：
Figure BDA0003487201460001441
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-XVII-1)描述：
Figure BDA0003487201460001442
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-XVII-2)描述：
Figure BDA0003487201460001451
其中L’为L的剩余部分，
y1为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-XVII-3)描述：
Figure BDA0003487201460001461
其中L’为L的剩余部分；
e1为1至10的整数；且
y1为1至20的整数；
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-XVII-4)描述：
Figure BDA0003487201460001462
Figure BDA0003487201460001471
其中L’为L的剩余部分；
e1及e3各自独立地为1至10的整数；且
y1为1至20的整数；
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述缀合物由式(M-XVII-5)描述：
Figure BDA0003487201460001472
其中L’为L的剩余部分；
e1及e3各自独立地为1至10的整数；且
y1为1至20的整数；
或其药学上可接受的盐。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，L或L’包括一个或多个任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C1-C20亚杂烷基、任选取代的C2-C20亚烯基、任选取代的C2-C20亚杂烯基、任选取代的C2-C20亚炔基、任选取代的C2-C20亚杂炔基、任选取代的C3-C20亚环烷基、任选取代的C2-C20亚杂环烷基、任选取代的C4-C20亚环烯基、任选取代的C4-C20亚杂环烯基、任选取代的C8-C20亚环炔基、任选取代的C8-C20亚杂环炔基、任选取代的C5-C15亚芳基、任选取代的C3-C15亚杂芳基、O、S、NRi、P、羰基、硫羰基、磺酰基、磷酸酯基、磷酰基或亚氨基，其中Ri为H、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C1-C20杂烷基、任选取代的C2-C20烯基、任选取代的C2-C20杂烯基、任选取代的C2-C20炔基、任选取代的C2-C20杂炔基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C4-C20环烯基、任选取代的C4-C20杂环烯基、任选取代的C8-C20环炔基、任选取代的C8-C20杂环炔基、任选取代的C5-C15芳基或任选取代的C3-C15杂芳基。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，L或L’的骨架由一个或多个任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C1-C20亚杂烷基、任选取代的C2-C20亚烯基、任选取代的C2-C20亚杂烯基、任选取代的C2-C20亚炔基、任选取代的C2-C20亚杂炔基、任选取代的C3-C20亚环烷基、任选取代的C2-C20亚杂环烷基、任选取代的C4-C20亚环烯基、任选取代的C4-C20亚杂环烯基、任选取代的C8-C20亚环炔基、任选取代的C8-C20亚杂环炔基、任选取代的C5-C15亚芳基、任选取代的C3-C15亚杂芳基、O、S、NRi、P、羰基、硫羰基、磺酰基、磷酸酯基、磷酰基或亚氨基组成，其中Ri为H、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C1-C20杂烷基、任选取代的C2-C20烯基、任选取代的C2-C20杂烯基、任选取代的C2-C20炔基、任选取代的C2-C20杂炔基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C4-C20环烯基、任选取代的C4-C20杂环烯基、任选取代的C8-C20环炔基、任选取代的C8-C20杂环炔基、任选取代的C5-C15芳基或任选取代的C3-C15杂芳基。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，L或L’经氧代取代。在一些实施方案中，L或L’的骨架包括不超过250个原子。在一些实施方案中，L或L’能够形成酰胺、氨基甲酸酯、磺酰基或脲连接。在一些实施方案中，L或L’为键。在一些实施方案中，L或L’为原子。在一些实施方案中，L’为氮原子。
在一些实施方案中，每个L由式(M-L-1)描述：
J1-(Q1)g-(T1)h-(Q2)i-(T2)j-(Q3)k-(T3)l-(Q4)m-(T4)n-(Q5)o-J2
其中：J1是附接至A1的键；J2是附接至E的键或能够与缀合于E的官能团反应的官能团(例如，马来酰亚胺及半胱氨酸、胺及经活化羧酸、硫醇及马来酰亚胺、经活化磺酸及胺、异氰酸酯及胺、叠氮化物及炔以及烯烃及四嗪)；Q1、Q2、Q3、Q4及Q5中的每一者独立地为任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C1-C20亚杂烷基、任选取代的C2-C20亚烯基、任选取代的C2-C20亚杂烯基、任选取代的C2-C20亚炔基、任选取代的C2-C20亚杂炔基、任选取代的C3-C20亚环烷基、任选取代的C2-C20亚杂环烷基、任选取代的C4-C20亚环烯基、任选取代的C4-C20亚杂环烯基、任选取代的C8-C20亚环炔基、任选取代的C8-C20亚杂环炔基、任选取代的C5-C15亚芳基或任选取代的C3-C15亚杂芳基；
T1、T2、T3、T4中的每一者独立地为O、S、NRi、P、羰基、硫羰基、磺酰基、磷酸酯基、磷酰基或亚氨基；Ri为H、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C1-C20杂烷基、任选取代的C2-C20烯基、任选取代的C2-C20杂烯基、任选取代的C2-C20炔基、任选取代的C2-C20杂炔基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C4-C20环烯基、任选取代的C4-C20杂环烯基、任选取代的C8-C20环炔基、任选取代的C8-C20杂环炔基、任选取代的C5-C15芳基或任选取代的C3-C15杂芳基；且g、h、i、j、k、l、m、n及o中的每一者独立地为0或1；或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，任选取代包括用聚乙二醇(PEG)取代。PEG具有重复单元结构(-CH2CH2O-)n，其中n为2至100的整数。聚乙二醇可选自PEG2至PEG100中任一者(例如，PEG2、PEG3、PEG4、PEG5、PEG5-PEG10、PEG10-PEG20、PEG20-PEG30、PEG30-PEG40、PEG50-PEG60、PEG60-PEG70、PEG70-PEG80、PEG80-PEG90、PEG90-PEG100)。
在一些实施方案中，J2可具有两个附接至Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽的点(例如，两个J2)。
在一些实施方案中，L为
Figure BDA0003487201460001501
其中d为1至20的整数(例如，d为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)。
在一些实施方案中，L为
Figure BDA0003487201460001502
Figure BDA0003487201460001511
Figure BDA0003487201460001521
其中每个Y独立地选自(-O-)、(-S-)、(-R8-)、(-O(C＝O)NR8-)、(-O(C＝S)NR8-)、(-O(C＝O)O-)、(-O(C＝O)-)、(-NH(C＝O)O-)、(-NH(C＝O)-)、(-NH(C＝NH)-)、(-NH(C＝O)NR8-)、(-NH(C＝NH)NR8-)、(-NH(C＝S)NR8-)、(-NH(C＝S)-)、(-OCH2(C＝O)NR8-)、(-NH(SO2)-)、(-NH(SO2)NR8-)、(-OR9-)、(-NR9-)、(-SR9-)、(-R9NH(C＝O)-)、(-R9OR9C(＝O)NH-)、(-CH2NH(C＝O)-)、(-CH2OCH2(C＝O)NH-)、(-(C＝NR8)NH-)、(-NH(SO2)-)、(-(C＝O)NH-)、(-C(＝O)-)、(-C(NR8)-)或(-R9C(＝O)-)；
每个R8独立地选自H、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C5-C15芳基及任选取代的C2-C15杂芳基；
每个R9独立地选自任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C5-C15芳基及任选取代的C2-C15杂芳基；且
d、e、y1及x1中的每一者独立地为1至26的整数(例如，d为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或26)。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，L包括聚乙二醇(PEG)接头。PEG接头包括具有重复单元结构(-CH2CH2O-)n的接头，其中n为2至100的整数。聚乙二醇接头可共价接合gp120结合剂及E(例如，在式(1)、(2)、(D-I)-(D-XVII)或(M-I)-(M-XVII)中任一者的缀合物中)。聚乙二醇接头可共价接合第一gp120结合剂及第二gp120结合剂(例如，在式(1)、(2)、(D-I)-(D-XVII)或(M-I)-(M-XVII)中任一者的缀合物中)。聚乙二醇接头可共价接合gp120结合剂二聚体及E(例如，在式中任一者的缀合物中)。聚乙二醇接头可选自PEG2至PEG100中任一者(例如，PEG2、PEG3、PEG4、PEG5、PEG5-PEG10、PEG10-PEG20、PEG20-PEG30、PEG30-PEG40、PEG50-PEG60、PEG60-PEG70、PEG70-PEG80、PEG80-PEG90、PEG90-PEG100)。在一些实施方案中，Lc包括PEG接头，其中LC共价附接至Qi及E中每一者。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，L共价附接至E的表面暴露赖氨酸的氮原子或L共价附接至E的表面暴露半胱氨酸的硫原子。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E为Fc结构域单体。在一些实施方案中，n为2且每个E二聚以形成Fc结构域。
在一些实施方案中，n为2，每个E为Fc结构域单体，每个E二聚以形成Fc结构域，且所述缀合物由式(D-I-1)描述：
Figure BDA0003487201460001541
其中J为Fc结构域；且T为1至20的整数(例如，T为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，n为2，每个E为Fc结构域单体，每个E二聚以形成Fc结构域，且所述缀合物由式(M-I-1)描述：
Figure BDA0003487201460001542
其中J为Fc结构域；且T为1至20的整数(例如，T为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)，或其药学上可接受的盐。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E具有SEQ ID NO:1-95中任一者的序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E为白蛋白、白蛋白结合肽或Fc结合肽。在其中E为白蛋白、白蛋白结合肽或Fc结合肽的一些实施方案中，n为1。
在一些实施方案中，n为1，E为白蛋白、白蛋白结合肽或Fc结合肽且所述缀合物由式(D-I-2)描述：
Figure BDA0003487201460001551
其中E为白蛋白、白蛋白结合肽或Fc结合肽；且T为1至20的整数，或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，n为1，E为白蛋白、白蛋白结合肽或Fc结合肽且所述缀合物由式(M-I-2)描述：
Figure BDA0003487201460001552
其中E为白蛋白、白蛋白结合肽或Fc结合肽；且T为1至20的整数，或其药学上可接受的盐。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E为具有SEQ ID NO:96-98中任一者的序列的白蛋白。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，T为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20。
在另一方面中，本发明提供具有本文所述的任何缀合物的结构的缀合物的群体(例如，具有式(1)、(2)、(D-I)-(D-XVII)或(M-I)-(M-XVII)中任一式的缀合物的群体)，其中T的平均值为1至20(例如，T的平均值为1至2、1至3、1至4、1至5、5至10、10至15或15至20)。在一些实施方案中，T的平均值为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20。
在另一方面中，本发明提供一种药物组合物，其包含本文所述的任何缀合物(例如，式(1)、(2)、(D-I)-(D-XVII)或(M-I)-(M-XVII)中任一者的缀合物)或其药学上可接受的盐，及药学上可接受的赋形剂。
在另一方面中，本发明提供一种用于治疗具有病毒感染或据推测具有病毒感染的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的本文所述的缀合物或组合物(例如，式(1)、(2)、(D-I)-(D-XVII)或(M-I)-(M-XVII)中任一者的缀合物)中任一者。
在另一方面中，本发明提供一种用于预防性治疗有需要的受试者的病毒感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的本文所述的缀合物或组合物(例如，式(1)、(2)、(D-I)-(D-XVII)或(M-I)-(M-XVII)中任一者的缀合物)中任一者。
在一些实施方案中，所述病毒感染是由HIV引起。在一些实施方案中，所述病毒感染是HIV-1或HIV-2。
在一些实施方案中，所述受试者是免疫受损的。
在一些实施方案中，所述受试者已经诊断患有体液免疫缺陷、T细胞缺陷、中性粒细胞减少症、无脾或补体缺陷。
在一些实施方案中，所述受试者正在经免疫抑制性疗法治疗或即将经免疫抑制性疗法治疗。
在一些实施方案中，所述受试者已经诊断患有引起免疫抑制的疾病。在一些实施方案中，所述疾病为癌症或获得性免疫缺陷综合征。在一些实施方案中，所述癌症为白血病、淋巴瘤或多发性骨髓瘤。
在一些实施方案中，所述受试者已经受或即将经受造血干细胞移植。
在一些实施方案中，其中所述受试者已经受或即将经受器官移植。
在一些实施方案中，所述缀合物或组合物肌肉内、静脉内、皮内、动脉内、腹膜内、病变内、颅内、关节内、前列腺内、胸膜内、气管内、鼻内、玻璃体内、阴道内、直肠内、经表面、肿瘤内、经腹膜、皮下、结膜下、囊内、经粘膜、心包内、脐内、眼内、经口、经局部、通过吸入、通过注射或通过输注经施用。
在一些实施方案中，所述受试者经第二治疗剂治疗。在一些实施方案中，所述第二治疗剂为抗病毒剂。在一些实施方案中，所述第二治疗剂为病毒疫苗。在一些实施方案中，所述病毒疫苗在所述受试者中引起针对HIV(例如，HIV-1或HIV-2)的免疫反应。
在一些实施方案中，在式(1)、(2)、(D-I)-(D-XVII)或(M-I)-(M-XVII)中任一者(例如，式(1)、(2)、(D-I)、(D-II)、(D-III)、(D-III-1)、(D-III-2)、(D-III-3)、(D-III-4)、(D-III-5)、(D-III-6)、(D-IV)、(D-IV-1)、(D-IV-2)、(D-IV-3)、(D-IV-4)、(D-IV-5)、(D-IV-6)、(D-V)、(D-V-1)、(D-V-2)、(D-V-3)、(D-V-4)、(D-V-5)、(D-V-6)、(D-VI)、(D-VI-1)、(D-VI-2)、(D-VI-3)、(D-VI-4)、(D-VI-5)、(D-VI-6)、(D-VII)、(D-VIII)、(D-VIII-1)、(D-IX)、(D-IX-1)、(D-X)、(D-X-1)、(D-XI)、(D-XI-1)、(D-XII)、(D-XII-1)、(D-XII-2)、(D-XIII)、(D-XIII-1)、(D-XIII-2)、(D-XIV)、(D-XIV-1)、(D-XIV-2)、(D-XIV-3)、(D-XIV-4)、(D-XIV-5)、(D-XV)、(D-XV-1)、(D-XV-2)、(D-XV-3)、(D-XV-4)、(D-XV-5)、(D-XVI)、(D-XVI-1)、(D-XVI-2)、(D-XVI-3)、(D-XVI-4)、(D-XVI-5)、(D-XV)、(D-XVII-1)、(D-XVII-2)、(D-XVII-3)、(D-XVII-4)、(D-XVII-5)、(M-I)、(M-II)、(M-III)、(M-III-1)、(M-III-2)、(M-III-3)、(M-III-4)、(M-III-5)、(M-III-6)、(M-IV)、(M-IV-1)、(M-IV-2)、(M-IV-3)、(M-IV-4)、(M-IV-5)、(M-IV-6)、(M-V)、(M-V-1)、(M-V-2)、(M-V-3)、(M-V-4)、(M-V-5)、(M-V-6)、(M-VI)、(M-VI-1)、(M-VI-2)、(M-VI-3)、(M-VI-4)、(M-VI-5)、(M-VI-6)、(M-VII)、(M-VIII)、(M-VIII-1)、(M-IX)、(M-IX-1)、(M-X)、(M-X-1)、(M-XI)或(M-XI-1)、(M-XII)、(M-XII-1)、(M-XII-2)、(M-XIII)、(M-XIII-1)、(M-XIII-2)、(M-XIV)、(M-XIV-1)、(M-XIV-2)、(M-XIV-3)、(M-XIV-4)、(M-XIV-5)、(M-XV)、(M-XV-1)、(M-XV-2)、(M-XV-3)、(M-XV-4)、(M-XV-5)、(M-XVI)、(M-XVI-1)、(M-XVI-2)、(M-XVI-3)、(M-XVI-4)、(M-XVI-5)、(M-XV)、(M-XVII-1)、(M-XVII-2)、(M-XVII-3)、(M-XVII-4)、(M-XVII-5)中任一者)中，含Fc结构域组合物可取代Fc结构域且含Fc结构域-单体组合物可取代Fc结构域单体。在本文所述的式中任一者(例如，式(1)、(2)、(D-I)-(D-XVII)或(M-I)-(M-XVII)中任一者)中，当n为1时，E为含Fc结构域-单体组合物。在本文所述的式中任一者(例如，式(1)、(2)、(D-I)-(D-XVII)或(M-I)-(M-XVII)中任一者)中，当n为2时，E为含Fc结构域组合物。
在某些实施方案中，所述含Fc结构域组合物为抗体或抗体片段。抗体可包括免疫球蛋白的任何形式、重链抗体、轻链抗体、基于LRR的抗体或具有抗体样特性的其他蛋白骨架，以及所属领域中已知的任何其他免疫结合部分，包括抗体片段(例如，Fab、Fab’、Fab’2、F(ab’)2、Fd、Fv、Feb、scFv或SMIP)。不同类别的抗体的次单元结构及三维组态为本领域中已知的。抗体片段可包括如下结合部分，其包括源于抗体或与抗体具有显著同源性的部分，诸如抗体的抗原决定区。例示性抗体片段包括Fab、Fab’、Fab’2、F(ab’)2、Fd、Fv、Feb、scFv及SMIP。
在特定实施方案中，所述抗体或抗体片段为人、小鼠、骆驼科动物(例如，美洲驼、羊驼或骆驼)、山羊、绵羊、兔、鸡、豚鼠、仓鼠、马或大鼠抗体或抗体片段。在特定实施方案中，所述抗体为IgG、IgA、IgD、IgE、IgM或内体。在某些实施方案中，所述抗体片段包括scFv、sdAb、dAb、Fab、Fab’、Fab’2、F(ab’)2、Fd、Fv、Feb或SMIP。
在一些实施方案中，所述含Fc结构域组合物(例如，抗体或抗体片段)对一种或多种靶标(例如，抗原，诸如HIV相关抗原)赋予结合特异性。靶向HIV抗体是本领域已知的，例如，如以下中所述：Wibmer等人Curr.Opin.HIV AIDS,10(3):135-143(2015)，其通过引用以其整体并入本文。
在一些实施方案中，由所述含Fc结构域组合物(例如，抗体或抗体片段)结合的所述一种或多种靶标(例如，抗原)为病毒(例如，HIV)蛋白，诸如gp41受体或gp120受体。在一些实施方案中，所述抗体或抗体片段识别病毒表面抗原。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:1的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:1的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:2的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:2的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:3的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:3的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:4的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:4的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:5的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:5的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:6的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:6的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:7的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:7的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:8的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:8的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:9的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:9的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:10的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:10的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:11的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:11的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:12的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:12的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:13的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:13的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:14的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:14的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:15的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:15的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:16的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:16的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:17的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:17的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:18的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:18的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:19的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:19的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:20的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:20的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:21的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:21的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:22的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:22的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:23的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:23的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:24的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:25的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:25的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:26的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:26的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:27的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:27的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:28的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:28的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:29的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:29的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:30的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:30的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:31的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:31的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:32的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:32的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:33的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:33的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:34的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:34的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:35的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:35的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:36的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:36的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:37的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:37的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:38的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:38的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:39的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:39的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:40的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:40的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:41的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:41的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:42的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:42的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:43的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:43的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:44的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:45的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:46的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:46的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:47的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:47的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:48的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:48的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:49的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:49的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:50的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:50的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:51的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:51的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:52的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:52的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:53的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:53的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:54的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:54的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:55的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:55的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:56的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:56的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:57的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:57的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:58的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:58的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:59的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:59的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:60的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:60的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:61的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:61的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:62的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:62的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:63的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:63的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:64的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:64的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:65的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:65的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:66的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:66的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:67的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:67的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:68的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:68的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:69的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:69的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:70的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:70的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:71的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:71的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:72的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:72的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:73的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:73的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:74的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:74的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:75的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:75的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:76的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:76的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:77的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:77的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:78的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:78的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:79的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:79的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:80的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:80的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:81的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:81的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:82的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:82的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:83的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:83的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:84的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:84的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:85的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:85的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:86的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:87的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:87的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:88的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:88的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:89的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:89的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:90的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:90的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:91的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:91的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:92的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:92的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:93的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:93的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:94的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:94的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:95的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:95的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:96的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:96的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:97的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:97的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，E(例如，每个E)包括SEQ ID NO:98的氨基酸序列。在一些实施方案中，E包括与SEQ ID NO:98的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在其中E包括Fc结构域单体的本文所述的任何方面的一些实施方案中，所述Fc结构域单体(例如，具有SEQ ID NO:1-95中任一者的序列的Fc结构域单体)包括对应于M252Y/S254T/T256E(YTE)的三重突变。如本文所用，应理解“对应于”(例如，特定SEQ ID NO.的)特定氨基酸残基的氨基酸包括本领域技术人员将理解与(例如，所述特定序列的)所述特定残基比对的任何氨基酸残基。例如，SEQ ID NO:1-95中任一者可发生突变以包括YTE突变。
在其中E包括Fc结构域单体的本文所述的任何方面的一些实施方案中，所述Fc结构域单体(例如，具有SEQ ID NO:1-95中任一者的序列的Fc结构域单体)包括对应于M428L/N434S(LS)的双重突变型。如本文所用，应理解“对应于”(例如，特定SEQ ID NO.的)特定氨基酸残基的氨基酸包括本领域技术人员将理解与(例如，所述特定序列的)所述特定残基比对的任何氨基酸残基。例如，SEQ ID NO:1-95中任一者可发生突变以包括LS突变。
在其中E包括Fc结构域单体的本文所述的任何方面的一些实施方案中，所述Fc结构域单体(例如，具有SEQ ID NO:1-95中任一者的序列的Fc结构域单体)包括对应于N434H的突变型。如本文所用，应理解“对应于”(例如，特定SEQ ID NO.的)特定氨基酸残基的氨基酸包括本领域技术人员将理解与(例如，所述特定序列的)所述特定残基比对的任何氨基酸残基。例如，SEQ ID NO:1-95中任一者可发生突变以包括N434H突变。
在其中E包括Fc结构域单体的本文所述的任何方面的一些实施方案中，所述Fc结构域单体(例如，具有SEQ ID NO:1-95中任一者的序列的Fc结构域单体)包括对应于C220S的突变型。如本文所用，应理解“对应于”(例如，特定SEQ ID NO.的)特定氨基酸残基的氨基酸包括本领域技术人员将理解与(例如，所述特定序列的)所述特定残基比对的任何氨基酸残基。例如，SEQ ID NO:1-95中任一者可发生突变以包括C220S突变。
在其中E包括Fc结构域单体的本文所述的任何方面的一些实施方案中，所述Fc结构域单体(例如，具有SEQ ID NO:1-95中任一者的序列的Fc结构域单体)是所述Fc结构域单体的片段(例如，来自SEQ ID NO:1-95的至少25个(例如，20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50个或更多)、至少50个(例如，51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75个或更多)、至少75个(例如，75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100个或更多)连续氨基酸长的片段)。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中(例如，式(1)、(2)、(D-I)-(D-XVII)或(M-I)-(M-XVII)中任一者的缀合物)，E的一个或多个表面暴露赖氨酸残基的一个或多个氮原子或E中的一个或多个表面暴露半胱氨酸的一个或多个硫原子共价缀合于接头(例如，PEG2-PEG20接头)。缀合于E的接头可被官能化，以致其可反应以与本文所述的任何A1-L或任何A2-L-A1的L形成共价键。在优选实施方案中，E缀合于经叠氮基官能化的接头且A1-L或任何A2-L-A1的L经炔基官能化。E的接头-叠氮基及A1-L或A2-L-A1的接头-炔缀合(例如，通过点击化学)形成本发明的缀合物，例如由式(1)、(2)、(D-I)-(D-XVII)或(M-I)-(M-XVII)中任一者描述的缀合物。在其他实施方案中，E缀合于经炔基官能化的接头且A1-L或任何A2-L-A1的L经叠氮基官能化。E的接头-炔及A1-L或任何A2-L-A1的接头-叠氮基缀合(例如，通过点击化学)形成本发明的缀合物，例如由式(1)、(2)、(D-I)-(D-XVII)或(M-I)-(M-XVII)中任一者描述的缀合物。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，式(1)、(2)、(D-I)-(D-XVII)或(M-I)-(M-XVII)中任一者的波浪线可表示A1-L或A2-L-A1的L或者A1-L’或A1-L’-A2的L’之间的共价键。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，式(1)-(2)、(D-I)-(D-X)、(D’-I)、(M-I)-(M-X)或(M’-I)中任一者的波浪线可表示E的一个或多个氨基酸侧链(例如，E的一个或多个表面暴露赖氨酸残基的一个或多个氮原子或E中的一个或多个表面暴露半胱氨酸的一个或多个硫原子)已缀合于接头(例如，PEG2-PEG20接头)，其中所述接头已经反应性部分官能化，以致所述反应性部分与本文所述的任何A1-L或任何A2-L-A1的L形成共价键(例如，通过经叠氮基官能化的接头与经炔官能化的接头之间的点击化学，如上文所述)。
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，A1及/或A2具有由(A-I)描述的结构：
Figure BDA0003487201460001761
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，A1及/或A2具有由下式描述的结构：
Figure BDA0003487201460001771
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，A1及/或A2具有由下式描述的结构：
Figure BDA0003487201460001772
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，A1及/或A2具有由下式描述的结构：
Figure BDA0003487201460001773
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，A1及/或A2具有由下式描述的结构：
Figure BDA0003487201460001781
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，A1及/或A2具有由下式描述的结构：
Figure BDA0003487201460001782
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，A1及/或A2具有由下式描述的结构：
Figure BDA0003487201460001783
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，A1及/或A2具有由下式描述的结构：
Figure BDA0003487201460001791
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，A1及/或A2具有由下式描述的结构：
Figure BDA0003487201460001792
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，A1及/或A2具有由下式描述的结构：
Figure BDA0003487201460001793
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，A1及/或A2具有由下式描述的结构：
Figure BDA0003487201460001801
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，A1及/或A2具有由下式描述的结构：
Figure BDA0003487201460001802
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，A1及/或A2具有由下式描述的结构：
Figure BDA0003487201460001803
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，A1及/或A2具有由下式描述的结构：
Figure BDA0003487201460001811
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，A1及/或A2具有由下式描述的结构：
Figure BDA0003487201460001812
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，A1及/或A2具有由下式描述的结构：
Figure BDA0003487201460001813
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，A1及/或A2具有由下式描述的结构：
Figure BDA0003487201460001821
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，A1及/或A2具有由下式描述的结构：
Figure BDA0003487201460001822
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，A1及/或A2具有由下式描述的结构：
Figure BDA0003487201460001823
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，A1及/或A2具有由下式描述的结构：
Figure BDA0003487201460001831
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，A1及/或A2具有由下式描述的结构：
Figure BDA0003487201460001832
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，A1及/或A2具有由(A-II)描述的结构：
Figure BDA0003487201460001833
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，A1及/或A2具有由(A-IIaa)描述的结构：
Figure BDA0003487201460001834
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，A1及/或A2具有由(A-IIbb)描述的结构：
Figure BDA0003487201460001841
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，A1及/或A2具有由(A-IIcc)描述的结构：
Figure BDA0003487201460001842
在本文所述的任何方面的一些实施方案中，A1及/或A2具有由(A-IIdd)描述的结构：
Figure BDA0003487201460001851
在一些实施方案中，所述缀合物为缀合物1或其任何区域异构体，且药物:抗体比率(DAR)(例如，T)是在0.5与10.0之间，例如0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8.0、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9或10.0。在一些实施方案中，DAR是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
在一些实施方案中，所述缀合物为缀合物2或其任何区域异构体，且DAR(例如，T)是在0.5与10.0之间，例如0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8.0、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9或10.0。在一些实施方案中，DAR是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
在一些实施方案中，所述缀合物为缀合物3或其任何区域异构体，且DAR(例如，T)是在0.5与10.0之间，例如0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8.0、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9或10.0。在一些实施方案中，DAR是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
在一些实施方案中，所述缀合物为缀合物4或其任何区域异构体，且DAR(例如，T)是在0.5与10.0之间，例如0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8.0、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9或10.0。在一些实施方案中，DAR是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
在一些实施方案中，所述缀合物为缀合物5或其任何区域异构体，且DAR(例如，T)是在0.5与10.0之间，例如0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8.0、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9或10.0。在一些实施方案中，DAR是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
在一些实施方案中，所述缀合物为缀合物6或其任何区域异构体，且DAR(例如，T)是在0.5与10.0之间，例如0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8.0、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9或10.0。在一些实施方案中，DAR是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
在一些实施方案中，所述缀合物为缀合物7或其任何区域异构体，且DAR(例如，T)是在0.5与10.0之间，例如0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8.0、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9或10.0。在一些实施方案中，DAR是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
在一些实施方案中，所述缀合物为缀合物8或其任何区域异构体，且DAR(例如，T)是在0.5与10.0之间，例如0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8.0、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9或10.0。在一些实施方案中，DAR是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
在一些实施方案中，所述缀合物为缀合物9或其任何区域异构体，且DAR(例如，T)是在0.5与10.0之间，例如0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8.0、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9或10.0。在一些实施方案中，DAR是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
在一些实施方案中，所述缀合物为缀合物10或其任何区域异构体，且DAR(例如，T)是在0.5与10.0之间，例如0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8.0、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9或10.0。在一些实施方案中，DAR是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
在一些实施方案中，所述缀合物为缀合物11或其任何区域异构体，且DAR(例如，T)是在0.5与10.0之间，例如0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8.0、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9或10.0。在一些实施方案中，DAR是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
在一些实施方案中，所述缀合物为缀合物12或其任何区域异构体，且DAR(例如，T)是在0.5与10.0之间，例如0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8.0、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9或10.0。在一些实施方案中，DAR是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
在一些实施方案中，所述缀合物为缀合物13或其任何区域异构体，且DAR(例如，T)是在0.5与10.0之间，例如0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8.0、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9或10.0。在一些实施方案中，DAR是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
在一些实施方案中，所述缀合物为缀合物14或其任何区域异构体，且DAR(例如，T)是在0.5与10.0之间，例如0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8.0、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9或10.0。在一些实施方案中，DAR是在0.5与2.0之间、在2.0与4.0之间、在4.0与6.0之间、在6.0与8.0之间或在8.0与10.0之间。
在一些实施方案中，本文所述的缀合物的群体具有1与2之间、2与4之间、4与6之间、6与8之间、8与10之间、1与10之间、1与20之间、1与5之间、3与7之间、5与10之间或10与20之间的DAR(例如，T)。
在一些实施方案中，Fc结构域单体包括小于约300个氨基酸残基(例如，小于约300、小于约295、小于约290、小于约285、小于约280、小于约275、小于约270、小于约265、小于约260、小于约255、小于约250、小于约245、小于约240、小于约235、小于约230、小于约225或小于约220个氨基酸残基)。在一些实施方案中，Fc结构域单体小于约40kDa(例如，小于约35kDa、小于约30kDa、小于约25kDa)。
在一些实施方案中，Fc结构域单体包括至少200个氨基酸残基(例如，至少210、至少220、至少230、至少240、至少250、至少260、至少270、至少280、至少290或至少300个氨基酸残基)。在一些实施方案中，Fc结构域单体为至少20kDa(例如，至少25kDa、至少30kDa或至少35kDa)。
在一些实施方案中，Fc结构域单体包括200至400个氨基酸残基(例如，200至250、250至300、300至350、350至400、200至300、250至350或300至400个氨基酸残基)。在一些实施方案中，Fc结构域单体为20至40kDa(例如，20至25kDa、25至30kDa、35至40kDa、20至30kDa、25至35kDa或30至40kDa)。
在一些实施方案中，Fc结构域单体包括与SEQ ID No:1-95中任一者的序列具有至少90％(例如，至少95％、至少98％)同一性的氨基酸序列或其区。在一些实施方案中，Fc结构域单体包括SEQ ID No:1-95中任一者的氨基酸序列或其区。
在一些实施方案中，Fc结构域单体包括SEQ ID NO:1-95中任一者的区，其中所述区包括位置220、252、254及256。在一些实施方案中，所述区包括至少40个氨基酸残基、至少50个氨基酸残基、至少60个氨基酸残基、至少70个氨基酸残基、至少80个氨基酸残基、至少90个氨基酸残基、至少100个氨基酸残基、至少110个氨基酸残基、至少120个氨基酸残基、至少130个氨基酸残基、至少140个氨基酸残基、至少150个氨基酸残基、至少160个氨基酸残基、至少170个氨基酸残基、至少180个氨基酸残基、至少190个氨基酸残基或至少200个氨基酸残基。
定义
为了促进理解本发明，下文定义多个术语。本文所定义的术语具有如本发明相关领域中的一般技术者通常所理解的含义。诸如“一(a)”、“一(an)”及“所述(the)”的术语不旨在仅指单一实体，而包括可用于说明的特定实例所属的一般类别。所述术语在本文中用于描述本发明的特定实施方案，但其使用不会限定本发明，除非如权利要求书中所概述。
“病毒感染”意指病毒(例如，人类免疫缺陷病毒)在宿主生物体(例如，人受试者)中的致病性生长。病毒感染可为其中病毒群体的存在正在损害宿主身体的任何情形。因此，当受试者的身体中或身体上存在过量病毒群体时，或当病毒群体的存在正在损害所述受试者的细胞或其他组织时，所述受试者“正在经受”病毒感染。
如本文所用，术语“Fc结构域单体”是指如下多肽链，其包括至少一个铰链结构域及第二及第三抗体恒定结构域(CH2及CH3)或其功能片段(例如，能够(i)与另一Fc结构域单体二聚以形成Fc结构域，及(ii)结合于Fc受体的片段。所述Fc结构域单体可为任何免疫球蛋白抗体同型，包括IgG、IgE、IgM、IgA或IgD(例如，IgG)。另外，所述Fc结构域单体可为IgG亚型(例如，IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3或IgG4)(例如，IgG1)。Fc结构域单体不包括免疫球蛋白中能够充当抗原-识别区的任何部分，例如可变结构域或互补决定区(CDR)。如本文所述的缀合物中的Fc结构域单体可含有相对于野生型Fc结构域单体序列的一种或多种改变(例如，1-10、1-8、1-6、1-4种氨基酸取代、添加或缺失)，其改变Fc结构域与Fc受体之间的相互作用。合适改变的实例为本领域中已知的。在某些实施方案中，人Fc结构域单体(例如，IgG重链，诸如IgG1)包括自Asn208、Glu216、Asp221、Lys222或Cys226中任一者延伸至Lys447处的重链羧基端的区。所述Fc区的C端Lys447可或可不存在，不影响所述Fc区的结构或稳定性。除非本文中另外规定，否则所述IgG或Fc结构域单体中氨基酸残基的编号是根据针对抗体的EU编号系统，所述系统也称为Kabat EU指数，如例如Kabat等人,Sequences ofProteins of Immunological Interest,第5版Public Health Service,NationalInstitutes of Health,Bethesda,MD,1991中所述。
如本文所用，术语“Fc结构域”是指两种Fc结构域单体的二聚体，其能够结合Fc受体。在野生型Fc结构域中，两种Fc结构域单体通过两个CH3抗体恒定结构域之间的相互作用二聚化，在一些实施方案中，两种二聚化Fc结构域单体的铰链结构域之间形成一个或多个二硫键。
术语“共价附接”是指缀合物中通过共价键彼此连接的两个部分，所述共价键形成于所述缀合物的所述两个部分中的两个原子之间。
如本文所用，术语“Fc结合肽”是指是指具有5至50个(例如，5至40个、5至30个、5至20个、5至15个、5至10个、10至50个、10至30个或10至20个)氨基酸残基的氨基酸序列的多肽，其对Fc结构域(诸如本文所述的任何Fc结构域)具有亲和力且具有结合所述Fc结构域的功能。Fc结合肽可具有不同起源，例如合成、人、小鼠或大鼠。本发明的Fc结合肽包括已被工程改造以包括一个或多个(例如，两个、三个、四个或五个)溶剂暴露半胱氨酸或赖氨酸残基的Fc结合肽，其可提供用于缀合于本发明化合物(例如，缀合于gp120结合剂单体或二聚体，包括借助于接头)的位点。最优选地，所述Fc结合肽将含有单一溶剂暴露半胱氨酸或赖氨酸，因此使得本发明化合物能够位点特异性缀合。Fc结合肽可仅包括天然存在的氨基酸残基，或可包括一个或多个非天然存在的氨基酸残基。在包括时，非天然存在的氨基酸残基(例如，非天然存在的氨基酸残基的侧链)可用作用于本发明化合物(例如，gp120结合剂单体或二聚体，包括借助于接头)的附接点。本发明的Fc结合肽可为直链或环状的。本发明的Fc结合肽包括本领域技术人员已知的任何Fc结合肽。
如此处所用，术语“白蛋白”是指包含对应于天然存在的白蛋白(例如，人血清白蛋白)或其变体(诸如天然存在的白蛋白的经工程改造变体)的氨基酸的多肽。白蛋白的变体包括多态性、诸如结构域及子结构域的片段及融合蛋白(例如，具有诸如多肽接头的C端或N端融合的白蛋白)。优选地，白蛋白具有人血清白蛋白(HSA)或其变体或片段的氨基酸序列，最优选地具有其功能变体或片段的氨基酸序列。本发明的白蛋白包括与SEQ ID NO:96-98中任一者具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的蛋白。本发明的白蛋白包括已被工程改造以包括一个或多个(例如，两个、三个、四个或五个)溶剂暴露半胱氨酸或赖氨酸残基的白蛋白，其可提供用于缀合于本发明化合物(例如，缀合于gp120结合剂单体或二聚体，包括借助于接头)的位点。最优选地，所述白蛋白将含有单一溶剂暴露半胱氨酸或赖氨酸，因此使得本发明化合物能够位点特异性缀合。白蛋白可仅包括天然存在的氨基酸残基，或可包括一个或多个非天然存在的氨基酸残基。在包括时，非天然存在的氨基酸残基(例如，非天然存在的氨基酸残基的侧链)可用作用于本发明化合物(例如，gp120结合剂单体或二聚体，包括借助于接头)的附接点。
如本文所用，术语“白蛋白结合肽”是指具有5至50个(例如，5至40个、5至30个、5至20个、5至15个、5至10个、10至50个、10至30个或10至20个)氨基酸残基的氨基酸序列的多肽，其对白蛋白(诸如本文所述的任何白蛋白)具有亲和力且具有结合所述白蛋白的功能。优选地，白蛋白结合肽缀合于天然存在的血清白蛋白，最优选地人血清白蛋白。白蛋白结合肽可具有不同起源，例如合成、人、小鼠或大鼠。本发明的白蛋白结合肽包括已被工程改造以包括一个或多个(例如，两个、三个、四个或五个)溶剂暴露半胱氨酸或赖氨酸残基的白蛋白结合肽，其可提供用于缀合于本发明化合物(例如，缀合于gp120结合剂单体或二聚体，包括借助于接头)的位点。最优选地，所述白蛋白结合肽将含有单一溶剂暴露半胱氨酸或赖氨酸，因此使得本发明化合物能够位点特异性缀合。白蛋白结合肽可仅包括天然存在的氨基酸残基，或可包括一个或多个非天然存在的氨基酸残基。在包括时，非天然存在的氨基酸残基(例如，非天然存在的氨基酸残基的侧链)可用作用于本发明化合物(例如，gp120结合剂单体或二聚体，包括借助于接头)的附接点。本发明的白蛋白结合肽可为直链或环状的。本发明的白蛋白结合肽包括本领域技术人员已知的任何白蛋白结合肽，其实例提供于本文中。进一步例示性白蛋白结合肽提供于美国专利申请案第2005/0287153号中，所述美国专利申请案以引用的方式整体并入本文中。
如本文所用，诸如表面暴露半胱氨酸或表面暴露赖氨酸的“表面暴露氨基酸”或“溶剂暴露氨基酸”是指如下氨基酸，其易接近围绕所述蛋白质的溶剂。表面暴露氨基酸可为天然存在的，或所述蛋白质的经工程改造变体(例如，取代或插入)。在一些实施方案中，表面暴露氨基酸是如下氨基酸，其在被取代时未实质上改变所述蛋白质的三维结构。
如本文所用，术语“接头”、“L”及“L’”是指缀合物中的两种或更多种组分之间(例如，本文所述的缀合物中的两种gp120结合剂之间、本文所述的缀合物中的gp120结合剂与Fc结构域或白蛋白之间及本文所述的缀合物中的两种gp120结合剂的二聚体与Fc结构域或白蛋白之间)的共价连接。在一些实施方案中，本文所述的缀合物可含有具有三价结构的接头(例如，三价接头)。三价接头具有三个臂，其中每个臂共价连接至所述缀合物的组分(例如，缀合于第一gp120结合剂的第一臂、缀合于第二gp120结合剂的第二臂及缀合于Fc结构域或白蛋白的第三臂)。
可用作接头的分子包括至少两个官能团，所述官能团可为相同或不同的，例如两个羧酸基、两个氨基、两个磺酸基、羧酸基及马来酰亚胺基、羧酸基及炔基、羧酸基及氨基、羧酸基及磺酸基、氨基及马来酰亚胺基、氨基及炔基或氨基及磺酸基。第一官能团可与所述缀合物中的第一组分形成共价连接且第二官能团可与所述缀合物中的第二组分形成共价连接。在三价接头的一些实施方案中，接头的两个臂可含有两种二羧酸，其中第一羧酸可与所述缀合物中的第一gp120结合剂形成共价连接且第二羧酸可与所述缀合物中的第二gp120结合剂形成共价连接且所述接头的第三臂可与所述缀合物中的Fc结构域或白蛋白形成共价连接。二羧酸的实例进一步描述于本文中。在一些实施方案中，含有一个或多个马来酰亚胺基的分子可用作接头，其中所述马来酰亚胺基可与所述缀合物中的组分(例如，Fc结构域单体、Fc结构域或白蛋白)的半胱氨酸形成碳-硫连接。在一些实施方案中，含有一个或多个炔基的分子可用作接头，其中所述炔基可与所述缀合物中的组分(例如，Fc结构域单体、Fc结构域或白蛋白)的叠氮化物形成1,2,3-三唑连接。在一些实施方案中，含有一个或多个叠氮基的分子可用作接头，其中所述叠氮基可与所述缀合物中的组分(例如，Fc结构域单体、Fc结构域或白蛋白)的炔形成1,2,3-三唑连接。在一些实施方案中，含有一个或多个双砜基的分子可用作接头，其中所述双砜基可与所述缀合物中的组分(例如，Fc结构域单体、Fc结构域或白蛋白)的氨基形成连接。在一些实施方案中，含有一个或多个磺酸基的分子可用作接头，其中所述磺酸基可与所述缀合物中的组分形成磺酰胺连接。在一些实施方案中，含有一个或多个异氰酸酯基的分子可用作接头，其中所述异氰酸酯基可与所述缀合物中的组分形成脲连接。在一些实施方案中，含有一个或多个卤烷基的分子可用作接头，其中所述卤烷基可与所述缀合物中的组分形成共价连接，例如C-N及C-O连接。
在一些实施方案中，接头提供两种或更多种组分之间的空间、刚性及/或柔性。在一些实施方案中，接头可为键，例如共价键。术语“键”是指化学键，例如酰胺键、二硫键、C-O键、C-N键、N-N键、C-S键或由化学反应(例如，化学缀合)产生的任何种类的键。在一些实施方案中，接头包括不超过250个原子。在一些实施方案中，接头包括不超过250个非氢原子。在一些实施方案中，接头的骨架包括不超过250个原子。接头的“骨架”是指接头中的原子，其合起来形成自缀合物的一部分至所述缀合物的另一部分的最短路径(例如，连接第一gp120结合剂及第二gp120结合剂的最短路径)。接头的骨架中的原子直接地参与连接缀合物的一部分至所述缀合物的另一部分(例如，连接第一gp120结合剂及第二gp120结合剂)。例如，附接于接头的骨架中的碳的氢原子未被视为直接地参与连接所述缀合物的一部分至所述缀合物的另一部分。
在一些实施方案中，接头可包含源于例如合成聚合物(例如，聚乙二醇(PEG)聚合物)的合成基团。在一些实施方案中，接头可包含一个或多个氨基酸残基，诸如D-或L-氨基酸残基。在一些实施方案中，接头可为氨基酸序列(例如，1-25个氨基酸、1-10个氨基酸、1-9个氨基酸、1-8个氨基酸、1-7个氨基酸、1-6个氨基酸、1-5个氨基酸、1-4个氨基酸、1-3个氨基酸、1-2个氨基酸或1个氨基酸的序列)的残基。在一些实施方案中，接头可包含一个或多个(例如，1-100个、1-50个、1-25个、1-10个、1-5个或1-3个)任选取代的亚烷基、任选取代的亚杂烷基(例如，PEG单元)、任选取代的亚烯基、任选取代的亚杂烯基、任选取代的亚炔基、任选取代的亚杂炔基、任选取代的亚环烷基、任选取代的亚杂环烷基、任选取代的亚环烯基、任选取代的亚杂环烯基、任选取代的亚环炔基、任选取代的亚杂环炔基、任选取代的亚芳基、任选取代的亚杂芳基(例如，吡啶)、O、S、NRi(Ri为H、任选取代的烷基、任选取代的杂烷基、任选取代的烯基、任选取代的杂烯基、任选取代的炔基、任选取代的杂炔基、任选取代的环烷基、任选取代的杂环烷基、任选取代的环烯基、任选取代的杂环烯基、任选取代的环炔基、任选取代的杂环炔基、任选取代的芳基或任选取代的杂芳基)、P、羰基、硫羰基、磺酰基、磷酸酯基、磷酰基或亚氨基。例如，接头可包含一个或多个任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C1-C20亚杂烷基(例如，PEG单元)、任选取代的C2-C20亚烯基(例如，C2亚烯基)、任选取代的C2-C20亚杂烯基、任选取代的C2-C20亚炔基、任选取代的C2-C20亚杂炔基、任选取代的C3-C20亚环烷基(例如，亚环丙基、亚环丁基)、任选取代的C2-C20亚杂环烷基、任选取代的C4-C20亚环烯基、任选取代的C4-C20亚杂环烯基、任选取代的C8-C20亚环炔基、任选取代的C8-C20亚杂环炔基、任选取代的C5-C15亚芳基(例如，C6亚芳基)、任选取代的C3-C15亚杂芳基(例如，咪唑、吡啶)、O、S、NRi(Ri为H、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C1-C20杂烷基、任选取代的C2-C20烯基、任选取代的C2-C20杂烯基、任选取代的C2-C20炔基、任选取代的C2-C20杂炔基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C4-C20环烯基、任选取代的C4-C20杂环烯基、任选取代的C8-C20环炔基、任选取代的C8-C20杂环炔基、任选取代的C5-C15芳基或任选取代的C3-C15杂芳基)、P、羰基、硫羰基、磺酰基、磷酸酯基、磷酰基或亚氨基。
如本文所用，术语“烷基”、“烯基”及“炔基”包括直链及分支链单价取代基，以及其组合，当未被取代时仅含有C及H。当烷基包括至少一个碳-碳双键或碳-碳三键时，所述烷基可分别称作“烯基”或“炔基”。烷基、烯基或炔基的单价不包括所述烷基、烯基或炔基上任选存在的取代基。例如，若烷基、烯基或炔基附接于化合物，则所述烷基、烯基或炔基的单价是指其附接于所述化合物且不包括可存在于所述烷基、烯基或炔基上的任何额外取代基。在一些实施方案中，烷基或杂烷基可含有例如1-20、1-18、1-16、1-14、1-12、1-10、1-8、1-6、1-4或1-2个碳原子(例如，C1-C20、C1-C18、C1-C16、C1-C14、C1-C12、C1-C10、C1-C8、C1-C6、C1-C4或C1-C2)。在一些实施方案中，烯基、杂烯基、炔基或杂炔基可含有例如2-20、2-18、2-16、2-14、2-12、2-10、2-8、2-6或2-4个碳原子(例如，C2-C20、C2-C18、C2-C16、C2-C14、C2-C12、C2-C10、C2-C8、C2-C6或C2-C4)。实例包括但不限于甲基、乙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、2-丙烯基及3-丁炔基。
如本文所用，术语“环烷基”表示单价饱和或不饱和非芳族环烷基。环烷基可具有例如三个至二十个碳(例如，C3-C7、C3-C8、C3-C9、C3-C10、C3-C11、C3-C12、C3-C14、C3-C16、C3-C18或C3-C20环烷基)。环烷基的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基及环庚基。当环烷基包括至少一个碳-碳双键时，所述环烷基可称作“环烯基”。环烯基可具有例如四个至二十个碳(例如，C4-C7、C4-C8、C4-C9、C4-C10、C4-C11、C4-C12、C4-C14、C4-C16、C4-C18或C4-C20环烯基)。例示性环烯基包括但不限于环戊烯基、环己烯基及环庚烯基。当环烷基包括至少一个碳-碳三键时，所述环烷基可称作“环炔基”。环炔基可具有例如八个至二十个碳(例如，C8-C9、C8-C10、C8-C11、C8-C12、C8-C14、C8-C16、C8-C18或C8-C20环炔基)。术语“环烷基”也包括具有桥接多环结构的环状化合物，其中一个或多个碳桥接单环的两个不相邻成员，例如双环[2.2.1.]庚基及金刚烷。术语“环烷基”也包括二环、三环及四环稠环结构，例如十氢化萘及螺环化合物。“杂环烷基”、“杂环烯基”或“杂环炔基”是指具有一个或多个环(例如，1、2、3、4或更多个环)的环烷基、环烯基或环炔基，所述环具有一个或多个独立地选自例如N、O及S的杂原子。例示性杂环烷基包括吡咯烷、噻吩、四氢噻吩、四氢呋喃、哌啶、四氢吡喃、喹啉、异喹啉、噌啉、酞嗪、喹唑啉、喹喔啉、吲哚、苯并噻吩、苯并呋喃、异吲哚、苯并[c]噻吩、异苯并呋喃、苯并咪唑、苯并恶唑、苯并噻唑、1H-吲唑、1,2-苯并异恶唑、1,2-苯并异噻唑、2,1-苯并异噻唑、2,1-苯并异恶唑、嘌呤、吡咯里西啶、茚、芴、咔唑、二苯并呋喃、吖啶、吩嗪及吩恶嗪。
如本文所用，术语“芳基”是指就电子分布而言在环系统中具有芳香性特征的任何单环或稠环二环或三环系统，例如苯基、萘基或菲。在一些实施方案中，环系统含有5-15个环成员原子或5-10个环成员原子。芳基可具有例如五个至十五个碳(例如，C5-C6、C5-C7、C5-C8、C5-C9、C5-C10、C5-C11、C5-C12、C5-C13、C5-C14或C5-C15芳基)。术语“杂芳基”还指代含有一个或多个(例如，1-4、1-3、1、2、3或4个)选自O、S及N的杂原子的此类单环或稠合双环系统。杂芳基可具有例如二个至十五个环成员原子(例如，C2-C3、C2-C4、C2-C5、C2-C6、C2-C7、C2-C8、C2-C9、C2-C10、C2-C11、C2-C12、C2-C13、C2-C14或C3-C15杂芳基)。杂原子的包括允许包括将被视为芳族的5-元环以及6-元环。因此，典型杂芳基系统包括例如吡啶基、嘧啶基、吲哚基、苯并咪唑基、苯并三唑基、异喹啉基、喹啉基、苯并噻唑基、苯并呋喃基、噻吩基、呋喃基、噻唑基、三唑基(例如，1,2,3-或1,2,4-三唑基)、恶唑基、异恶唑基、苯并恶唑基、苯并异恶唑基及咪唑基。因为互变异构体为可能的，故诸如邻苯二甲酰亚胺基的基团也被视为杂芳基。在一些实施方案中，芳基或杂芳基为任选含有1-2个氮原子的5或6元芳环系统。在一些实施方案中，芳基或杂芳基为任选取代的苯基、吡啶基、吲哚基、嘧啶基、哒嗪基、苯并噻唑基、苯并咪唑基、吡唑基、咪唑基、异恶唑基、噻唑基或咪唑并吡啶基。在一些实施方案中，芳基为苯基。在一些实施方案中，芳基可任选被诸如芳基取代基(例如，联苯基)的取代基取代。
术语“烷芳基”是指连接至亚烷基、亚烯基或亚炔基的芳基。一般而言，若化合物附接于烷芳基，则所述烷芳基的亚烷基、亚烯基或亚炔基部分附接于所述化合物。在一些实施方案中，烷芳基为C6-C35烷芳基(例如，C6-C16、C6-C14、C6-C12、C6-C10、C6-C9、C6-C8、C7或C6烷芳基)，其中碳数目指示所述烷芳基的芳基部分及亚烷基、亚烯基或亚炔基部分中的碳的总数。烷芳基的实例包括但不限于(C1-C8)亚烷基(C6-C12)芳基、(C2-C8)亚烯基(C6-C12)芳基或(C2-C8)亚炔基(C6-C12)芳基。在一些实施方案中，烷芳基为苯甲基或苯乙基。在杂烷芳基中，一个或多个选自N、O及S的杂原子可存在于所述烷芳基的亚烷基、亚烯基或亚炔基部分中及/或可存在于所述烷芳基的芳基部分中。在任选取代的烷芳基中，取代基可存在于所述烷芳基的亚烷基、亚烯基或亚炔基部分上及/或可存在于所述烷芳基的芳基部分上。
如本文所用，术语“氨基”表示–N(Rx)2或–N+(Rx)3，其中Rx各自独立地为H、烷基、烯基、炔基、芳基、烷芳基、环烷基，或两个Rx组合形成杂环烷基。在一些实施方案中，氨基为-NH2。
如本文所用，术语“烷氨基”是指本文所述的氨基，其附接于亚烷基(例如，C1-C5亚烷基)、亚烯基(例如，C2-C5亚烯基)或亚炔基(例如，C2-C5亚烯基)。一般而言，若化合物附接于烷氨基，则所述烷氨基的亚烷基、亚烯基或亚炔基部分附接于所述化合物。烷氨基的氨基部分是指–N(Rx)2或–N+(Rx)3，其中Rx各自独立地为H、烷基、烯基、炔基、芳基、烷芳基、环烷基，或两个Rx组合形成杂环烷基。在一些实施方案中，烷氨基的氨基部分为-NH2。烷氨基的实例为C1-C5烷氨基，例如C2烷氨基(例如，CH2CH2NH2或CH2CH2N(CH3)2)。在杂烷氨基中，一个或多个(例如，1-4、1-3、1、2、3或4个)选自N、O及S的杂原子可存在于所述杂烷氨基的亚烷基、亚烯基或亚炔基部分中。在一些实施方案中，烷氨基可任选被取代。在取代的烷氨基中，取代基可存在于所述烷氨基的亚烷基、亚烯基或亚炔基部分上及/或可存在于所述烷氨基的氨基部分上。
如本文所用，术语“烷酰胺”是指如下酰胺基，其附接至亚烷基(例如，C1-C5亚烷基)、亚烯基(例如，C2-C5亚烯基)或亚炔基(例如，C2-C5亚烯基)。一般而言，若化合物附接于烷酰胺基，则所述烷酰胺的亚烷基、亚烯基或亚炔基部分附接于所述化合物。烷酰胺的酰胺部分是指–C(O)-N(Rx)2，其中Rx各自独立地为H、烷基、烯基、炔基、芳基、烷芳基、环烷基，或两个Rx组合形成杂环烷基。在一些实施方案中，烷酰胺的酰胺部分为-C(O)NH2。烷酰胺基可为-(CH2)2-C(O)NH2或-CH2-C(O)NH2。在杂烷酰胺基中，一个或多个(例如，1-4、1-3、1、2、3或4个)选自N、O及S的杂原子可存在于所述杂烷酰胺基的亚烷基、亚烯基或亚炔基部分中。在一些实施方案中，烷酰胺基可任选被取代。在取代的烷酰胺基中，取代基可存在于所述烷酰胺基的亚烷基、亚烯基或亚炔基部分上及/或可存在于所述烷酰胺基的酰胺部分上。
如本文所用，术语“亚烷基”、“亚烯基”及“亚炔基”是指具有规定大小的二价基团。在一些实施方案中，亚烷基可含有例如1-20、1-18、1-16、1-14、1-12、1-10、1-8、1-6、1-4或1-2个碳原子(例如，C1-C20、C1-C18、C1-C16、C1-C14、C1-C12、C1-C10、C1-C8、C1-C6、C1-C4或C1-C2)。在一些实施方案中，亚烯基或亚炔基可含有例如2-20、2-18、2-16、2-14、2-12、2-10、2-8、2-6或2-4个碳原子(例如，C2-C20、C2-C18、C2-C16、C2-C14、C2-C12、C2-C10、C2-C8、C2-C6或C2-C4)。亚烷基、亚烯基及/或亚炔基包括直链及分支链形式，以及其组合。亚烷基、亚烯基或亚炔基的二价不包括所述亚烷基、亚烯基或亚炔基上任选存在的取代基。例如，两种gp120结合剂可借助于包括亚烷基、亚烯基及/或亚炔基或其组合的接头彼此附接。所述接头中的亚烷基、亚烯基及/或亚炔基中每一者关于亚烷基、亚烯基及/或亚炔基的任一末端上的两个附接被视为二价。例如，若接头包括-(任选取代的亚烷基)-(任选取代的亚烯基)-(任选取代的亚烷基)-，则所述亚烯基关于其与所述接头的末端处的两个亚烷基的附接被视为二价。亚烯基上的任选存在的取代基未包括于所述亚烯基的二价中。亚烷基、亚烯基或亚炔基(例如，接头中的亚烷基、亚烯基或亚炔基)的二价性质是指所述基团的两个末端且不包括可存在于亚烷基、亚烯基或亚炔基中的任选存在的取代基。因为其为二价，故其可使缀合物的多个(例如，两个)部分(例如，第一gp120结合剂及第二gp120结合剂)连接在一起。亚烷基、亚烯基及/或亚炔基可由典型地适用作如本文所陈述的烷基、烯基及炔基的取代基的基团取代。例如，C＝O是由氧代(＝O)取代的C1亚烷基。例如，-HCR-C≡C-可被视为任选取代的亚炔基且被视为二价基团，即使其具有任选取代基R。亚杂烷基、亚杂烯基及/或亚杂炔基是指包括一个或多个(例如，1-4、1-3、1、2、3或4个)杂原子(例如，N、O及S)的亚烷基、亚烯基及/或亚炔基。例如，聚乙二醇(PEG)聚合物或PEG聚合物中的PEG单元-(CH2)2-O-被视为含有一个或多个氧原子的亚杂烷基。
如本文所用，术语“亚环烷基”是指使化合物的两个部分连接在一起的二价环状基团。例如，亚环烷基内的一个碳可连接于化合物的一部分，而亚环烷基内的另一个碳可连接于化合物的另一部分。亚环烷基可包括饱和或不饱和非芳族环状基团。亚环烷基可在所述亚环烷基的环状部分中具有例如三个至二十个碳(例如，C3-C7、C3-C8、C3-C9、C3-C10、C3-C11、C3-C12、C3-C14、C3-C16、C3-C18或C3-C20亚环烷基)。当亚环烷基包括至少一个碳-碳双键时，所述亚环烷基可称为“亚环烯基”基团。亚环烯基可在所述亚环烯基的环状部分中具有例如四个至二十个碳(例如，C4-C7、C4-C8、C4-C9、C4-C10、C4-C11、C4-C12、C4-C14、C4-C16、C4-C18或C4-C20亚环烯基)。亚环烯基可在所述亚环烯基的环状部分中具有例如四个至二十个碳(例如，C4-C7、C4-C8、C4-C9、C4-C10、C4-C11、C4-C12、C4-C14、C4-C16、C4-C18或C4-C20亚环烯基)。亚环炔基可在所述亚环炔基的环状部分中具有例如四个至二十个碳(例如，C4-C7、C4-C8、C4-C9、C4-C10、C4-C11、C4-C12、C4-C14、C4-C16、C4-C18或C4-C20亚环炔基)。亚环烷基可由典型地适用作如本文所陈述的烷基、烯基及炔基的取代基的基团取代。亚杂环烷基是指包括一个或多个(例如，1-4、1-3、1、2、3或4个)杂原子(例如，N、O及S)的亚环烷基。亚环烷基的实例包括但不限于亚环丙基及亚环丁基。四氢呋喃可被视为亚杂环烷基。
如本文所用，术语“亚芳基”是指使化合物的多个(例如，两个或三个)部分连接在一起的多价(例如，二价或三价)芳基。例如，亚芳基内的一个碳可连接于化合物的一部分，而亚芳基内的另一个碳可连接于化合物的另一部分。亚芳基可在所述亚芳基的芳基部分中具有例如五个至十五个碳(例如，C5-C6、C5-C7、C5-C8、C5-C9、C5-C10、C5-C11、C5-C12、C5-C13、C5-C14或C5-C15亚芳基)。亚芳基可由典型地适用作如本文所陈述的烷基、烯基及炔基的取代基的基团取代。亚杂芳基是指包括一个或多个(例如，1-4、1-3、1、2、3或4个)杂原子(例如，N、O及S)的芳族基团。亚杂芳基可具有例如二个至十五个碳(例如，C2-C3、C2-C4、C2-C5、C2-C6、C2-C7、C2-C8、C2-C9、C2-C10、C2-C11、C2-C12、C2-C13、C2-C14或C3-C15亚杂芳基)。
如本文所用，术语“任选取代”是指具有0、1或多个取代基，诸如0-25、0-20、0-10或0-5个取代基。取代基包括但不限于烷基、烯基、炔基、芳基、烷芳基、酰基、杂芳基、杂烷基、杂烯基、杂炔基、杂烷芳基、卤素、氧代、氰基、硝基、氨基、烷氨基、羟基、烷氧基、烷酰基、羰基、氨甲酰基、胍基(guanidinyl)、脲基、脒基(amidinyl)、上述基团或部分中任一者及上述基团或部分中任一者的杂形式。取代基包括但不限于F、Cl、甲基、苯基、苯甲基、OR、NR2、SR、SOR、SO2R、OCOR、NRCOR、NRCONR2、NRCOOR、OCONR2、RCO、COOR、烷基-OOCR、SO3R、CONR2、SO2NR2、NRSO2NR2、CN、CF3、OCF3、SiR3及NO2，其中R各自独立地为H、烷基、烯基、芳基、杂烷基、杂烯基或杂芳基，且其中同一或相邻原子上的两个任选存在的取代基可接合以形成含有3–8个成员的稠合、任选取代的芳族或非芳族、饱和或不饱和环，或同一原子上的两个任选存在的取代基可接合以形成含有3–8个成员的任选取代的芳族或非芳族、饱和或不饱和环。
任选取代的基团或部分是指其中一个原子(例如，氢原子)任选被另一取代基置换的基团或部分(例如，上述基团或部分中任一者)。例如，任选取代的烷基可为任选取代的甲基，其中所述甲基的氢原子由例如OH置换。作为另一实例，杂烷基或其二价配对物亚杂烷基上的取代基可置换碳上的氢或诸如N的杂原子上的氢。例如，基团-R-NH-R-中的氢原子可被烷酰胺取代基取代，例如-R-N[(CH2C(O)N(CH3)2]-R。
一般而言，任选存在的取代基为非干扰取代基。“非干扰取代基”是指如下取代基，其保留本文所述的缀合物(例如，式(1)、(2)、(D-I)-(D-XVII)或(M-I)-(M-XVII)中任一者的缀合物)结合于病毒gp41或gp120受体或者抑制HIV的增殖的能力。因此，在一些实施方案中，所述取代基可改变所述活性的程度。然而，只要所述缀合物保留结合于病毒gp41或gp120受体或者抑制HIV增殖的能力，所述取代基就将归类为“非干扰”。例如，非干扰取代基将保留所述化合物基于病毒斑块减少分析中10μM或更低的IC50值提供抗病毒功效的能力。因此，基于斑块减少或gp120受体抑制，所述取代基可改变抑制的程度。然而，只要本文所述的化合物(诸如式(A-I)的任何化合物)保留抑制gp120受体的能力，所述取代基就将归类为“非干扰”。用于测定病毒斑块减少或任何化合物抑制gp120受体的能力的多种分析在本领域中可获得且一些例示于下文实例中。
术语“杂”在用于描述化学基团或部分时是指具有至少一个非碳或氢的杂原子，例如N、O及S。若上述基团或部分中任一者含有至少一个杂原子，则其可称为杂。例如，杂环烷基、杂环烯基或杂环炔基是指具有一个或多个独立地选自例如N、O及S的杂原子的环烷基、环烯基或环炔基。杂环烯基的实例为马来酰亚胺基。例如，杂芳基是指具有一个或多个独立地选自例如N、O及S的杂原子的芳族基团。一个或多个杂原子也可包括于置换如本文所述的基团或部分中的氢原子的取代基中。例如，在任选取代的杂芳基中，若所述杂芳基中的一个氢原子被取代基(例如，甲基)置换，则所述取代基也可含有一个或多个杂原子(例如，甲醇)。
如本文所用，术语“酰基”是指具有如下结构的基团：
Figure BDA0003487201460002051
其中Rz为任选取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、烷芳基、烷氨基、杂烷基、杂烯基、杂炔基、杂环烷基、杂环烯基、杂环炔基、杂芳基、杂烷芳基或杂烷氨基。
如本文所用，术语“卤基”或“卤素”是指任何卤素原子，例如F、Cl、Br或I。若本文所述的基团或部分中任一者均含有至少一个卤素原子，则其可称为“卤基部分”，诸如卤烷基。
如本文所用，术语“羟基”表示-OH基团。
如本文所用，术语“氧代”是指具有结构＝O的取代基，其中在原子与氧原子之间存在双键。
如本文所用，术语“羰基”是指具有如下结构的基团：
Figure BDA0003487201460002052
如本文所用，术语“硫羰基”是指具有如下结构的基团：
Figure BDA0003487201460002053
如本文所用，术语“磷酸酯基”表示具有如下结构的基团：
Figure BDA0003487201460002054
如本文所用，术语“磷酰基”表示具有如下结构的基团：
Figure BDA0003487201460002061
Figure BDA0003487201460002062
如本文所用，术语“磺酰基”表示具有如下结构的基团：
Figure BDA0003487201460002063
如本文所用，术语“亚氨基”表示具有如下结构的基团：
Figure BDA0003487201460002064
其中R为任选取代基。
如本文所用，术语“N-保护基”表示在合成程序期间旨在保护氨基以抵御非所需反应的那些基团。通常使用的N-保护基公开于Greene,“Protective Groups in OrganicSynthesis,”第5版(John Wiley&Sons,New York,2014)中，其以引用的方式并入本文中。N-保护基包括例如酰基、芳酰基及氨甲酰基，诸如甲酰基、乙酰基、丙酰基、特戊酰基、叔丁基乙酰基、2-氯乙酰基、2-溴乙酰基、三氟乙酰基、三氯乙酰基、邻苯二甲酰基、邻硝基苯氧基乙酰基、α-氯丁酰基、苯甲酰基、羧基苯甲基(CBz)、4-氯苯甲酰基、4-溴苯甲酰基、4-硝基苯甲酰基，及手性助剂，诸如经保护或未经保护D、L或D,L-氨基酸残基，诸如丙氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸；含磺酰基的基团，诸如苯磺酰基及对甲苯磺酰基；氨基甲酸酯形成基团，诸如苯甲氧基羰基、对氯苯甲氧基羰基、对甲氧基苯甲氧基羰基、对硝基苯甲氧基羰基、2-硝基苯甲氧基羰基、对溴苯甲氧基羰基、3,4-二甲氧基苯甲氧基羰基、3,5-二甲氧基苯甲氧基羰基、2,4-二甲氧基苯甲氧基羰基、4-甲氧基苯甲氧基羰基、2-硝基-4,5-二甲氧基苯甲氧基羰基、3,4,5-三甲氧基苯甲氧基羰基、1-(对联苯基)-1-甲基乙氧基羰基、α,α-二甲基-3,5-二甲氧基苯甲氧基羰基、二苯甲基氧基羰基、叔丁基氧基羰基(BOC)、二异丙基甲氧基羰基、异丙氧基羰基、乙氧基羰基、甲氧基羰基、烯丙氧基羰基、2,2,2,-三氯乙氧基羰基、苯氧基羰基、4-硝基苯氧基羰基、芴基-9-甲氧基羰基(Fmoc)、环戊基氧基羰基、金刚烷基氧基羰基、环己基氧基羰基及苯基硫羰基；烷芳基，诸如苯甲基、三苯基甲基及苯甲氧基甲基；及甲硅烷基，诸如三甲基甲硅烷基。
如本文所用，术语“氨基酸”意谓天然存在的氨基酸及非天然存在的氨基酸。
如本文所用，术语“天然存在的氨基酸”意谓包括Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr及Val的氨基酸。
如本文所用，术语“非天然存在的氨基酸”意谓非天然产生或发现于哺乳动物中的α氨基酸。非天然存在的氨基酸的实例包括D-氨基酸；具有附接于半胱氨酸的硫原子的乙酰基氨基甲基的氨基酸；聚乙二醇化氨基酸；式NH2(CH2)nCOOH的ω氨基酸，其中n为2-6，中性非极性氨基酸，诸如肌氨酸、叔丁基丙氨酸、叔丁基甘氨酸、N-甲基异亮氨酸及正亮氨酸；氧基蛋氨酸；苯基甘氨酸；瓜氨酸；蛋氨酸亚砜；磺基丙氨酸；鸟氨酸；二氨基丁酸；3-氨基丙氨酸；3-羟基-D-脯氨酸；2,4-二氨基丁酸；2-氨基戊酸；2-氨基辛酸、2-羧基哌嗪；哌嗪-2-甲酸、2-氨基-4苯基丁酸；3-(2-萘基)丙氨酸，及羟基脯氨酸。其他氨基酸为α-氨基丁酸、α-氨基-α-甲基丁酸酯、胺基环丙烷-羧酸酯、胺基异丁酸、胺基降冰片基-羧酸酯、L-环己基丙氨酸、环戊基丙氨酸、L-N-甲基白氨酸、L-N-甲基甲硫氨酸、L-N-甲基正缬氨酸、L-N-甲基苯基丙氨酸、L-N-甲基脯氨酸、L-N-甲基丝氨酸、L-N-甲基色氨酸、D-鸟氨酸、L-N-甲基乙基甘氨酸、L-正白氨酸、α-甲基-氨基异丁酸酯、α-甲基环己基丙氨酸、D-α-甲基丙氨酸、D-α-甲基精胺酸、D-α-甲基天冬酰胺、D-α-甲基天冬氨酸、D-α-甲基半胱氨酸、D-α-甲基麸酰胺、D-α-甲基组氨酸、D-α-甲基异白氨酸、D-α-甲基白氨酸、D-α-甲基赖氨酸、D-α-甲基甲硫氨酸、D-α-甲基鸟氨酸、D-α-甲基苯丙氨酸、D-α-甲基脯氨酸、D-α-甲基丝氨酸、D-N-甲基丝氨酸、D-α-甲基酥氨酸、D-α-甲基色氨酸、D-α-甲基酪胺酸、D-α-甲基缬氨酸、D-N-甲基丙氨酸、D-N-甲基精胺酸、D-N-甲基天冬酰胺、D-N-甲基天冬氨酸、D-N-甲基半胱氨酸、D-N-甲基麸酰胺、D-N-甲基麸氨酸盐、D-N-甲基组氨酸、D-N-甲基异白氨酸、D-N-甲基白氨酸、D-N-甲基赖氨酸、N-甲基环己基丙氨酸、D-N-甲基鸟氨酸、N-甲基甘氨酸、N-甲基胺基异丁酸盐、N-(1-甲基丙基)甘氨酸、N-(2-甲基丙基)甘氨酸、D-N-甲基色氨酸、D-N-甲基酪胺酸、D-N-甲基缬氨酸、γ-氨基丁酸、L-叔丁基甘氨酸、L-乙基甘氨酸、L-高苯丙氨酸、L-α-甲基精胺酸、L-α-甲基天冬氨酸、L-α-甲基半胱氨酸、L-α-甲基麸酰胺、L-α-甲基组氨酸、L-α-甲基异白氨酸、L-α-甲基白氨酸、L-α-甲基甲硫氨酸、L-α-甲基正缬氨酸、L-α-甲基苯丙氨酸、L-α-甲基丝氨酸、L-α-甲基色氨酸、L-α-甲基缬氨酸、N-(N-(2,2-二苯基乙基)胺甲酰基甲基甘氨酸、1-羧基-1-(2,2-二苯基-乙基胺基)环丙烷、4-羟基脯氨酸、鸟氨酸、2-氨基苯甲酰基(邻胺基苯甲酰基)、D-环己基丙氨酸、4-苯基-苯丙氨酸、L-瓜氨酸、α-环己基甘氨酸、L-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-甲酸、L-噻唑烷-4-甲酸、L-高酪胺酸、L-2-呋喃基丙氨酸、L-组氨酸(3-甲基)、N-(3-胍基丙基)甘氨酸、O-甲基-L-酪胺酸、O-聚糖-丝氨酸、间-酪胺酸、正-酪胺酸、L-N,N′,N″-三甲基赖氨酸、高赖氨酸、正赖氨酸、N-聚糖天冬酰胺、7-羟基-1,2,3,4-四氢-4-氟苯丙氨酸、4-甲基苯丙氨酸、双-(2-吡啶甲基)胺、五氟苯丙氨酸、吲哚啉-2-甲酸、2-氨基苯甲酸、3-氨基-2-萘甲酸、不对称二甲基精胺酸、L-四氢异喹啉-1-甲酸、D-四氢异喹啉-1-甲酸、1-氨基-环己烷乙酸、D/L-烯丙基甘氨酸、4-氨基苯甲酸、1-氨基-环丁烷甲酸、2或3或4-氨基环己烷甲酸、1-氨基-1-环戊烷甲酸、1-氨基茚满-1-甲酸、4-氨基-吡咯烷-2-甲酸、2-氨基萘满-2-甲酸、氮杂环丁烷-3-甲酸、4-苯甲基-吡咯烷-2-甲酸、叔丁基甘氨酸、b-(苯并噻唑基-2-基)-丙氨酸、b-环丙基丙氨酸、5,5-二甲基-1,3-噻唑烷-4-甲酸、(2R,4S)4-羟基哌啶-2-甲酸、(2S,4S)及(2S,4R)-4-(2-萘基甲氧基)-吡咯烷-2-甲酸、(2S,4S)及(2S,4R)4-苯氧基-吡咯烷-2-甲酸、(2R,5S)及(2S,5R)-5-苯基-吡咯烷-2-甲酸、(2S,4S)-4-氨基-1-苯甲酰基-吡咯烷-2-甲酸、叔丁基丙氨酸、(2S,5R)-5-苯基-吡咯烷-2-甲酸、1-氨基甲基-环己烷-乙酸、3,5-双-(2-氨基)乙氧基-苯甲酸、3,5-二胺基-苯甲酸、2-甲基胺基-苯甲酸、N-甲基邻胺基苯甲酸、L-N-甲基丙氨酸、L-N-甲基精胺酸、L-N-甲基天冬酰胺、L-N-甲基天冬氨酸、L-N-甲基半胱氨酸、L-N-甲基麸酰胺、L-N-甲基麸氨酸、L-N-甲基组氨酸、L-N-甲基异白氨酸、L-N-甲基赖氨酸、L-N-甲基正白氨酸、L-N-甲基鸟氨酸、L-N-甲基酥氨酸、L-N-甲基酪胺酸、L-N-甲基缬氨酸、L-N-甲基-叔丁基甘氨酸、L-正缬氨酸、α-甲基-γ-氨基丁酸盐、4,4′-二苯基丙氨酸、α-甲基环戊基丙氨酸、α-甲基-α-萘基丙氨酸、α-甲基青霉胺、N-(4-氨基丁基)甘氨酸、N-(2-氨基乙基)甘氨酸、N-(3-氨基丙基)甘氨酸、N-氨基-α-甲基丁酸盐、α-萘基丙氨酸、N-苯甲基甘氨酸、N-(2-胺甲酰基乙基)甘氨酸、N-(胺甲酰基甲基)甘氨酸、N-(2-羧基乙基)甘氨酸、N-(羧基甲基)甘氨酸、N-环丁基甘氨酸、N-环癸基甘氨酸、N-环庚基甘氨酸、N-环己基甘氨酸、N-环癸基甘氨酸、N-环十二烷基甘氨酸、N-环辛基甘氨酸、N-环丙基甘氨酸、N-环十一烷基甘氨酸、N-(2,2-二苯基乙基)甘氨酸、N-(3,3-二苯基丙基)甘氨酸、N-(3-胍基丙基)甘氨酸、N-(1-羟基乙基)甘氨酸、N-(羟基乙基))甘氨酸、N-(咪唑基乙基))甘氨酸、N-(3-吲哚基乙基)甘氨酸、N-甲基-γ-氨基丁酸盐、D-N-甲基甲硫氨酸、N-甲基环戊基丙氨酸、D-N-甲基苯丙氨酸、D-N-甲基脯氨酸、D-N-甲基酥氨酸、N-(1-甲基乙基)甘氨酸、N-甲基-萘基丙氨酸、N-甲基青霉胺、N-(p-羟基苯基)甘氨酸、N-(硫甲基)甘氨酸、青霉胺、L-α-甲基丙氨酸、L-α-甲基天冬酰胺、L-α-甲基-叔丁基甘氨酸、L-甲基乙基甘氨酸、L-α-甲基麸氨酸盐、L-α-甲基高苯丙氨酸、N-(2-甲基硫乙基)甘氨酸、L-α-甲基赖氨酸、L-α-甲基正白氨酸、L-α-甲基鸟氨酸、L-α-甲基脯氨酸、L-α-甲基酥氨酸、L-α-甲基酪胺酸、L-N-甲基-高苯丙氨酸、N-(N-(3,3-二苯基丙基)胺甲酰基甲基甘氨酸、L-焦麸氨酸、D-焦麸氨酸、O-甲基-L-丝氨酸、O-甲基-L-高丝氨酸、5-羟基赖氨酸、α-羧基麸氨酸盐、苯基甘氨酸、L-哌可酸(高脯氨酸)、L-高白氨酸、L-赖氨酸(二甲基)、L-2-萘基丙氨酸、L-二甲基多巴或L-二甲氧基-苯丙氨酸、L-3-吡啶基丙氨酸、L-组氨酸(苯甲酰基氧基甲基)、N-环庚基甘氨酸、L-二苯丙氨酸、O-甲基-L-高酪胺酸、L-β-高赖氨酸、O-聚糖-酥氨酸、邻-酪胺酸、L-N,N′-二甲基赖氨酸、L-高精胺酸、新色氨酸、3-苯并噻吩基丙氨酸、异喹啉-3-甲酸、二胺基丙酸、高半胱氨酸、3,4-二甲氧基苯丙氨酸、4-氯苯丙氨酸、L-1,2,3,4-四氢去甲哈尔满-3-甲酸、金刚烷基丙氨酸、对称二甲基精胺酸、3-羧基硫代吗啉、D-1,2,3,4-四氢去甲哈尔满-3-甲酸、3-氨基苯甲酸、3-氨基-1-羧基甲基-吡啶-2-酮、1-氨基-1-环己烷甲酸、2-氨基环戊烷甲酸、1-氨基-1-环丙烷甲酸、2-氨基茚满-2-甲酸、4-氨基-四氢噻喃-4-甲酸、氮杂环丁烷-2-甲酸、b-(苯并噻唑-2-基)-丙氨酸、新戊基甘氨酸、2-羧基甲基哌啶、b-环丁基丙氨酸、烯丙基甘氨酸、二胺基丙酸、高-环己基丙氨酸、(2S,4R)-4-羟基哌啶-2-甲酸、八氢吲哚-2-甲酸、(2S,4R)及(2S,4R)-4-(2-萘基)、吡咯烷-2-甲酸、哌啶甲酸、(2S,4R)及(2S,4S)-4-(4-苯基苯甲基)吡咯烷-2-甲酸、(3S)-1-吡咯烷-3-甲酸、(2S,4S)-4-三苯甲基巯基-吡咯烷-2-甲酸、(2S,4S)-4-巯基脯氨酸、叔丁基甘氨酸、N,N-双(3-氨基丙基)甘氨酸、1-氨基-环己烷-1-甲酸、N-巯基乙基甘氨酸及硒并半胱氨酸。在一些实施方案中，氨基酸残基可为带电的或极性。带电氨基酸包括丙氨酸、赖氨酸、天冬氨酸或谷氨酸，或其非天然存在的类似物。极性氨基酸包括谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、丝氨酸、酥氨酸、酪氨酸、蛋氨酸或色氨酸，或其非天然存在的类似物。具体而言，预期在一些实施方案中，氨基酸中的末端氨基可为酰胺基或氨基甲酸酯基。
如本文所用，术语“百分比(％)同一性”是指候选序列(例如，Fc-IgG或其片段)中的氨基酸残基的百分率，所述氨基酸残基在比对所述序列且必要时引入间隙以实现最大百分比同一性之后与参考序列的氨基酸残基相同(即，可在所述候选及参考序列中的一或两者中引入间隙以进行最佳比对且出于比较目的可忽略非同源序列)。用于达成测定百分比同一性的目的的比对可以在此项技术的技能内的多种方式实现，例如使用公开可得的计算机软件，诸如BLAST、ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件。本领域技术人员可确定用于测量比对的适当参数，包括在所比较的序列的全长内实现最大比对所需的任何算法。在一些实施方案中，既定候选序列相对、与或针对既定参考序列的百分比氨基酸序列同一性(其或者可表述为具有或包括相对、与或针对既定参考序列的某一百分比氨基酸序列同一性的既定候选序列)计算如下：
100×(A/B的分数)
其中A是在候选序列与参考序列的比对中经评分为相同的氨基酸残基的数目，且其中B是参考序列中的氨基酸残基的总数。在其中候选序列的长度不等于参考序列的长度的一些实施方案中，候选序列与参考序列的百分比氨基酸序列同一性将不等于参考序列与候选序列的百分比氨基酸序列同一性。
当如上文所述针对最大对应进行比对时，若两个聚核苷酸或多肽序列中的核苷酸或氨基酸的序列相同，则所述两个序列被称为“相同”。两个序列之间的比较典型地通过在比较窗中比较所述序列来执行以鉴别且比较具有序列相似性的局部区。如本文所用，“比较窗”是指至少约15个邻近位置、约20个邻近位置、约25个邻近位置或更多(例如，约30个至约75个邻近位置或约40个至约50个邻近位置)的区段，其中在序列及相同数目的邻近位置的参考序列经最佳比对之后，所述两个序列可进行比较。
如本文所用，术语“治疗(treating)”或“以治疗(to treat)”是指受试者的病毒感染(例如病毒感染，诸如HIV感染)的治疗性治疗。在一些实施方案中，治疗性治疗可减慢病毒感染的进展、改良受试者的结果及/或消除所述感染。在一些实施方案中，受试者的病毒感染的治疗性治疗可缓解或改善与所述病毒感染相关的一种或多种症状或病状，削弱病毒程度，稳定(即，不恶化)病毒感染的状态，预防病毒感染的扩散，及/或延迟或减慢病毒感染的进展，如与所述治疗性治疗不存在下所述病毒感染的状态及/或病状相比。
如本文所用，术语“T的平均值”是指缀合于缀合物群体内的Fc结构域或白蛋白的gp120结合剂单体或gp120结合剂二聚体的平均数。在一些实施方案中，在缀合物群体内，缀合于Fc结构域单体的gp120结合剂单体或gp120结合剂二聚体的平均数可为1至20(例如，T的平均值为1至2、1至3、1至4、1至5、5至10、10至15或15至20)。在一些实施方案中，T的平均值为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20。
如本文所用，术语“受试者”可为人或非人类灵长类动物或者其他哺乳动物，诸如但不限于犬、猫、马、牛、猪、火鸡、山羊、鱼、猴、鸡、大鼠、小鼠或绵羊。
如本文所用，术语“治疗有效量”是指有效诱导受试者的所需效应或治疗具有本文所述的病状或病症(例如病毒感染，诸如HIV感染)的受试者的量，例如药物剂量。本文中也应了解，“治疗有效量”可解释为给出所需治疗及/或预防效应的量，以一个或多个剂量或以任何剂量或途径服用，及/或单独或与其他治疗剂(例如，本文素数的抗病毒剂)组合服用。例如，在施用用于治疗病毒感染的本文所述的缀合物(例如，式(1)、(2)、(D-I)-(D-XVII)或(M-I)-(M-XVII)中任一者的缀合物)的情况下，缀合物的治疗有效量为例如以下量，如与不施用所述缀合物时获得的反应相比，所述量足以预防、减慢或逆转病毒感染的进展。
如本文所用，术语“药物组合物”是指含有至少一种活性成分(例如，式(1)、(2)、(D-I)-(D-XVII)或(M-I)-(M-XVII)中任一者的缀合物)以及一种或多种赋形剂及稀释剂以使所述活性成分能够适用于施用方法的药用或药物调配物。本发明的药物组合物包括可与本文所述的缀合物(例如，式(1)、(2)、(D-I)-(D-XVII)或(M-I)-(M-XVII)中任一者的缀合物)相容的药学上可接受的组分。
如本文所用，术语“药学上可接受的载剂”是指药物组合物中的赋形剂或稀释剂。例如，药学上可接受的载剂可为能够悬浮或溶解活性缀合物(例如，式(1)、(2)、(D-I)-(D-XVII)或(M-I)-(M-XVII)中任一者的缀合物)的媒介物。药学上可接受的载剂必须可与所述调配物的其他成分相容且对接受者无害。在本发明中，药学上可接受的载剂必须向本文所述的缀合物提供适当药物稳定性。载剂的性质随施用方式变化。例如，关于经口施用，固体载剂为优选的；关于静脉内施用，一般使用水溶液载剂(例如，WFI及/或缓冲溶液)。
如本文所用，术语“药学上可接受的盐”表示本文所述的缀合物(例如，式(1)、(2)、(D-I)-(D-XVII)或(M-I)-(M-XVII)中任一者的缀合物)的盐，其在合理医学判断的范围内适用于本文所述的方法而无不当毒性、刺激及/或过敏性反应。药学上可接受的盐为本领域中熟知的。例如，药学上可接受的盐描述于以下中：Pharmaceutical Salts:Properties,Selection,and Use(编辑P.H.Stahl及C.G.Wermuth),Wiley-VCH,2008中。所述盐可在本文所述的缀合物的最终分离及纯化期间当场制备，或通过使游离碱基与合适有机酸反应而单独制备。
如本文所用，术语“gp120结合剂”是指结合于HIV gp120糖蛋白的部分，诸如小分子(例如，替米沙韦、BMS-818251、DMJ-II-121、BNM-IV-147或其类似物)。通过阻断病毒的gp120糖蛋白，gp120结合剂可防止病毒附着至宿主CD4+T细胞且进入宿主免疫细胞。本发明的Gp120结合剂包括由式(A-I)描述的化合物，优选替米沙韦、BMS-818251、DMJ-II-121、BNM-IV-147或其类似物。
如本文所用，术语“约”指示±5％的偏差。例如，约10％是指9.5％至10.5％。
以值的范围提供的任何值均包括上限及下限，及含于所述上限及下限内的任何值。
如本文所述，术语“(1)、(2)、(D-I)-(D-XVII)或(M-I)-(M-XVII)”表示(1)、(2)、(D-I)、(D-II)、(D-III)、(D-III-1)、(D-III-2)、(D-III-3)、(D-III-4)、(D-III-5)、(D-III-6)、(D-IV)、(D-IV-1)、(D-IV-2)、(D-IV-3)、(D-IV-4)、(D-IV-5)、(D-IV-6)、(D-V)、(D-V-1)、(D-V-2)、(D-V-3)、(D-V-4)、(D-V-5)、(D-V-6)、(D-VI)、(D-VI-1)、(D-VI-2)、(D-VI-3)、(D-VI-4)、(D-VI-5)、(D-VI-6)、(D-VII)、(D-VIII)、(D-VIII-1)、(D-IX)、(D-IX-1)、(D-X)、(D-X-1)、(D-XI)、(D-XI-1)、(D-XII)、(D-XII-1)、(D-XII-2)、(D-XIII)、(D-XIII-1)、(D-XIII-2)、(D-XIV)、(D-XIV-1)、(D-XIV-2)、(D-XIV-3)、(D-XIV-4)、(D-XIV-5)、(D-XV)、(D-XV-1)、(D-XV-2)、(D-XV-3)、(D-XV-4)、(D-XV-5)、(D-XVI)、(D-XVI-1)、(D-XVI-2)、(D-XVI-3)、(D-XVI-4)、(D-XVI-5)、(D-XV)、(D-XVII-1)、(D-XVII-2)、(D-XVII-3)、(D-XVII-4)、(D-XVII-5)、(M-I)、(M-II)、(M-III)、(M-III-1)、(M-III-2)、(M-III-3)、(M-III-4)、(M-III-5)、(M-III-6)、(M-IV)、(M-IV-1)、(M-IV-2)、(M-IV-3)、(M-IV-4)、(M-IV-5)、(M-IV-6)、(M-V)、(M-V-1)、(M-V-2)、(M-V-3)、(M-V-4)、(M-V-5)、(M-V-6)、(M-VI)、(M-VI-1)、(M-VI-2)、(M-VI-3)、(M-VI-4)、(M-VI-5)、(M-VI-6)、(M-VII)、(M-VIII)、(M-VIII-1)、(M-IX)、(M-IX-1)、(M-X)、(M-X-1)、(M-XI)或(M-XI-1)、(M-XII)、(M-XII-1)、(M-XII-2)、(M-XIII)、(M-XIII-1)、(M-XIII-2)、(M-XIV)、(M-XIV-1)、(M-XIV-2)、(M-XIV-3)、(M-XIV-4)、(M-XIV-5)、(M-XV)、(M-XV-1)、(M-XV-2)、(M-XV-3)、(M-XV-4)、(M-XV-5)、(M-XVI)、(M-XVI-1)、(M-XVI-2)、(M-XVI-3)、(M-XVI-4)、(M-XVI-5)、(M-XV)、(M-XVII-1)、(M-XVII-2)、(M-XVII-3)、(M-XVII-4)、(M-XVII-5)中任一者的式。
本文所述的缀合物的其他特征及优势将由具体实施方式及权利要求书显而易见。
附图说明
图1是描绘例如借助于接头使gp120受体抑制剂单体或二聚体缀合于Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽的例示性方法的图像。
图2是描绘例如借助于接头使gp120结合剂单体或二聚体缀合于Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽，通过肟缀合于氨基酸残基(例如，表面暴露赖氨酸的氮原子)的方法的图像。
图3是描绘例如借助于接头使gp120结合剂单体或二聚体缀合于Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽，通过硫醚缀合于氨基酸残基(例如，表面暴露赖氨酸的氮原子)的方法的图像。
图4是描绘例如借助于接头使gp120结合剂单体或二聚体缀合于Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽，通过再桥接半胱氨酸缀合，例如再桥接半胱氨酸缀合于Fc结构域单体或Fc结构域中的两个铰链半胱氨酸的一对硫原子的方法的图像。
图5显示由具有SEQ ID NO:1的序列的Fc结构域单体形成的Fc结构域的非还原及还原SDS-PAGE及示意图。
图6显示由具有SEQ ID NO:3的序列的Fc结构域单体形成的Fc结构域的非还原及还原SDS-PAGE及示意图。
图7显示由具有SEQ ID NO:5的序列的Fc结构域单体形成的Fc结构域的非还原及还原SDS-PAGE及示意图。
图8显示由具有SEQ ID NO:7的序列的Fc结构域单体形成的Fc结构域的非还原及还原SDS-PAGE及示意图。
图9显示由具有SEQ ID NO:9的序列的Fc结构域单体形成的Fc结构域的非还原及还原SDS-PAGE及示意图。
图10显示由具有SEQ ID NO:12的序列的Fc结构域单体形成的Fc结构域的非还原及还原SDS-PAGE及示意图。
图11显示由具有SEQ ID NO:14的序列的Fc结构域单体形成的Fc结构域的非还原及还原SDS-PAGE及示意图。
图12是显示含有gp120结合剂的缀合物与gp120蛋白的结合与多克隆山羊抗gp120HRP(PA1-73097,Invitrogen)阳性对照及未缀合Fc分子阴性对照相比的图表。
图13是显示在由Fc捕获测定的非人灵长类动物PK研究中的包括具有C220S突变的Fc结构域的缀合物(SEQ ID NO:64)(2mpk IV)的血浆水平与包括具有C220S突变及YTE三重突变的Fc结构域的缀合物(SEQ ID NO:67)(2mpk IV)相比的图表。此研究如实施例35所述来执行。
图14是描绘包括gp120结合剂单体或二聚体及Fc结构域单体或Fc结构域的例示性缀合物的图像。“T”代表药物抗体比率(DAR)，且描绘了多个单体或二聚体可缀合于Fc结构域单体或Fc结构域。
具体实施方式
本公开提供用于治疗病毒感染(例如，人类免疫缺陷病毒感染)的缀合物、组合物及方法。本文所公开的缀合物包括病毒gp120结合剂(例如，替米沙韦、BMS-818251、DMJ-II-121、BNM-IV-147或其类似物)的单体或二聚体，其缀合于Fc单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽。所述缀合物中的gp120结合剂(例如，替米沙韦、BMS-818251、DMJ-II-121、BNM-IV-147或其类似物)靶向在病毒粒子的表面上的gp120受体。所述缀合物中的Fc单体或Fc结构域结合于免疫细胞(例如，嗜中性粒细胞)上的FcγR(例如，FcRn、FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIc、FcγRIIIa及FcγRIIIb)以活化吞噬作用及效应子功能，诸如抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)，因此由免疫细胞吞没及破坏病毒粒子且进一步增强所述缀合物的抗病毒活性。所述白蛋白或白蛋白结合肽可例如通过使白蛋白缀合于再循环的新生儿Fc受体而延长所述缀合物的半衰期。所述组合物适用于抑制病毒生长的方法及治疗病毒感染(诸如由HIV-1及HIV-2引起的那些)的方法。
I.病毒感染
本文所述的化合物及药物组合物(例如，式(1)、(2)、(D-I)-(D-XVII)或(M-I)-(M-XVII)中任一者的缀合物)可用于治疗病毒感染(例如，HIV-1或HIV-2病毒感染)。
病毒感染是指病毒(例如，人类免疫缺陷病毒)在宿主生物体(例如，人受试者)中的致病性生长。病毒感染可为其中病毒群体的存在正在损害宿主身体的任何情形。因此，当受试者的身体中或身体上存在过量病毒群体时，或当病毒群体的存在正在损害所述受试者的细胞或其他组织时，所述受试者正在经受病毒感染。
人类免疫缺陷病毒(HIV)是两种慢病毒(逆转录病毒的亚群)，其会引起HIV感染并随着时间的推移引起获得性免疫缺陷综合征(AIDS)。艾滋病是人类的一种病状，其中免疫系统的进行性衰竭使危及生命的机会性感染及癌症得以滋长。如果不进行治疗，感染HIV后的平均存活时间估计为9至11年，具体取决于HIV亚型。在大多数情况下，HIV是一种性传播感染并通过接触或转移血液、射精前液、精液及阴道分泌物而发生。
两种类型的HIV表征为：HIV-1及HIV-2。HIV感染人体免疫系统中的重要细胞，诸如辅助性T细胞(特别是CD4+T细胞)、巨噬细胞及树突状细胞。HIV感染通过多种机制导致低水平的CD4+T细胞，包括流产感染的T细胞的焦亡、未感染的旁观者细胞的凋亡、感染细胞的直接病毒杀伤，以及识别感染细胞的CD8+细胞毒性淋巴细胞对感染的CD4+T细胞的杀伤。当CD4+T细胞数量下降到临界水平以下时，细胞介导的免疫力就会丧失，且身体逐渐变得更容易受到机会性感染，从而导致AIDS的发展。
II.本公开的缀合物
本文提供适用于治疗病毒感染(例如，HIV感染)的合成缀合物。本文所公开的缀合物包括缀合于一种或多种单体gp120结合剂或者一种或多种两种gp120结合剂的二聚体(例如，选自替米沙韦、BMS-818251、DMJ-II-121、BNM-IV-147或其类似物的gp120结合剂)的Fc结构域单体、Fc结构域或白蛋白。两种gp120结合剂的二聚体包括gp120结合剂(例如，式(A-I)或(A-II)的第一gp120结合剂)及第二gp120结合剂(例如，式(A-I)或(A-II)的第二病gp120结合剂)。所述第一及第二gp120结合剂借助于接头彼此连接。
不受理论束缚，在一些方面中，本文所述的缀合物经由所述缀合物中的gp120结合剂部分与病毒粒子的表面上的蛋白质之间的相互作用结合于所述病毒粒子的表面(例如，结合于在人类免疫缺陷病毒粒子的表面上的病毒gp120受体)。gp120结合剂会破坏gp120(一种与CD4受体结合的包膜糖蛋白)，尤其是在辅助性T细胞上。与CD4结合会引发gp120及gp41的一系列构象变化，导致病毒膜与宿主细胞膜融合，从而允许病毒扩散。
本发明缀合物包括缀合于Fc结构域、Fc单体或Fc结合肽的gp120结合剂单体及二聚体。本文所述的缀合物中的Fc结构域缀合于免疫细胞上的FcγR(例如，FcRn、FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIc、FcγRIIIa及FcγRIIIb)。本文所述的缀合物中的Fc结构域缀合于免疫细胞上的FcγR会活化吞噬作用及效应子功能，诸如抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)，因此由免疫细胞吞没及破坏病毒粒子且进一步增强所述缀合物的抗病毒活性。
本发明缀合物包括缀合于白蛋白或白蛋白结合肽的gp120结合剂单体及二聚体。所述白蛋白或白蛋白结合肽可例如通过使白蛋白缀合于再循环的新生儿Fc受体而延长所述缀合物的半衰期。
本文所提供的缀合物由式(1)、(2)、(D-I)-(D-XVII)或(M-I)-(M-XVII)中任一者描述。在一些实施方案中，本文所述的缀合物包括缀合于Fc结构域或白蛋白的gp120结合剂的一种或多种单体。在一些实施方案中，本文所述的缀合物包括缀合于Fc结构域单体、Fc结构域或白蛋白的gp120结合剂的一种或多种二聚体。在一些实施方案中，当n为2时，E(Fc结构域单体)二聚以形成Fc结构域。
本文所述的缀合物可使用所属领域中可获得的化学合成技术来合成。在无法获得用于缀合的官能团的情况下，分子可使用所属领域中熟知的常规化学合成技术衍生化。在一些实施方案中，本文所述的缀合物含有一个或多个手性中心。所述缀合物包括经分离立体异构体形式中任一者，以及具有变化的手性纯度程度的立体异构体的混合物，包括外消旋混合物。其也涵盖可形成的多种非对映异构体、对映异构体及互变异构体。
Gp120结合剂
本文所述的缀合物的组分为HIV gp120结合剂部分。gp120结合剂会破坏gp120(一种与CD4受体结合的包膜糖蛋白)，尤其是在辅助性T细胞上。与CD4结合会引发gp120及gp41的一系列构象变化，导致病毒膜与宿主细胞膜融合，从而允许病毒扩散。gp120结合剂的实例包括替米沙韦、BMS-818251、DMJ-II-121及BNM-IV-147。此外，替米沙韦、BMS-818251、DMJ-II-121及BNM-IV-147的衍生物(诸如文献中发现的那些)具有gp120结合剂活性且可用作本文化合物的gp120抑制剂部分(参见，例如，Lu等人Curr.Top.Med.Chem.16(10):1074-1090)。
本文所述的缀合物分为两种类型：(1)缀合于Fc结构域单体、Fc结构域或白蛋白的gp120结合剂的一种或多种二聚体及(2)缀合于Fc结构域单体、Fc结构域或白蛋白的gp120结合剂的一种或多种单体。gp120结合剂的二聚体借助于接头(诸如本文所述的接头)彼此连接。
本发明的病毒gp120结合剂包括替米沙韦、BMS-818251、DMJ-II-121、BNM-IV-147及其类似物，诸如式(A-I)及(A-II)的病毒gp120结合剂：
Figure BDA0003487201460002201
其中Q选自由以下组成的组：
Figure BDA0003487201460002202
Figure BDA0003487201460002203
及
Figure BDA0003487201460002204
S选自由以下组成的组：
Figure BDA0003487201460002205
Figure BDA0003487201460002206
及
Figure BDA0003487201460002207
R1、R2、R3各自独立地选自H、OH、卤素、腈、硝基、任选取代的氨基、任选取代的巯基、任选取代的羧基、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20烯基、任选取代的C3-C20环烯基、任选取代的C2-C20炔基、任选取代的C5-C20芳基、任选取代的C3-C15杂芳基及任选取代的C1-C20烷氧基；
R4选自任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C5-C15芳基、任选取代的C3-C15杂芳基及键；
R5选自H或任选取代的C1-C6烷基；
R6选自任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C5-C15芳基及任选取代的C3-C15杂芳基；
R7及Y各自独立地选自
Figure BDA0003487201460002221
每个R8独立地选自H、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C5-C15芳基及任选取代的C2-C15杂芳基；
每个R9独立地选自任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C5-C15芳基及任选取代的C2-C15杂芳基；
x为1或2；
k为0、1、2、3、4或5；
Ar选自由以下组成的组：任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C5-C15芳基及任选取代的C3-C15杂芳基。在以上的优选实施方案中，x为2。
优选地，所述gp120抑制剂选自替米沙韦、BMS-818251、DMJ-II-121或BNM-IV-147：
Figure BDA0003487201460002231
连接于Fc结构域或白蛋白的gp120结合剂的二聚体的缀合物
本文所述的缀合物包括共价连接于gp120结合剂的一种或多种二聚体的Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽及白蛋白或白蛋白结合肽。两种gp120结合剂的二聚体包括第一gp120结合剂(例如，式(A-I)或(A-II)的第一病毒gp120结合剂)及第二gp120结合剂(例如，式(A-I)或(A-II)的第二病毒gp120结合剂)。所述第一及第二gp120结合剂借助于接头(诸如本文所述的接头)彼此连接。在gp120结合剂的二聚体的一些实施方案中，所述第一及第二gp120结合剂为相同的。在一些实施方案中，所述第一及第二gp120结合剂为不同的。
在一些实施方案中，当T大于1(例如，T为2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)时，每个A1-L-A2可独立地经选择(例如，独立地选自本文所述的A1-L-A2结构中任一者)。在一些实施方案中，E可缀合于2、3、4、5、6、7、8、9、10个或更多个不同A1-L-A2部分。在一些实施方案中，E缀合于第一A1-L-A2部分及第二A1-L-A2部分。在一些实施方案中，第一A1-L-A2部分及第二A1-L-A2部分的A1及A2中的每一者独立地选自由式(A-I)及(A-II)描述的任何结构：
Figure BDA0003487201460002241
在以上的优选实施方案中，x为2。
在一些实施方案中，第一A1-L-A2部分特异性地缀合于E的赖氨酸残基(例如，E的表面暴露赖氨酸残基的氮原子)，且第二A1-L-A2部分特异性地缀合于E的半胱氨酸残基(例如，E的表面暴露半胱氨酸残基的硫原子)。在一些实施方案中，第一A1-L-A2部分特异性地缀合于E的半胱氨酸残基(例如，E的表面暴露半胱氨酸残基的硫原子)，且第二A1-L-A2部分特异性地缀合于E的赖氨酸残基(例如，E的表面暴露赖氨酸残基的氮原子)。
在一些实施方案中，本公开提供由以下各式描述的缀合物或其药学上可接受的盐：
Figure BDA0003487201460002242
Figure BDA0003487201460002251
Figure BDA0003487201460002261
Figure BDA0003487201460002271
Figure BDA0003487201460002281
Figure BDA0003487201460002291
Figure BDA0003487201460002301
Figure BDA0003487201460002311
Figure BDA0003487201460002321
Figure BDA0003487201460002331
Figure BDA0003487201460002341
Figure BDA0003487201460002351
Figure BDA0003487201460002361
Figure BDA0003487201460002371
Figure BDA0003487201460002381
Figure BDA0003487201460002391
Figure BDA0003487201460002401
Figure BDA0003487201460002411
Figure BDA0003487201460002421
Figure BDA0003487201460002431
Figure BDA0003487201460002441
Figure BDA0003487201460002451
Figure BDA0003487201460002461
Figure BDA0003487201460002471
Figure BDA0003487201460002481
Figure BDA0003487201460002491
Figure BDA0003487201460002501
Figure BDA0003487201460002511
Figure BDA0003487201460002521
Figure BDA0003487201460002531
Figure BDA0003487201460002541
Figure BDA0003487201460002551
Figure BDA0003487201460002561
Figure BDA0003487201460002571
或其药学上可接受的盐。
在本文所述的缀合物中，连接至E的波浪线指示gp120结合剂的一种或多种(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20种)二聚体可附接于Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽。在一些实施方案中，当n为1时，gp120结合剂的一种或多种(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10种)二聚体可附接于Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽。在一些实施方案中，当n为2时，gp120结合剂的一种或多种(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20种)二聚体可附接于Fc结构域。本文所述的缀合物中的波浪线不应解释为gp120结合剂的一种或多种二聚体与Fc结构域单体、Fc结构域或白蛋白中的原子之间的单键。在一些实施方案中，当T为1时，gp120结合剂的一种二聚体可附接于Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽中的原子。在一些实施方案中，当T为2时，gp120结合剂的两种二聚体可附接于Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽中的原子。
如本文进一步描述，本文所述的缀合物中的接头(例如，L或L’)可为分支链结构。如本文进一步描述，本文所述的缀合物中的接头(例如，L或L’)可为多价结构，例如分别具有两个或三个臂的二价或三价结构。在一些实施方案中，当所述接头具有三个臂时，所述臂中的两者可附接于第一及第二gp120结合剂且第三个臂可附接于Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽。
在如由以上各式表示的具有共价连接于gp120结合剂的一种或多种二聚体的Fc结构域的缀合物中，当n为2时，两种Fc结构域单体(每个Fc结构域单体由E表示)二聚以形成Fc结构域。
连接于Fc结构域单体、Fc结构域或白蛋白的gp120结合剂的单体的缀合物
在一些实施方案中，本文所述的缀合物包括共价连接于gp120结合剂的一种或多种单体的Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽。Fc结构域单体或白蛋白及gp120结合剂的一种或多种单体的缀合物可通过经由接头(诸如本文所述的任何接头)使所述Fc结构域单体、Fc结构域或白蛋白连接于gp120结合剂的各单体来形成。
在本文所述的具有共价连接于gp120结合剂的一种或多种单体的Fc结构域或白蛋白的缀合物中，连接至E的波浪线指示gp120结合剂的一种或多种(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20种)单体可附接于Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽。在一些实施方案中，当n为1时，gp120结合剂的一种或多种(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10种)单体可附接于Fc结构域单体、Fc结构域或白蛋白。在一些实施方案中，当n为2时，gp120结合剂的一种或多种(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20种)单体可附接于Fc结构域。本文所述的缀合物中的波浪线不应解释为gp120结合剂的一种或多种单体与Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽中的原子之间的单键。在一些实施方案中，当T为1时，gp120结合剂的一种单体可附接于Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽中的原子。在一些实施方案中，当T为2时，gp120结合剂的两种单体可附接于Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽中的原子。
在一些实施方案中，当T大于1(例如，T为2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)时，每个A1-L可独立地经选择(例如，独立地选自本文所述的A1-L结构中任一者)。在一些实施方案中，E可缀合于2、3、4、5、6、7、8、9、10个或10个以上不同A1-L部分。在一些实施方案中，E缀合于第一A1-L部分及第二A1-L部分。在一些实施方案中，第一Al-L部分及第二Al-L部分中的每一者的A1独立地选自由式(A-I)或(A-II)描述的任何结构：
Figure BDA0003487201460002601
在优选实施方案中，x为2。
在一些实施方案中，第一A1-L部分特异性地缀合于E的赖氨酸残基(例如，E的表面暴露赖氨酸残基的氮原子)，且第二A1-L部分特异性地缀合于E的半胱氨酸残基(例如，E的表面暴露半胱氨酸残基的硫原子)。在一些实施方案中，第一A1-L部分特异性地缀合于E的半胱氨酸残基(例如，E的表面暴露半胱氨酸残基的硫原子)，且第二A1-L部分特异性地缀合于E的赖氨酸残基(例如，E的表面暴露赖氨酸残基的氮原子)。
如本文进一步描述，本文所述的具有共价连接于gp120结合剂的一种或多种单体的Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽的缀合物中的接头(例如，L或L’)可为具有两个臂的二价结构。二价接头中的一个臂可附接于gp120结合剂的单体且另一臂可附接于Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽。
在一些实施方案中，本文所提供的含有共价连接于gp120结合剂的一种或多种单体的Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽的缀合物是由以下各式中任一者描述：
Figure BDA0003487201460002602
Figure BDA0003487201460002611
Figure BDA0003487201460002621
Figure BDA0003487201460002631
Figure BDA0003487201460002641
Figure BDA0003487201460002651
Figure BDA0003487201460002661
Figure BDA0003487201460002671
Figure BDA0003487201460002681
Figure BDA0003487201460002691
Figure BDA0003487201460002701
Figure BDA0003487201460002711
Figure BDA0003487201460002721
Figure BDA0003487201460002731
Figure BDA0003487201460002741
Figure BDA0003487201460002751
Figure BDA0003487201460002761
Figure BDA0003487201460002771
Figure BDA0003487201460002781
Figure BDA0003487201460002791
Figure BDA0003487201460002801
Figure BDA0003487201460002811
Figure BDA0003487201460002821
Figure BDA0003487201460002831
Figure BDA0003487201460002841
Figure BDA0003487201460002851
Figure BDA0003487201460002861
Figure BDA0003487201460002871
Figure BDA0003487201460002881
Figure BDA0003487201460002891
Figure BDA0003487201460002901
Figure BDA0003487201460002911
Figure BDA0003487201460002921
Figure BDA0003487201460002931
或其药学上可接受的盐。
在如由以上各式表示的具有共价连接于gp120结合剂的一种或多种单体的Fc结构域的缀合物中，当n为2时，两种Fc结构域单体(每个Fc结构域单体由E表示)二聚以形成Fc结构域。
III.Fc结构域单体及Fc结构域
Fc结构域单体包括铰链结构域、CH2抗体恒定结构域及CH3抗体恒定结构域。所述Fc结构域单体可具有免疫球蛋白抗体同型IgG、IgE、IgM、IgA或IgD。所述Fc结构域单体也可具有任何免疫球蛋白抗体同型(例如，IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3或IgG4)。所述Fc结构域单体可具有任何免疫球蛋白抗体同种异型(例如，IGHG1*01(即，G1m(za))、IGHG1*07(即，G1m(zax))、IGHG1*04(即，G1m(zav))、IGHG1*03(G1m(f))、IGHG1*08(即，G1m(fa))、IGHG2*01、IGHG2*06、IGHG2*02、IGHG3*01、IGHG3*05、IGHG3*10、IGHG3*04、IGHG3*09、IGHG3*11、IGHG3*12、IGHG3*06、IGHG3*07、IGHG3*08、IGHG3*13、IGHG3*03、IGHG3*14、IGHG3*15、IGHG3*16、IGHG3*17、IGHG3*18、IGHG3*19、IGHG2*04、IGHG4*01、IGHG4*03或IGHG4*02)(如描述于例如Vidarsson等人IgG subclasses and allotypes:from structure toeffector function.Frontiers in Immunology.5(520):1-17(2014)中)。所述Fc结构域单体也可属任何物种，例如人、鼠科动物或小鼠。Fc结构域单体的二聚体系可结合于Fc受体的Fc结构域，所述Fc受体系位于白细胞表面上的受体。
在一些实施方案中，本文所述的缀合物中的Fc结构域单体可相对于具有SEQ IDNO:1-95中任一者的序列的Fc结构域单体含有一种或多种氨基酸取代、添加及/或缺失。在一些实施方案中，如本文所述的缀合物中的Fc结构域单体中的Asn可由Ala置换以便预防N连接的糖基化(参见例如SEQ ID NO:12-15，其中Asn至Ala取代用*标记)。在一些实施方案中，本文所述的缀合物中的Fc结构域单体也可含有额外Cys添加(参见例如SEQ ID NO:9、10及11，其中Cys添加用*标记)。
在一些实施方案中，如本文所述的缀合物中的Fc结构域单体包括附接至Fc结构域单体的N端或C端的额外部分，例如白蛋白结合肽、纯化肽(例如，六组氨酸肽HHHHHH(SEQ IDNO:99))或信号序列(例如，IL2信号序列MYRMQLLSCIALSLALVTNS(SEQ ID NO:100))。在一些实施方案中，所述缀合物中的Fc结构域单体不含任何类型的抗体可变区，例如VH、VL、互补决定区(CDR)或高变区(HVR)。
在一些实施方案中，如本文所述的缀合物中的Fc结构域单体可具有与下文所示的SEQ ID NO:1-95中任一者的序列至少95％同一性(例如，97％、99％或99.5％同一性)的序列。在一些实施方案中，如本文所述的缀合物中的Fc结构域单体可具有下文所示的SEQ IDNO:1-95中任一者的序列。
SEQ ID NO:1：N端(粗体)具有IL2信号序列的鼠科动物Fc-IgG2a
Figure BDA0003487201460002951
SEQ ID NO:2：成熟鼠科动物Fc-IgG2a
PRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK
SEQ ID NO:3：N端(粗体)具有IL2信号序列且添加有N端MVRS氨基酸残基(加下划线)的人Fc-IgG1
Figure BDA0003487201460002961
SEQ ID NO:4：添加有N端MVRS氨基酸残基(加下划线)的成熟人Fc-IgG1
MVRSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:5：N端具有IL2信号序列(粗体)且C端具有六组氨酸肽(斜体)的鼠科动物Fc-IgG2a
Figure BDA0003487201460002962
SEQ ID NO:6：C端具有六组氨酸肽(斜体)的成熟鼠科动物Fc-IgG2a
Figure BDA0003487201460002971
SEQ ID NO:7：N端具有IL2信号序列(粗体)、添加有N端MVRS氨基酸残基(加下划线)且C端具有六组氨酸肽(斜体)的人Fc-IgG1
Figure BDA0003487201460002972
SEQ ID NO:8：C端具有六组氨酸肽(斜体)且添加有N端MVRS氨基酸残基(加下划线)的成熟人Fc-IgG1
Figure BDA0003487201460002973
SEQ ID NO:9：N端具有IL2信号序列(粗体)、添加有N端MVRS氨基酸残基(加下划线)、铰链区中具有两个额外半胱氨酸(*)且C端具有六组氨酸肽(斜体)的人Fc-IgG1
Figure BDA0003487201460002981
SEQ ID NO:10：添加有N端MVRS氨基酸残基(加下划线)、铰链区中具有两个额外半胱氨酸(*)且C端具有六组氨酸肽(斜体)的成熟人Fc-IgG1
Figure BDA0003487201460002982
SEQ ID NO:11：添加有N端MVRS氨基酸残基(加下划线)且铰链区中具有两个额外半胱氨酸(*)的成熟人Fc-IgG1
MVRSDKTHTCPPCPPC*KC*PAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:12：N端具有IL2信号序列(粗体)、具有Asn至Ala取代(*)且C端具有六组氨酸肽(斜体)的鼠科动物Fc-IgG2a
Figure BDA0003487201460002991
SEQ ID NO:13：具有Asn至Ala取代(*)且C端具有六组氨酸肽(斜体)的成熟鼠科动物Fc-IgG2a
Figure BDA0003487201460002992
SEQ ID NO:14：N端具有IL2信号序列(粗体)、添加有N端MVRS氨基酸残基(加下划线)、具有Asn至Ala取代(*)且C端具有六组氨酸肽(斜体)的人Fc-IgG1
Figure BDA0003487201460002993
SEQ ID NO:15：具有Asn至Ala取代(*)、添加有N端MVRS氨基酸残基(加下划线)且C端具有六组氨酸肽(斜体)的成熟人Fc-IgG1
Figure BDA0003487201460003001
SEQ ID NO:16：N端具有人血清白蛋白信号序列(粗体)且添加有N端ISAMVRS氨基酸残基(加下划线)的人IgG1 Fc
Figure BDA0003487201460003002
SEQ ID NO:17：N端具有人血清白蛋白信号序列(粗体)、添加有N端ISAMVRS氨基酸残基(加下划线)、具有C端G4S接头(斜体)且具有C端c-Myc标签(加下划线、斜体)的人IgG1Fc
Figure BDA0003487201460003003
SEQ ID NO:18：添加有N端ISAMVRS氨基酸残基(加下划线)、具有C端G4S接头(斜体)且具有C端c-Myc标签(加下划线、斜体)的成熟人IgG1 Fc
Figure BDA0003487201460003011
SEQ ID NO:19：具有人血清白蛋白信号序列(粗体)、添加有N端ISAMVRS氨基酸残基(加下划线)且具有赖氨酸至丝氨酸修饰(*)以预防此位点处的赖氨酸缀合的人IgG1 Fc
Figure BDA0003487201460003012
SEQ ID NO:20：添加有N端ISAMVRS氨基酸残基(加下划线)且具有赖氨酸至丝氨酸修饰(*)以预防此位点处的赖氨酸缀合的成熟人IgG1 Fc
ISAMVRSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPS*DTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:21：N端具有人血清白蛋白信号序列(粗体)、添加有N端ISAMVRS氨基酸残基(加下划线)、具有赖氨酸至丝氨酸修饰(*)以预防此位点处的赖氨酸缀合、具有C端G4S接头(斜体)且具有C端C-Myc标签(加下划线、斜体)的人IgG1 Fc
Figure BDA0003487201460003021
SEQ ID NO:22：添加有N端ISAMVRS氨基酸残基(加下划线)、具有赖氨酸至丝氨酸修饰(*)以预防此位点处的赖氨酸缀合、具有C端G4S接头(斜体)且具有C端C-Myc标签(加下划线、斜体)的成熟人IgG1 Fc
Figure BDA0003487201460003022
SEQ ID NO:23：N端具有人血清白蛋白信号序列(粗体)、添加有N端ISAMVRS氨基酸残基(加下划线)、具有Asn至Ala取代(*)、具有C端G4S接头(斜体)且具有C端C-myc标签(加下划线、斜体)的人IgG1 Fc
Figure BDA0003487201460003023
Figure BDA0003487201460003031
SEQ ID NO:24：添加有N端ISAMVRS氨基酸残基(加下划线)、具有Asn至Ala取代(*)、具有C端G4S接头(斜体)且具有C端C-myc标签(加下划线、斜体)的成熟人IgG1 Fc
Figure BDA0003487201460003032
SEQ ID NO:25：N端具有人血清白蛋白信号序列(粗体)、添加有N端ISAMVRS氨基酸残基(加下划线)、具有H310A(*)及H435A(*)突变以妨碍FcRn结合、具有C端G4S(斜体)且具有C端C-myc标签(加下划线、斜体)的人IgG1 Fc
Figure BDA0003487201460003033
SEQ ID NO:26：N端具有人血清白蛋白信号序列(粗体)、添加有N端ISAMVRS氨基酸残基(加下划线)、具有H310A(*)及H435A(*)突变以妨碍FcRn结合、具有C端G4S(斜体)且具有C端C-myc标签(加下划线、斜体)的成熟人IgG1 Fc
Figure BDA0003487201460003041
SEQ ID NO:27：N端具有人血清白蛋白信号序列(粗体)、添加有N端ISAMVRS氨基酸残基(加下划线)、具有C端G4S接头(斜体)且具有C端突变型(赖氨酸至苯丙氨酸，粗体)C-myc标签(加下划线、斜体)的人IgG1 Fc
Figure BDA0003487201460003042
SEQ ID NO:28：添加有N端ISAMVRS氨基酸残基(加下划线)、具有C端G4S接头(斜体)且具有C端突变型(赖氨酸至苯丙氨酸，粗体)C-myc标签(加下划线、斜体)的成熟人IgG1Fc
Figure BDA0003487201460003043
SEQ ID NO:29：N端具有人血清白蛋白信号序列(粗体)、添加有N端ISAMVRS氨基酸残基(加下划线)、具有Asn至Ala取代(*)、具有C端G4S接头(斜体)且具有C端突变型(赖氨酸至苯丙氨酸，粗体)C-myc标签(加下划线、斜体)的人IgG1 Fc
Figure BDA0003487201460003051
SEQ ID NO:30：添加有N端MVRS氨基酸残基(加下划线)、具有Asn至Ala取代(*)、具有C端G4S接头(斜体)且具有C端突变型(赖氨酸至苯丙氨酸，粗体)C-myc标签(加下划线、斜体)的成熟人IgG1 Fc
Figure BDA0003487201460003052
SEQ ID NO:31：N端具有人血清白蛋白信号序列(粗体)、具有同种异型G1m(fa)(粗斜体)、具有C端G4S接头(斜体)且具有C端突变型(赖氨酸至苯丙氨酸，粗体)C-myc标签(加下划线)的人IgG1 Fc
Figure BDA0003487201460003053
Figure BDA0003487201460003061
SEQ ID NO:32：N端具有人血清白蛋白信号序列(粗体)、具有同种异型G1m(fa)(粗斜体)的人IgG1 Fc
Figure BDA0003487201460003062
SEQ ID NO:33：具有YTE三重突变(粗体及加下划线)且添加有N端MVRS氨基酸残基(加下划线)的成熟人IgG1 Fc
Figure BDA0003487201460003063
SEQ ID NO:34：N端具有人血清白蛋白信号序列(粗体)、含有在成熟人IgG1 Fc的N端构成全铰链区的残基EPKSS(加下划线)、具有Cys至Ser取代(#)、具有同种异型G1m(fa)(粗斜体)的人IgG1 Fc
Figure BDA0003487201460003064
Figure BDA0003487201460003071
SEQ ID NO:35：N端具有鼠科动物IgG信号序列(粗体)、自成熟人IgG1 Fc的N端移除EPKSSD铰链残基、具有同种异型G1m(fa)(粗斜体)的人IgG1 Fc
Figure BDA0003487201460003072
SEQ ID NO:36：具有YTE三重突变(粗体及加下划线)、自成熟人IgG1 Fc的N端移除EPKSSD铰链残基、具有同种异型G1m(fa)(粗斜体)的成熟人IgG1 Fc
Figure BDA0003487201460003073
SEQ ID NO:37：具有LS双重突变(粗体及加下划线)、自成熟人IgG1 Fc的N端移除EPKSSD铰链残基、具有同种异型G1m(fa)(粗斜体)的成熟人IgG1 Fc
Figure BDA0003487201460003074
Figure BDA0003487201460003081
Figure BDA0003487201460003082
SEQ ID NO:38：N端具有人血清白蛋白信号序列(粗体)、具有YTE三重突变(粗体及加下划线)、具有同种异型G1m(fa)(粗斜体)、具有C端G4S接头(斜体)且具有C端C-myc标签(加下划线)的成熟人IgG1 Fc
Figure BDA0003487201460003083
SEQ ID NO:39：成熟人Fc IgG1，其中X1为Met或Trp，X2为Ser或Thr，X3为Thr或Glu，X4为Asp或Glu，且X5为Leu或Met，X6为Met或Leu，且X7为Asn或Ser
DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLX1IX2RX3PEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRX4EX5TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVX6HEALHX7HYTQKSLSLSPG
SEQ ID NO:40：成熟人Fc IgG1，其中X4为Asp或Glu，且X5为Leu或Met
DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRX4EX5TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
SEQ ID NO:41：具有YTE三重突变(粗体及加下划线)的成熟人Fc IgG1，且其中X4为Asp或Glu，且X5为Leu或Met
Figure BDA0003487201460003091
SEQ ID NO:42：具有YTE三重突变(粗体及加下划线)、具有同种异型G1m(fa)(粗斜体)的成熟人Fc IgG1
Figure BDA0003487201460003092
SEQ ID NO:43：具有YTE三重突变(粗体及加下划线)、具有同种异型G1m(f)(粗斜体)的成熟人Fc IgG1
Figure BDA0003487201460003093
Figure BDA0003487201460003101
SEQ ID NO:44：具有LS双重突变(粗体及加下划线)的成熟人Fc IgG1，且其中X4为Asp或Glu，且X5为Leu或Met
Figure BDA0003487201460003102
SEQ ID NO:45：具有LS双重突变(粗体及加下划线)、具有同种异型G1m(fa)(粗斜体)的成熟人Fc IgG1
Figure BDA0003487201460003103
SEQ ID NO:46：具有LS双重突变(粗体及加下划线)、具有同种异型G1m(f)(粗斜体)的成熟人Fc IgG1
Figure BDA0003487201460003104
Figure BDA0003487201460003111
SEQ ID NO:47：具有小鼠重链MIgG Vh信号序列(粗体)、具有Asp缺失([D])、具有Cys至Ser取代(#)的成熟人Fc IgG1，且其中X1为Met或Trp，X2为Ser或Thr，X3为Thr或Glu，X4为Asp或Glu，且X5为Leu或Met，X6为Met或Leu，且X7为Asn或Ser
Figure BDA0003487201460003112
SEQ ID NO:48：具有小鼠重链MIgG Vh信号序列(粗体)、具有Cys至Ser取代(#)、具有同种异型G1m(fa)(粗斜体)的成熟人IgG1 Fc
Figure BDA0003487201460003113
SEQ ID NO:49：具有小鼠重链MIgG Vh信号序列(粗体)、具有Cys至Ser取代(#)、具有同种异型G1m(f)(粗斜体)的成熟人IgG1 Fc
Figure BDA0003487201460003114
Figure BDA0003487201460003121
SEQ ID NO:50：具有小鼠重链MIgG Vh信号序列(粗体)、具有Cys至Ser取代(#)、具有M428L、N434S突变(粗体/加下划线)、具有同种异型G1m(fa)(粗斜体)的成熟人IgG1 Fc
Figure BDA0003487201460003122
SEQ ID NO:51：具有小鼠重链MIgG Vh信号序列(粗体)、具有Cys至Ser取代(#)、具有M428L、N434S突变(粗体/加下划线)、具有同种异型G1m(f)(粗斜体)的成熟人IgG1 Fc
Figure BDA0003487201460003123
SEQ ID NO:52：具有小鼠重链MIgG Vh信号序列(粗体)、具有Cys至Ser取代(#)、具有YTE三重突变(粗体及加下划线)、具有同种异型G1m(fa)(粗斜体)的成熟人IgG1 Fc
Figure BDA0003487201460003131
SEQ ID NO:53：具有小鼠重链MIgG Vh信号序列(粗体)、具有Cys至Ser取代(#)、具有YTE三重突变(粗体及加下划线)、具有同种异型G1m(f)(粗斜体)的成熟人IgG1 Fc
Figure BDA0003487201460003132
SEQ ID NO:54：具有小鼠重链MIgG Vh信号序列(粗体)、添加有N端ISAMVRS氨基酸残基(斜体)、具有M428L、N434S突变(粗体/加下划线)、具有G4S接头(斜体)且具有C端C-myc-标签(加下划线)、具有同种异型G1m(f)(粗斜体)的成熟人IgG1 Fc
Figure BDA0003487201460003133
Figure BDA0003487201460003141
SEQ ID NO:55：具有小鼠重链MIgG Vh信号序列(粗体)、添加有N端ISAMVRS氨基酸残基(斜体)、具有M428L、N434S突变(粗体/加下划线)、具有G4S接头(斜体)、具有C端C-myc-标签(加下划线)、具有同种异型G1m(fa)(粗斜体)的成熟人IgG1 Fc
Figure BDA0003487201460003142
SEQ ID NO:56：具有小鼠重链MIgG Vh信号序列(粗体)、添加有N端ISAMVRS氨基酸残基(斜体)、具有YTE三重突变(粗体/加下划线)、具有G4S接头(斜体)且具有C端C-myc-标签(加下划线)、具有同种异型G1m(f)(粗斜体)的成熟人IgG1 Fc
Figure BDA0003487201460003143
SEQ ID NO:57：具有小鼠重链MIgG Vh信号序列(粗体)、添加有N端ISAMVRS氨基酸残基(斜体)、具有YTE三重突变体(粗体/加下划线)、具有G4S接头(斜体)、具有C端C-myc-标签(加下划线)、具有同种异型G1m(fa)(粗斜体)的成熟人IgG1 Fc
Figure BDA0003487201460003151
SEQ ID NO:58：具有小鼠重链MIgG1信号序列(粗体)、具有Cys至Ser取代(#)、具有C端G4S(斜体)且具有C端IgA肽(加下划线)、具有同种异型G1m(fa)(粗斜体)的成熟人IgG1
Figure BDA0003487201460003152
SEQ ID NO:59：具有小鼠重链MIgG1信号序列(粗体)、具有Cys至Ser取代(#)、具有M428L、N434S突变(粗体/加下划线)、具有C端G4S(斜体)且具有C端IgA肽(加下划线)、具有同种异型G1m(fa)(粗斜体)的成熟人IgG1
Figure BDA0003487201460003153
Figure BDA0003487201460003161
SEQ ID NO:60：成熟人Fc IgG1，Z1为Cys或Ser，且其中X1为Met或Trp，X2为Ser或Thr，X3为Thr或Glu，X4为Asp或Glu，且X5为Leu或Met，X6为Met或Leu，且X7为Asn或Ser
NVNHKPSNTKVDKKVEPKSZ1DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLX1IX2RX3PEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRX4EX5TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVX6HEALHX7HYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:61：成熟人Fc IgG1，Cys至Ser取代(#)，且其中X1为Met或Trp，X2为Ser或Thr，X3为Thr或Glu，X4为Asp或Glu，且X5为Leu或Met，X6为Met或Leu，且X7为Asn或Ser
NVNHKPSNTKVDKKVEPKSS(#)DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLX1IX2RX3PEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRX4EX5TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVX6HEALHX7HYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:62：成熟人IgG1 Fc，Cys至Ser取代(#)，X4为Asp或Glu，且X5为Leu或Met
NVNHKPSNTKVDKKVEPKSS(#)DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRX4EX5TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:63：成熟人IgG1 Fc，Cys至Ser取代(#)、同种异型G1m(f)(粗斜体)
Figure BDA0003487201460003171
SEQ ID NO:64：成熟人IgG1 Fc，Cys至Ser取代(#)、同种异型G1m(fa)(粗斜体)
Figure BDA0003487201460003172
SEQ ID NO:65：成熟人IgG1 Fc，Cys至Ser取代(#)、M428L、N434S突变(粗体/加下划线)、同种异型G1m(fa)(粗斜体)
Figure BDA0003487201460003173
SEQ ID NO:66：成熟人IgG1 Fc，Cys至Ser取代(#)、M428L、N434S突变(粗体/加下划线)、同种异型G1m(f)(粗斜体)
Figure BDA0003487201460003181
SEQ ID NO:67：成熟人IgG1 Fc，Cys至Ser取代(#)、YTE三重突变(粗体及加下划线)、同种异型G1m(fa)(粗斜体)
Figure BDA0003487201460003182
SEQ ID NO:68：成熟人IgG1 Fc，Cys至Ser取代(#)、YTE三重突变(粗体及加下划线)、同种异型G1m(f)(粗斜体)
Figure BDA0003487201460003183
SEQ ID NO:69：成熟人Fc IgG1，Z1为Cys或Ser，且其中X1为Met或Trp，X2为Ser或Thr，X3为Thr或Glu，X4为Asp或Glu，且X5为Leu或Met，X6为Met或Leu，且X7为Asn或Ser
NVNHKPSNTKVDKKVEPKSZ1DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLX1IX2RX3PEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRX4EX5TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVX6HEALHX7HYTQKSLSLSPG
SEQ ID NO:70：成熟人Fc IgG1，Cys至Ser取代(#)，且其中X1为Met或Trp，X2为Ser或Thr，X3为Thr或Glu，X4为Asp或Glu，且X5为Leu或Met，X6为Met或Leu，且X7为Asn或Ser
NVNHKPSNTKVDKKVEPKSS(#)DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLX1IX2RX3PEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRX4EX5TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVX6HEALHX7HYTQKSLSLSPG
SEQ ID NO:71：成熟人IgG1 Fc，Cys至Ser取代(#)，X4为Asp或Glu，且X5为Leu或Met
NVNHKPSNTKVDKKVEPKSS(#)DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRX4EX5TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
SEQ ID NO:72：成熟人IgG1 Fc，Cys至Ser取代(#)、同种异型G1m(f)(粗斜体)
Figure BDA0003487201460003191
Figure BDA0003487201460003201
SEQ ID NO:73：成熟人IgG1 Fc，Cys至Ser取代(#)、同种异型G1m(fa)(粗斜体)
Figure BDA0003487201460003202
SEQ ID NO:74：成熟人IgG1 Fc，Cys至Ser取代(#)、M428L、N434S突变(粗体/加下划线)、同种异型G1m(fa)(粗斜体)
Figure BDA0003487201460003203
SEQ ID NO:75：成熟人IgG1 Fc，Cys至Ser取代(#)、M428L、N434S突变(粗体/加下划线)、同种异型G1m(f)(粗斜体)
Figure BDA0003487201460003204
Figure BDA0003487201460003211
SEQ ID NO: 76：成熟人IgG1 Fc，Cys至Ser取代(#)、YTE三重突变(粗体及加下划线)、同种异型G1m(fa)(粗斜体)
Figure BDA0003487201460003212
SEQ ID NO:77：成熟人IgG1 Fc，Cys至Ser取代(#)、YTE三重突变(粗体及加下划线)、同种异型G1m(f)(粗斜体)
Figure BDA0003487201460003213
SEQ ID NO: 78：成熟人Fc IgG1，Z1为Cys或Ser，且其中X1为Met或Trp，X2为Ser或Thr，X3为Thr或Glu，X4为Asp或Glu，且X5为Leu或Met，X6为Met或Leu，且X7为Asn或Ser
VNHKPSNTKVDKKVEPKSZ1DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLX1IX2RX3PEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRX4EX5TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVX6HEALHX7HYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:79：成熟人Fc IgG1，Cys至Ser取代(#)，且其中X1为Met或Trp，X2为Ser或Thr，X3为Thr或Glu，X4为Asp或Glu，且X5为Leu或Met，X6为Met或Leu，且X7为Asn或Ser
VNHKPSNTKVDKKVEPKSS(#)DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLX1IX2RX3PEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRX4EX5TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVX6HEALHX7HYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:80：成熟人IgG1 Fc，Cys至Ser取代(#)，X4为Asp或Glu，且X5为Leu或Met
VNHKPSNTKVDKKVEPKSS(#)DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRX4EX5TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO: 81：成熟人IgG1 Fc，Cys至Ser取代(#)、同种异型G1m(f)(粗斜体)
Figure BDA0003487201460003221
Figure BDA0003487201460003231
SEQ ID NO:82：成熟人IgG1 Fc，Cys至Ser取代(#)、同种异型G1m(fa)(粗斜体)
Figure BDA0003487201460003232
SEQ ID NO:83：成熟人IgG1 Fc，Cys至Ser取代(#)、M428L、N434S突变(粗体/加下划线)、同种异型G1m(fa)(粗斜体)
Figure BDA0003487201460003233
SEQ ID NO:84：成熟人IgG1 Fc，Cys至Ser取代(#)、M428L、N434S突变(粗体/加下划线)、同种异型G1m(f)(粗斜体)
Figure BDA0003487201460003234
SEQ ID NO:85：成熟人IgG1 Fc，Cys至Ser取代(#)、YTE三重突变(粗体及加下划线)、同种异型G1m(fa)(粗斜体)
Figure BDA0003487201460003241
SEQ ID NO:86：成熟人IgG1 Fc，Cys至Ser取代(#)、YTE三重突变(粗体及加下划线)、同种异型G1m(f)(粗斜体)
Figure BDA0003487201460003242
SEQ ID NO:87：成熟人Fc IgG1，Z1为Cys或Ser，且其中X1为Met或Trp，X2为Ser或Thr，X3为Thr或Glu，X4为Asp或Glu，且X5为Leu或Met，X6为Met或Leu，且X7为Asn或Ser
VNHKPSNTKVDKKVEPKSZ1DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLX1IX2RX3PEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRX4EX5TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVX6HEALHX7HYTQKSLSLSPG
SEQ ID NO:88：成熟人Fc IgG1，Cys至Ser取代(#)，且其中X1为Met或Trp，X2为Ser或Thr，X3为Thr或Glu，X4为Asp或Glu，且X5为Leu或Met，X6为Met或Leu，且X7为Asn或Ser
VNHKPSNTKVDKKVEPKSS(#)DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLX1IX2RX3PEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRX4EX5TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVX6HEALHX7HYTQKSLSLSPG
SEQ ID NO:89：成熟人IgG1 Fc，Cys至Ser取代(#)，X4为Asp或Glu，且X5为Leu或Met
VNHKPSNTKVDKKVEPKSS(#)DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRX4EX5TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
SEQ ID NO:90：成熟人IgG1 Fc，Cys至Ser取代(#)、同种异型G1m(f)(粗斜体)
Figure BDA0003487201460003251
SEQ ID NO:91：成熟人IgG1 Fc，Cys至Ser取代(#)、同种异型G1m(fa)(粗斜体)
Figure BDA0003487201460003252
Figure BDA0003487201460003261
SEQ ID NO:92：成熟人IgG1 Fc，Cys至Ser取代(#)、M428L、N434S突变(粗体/加下划线)、同种异型G1m(fa)(粗斜体)
Figure BDA0003487201460003262
SEQ ID NO:93：成熟人IgG1 Fc，Cys至Ser取代(#)、M428L、N434S突变(粗体/加下划线)、同种异型G1m(f)(粗斜体)
Figure BDA0003487201460003263
SEQ ID NO:94：成熟人IgG1 Fc，Cys至Ser取代(#)、YTE三重突变(粗体及加下划线)、同种异型G1m(fa)(粗斜体)
Figure BDA0003487201460003264
Figure BDA0003487201460003271
SEQ ID NO:95：成熟人IgG1 Fc，Cys至Ser取代(#)、YTE三重突变(粗体及加下划线)、同种异型G1m(f)(粗斜体)
Figure BDA0003487201460003272
如本文所定义，Fc结构域包括通过CH3抗体恒定结构域之间的相互作用二聚化的两种Fc结构域单体，以及在两种二聚化Fc结构域单体的铰链结构域之间形成的一个或多个二硫键。Fc结构域形成缀合于Fc受体，例如Fc-γ受体(即，Fcγ受体(FcγR))、Fc-α受体(即，Fcα受体(FcαR))、Fc-ε受体(即，Fcε受体(FcεR))及/或新生儿Fc受体(FcRn)的最小结构。在一些实施方案中，本发明的Fc结构域缀合于Fcγ受体(例如，FcRn、FcγRI(CD64)、FcγRIIa(CD32)、FcγRIIb(CD32)、FcγRIIIa(CD16a)、FcγRIIIb(CD16b))及/或FcγRIV及/或新生儿Fc受体(FcRn)。
在一些实施方案中，本发明的Fc结构域单体或Fc结构域为无糖基化Fc结构域单体或Fc结构域(例如，维持衔接于Fc受体(例如，F cRn)的Fc结构域单体或Fc结构域)。例如，所述Fc结构域是维持衔接于Fc受体的无糖基化IgG1变体(例如，在糖基化基序的N297及/或T299处具有氨基酸取代的IgG1)。例示性无糖基化Fc结构域及用于制备无糖基化Fc结构域的方法为本领域中已知的，例如，如描述于Sazinsky S.L.等人,Aglycosylatedimmunoglobulin G1 variants pr oductively engage activating Fc receptors,PNAS,2008,105(51):20167-20172中，所述文献整体并入本文中。
在一些实施方案中，本发明的Fc结构域或Fc结构域单体经工程改造以增强与新生儿Fc受体(FcRn)的结合。例如，所述Fc结构域可包括对应于M252Y/S254T/T256E(YTE)的三重突变(例如IgG1，诸如具有YTE突变的人或人化IgG1，例如SEQ ID NO:33、SEQ ID N O:36、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:56或SEQ ID NO:57)。所述Fc结构域可包括对应于M428L/N434S(LS)的双重突变体(例如IgG1，诸如具有LS突变的人或人化IgG1，诸如SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:39、SEQ ID N O:44、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:55或SEQ ID NO:59)。所述Fc结构域可包括对应于N434H的单一突变体(例如IgG1，诸如具有N434H突变的人或人化IgG1)。所述Fc结构域可包括对应于C220S的单一突变体(例如IgG1，诸如具有C220S突变的人或人化IgG1，诸如SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ I D NO:61、SEQ ID NO:62、SEQ IDNO:63、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67或SEQ ID N O:68)。所述Fc结构域可包括增强与FcRn的结合的上述突变中的一或多者的组合。增强的与FcRn的结合可增加含Fc结构域的缀合物的半衰期。例如，相对于具有不含增强FcRn结合的突变的相应Fc结构域的缀合物，增加结合于FcRn的一种或多种氨基酸突变(例如，YTE突变、LS突变或N434H突变)的掺入可增加所述缀合物的半衰期达5％、10％、15％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、200％、300％、400％、500％或更高。具有增强的与FcRN的结合的例示性Fc结构域及用于制备具有增强的与FcRN的结合的Fc结构域的方法为所属领域中已知的，例如，如描述于Maeda,A.等人,Identification of human IgG1 variant with enhanced FcRnbinding and without increased binding to rheumatoid factor autoantibody,M ABS,2017,9(5):844-853中，所述文献整体并入本文中。如本文所用，应理解“对应于”(例如，特定SEQ ID NO.的)特定氨基酸残基的氨基酸包括本领域技术人员将理解与(例如，所述特定序列的)所述特定残基比对的任何氨基酸残基。例如，SEQ ID NO:1-95中任一者可通过使所述氨基酸序列的“相应残基”突变而发生突变以包括YTE突变、LS突变及/或N434H突变。
如本文所用，应理解“对应于”特定SEQ ID NO.的特定半胱氨酸残基的硫原子包括本领域技术人员将理解与所述特定序列的特定半胱氨酸比对的任何半胱氨酸残基的硫原子。人IgG1(UniProtKB:P01857；SEQ ID NO:121)、人IgG2(UniProtKB:P01859；SEQ ID NO:122)、人IgG3(UniProtKB:P01860；SEQ ID NO:123)及人IgG4(UniProtKB:P01861；SEQ IDNO:124)的蛋白质序列比对提供如下(用Clustal Omega多对比对(Multiple PairwiseAlignment)对齐)。所述比对指示彼此“对应”的半胱氨酸残基(例如，半胱氨酸残基的硫原子)(在盒中且由*符号指示)。本领域技术人员将能够容易地执行与本发明的任何IgG变体的所述种比对以确定半胱氨酸中对应于本文所述的特定SEQ ID NO.(例如，SEQ ID NO:1-95中任一者)的特定半胱氨酸的任何硫原子的硫原子。例如，本领域技术人员将能够容易地确定SEQ ID NO:10的Cys10(Fc结构域铰链区保守CPPC基序的第一半胱氨酸)对应于例如IgG1的Cys109、IgG2的Cys106、IgG3的Cys156、SEQ ID NO:1的Cys29、SEQ ID NO:2的Cys9、SEQ ID NO:3的Cys30、SEQ ID NO:10的Cys10。
在一些实施方案中，具有SEQ ID NO:39-95中任一者的序列的本发明的Fc结构域或Fc结构域单体可进一步包括N端处的额外氨基酸(Xaa)x及/或C端处的额外氨基酸(Xaa)z，其中Xaa为任何氨基酸且x及z为大于或等于零的整数，一般地小于100，优选地小于10且更优选地为0、1、2、3、4或5。在一些实施方案中，所述额外氨基酸与SEQ ID NO:103的一个或多个连续氨基酸至少70％(例如，70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性。例如，所述额外氨基酸可为C端处对应于IgG1(SEQ ID NO:121)的Lys330的单一氨基酸。
如本文所用，应理解“对应于”特定SEQ ID NO.的特定赖氨酸残基的氮原子包括本领域技术人员将理解与所述特定序列的特定赖氨酸比对的任何赖氨酸残基的氮原子。人IgG1(UniProtKB:P01857；SEQ ID NO:121)、人IgG2(UniProtKB:P01859；SEQ ID NO:122)、人IgG3(UniProtKB:P01860；SEQ ID NO:123)及人IgG4(UniProtKB:P01861；SEQ ID NO:124)的蛋白质序列比对提供如下(用Clustal Omega多对比对对齐)。所述比对指示彼此“对应”的赖氨酸残基(例如，赖氨酸残基的氮原子)(在盒中且由*符号指示)。本领域技术人员将能够容易地执行与本发明的任何IgG变体的所述种比对以确定赖氨酸中对应于本文所述的特定SEQ ID NO.(例如，SEQID NO:1-95中任一者)的特定赖氨酸的任何氮原子的氮原子。例如，本领域技术人员将能够容易地确定SEQ ID NO:10的Lys35对应于例如IgG1的Lys129、IgG2的Lys126、IgG3的Lys176、SEQ IDNO:1的Lys51、SEQ ID NO:2的Lys31、SEQ ID NO:3的Lys50、SEQ ID NO:10的Lys30。
IgG1(SEQ ID NO:121)、IgG2(SEQ ID NO:122)、IgG3(SEQ ID NO:123)及IgG4(SEQID NO:124)的蛋白质序列比对
Figure BDA0003487201460003311
在一些实施方案中，Fc结构域单体包括小于约300个氨基酸残基(例如，小于约300、小于约295、小于约290、小于约285、小于约280、小于约275、小于约270、小于约265、小于约260、小于约255、小于约250、小于约245、小于约240、小于约235、小于约230、小于约225或小于约220个氨基酸残基)。在一些实施方案中，Fc结构域单体小于约40kDa(例如，小于约35kDa、小于约30kDa、小于约25kDa)。
在一些实施方案中，Fc结构域单体包括至少200个氨基酸残基(例如，至少210、至少220、至少230、至少240、至少250、至少260、至少270、至少280、至少290或至少300个氨基酸残基)。在一些实施方案中，Fc结构域单体为至少20kDa(例如，至少25kDa、至少30kDa或至少35kDa)。
在一些实施方案中，Fc结构域单体包括200至400个氨基酸残基(例如，200至250、250至300、300至350、350至400、200至300、250至350或300至400个氨基酸残基)。在一些实施方案中，Fc结构域单体为20至40kDa(例如，20至25kDa、25至30kDa、35至40kDa、20至30kDa、25至35kDa或30至40kDa)。
在一些实施方案中，Fc结构域单体包括与SEQ ID No:1-95中任一者的序列具有至少90％(例如，至少95％、至少98％)同一性的氨基酸序列或其区域。在一些实施方案中，Fc结构域单体包括SEQ ID No:1-95中任一者的氨基酸序列或其区域。
在一些实施方案中，Fc结构域单体包括SEQ ID NO:1-95中任一者的区域，其中所述区域包括位置220、252、254及256。在一些实施方案中，所述区域包括至少40个氨基酸残基、至少50个氨基酸残基、至少60个氨基酸残基、至少70个氨基酸残基、至少80个氨基酸残基、至少90个氨基酸残基、至少100个氨基酸残基、至少110个氨基酸残基、至少120个氨基酸残基、至少130个氨基酸残基、至少140个氨基酸残基、至少150个氨基酸残基、至少160个氨基酸残基、至少170个氨基酸残基、至少180个氨基酸残基、至少190个氨基酸残基或至少200个氨基酸残基。
免疫细胞活化
Fc-γ受体(FcγR)结合免疫球蛋白G(IgG)的Fc部分且在免疫活化及调节中发挥重要作用。例如，免疫复合物(IC)中的IgG Fc结构域以高亲合力衔接FcγR，因此触发调节免疫细胞活化的信号传导级联。人FcγR家族含有数种活化受体(FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIc、FcγRIIIa及FcγRIIIb)及一种抑制受体(FcγRIIb)。FcγR信号传导通过细胞内结构域介导，所述细胞内结构域含有用于活化FcγR的免疫酪氨酸活化基序(ITAM)及用于抑制受体FcγRIIb的免疫酪氨酸抑制基序(ITIM)。在一些实施方案中，Fc结构域与FcγR的结合使Src家族激酶进行ITAM磷酸化；此活化Syk家族激酶且诱导包括PI3K及Ras路径的下游信号传导网路。
在本文所述的缀合物中，缀合物中包括gp120结合剂的单体或二聚体的部分结合于且抑制病毒gp120受体，导致抑制病毒复制，而所述缀合物的Fc结构域部分结合于免疫细胞上的FcγR(例如，FcRn、FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIc、FcγRIIIa及FcγRIIIb)且活化吞噬作用及效应子功能，诸如抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)，因此由免疫细胞吞没及破坏病毒粒子且进一步增强所述缀合物的抗病毒活性。可通过本文所述的缀合物活化的免疫细胞的实例包括但不限于巨噬细胞、嗜中性粒细胞、嗜曙红细胞、嗜碱细胞、淋巴细胞、滤泡性树突状细胞、天然杀手细胞及肥大细胞。
组织分布
在进入体循环之后，治疗剂被分配到身体的组织。由于血液灌注、组织结合、区域pH值及细胞膜通透性的不同，分布通常不均匀。药物进入组织的速度取决于血液流向组织的速度、组织质量及血液与组织之间的分配特性。在血管丰富的区域，血液与组织之间的分布平衡(当进入及退出速率相同时)会更快地达到，除非跨细胞膜扩散是限速步骤。大小、形状、电荷、靶标结合、FcRn及靶标结合机制、施用途径以及配方都会影响组织分布。
在一些情况下，可优化本文所述的缀合物以分布至肺组织。在一些情况下，缀合物在施用之后2小时内在上皮衬液中的分布浓度比率为血浆中缀合物浓度的至少30％。在某些实施方案中，施用之后2小时内的浓度比率为至少45％。在某些实施方案中，施用之后2小时内的浓度比率为至少55％。特别地，施用之后2小时内的浓度比率为至少60％。如实施例35及图13所示，到注射后2小时，如在其余时间过程中通过AUC所测量，具有用一种或多种小分子抗病毒抑制剂修饰的Fc结构域(SEQ ID NO:64)的缀合物ELF水平令人惊讶地为血浆暴露水平的约60％，表明缀合物几乎立即从血浆分配到肺中的ELF。这表明含有Fc的缀合物迅速分布到肺中，且相对于血浆中的水平在肺中保持高浓度。
IV.白蛋白及白蛋白结合肽
白蛋白
本发明的白蛋白可为天然存在的白蛋白或其变体，诸如天然存在的白蛋白的经工程改造变体。变体包括多态性、诸如结构域及子结构域的片段及融合蛋白。白蛋白可包括自任何来源获得的白蛋白的序列。优选地，所述来源为哺乳动物，诸如人或牛。最优选地，所述白蛋白为人血清白蛋白(HSA)或其变体。人血清白蛋白包括具有天然存在于人中的氨基酸序列的任何白蛋白及其变体。白蛋白编码序列可通过本领域技术人员已知用于分离对应于人基因的cDNA且对所述cDNA进行测序的方法获得。本发明的白蛋白可包括SEQ ID NO:96或SEQ ID NO:97中提供的人血清白蛋白(HSA)的氨基酸序列，或者SEQ ID NO:98中提供的小鼠血清白蛋白(MSA)的氨基酸序列，或者其变体或片段(优选其功能变体或片段)。片段或变体可或可不为功能性的，或可在某种程度上保持白蛋白的功能。例如，片段或变体可保持与白蛋白受体(诸如HSA或MSA)结合的能力，达亲本白蛋白(例如，产生所述片段或变体的亲本白蛋白)的所述能力的至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％或105％。相对结合能力可通过所属领域中已知的方法，诸如通过表面电浆共振来测定。
所述白蛋白可为白蛋白的天然存在的多态变体，诸如人血清白蛋白。一般而言，人血清白蛋白的变体或片段将具有人血清白蛋白或小鼠血清白蛋白的配位体结合活性的至少5％、10％、15％、20％、30％、40％、50％、60％或70％，且优选地80％、90％、95％、100％或105％或更高。
所述白蛋白可包括牛血清白蛋白的氨基酸序列。牛血清白蛋白包括具有天然存在于牛中的氨基酸序列的任何白蛋白，例如，如通过Swissprot寄存编号P02769所述，及如本文所定义的其变体。牛血清白蛋白也包括如本文所定义的全长牛血清白蛋白或其变体的片段。
所述白蛋白可包含源自来自以下的血清白蛋白中的一者的白蛋白的序列：狗(例如，Swissprot登录号P49822-1)、猪(例如，Swissprot登录号P08835-1)、山羊(例如，Sigma产品号A2514)A4164)、猫(例如，Swissprot登记号P49064-1)、鸡(例如，Swissprot登记号P19121-1)、卵清蛋白(例如，鸡卵清蛋白)(例如，Swissprot登记号P01012-1)、火鸡卵清蛋白(例如，Swissprot登录号O73860-1)、驴(例如，Swissprot登录号Q5XLE4-1)、豚鼠(例如，Swissprot登录号Q6WDN9-1)、仓鼠(例如，如DeMarco等人International Journal forParasitology 37(11):1201-1208(2007)中所描述)、马(例如，Swissprot登录号P35747-1)、恒河猴(例如，Swissprot登录号Q28522-1)、小鼠(例如，Swissprot登录号P07724-1)、鸽子(例如，如由Khan等人Int.J.Biol.Macromol.30(3-4),171-8(2002)所定义)、兔(例如，Swissprot登录号P49065-1)、大鼠(例如，Swissprot登录号P02770-1)或绵羊(例如，Swissprot登录号P14639-1)，且包括如本文定义的其变体及片段。
本领域技术人员已知白蛋白的多种天然存在的突变体形式。天然存在的白蛋白突变体形式在例如Peters等人All About Albumin:Biochemistry,Genetics and MedicalApplications,Academic Press,Inc.,San Diego,Calif.,第170页-181页(1996)中描述。
本发明的白蛋白包括天然存在的白蛋白的变体。变异型白蛋白是指具有至少一种氨基酸突变，诸如通过插入、缺失或取代产生的氨基酸突变(保守或非保守)的白蛋白，其限制条件在于所述改变产生尚未显著改变至少一种基础特性(例如，尚未改变超过5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％或40％)的白蛋白。可定义白蛋白的活性的例示性特性包括结合活性(例如，包括对胆红素或诸如长链脂肪酸的脂肪酸的结合特异性或亲和力)、容积渗透浓度或在特定pH范围内的行为。
典型地，白蛋白变体将与天然存在的白蛋白(诸如SEQ ID NO:96-98中任一者的白蛋白)具有至少40％、至少50％、至少60％且优选地至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性。
用于生产及纯化重组人白蛋白的方法为充分确立的(Sleep等人Biotechnology,8(1):42-6(1990))，且包括用于制药应用的重组人白蛋白的生产(Bosse等人J ClinPharmacol 45(1):57-67(2005))。HSA的三维结构已由X射线晶体学阐明(Carter等人Science.244(4909):1195-8(1998))；Sugio等人Protein Eng.12(6):439-46(1999))。HSA多肽链具有35个半胱氨酸残基，所述残基形成17个二硫键；及在成熟蛋白质的位置34处的一个未配对(例如，游离)半胱氨酸。HSA的Cys-34已被用于将分子缀合于白蛋白(Leger等人Bioorg Med Chem Lett 14(17):4395-8(2004)；Thibaudeau等人Bioconjug Chem16(4):1000-8(2005))，且为位点特异性缀合提供位点。
SEQ ID NO:96(人血清白蛋白(HSA)，变体1)
DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQCPFEDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSVVLLLRLAKTYETTLEKCCAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSVVLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASQAALGL
SEQ ID NO:97(人血清白蛋白(HSA)，变体2)
RGVFRRDAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQCPFEDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSVVLLLRLAKTYETTLEKCCAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSVVLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASQAALGL
SEQ ID NO:98(小鼠血清白蛋白(MSA))
RGVFRREAHKSEIAHRYNDLGEQHFKGLVLIAFSQYLQKCSYDEHAKLVQEVTDFAKTCVADESAANCDKSLHTLFGDKLCAIPNLRENYGELADCCTKQEPERNECFLQHKDDNPSLPPFERPEAEAMCTSFKENPTTFMGHYLHEVARRHPYFYAPELLYYAEQYNEILTQCCAEADKESCLTPKLDGVKEKALVSSVRQRMKCSSMQKFGERAFKAWAVARLSQTFPNADFAEITKLATDLTKVNKECCHGDLLECADDRAELAKYMCENQATISSKLQTCCDKPLLKKAHCLSEVEHDTMPADLPAIAADFVEDQEVCKNYAEAKDVFLGTFLYEYSRRHPDYSVSLLLRLAKKYEATLEKCCAEANPPACYGTVLAEFQPLVEEPKNLVKTNCDLYEKLGEYGFQNAILVRYTQKAPQVSTPTLVEAARNLGRVGTKCCTLPEDQRLPCVEDYLSAILNRVCLLHEKTPVSEHVTKCCSGSLVERRPCFSALTVDETYVPKEFKAETFTFHSDICTLPEKEKQIKKQTALAELVKHKPKATAEQLKTVMDDFAQFLDTCCKAADKDTCFSTEGPNLVTRCKDALA
白蛋白的缀合
本发明的白蛋白可缀合于(例如，借助于共价键)任何本发明化合物(例如，借助于gp120结合剂单体或二聚体的接头部分)。所述白蛋白可通过本领域技术人员熟知用于产生小分子-蛋白缀合物的任何方法缀合于任何本发明化合物。此可包括共价缀合于溶剂暴露氨基酸，诸如溶剂暴露半胱氨酸或赖氨酸。例如，人血清白蛋白可通过共价缀合于对应于SEQ ID NO:96的Cys34或SEQ ID NO:97的Cys40的硫原子而缀合于本发明化合物。
本发明的白蛋白可借助于位于所述白蛋白的C端或N端的10个氨基酸残基内的氨基酸缀合于任何本发明化合物。白蛋白可包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15或20个或20个以上氨基酸的C端或N端多肽融合。所述C端或N端多肽融合可包括一个或多个溶剂暴露半胱氨酸或赖氨酸残基，所述残基可用于共价缀合本发明化合物(例如，缀合于gp120结合剂单体或二聚体，包括借助于接头)。
本发明的白蛋白包括已被工程改造以包括一个或多个溶剂暴露半胱氨酸或赖氨酸残基的任何白蛋白，其可提供用于缀合于本发明化合物(例如，缀合于gp120结合剂单体或二聚体，包括借助于接头)的位点。最优选地，所述白蛋白将含有单一溶剂暴露半胱氨酸或赖氨酸，因此使得本发明化合物能够位点特异性缀合。
用于产生包括一个或多个缀合胜任半胱氨酸残基的经工程改造白蛋白变体的例示性方法提供于美国专利申请案第2017/0081389号中，所述案以引用的方式整体并入本文中。简单来说，优选白蛋白变体包含单一、溶剂暴露、未配对(例如，游离)半胱氨酸残基，因此使得接头能够位点特异性缀合于所述半胱氨酸残基的那些变体。
已被工程改造以使得能够化学缀合于溶剂暴露、未配对半胱氨酸残基的白蛋白包括以下白蛋白变体：
(a)在对应于SEQ ID NO:96的L585、D1、A2、D562、A364、A504、E505、T79、E86、D129、D549、A581、D121、E82、S270、Q397及A578中任一者的氨基酸残基处由半胱氨酸取代非半胱氨酸氨基酸残基的白蛋白；
(b)在邻近对应于SEQ ID NO:96的L585、D1、A2、D562、A364、A504、E505、T79、E86、D129、D549、A581、D121、E82、S270、Q397及A578中任一者的氨基酸残基的N端或C端侧的位置处具有半胱氨酸插入的白蛋白；
(c)经工程改造以具有未配对半胱氨酸的白蛋白，其在对应于SEQ ID NO:96的C369、C361、C91、C177、C567、C316、C75、C169、C124或C558中任一者的残基处具有游离硫醇基团，且所述白蛋白可由或不由对应于SEQ ID NO:96的C360、C316、C75、C168、C558、C361、C91、C124、C169或C567的残基的缺失或取代而生成；以及/或者
(d)添加半胱氨酸至白蛋白的N端或C端。
在本发明的一些实施方案中，(a)、(b)、(c)及/或(d)的取代、缺失、添加或插入事件的净结果是所述多肽序列的缀合胜任半胱氨酸残基的数目相对于亲本白蛋白序列有所增加。在本发明的一些实施方案中，(a)、(b)、(c)及/或(d)的取代、缺失、添加或插入事件的净结果是所述多肽序列的缀合胜任半胱氨酸残基的数目为1，因此使得能够位点特异性缀合。
优选白蛋白变体也包括具有单一溶剂暴露赖氨酸残基，因此使得接头能够位点特异性缀合于所述赖氨酸残基的白蛋白。所述变体可通过工程改造白蛋白，包括任何前述方法(例如，插入、缺失、取代或C端或N端融合)来产生。
白蛋白结合肽
生物活性化合物与白蛋白结合肽的缀合可改变所述生物活性化合物的药效，包括组织摄取、渗透及扩散的改变。在一优选实施方案中，如与单独本发明化合物(例如，gp120结合剂单体或二聚体，借助于接头)相比，白蛋白结合肽与所述化合物的缀合会增加所述化合物的功效或减少毒性。
本发明的白蛋白结合肽包括具有5至50个(例如，5至40个、5至30个、5至20个、5至15个、5至10个、10至50个、10至30个或10至20个)氨基酸残基的氨基酸序列的任何多肽，其对白蛋白(诸如本文所述的任何白蛋白)具有亲和力且具有结合所述白蛋白的功能。优选地，白蛋白结合肽缀合于天然存在的血清白蛋白，最优选地人血清白蛋白。白蛋白结合肽可具有不同起源，例如合成、人、小鼠或大鼠。本发明的白蛋白结合肽包括已被工程改造以包括一个或多个(例如，两个、三个、四个或五个)溶剂暴露半胱氨酸或赖氨酸残基的白蛋白结合肽，其可提供用于缀合于本发明化合物(例如，缀合于gp120结合剂单体或二聚体，包括借助于接头)的位点。最优选地，所述白蛋白结合肽将含有单一溶剂暴露半胱氨酸或赖氨酸，因此使得本发明化合物能够位点特异性缀合。白蛋白结合肽可仅包括天然存在的氨基酸残基，或可包括一个或多个非天然存在的氨基酸残基。在包括时，非天然存在的氨基酸残基(例如，非天然存在的氨基酸残基的侧链)可用作用于本发明化合物(例如，gp120结合剂单体或二聚体，包括借助于接头)的附接点。本发明的白蛋白结合肽可为直链或环状的。本发明的白蛋白结合肽包括本领域技术人员已知的任何白蛋白结合肽，其实例提供于本文中。
白蛋白结合肽及包括白蛋白结合肽的缀合物优选地以如下亲和力结合白蛋白(例如，人血清白蛋白)，所述亲和力的特征在于小于约100μM，优选地小于约100nM，且最优选地不会实质上结合其他血浆蛋白质的解离常数Kd。所述化合物的特定实例为直链或环状肽，其长度优选地在约10个与20个氨基酸残基之间，任选在N端或C端或所述两处经修饰。
白蛋白结合肽包括包含以下通式的直链及环状肽，其中Xaa为任何氨基酸：
SEQ ID NO:101
Xaa-Xaa-Cys-Xaa-Xaa-Xaa-Xaa-Xaa-Cys-Xaa-Xaa-Phe-Cys-Xaa-Asp-Trp-Pro-Xaa-Xaa-Xaa-Ser-Cys
SEQ ID NO:102
Val-Cys-Tyr-Xaa-Xaa-Xaa-Ile-Cys-Phe
SEQ ID NO:103
Cys-Tyr-Xaa-Pro-Gly-Xaa-Cys
SEQ ID NO:104
Asp-Xaa-Cys-Leu-Pro-Xaa-Trp-Gly-Cys-Leu-Trp
SEQ ID NO:105
Trp-Cys-Asp-Xaa-Xaa-Leu-Xaa-Ala-Xaa-Asp-Leu-Cys
SEQ ID NO:106
Asp-Leu-Val-Xaa-Leu-Gly-Leu-Glu-Cys-Trp
本发明的白蛋白结合肽进一步包括以下肽序列中任一者，其可为直链或环状：
Figure BDA0003487201460003421
SEQ ID NO:101-120的白蛋白结合肽可进一步包括N端处的额外氨基酸(Xaa)x及/或C端处的额外氨基酸(Xaa)z，其中Xaa为任何氨基酸且x及z为大于或等于零的整数，一般地小于100，优选地小于10且更优选地为0、1、2、3、4或5。
进一步例示性白蛋白结合肽提供于美国专利申请案第2005/0287153号中，所述美国专利申请案以引用的方式整体并入本文中。
白蛋白结合肽的缀合
本发明的白蛋白结合肽可缀合于(例如，借助于共价键)任何本发明化合物(例如，借助于gp120结合剂单体或二聚体的接头部分)。所述白蛋白结合肽可通过本领域技术人员已知用于产生肽-小分子缀合物的任何方法缀合于任何本发明化合物。此可包括共价缀合于氨基酸残基(诸如半胱氨酸、赖氨酸或非天然氨基酸)的侧链基团。或者，共价缀合可出现于C端(例如，缀合于C端羧酸，或缀合于C端残基的侧链基团)或N端(例如，缀合于N端氨基，或缀合于N端氨基酸的侧链基团)。
V.接头
接头是指本文所述的缀合物中的两种或更多种组分之间(例如，本文所述的缀合物中的两种gp120结合剂之间、本文所述的缀合物中的gp120结合剂与Fc结构域单体、Fc结构域或白蛋白之间及本文所述的缀合物中的两种gp120结合剂的二聚体与Fc结构域单体、Fc结构域或白蛋白之间)的连接。
具有共价连接于gp120结合剂的二聚体的Fc结构域单体、Fc结构域或白蛋白的缀合物中的接头
在如本文所述的含有共价连接于gp120结合剂的一种或多种二聚体的Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽的缀合物中，所述缀合物中的接头(例如，L或L’)可为分支链结构。如本文进一步描述，本文所述的缀合物中的接头(例如，L或L’)可为多价结构，例如分别具有两个或三个臂的二价或三价结构。在一些实施方案中，当所述接头具有三个臂时，所述臂中的两者可附接于第一及第二gp120结合剂且第三个臂可附接于Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽。在一些实施方案中，当所述接头具有两个臂时，一个臂可附接于Fc结构域单体、Fc结构域或白蛋白且另一臂可附接于两种gp120结合剂的一。在其他实施方案中，具有三个臂的接头可用于附接含有共价连接于gp120结合剂的一种或多种二聚体的Fc结构域单体、Fc结构域或白蛋白的缀合物上的两种gp120结合剂。
在一些实施方案中，具有共价连接于gp120结合剂的一种或多种二聚体的Fc结构域单体、Fc结构域或白蛋白的缀合物中的接头由式(D-L-I)描述：
Figure BDA0003487201460003441
其中LA由式GA1-(ZA1)g1-(YA1)h1-(ZA2)i1-(YA2)j1-(ZA3)k1-(YA3)l1-(ZA4)m1-(YA4)n1-(ZA5)o1-GA2描述；LB由式GB1-(ZB1)g2-(YB1)h2-(ZB2)i2-(YB2)j2-(ZB3)k2-(YB3)l2-(ZB4)m2-(YB4)n2-(ZB5)o2-GB2描述；LC由式GC1-(ZC1)g3-(YC1)h3-(ZC2)i3-(YC2)j3-(ZC3)k3-(YC3)l3-(ZC4)m3-(YC4)n3-(ZC5)o3-GC2描述；GA1是附接至式(D-L-I)中的Q的键；GA2是附接至第一gp120结合剂(例如，A1)的键；GB1是附接至式(D-L-I)中的Qi的键；GB2是附接至第二gp120结合剂(例如，A2)的键；GC1是附接至式(D-L-I)中的Qi的键；GC2是附接至Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽的键或能够与缀合于E的官能团反应的官能团(例如，马来酰亚胺及半胱氨酸、胺及经活化羧酸、硫醇及马来酰亚胺、经活化磺酸及胺、异氰酸酯及胺、叠氮化物及炔以及烯烃及四嗪)；ZA1、ZA2、ZA3、ZA4、ZA5、ZB1、ZB2、ZB3、ZB4、ZB5、ZC1、ZC2、ZC3、ZC4及ZC5中的每一者独立地为任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C1-C20亚杂烷基、任选取代的C2-C20亚烯基、任选取代的C2-C20亚杂烯基、任选取代的C2-C20亚炔基、任选取代的C2-C20亚杂炔基、任选取代的C3-C20亚环烷基、任选取代的C2-C20亚杂环烷基、任选取代的C4-C20亚环烯基、任选取代的C4-C20亚杂环烯基、任选取代的C8-C20亚环炔基、任选取代的C8-C20亚杂环炔基、任选取代的C5-C15亚芳基或任选取代的C3-C15亚杂芳基；YA1、YA2、YA3、YA4、YB1、YB2、YB3、YB4、YC1、YC2、YC3及YC4中的每一者独立地为O、S、NRi、P、羰基、硫羰基、磺酰基、磷酸酯基、磷酰基或亚氨基；Ri为H、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C1-C20杂烷基、任选取代的C2-C20烯基、任选取代的C2-C20杂烯基、任选取代的C2-C20炔基、任选取代的C2-C20杂炔基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C4-C20环烯基、任选取代的C4-C20杂环烯基、任选取代的C8-C20环炔基、任选取代的C8-C20杂环炔基、任选取代的C5-C15芳基或任选取代的C3-C15杂芳基；g1、h1、i1、j1、k1、l1、m1、n1、o1、g2、h2、i2、j2、k2、l2、m2、n2、o2、g3、h3、i3、j3、k3、l3、m3、n3及o3中的每一者独立地为0或1；Q为氮原子、任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C1-C20亚杂烷基、任选取代的C2-C20亚烯基、任选取代的C2-C20亚杂烯基、任选取代的C2-C20亚炔基、任选取代的C2-C20亚杂炔基、任选取代的C3-C20亚环烷基、任选取代的C2-C20亚杂环烷基、任选取代的C4-C20亚环烯基、任选取代的C4-C20亚杂环烯基、任选取代的C8-C20亚环炔基、任选取代的C8-C20亚杂环炔基、任选取代的C5-C15亚芳基或任选取代的C3-C15亚杂芳基。
在一些实施方案中，任选取代包括用聚乙二醇(PEG)取代。PEG具有重复单元结构(-CH2CH2O-)n，其中n为2至100的整数。聚乙二醇可选自PEG2至PEG100中任一者(例如，PEG2、PEG3、PEG4、PEG5、PEG5-PEG10、PEG10-PEG20、PEG20-PEG30、PEG30-PEG40、PEG50-PEG60、PEG60-PEG70、PEG70-PEG80、PEG80-PEG90、PEG90-PEG100)。
在一些实施方案中，LC可具有两个附接至Fc结构域的点(例如，两个GC2)。
在一些实施方案中，L包括聚乙二醇(PEG)接头。PEG接头包括具有重复单元结构(-CH2CH2O-)n的接头，其中n为2至100的整数。聚乙二醇接头可共价接合gp120结合剂及E(例如，在式(M-I)-(M-X)中任一者的缀合物中)。聚乙二醇接头可共价接合第一gp120结合剂及第二gp120结合剂(例如，在式(D-I)-(D-X)中任一者的缀合物中)。聚乙二醇接头可共价接合gp120结合剂二聚体及E(例如，在式(D-I)-(D-X)中任一者的缀合物中)。聚乙二醇接头可选自PEG2至PEG100中任一者(例如，PEG2、PEG3、PEG4、PEG5、PEG5-PEG10、PEG10-PEG20、PEG20-PEG30、PEG30-PEG40、PEG50-PEG60、PEG60-PEG70、PEG70-PEG80、PEG80-PEG90、PEG90-PEG100)。在一些实施方案中，Lc包括PEG接头，其中LC共价附接至Qi及E中每一者。
可用于本文所述的缀合物中的式(D-L-I)的接头包括但不限于
Figure BDA0003487201460003461
Figure BDA0003487201460003471
Figure BDA0003487201460003481
Figure BDA0003487201460003491
Figure BDA0003487201460003501
Figure BDA0003487201460003511
Figure BDA0003487201460003521
Figure BDA0003487201460003531
Figure BDA0003487201460003541
Figure BDA0003487201460003551
Figure BDA0003487201460003561
其中z1、z2、y1、y2、y3及y4各自独立地为1至20的整数；且R9选自H、C1-C20烷基、C3-C20环烷基、C2-C20杂环烷基、任选取代的C5-C15芳基及C3-C15杂芳基。
式(D-L-I)的接头也可包括以下任一者：
Figure BDA0003487201460003562
Figure BDA0003487201460003571
Figure BDA0003487201460003581
Figure BDA0003487201460003582
及
Figure BDA0003487201460003591
具有共价连接于gp120结合剂的单体的Fc结构域单体、Fc结构域或白蛋白的缀合物中的接头
在如本文所述的含有共价连接于gp120结合剂的一种或多种单体的Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽的缀合物中，所述缀合物中的接头(例如，L或L’)可为具有两个臂的二价结构。二价接头中的一个臂可附接于gp120结合剂的单体且另一臂可附接于Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽。在一些实施方案中，本文所述的缀合物中的gp120结合剂的一种或多种单体可各自独立地连接于Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽中的原子。
在一些实施方案中，接头由式(M-L-I)描述：
J1-(Q1)g-(T1)h-(Q2)i-(T2)j-(Q3)k-(T3)l-(Q4)m-(T4)n-(Q5)o-J2
其中J1是附接至gp120结合剂的键；J2是附接至Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽的键或能够与缀合于Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽的官能团反应的官能团(例如，马来酰亚胺及半胱氨酸、胺及经活化羧酸、硫醇及马来酰亚胺、经活化磺酸及胺、异氰酸酯及胺、叠氮化物及炔以及烯烃及四氮烯)；Q1、Q2、Q3、Q4及Q5中的每一者独立地为任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C1-C20亚杂烷基、任选取代的C2-C20亚烯基、任选取代的C2-C20亚杂烯基、任选取代的C2-C20亚炔基、任选取代的C2-C20亚杂炔基、任选取代的C3-C20亚环烷基、任选取代的C2-C20亚杂环烷基、任选取代的C4-C20亚环烯基、任选取代的C4-C20亚杂环烯基、任选取代的C8-C20亚环炔基、任选取代的C8-C20亚杂环炔基、任选取代的C5-C15亚芳基或任选取代的C3-C15亚杂芳基；T1、T2、T3、T4中的每一者独立地为O、S、NRi、P、羰基、硫羰基、磺酰基、磷酸酯基、磷酰基或亚氨基；Ri为H、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C1-C20杂烷基、任选取代的C2-C20烯基、任选取代的C2-C20杂烯基、任选取代的C2-C20炔基、任选取代的C2-C20杂炔基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C4-C20环烯基、任选取代的C4-C20杂环烯基、任选取代的C8-C20环炔基、任选取代的C8-C20杂环炔基、任选取代的C5-C15芳基或任选取代的C3-C15杂芳基；且g、h、i、j、k、l、m、n及o各自独立地为0或1。
在一些实施方案中，任选取代包括用聚乙二醇(PEG)取代。PEG具有重复单元结构(-CH2CH2O-)n，其中n为2至100的整数。聚乙二醇可选自PEG2至PEG100中任一者(例如，PEG2、PEG3、PEG4、PEG5、PEG5-PEG10、PEG10-PEG20、PEG20-PEG30、PEG30-PEG40、PEG50-PEG60、PEG60-PEG70、PEG70-PEG80、PEG80-PEG90、PEG90-PEG100)。
在一些实施方案中，J2可具有两个附接至Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽的点(例如，两个J2)。
可用于本文所述的缀合物中的式(M-L-I)的接头包括但不限于或，
Figure BDA0003487201460003601
其中d为1至20的整数(例如，d为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)。
可用于本文所述的缀合物中的式(M-L-I)的接头包括但不限于
Figure BDA0003487201460003611
Figure BDA0003487201460003621
Figure BDA0003487201460003622
及
Figure BDA0003487201460003631
其中每个Y独立地选自(-O-)、(-S-)、(-R8-)、(-O(C＝O)NR8-)、(-O(C＝S)NR8-)、(-O(C＝O)O-)、(-O(C＝O)-)、(-NH(C＝O)O-)、(-NH(C＝O)-)、(-NH(C＝NH)-)、(-NH(C＝O)NR8-)、(-NH(C＝NH)NR8-)、(-NH(C＝S)NR8-)、(-NH(C＝S)-)、(-OCH2(C＝O)NR8-)、(-NH(SO2)-)、(-NH(SO2)NR8-)、(-OR9-)、(-NR9-)、(-SR9-)、(-R9NH(C＝O)-)、(-R9OR9C(＝O)NH-)、(-CH2NH(C＝O)-)、(-CH2OCH2(C＝O)NH-)、(-(C＝NR8)NH-)、(-NH(SO2)-)、(-(C＝O)NH-)、(-C(＝O)-)、(-C(NR8)-)或(-R9C(＝O)-)；
每个R8独立地选自H、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C5-C15芳基及任选取代的C2-C15杂芳基；
每个R9独立地选自任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C5-C15芳基及任选取代的C2-C15杂芳基；且
d、e、y1及x1中的每一者独立地为1至26的整数(例如，d为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或26)。
连接基团
在一些实施方案中，接头提供此处所述的缀合物中的gp120结合剂与Fc结构域单体及Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽之间或本文所述的缀合物中的两种gp120结合剂的空间、刚性及/或柔性。在一些实施方案中，接头可为键，例如共价键，例如酰胺键、二硫键、C-O键、C-N键、N-N键、C-S键或由化学反应(例如，化学缀合)产生的任何种类的键。在一些实施方案中，接头(如式(1)、(2)、(D-I)-(D-XVII)或(M-I)-(M-XVII)中任一者所示的L或L’)包括不超过250个原子(例如，1-2、1-4、1-6、1-8、1-10、1-12、1-14、1-16、1-18、1-20、1-25、1-30、1-35、1-40、1-45、1-50、1-55、1-60、1-65、1-70、1-75、1-80、1-85、1-90、1-95、1-100、1-110、1-120、1-130、1-140、1-150、1-160、1-170、1-180、1-190、1-200、1-210、1-220、1-230、1-240或1-250个原子；250、240、230、220、210、200、190、180、170、160、150、140、130、120、110、100、95、90、85、80、75、70、65、60、55、50、45、40、35、30、28、26、24、22、20、18、16、14、12、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个原子)。在一些实施方案中，接头(L或L)包括不超过250个非氢原子(例如，1-2、1-4、1-6、1-8、1-10、1-12、1-14、1-16、1-18、1-20、1-25、1-30、1-35、1-40、1-45、1-50、1-55、1-60、1-65、1-70、1-75、1-80、1-85、1-90、1-95、1-100、1-110、1-120、1-130、1-140、1-150、1-160、1-170、1-180、1-190、1-200、1-210、1-220、1-230、1-240或1-250个非氢原子；250、240、230、220、210、200、190、180、170、160、150、140、130、120、110、100、95、90、85、80、75、70、65、60、55、50、45、40、35、30、28、26、24、22、20、18、16、14、12、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个非氢原子)。在一些实施方案中，接头(L或L)的骨架包括不超过250个原子(例如，1-2、1-4、1-6、1-8、1-10、1-12、1-14、1-16、1-18、1-20、1-25、1-30、1-35、1-40、1-45、1-50、1-55、1-60、1-65、1-70、1-75、1-80、1-85、1-90、1-95、1-100、1-110、1-120、1-130、1-140、1-150、1-160、1-170、1-180、1-190、1-200、1-210、1-220、1-230、1-240或1-250个原子；250、240、230、220、210、200、190、180、170、160、150、140、130、120、110、100、95、90、85、80、75、70、65、60、55、50、45、40、35、30、28、26、24、22、20、18、16、14、12、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个原子)。接头的“骨架”是指接头中的原子，其合起来形成自缀合物的一部分至所述缀合物的另一部分的最短路径。接头的骨架中的原子直接地参与连接所述缀合物的一部分至所述缀合物的另一部分。例如，附接于接头的骨架中的碳的氢原子未被视为直接地参与连接所述缀合物的一部分至所述缀合物的另一部分。
可用于制备接头(L或L’)的分子包括至少两个官能团，例如两个羧酸基。在三价接头的一些实施方案中，接头的两个臂可含有两种二羧酸，其中第一羧酸可与所述缀合物中的第一gp120结合剂形成共价连接且第二羧酸可与所述缀合物中的第二gp120结合剂形成共价连接且所述接头的第三臂可与所述缀合物中的Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽形成共价连接(例如，C-O键)。在二价接头的一些实施方案中，所述二价接头可含有两种羧酸，其中第一羧酸可与所述缀合物中的一种组分(例如，gp120结合剂)形成共价连接且第二羧酸可与所述缀合物中的另一组分(例如，Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽)形成共价连接(例如，C-S键或C-N键)。
在一些实施方案中，二羧酸分子可用作接头(例如，二羧酸接头)。例如，在含有共价连接于gp120结合剂的一种或多种二聚体的Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽的缀合物中，二羧酸分子中的第一羧酸可与第一gp120结合剂的羟基或氨基形成共价连接且第二羧酸可与第二gp120结合剂的羟基或氨基形成共价连接。
可用于形成接头的二羧酸分子的实例包括但不限于：
Figure BDA0003487201460003651
Figure BDA0003487201460003661
及
Figure BDA0003487201460003671
其中n为1至20的整数(例如，n为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)。
可用于形成接头的二羧酸分子的其他实例包括但不限于：
Figure BDA0003487201460003672
Figure BDA0003487201460003681
在一些实施方案中，二羧酸分子(诸如本文所述者)可进一步官能化以含有一个或多个额外官能团。二羧酸可进一步官能化，例如以提供与Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽的附接点(例如，借助于接头，诸如PEG接头)。
在一些实施方案中，当所述gp120结合剂附接于Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽时，连接基团可包含包括由1至25个原子间隔的羧酸部分及氨基部分的部分。所述连接基团的实例包括但不限于，
Figure BDA0003487201460003691
其中n为1至20的整数(例如，n为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)。
在一些实施方案中，可包含包括羧酸部分及氨基部分的部分的连接基团(诸如本文所述者)可进一步官能化以含有一个或多个额外官能团。所述连接基团可进一步官能化，例如以提供与Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽的附接点(例如，借助于接头，诸如PEG接头)。
在一些实施方案中，当所述gp120结合剂附接于Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽时，连接基团可包含包括由1至25个原子间隔的两个或氨基部分(例如，二氨基部分)的部分。所述连接基团的实例包括但不限于：
Figure BDA0003487201460003701
其中n为1至20的整数(例如，n为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)。
在一些实施方案中，可包括二氨基部分的连接基团(诸如本文所述者)可进一步官能化以含有一个或多个额外官能团。所述二氨基连接基团可进一步官能化，例如以提供与Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽的附接点(例如，借助于接头，诸如PEG接头)。
在一些实施方案中，含有叠氮基的分子可用于形成接头，其中所述叠氮基可与炔进行环加成以形成1,2,3-三唑连接。在一些实施方案中，含有炔基的分子可用于形成接头，其中所述炔基可与叠氮化物进行环加成以形成1,2,3-三唑连接。在一些实施方案中，含有马来酰亚胺基的分子可用于形成接头，其中所述马来酰亚胺基可与半胱氨酸反应以形成C-S连接。在一些实施方案中，含有一个或多个卤烷基的分子可用于形成接头，其中所述卤烷基可与gp120结合剂形成共价连接，例如C-N及C-O连接。
在一些实施方案中，接头(L或L’)可包含源于例如合成聚合物(例如，聚乙二醇(PEG)聚合物)的合成基团。在一些实施方案中，接头可包含一个或多个氨基酸残基。在一些实施方案中，接头可为氨基酸序列(例如，1-25个氨基酸、1-10个氨基酸、1-9个氨基酸、1-8个氨基酸、1-7个氨基酸、1-6个氨基酸、1-5个氨基酸、1-4个氨基酸、1-3个氨基酸、1-2个氨基酸或1个氨基酸的序列)。在一些实施方案中，接头(L或L’)可包括一个或多个任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C1-C20亚杂烷基(例如，PEG单元)、任选取代的C2-C20亚烯基(例如，C2亚烯基)、任选取代的C2-C20亚杂烯基、任选取代的C2-C20亚炔基、任选取代的C2-C20亚杂炔基、任选取代的C3-C20亚环烷基(例如，亚环丙基、亚环丁基)、任选取代的C2-C20亚杂环烷基、任选取代的C4-C20亚环烯基、任选取代的C4-C20亚杂环烯基、任选取代的C8-C20亚环炔基、任选取代的C8-C20亚杂环炔基、任选取代的C5-C15亚芳基(例如，C6亚芳基)、任选取代的C3-C15亚杂芳基(例如，咪唑、吡啶)、O、S、NRi(Ri为H、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C1-C20杂烷基、任选取代的C2-C20烯基、任选取代的C2-C20杂烯基、任选取代的C2-C20炔基、任选取代的C2-C20杂炔基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C4-C20环烯基、任选取代的C4-C20杂环烯基、任选取代的C8-C20环炔基、任选取代的C8-C20杂环炔基、任选取代的C5-C15芳基或任选取代的C3-C15杂芳基)、P、羰基、硫羰基、磺酰基、磷酸酯基、磷酰基或亚氨基。
缀合化学
gp120结合剂单体或二聚体(例如，在式(1)、(2)、(D-I)-(D-XVII)或(M-I)-(M-XVII)中任一者的缀合物中)可例如借助于接头，通过本领域技术人员已知的任何标准缀合化学缀合于Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽。特定地涵盖以下缀合化学，例如关于使PEG接头(例如，官能化PEG接头)缀合于Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽。
使用接头使缀合物中的两种或更多种组分共价缀合可使用熟知有机化学合成技术及方法来实现。两种组分上的互补官能团可彼此反应以形成共价键。互补反应性官能团的实例包括但不限于例如马来酰亚胺及半胱氨酸、胺及经活化羧酸、硫醇及马来酰亚胺、经活化磺酸及胺、异氰酸酯及胺、叠氮化物及炔以及烯烃及四嗪。与多肽(例如，Fc结构域单体、Fc结构域、Fc结合肽、白蛋白或白蛋白结合肽)的位点特异性缀合可使用所属领域中已知的技术来实现。用于使小分子位点特异性缀合于Fc结构域的例示性技术提供于Agarwall.P.,等人Bioconjugate Chem.26:176-192(2015)中。
能够与氨基反应的官能团的其他实例包括例如烷基化剂及酰化剂。代表性烷基化剂包括：(i)α-卤基乙酰基，例如XCH2CO-(其中X＝Br、Cl或I)；(ii)N-马来酰亚胺基，其可经由Michael类型反应或经由通过增加环羰基进行酰化而与氨基反应；(iii)芳基卤化物，例如硝基卤基芳族基团；(iv)烷基卤化物；(v)能够与氨基形成席夫氏碱的醛或酮；(vi)可与氨基、巯基或酚式羟基反应的环氧化物，例如表氯醇及双环氧乙烷；(vii)含氯s-三嗪，其可对诸如氨基、巯基及羟基的亲核试剂具反应性；(viii)氮丙啶，其可通过开环对诸如氨基的亲核试剂具反应性；(ix)方酸二乙酯；及(x)α-卤基烷基醚。
氨基反应性酰化剂的实例包括例如(i)异氰酸酯及异硫氰酸酯；(ii)磺酰氯；(iii)酰基卤；(iv)活性酯，例如硝基苯酯或N-羟基丁二酰亚胺酯；(v)酸酐，例如混合、对称或N-羧基酐；(vi)酰基叠氮化物；及(vii)酰亚胺酯。醛及酮可与胺反应以形成席夫氏碱，席夫氏碱可经由还原胺化稳定化。
应理解，某些官能团可在反应之前转化为其他官能团，例如以赋予额外反应性或选择性。适用于此目的的实例包括使用诸如二羧酸酐的试剂使胺转化为羧基；使用诸如N-乙酰基高半胱氨酸硫内酯、S-乙酰基巯基丁二酸酐、2-亚氨基硫杂环戊烷或含硫醇的丁二酰亚胺基衍生物的试剂使胺转化为硫醇；使用诸如α-卤基乙酸酯的试剂使硫醇转化为羧基；使用诸如乙烯亚胺或2-溴乙胺的试剂使硫醇转化为胺；使用诸如碳化二亚胺的试剂、随后二胺使羧基转化为胺；及使用诸如甲苯磺酰氯的试剂、随后用硫代乙酸酯进行酯基转移且用乙酸钠水解为硫醇而使醇转化为硫醇。
在一些实施方案中，本发明的接头(例如L或L’，诸如D-L-I的LC)缀合(例如，通过本文所述的任何方法)于E(例如，Fc结构域单体、Fc结构域或白蛋白)。在本发明的优选实施方案中，所述接头借助于以下进行缀合：(a)硫脲连接(即，-NH(C＝S)NH-)于E的赖氨酸；(b)氨基甲酸酯连接(即，-NH(C＝O)-O)于E的赖氨酸；(c)在赖氨酸与E之间通过还原胺化实现的胺连接(即，-NHCH2)；(d)酰胺(即，-NH-(C＝O)CH2)于E的赖氨酸；(e)接头的马来酰亚胺至E的半胱氨酸之间的半胱氨酸-马来酰亚胺结合；(f)在接头与E的碳水化合物(例如，Fc结构域单体或Fc结构域的糖基)之间通过还原胺化实现的胺连接(即，-NHCH2)；(g)再桥接半胱氨酸结合，其中所述接头缀合于E的两个半胱氨酸；(h)在接头与E的碳水化合物(例如，Fc结构域单体或Fc结构域的糖基)之间的肟连接；(i)在接头与E的氨基酸残基之间的肟连接；(j)在接头与E之间的叠氮基连接；(k)接头直接酰化为E；或(l)在接头与E之间的硫醚连接。
在一些实施方案中，接头缀合于E，其中所述连接包括结构-NH(C＝NH)X-，其中X为O、HN或键。在一些实施方案中，接头缀合于E，其中在接头的剩余部分与E之间的连接包括结构-NH(C＝O)NH-。
在一些实施方案中，接头缀合于E，其中连接包括结构-R9OR9C(＝O)NH-，其中R9为H、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C5-C15芳基或任选取代的C2-C15杂芳基。在一些实施方案中，接头缀合于E，其中在接头的剩余部分与E之间的连接包括结构–CH2OCH2C(＝O)NH-。
例示性连接策略(例如，用于使gp120结合剂的单体或二聚体连接于E的方法，诸如借助于接头)进一步描绘于图1至4及14中。
在一些实施方案中，接头(例如活性酯，例如硝基苯酯或N-羟基丁二酰亚胺酯或其衍生物(例如，官能化PEG接头(例如，叠氮基-PEG2-PEG40-NHS酯)缀合于E，其中T(例如，DAR)在0.5与10.0之间，例如约0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8.0、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9或10.0。在这些情况下，E-(PEG2-PEG40)-叠氮化物可经由点击缀合与具有末端炔接头(例如L或L’，诸如D-L-I的LC)的Int反应。在点击缀合期间，铜催化的叠氮化物(例如，Fc-(PEG2-PEG40)-叠氮化物)与炔(例如，具有末端炔接头(例如L或L’，诸如D-L-I的LC的Int)的反应形成5元杂原子环。在一些实施方案中，缀合于E的接头为末端炔且缀合于具有末端叠氮化物的Int。E-(PEG2-PEG40)-叠氮化物的制备的例示性制备描述于实施例2、3及12中。本领域技术人员应容易了解来自点击化学缀合的最终产物。
例示性连接策略(例如，用于使神经氨酸酶抑制剂的单体或二聚体连接于E的方法，诸如借助于接头)进一步描绘于图1至4及14中。
VI.组合疗法
抗病毒剂
在一些实施方案中，一种或多种抗病毒剂可与本文所述的缀合物(例如，式(1)、(2)、(D-I)-(D-XVII)或(M-I)-(M-XVII)中任一者的缀合物)组合施用(例如，实质上同时施用(例如，在同一药物组合物中或在独立药物组合物中)或在不同时间独立地施用)。
在一些实施方案中，所述抗病毒剂是用于治疗HIV的抗病毒剂。例如，抗病毒剂可以是核苷/核苷酸逆转录酶抑制剂、gp120抑制剂、聚合酶抑制剂或融合蛋白抑制剂。所述抗病毒剂可靶向病毒或宿主受试者。用于治疗HIV的抗病毒剂与本文所述的缀合物(例如，式(1)、(2)、(D-I)-(D-XVII)或(M-I)-(M-XVII))组合使用，其可以选自整合酶抑制剂(例如，度鲁特韦(dolutegravir)、埃替格韦(elvitegravir)或雷特格韦(raltegravir))、核苷逆转录酶抑制剂(NRTI)(例如，阿巴卡韦(abacavir)、拉米夫定(lamivudine)、齐多夫定(zidovudine)、恩曲他滨(emtricitabine)、替诺福韦(tenofovir)、恩曲他滨、去羟肌苷(didanosine)或司他夫定(stavudine))、非核苷逆转录酶抑制剂(NNRTI)(例如，依法韦仑(efavirenz)、依曲韦林(etravirine)、奈韦拉平(nevirapine)、利匹韦林(rilpivirine)或地拉韦定(delavirdine))、蛋白酶抑制剂(例如，阿扎那韦(atazanavir)、可比司他(cobicistat)、达芦那韦(darunavir)、可比司他、洛匹那韦(lopinavir)、利托那韦(ritonavir)、福沙那韦(fosamprenavir)、替拉那韦(tipranavir)、奈非那韦(nelfinavir)、茚地那韦(indinavir)或沙奎那韦(saquinavir))、病毒进入抑制剂(例如，恩夫韦肽(enfuviritide))、CCR5拮抗剂(例如，马拉韦罗(maraviroc))或CYP3A抑制剂(例如，可比司他或利托那韦)，或靶向宿主或病毒基因的siRNA，或其前药，或其药学上可接受的盐。
抗病毒疫苗
在一些实施方案中，本文所述的缀合物中任一者(例如，式(1)、(2)、(D-I)-(D-XVII)或(M-I)-(M-XVII)中任一者的缀合物)与抗病毒疫苗(例如，在针对病毒的受试者中引起免疫反应的组合物)组合施用。所述抗病毒疫苗可与所述缀合物实质上同时施用(例如，在同一药物组合物中或在独立药物组合物中)，或可在所述缀合物之前或之后(例如，在1天、2天、5天、1周、2周、3周、1个月、2个月、6个月或12个月或更久时期内)经施用。
在一些实施方案中，所述病毒疫苗包括在所述受试者中引起针对HIV-1或HIV-2的免疫反应的免疫原。在一些实施方案中，所述疫苗呈鼻内喷雾剂形式经施用。
VII.方法
本文所述的方法包括例如进行保护以抵御或治疗受试者的病毒感染(例如，HIV感染)的方法及预防、稳定化或抑制病毒粒子的生长的方法。治疗受试者的病毒感染(例如，HIV感染)的方法包括向所述受试者施用本文所述的缀合物(例如，式(1)、(2)、(D-I)-(D-XVII)或(M-I)-(M-XVII)中任一者的缀合物)或其药物组合物。在一些实施方案中，所述病毒感染是由人类免疫缺陷病毒(例如，HIV-1或HIV-2)引起。在一些实施方案中，所述病毒感染是由抗性病毒菌株引起。预防、稳定化或抑制病毒粒子的生长或预防病毒的复制及扩散的方法包括使所述病毒或易经受病毒生长的位点与本文所述的缀合物(例如，式(1)、(2)、(D-I)-(D-XVII)或(M-I)-(M-XVII)中任一者的缀合物)或其药物组合物接触。
此外，本文所述的方法也包括通过向受试者施用本文所述的缀合物(例如，式(1)、(2)、(D-I)-(D-XVII)或(M-I)-(M-XVII)中任一者的缀合物)来进行保护以抵御或治疗受试者的病毒感染的方法。在一些实施方案中，所述方法进一步包括向所述受试者施用抗病毒剂或抗病毒疫苗。
本文所述的方法也包括通过向受试者施用(1)本文所述的缀合物(例如，式(1)、(2)、(D-I)-(D-XVII)或(M-I)-(M-XVII)中任一者的缀合物)及(2)抗病毒剂或抗病毒疫苗来进行保护以抵御或治疗所述受试者的病毒感染的方法。本文所述的方法也包括通过使病毒或易经受病毒生长的位点与(1)本文所述的缀合物(例如，式(1)、(2)、(D-I)-(D-XVII)或(M-I)-(M-XVII)中任一者的缀合物)及(2)抗病毒剂或抗病毒疫苗接触来预防、稳定化或抑制病毒粒子的生长或预防病毒的复制或扩散的方法。
在一些实施方案中，首先施用本文所述的缀合物(例如，式(1)、(2)、(D-I)-(D-XVII)或(M-I)-(M-XVII)中任一者的缀合物)，随后单独施用抗病毒剂或抗病毒疫苗。在一些实施方案中，首先施用抗病毒剂或抗病毒疫苗，随后单独施用本文所述的缀合物。在一些实施方案中，实质上同时施用本文所述的缀合物及抗病毒剂或抗病毒疫苗(例如，在同一药物组合物中或在独立药物组合物中)。在一些实施方案中，首先施用本文所述的缀合物或抗病毒剂或抗病毒疫苗，随后实质上同时施用本文所述的缀合物及抗病毒剂或抗病毒疫苗(例如，在同一药物组合物中或在独立药物组合物中)。在一些实施方案中，首先实质上同时施用本文所述的缀合物及抗病毒剂或抗病毒疫苗(例如，在同一药物组合物中或在独立药物组合物中)，随后单独施用本文所述的缀合物或抗病毒剂或抗病毒疫苗。在一些实施方案中，当本文所述的缀合物(例如，式(1)、(2)、(D-I)-(D-XVII)或(M-I)-(M-XVII)中任一者的缀合物)及抗病毒剂或抗病毒疫苗合起来(例如，在同一或独立药物组合物中实质上同时，或在同一治疗方案中独立地)经施用时，所述缀合物及所述抗病毒剂或抗病毒疫苗中每一者对病毒复制的抑制可大于(例如，在较低浓度下出现)当在治疗方案中单独使用每一者时所述缀合物及所述抗病毒剂或抗病毒疫苗中每一者对病毒复制的抑制。
VIII.药物组合物及制剂
本文所述的缀合物可被调配于用于本文所述的方法的药物组合物中。在一些实施方案中，本文所述的缀合物可单独被调配于药物组合物中。在一些实施方案中，本文所述的缀合物可与抗病毒剂或抗病毒疫苗组合被调配于药物组合物中。在一些实施方案中，所述药物组合物包括本文所述的缀合物(例如，由式(1)、(2)、(D-I)-(D-XVII)或(M-I)-(M-XVII)中任一者描述的缀合物)及药学上可接受的载剂及赋形剂。
所述药物组合物中可接受的载剂及赋形剂在所用的剂量及浓度下对接受者无毒。可接受的载剂及赋形剂可包括缓冲液，诸如磷酸盐、柠檬酸盐、HEPES及TAE；抗氧化剂，诸如抗坏血酸及蛋氨酸；防腐剂，诸如氯化六烃季铵、十八烷基二甲基苯甲基氯化铵、间苯二酚及苯扎氯铵；蛋白质，诸如人血清白蛋白、明胶、右旋糖苷及免疫球蛋白；亲水性聚合物，诸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸残基，诸如甘氨酸、谷氨酰胺、组氨酸及赖氨酸；及碳水化合物，诸如葡萄糖、甘露糖、蔗糖及山梨糖醇。
其他赋形剂的实例包括但不限于抗粘剂、粘合剂、包衣、压缩助剂、崩解剂、染料、润肤剂、乳化剂、填充剂(稀释剂)、成膜剂或包衣、调味剂、芳香剂、助流剂(流动增强剂)、润滑剂、吸附剂、悬浮或分散剂或甜味剂。例示性赋形剂包括但不限于：丁基化羟基甲苯(BHT)、碳酸钙、磷酸钙(一氢)、硬脂酸钙、交联羧甲纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮、柠檬酸、交联聚维酮、半胱氨酸、乙基纤维素、明胶、羟基丙基纤维素、羟基丙基甲基纤维素、乳糖、硬脂酸镁、麦芽糖醇、甘露糖醇、蛋氨酸、甲基纤维素、对羟基苯甲酸甲酯、微晶纤维素、聚乙二醇、聚维酮、预胶凝淀粉、对羟基苯甲酸丙酯、视黄醇棕榈酸酯、虫胶、二氧化硅、羧基甲基纤维素钠、柠檬酸钠、乙醇酸淀粉钠、山梨糖醇、淀粉(玉米)、硬脂酸、硬脂酸、蔗糖、滑石、二氧化钛、维他命A、维他命E、维他命C及木糖醇。
本文中的缀合物可具有可离子化基团以便能够呈药学上可接受的盐形式制备。这些盐可为涉及无机或有机酸的酸加成盐，或所述盐在本文中的缀合物的酸性形式的情况下可由无机或有机碱制备。所述缀合物经常地呈药学上可接受的盐形式经制备或使用，所述药学上可接受的盐呈药学上可接受的酸或碱的加成产物形式经制备。合适的药学上可接受的酸及碱为本领域中熟知的，诸如用于形成酸加成盐的盐酸、硫酸、氢溴酸、乙酸、乳酸、柠檬酸或酒石酸，及用于形成碱式盐的氢氧化钾、氢氧化钠、氢氧化铵、咖啡因、多种胺及其类似物。用于制备适当盐的方法为本领域中充分确立的。
代表性酸加成盐包括但不限于乙酸盐、己二酸盐、褐藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、本甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙烷磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢溴酸盐、盐酸盐、氢碘酸盐、2-羟基-乙烷磺酸盐、乳糖酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、己烷磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟碱酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、特戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、丁二酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐、十一烷酸盐及戊酸盐。代表性碱金属或碱土金属盐包括但不限于钠、锂、钾、钙及镁；以及无毒铵、四级铵及胺阳离子，包括但不限于铵、四甲基铵、四乙基铵、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺及乙胺。
视施用途径及剂量而定，用于本文所述的方法中的本文中的缀合物或其药物组合物将被调配成合适药物组合物以允许容易递送。缀合物(例如，式(1)、(2)、(D-I)-(D-XVII)或(M-I)-(M-XVII)中任一者的缀合物)或其药物组合物可被调配以肌肉内、静脉内(例如，呈无菌溶液形式且在适用于静脉内使用的溶剂系统中)、皮内、动脉内、腹膜内、病变内、颅内、关节内、前列腺内、胸膜内、气管内、鼻内、玻璃体内、阴道内、直肠内、经表面、肿瘤内、经腹膜、皮下、结膜下、囊内、经粘膜、心包内、脐内、眼内、经口(例如，片剂、胶囊、囊片、囊形片或糖浆)、经表面(例如，呈乳膏、凝胶、洗剂或软膏形式)、经局部、通过吸入、通过注射或通过输注(例如，连续输注、直接地浸泡靶标细胞的局部灌注、导管、灌洗、呈乳膏或脂质组合物形式)经施用。视施用途径而定，本文中的缀合物或其药物组合物可呈例如片剂、胶囊、丸剂、散剂、颗粒剂、悬浮液、乳液、溶液、凝胶(包括水凝胶)、糊剂、软膏、乳膏、膏药、灌药、渗透递送器件、栓剂、灌肠剂、可注射剂、植入物、喷雾剂、适用于离子导入递送的制剂或气雾剂的形式。所述组合物可根据常规药物规范进行调配。
本文所述的缀合物可以本领域中已知的多种方式进行调配。关于用作人及动物受试者的治疗，本文所述的缀合物可被调配为药物或兽医学组合物。视待治疗的受试者(例如，人)、施用方式及所需治疗类型(例如，预防或疗法)而定，本文所述的缀合物以与这些参数一致的方式进行调配。所述技术的概述发现于Remington:The Science and Practiceof Pharmacy,第22版,Lippincott Williams&Wilkins(2012)；及Encyclopedia ofPharmaceutical Technology,第4版,J.Swarbrick及J.C.Boylan,Marcel Dekker,NewYork(2013)中，所述文献各自以引用的方式并入本文中。
调配物可以适用于全身性施用或表面或局部施用的方式经制备。全身性调配物包括经设计用于注射(例如，肌肉内、静脉内或皮下注射)的那些调配物，或可被制备用于经皮、经粘膜或经口施用。所述调配物一般将包括稀释剂以及在一些情况下佐剂、缓冲液及防腐剂。所述缀合物也可呈脂质粒组合物形式或呈微乳液形式经施用。全身性施用也可包括相对非侵袭性方法，诸如使用栓剂、经皮贴片、经粘膜递送及鼻内施用。经口施用也适用于本文中的缀合物。合适形式包括糖浆、胶囊及片剂，如本领域中应理解。
所述药物组合物可呈可注射调配物形式非经肠施用。用于注射的药物组合物可使用无菌溶液或任何药学上可接受的液体作为媒介物进行调配。调配物可被制备为适用于在注射之前溶解或悬浮于液体中的固体形式或经制备为乳液。药学上可接受的媒介物包括但不限于无菌水、生理食盐水及细胞培养基(例如，杜氏改良伊格尔培养基(DMEM)、α改良伊格尔培养基(α-MEM)、F-12培养基)。所述可注射组合物也可含有一定量的无毒辅助物质，诸如湿润或乳化剂、pH缓冲剂，诸如乙酸钠及山梨醇酐单月桂酸酯。调配方法为本领域中已知的，参见例如Pharmaceutical Preformulation and Formulation,第2版,M.Gibson,Taylor&Francis Group,CRC Press(2009)。
所述药物组合物可呈经口调配物形式经制备。用于经口使用的调配物包括含有活性成分与无毒药学上可接受的赋形剂的混合物的片剂。这些赋形剂可为例如惰性稀释剂或填充剂(例如，蔗糖、山梨糖醇、糖、甘露糖醇、微晶纤维素、包括马铃薯淀粉在内的淀粉、碳酸钙、氯化钠、乳糖、磷酸钙、硫酸钙或磷酸钠)；造粒及崩解剂(例如，包括微晶纤维素在内的纤维素衍生物、包括马铃薯淀粉在内的淀粉、交联羧甲纤维素钠、褐藻酸盐或褐藻酸)；粘合剂(例如，蔗糖、葡萄糖、山梨糖醇、阿拉伯胶、褐藻酸、褐藻酸钠、明胶、淀粉、预胶凝淀粉、微晶纤维素、硅酸镁铝、羧基甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟基丙基甲基纤维素、乙基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮或聚乙二醇)；及润滑剂、助流剂及抗粘剂(例如，硬脂酸镁、硬脂酸锌、硬脂酸、二氧化硅、氢化植物油或滑石)。用于经口使用的调配物也可呈可咀嚼片剂形式，或呈硬明胶胶囊形式，其中活性成分与惰性固体稀释剂(例如，马铃薯淀粉、乳糖、微晶纤维素、碳酸钙、磷酸钙或高岭土)混合，或呈软明胶胶囊形式，其中活性成分与水或油介质(例如，花生油、液体石蜡或橄榄油)混合。散剂、颗粒剂及集结粒可使用上文关于片剂及胶囊所提及的成分以常规方式使用例如混合器、流体床装置或喷雾干燥设备经制备。
用于经口调配物的其他药学上可接受的赋形剂包括但不限于着色剂、调味剂、增塑剂、保湿剂及缓冲剂。用于经口使用的调配物也可呈可咀嚼片剂形式，或呈硬明胶胶囊形式，其中活性成分与惰性固体稀释剂(例如，马铃薯淀粉、乳糖、微晶纤维素、碳酸钙、磷酸钙或高岭土)混合，或呈软明胶胶囊形式，其中活性成分与水或油介质(例如，花生油、液体石蜡或橄榄油)混合。散剂、颗粒剂及集结粒可使用上文关于片剂及胶囊所提及的成分以常规方式使用例如混合器、流体床装置或喷雾干燥设备经制备。
本文所述的缀合物(例如，式(1)、(2)、(D-I)-(D-XVII)或(M-I)-(M-XVII)中任一者的缀合物)或其药物组合物的溶解或扩散控制释放可通过所述缀合物的片剂、胶囊、集结粒或颗粒剂调配物的适当涂布，或通过将所述缀合物掺入至适当基质中来实现。控制释放包衣可包括上文所提及的涂布物质及/或例如虫胶、蜂蜡、葡萄糖蜡、蓖麻蜡、巴西棕榈蜡、硬脂醇、单硬脂酸甘油酯、二硬脂酸甘油酯、硬脂酸棕榈酸甘油酯、乙基纤维素、丙烯酸系树脂、dl-聚乳酸、乙酸丁酸纤维素、聚氯乙烯、聚乙酸乙烯酯、乙烯基吡咯烷酮、聚乙烯、聚甲基丙烯酸酯、甲基丙烯酸甲酯、2-羟基甲基丙烯酸酯、甲基丙烯酸酯水凝胶、1,3丁二醇、乙二醇甲基丙烯酸酯及/或聚乙二醇中的一或多者。在控制释放基质调配物中，基质材料也可包括例如氢化甲基纤维素、巴西棕榈蜡及硬脂醇、卡伯波934、硅酮、三硬脂酸甘油酯、丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸甲酯、聚氯乙烯、聚乙烯及/或卤代碳氟化合物。
所述药物组合物可如所需呈单位剂型形成。包括于所述药物组合物中的活性组分(例如，本文所述的缀合物(例如，式(1)、(2)、(D-I)-(D-XVII)或(M-I)-(M-XVII))的量使得提供在指定范围内的合适剂量(例如，在0.01-100mg/kg体重范围内的剂量)。
IX.施用途径及剂量
在本文所述的任何方法中，本文中的缀合物可通过用于治疗或提供保护以抵御病毒感染(例如，HIV感染)，或用于预防、稳定化或抑制病毒(例如，HIV病毒)的增殖或扩散的任何适当途径经施用。本文所述的缀合物可用药学上可接受的稀释剂、载剂或赋形剂施用至人、家养宠物、家畜或其他动物。在一些实施方案中，施用包括经肌肉内、静脉内(例如，呈无菌溶液形式且在适用于静脉内使用的溶剂系统中)、皮内、动脉内、腹膜内、病变内、颅内、关节内、前列腺内、胸膜内、气管内、鼻内、玻璃体内、阴道内、直肠内、经表面、肿瘤内、经腹膜、皮下、结膜下、囊内、经粘膜、心包内、脐内、眼内、经口(例如，片剂、胶囊、囊片、囊形片或糖浆)、经表面(例如，呈乳膏、凝胶、洗剂或软膏形式)、经局部、通过吸入、通过注射或通过输注(例如，连续输注、直接地浸泡靶标细胞的局部灌注、导管、灌洗、呈乳膏或脂质组合物形式)施用本文所述的缀合物(例如，式(1)、(2)、(D-I)-(D-XVII)或(M-I)-(M-XVII)中任一者的缀合物)或组合物中任一者。在一些实施方案中，若除了本文所述的缀合物以外也施用抗病毒剂，则所述抗病毒剂或其药物组合物也可以本文所述的施用途径中任一者经施用。
本文所述的缀合物(例如，式(1)、(2)、(D-I)-(D-XVII)或(M-I)-(M-XVII)或其药物组合物的剂量取决于如下因素，包括施用途径、待治疗的疾病(例如，病毒感染的程度及/或病状)及物理特征，例如受试者的年龄、重量、一般健康状况。典型地，含于单一剂量内的所述缀合物或其药物组合物的量可为有效地预防、延迟或治疗病毒感染而不诱导显著毒性的量。药物组合物可包括介于0.01至500mg/kg范围内(例如，0.01、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、1、2、3、4、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、100、150、200、250、300、350、400、450或500mg/kg)且在一更特定实施方案中介于约0.1至约30mg/kg范围内且在一更特定实施方案中介于约1至约30mg/kg范围内的剂量的本文所述的缀合物。在一些实施方案中，当本文所述的缀合物(例如，式(1)、(2)、(D-I)-(D-XVII)或(M-I)-(M-XVII)中任一者的缀合物)及抗病毒剂或抗病毒疫苗组合(例如，在同一或独立药物组合物中实质上同时，或在同一治疗方案中独立地)经施用时，本文所述的缀合物的所需剂量可低于若所述缀合物单独用于治疗方案中时所述缀合物的所需剂量。
本文所述的缀合物(例如，式(1)、(2)、(D-I)-(D-XVII)或(M-I)-(M-XVII)中任一者的缀合物)或其药物组合物可例如每天、每周、每个月、每半年、每年一或多次(例如，1至10次或更多次；1、2、3、4、5、6、7、8、9或10次)，或如医学上必要时经施用至有需要的受试者。剂量可以单一或多剂量方案经提供。施用之间的时间安排可在医学病状改良时减少，或在患者的健康状况下降时增加。施用的剂量及频率可由医师根据诸如感染程度及受试者的不同参数的常规因素经调适。
实施例
提出以下实施例以便向一般技术者提供可如何使用、制备及评估本文所述的组合物及方法的描述，且旨在仅例示本发明而不旨在限制被本发明者视为其发明的发明的范围。
实施例1：制备Fc构建体
构成蛋白构建体的氨基酸(SEQ ID NO:1、3、5、7、9、12及14)的逆翻译通过固相合成来合成。寡核苷酸模板经克隆至pcDNA3.1(Life Technologies,Carlsbad,CA,USA)中的克隆位点BamHI及XhoI(New England Biolabs,Ipswich,MA,USA)处且包括源于人介白素-2或人白蛋白的信号序列。所述pcDNA3.1质粒被转化至Top10大肠杆菌细胞(LifeTech)中。使用
Figure BDA0003487201460003841
HiPure Plasmid Filter Maxiprep试剂盒(LifeTech)对DNA进行扩增，萃取，且纯化。所述质粒DNA使用EXPIFECTAMINETM 293转染试剂盒(LifeTech)根据制造商的方案被递送至HEK-293细胞中。细胞经离心，过滤，且使用MabSelect Sure Resin(GEHealthcare,Chicago,IL,USA)纯化上清液。经纯化分子使用4-12％Bis Tris SDS PAGE凝胶通过将1-2μg每种分子装载至所述凝胶中且使用instant Blue染色进行染色而经分析。每种凝胶包括具有经指示分子量标准的分子量梯。经还原及非还原泳道由“R”及“NR”表示。图5-11显示由分别具有SEQ ID NO:1、3、5、7、9、12及14的序列的Fc结构域单体形成的Fc结构域的非还原及还原SDS-PAGE。
实施例2.合成h-IgG1 Fc-PEG4-叠氮化物
制备DMF/PBS中的0.05M PEG4-叠氮基NHS酯溶液：195.8mg PEG4-叠氮基NHS酯在0℃下溶解于0.500mL DMF中且在0℃下通过添加PBS缓冲液经稀释至9.88mL。使用此溶液，通过调节此PEG4-叠氮基NHS酯溶液的当量数来制备具有多种DAR值的其他PEG4-叠氮基Fc。
制备PEG4-叠氮基Fc：0.05M PEG4-叠氮基NHS酯PBS缓冲溶液(9.88mL，494.0μmol，9.5当量)经添加到h-IgG1 Fc(SEQ ID NO:4)溶液(3027mg在213.0mL的pH 7.4 PBS中，MW约58,200Da，16.5μmol)中且混合物在环境温度下轻柔地经振荡持续2小时。所述溶液通过使用10个离心浓缩机(30,000MWCO，15mL)经浓缩至约1.5mL的体积。粗混合物1:10稀释于PBSpH 7.4中，且再次经浓缩。重复此洗涤程序，共计三次。用此洗涤程序移除小分子试剂。经浓缩Fc-PEG4-叠氮化物(SEQ ID NO:4)用pH 7.4 PBS 1x缓冲液稀释至213.0mL且准备用于点击缀合。经纯化材料使用NANODROPTM UV可见光光谱仪(使用基于h-IgG1的氨基酸序列计算的消光系数)来量化。产率是在纯化之后定量的。
Fc-PEG4-叠氮化物(SEQ ID NO:35)类似地经制备。
实施例3.合成重组小鼠血清白蛋白(MSA)-PEG4-叠氮化物
PEG4-叠氮基NHS酯(98％，81.7μmol，4.5当量，32.4mg在0.3mL的DMF中且用pH 7.4PBS 1x缓冲溶液稀释至1.63mL)经添加到重组小鼠血清白蛋白(SEQ ID NO:71)溶液(1200mg在75.0mL的pH 7.4 PBS中，MW约66,000Da，18.2μmol)中且混合物在环境温度下轻柔地经振荡持续12小时。所述溶液使用离心浓缩机(30,000MWCO)经浓缩至约1.5mL的体积。粗混合物1:10稀释于PBS pH 7.4中，且再次经浓缩。重复此洗涤程序，共计三次。用此洗涤程序移除小分子试剂。经浓缩MSA-PEG4-叠氮化物用pH 7.4 PBS 1x缓冲液稀释至75.0mL且准备用于点击缀合。经纯化材料使用NANODROPTM UV可见光光谱仪(使用基于h-IgG1的氨基酸序列计算的消光系数)来量化。产率是在纯化之后定量的。通过MALDI测定，DAR＝3.5。DAR值可通过类似于h-IgG1 Fc(实施例2)改变PEG4-叠氮基NHS酯的当量数经调节。
实施例4.合成Int-1
Figure BDA0003487201460003861
步骤a.
Figure BDA0003487201460003862
在室温下向(7-溴-4-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-3-基)(氧代)乙酸(2.5g，8.6mmol，描述于J.Med.Chem.2018,61(1):62-80)及苯基(哌啶-4-亚基)乙腈(1.90g，9.5mmol，1.1eq)在DMF(40ml)中的溶液中添加HATU(3.6g，9.5mmol，10.5mmol)及N-甲基吗啉(2.1g，20mmol)。所得溶液在室温下经搅拌1小时，接着浓缩，且通过反相液体色谱法(RPLC)使用以20％至80％乙腈及水洗脱的Isco CombiFlash液体色谱仪使用0.1％TFA作为修饰剂经纯化。产物的产量2.43g，59％。通过LCMS发现的离子：M+H＝479.1。
步骤b.
Figure BDA0003487201460003871
在室温下向来自前一步骤的产物(0.24g，0.5mmol)及4-(4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧戊环-2-基)-1,3-噻唑-2-羧酸甲酯(0.27g，1mmol)在二恶烷(10ml)中的溶液中添加碳酸钾(2M，2ml)、四(三苯基膦)钯(0.065g，0.05mmol)。所得溶液用氮气脱气5分钟，且在油浴中在100℃下经加热过夜。所述溶液经浓缩，且通过反相液体色谱法(RPLC)使用以20％至80％乙腈及水洗脱的Isco CombiFlash液体色谱仪使用0.1％TFA作为修饰剂经纯化。产量0.11g，43.0％。通过LCMS发现的离子：M+H＝528.1。
步骤c.
Figure BDA0003487201460003881
在室温下向来自前一步骤的产物(26mg，0.050mmol)及炔丙基-PEG4-胺(23mg，0.10mmol)在DMF(2ml)中的溶液中添加HATU(38mg，0.10mmol)及N-甲基吗啉(0.07ml，0.50mmol)。所得溶液在室温下经搅拌1小时，接着浓缩，且通过反相液体色谱法(RPLC)使用以20％至80％乙腈及水洗脱的Isco CombiFlash液体色谱仪使用0.1％TFA作为修饰剂经纯化。产物的产量18mg，48％。通过LCMS发现的离子：M+H＝741.3。
实施例5.合成Int-2
Figure BDA0003487201460003882
步骤a.
Figure BDA0003487201460003883
7-溴-4-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶(480mg，1.0mmol)(描述于实施例4(Int-1)中)、碳酸钾(457mg，3.30mmol)、碘化铜(I)(210mg，1.1mmol)、1H-1,2,4-三唑-3-羧酸甲酯(254mg，2mmol)及(1R,2R)-N1,N2-二甲基环己烷-1,2-二胺(160mg，1.1mmol)于1,4-二恶烷(10mL)中的溶液在110℃下经加热持续13小时。反应溶液用水(0.5mL)处理15分钟，接着浓缩且通过反相液体色谱(RPLC)使用以20％至80％乙腈及水洗脱的Isco CombiFlash液体色谱仪使用0.1％TFA作为修饰剂经纯化。产物的产量270mg，51％。通过LCMS发现的离子：M+H＝512.2。
步骤b.
Figure BDA0003487201460003891
在室温下向来自前一步骤的产物(1-{3-[{4-[氰基(苯基)亚甲基]哌啶-1-基}(氧代)乙酰]-4-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-7-基}-1H-1,2,4-三唑-3-羧酸，50mg，0.1mmol)及炔丙基-PEG4-胺(23mg，0.1mmol)在DMF(2ml)中的溶液中添加HATU(38mg，0.1mmol)及N-甲基吗啉(0.07ml，0.5mmol)，且所得溶液在室温下经搅拌持续1小时。所述溶液经浓缩且通过逆相液体色谱法(RPLC)使用以2％至100％乙腈及水洗脱的IscoCombiFlash液体色谱仪用0.1％TFA作为修饰剂经纯化。产物的产量21mg，29.6％。通过LCMS发现的离子：M+H＝725.3。
实施例6.合成Int-3
Figure BDA0003487201460003901
步骤a.
Figure BDA0003487201460003902
炔丙基-Peg2-醇(1.9g，13.2mmol)、N,N'-Di-Boc-1H-吡唑-1-甲脒(3.4g，11.0mmol)及三苯基膦(3.5g，13.2mmol)溶解于THF(20mL)中的溶液经冷却至0℃，且在30分钟内用DIAD(分三份，2.58mL)处理。LCMS显示在室温下2小时之后完全转化。产物通过RPLC(10％乙腈/水至90％乙腈/水)经纯化。产量3.66g，76％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝437.2。
步骤b.
Figure BDA0003487201460003903
向来自前一步骤的产物(1.2g，2.75mmol)及(2-氨基乙基)氨基甲酸叔丁酯(0.44g，2.75mmol)于20ml THF中的溶液中添加4-二甲氨基吡啶(120mg，1mmol)及三乙胺(0.7ml，5mmol)，且经加热至60°℃持续2小时。所得溶液经浓缩且通过反相液体色谱法(RPLC)使用以0％至50％乙腈及水洗脱的Isco CombiFlash液体色谱仪不使用修饰剂经纯化。产量1.1g，76％。通过LCMS发现的离子：M+H＝529.3。
步骤c.
Figure BDA0003487201460003911
前一步骤的产物(1.00g，2.00mmol)在室温下用10ml TFA处理持续0.5小时，接着浓缩至干且无需任何进一步纯化即用于下一步骤。此步骤的产率为定量的。通过LCMS发现的离子：M/2+H＝229.2。
步骤d.
Figure BDA0003487201460003912
类似于实施例4制备标题化合物，其中炔丙基-PEG4胺用来自前一步骤的N-(2-氨基乙基)-N'-(2-{2-[(丙-2-炔-1-基)氧基]-乙氧基}乙基)胍取代。产物的产量15mg，36％。通过LCMS发现的离子：M+H＝738.3。
实施例7.合成Int-4
Figure BDA0003487201460003913
步骤a.
Figure BDA0003487201460003921
向N-(2,3-环氧丙基)邻苯二甲酰亚胺(0.5g，2.5mmol)及炔丙基-PEG4醇(0.7g，3.6mmol)在DCM(20ml)中的溶液中添加三氟化硼乙醚络合物(BF3.Et2O)(1.42g，1.23ml，10mmol)，且所得溶液在40℃下经搅拌持续12小时。粗反应物经浓缩且通过反相液体色谱法(RPLC)使用以10％至80％乙腈及水洗脱的Isco CombiFlash液体色谱仪不使用修饰剂经纯化。产量0.35g，36％。通过LCMS发现的离子：M+H＝392.2。
步骤b.
Figure BDA0003487201460003922
向前一步骤的产物(0.48g，1.2mmol)在甲醇(5ml)中的溶液中添加肼(0.20g，6mmol)，且接着溶液在室温下经搅拌持续过夜。所得溶液经浓缩且通过反相液体色谱法(RPLC)使用以0％至50％乙腈及水洗脱的Isco CombiFlash液体色谱仪不使用修饰剂经纯化。产量0.22g，68.5％。通过LCMS发现的离子：M+H＝262.2。
步骤c.
Figure BDA0003487201460003931
类似于实施例4制备标题化合物，其中PEG-胺组分用来自前一步骤的1-氨基-4,7,10,13-四氧杂十六碳-15-炔-2-醇取代。产物的产量8mg，19.0％。通过LCMS发现的离子：M+H＝771.3。
实施例8.合成缀合物
执行制备PBS缓冲溶液点击试剂中的0.0050M CuSO4。简单来说，10.0mg CuSO4溶解于12.53mL PBS中，接着采用6.00mL此CuSO4溶液且添加51.7mg BTTAA(CAS#1334179-85-9)及297.2mg抗坏血酸钠以得到点击试剂溶液(0.0050M CuSO4、0.020M BTTAA及0.25M抗坏血酸钠)。此点击试剂溶液用于所有后续缀合。
有效载荷点击缀合的一般程序：叠氮基官能化Fc的溶液经添加到含有炔衍生小分子(每个DAR 2当量)的15mL离心管中。在轻柔地振荡以溶解所有固体之后，所述混合物用点击试剂溶液(L-抗坏血酸钠，0.25M，400当量，硫酸铜(II)0.0050M，8当量，及BTTAA 0.020M，32当量)处理。所得混合物在环境温度下轻柔地经旋转持续6小时。其相继通过在蛋白A柱上的亲和力色谱法、尺寸排阻色谱法经纯化(如本文所述)。经纯化最终产物的Maldi TOF分析给出以下表3中所列的平均质量、平均DAR及产率。
表3.缀合物及特性
Figure BDA0003487201460003932
Figure BDA0003487201460003941
*Fc结构域的末端Lys残基可在表达及纯化后经切割，例如SEQ ID NO:64到SEQ IDNO:73
实施例9.用于纯化缀合物的一般程序。
粗混合物1:10稀释于PBS pH 7.4中，且相继使用MabSelect Sure Resin(GEHealthcare,Chicago,IL,USA)、尺寸排阻色谱法经纯化。(HiLoad 26/600Superdex200pg,GE Healthcare,Chicago,IL,USA)。汇集含有经纯化缀合物的洗脱份且使用离心浓缩机(30,000MWCO)经浓缩至大约20mg/mL。经纯化材料使用NANODROPTM UV可见光光谱仪使用基于hIgG1 Fc(myc)的氨基酸序列计算的消光系数来量化。经纯化分子使用4-12％Bis TrisSDS PAGE凝胶通过将1μg每种分子装载至所述凝胶中且使用Instant Blue(Expedeon,SanDiego,CA,USA)进行染色而经分析。每种凝胶包括具有经指示分子量标准的分子量梯。通过Agilent Analytical HPLC计算产量且测定纯度。通过MALDI MS发现产物峰及MW且计算最终DAR。
实施例10.gp120糖蛋白结合分析
Nunc MaxiSorp平底96孔板(12-565-136,Fisher Scientific)用重组HIV-1GP120(SAE0071,Sigma)以PBS(pH 7.4)(10-010-049,Fis her Scientific)中的2μg/mL在4℃下包被过夜(100μL，0.2μg/孔)。板用洗涤缓冲液(PBS 0.05％Tween 20)洗涤(5x300μL)，且用洗涤缓冲液中的1％BSA(A5611-10G，Sigma；200μL/孔)在室温下在轨道微孔板振荡器(BT908,BT LabSystems)上以500rpm封闭持续1小时。去除封闭剂，且孔在室温、振荡下用以1μM开始的缀合物在样品稀释剂(PBS中的0.5％BSA，0.025％Tween 20)中的三倍连续稀释液孵育持续1小时。5x300μL洗涤之后，板用在样品稀释剂中按1:1,000稀释的HRP缀合的驴抗人IgG Fc F(ab')2(709-036-098,J ackson ImmunoResearch)二抗在室温、振荡下孵育持续1小时。接着洗涤板(8x300μL)且在室温下用TMB底物(BD555214,Fisher Scie ntific)显色3-5分钟。用1N H2SO4终止反应，且使用EnSpire多模式读板器(PerkinElmer)在450nm处读取吸光度。使用结合曲线的非线性回归分析(Sigmoidal,4PL)以GraphPad Prism版本8计算半数最大有效浓度(EC50)。多克隆山羊抗GP120 HRP(PA1-73097,Invitrogen)及未缀合的Fc分子分别作为阳性及阴性结合对照运行。结果在图12及表4中提供。
表4.GP120蛋白结合EC50(nM)
Figure BDA0003487201460003951
实施例11.体外细胞融合分析中缀合前中间体(Int)化合物的活性
HIV化合物的活性是在设计以测量细胞-细胞融合抑制的分析中测定的，所述细胞-细胞融合是HIV感染过程中的重要步骤。简单来说，此分析测量了从AIDS研究试剂及参考程序(Research Reagent and Reference Program)(Rockville,MD)获得的两个细胞系HeLa-CD4-LTR-β-Gal(目录#1294)及HL2/3细胞(目录#1294)的融合。HeLa-CD4-LTR-β-Gal细胞一式三份在37℃/5％CO2条件下以每孔5x103个细胞的密度按50μL的体积在50μL的九种化合物连续对数稀释液的情况下铺种持续一小时。孵育后，100μL的HL2/3细胞经添加到板中。培养物在37℃/5％CO2下额外孵育48小时。孵育后，使用化学发光底物评估功效板的β-半乳糖苷酶产生，且用XTT对毒性板染色以评估细胞活力。
在这些研究中，也评估了细胞毒性(TC50)。测试材料源于通过测量四氮唑蓝染料XTT(2,3-双(2-甲氧基-4-硝基-5-磺苯基)-5-[(苯氨基)羰基]-2H-四氮唑蓝氢氧化物)的还原。代谢活性细胞中的XTT被线粒体酶NADPH氧化酶代谢为可溶性甲臜产物。XTT溶液每天制备为RPMI-1640中的1mg/mL的储备液，不含添加剂。在DPBS中制备0.15mg/mL的吩嗪硫酸甲酯(PMS)溶液，且在-20℃下避光保存。XTT/PMS储备液在使用前通过每mL的XTT溶液添加40μL的PMS来立即制备。50μL的XTT/PMS经添加到板的每个孔中，且板在37℃下孵育4小时。已凭经验确定4小时的孵育在XTT染料还原的线性响应范围内，每个分析使用指定的细胞数。板经密封且经倒转若干次以混合可溶性甲臜产物，且用Molecular DevicesSpectraMax Plus 384 96孔板形式分光光度计在450nm(650nm参考波长)处读取板。
此分析鉴定了EC50值在基准化合物(替米沙韦)的10倍以内的若干种化合物(表5)。特别活跃的是EC50小于4nM的Int-1。重要的是，在测试浓度下，任何化合物都没有明显的细胞毒性。nM抑制及无可检测细胞毒性的组合表明这是具有显著治疗潜力的有效系列。
表5.预缀合中间体(Int)化合物的融合抑制活性
Figure BDA0003487201460003971
实施例12.用于合成叠氮基Fc的一般程序
制备DMF/PBS中的PEG4-叠氮基NHS酯溶液(0.050M)：16.75mg PEG4-叠氮基NHS酯在0℃下溶解于0.100mL DMF中且在0℃下通过添加PBS 1x缓冲液经稀释至0.837mL。使用此溶液，通过调节此PEG4-叠氮基NHS酯PBS溶液的当量数来制备具有多种DAR值的其他PEG4-叠氮基Fc。
预处理h-lgG1 Fc，SEQ ID NO:48(107.2mg于8.800mL pH 7.4PBS中，MW约57891Da，1.852μmol)：所述Fc溶液经转移至四个离心浓缩机(30,000MWCO，15mL)中且用PBSx1缓冲液稀释至15mL且经浓缩至约1.5mL的体积。残余物1:10稀释于PBS pH 7.4中，且再次经浓缩。重复此洗涤程序，共计四次，随后稀释至8.80mL。
制备PEG4-叠氮基Fc：0.050M PEG4-叠氮基NHS酯PBS缓冲溶液(0.593mL，29.6μmol，16当量)经添加到以上的h-IgG1 Fc(SEQ ID NO:48)的溶液中且混合物在环境温度下经振荡旋转持续2小时。所述溶液通过使用四个离心浓缩机(30,000MWCO，15mL)经浓缩至约1.5mL的体积。粗混合物1:10稀释于PBS pH 7.4中，且再次经浓缩。重复此洗涤程序，共计三次。经浓缩Fc-PEG4-叠氮化物用pH 7.4 PBS缓冲液稀释至8.80mL且准备用于点击缀合。经纯化材料使用NANODROPTM UV可见光光谱仪(使用基于h-IgG1的氨基酸序列计算的消光系数)来量化。产率是在纯化之后定量的。
实施例13.合成Int-12
Figure BDA0003487201460003981
如以上方案所示，类似于实施例18(Int-17)制备标题化合物。通过LCMS发现的离子：M+H＝1030.5。
实施例14.合成Int-13
Figure BDA0003487201460003982
类似于实施例5(Int-2)制备标题化合物，其中1H-1,2,4-三唑-3-羧酸甲酯在步骤a中用1H-1,2,3-三唑-4-羧酸甲酯取代。通过LCMS发现的离子：M+H＝725.3。
实施例15.合成Int-14
Figure BDA0003487201460003991
步骤a.
Figure BDA0003487201460003992
氯甲酸苄酯(2.4g，14.2mmol)滴加到(L)-半胱氨酸(2g，11.8mmol)及三乙胺(3.6g，35.5mmol)在乙腈/水性碳酸氢钠(40mL)的(1/1)混合物中的冷却至0℃的搅拌混合物中。反应物在0℃下经搅拌持续40分钟，接着通过旋转蒸发去除溶剂。粗材料通过反相液体色谱法(RPLC)使用以5％至95％乙腈/水洗脱的Isco CombiFlash液体色谱仪使用0.1％TFA作为修饰剂经纯化。汇集纯洗脱份且浓缩以提供呈澄清粘性油状物的粗产物。产量2.1g，58％。LC/MS[M-H]-＝302.2。
步骤b.
Figure BDA0003487201460003993
DMF(1mL)中的HATU(451mg，1.2mmol)滴加到来自此实施例的步骤a的产物(300mg，0.99mmol)、1((N-Boc-氨基)乙基)哌嗪(272mg，1.89mmol)及三乙胺(500mg，4.95mmol)在DMF(5mL)中的搅拌混合物中。混合物在环境温度下经搅拌持续45分钟且通过旋转蒸发浓缩。粗材料通过反相液体色谱法(RPLC)使用以5％至95％乙腈/水洗脱的Isco CombiFlash液体色谱仪使用0.1％TFA作为修饰剂经纯化。汇集纯洗脱份且浓缩以提供呈澄清粘性油状物的产物。产量270mg，53％。LC/MS[M+H]+＝515.2。
步骤c.
Figure BDA0003487201460004001
来自步骤b的CBZ保护的中间体(270mg，0.53mmol)在1个大气压的氢气下在5％Pd/C(75mg)的存在下在甲醇(20mL)中经搅拌持续1小时。所述混合物经硅藻土过滤且浓缩以提供呈澄清粘性油状物的产物，其无需纯化即使用。产量200mg，约99％。LC/MS[M+H]+＝381.2。
步骤d.
Figure BDA0003487201460004002
DMF(1mL)中的HATU(240mg，0.63mmol)滴加到来自步骤c的产物(200mg，0.52mmol)、炔丙基-Peg4-羧酸(164mg，0.63mmol)及三乙胺(265mg，2.62mmol)在DMF(3mL)中的搅拌混合物中。混合物在环境温度下经搅拌持续45分钟，接着在旋转蒸发器上经浓缩。粗材料通过反相液体色谱法(RPLC)使用以5％至75％乙腈/水洗脱的Isco CombiFlash液体色谱仪使用0.1％TFA作为修饰剂经纯化。汇集纯洗脱份且浓缩以提供呈澄清粘性油状物的产物TFA盐。产量238mg，73％。LC/MS[M+H]+＝623.4。
Boc保护的中间体(238mg，0.53mmol)在4H HCl(二恶烷中的气体，10mL)中经搅拌持续1小时。通过旋转蒸发移除溶剂。所得油状物经溶解在去离子水中，接着冷冻干燥，得到呈澄清粘性油状物的HCl盐。产量215mg，约99％。LC/MS[M+H]+＝522.4。
步骤e.
Figure BDA0003487201460004011
向来自步骤d的氨基HCl盐(66.1mg，0.12mmol)、酸(描述于实施例5(Int-2)中，60.5mg，0.12mmol)及HATU(69.0mg，0.18mmol)于DMF(3mL)中的溶液中在室温下添加DIEA(0.11mL，0.62mmol)。所述反应混合物在室温下经搅拌持续1小时，接着通过半制备型RPLC(ACCQ，5％至50％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。产量2.5mg，1.7％。通过LCMS发现的离子，[M+2+H]/2＝509.2。
实施例16.合成Int-15
Figure BDA0003487201460004021
步骤a.
Figure BDA0003487201460004022
苯甲醛(2.80g，25.83mmol)及1-N-Boc-1,3-二氨基丙烷(2.99g，16.81mmol)在甲醇(30mL)中的溶液在60℃下经加热持续6小时。冷却至室温之后，分批添加NaBH4(1.91g，49.58mmol)，接着所得溶液经搅拌持续30分钟。反应物经浓缩且用NH4Cl水溶液淬灭，接着用CH2Cl2萃取。有机层经分离且经Na2SO4干燥，过滤，接着经浓缩。残余物通过正相液体色谱法(Isco，0％至10％甲醇及二氯甲烷)经纯化。产量2.99g，67.5％，呈无色油状物。通过LCMS发现的离子，[M+H]+＝265.2。
步骤b.
Figure BDA0003487201460004023
来自步骤a的产物(0.86g，3.26mmol)、2-溴乙基磺酸(1.40g，7.32mmol)及K2CO3(1.35g，9.78mmol)在DMF:H2O(10mL:1mL)中的溶液在70摄氏度下在微波中经加热持续3小时。所述反应混合物经过滤且通过反相液体色谱法(Isco，0％至25％的乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。产量0.94g，77.4％。通过LCMS发现的离子：[M-Boc+H]+＝273.2。
步骤c.
Figure BDA0003487201460004031
将Pd(OH)2(0.18g，0.25mmol)及来自气球的H2馈入来自步骤b.的产物(0.94g，2.52mmol)在甲醇(25mL)中的溶液。反应混合物在室温下经搅拌过夜。反应完成之后，反应混合物通过硅藻土垫经过滤且用甲醇洗涤，接着经浓缩。获得白色泡沫状固体，且无需纯化继续用于下一步骤。产量0.71g，100％。通过LCMS发现的离子，[M+H]+＝283.1。
步骤d.
Figure BDA0003487201460004032
在室温下向来自步骤c.的产物(0.72g，2.55mmol)、炔丙基-PEG-4-酸(0.75g，2.81mmol)及HATU(1.48g，3.83mmol)于DMF(4mL)中的溶液中添加DIEA(1.36mL，7.65mmol)。所得反应物在室温下经搅拌持续2小时，接着通过反相液体色谱法(Isco，0％至30％乙腈及水，不使用修饰剂)经纯化。产量1.04g，69.5％。通过LCMS发现的离子：[M-Boc+H]+＝425.2。
步骤e.
Figure BDA0003487201460004041
来自步骤e的产物(1.04g，1.77mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液用HCl(4N在二恶烷中，2.22mL，8.86mmol)处理。所得溶液在室温下经搅拌直至通过LCMS显示完成脱保护，接着通过旋转蒸发去除溶剂以产生呈HCl盐形式的所需产物。产量0.94g，95％。通过LCMS发现的离子，[M+H]+＝425.2。
步骤f.
Figure BDA0003487201460004042
向来自步骤e的产物(0.37g，0.79mmol)、三唑酸(实施例5(Int-2)中所述，0.31g，0.50mmol)及HATU(0.29g，0.75mmol)在DMF(4mL)中的溶液中添加DIEA(0.41mL，2.29mmol)。所得溶液在室温下经搅拌持续16小时，接着通过半制备型HPLC(5％至35％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。产量0.12g，呈TFA盐形式，26％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝918.1,[M+2+H]/2+＝459.7。
实施例17.合成Int-16
Figure BDA0003487201460004051
步骤a.
Figure BDA0003487201460004052
CBZ-哌嗪(3.8g，17.4mmol)、N-Boc-溴-乙胺(3g，13.4mmol)及二异丙基乙胺(3.5g,26.8mmol)在65℃下在乙腈(30mL)中经搅拌持续18小时。混合物经冷却至室温且浓缩，用去离子水(100mL)稀释且用乙酸乙酯(3x75mL)萃取。经组合的有机萃取物用盐水洗涤且经硫酸钠干燥。粗材料通过硅胶色谱法(DCM中的0％-5％甲醇，30分钟)经纯化。组合纯洗脱份且浓缩以提供呈澄清油状物的产物。产量3.3，67％。LC/MS[M+H]+＝364.2。
步骤b.
Figure BDA0003487201460004053
此实施例的来自步骤a的产物(3.3g，9.1mmol)在1个大气压的氢气下在5％Pd/C(200mg)的存在下在甲醇(30mL)中经搅拌持续2小时。混合物通过硅藻土过滤，且无需进一步纯化即使用。产量2g，约99％。LC/MS[M+H]+＝230.2。
步骤c.
Figure BDA0003487201460004061
来自此实施例的步骤b的产物(0.74g，3.2mmol)、炔丙基-peg4-甲苯磺酸酯(1.9g，4.8mmol)及二异丙基乙胺(0.83g，6.5mmol)在回流下在乙腈(20mL)中经搅拌持续8小时。混合物经冷却且通过反相液体色谱法(RPLC)使用以5％至80％乙腈/水洗脱的IscoCombiFlash液体色谱仪使用0.1％TFA作为修饰剂(30分钟梯度)经纯化。汇集纯洗脱份且浓缩以提供呈浓稠淡黄色油状物的产物。产量0.71g，50％。LC/MS[M+H]+＝444.2。
步骤d.
Figure BDA0003487201460004062
来自此实施例的步骤c的产物(0.71g，1.6mmol)在二恶烷(8mL)中的4N HCl中经搅拌持续1小时。混合物在旋转蒸发器上经浓缩，溶解于去离子水(20mL)中，冷冻且冻干，提供呈HCl盐形式的产物。产量0.75g，99％。LC/MS[M+H]+＝344.2。
步骤e.
Figure BDA0003487201460004071
DMF(1mL)中的HATU(162mg，0.43mmol)在5分钟内滴加到来自步骤d的产物(265mg，0.58mmol)、三唑羧酸支架(200mg，0.38mmol，描述于实施例5(Int-2)中)及二异丙基乙胺(200mg，2.3mmol)在DMF(5mL)中的搅拌混合物中。混合物在环境温度下经搅拌持续2小时，且接着在旋转蒸发器上经浓缩。粗材料在ACQ semi-prep HPLC上以5％至50％乙腈/水用0.1％TFA作为修饰剂(30分钟梯度)经纯化。汇集纯洗脱份且浓缩以提供呈浓稠淡黄色油状物的产物。产量50mg，15％。LC/MS[M+H]+＝837.4。
实施例18.合成Int-17
Figure BDA0003487201460004072
步骤a.
Figure BDA0003487201460004073
向三(羟甲基)-氨基甲烷(1.22g，10mmol)及3-[(苄氧羰基)氨基]-1-丙醛(2.1g，10mmol)在DCM(20mL)及甲醇(10ml)中的溶液中添加乙酸(1ml)。所得溶液在室温下经搅拌持续1小时，接着在剧烈搅拌下用三乙酰氧基硼氢化钠(4.2g，20mmol)处理。此混合物经搅拌过夜，接着经浓缩且通过反相液体色谱法(RPLC)使用以5％至80％乙腈及水洗脱的IscoCombiFlash液体色谱仪用0.1％TFA作为修饰剂经纯化。产物的产量2.3g，72.0％。通过LCMS发现的离子：M+H＝313.2。
步骤b.
Figure BDA0003487201460004081
在室温下向来自前一步骤的产物(0.1g，0.32mmol)及炔丙基-PEG4-酸(130mg，0.5mmol)在DMF(5ml)中的溶液中添加HATU(38mg，0.1mmol)及N-甲基吗啉(0.14ml，1mmol)，且所得溶液在室温下经搅拌持续1小时。所述溶液经浓缩且通过反相液体色谱法(RPLC)使用以10％至100％乙腈及水洗脱的Isco CombiFlash液体色谱仪用0.1％TFA作为修饰剂经纯化。产物的产量120mg，68％。通过LCMS发现的离子：M+H＝554.3。
步骤c.
Figure BDA0003487201460004082
来自前一步骤的产物(0.2g，32mmol)用TFA(3mL)及茴香硫醚(0.2ml)处理，且所得溶液经加热至45℃过夜。所述溶液经浓缩且通过反相液体色谱法(RPLC)使用以10％至100％乙腈及水洗脱的Isco CombiFlash液体色谱仪用0.1％TFA作为修饰剂经纯化。此步骤的产率为定量的。通过LCMS发现的离子：M+H＝421.3。
步骤d.
Figure BDA0003487201460004091
向1-{3-[{4-[氰基(苯基)亚甲基]哌啶-1-基}(氧代)乙酰基]-4-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-7-基}-1H-1,2,4-三唑-3-羧酸(50mg，0.1mmol，在实施例5，Int-2中描述)及来自前一步骤的产物(41mg，0.1mmol)在DMF(2ml)中的溶液中在室温下添加HATU(38mg，0.1mmol)及N-甲基吗啉(0.07ml，0.5mmol)，且所得溶液在室温下经搅拌持续1小时。所述溶液经浓缩且通过反相液体色谱法(RPLC)使用以10％至100％乙腈及水洗脱的IscoCombiFlash液体色谱仪用0.1％TFA作为修饰剂经纯化。产物的产量21mg，24.0％。通过LCMS发现的离子：M+H＝914.4。
实施例19.在体外细胞融合分析中筛选Int及缀合物
Int的活性是在设计以测量细胞-细胞融合抑制的分析中测定的，所述细胞-细胞融合是HIV感染过程中的重要步骤。简单来说，此分析测量了从AIDS研究试剂及参考程序(Rockville,MD)获得的两个细胞系HeLa-CD4-LTR-β-Gal(目录#1294)及HL2/3细胞(目录#1294)的融合。HeLa-CD4-LTR-β-Gal细胞一式三份在37℃/5％CO2条件下以每孔5x103个细胞的密度按50μL的体积在50μL的九种化合物连续半对数稀释液的情况下铺种持续一小时。孵育后，100μL的HL2/3细胞经添加到板中。培养物在37℃/5％CO2下额外孵育48小时。孵育后，使用化学发光底物评估功效板的β-半乳糖苷酶产生，且用XTT对毒性板染色以评估细胞活力。
在这些研究中，也评估了细胞毒性(TC50)。测试材料源于通过测量四氮唑蓝染料XTT(2,3-双(2-甲氧基-4-硝基-5-磺苯基)-5-[(苯氨基)羰基]-2H-四氮唑蓝氢氧化物)的还原。代谢活性细胞中的XTT被线粒体酶NADPH氧化酶代谢为可溶性甲臜产物。XTT溶液每天制备为RPMI-1640中的1mg/mL的储备液，不含添加剂。在DPBS中制备0.15mg/mL的吩嗪硫酸甲酯(PMS)溶液，且在-20℃下避光保存。XTT/PMS储备液在使用前通过每mL的XTT溶液添加40μL的PMS来立即制备。五十μL(50μL)的XTT/PMS经添加到板的每个孔中，且板在37℃下孵育4小时。已凭经验确定4小时的孵育在XTT染料还原的线性响应范围内，每个分析使用指定的细胞数。板经密封且经倒转若干次以混合可溶性甲臜产物，且用Molecular DevicesSpectraMax Plus 384 96孔板形式分光光度计在450nm(650nm参考波长)处读取板。
此分析鉴定了四种化合物，其EC50值大约等于基准化合物(替米沙韦)(表6)。这些化合物在抑制细胞融合方面非常有效，EC50值小于0.9nM。这些化合物中的一者Int-17在与hIgG1 Fc(缀合物5)缀合后也没有表现出明显的活性损失；这是一个重要的发现。最后，在本研究中测试的浓度下，没有化合物显示出细胞毒性。因此，对于大多数活性化合物，EC50与细胞毒性之间的差异大于10,000倍。先前的融合抑制研究还鉴定了若干种高活性化合物(Int-2及Int-4)。然而，两种化合物在缀合(分别为缀合物2及缀合物3)后都失去了显著的效力，进一步强调了缀合物4的重要性。
表6.HIV抑制剂化合物的融合抑制活性
Figure BDA0003487201460004101
Figure BDA0003487201460004111
实施例20.合成DMJ-II-121
Figure BDA0003487201460004112
步骤a.
Figure BDA0003487201460004113
(1S,2R)-(-)-顺-1-氨基-2-茚满醇(2.98g，20mmol)通过用热风枪加热溶解在无水DMF(10ml)中。溶液冷却至室温之后，添加无水THF(20ml)及DIPEA(2.59g，20mmol)。向此充分搅拌的溶液中缓慢添加二碳酸二叔丁酯(5.46g，25mmol)。添加后，形成白色凝胶且手动将其破碎成小块。在室温下经搅拌2小时之后，反应物变成澄清溶液。接着用水(50ml)及己烷(50ml)萃取。水层用EtOAc(50ml)进行反萃取。经组合的有机层经Na2SO4干燥且通过旋转蒸发经浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法(120g柱，10％至45％EtOAc/己烷)经纯化。产量4.97g，99.7％。通过LCMS发现的离子：[M-Boc]+＝150,[M-H]-＝248.9。
步骤b.
Figure BDA0003487201460004121
步骤-a产物(4.97g，19.94mmol)溶解于无水DCM(30ml)中。在冰水浴中冷却之后，溶液用DIPEA(5.17g，40mmol)处理，然后缓慢添加甲磺酰氯(2.75g，24mmol)。反应混合物在0℃至室温下经搅拌过夜，接着用水(30ml)萃取。有机层经Na2SO4干燥，通过旋转蒸发经浓缩，且进一步在高真空下干燥。粗产物(6.24g)无需进一步纯化继续用于后续步骤。通过LCMS发现的离子：[M-Boc]+＝228。
步骤c.
Figure BDA0003487201460004122
步骤-b中的粗产物(假设为19.94mmol)溶解在无水DMSO(20ml)中。添加氰化钾(6.51g，100mmol)，且所得混合物在80℃下经加热持续20小时。所得混合物接着经冷却至室温且用EtOAc(70ml)及己烷(100ml)稀释。过滤出所述固体且用EtOAc洗涤。滤液接着用水(50ml x 4)萃取。经组合的有机层通过旋转蒸发经浓缩，接着通过硅胶柱色谱法(220g柱，5％至30％EtOAc/己烷)经纯化。经两个步骤，产量2.34g，45.4％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝259.2。
步骤d.
Figure BDA0003487201460004131
经火焰干燥的反应烧瓶用氮气吹扫且馈入步骤-c产物(2.18g，8.44mmol)及无水THF(12mL)。溶液在冰水浴中冷却，接着用LiAlH4(1.0M在THF中，8.5ml，8.5mmol)逐滴处理。所得混合物在0℃至室温下经搅拌持续1.5小时。所得混合物接着在冰水浴中经冷却且用KOH(940mg，16.8mmol)在水(15ml)中的溶液缓慢处理。过滤出所述固体且用EtOAc洗涤。滤液用水(30ml)萃取。有机层经Na2SO4干燥，通过旋转蒸发经浓缩，且进一步在高真空下干燥。2.27g的粗产物无需进一步纯化继续用于后续步骤。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝263。
步骤e.
Figure BDA0003487201460004132
来自步骤-d的粗产物(2.27g，假设为8.44mmol)溶解于无水DCM(20ml)中，用DIPEA(1.16g，8.44mmol)及N-(苄氧羰基氧基)琥珀酰亚胺(4.1g，16.5mmol)处理。所得混合物在室温下经搅拌过夜。所得混合物接着用水(30ml)萃取。有机层经Na2SO4干燥且通过旋转蒸发经浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法(220g柱，5％至40％EtOAc及己烷)经纯化。经两个步骤，产量2.2g，65.7％。通过LCMS发现的离子：[M-Boc+H]+＝297.2,[M–BocNH3+H]+＝280.1。
步骤f.
Figure BDA0003487201460004141
向步骤-e产物(2.07g，5.22mmol)于THF(5ml)中的溶液中添加二恶烷(10ml，40mmol)中的4N HCl。所述反应混合物经搅拌持续1小时，接着用己烷(15ml)及水(5ml x 3)萃取。经组合的水层经冻干，得到浅黄色固体。所述材料无需进一步纯化继续用于后续步骤。产量1.7g，92％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝297.2,[M-NH4+H]+＝280.1。
步骤g.
Figure BDA0003487201460004142
4-氯-3-氟苯胺(4.368g，30mmol)溶解于无水DCM(30ml)中。所述溶液在冰水浴中冷却之后，添加DIEPA(4.265g，33mmol)，然后滴加甲基乙二酰氯(3.92g，32mmol)。所述反应物在冰水浴中经搅拌持续1小时，接着在室温下持续5小时。白色沉淀经过滤且重新溶解在热的THF(50ml)中。所得溶液用水(100ml)萃取。过滤所得的滤液用水萃取。来自两部分萃取液的经组合的有机层经Na2SO4干燥，通过旋转蒸发经浓缩，且进一步在高真空中干燥。粗产物无需进一步纯化继续用于后续步骤。产量6.98g，定量产率。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝232.0,[M+Na]+＝254。
步骤h.
Figure BDA0003487201460004143
步骤-g产物(2.31g，10mmol)通过加热在60℃下溶解于MeOH(50ml)中。添加KOH(2.25g，40mmol)在水(40ml)中的溶液。添加KOH之后形成了白色凝胶。在60℃下继续反应30分钟，接着用6N HCl水溶液(15ml)缓慢酸化。反应经加热至100℃直至所有凝胶溶解(约需10分钟)。通过旋转蒸发去除MeOH，且白色产物经过滤，用水洗涤，接着在高真空下干燥。产量2.2g，定量产率。通过LCMS发现的离子：[M-H]-＝216.0。
步骤i.
Figure BDA0003487201460004151
向步骤-h产物(255.7mg，1mmol)及步骤-f产物(332.8mg，1mmol)在无水DMF(1ml)中的混合物中添加HATU(437mg，1.15mmol)且搅拌持续5分钟。添加DIPEA(258.5mg，2mmol)，且反应继续持续1小时。反应物接着通过硅胶柱色谱法(80g柱，5％至50％EtOAc/己烷)经纯化。产量480.7mg，96.9％。通过LCMS发现的离子：[M+Na]+＝518.0。
步骤j.
Figure BDA0003487201460004152
步骤i产物(360.5mg，0.728mmol)溶解于TFA(2ml)中。添加茴香硫醚(169mg，1.36mmol)，且所得混合物在70℃下经加热持续1小时。所得混合物接着经冷却至室温且直接地通过RPLC(150g柱，5％至70％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。产量331.2mg，95.6％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝362.0。
步骤k.
Figure BDA0003487201460004161
向步骤-j产物(32.4mg，0.0682mmol)于无水THF(0.5ml)中的溶液中添加DIPEA(31mg，0.3mmol)及N,N'-双-Boc-1-胍基吡唑(31mg，0.1mmol)。所得混合物在50℃下经加热过夜。所得混合物接着通过RPLC(50g柱，30％至100％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。产量40.3mg，97.9％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝604.2。
步骤l.
Figure BDA0003487201460004162
步骤-k产物(40.3mg，0.0667mmol)溶解于DCM/TFA(1:1，1ml)中，接着在40℃下经加热持续1小时。粗反应物经浓缩且通过RPLC(50g，5％至60％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。产量20mg，57.9％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝404.0。
实施例21.合成缀合物8
叠氮基官能化Fc(50mg，28.43mL，0.862μmol，1.76mg/mL；SEQ ID NO:64，实施例2)的溶液经添加到50mL离心管中，然后添加pH 8.5的EPPES中的炔衍生小分子(15.83mg，0.012mmol，Int-15，实施例16)，及水中的硫酸铜(II)(1.1mg，0.0043mmol)与THTPA(0.43mL，0.0216mmol，50nM在水中)、氨基胍HCl(2.16mL，100mM在水中)及抗坏血酸钠(2.16mL，100mM在水中)混合的溶液。所得溶液轻柔地经振荡持续4小时。其相继通过在蛋白A柱上的亲和力色谱法、尺寸排阻色谱法(如实施例8所述)经纯化。经纯化最终产物的MaldiTOF分析给出60593Da的平均质量(DAR 2.5)。产量12.71mg，25％。
实施例22.合成Int-18
Figure BDA0003487201460004171
步骤a.
Figure BDA0003487201460004172
HATU(164mg，0.19mmol)经添加到三唑酸起始材料(描述于实施例05中，Int-2)(185mg，0.36)、4-(3-氨基丙基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(96mg，0.39mmol)及二异丙基乙胺(186mg，1.44mmol)于DMF(3L)中的搅拌混合物中，且反应物经搅拌持续12小时。在旋转蒸发仪上去除溶剂且所得油状物通过反相RPLC Isco
Figure BDA0003487201460004173
(去离子水中的20％-95％ACN，0.1％TFA，30分钟梯度)经纯化。汇集纯洗脱份并冻干并用于下一步骤。通过LC/MS发现的离子，[M+H]+＝737.4。
Boc保护的中间体在环境温度下在DCM/TFA的1/1混合物(10ml)中经搅拌持续2小时，接着在旋转蒸发仪上经浓缩且通过RPLC Isco
Figure BDA0003487201460004174
(去离子水中的20％-95％ACN，0.1％TFA，30分钟梯度)经纯化。汇集纯洗脱份且冻干。产量120mg，44％产率，2个步骤。通过LC/MS发现的离子，[M+H]+＝637.2。
步骤b.
Figure BDA0003487201460004181
来自前一步骤的中间体(90mg，0.41mmol)、炔丙基peg4甲苯磺酸酯(57mg，0.18mmol)及二异丙基乙胺(36mg，0.28mmol)在80℃下在DMF(3mL)中一起经搅拌持续12小时。通过旋转蒸发仪去除溶剂且通过RPLC Isco
Figure BDA0003487201460004182
(去离子水中的20％-95％ACN，0.1％TFA，30分钟梯度)纯化。汇集纯洗脱份且冻干。产量120mg，44％。通过LC/MS发现的离子，[M+H]+＝851.2。
实施例23.合成Int-19
Figure BDA0003487201460004183
步骤a.
Figure BDA0003487201460004184
Z-哌嗪(29.62g，131.8mmol)、2-(Boc-氨基)乙基溴(24.87g，105.4mmol)、KI(8.75g，52.7mmol)及碳酸钾(21.86g，158.1mmol)在1,4-二恶烷(300mL)中的混合物在75℃下经搅拌持续24小时。过滤且浓缩粗反应混合物。残余物通过正相色谱法经纯化，以0％至10％甲醇/二氯甲烷洗脱，得到呈油状物的纯产物(32.0g，83％分离产率)。通过LCMS发现的离子：M+H+:364.2.H1 NMR(300MHz):7.26-7.45(m,5H),5.10-5.20(m,2H),3.47-3.60(m,4H),3.18-3.30(m,2H),2.32-2.51(m,4H),1.60-1.75(m,2H)and 1.47(s,9H)。
此产物(5.38g，14.8mmol)在来自气球的氢气下用甲醇(100mL)中的5％Pd/C(1.57g，0.74mmol)处理3小时。在硅藻土过滤及溶剂去除之后，以定量产率获得呈白色泡沫状的产物，且无需进一步纯化即用于下一步骤。通过LCMS发现的离子：M+H+:230.2。
步骤b.
Figure BDA0003487201460004191
2-(Boc-氨基)-乙基-1-哌嗪(3.707g，15.23mmol)、Z-哌嗪基-丙基溴(5.728g，16.76mmol，ACS MedChem Lett,2018,446)、K2CO3(3.158g，22.85mmol)及KI(1.264g，7.619mmol)于1,4-二恶烷(100mL)中的溶液在75℃下在油浴中经加热持续24小时。混合物经过滤、浓缩且通过正相色谱法经纯化，以0％至10％甲醇/二氯甲烷洗脱，得到呈泡沫状的产物(5.45g，75％分离产率)。通过LCMS发现的离子：M+H+:490.2。
此产物(5.45g，11.13mmol)在来自气球的氢气下用甲醇(100mL)中的5％Pd(OH)2/C(3.91g，5.57mmol)处理过夜。硅藻土过滤及溶剂去除之后，呈白色泡沫状的所需产物以定量产率获得，且无需进一步纯化即用于下一步骤。通过LCMS发现的离子：M+H+:356.2；M-Boc+H+:256.2。
步骤c.
Figure BDA0003487201460004201
2-(Boc-氨基)-乙基-1-哌嗪基-丙基-哌嗪(1.31g，3.68mmol)、炔丙基-PEG4甲苯磺酸酯(1.721g，5.53mmol)、K2CO3(0.764g，5.53mmol)及KI(0.306g，1.84mmol)于1,4-二恶烷(50mL)中的溶液在75℃下在油浴中经加热持续24小时。混合物经过滤、浓缩且通过反相色谱法经纯化，以5％至45％ACN/水(0.1％TFA)洗脱，得到呈油状物的纯产物(0.890g，42％分离产率)。通过LCMS发现的离子：M+H+:570.4；(M+2H+)/2:284.8。
此产物(0.104g，0.183mmol)用二恶烷(10mL)中的4M HCl处理持续2小时。溶剂去除之后，以定量产率获得呈白色泡沫状的产物，且无需进一步纯化即用于下一步骤。
步骤d.
Figure BDA0003487201460004202
炔丙基-PEG4-1-哌嗪基-丙基-哌嗪基-乙胺(0.0857g，0.182mmol)、三唑酸核(0.121g，0.237mmol，在实施例05，Int-2中描述)、NaHCO3(0.0613g，0.730mmol)、NMM(0.030mL，0.274mmol)及HATU(0.138g，0.365mmol)在DMF(5mL)中的溶液经搅拌持续4小时。去除溶剂，且残余物溶解在最少量的NMP/水(1:1，0.1％TFA)中且通过反相色谱经纯化，以5％至45％ACN/水(0.1％TFA)洗脱，得到呈油状物的所需产物。通过LCMS发现的离子：M+H+:963.2；(M+2H+)/2:482.2。
实施例24.合成Int-20
Figure BDA0003487201460004211
步骤a.
Figure BDA0003487201460004212
向1,2,4-三唑-3-羧酸(500mg，4.422mmol)、炔丙基-PEG4-胺(1.227g，5.306mmol)、N,N-二异丙基乙胺(3.466mL,19.90mmol)在二氯甲烷(1.0mL)及DMF(5.0mL)中的0℃搅拌溶液中添加丙基膦酸酐溶液(2.711mL，4.643mmol，在DMF中约50％)的溶液。10分钟之后将温度升至环境温度，且通过LCMS确定反应完成后，根据旋转蒸发去除所有挥发物。残余物在水中经搅拌直至获得悬浮液。过滤混合物，且用水(3x30mL)洗涤固体。收集固体且根据真空技术干燥。所得油状物无需进一步纯化即使用。产量968mg，67％。通过LCMS发现的离子：[(M+H)+Na]+＝349.2；[(M+H]]+＝327.2。
步骤b.
Figure BDA0003487201460004221
向的杂环酸(200mg，0.669mmol，描述于Org.Process Res.Dev.2017,21,1145-1155中)，1-苯甲酰哌嗪(178mg，0.936mmol)、N,N-二异丙基乙胺(524uL，3.009mmol)溶解于二氯甲烷(0.250mL)及N,N-二甲基甲酰胺(2.5mL)中的0℃搅拌溶液中添加50％的丙基膦酸酐在DMF(390uL，0.669mmol)中的溶液。通过LCMS确定反应完成后，根据真空技术蒸发所有挥发物。浓稠的粗制物在剧烈搅拌下溶解在水(30mL)中。继续搅拌直至形成悬浮液。混合物经过滤且固体用额外的水(3x30mL)洗涤，接着经收集且根据真空技术干燥。此物质无需另外纯化即用于下一步骤。产量0.268mg，85％。通过LCMS发现的离子：[(M+H)+Na]+＝494.9,492.9；[(M+H]]+＝473.0,471.0。
步骤c.
Figure BDA0003487201460004222
严格地在密封管中的氮气下，步骤b产物(268mg，0.569mmol)、N-(炔丙基-PEG4)-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺(278mg，0.853mmol)、KOH(60mg，1.080mmol)、水(512mg，28.43mmol)、反式-N,N'-二甲基环己烷-1,2-二胺(64mg，0.455mmol)及CuI(32mg，0.170mmol)的搅拌混合物在100℃下经加热持续2天。冷却后，粗反应物与铜清除树脂SiliaMetS TAAcONa(800mg，负载量0.45mmol/g)混合且经搅拌持续1小时。过滤所述反应物且滤液根据真空技术经蒸发。残余物通过RPLC使用以0％至100％水及甲醇洗脱的Isco
Figure BDA0003487201460004232
液体色谱法经纯化。产量93mg，23％。通过LCMS发现的离子：[(M+H)+Na]+＝739.2；[(M+H]]+＝717.2。
实施例25.合成Int-21
Figure BDA0003487201460004231
步骤a.
[3-(哌嗪-1-基)丙基]氨基甲酸叔丁酯(1.73g，7.09mmol)、三甘醇甲烷磺酸炔丙醚(2.00g，6.44mmol)、碳酸钾(1.96g，14.18mmol)及乙腈(20mL)在70℃油浴中经加热持续24小时，此时LCMS指示大部分起始材料已消耗。过滤所得混合物以去除盐及碳酸钾。滤液经浓缩且通过RPLC(10％至100％ACN/水，含有0.1％TFA)经纯化，得到2.60g的双TFA盐(59％产率)。
步骤b.
来自前一步骤的产物(2.60g，5.68mmol)在室温下用HCl/二恶烷(4M，15mL)处理持续1小时，且接着经浓缩至干燥，且无需进一步纯化即使用(产率：定量)。
步骤c.
严格地在密封管中的氮气下，前述中间体(145mg，0.308mmol，参见Int-20，实施例24步骤b)、1,2,4-三唑-3-羧酸甲酯(59mg，0.461mmol)、KOH(50mg，0.892mmol)、水(166mg，9.230mmol)、反式-N,N'-二甲基环己烷-1,2-二胺(35mg，0.246mmol)及CuI(18mg，0.092mmol)的搅拌悬浮液在100℃下经加热持续2天。冷却后，通过旋转蒸发器蒸发挥发物。固体残余物用乙酸乙酯(3x12mL)洗涤，且接着用二氯甲烷(3x12mL)洗涤。获得的固体溶解在水中且在搅拌下用SiliaMetS TAAcONa(300mg，负载量0.45mmol/g)处理持续3小时。过滤悬浮液且通过旋转蒸发去除所有挥发物。向获得的残余物、来自步骤b的炔丙基-PEG4哌嗪接头(HCl盐，144mg，0.308mmol)、DIPEA(241uL，1.384mmol，)在DMF(2.0mL)中的0℃搅拌溶液中添加50％的丙基膦酸酐在DMF(196uL，0.338mmol)中的溶液。在完成时，所有挥发物均根据真空技术经蒸发。残余物通过RPLC使用以0％至100％水及甲醇洗脱的Isco
Figure BDA0003487201460004241
液体色谱法经纯化。产量29mg，11％，2个步骤。通过LCMS发现的离子：[(M+H)+Na]+＝865.2；[(M+H]]+＝843.2；[(M+2H)/2]+＝422.2。
实施例26.合成Int-22
Figure BDA0003487201460004242
步骤a.
Figure BDA0003487201460004243
Z-哌嗪(14.16g，63.0mmol)、3-(Boc-氨基)丙基溴(12.50g，50.4mmol)及碳酸钾(10.45g，75.9mmol)在1,4-二恶烷(150mL)中的混合物在75℃下经搅拌持续24小时。粗反应混合物经过滤且浓缩，接着通过正相色谱法经纯化，以0％至10％甲醇/二氯甲烷洗脱，得到呈油状物的纯产物(17.23g，90％分离产率)。通过LCMS发现的离子：M+H+:378.2。H1 NMR(300MHz):7.26-7.40(m,5H),5.10-5.20(m,2H),3.47-3.60(m,4H),3.14-3.30(m,2H),2.32-2.50(m,6H),1.60-1.75(m,2H)and 1.45(s,9H)。
Cbz-保护的产物(4.84g，12.8mmol)在氢气球下用甲醇(100mL)中的5％Pd/C(1.34g，0.64mmol)处理3小时。在硅藻土过滤及溶剂去除之后，呈白色泡沫状的纯产物以定量产率获得，且无需进一步纯化即用于下一步骤。通过LCMS发现的离子：M+H+:244.2。
步骤b.
Figure BDA0003487201460004251
来自前一步骤的3-(Boc-氨基)-丙基-1-哌嗪(3.707g，15.23mmol)、Z-哌嗪基-丙基溴(5.728g，16.76mmol，描述于ACS MedChem Lett,2018,446中)、K2CO3(3.158g，22.85mmol)及KI(1.264g，7.619mmol)于1,4-二恶烷(100mL)中的溶液在75℃下在油浴中经加热持续24小时。混合物经过滤、浓缩且通过正相色谱法经纯化，以0％至10％甲醇/二氯甲烷洗脱，得到呈泡沫状的所需产物(6.59g，85％分离产率)。LC/MS质量：M+H+:504.4。
此产物(5.45g，11.13mmol)在氢气球下用甲醇(100mL)中的5％Pd(OH)2/C(1.34g，0.64mmol)处理持续12小时。硅藻土过滤及溶剂去除之后，呈白色泡沫状的纯产物以定量产率获得，且无需进一步纯化即用于下一步骤。LC/MS质量：M+H+:370.2。
步骤c.
Figure BDA0003487201460004261
3-(Boc-氨基)-丙基-1-哌嗪基-丙基-哌嗪(1.98g，5.36mmol)、炔丙基-PEG4溴化物(2.421g，8.037mmol)、K2CO3(1.851g，14.0mmol)及KI(0.445g，2.68mmol)于1,4-二恶烷(50mL)中的溶液在75℃下在油浴中经加热持续24小时。混合物经过滤、浓缩且通过反相色谱法经纯化，以5％至45％ACN/水(0.1％TFA)洗脱，得到呈油状物的纯产物(1.61g，51％分离产率)。通过LCMS发现的离子：M+H+:584.4；(M+2H+)/2:292.6。
此产物(0.107g，0.183mmol)用二恶烷(10mL)中的4M HCl处理持续2小时。溶剂去除之后，获得呈白色泡沫状的产物，且无需进一步纯化即用于下一步骤。
步骤d.
Figure BDA0003487201460004262
炔丙基-PEG4-1-哌嗪基-丙基-哌嗪基-丙胺HCl盐(0.0886g，0.163mmol)、三唑酸核(0.122g，0.238mmol，在实施例05，Int-2中描述)、NaHCO3(0.0616g，0.733mmol)、N-甲基吗啉(0.031mL，0.274mmol)及HATU(0.139g，0.366mmol)在DMF(5mL)中的溶液经搅拌持续4小时。去除溶剂，且残余物溶解在最少量的NMP/水(1:1，重量/0.1％TFA)中且通过反相色谱经纯化，以5％至45％ACN/水(重量/0.1％TFA)洗脱，得到呈油状物的所需产物。通过LCMS发现的离子：M+H+:977.3；(M+2H+)/2:489.4。
实施例27.合成缀合物9
制备点击试剂溶液：PBS缓冲溶液中的0.0050M CuSO4：10.0mg CuSO4溶解于12.53mL PBS中，接着采用6.00mL此CuSO4溶液且添加64.8mg BTTAA(CAS#1334179-85-9)及297mg抗坏血酸钠以生成点击试剂溶液(0.0050M CuSO4、0.025M BTTAA及0.25M抗坏血酸钠)。
向叠氮基官能化Fc(122.1mg，8.55mL，21.1μmol，SEQ ID NO:64，实施例2，DAR＝3.9，在25mM MES，150mM NaCl，pH 6.0缓冲液中)在15mL离心管中的溶液中添加1.5mL的MES缓冲液中的炔衍生小分子(25.0mg，19.0mmol，对于Fc上的每个叠氮基3.0当量，描述于实施例26中，Int-22)。在轻柔地搅拌之后，混合物用点击试剂溶液(5.05mL)处理。所得混合物在环境温度下轻柔地经旋转持续4小时。其接着相继通过在蛋白A柱上的亲和力色谱法、尺寸排阻色谱法(参见一般缀合物纯化方案)经纯化。经纯化最终产物的Maldi TOF分析给出65,947Da的平均质量(DAR＝3.4)。产量/产率：50mg/41％。
实施例28.合成Int-23
Figure BDA0003487201460004271
步骤a.
Figure BDA0003487201460004281
芳基溴起始物质(先前描述于实施例05，Int-2中)(350mg，1.36mmol)经添加到DMF(10mL)中的三唑乙酯(421mg，2.71mmol)中且在氮气下经搅拌直至完全溶解，接着添加二恶烷(20mL)，然后添加碳酸钾(561，4.07mmol)，且接着添加反式-N,N-二甲基环己烷-二胺(38mg，027mmol)。混合物经排空且用氮气(3x)吹扫，接着添加CuI(129mg，0.68mmol)且混合物再次(3x)经抽真空/用氮气吹扫且在100℃下在1个大气压的氮气下经搅拌持续4小时。过滤混合物且浓缩。粗产物通过RPLC Isco
Figure BDA0003487201460004282
(去离子水中的15％-95％ACN，0.1％TFA，30分钟)经纯化。汇集纯洗脱份且冻干以提供呈浅棕色固体状的乙酯产物。通过LC/MS发现的离子，[M+H]+＝554.2
来自前一反应的酯(140mg，0.22mmol)在4/1的含有LiOH(97mg，4.1mmol)的甲醇/去离子水(5mL)的混合物中经搅拌持续1小时。用冰醋酸将pH升高至pH约5且浓缩。残余物溶解在DMF(2mL)中且通过RPLC Isco
Figure BDA0003487201460004283
(去离子水中的20％-95％ACN，0.1％TFA，30分钟梯度)经纯化。汇集纯洗脱份且冻干。经两个步骤，产量375mg，52％。通过LC/MS发现的离子，[M+H]+＝525.8。
步骤b.
Figure BDA0003487201460004284
HATU(71mg，0.19mmol)经添加到三唑酸(90mg，0.17)(在本实施例的步骤a中描述)、4-(3-氨基丙基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(46mg，0.19mmol)及二异丙基乙胺(110mg，0.86mmol)于DMF(3mL)中的搅拌混合物中，且反应经搅拌持续12小时。在旋转蒸发仪上去除溶剂且混合物用反相HPLC Isco
Figure BDA0003487201460004291
(去离子水中的20％-95％ACN，0.1％TFA，30分钟梯度)经纯化。汇集纯洗脱份且冻干。分离85mg。通过LC/MS发现的离子，[M+H]+＝751.4。
Boc保护的中间体在环境温度下在DCM/TFA的1/1混合物(10ml)中经搅拌持续2小时，在旋转蒸发仪上经浓缩且通过反相HPLC Isco
Figure BDA0003487201460004292
(去离子水中的20％-95％ACN，0.1％TFA，30分钟梯度)经纯化。汇集纯洗脱份且冻干。产量67mg，45％，2个步骤，通过LC/MS发现的离子，[M+H]+＝651.2。
步骤c.
Figure BDA0003487201460004293
来自此实施例的步骤b的中间体(90mg，0.41mmol)、炔丙基peg4甲苯磺酸酯(57mg，0.18mmol)及二异丙基乙胺(36mg，0.28mmol)在80℃下在DMF(3mL)中一起经搅拌持续12小时。在旋转蒸发仪上去除溶剂且通过反相ACQ semi prep(去离子水中的20％-95％ACN，0.1％TFA，30分钟梯度)经纯化。汇集纯洗脱份且冻干。产量120mg，44％。通过LC/MS发现的离子，[M+H]+＝865.4。
实施例29.合成Int-24
Figure BDA0003487201460004301
步骤a.
Figure BDA0003487201460004302
向甲醇(12mL)中的2-苯基-2-(4-亚哌啶基)乙腈(参见实施例05，Int-2，0.28g，1.16mmol)的游离碱中添加5％Pd/C及来自气球的H2。反应在室温下经搅拌持续16小时，接着通过硅藻土垫经过滤。在减压下去除溶剂以得到淡黄色固体。此物质无需进一步纯化即用于下一步骤。产量0.12g，50.9％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝201.2。
步骤b.
Figure BDA0003487201460004303
来自前一步骤的产物(0.88g，2.93mmol，合成描述于Org.Process Res.Dev.2017,21,1145-1155.中)、2-苯基-2-(4-哌啶基)乙腈(0.65g，3.23mmol)、HATU(1.71g，4.40mmol)在DMF(8.4mL)中的溶液在氮气下在室温下经搅拌持续10分钟，然后添加DIEA(1.56mL，8.80mmol)。所得混合物在室温下经搅拌持续16小时；用水将其淬灭。水层用乙酸乙酯(2x100mL)萃取。经组合的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，且过滤，且接着在减压下浓缩。残余物通过正相液体色谱法(Isco
Figure BDA0003487201460004311
0％至100％乙酸乙酯及己烷)经纯化以得到呈黄色泡沫状的所需产物。产量1.23g，87.3％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝481.0。
步骤c.
Figure BDA0003487201460004312
来自前一步骤的产物(0.12g，0.25mmol)、PEG4三唑(0.12g，0.37mmol，在实施例25中描述，Int-20)、K2CO3(0.10g，0.75mmol)、水(0.22mL，12.47mmol)、CuI(14.5mg，0.075mmol)、反式二甲基环己基二胺(28.9mg，0.20mmol)在DMF(3mL)中的溶液用N2脱气6次，接着混合物在100℃下经加热持续4小时。所述反应混合物经过滤且通过反相液体色谱法(ACCQ，10％至45％的乙腈及水，用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。产量11.8mg，5.6％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝727.2。
实施例30.合成Int-25
Figure BDA0003487201460004321
步骤a.
向Fmoc-N-(叔丁氧羰基甲基)-甘氨酸(2.00g，4.861mmol)、2-叠氮基乙-1-胺盐酸盐(626mg，5.104mmol)及DIPEA(3.387mL，19.44mmol)于DMF(10mL)及DCM(10mL)中的0℃搅拌溶液中添加HATU(1.885mg，4.958mmol)。温度升至环境温度且继续搅拌直至通过LCMS确定完成。所有挥发物均根据真空技术经移除。残余物通过二氧化硅柱使用以0％至100％己烷中的乙酸乙酯洗脱的Isco
Figure BDA0003487201460004322
液体色谱法经纯化。产量2.26g，97％产率。通过LCMS发现的离子：[(M+H–t-Bu)]+＝424.2。
步骤b.
来自步骤a的产物(2.26g，4.713mmol)经吸收在TFA(10mL)中且继续经搅拌直至通过LCMS显示反应完成。根据真空技术蒸发挥发物。残余物通过RP-C18柱使用以0％至100％水及甲醇洗脱的Isco
Figure BDA0003487201460004323
液体色谱法经纯化。产量990mg，45％。通过LCMS发现的离子：[(M+H)+Na]+＝446.2；[(M+H]]+＝424.2。
步骤c.
向来自步骤b的化合物(990mg，2.338mmol)、甲基-PEG4-胺(1.335g，2.385mmol)及DIPEA(1.018mL，5.845mmol)于DMF(5.0mL)及DCM(5.0mL)中的0℃搅拌溶液中添加HATU(907mg，2.385mmol)。温度升至环境温度且继续搅拌直至通过LCMS显示反应完成。所有挥发物均根据真空技术经移除。残余物通过RP-C18柱使用以0％至100％水及甲醇洗脱的Isco
Figure BDA0003487201460004331
液体色谱法经纯化。产量1.704g，76％。通过LCMS发现的离子：[(M+H)]+＝965.2,[(M+2H)/2]+＝483.2。
步骤d.
向来自实施例5的炔官能化化合物、Int-2(668mg，0.922mmol)、来自步骤c的化合物(907mg，0.940mmol)、TBTA(51mg，0.097mmol)及硫酸铜(15mg，0.092mmol)于乙醇(10mL)及水(5mL)中的溶液中添加抗坏血酸钠(91mg，0.460mmol)。形成了所需产物，且通过LCMS数据确认：{[(M+H)+2Na]+＝867.8；.[(M+H)+Na]+＝856.5；[(M+H]]+＝845.4,[(M+2H)/2]+＝563.8}。完成之后，添加铜清除剂SiliaMetS TAAcONa(205mg，负载量0.45mmol/g)且继续搅拌过夜。过滤混合物且用乙醇冲洗。所得溶液(约20mL)用哌啶(1.0mL)处理以去除Fmoc基团。在完成时，所有挥发物均根据真空技术经去除。残余物通过RP-C18柱使用以0％至100％水及甲醇洗脱的Isco
Figure BDA0003487201460004332
液体色谱法经纯化。产量696mg，51％。通过LCMS发现的离子：[(M+H]]+＝734.4,[(M+2H)/2]+＝490.0。
步骤e.
向来自步骤d的产物(255mg，0.174mmol)、丙炔基-PEG4-酸(68mg，0.261mmol)及DIPEA(121uL，0.695mmol)于DMF(5.0mL)及DCM(0.5mL)中的0℃搅拌溶液中添加HATU(67mg，0.177mmol)。温度升至环境温度且继续搅拌直至通过LCMS显示完成。所有挥发物均根据真空技术经移除。残余物通过RP-C18柱使用以0％至100％水及甲醇洗脱的Isco
Figure BDA0003487201460004341
液体色谱法经纯化。产量157mg，53％产率。通过LCMS发现的离子：[(M+2H)/2]+＝855.8；[(M+3H)/3]+＝570.8。
实施例31.合成Int-26
Figure BDA0003487201460004342
步骤a.
Figure BDA0003487201460004343
二苄基丙胺(2.0g，7.86mmol)、3-溴丙醇(2.73g，19.66mmol)及DIEA(4.11mL，23.6mmol)溶解在ACN(10mL)中，接着在75℃油浴中经加热持续12小时。12小时之后LCMS显示大部分产物。浓缩粗反应物，且通过RPLC以10％至100％ACN/水与0.1％TFA经纯化。分离较差。双-TFA盐的产量4.57g，97％。通过LCMS观察到的离子：(M+H)+371.2。
步骤b.
Figure BDA0003487201460004344
来自前一步骤的产物(5.16g，8.62mmol)、Pd(OH)2(2.0g)及来自气球的H2在室温下经搅拌持续2小时，此时LCMS显示完全转化。粗混合物通过硅藻土过滤，浓缩且无需纯化即用于下一步骤。产量3.48g，96％。通过LCMS观察到的离子：(M+H)+191.2。
步骤c.
Figure BDA0003487201460004351
前一步骤的产物(3.48g，8.33mmol)、Cbz-保护的醛(1.73g，8.33mmol)、STAB(1.76g，8.33mmol)及DIEA(1.45mL，8.33mmol)在THF(20mL)及MeOH(5mL)中在室温下经搅拌持续12小时。浓缩粗反应物，且通过RPLC以5％至100％ACN/水与作为修饰剂的0.1％TFA经纯化。产量2.09g。两个步骤42％。通过LCMS观察到的离子：(M+H)+382.3。
步骤d.
Figure BDA0003487201460004352
来自前一步骤的产物(2.09g，3.43mmol)、炔丙基-PEG4-甲苯磺酸酯(1.17g，3.77mmol)及K2CO3(1.89g，13.7mmol)在乙腈(10mL)中在70℃下经搅拌持续72小时。LCMS在72小时显示所需产物及大量起始材料。过滤粗反应物，用TFA酸化至pH 4-5，浓缩，且通过RPLC以含有0.1％TFA的5％至100％乙腈/水经纯化。分离出1.14g的未反应的起始材料以及0.746g的产物(26％产率)。
步骤e.
Figure BDA0003487201460004361
溶解在TFA(10mL)中的来自前一步骤的Cbz保护的产物(0.700g，0.850mmol)及茴香硫醚(2.51mL，21.2mmol)在室温下在搅拌下用TMS溴化物处理。2分钟之后LCMS显示完全脱保护。除去粗反应物中的TFA，用己烷(3x5mL)洗涤，且无需进一步纯化即使用。三重TFA盐的粗产率是定量的。
步骤f.
Figure BDA0003487201460004362
向三唑酸中间品(511mg，0.1mmol，描述于实施例5中，Int-2)及HATU(45.6mg，0.12mmol)于无水DMF(0.5ml)中的溶液中添加4-甲基吗啉(20.2mg，0.2mmol)。搅拌5分钟之后，所述溶液用来自步骤e的炔丙基-PEG接头(160.7mg，0.2mmol)在DMF(0.5ml)中的溶液处理。所述反应混合物经搅拌持续1小时，接着直接地通过RPLC(5％至50％乙腈及水，0.1％TFA)经纯化。产量16.4mg，13.9％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝954.8,[(M+2H)/2]+＝478.2。
实施例32.合成Int-27
Figure BDA0003487201460004371
步骤a.
Figure BDA0003487201460004372
经火焰干燥的反应烧瓶用氮气冲扫且馈入2-吡啶乙腈(590.5mg，5mmol)及无水THF(5mL)。在-78℃浴中冷却之后，缓慢添加NaHMDS(1.0M在THF中，10mmol)。所得混合物在氮气下经搅拌持续5分钟，且接着用1-Boc-哌啶-4-酮(996mg，5mmol)处理。移除-78℃浴且所述反应经搅拌持续2.5小时。所述反应接着通过10％NH4Cl(50ml)淬灭且用EtOAc(50ml)/己烷(20ml)萃取。水层通过EtOAc(30ml)进行反萃取。经组合的有机层经Na2SO4干燥且通过旋转蒸发经浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法(120g，5％至60％EtOAc及己烷)经纯化。产量970mg，64.8％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝300.2。
步骤b.
Figure BDA0003487201460004381
来自步骤a的产物(970mg，3.24mmol)溶解在THF(5ml)中且用二恶烷(5ml)中的4MHCl溶液处理。所述混合物在40℃下经加热持续5小时。接着通过旋转蒸发浓缩混合物，且通过在EtOAc(50ml)中沉淀产物进一步去除过量的HCl。粗产物无需进一步纯化即使用。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝200.2。
步骤c.
Figure BDA0003487201460004382
向溴氮杂吲哚(299.1mg，1mmol，描述于J.Med.Chem.2018,61(1):62-80中)在无水DMF(1ml)中的溶液中添加二恶烷(2ml)、1,2,4-三唑-3-羧酸甲酯(381.3mg，3mmol)、K2CO3(414.6mg，4mmol)及无水EtOH(4ml)。所得混合物在75℃下经加热，同时缓慢鼓泡通入氮气。添加反式-N,N'-二甲基环己烷-1,2-二胺(284.5mg，2mmol)。氮气继续鼓泡，直至所有形成气体消失(约3分钟)。添加CuI(390mg，2mmol)，且反应在氮气下经加热过夜。接着溶液经冷却至室温且通过硅藻土过滤到HCl溶液(2ml的6N HCl及20ml的水)中。固体用MeOH(20ml)洗涤。滤液通过旋转蒸发浓缩成固体。残余物再溶解于MeOH中，且过滤出盐。经浓缩之后，粗产物通过prep-HPLC(0％至40％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。产量64.7mg，18％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝360.0。
步骤d.
Figure BDA0003487201460004391
向来自步骤c的产物(64.7mg，0.18mmol)及来自步骤c的产物(63.6mg，0.27mmol)于无水DMF(1ml)中的溶液中添加HATU(83.6mg，0.22mmol)。在搅拌以溶解所有HATU之后，添加DIPEA(48.5mg，0.375mmol)且反应物经搅拌持续30分钟。反应物接着直接地通过RPLC(50g柱，0％至100％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂)经纯化。产量80mg，82.2％。通过LCMS发现的离子：{M+H]+＝540.8。
步骤e.
Figure BDA0003487201460004392
来自步骤d的产物(80mg，0.148mmol)溶解于MeOH:DCM(1:1，2ml)中，且在冰水浴中经冷却。添加1M LiOH溶液(0.592ml)及水(1ml)。反应物经搅拌持续4小时，接着通过二恶烷(0.148ml)中的4N HCl溶液酸化。通过旋转蒸发去除有机溶剂。剩余的水层经冷冻且冻干。含有4当量的粗产物无需进一步纯化继续用于下一步骤。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝513.2。
步骤f.
Figure BDA0003487201460004401
向步骤-e产物(33.5mg，0.0449mmol)及HATU(21.4mg，0.0562mmol)于无水DMF(1ml)中的溶液中添加PEG-哌嗪接头(27.6mg，0.07mmol，描述于实施例5，Int-2中)及4-甲基吗啉(50.5mg，0.5mmol)。所得混合物在室温下经搅拌持续30分钟，接着直接地通过HPLC经纯化：0％到40％乙腈及水，使用0.1％TFA作为修饰剂。产量26.3mg，54.2％。通过LCMS发现的离子：[M+H]+＝851.8,[(M+2H)/2]+＝426.4。
实施例33.在体外细胞融合分析中筛选HIV先导化合物
HIV化合物的活性是在设计以测量由gp120与CD4相互作用介导的细胞-细胞融合抑制的分析中测定的，所述细胞-细胞融合是HIV感染过程中的重要步骤。简单来说，此分析测量了从AIDS研究试剂及参考程序(Rockville,MD)获得的两个细胞系HeLa-CD4-LTR-β-Gal(目录#1294)及HL2/3细胞(目录#1299)的融合。HeLa-CD4-LTR-β-Gal细胞一式三份在37℃/5％CO2条件下以每孔5x103个细胞的密度按50μL的体积在50μL的九种化合物连续半对数稀释液的情况下铺种持续一小时。孵育后，100μL的HL2/3细胞经添加到板中。培养物在37℃/5％CO2下额外孵育48小时。孵育后，使用化学发光底物评估功效板的β-半乳糖苷酶产生，且用XTT对毒性板染色以评估细胞活力。
在这些研究中，也评估了细胞毒性(TC50)。测试材料源于通过测量四氮唑蓝染料XTT(2,3-双(2-甲氧基-4-硝基-5-磺苯基)-5-[(苯氨基)羰基]-2H-四氮唑蓝氢氧化物)的还原。代谢活性细胞中的XTT被线粒体酶NADPH氧化酶代谢为可溶性甲臜产物。XTT溶液每天制备为RPMI-1640中的1mg/mL的储备液，不含添加剂。在DPBS中制备0.15mg/mL的吩嗪硫酸甲酯(PMS)溶液，且在-20℃下避光保存。XTT/PMS储备液在使用前通过每mL的XTT溶液添加40μL的PMS来立即制备。五十μL(50μL)的XTT/PMS经添加到板的每个孔中，且板在37℃下孵育4小时。已凭经验确定4小时的孵育在XTT染料还原的线性响应范围内，每个分析使用指定的细胞数。板经密封且经倒转若干次以混合可溶性甲臜产物，且用Molecular DevicesSpectraMax Plus 384 96孔板形式分光光度计在450nm(650nm参考波长)处读取板。
在此分析中，7种Int及5种缀合物与2种对照化合物(芝加哥天蓝(CSB)及恩夫韦肽)一起运行，已知对照化合物可防止由病毒gp120结合于宿主细胞受体(CD4)介导的细胞融合。CSB及恩夫韦肽的EC50值为201nM及409nM，表明对细胞融合有中度抑制。相比之下，7种Int的范围为从1.56nM至72.8nM。总的来说，在此分析中测试的Int具有显著高于经批准的HIV治疗剂恩夫韦肽的活性。重要的是，缀合物5是高效的，EC50值为3.62nM。除了缀合物014(EC50值为406nM)外，其他AVC均>500nM。然而，值得注意的是，尽管这些化合物的EC50大于500nM，但在此浓度下检测到了信号，表明真实值不比500nM高出太多。最关键的是观察到这些化学系列中的至少一者可以缀合于hIgG1 Fc且保持强效活性(Int-17缀合物，缀合物5)。最后，在本研究中测试的浓度下，没有测试制品显示出细胞毒性。
表7.先导化合物在细胞融合分析中的活性(EC50)及细胞毒性(TC50)。
Figure BDA0003487201460004411
Figure BDA0003487201460004421
实施例34.合成包括具有C220S/YTE四重突变的Fc结构域的缀合物
制备点击试剂溶液：PBS缓冲溶液中的0.0050M CuSO4：10.0mg CuSO4溶解于12.53mL PBS中，接着采用5.00mL此CuSO4溶液且添加43.1mg BTTAA(CAS#1334179-85-9)及247.5mg抗坏血酸钠以生成点击试剂溶液(0.0050M CuSO4、0.020M BTTAA及0.25M抗坏血酸钠)。
向具有C220S突变及YTE突变的叠氮基官能化Fc(65.5mg，10.0mL，1.13μmol，叠氮基DAR约5.9，SEQ ID NO:67)在15mL离心管中的溶液中添加炔衍生小分子(根据Fc的每个叠氮基3.0当量)。在轻柔地搅拌以溶解所有固体之后，混合物用点击试剂溶液(1.80mL)处理。所得混合物在环境温度下轻柔地经旋转持续12小时。其相继通过在蛋白A柱上的亲和力色谱法、尺寸排阻色谱法(参见一般缀合物纯化方案)经纯化。经纯化最终产物的Maldi TOF分析给出66,420Da的平均质量(DAR＝5.8)。产量57mg，具有98％纯度。
实施例35.IV施用包括具有C220S/YTE四重突变体的Fc结构域的缀合物后的30天比较非人灵长类动物PK研究
如实施例34中所述合成包括具有C220S突变及YTE突变的Fc结构域的缀合物(SEQID NO:67)。执行非人灵长类动物PK研究以比较C220S/YTE Fc缀合物(SEQ ID NO:67)与包括单独具有C220S突变的Fc结构域的缀合物(SEQ ID NO:64)的IV施用。
由BTS Research(San Diego,CA)使用体重介于3.5-8.5kg范围内的5-9岁雄性及雌性食蟹猕猴执行非人类灵长类动物(NHP)PK研究。NHP经IV注射2mg/kg的测试制品(0.4mL/kg的剂量体积)。动物经圈养于标准IACUC批准的圈养条件下。在适当时间，对动物进行非末端放血(通过股静脉或头静脉)，其中血液经收集于K2EDTA管中以预防凝血。所收集的血液经离心(2,000x g，持续10分钟)且抽出血浆以随时间分析测试物件浓度。C220S/YTE Fc缀合物及C220S缀合物在每个时间点的血浆浓度通过夹心ELISA测量。简单来说，测试制品经捕获于Fc包被的板上且接着使用HRP缀合的抗人IgG-Fc抗体进行检测。在GraphPad Prism中使用C220S/YTE Fc缀合物或C220S缀合物标准曲线的4PL非线性回归计算蛋白质浓度。更详细的方法描述提供于上文。对应的曲线显示在图13中。与C220S Fc缀合物的约10天相比，C220S/YTE Fc缀合物表现出约45天的显著改进的终末半衰期。C220S/YTEFc缀合物的AUC比C220S缀合物的AUC大2倍(表8)。
Figure BDA0003487201460004441
实施例36.在体外细胞融合分析中筛选HIV化合物
HIV化合物的活性是在设计以测量由gp120与CD4相互作用介导的细胞-细胞融合抑制的分析中测定的，所述细胞-细胞融合是HIV感染过程中的重要步骤。简单来说，此分析测量了从AIDS研究试剂及参考程序(Rockville,MD)获得的两个细胞系HeLa-CD4-LTR-β-Gal(目录#1294)及HL2/3细胞(目录#1299)的融合。HeLa-CD4-LTR-β-Gal细胞一式三份在37℃/5％CO2条件下以每孔5x103个细胞的密度按50μL的体积在50μL的九种化合物连续半对数稀释液的情况下铺种持续一小时。孵育后，100μL的HL2/3细胞经添加到板中。培养物在37℃/5％CO2下额外孵育48小时。孵育后，使用化学发光底物评估功效板的β-半乳糖苷酶产生，且用XTT对毒性板染色以评估细胞活力。
在这些研究中，也评估了细胞毒性(TC50)。测试材料源于通过测量四氮唑蓝染料XTT(2,3-双(2-甲氧基-4-硝基-5-磺苯基)-5-[(苯氨基)羰基]-2H-四氮唑蓝氢氧化物)的还原。代谢活性细胞中的XTT被线粒体酶NADPH氧化酶代谢为可溶性甲臜产物。XTT溶液每天制备为RPMI-1640中的1mg/mL的储备液，不含添加剂。在DPBS中制备0.15mg/mL的吩嗪硫酸甲酯(PMS)溶液，且在-20℃下避光保存。XTT/PMS储备液在使用前通过每mL的XTT溶液添加40μL的PMS来立即制备。五十μL(50μL)的XTT/PMS经添加到板的每个孔中，且板在37℃下孵育4小时。已凭经验确定4小时的孵育在XTT染料还原的线性响应范围内，每个分析使用指定的细胞数。板经密封且经倒转若干次以混合可溶性甲臜产物，且用Molecular DevicesSpectraMax Plus 384 96孔板形式分光光度计在450nm(650nm参考波长)处读取板。
在此分析中，5种Int及4种缀合物与2种对照化合物(芝加哥天蓝(CSB)及恩夫韦肽)一起运行，已知对照化合物可防止由病毒gp120结合于宿主细胞受体(CD4)介导的细胞融合。CSB及恩夫韦肽的EC50值为781nM及358nM，表明对细胞融合有中度抑制。相比之下，5种Int的范围为从＜0.0051nM至70.1nM。总的来说，在此分析中测试的Int显示出显著高于经批准的HIV治疗剂恩夫韦肽的活性。除缀合物14外，四种缀合物也表现出可接受的活性。
最后，在本研究中测试的浓度下，没有测试制品显示出细胞毒性。
表9.先导化合物在细胞融合分析中的活性(EC50)及细胞毒性(TC50)
化合物 EC<sub>50</sub>(nM) TC<sub>50</sub> 治疗指数(TI)
芝加哥天蓝(ng/mL) 781 >10,000 >12.8
恩夫韦肽 358 >1,000 >2.8
Int-18 <0.0051 >2000 >392,157
Int-22 0.732 >2000 >2732
Int-25 70.1 >2000 >28.5
Int-26 7.6 >2000 >263
Int-27 20.8 >2000 >96.2
缀合物9 795 >2000 >2.5
缀合物12 746 >2000 >2.7
缀合物13 345 >2000 >5.8
缀合物14 >2000 >2000 N.D.

Claims (235)

1.一种由式(D-I)、(M-I)、(1)或(2)中任一者描述的缀合物：
Figure FDA0003487201450000011
其中每个A1及每个A2独立地由式(A-I)或式(A-II)描述：
Figure FDA0003487201450000012
其中Q选自由以下组成的组：
Figure FDA0003487201450000013
Figure FDA0003487201450000014
及
Figure FDA0003487201450000015
S选自由以下组成的组：
Figure FDA0003487201450000021
及
Figure FDA0003487201450000022
R1、R2、R3各自独立地选自H、OH、卤素、腈、硝基、任选取代的氨基、任选取代的巯基、任选取代的羧基、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20烯基、任选取代的C3-C20环烯基、任选取代的C2-C20炔基、任选取代的C5-C20芳基、任选取代的C3-C15杂芳基及任选取代的C1-C20烷氧基；
R4选自任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C5-C15芳基、任选取代的C3-C15杂芳基及键；
R5选自H或任选取代的C1-C6烷基；
R6选自任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C5-C15芳基及任选取代的C3-C15杂芳基；
U1、U2、U3、U4及U5各自独立地选自H、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C2-C20烯基、任选取代的C2-C20炔基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C5-C15芳基及任选取代的C3-C15杂芳基；
R7及Y各自独立地选自
Figure FDA0003487201450000031
R8各自独立地选自H、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C5-C15芳基及任选取代的C2-C15杂芳基；
R9各自独立地选自任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C5-C15芳基及任选取代的C2-C15杂芳基；
x为1或2；
k为0、1、2、3、4或5；
Ar选自由以下组成的组：任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C5-C15芳基及任选取代的C3-C15杂芳基；
n为1或2；
每个E包含Fc结构域单体、白蛋白、白蛋白结合肽或Fc结合肽；L为共价附接至E且附接至每个A1或每个A1及A2的每个Y的接头；
T为1至20的整数，且
式(D-I)、(M-I)、(1)或(2)中的每条波浪线指示L共价附接至每个E；
或其药学上可接受的盐。
2.如权利要求1所述的缀合物，其中每个A1及每个A2独立地由式(A-I)描述。
3.如权利要求2所述的缀合物，其中每个A1及每个A2独立地由式(A-Ia)-(A-Ih)中任一者描述：
Figure FDA0003487201450000041
Figure FDA0003487201450000051
Figure FDA0003487201450000052
及
Figure FDA0003487201450000053
其中每个X独立地为C或N；
或其药学上可接受的盐。
4.如权利要求3所述的缀合物，其中每个A1及每个A2独立地由式(A-Ia-i)-(A-Ih-i)中任一者描述：
Figure FDA0003487201450000054
Figure FDA0003487201450000055
及
Figure FDA0003487201450000056
或其药学上可接受的盐。
5.如权利要求1所述的缀合物，其中每个A1及每个A2独立地由式(A-Ii)-(A-Ip)中任一者描述：
Figure FDA0003487201450000061
Figure FDA0003487201450000062
及
Figure FDA0003487201450000063
其中每个X独立地为C或N；
或其药学上可接受的盐。
6.如权利要求1所述的缀合物，其中每个A1及每个A2独立地由式(A-Iq)-(A-Ix)中任一者描述：
Figure FDA0003487201450000064
Figure FDA0003487201450000071
Figure FDA0003487201450000072
及
Figure FDA0003487201450000073
或其药学上可接受的盐。
7.如权利要求6所述的缀合物，其中每个A1及每个A2独立地由式(A-Iq-i)-(A-Ix-i)中任一者描述：
Figure FDA0003487201450000074
Figure FDA0003487201450000075
及
Figure FDA0003487201450000076
或其药学上可接受的盐。
8.如权利要求1所述的缀合物，其中每个A1及每个A2独立地由式(A-Iaa)-(A-Ihh)中任一者描述：
Figure FDA0003487201450000081
Figure FDA0003487201450000082
及
Figure FDA0003487201450000083
或其药学上可接受的盐。
9.如权利要求1所述的缀合物，其中每个A1及每个A2独立地由式(A-Iii)-(A-Ipp)中任一者描述：
Figure FDA0003487201450000084
Figure FDA0003487201450000091
及
Figure FDA0003487201450000092
其中每个X独立地为C或N；
或其药学上可接受的盐。
10.如权利要求9所述的缀合物，其中每个A1及每个A2独立地由式(A-Iaa-i)-(A-Ihh-i)中任一者描述：
Figure FDA0003487201450000093
Figure FDA0003487201450000094
及
Figure FDA0003487201450000095
或其药学上可接受的盐。
11.如权利要求1所述的缀合物，其中每个A1及每个A2独立地由式(A-IIa)-(A-IId)中任一者描述：
Figure FDA0003487201450000101
其中U6及U7各自独立地选自F、Cl、Br或I；
或其药学上可接受的盐。
12.如权利要求11所述的缀合物，其中每个A1及每个A2独立地由式(A-IIa-i)-(A-IId-i)中任一者描述：
Figure FDA0003487201450000111
其中U5为C1-C10烷基；
或其药学上可接受的盐。
13.如权利要求1所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-I)描述：
Figure FDA0003487201450000112
其中每个A1及每个A2独立地由式(A-I)描述；
每个E包含Fc结构域单体；且
连接至E的波浪线指示每个A1-L-A2共价附接至E；
或其药学上可接受的盐。
14.如权利要求13所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-II)描述：
Figure FDA0003487201450000121
其中X为C、O或N，
或其药学上可接受的盐。
15.如权利要求14所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-III)描述：
Figure FDA0003487201450000122
或其药学上可接受的盐。
16.如权利要求15所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-III-1)描述：
Figure FDA0003487201450000131
或其药学上可接受的盐。
17.如权利要求16所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-III-2)描述：
Figure FDA0003487201450000141
其中L’是L的剩余部分，且
y1及y2各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
18.如权利要求17所述的缀合物，其中L’为氮原子。
19.如权利要求15所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-III-3)描述：
Figure FDA0003487201450000151
或其药学上可接受的盐。
20.如权利要求19所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-III-4)描述：
Figure FDA0003487201450000152
其中L’是L的剩余部分，且
y1及y2各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
21.如权利要求20所述的缀合物，其中L’为氮原子。
22.如权利要求15所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-III-5)描述：
Figure FDA0003487201450000161
或其药学上可接受的盐。
23.如权利要求22所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-III-6)描述：
Figure FDA0003487201450000171
其中L’是L的剩余部分，且
y1及y2各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
24.如权利要求23所述的缀合物，其中L’为氮原子。
25.如权利要求14所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-IV)描述：
Figure FDA0003487201450000181
或其药学上可接受的盐。
26.如权利要求25所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-IV-1)描述：
Figure FDA0003487201450000182
或其药学上可接受的盐。
27.如权利要求26所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-IV-2)描述：
Figure FDA0003487201450000191
其中L’是L的剩余部分，且
y1及y2各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
28.如权利要求27所述的缀合物，其中L’为氮原子。
29.如权利要求25所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-IV-3)描述：
Figure FDA0003487201450000201
或其药学上可接受的盐。
30.如权利要求29所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-IV-4)描述：
Figure FDA0003487201450000202
其中L’是L的剩余部分，且
y1及y2各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
31.如权利要求30所述的缀合物，其中L’为氮原子。
32.如权利要求25所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-IV-5)描述：
Figure FDA0003487201450000211
或其药学上可接受的盐。
33.如权利要求32所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-IV-6)描述：
Figure FDA0003487201450000221
其中L’是L的剩余部分，且
y1及y2各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
34.如权利要求33所述的缀合物，其中L’为氮原子。
35.如权利要求14所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-V)描述：
Figure FDA0003487201450000231
或其药学上可接受的盐。
36.如权利要求35所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-V-1)描述：
Figure FDA0003487201450000232
或其药学上可接受的盐。
37.如权利要求36所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-V-2)描述：
Figure FDA0003487201450000241
其中L’是L的剩余部分，且
y1及y2各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
38.如权利要求37所述的缀合物，其中L’为氮原子。
39.如权利要求35所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-V-3)描述：
Figure FDA0003487201450000251
或其药学上可接受的盐。
40.如权利要求39所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-V-4)描述：
Figure FDA0003487201450000252
其中L’是L的剩余部分，且
y1及y2各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
41.如权利要求40所述的缀合物，其中L’为氮原子。
42.如权利要求35所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-V-5)描述：
Figure FDA0003487201450000261
或其药学上可接受的盐。
43.如权利要求42所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-V-6)描述：
Figure FDA0003487201450000271
其中L’是L的剩余部分，且
y1及y2各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
44.如权利要求43所述的缀合物，其中L’为氮原子。
45.如权利要求14所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-VI)描述：
Figure FDA0003487201450000281
或其药学上可接受的盐。
46.如权利要求45所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-VI-1)描述：
Figure FDA0003487201450000282
或其药学上可接受的盐。
47.如权利要求46所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-VI-2)描述：
Figure FDA0003487201450000291
其中L’是L的剩余部分，且
y1及y2各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
48.如权利要求47所述的缀合物，其中L’为氮原子。
49.如权利要求45所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-VI-3)描述：
Figure FDA0003487201450000301
或其药学上可接受的盐。
50.如权利要求49所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-VI-4)描述：
Figure FDA0003487201450000302
其中L’是L的剩余部分，且
y1及y2各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
51.如权利要求50所述的缀合物，其中L’为氮原子。
52.如权利要求45所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-VI-5)描述：
Figure FDA0003487201450000311
或其药学上可接受的盐。
53.如权利要求52所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-VI-6)描述：
Figure FDA0003487201450000321
其中L’是L的剩余部分，且
y1及y2各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
54.如权利要求53所述的缀合物，其中L’为氮原子。
55.如权利要求13所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-VII)描述：
Figure FDA0003487201450000322
Figure FDA0003487201450000331
其中X为C、O或N，
或其药学上可接受的盐。
56.如权利要求55所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-VIII)描述：
Figure FDA0003487201450000332
或其药学上可接受的盐。
57.如权利要求56所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-VIII-1)描述：
Figure FDA0003487201450000341
其中L’是L的剩余部分，且
y1及y2各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
58.如权利要求57所述的缀合物，其中L’为氮原子。
59.如权利要求55所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-IX)描述：
Figure FDA0003487201450000342
Figure FDA0003487201450000351
或其药学上可接受的盐。
60.如权利要求59所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-IX-1)描述：
Figure FDA0003487201450000352
其中L’是L的剩余部分，且
y1及y2各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
61.如权利要求60所述的缀合物，其中L’为氮原子。
62.如权利要求55所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-X)描述：
Figure FDA0003487201450000361
或其药学上可接受的盐。
63.如权利要求62所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-X-1)描述：
Figure FDA0003487201450000362
其中L’是L的剩余部分，且
y1及y2各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
64.如权利要求63所述的缀合物，其中L’为氮原子。
65.如权利要求55所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-XI)描述：
Figure FDA0003487201450000371
或其药学上可接受的盐。
66.如权利要求65所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-XI-1)描述：
Figure FDA0003487201450000381
其中L’是L的剩余部分，且
y1及y2各自独立地为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
67.如权利要求66所述的缀合物，其中L’为氮原子。
68.如权利要求13所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-XII)描述：
Figure FDA0003487201450000382
其中X为C、O或N，
或其药学上可接受的盐。
69.如权利要求68所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-XII-1)描述：
Figure FDA0003487201450000391
或其药学上可接受的盐。
70.如权利要求69所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-XII-2)描述：
Figure FDA0003487201450000392
或其药学上可接受的盐。
71.如权利要求13所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-XIII)描述：
Figure FDA0003487201450000401
或其药学上可接受的盐。
72.如权利要求71所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-XIII-1)描述：
Figure FDA0003487201450000402
或其药学上可接受的盐。
73.如权利要求72所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-XIII-2)描述：
Figure FDA0003487201450000411
或其药学上可接受的盐。
74.如权利要求1所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-I)描述：
Figure FDA0003487201450000412
其中每个A1及每个A2独立地由式(A-II)描述；
每个E包含Fc结构域单体；
连接至E的波浪线指示每个A1-L-A2共价附接至E；
或其药学上可接受的盐。
75.如权利要求74所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-XIV)描述：
Figure FDA0003487201450000421
或其药学上可接受的盐。
76.如权利要求75所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-XIV-1)描述：
Figure FDA0003487201450000422
或其药学上可接受的盐。
77.如权利要求76所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-XIV-2)描述：
Figure FDA0003487201450000431
其中L’为L的剩余部分，
y1及y2各自独立地为1至20的整数
或其药学上可接受的盐。
78.如权利要求76所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-XIV-3)描述：
Figure FDA0003487201450000441
其中L’是L的剩余部分，且
e1及e2各自独立地为1至10的整数
y1及y2各自独立地为1至20的整数
或其药学上可接受的盐。
79.如权利要求76所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-XIV-4)描述：
Figure FDA0003487201450000442
Figure FDA0003487201450000451
其中L’是L的剩余部分，且
e1、e2、e3及e4各自独立地为1至10的整数
y1及y2各自独立地为1至20的整数
或其药学上可接受的盐。
80.如权利要求76所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-XIV-5)描述：
Figure FDA0003487201450000452
其中L’是L的剩余部分，且
e1、e2、e3及e4各自独立地为1至10的整数
y1及y2各自独立地为1至20的整数
或其药学上可接受的盐。
81.如权利要求74所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-XV)描述：
Figure FDA0003487201450000461
或其药学上可接受的盐。
82.如权利要求81所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-XV-1)描述：
Figure FDA0003487201450000462
Figure FDA0003487201450000471
或其药学上可接受的盐。
83.如权利要求82所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-XV-2)描述：
Figure FDA0003487201450000472
其中L’为L的剩余部分，
y1及y2各自独立地为1至20的整数
或其药学上可接受的盐。
84.如权利要求82所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-XV-3)描述：
Figure FDA0003487201450000481
其中L’是L的剩余部分，且
e1及e2各自独立地为1至10的整数
y1及y2各自独立地为1至20的整数
或其药学上可接受的盐。
85.如权利要求82所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-XV-4)描述：
Figure FDA0003487201450000491
其中L’是L的剩余部分，且
e1、e2、e3及e4各自独立地为1至10的整数
y1及y2各自独立地为1至20的整数
或其药学上可接受的盐。
86.如权利要求82所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-XV-5)描述：
Figure FDA0003487201450000501
其中L’是L的剩余部分，且
e1、e2、e3及e4各自独立地为1至10的整数
y1及y2各自独立地为1至20的整数
或其药学上可接受的盐。
87.如权利要求74所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-XVI)描述：
Figure FDA0003487201450000511
或其药学上可接受的盐。
88.如权利要求86所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-XVI-1)描述：
Figure FDA0003487201450000512
其中U5为C1-C10烷基；
或其药学上可接受的盐。
89.如权利要求88所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-XVI-2)描述：
Figure FDA0003487201450000521
其中L’为L的剩余部分，
y1及y2各自独立地为1至20的整数
或其药学上可接受的盐。
90.如权利要求88所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-XVI-3)描述：
Figure FDA0003487201450000531
其中L’是L的剩余部分，且
e1及e2各自独立地为1至10的整数
y1及y2各自独立地为1至20的整数
或其药学上可接受的盐。
91.如权利要求88所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-XVI-4)描述：
Figure FDA0003487201450000541
其中L’是L的剩余部分，且
e1、e2、e3及e4各自独立地为1至10的整数
y1及y2各自独立地为1至20的整数
或其药学上可接受的盐。
92.如权利要求88所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-XVI-5)描述：
Figure FDA0003487201450000551
其中L’是L的剩余部分，且
e1、e2、e3及e4各自独立地为1至10的整数
y1及y2各自独立地为1至20的整数
或其药学上可接受的盐。
93.如权利要求74所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-XVII)描述：
Figure FDA0003487201450000561
或其药学上可接受的盐。
94.如权利要求93所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-XVII-1)描述：
Figure FDA0003487201450000562
或其药学上可接受的盐。
95.如权利要求94所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-XVII-2)描述：
Figure FDA0003487201450000571
其中L’为L的剩余部分，
y1及y2各自独立地为1至20的整数
或其药学上可接受的盐。
96.如权利要求94所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-XVII-3)描述：
Figure FDA0003487201450000581
其中L’是L的剩余部分，且
e1及e2各自独立地为1至10的整数
y1及y2各自独立地为1至20的整数
或其药学上可接受的盐。
97.如权利要求94所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-XVII-4)描述：
Figure FDA0003487201450000582
其中L’是L的剩余部分，且
e1、e2、e3及e4各自独立地为1至10的整数
y1及y2各自独立地为1至20的整数
或其药学上可接受的盐。
98.如权利要求94所述的缀合物，其中所述缀合物由式(D-XVII-5)描述：
Figure FDA0003487201450000591
其中L’是L的剩余部分，且
e1、e2、e3及e4各自独立地为1至10的整数
y1及y2各自独立地为1至20的整数
或其药学上可接受的盐。
99.如权利要求1至98中任一项所述的缀合物，其中L或L’包含一个或多个任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C1-C20亚杂烷基、任选取代的C2-C20亚烯基、任选取代的C2-C20亚杂烯基、任选取代的C2-C20亚炔基、任选取代的C2-C20亚杂炔基、任选取代的C3-C20亚环烷基、任选取代的C2-C20亚杂环烷基、任选取代的C4-C20亚环烯基、任选取代的C4-C20亚杂环烯基、任选取代的C8-C20亚环炔基、任选取代的C8-C20亚杂环炔基、任选取代的C5-C15亚芳基、任选取代的C3-C15亚杂芳基、O、S、NRi、P、羰基、硫羰基、磺酰基、磷酸酯基、磷酰基或亚氨基，
其中Ri为H、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C1-C20杂烷基、任选取代的C2-C20烯基、任选取代的C2-C20杂烯基、任选取代的C2-C20炔基、任选取代的C2-C20杂炔基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C4-C20环烯基、任选取代的C4-C20杂环烯基、任选取代的C8-C20环炔基、任选取代的C8-C20杂环炔基、任选取代的C5-C15芳基或任选取代的C3-C15杂芳基。
100.如权利要求99所述的缀合物，其中L或L’的骨架由一个或多个任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C1-C20亚杂烷基、任选取代的C2-C20亚烯基、任选取代的C2-C20亚杂烯基、任选取代的C2-C20亚炔基、任选取代的C2-C20亚杂炔基、任选取代的C3-C20亚环烷基、任选取代的C2-C20亚杂环烷基、任选取代的C4-C20亚环烯基、任选取代的C4-C20亚杂环烯基、任选取代的C8-C20亚环炔基、任选取代的C8-C20亚杂环炔基、任选取代的C5-C15亚芳基、任选取代的C3-C15亚杂芳基、O、S、NRi、P、羰基、硫羰基、磺酰基、磷酸酯基、磷酰基或亚氨基组成，
其中Ri为H、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C1-C20杂烷基、任选取代的C2-C20烯基、任选取代的C2-C20杂烯基、任选取代的C2-C20炔基、任选取代的C2-C20杂炔基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C4-C20环烯基、任选取代的C4-C20杂环烯基、任选取代的C8-C20环炔基、任选取代的C8-C20杂环炔基、任选取代的C5-C15芳基或任选取代的C3-C15杂芳基。
101.如权利要求99或100所述的缀合物，其中L或L’经氧代取代。
102.如权利要求1至101中任一项所述的缀合物，其中L或L’的骨架包含不超过250个原子。
103.如权利要求1至102中任一项所述的缀合物，其中L或L’能够形成酰胺、氨基甲酸酯、磺酰基或脲连接。
104.如权利要求1至98中任一项所述的缀合物，其中L或L’为键。
105.如权利要求1至98中任一项所述的缀合物，其中L或L’为原子。
106.如权利要求1至105中任一项所述的缀合物，其中每个L由式(D-L-I)描述：
Figure FDA0003487201450000611
其中LA由式GA1-(ZA1)g1-(YA1)h1-(ZA2)i1-(YA2)j1-(ZA3)k1-(YA3)l1-(ZA4)m1-(YA4)n1-(ZA5)o1-GA2描述；
LB由式GB1-(ZB1)g2-(YB1)h2-(ZB2)i2-(YB2)j2-(ZB3)k2-(YB3)l2-(ZB4)m2-(YB4)n2-(ZB5)o2-GB2描述；
LC由式GC1-(ZC1)g3-(YC1)h3-(ZC2)i3-(YC2)j3-(ZC3)k3-(YC3)l3-(ZC4)m3-(YC4)n3-(ZC5)o3-GC2描述；
GA1是附接至Qi的键；
GA2是附接至A1的键；
GB1是附接至Qi的键；
GB2是附接至A2的键；
GC1是附接至Qi的键；
GC2是附接至E的键或能够与缀合于E的官能团反应的官能团(例如，马来酰亚胺及半胱氨酸、胺及经活化羧酸、硫醇及马来酰亚胺、经活化磺酸及胺、异氰酸酯及胺、叠氮化物及炔以及烯烃及四嗪)；
ZA1、ZA2、ZA3、ZA4、ZA5、ZB1、ZB2、ZB3、ZB4、ZB5、ZC1、ZC2、ZC3、ZC4及ZC5中的每一者独立地为任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C1-C20亚杂烷基、任选取代的C2-C20亚烯基、任选取代的C2-C20亚杂烯基、任选取代的C2-C20亚炔基、任选取代的C2-C20亚杂炔基、任选取代的C3-C20亚环烷基、任选取代的C2-C20亚杂环烷基、任选取代的C4-C20亚环烯基、任选取代的C4-C20亚杂环烯基、任选取代的C8-C20亚环炔基、任选取代的C8-C20亚杂环炔基、任选取代的C5-C15亚芳基或任选取代的C3-C15亚杂芳基；
YA1、YA2、YA3、YA4、YB1、YB2、YB3、YB4、YC1、YC2、YC3及YC4中的每一者独立地为O、S、NRi、P、羰基、硫羰基、磺酰基、磷酸酯基、磷酰基或亚氨基；
其中Ri为H、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C1-C20杂烷基、任选取代的C2-C20烯基、任选取代的C2-C20杂烯基、任选取代的C2-C20炔基、任选取代的C2-C20杂炔基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C4-C20环烯基、任选取代的C4-C20杂环烯基、任选取代的C8-C20环炔基、任选取代的C8-C20杂环炔基、任选取代的C5-C15芳基或任选取代的C3-C15杂芳基；
g1、h1、i1、j1、k1、l1、m1、n1、o1、g2、h2、i2、j2、k2、l2、m2、n2、o2、g3、h3、i3、j3、k3、l3、m3、n3及o3中的每一者独立地为0或1；
Qi为氮原子、任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C1-C20亚杂烷基、任选取代的C2-C20亚烯基、任选取代的C2-C20亚杂烯基、任选取代的C2-C20亚炔基、任选取代的C2-C20亚杂炔基、任选取代的C3-C20亚环烷基、任选取代的C2-C20亚杂环烷基、任选取代的C4-C20亚环烯基、任选取代的C4-C20亚杂环烯基、任选取代的C8-C20亚环炔基、任选取代的C8-C20亚杂环炔基、任选取代的C5-C15亚芳基或任选取代的C3-C15亚杂芳基。
107.如权利要求106所述的缀合物，其中L选自
Figure FDA0003487201450000631
Figure FDA0003487201450000641
Figure FDA0003487201450000651
Figure FDA0003487201450000661
Figure FDA0003487201450000671
Figure FDA0003487201450000681
Figure FDA0003487201450000691
Figure FDA0003487201450000701
Figure FDA0003487201450000711
Figure FDA0003487201450000721
Figure FDA0003487201450000731
其中z1、z2、y1、y2、y3及y4各自独立地为1至20的整数；且
R9选自H、C1-C20烷基、C3-C20环烷基、C2-C20杂环烷基、任选取代的C5-C15芳基及C3-C15杂芳基。
108.如权利要求1所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-I)描述：
Figure FDA0003487201450000732
其中每个A1独立地由式(A-I)描述；
每个E包含Fc结构域单体，且
连接至E的波浪线指示每个A1-L共价附接至E；
或其药学上可接受的盐。
109.如权利要求108所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-II)描述：
Figure FDA0003487201450000741
其中X为C、O或N，
或其药学上可接受的盐。
110.如权利要求109所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-III)描述：
Figure FDA0003487201450000751
或其药学上可接受的盐。
111.如权利要求110所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-III-1)描述：
Figure FDA0003487201450000752
或其药学上可接受的盐。
112.如权利要求111所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-III-2)描述：
Figure FDA0003487201450000761
其中L’是L的剩余部分，且
y1为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
113.如权利要求112所述的缀合物，其中L’为氮原子。
114.如权利要求110所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-III-3)描述：
Figure FDA0003487201450000771
或其药学上可接受的盐。
115.如权利要求114所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-III-4)描述：
Figure FDA0003487201450000772
其中L’是L的剩余部分，且
y1为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
116.如权利要求115所述的缀合物，其中L’为氮原子。
117.如权利要求110所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-III-5)描述：
Figure FDA0003487201450000781
或其药学上可接受的盐。
118.如权利要求117所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-III-6)描述：
Figure FDA0003487201450000791
其中L’是L的剩余部分，且
y1为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
119.如权利要求118所述的缀合物，其中L’为氮原子。
120.如权利要求109所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-IV)描述：
Figure FDA0003487201450000801
或其药学上可接受的盐。
121.如权利要求120所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-IV-1)描述：
Figure FDA0003487201450000802
或其药学上可接受的盐。
122.如权利要求121所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-IV-2)描述：
Figure FDA0003487201450000811
其中L’是L的剩余部分，且
y1为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
123.如权利要求122所述的缀合物，其中L’为氮原子。
124.如权利要求120所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-IV-3)描述：
Figure FDA0003487201450000821
或其药学上可接受的盐。
125.如权利要求124所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-IV-4)描述：
Figure FDA0003487201450000822
其中L’是L的剩余部分，且
y1为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
126.如权利要求125所述的缀合物，其中L’为氮原子。
127.如权利要求120所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-IV-5)描述：
Figure FDA0003487201450000831
或其药学上可接受的盐。
128.如权利要求127所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-IV-6)描述：
Figure FDA0003487201450000832
其中L’是L的剩余部分，且
y1为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
129.如权利要求128所述的缀合物，其中L’为氮原子。
130.如权利要求109所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-V)描述：
Figure FDA0003487201450000841
或其药学上可接受的盐。
131.如权利要求130所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-V-1)描述：
Figure FDA0003487201450000851
或其药学上可接受的盐。
132.如权利要求131所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-V-2)描述：
Figure FDA0003487201450000852
其中L’是L的剩余部分，且
y1为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
133.如权利要求132所述的缀合物，其中L’为氮原子。
134.如权利要求130所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-V-3)描述：
Figure FDA0003487201450000861
或其药学上可接受的盐。
135.如权利要求132所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-V-4)描述：
Figure FDA0003487201450000871
其中L’是L的剩余部分，且
y1为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
136.如权利要求135所述的缀合物，其中L’为氮原子。
137.如权利要求130所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-V-5)描述：
Figure FDA0003487201450000872
Figure FDA0003487201450000881
或其药学上可接受的盐。
138.如权利要求137所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-V-6)描述：
Figure FDA0003487201450000882
其中L’是L的剩余部分，且
y1为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
139.如权利要求138所述的缀合物，其中L’为氮原子。
140.如权利要求109所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-VI)描述：
Figure FDA0003487201450000891
或其药学上可接受的盐。
141.如权利要求140所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-VI-1)描述：
Figure FDA0003487201450000892
或其药学上可接受的盐。
142.如权利要求141所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-VI-2)描述：
Figure FDA0003487201450000901
其中L’是L的剩余部分，且
y1为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
143.如权利要求142所述的缀合物，其中L’为氮原子。
144.如权利要求140所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-VI-3)描述：
Figure FDA0003487201450000911
或其药学上可接受的盐。
145.如权利要求144所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-VI-4)描述：
Figure FDA0003487201450000912
其中L’是L的剩余部分，且
y1为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
146.如权利要求145所述的缀合物，其中L’为氮原子。
147.如权利要求140所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-VI-5)描述：
Figure FDA0003487201450000921
或其药学上可接受的盐。
148.如权利要求147所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-VI-6)描述：
Figure FDA0003487201450000931
其中L’是L的剩余部分，且
y1为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
149.如权利要求148所述的缀合物，其中L’为氮原子。
150.如权利要求108所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-VII)描述：
Figure FDA0003487201450000932
Figure FDA0003487201450000941
其中X为C、O或N，
或其药学上可接受的盐。
151.如权利要求150所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-VIII)描述：
Figure FDA0003487201450000942
或其药学上可接受的盐。
152.如权利要求151所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-VIII-1)描述：
Figure FDA0003487201450000951
其中L’是L的剩余部分，且
y1为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
153.如权利要求152所述的缀合物，其中L’为氮原子。
154.如权利要求150所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-IX)描述：
Figure FDA0003487201450000952
Figure FDA0003487201450000961
或其药学上可接受的盐。
155.如权利要求154所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-IX-1)描述：
Figure FDA0003487201450000962
其中L’是L的剩余部分，且
y1为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
156.如权利要求155所述的缀合物，其中L’为氮原子。
157.如权利要求150所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-X)描述：
Figure FDA0003487201450000971
或其药学上可接受的盐。
158.如权利要求157所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-X-1)描述：
Figure FDA0003487201450000972
其中L’是L的剩余部分，且
y1为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
159.如权利要求158所述的缀合物，其中L’为氮原子。
160.如权利要求150所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-XI)描述：
Figure FDA0003487201450000981
或其药学上可接受的盐。
161.如权利要求160所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-XI-1)描述：
Figure FDA0003487201450000982
其中L’是L的剩余部分，且
y1为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
162.如权利要求161所述的缀合物，其中L’为氮原子。
163.如权利要求108所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-XII)描述：
Figure FDA0003487201450000991
其中X为C、O或N，
或其药学上可接受的盐。
164.如权利要求163所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-XII-1)描述：
Figure FDA0003487201450000992
Figure FDA0003487201450001001
或其药学上可接受的盐。
165.如权利要求164所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-XII-2)描述：
Figure FDA0003487201450001002
或其药学上可接受的盐。
166.如权利要求108所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-XIII)描述：
Figure FDA0003487201450001003
或其药学上可接受的盐。
167.如权利要求166所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-XIII-1)描述：
Figure FDA0003487201450001011
或其药学上可接受的盐。
168.如权利要求167所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-XIII-2)描述：
Figure FDA0003487201450001012
或其药学上可接受的盐。
169.如权利要求1所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-I)描述：
Figure FDA0003487201450001021
其中每个A1独立地由式(A-II)描述；
每个E包含Fc结构域单体；
连接至E的波浪线指示每个A1-L-A2共价附接至E；
或其药学上可接受的盐。
170.如权利要求169所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-XIV)描述：
Figure FDA0003487201450001022
或其药学上可接受的盐。
171.如权利要求170所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-XIV-1)描述：
Figure FDA0003487201450001031
或其药学上可接受的盐。
172.如权利要求171所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-XIV-2)描述：
Figure FDA0003487201450001032
其中L’为L的剩余部分，
y1为1至20的整数
或其药学上可接受的盐。
173.如权利要求171所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-XIV-3)描述：
Figure FDA0003487201450001041
其中L’是L的剩余部分，且
e1为1至10的整数
y1为1至20的整数
或其药学上可接受的盐。
174.如权利要求171所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-XIV-4)描述：
Figure FDA0003487201450001051
其中L’是L的剩余部分，且
e1及e3各自独立地为1至10的整数
y1为1至20的整数
或其药学上可接受的盐。
175.如权利要求171所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-XIV-5)描述：
Figure FDA0003487201450001061
其中L’是L的剩余部分，且
e1及e3各自独立地为1至10的整数
y1为1至20的整数
或其药学上可接受的盐。
176.如权利要求169所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-XV)描述：
Figure FDA0003487201450001071
或其药学上可接受的盐。
177.如权利要求176所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-XV-1)描述：
Figure FDA0003487201450001072
或其药学上可接受的盐。
178.如权利要求177所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-XV-2)描述：
Figure FDA0003487201450001081
其中L’为L的剩余部分，
y1为1至20的整数
或其药学上可接受的盐。
179.如权利要求177所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-XV-3)描述：
Figure FDA0003487201450001091
其中L’是L的剩余部分，且
e1为1至10的整数
y1为1至20的整数
或其药学上可接受的盐。
180.如权利要求177所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-XV-4)描述：
Figure FDA0003487201450001101
其中L’是L的剩余部分，且
e1及e3各自独立地为1至10的整数
y1为1至20的整数
或其药学上可接受的盐。
181.如权利要求177所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-XV-5)描述：
Figure FDA0003487201450001111
其中L’是L的剩余部分，且
e1及e3各自独立地为1至10的整数
y1为1至20的整数
或其药学上可接受的盐。
182.如权利要求169所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-XVI)描述：
Figure FDA0003487201450001121
或其药学上可接受的盐。
183.如权利要求182所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-XVI-1)描述：
Figure FDA0003487201450001122
其中U5为C1-C10烷基；
或其药学上可接受的盐。
184.如权利要求183所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-XVI-2)描述：
Figure FDA0003487201450001131
其中L’为L的剩余部分，
y1为1至20的整数
或其药学上可接受的盐。
185.如权利要求183所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-XVI-3)描述：
Figure FDA0003487201450001141
其中L’是L的剩余部分，且
e1为1至10的整数
y1为1至20的整数
或其药学上可接受的盐。
186.如权利要求183所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-XVI-4)描述：
Figure FDA0003487201450001151
其中L’是L的剩余部分，且
e1及e3各自独立地为1至10的整数
y1为1至20的整数
或其药学上可接受的盐。
187.如权利要求183所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-XVI-5)描述：
Figure FDA0003487201450001161
其中L’是L的剩余部分，且
e1及e3各自独立地为1至10的整数
y1为1至20的整数
或其药学上可接受的盐。
188.如权利要求169所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-XVII)描述：
Figure FDA0003487201450001171
或其药学上可接受的盐。
189.如权利要求188所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-XVII-1)描述：
Figure FDA0003487201450001172
或其药学上可接受的盐。
190.如权利要求189所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-XVII-2)描述：
Figure FDA0003487201450001181
其中L’为L的剩余部分，
y1为1至20的整数
或其药学上可接受的盐。
191.如权利要求189所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-XVII-3)描述：
Figure FDA0003487201450001191
其中L’是L的剩余部分，且
e1为1至10的整数
y1为1至20的整数
或其药学上可接受的盐。
192.如权利要求189所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-XVII-4)描述：
Figure FDA0003487201450001201
其中L’是L的剩余部分，且
e1及e3各自独立地为1至10的整数
y1为1至20的整数
或其药学上可接受的盐。
193.如权利要求189所述的缀合物，其中所述缀合物由式(M-XVII-5)描述：
Figure FDA0003487201450001211
其中L’是L的剩余部分，且
e1及e3各自独立地为1至10的整数
y1为1至20的整数
或其药学上可接受的盐。
194.如权利要求108至193中任一项所述的缀合物，其中L或L’包含一个或多个任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C1-C20亚杂烷基、任选取代的C2-C20亚烯基、任选取代的C2-C20亚杂烯基、任选取代的C2-C20亚炔基、任选取代的C2-C20亚杂炔基、任选取代的C3-C20亚环烷基、任选取代的C2-C20亚杂环烷基、任选取代的C4-C20亚环烯基、任选取代的C4-C20亚杂环烯基、任选取代的C8-C20亚环炔基、任选取代的C8-C20亚杂环炔基、任选取代的C5-C15亚芳基、任选取代的C3-C15亚杂芳基、O、S、NRi、P、羰基、硫羰基、磺酰基、磷酸酯基、磷酰基或亚氨基，
其中Ri为H、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C1-C20杂烷基、任选取代的C2-C20烯基、任选取代的C2-C20杂烯基、任选取代的C2-C20炔基、任选取代的C2-C20杂炔基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C4-C20环烯基、任选取代的C4-C20杂环烯基、任选取代的C8-C20环炔基、任选取代的C8-C20杂环炔基、任选取代的C5-C15芳基或任选取代的C3-C15杂芳基。
195.如权利要求194所述的缀合物，其中L或L’的骨架由一个或多个任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C1-C20亚杂烷基、任选取代的C2-C20亚烯基、任选取代的C2-C20亚杂烯基、任选取代的C2-C20亚炔基、任选取代的C2-C20亚杂炔基、任选取代的C3-C20亚环烷基、任选取代的C2-C20亚杂环烷基、任选取代的C4-C20亚环烯基、任选取代的C4-C20亚杂环烯基、任选取代的C8-C20亚环炔基、任选取代的C8-C20亚杂环炔基、任选取代的C5-C15亚芳基、任选取代的C3-C15亚杂芳基、O、S、NRi、P、羰基、硫羰基、磺酰基、磷酸酯基、磷酰基或亚氨基组成，
其中Ri为H、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C1-C20杂烷基、任选取代的C2-C20烯基、任选取代的C2-C20杂烯基、任选取代的C2-C20炔基、任选取代的C2-C20杂炔基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C4-C20环烯基、任选取代的C4-C20杂环烯基、任选取代的C8-C20环炔基、任选取代的C8-C20杂环炔基、任选取代的C5-C15芳基或任选取代的C3-C15杂芳基。
196.如权利要求194或195所述的缀合物，其中L或L’经氧代取代。
197.如权利要求108至196中任一项所述的缀合物，其中L或L’的骨架包含不超过250个原子。
198.如权利要求108至197中任一项所述的缀合物，其中L或L’能够形成酰胺、氨基甲酸酯、磺酰基或脲连接。
199.如权利要求108至197中任一项所述的缀合物，其中L或L’为键。
200.如权利要求108至197中任一项所述的缀合物，其中L或L’为原子。
201.如权利要求108至200中任一项所述的缀合物，其中每个L由式(M-L-I)描述：
J1-(Q1)g-(T1)h-(Q2)i-(T2)j-(Q3)k-(T3)l-(Q4)m-(T4)n-(Q5)o-J2
其中J1是附接A1的键；
J2是附接至E的键；
Q1、Q2、Q3、Q4及Q5中每一者独立地为任选取代的C1-C20亚烷基、任选取代的C1-C20亚杂烷基、任选取代的C2-C20亚烯基、任选取代的C2-C20亚杂烯基、任选取代的C2-C20亚炔基、任选取代的C2-C20亚杂炔基、任选取代的C3-C20亚环烷基、任选取代的C2-C20亚杂环烷基、任选取代的C4-C20亚环烯基、任选取代的C4-C20亚杂环烯基、任选取代的C8-C20亚环炔基、任选取代的C8-C20亚杂环炔基、任选取代的C5-C15亚芳基或任选取代的C3-C15亚杂芳基；
T1、T2、T3、T4中每一者独立地为O、S、NRi、P、羰基、硫羰基、磺酰基、磷酸酯基、磷酰基或亚氨基；
Ri为H、任选取代的C1-C20烷基、任选取代的C1-C20杂烷基、任选取代的C2-C20烯基、任选取代的C2-C20杂烯基、任选取代的C2-C20炔基、任选取代的C2-C20杂炔基、任选取代的C3-C20环烷基、任选取代的C2-C20杂环烷基、任选取代的C4-C20环烯基、任选取代的C4-C20杂环烯基、任选取代的C8-C20环炔基、任选取代的C8-C20杂环炔基、任选取代的C5-C15芳基或任选取代的C3-C15杂芳基；且g、h、i、j、k、l、m、n及o中每一者独立地为0或1。
202.如权利要求1至201中任一项所述的缀合物，其中连接至E的波浪线指示每个A1-L或每个A1-L-A2的L共价附接至E的暴露于溶剂的赖氨酸的氮原子。
203.如权利要求1至201中任一项所述的缀合物，其中连接至E的波浪线指示每个A1-L或每个A1-L-A2的L共价附接至E的暴露于溶剂的半胱氨酸的硫原子。
204.如权利要求1至203中任一项所述的缀合物，其中每个E为Fc结构域单体。
205.如权利要求204所述的缀合物，其中n为2，且每个E二聚以形成Fc结构域。
206.如权利要求13所述的缀合物，其中n为2，每个E为Fc结构域单体，每个E二聚以形成Fc结构域，且所述缀合物由式(D-I-1)描述：
Figure FDA0003487201450001241
其中J为Fc结构域；且
T为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
207.如权利要求108所述的缀合物，其中n为2，每个E为Fc结构域单体，每个E二聚以形成Fc结构域，且所述缀合物由式(M-I-1)描述：
Figure FDA0003487201450001251
其中J为Fc结构域；且
T为1至20的整数，
或其药学上可接受的盐。
208.如权利要求1至207中任一项所述的缀合物，其中每个E具有SEQ ID NO:1-95中任一者的序列。
209.如权利要求1至208中任一项所述的缀合物，其中T为1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
210.一种如权利要求1至208中任一项所述的缀合物的群体，其中T的平均值为1至10。
211.一种如权利要求210所述的缀合物的群体，其中T的平均值为1至5。
212.一种药物组合物，其包含如权利要求1至209中任一项所述的缀合物或如权利要求210或211所述的缀合物的群体，或者其药学上可接受的盐，及药学上可接受的赋形剂。
213.一种用于治疗具有病毒感染或据推测具有病毒感染的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的如权利要求1至209中任一项所述的缀合物、如权利要求210或211所述的缀合物的群体或如权利要求212所述的组合物。
214.一种用于预防性治疗有需要的受试者的病毒感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的如权利要求1至209中任一项所述的缀合物、如权利要求210或211所述的缀合物的群体或如权利要求212所述的组合物。
215.如权利要求213或214所述的方法，其中所述病毒感染是由人类免疫缺陷病毒(HIV)引起。
216.如权利要求215所述的方法，其中所述HIV为HIV-1或HIV-2。
217.如权利要求213至216中任一项所述的方法，其中所述受试者是免疫受损的。
218.如权利要求213至217中任一项所述的方法，其中所述受试者已经诊断患有体液免疫缺陷、T细胞缺陷、中性粒细胞减少症、无脾或补体缺陷。
219.如权利要求213至218中任一项所述的方法，其中所述受试者正在经免疫抑制性疗法治疗或即将经免疫抑制性疗法治疗。
220.如权利要求213至219中任一项所述的方法，其中所述受试者已经诊断患有引起免疫抑制的疾病。
221.如权利要求220所述的方法，其中所述疾病为癌症。
222.如权利要求221所述的方法，其中所述癌症为白血病、淋巴瘤或多发性骨髓瘤。
223.如权利要求213至222中任一项所述的方法，其中所述受试者已经受或即将经受造血干细胞移植。
224.如权利要求213至223中任一项所述的方法，其中所述受试者已经受或即将经受器官移植。
225.如权利要求213至224中任一项所述的方法，其中所述缀合物或组合物是肌肉内、静脉内、皮内、动脉内、腹膜内、病变内、颅内、关节内、前列腺内、胸膜内、气管内、鼻内、玻璃体内、阴道内、直肠内、经表面、肿瘤内、经腹膜、皮下、结膜下、囊内、经粘膜、心包内、脐内、眼内、经口、经局部、通过吸入、通过注射或通过输注施用。
226.如权利要求213至225中任一项所述的方法，其中所述受试者经第二治疗剂治疗。
227.如权利要求226所述的方法，其中所述第二治疗剂为抗病毒剂。
228.如权利要求227所述的方法，其中所述抗病毒剂选自整合酶抑制剂、核苷逆转录酶抑制剂(NRTI)、非核苷逆转录酶抑制剂(NNRTI)、蛋白酶抑制剂、病毒进入抑制剂、CCR5拮抗剂或CYP3A抑制剂。
229.如权利要求228所述的方法，其中所述整合酶抑制剂选自度鲁特韦、埃替格韦或雷特格韦。
230.如权利要求228所述的方法，其中所述核苷逆转录酶抑制剂(NRTI)选自阿巴卡韦、拉米夫定、齐多夫定、恩曲他滨、替诺福韦、恩曲他滨、去羟肌苷或司他夫定。
231.如权利要求228所述的方法，其中所述非核苷逆转录酶抑制剂(NNRTI)选自依法韦仑、依曲韦林、奈韦拉平、利匹韦林或地拉韦定。
232.如权利要求228所述的方法，其中所述蛋白酶抑制剂选自阿扎那韦、可比司他、达芦那韦、可比司他、洛匹那韦、利托那韦、福沙那韦、替拉那韦、奈非那韦、茚地那韦或沙奎那韦。
233.如权利要求228所述的方法，其中所述病毒进入抑制剂为恩夫韦肽。
234.如权利要求228所述的方法，其中所述CCR5拮抗剂为马拉韦罗。
235.如权利要求228所述的方法，其中所述CYP3A抑制剂为可比司他或利托那韦。
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