CN117186190A - 非洲猪瘟病毒外囊膜蛋白p12靶标表位抗原及其在早期检测诊断中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种非洲猪瘟病毒外囊膜蛋白p12靶标表位抗原及其在早期检测诊断中的应用。本发明所述的非洲猪瘟病毒外囊膜蛋白p12靶标表位抗原可特异性识别和结合针对非洲猪瘟病毒感染产生的特异性抗体，通过间接凝集试验形成靶标抗原‑抗体复合物聚合体的肉眼可见凝集反应，从而实现快速微量的便捷检测。特异性方面，靶标抗原检测系统均不与猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪瘟病毒（CSFV）和猪圆环病毒（PCV）感染产生的阳性血清产生交叉反应。敏感性方面，感染非洲猪瘟后第3天即可检测到特异性抗体，该敏感性显著高于传统血清学检测技术。鉴于本发明具有特异、敏感、早期、快速等优势，有望成为非洲猪瘟早期感染诊断和鉴别诊断的重要技术和平台。

Description

非洲猪瘟病毒外囊膜蛋白p12靶标表位抗原及其在早期检测 诊断中的应用

技术领域

本发明属于生物医学和免疫诊断检测技术领域，具体涉及一种非洲猪瘟病毒外囊膜蛋白p12靶标表位抗原及其在早期检测诊断中的应用。

背景技术

非洲猪瘟(African swine fever，ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fevervirus，ASFV)引起家猪和野猪的一种直接接触性、高致死率的传染病。目前无商品化疫苗或药物可用，主要依靠检测、扑杀和严格的生物安全等措施进行防控。常用的检测方法包括检测病原、核酸与抗体3个方面，值得注意的是，非洲猪瘟病原和核酸检测的实时定量PCR不适合用于在没有病毒血症的感染猪体，包括不适合非洲猪瘟弱毒株和CD2v缺失株感染猪检测，因为感染猪通常不能产生病毒血症。基于抗体检测的免疫学检测方法包括非洲猪瘟磁微粒，阻断试剂盒，间接ELISA方法，检测时间较长，通常在非洲猪瘟病毒感染后第9天才能检测到感染猪体的感染性抗体，很难满足早期精准拔牙和精准防控的需求。综上所述，迫切需要开发一种针对ASFV感染的早期、适合现场检测的特异敏感便捷检测方法。

ASFV粒子由外囊膜、衣壳、内囊膜、核壳和病毒拟核组成。外囊膜是ASFV最外层结构，在启动病毒感染过程中直接与宿主易感细胞互作，直接参与病毒附着和内吞，快速诱导机体先天性和获得性免疫应答。p12蛋白作为ASFV的外囊膜蛋白，由O61R基因编码，共186bp，其编码p12蛋白分子量大小约为6.7kD。其C-末端区域富含半胱氨酸的结构域，参与病毒的吸附。有学者通过免疫电子显微镜发现，该蛋白位于病毒粒子上层，介导细胞表面的锚定膜蛋白--ASFV的受体。在ASFV侵染细胞时，p12外囊膜蛋白可吸附细胞膜，使病毒进入易感细胞内。利用HEK293真核细胞表达p12蛋白，纯化后p12蛋白免疫猪能很快产生针对p12的特异性抗体，体外细胞试验中，p12蛋白的抗体可阻断ASFV侵入宿主细胞。。鉴于p12作为外囊膜膜蛋白，在原核表达系统表达功能性膜蛋白操作难度大，目前尚无p12外囊膜膜蛋白作为靶标抗原进行早期诊断。因此，基于p12靶标表位抗原，探索建立特异性强、灵敏度高、早期、快速的ASFV诊断方法显得尤为重要。

发明内容

发明目的：本发明所要解决的技术问题是提供了一种能够早期诊断非洲猪瘟病毒的外囊膜膜蛋白p12靶标抗原的制备及其感染性抗体的检测应用。

一方面，本发明提供了外囊膜膜蛋白p12靶标表位抗原表位靶标抗原及其核酸分子。

另一方面，本发明还提供了含有所述的核酸分子的表达盒、重组载体、重组细胞或重组菌株或凝集抗体检测系统。

另一方面，本发明还提供了重组表达载体或所述的表位靶标抗原的感染性抗体检测系统的构建方法。

另一方面，本发明还提供了外囊膜膜蛋白p12靶标表位抗原、所述的靶标抗原的核酸或基因、所述的表达盒、重组载体、重组细胞、重组菌株或凝集抗体检测系统在制备检测抗体试剂或试剂盒中的应用。

技术方案：为了解决上述技术问题，本发明提供了非洲猪瘟病毒外囊膜蛋白p12表位抗原的特定表位，所述靶标抗原特定表位的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

本发明内容包括编码的靶标抗原的核酸分子，所述核酸分子的DNA序列如SEQ IDNO.1所示。

本发明内容包括一种重组基因片段，所述重组基因片段是将所述的核酸分子导入含有Peg菌毛基因序列的载体中即得，所述重组基因片段的序列如SEQ ID NO.5所示。

本发明内容包括编码所述的重组基因片段的重组蛋白，其特征在于，所述重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示。

本发明内容包括表达盒、重组载体、重组细胞或重组菌株，其包含所述的核酸分子或所述的重组基因片段。

本发明内容包括一种感染性凝集抗体检测系统，所述感染性凝集抗体检测系统包括所述的表达盒、重组载体、重组细胞或重组菌株。

本发明内容包括所述的重组载体或重组菌株的构建方法，所述重组载体包括以下步骤：

(1)非洲猪瘟病毒外囊膜蛋白的靶标抗原p12的DNA序列的获得，所述DNA序列如SEQ ID NO.1所示，所述氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

(2)将步骤(1)得到的DNA序列插入含有Peg菌毛基因序列的载体中，构建重组表达载体；

所述重组菌株的构建方法还包括将所述的重组表达载体通过电转化的方式导入载体菌中即得重组菌株。

本发明内容包括所述的靶标抗原特定表位、所述的核酸分子、所述的重组基因片段、所述的表达盒、重组载体、重组细胞或重组菌株、所述的感染性凝集抗体检测系统在制备检测非洲猪瘟病毒毒株感染性凝集抗体的试剂或试剂盒中的应用。

本发明内容包括结合非洲猪瘟病毒毒株的感染性凝集抗体，所述感染性凝集抗体特异性包括所述的非洲猪瘟病毒外囊膜蛋白p12表位抗原的特定表位或所述的重组蛋白制备而成。

本发明内容包括一种检测非洲猪瘟病毒毒株感染性凝集抗体的试剂或试剂盒，所述试剂或试剂盒包括所述的非洲猪瘟病毒外囊膜蛋白p12抗原表位、所述的重组蛋白、所述的重组载体、重组细胞或重组菌株、所述的感染性凝集抗体检测系统。

有益效果：本发明提供了一种特异、敏感、早期和成本低廉的ASFV感染的早期精准诊断方法。

1、本发明利用鸡白痢沙门氏菌Peg菌毛实施展呈和大量表达靶标表位抗原(p12)数量，极大提高了抗体检测的敏感性，同时利用p12替代完整的蛋白质抗原(即表位抗原特定表位替代完整的蛋白质抗原)特异性结合和识别抗体的表位，这一靶向靶标抗原抗体反应有效地保障了本发明的专一特异性，且感染非洲猪瘟毒株后第3天即可检测到特异性中和抗体。

2、本发明还通过间接凝集试验，特异性靶标抗原验证载体菌表达Peg菌毛，以及其菌体表面功能性展示表达ASFV p12外囊膜表位抗原，表位抗原可精准识别和结合针对ASFV外囊膜蛋白p12表位抗原的抗体，从而实现特异、敏感、早期、快速的ASFV感染性抗体检测。

3、本发明抗体检测系统与其他猪病(猪繁殖与呼吸综合征病毒PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)阳性感染血清和猪圆环(PCV)阳性血清不产生非特异性交叉反应。本发明的敏感性显著高于传统血清学检测技术，且能定量检测到特异性凝集抗体效价。

鉴于本发明具有特异、敏感、早期、快速等优势，有望成为非洲猪瘟病毒感染早期诊断检测监测评估的重要技术和平台。

附图说明

图1、插入ASFV-P12后Peg-ASFV-p12的PCR扩增鉴定电泳图。其中泳道M为Trans 2KPlus IIDNA Marker，泳道1为peg操纵子基因的PCR扩增产物，模板DNA来自鸡白痢沙门氏菌标准株CVCC 526，作为阳性对照；泳道2为Peg-ASFV-p12的PCR扩增产物；泳道3为禽致病性大肠杆菌分离株APEC-XM的基因组作为阴性对照；泳道4为大肠杆菌工程菌DH5α的基因组作为阴性对照。

图2、含Peg-ASFV-p12基因的重组质粒pBR-Peg-ASFV-p12的酶切鉴定电泳图。其中泳道M为1Kb DNA Marker，泳道1和泳道2为pBR-Peg-ASFV-p12单酶切结果；泳道3为pBR-Peg-ASFV-p12的Nhe I和Sph I双酶切产物。

图3、表达载体pBR-Peg-ASFV-P12质粒示意图。

图4、ASFV-p12抗原的表达鉴定，A：携带重组质粒pBR-Peg的DH-5α工程菌细菌悬液与阳性血清凝集结果；B：含pBR322空载体的DH-5α工程菌细菌悬液与阳性血清凝集结果。

图5、ASFV-p12凝集抗体检测系统DH-5α+Peg-ASFV-p12分别与不同来源ASFV阳性血清凝集反应结果图。A：DH-5α+Peg-ASFV-p12与健康猪血清凝集反应结果；B：DH-5α+Peg-ASFV-p12与非洲猪瘟株感染阳性血清凝集反应结果；C：DH-5α+Peg-ASFV-p12与猪繁殖与呼吸综合征病毒感染阳性血清凝集反应结果；D：DH-5α+Peg-ASFV-p12与猪瘟病毒感染阳性血清凝集反应结果；E：DH-5α+Peg-ASFV-p12与猪圆环病毒感染阳性血清凝集反应结果。ASFV、PRRSV、CSFV及PCV阳性血清(均已灭活)由金宇生物技术股份有限公司提供。

具体实施方式

在进一步描述本发明具体实施方式之前，应理解：本发明的保护范围不局限于下述特定的具体实施方案；还应当理解：本发明实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案，而不是为了限制本发明的保护范围。除非另外定义，本发明中使用的所有技术和科学术语与本技术领域技术人员通常理解的意义相同。除实施例中使用的具体方法、设备、材料外，根据本技术领域的技术人员对现有技术的掌握及本发明的记载，还可以使用与本发明实施例中所述的方法、设备、材料相似或等同的现有技术的任何方法、设备和材料来实现本发明。

实施例1携带非洲猪瘟p12靶标抗原的Peg菌毛表达载体构建及其功能性表达验证

基于鸡白痢沙门氏菌peg菌毛操纵子基因的克隆和在载体菌菌体表面展示功能验证的基础上(参见中国专利公开号CN116715737A，发明名称为新型冠状病毒受体结合域B细胞表位的靶标抗原及其在Peg菌毛展呈表达及应用的实施例1的方法制备重组载体pBR-Peg和含pBR-Peg的DH-5α工程菌(DH-5α+pBR-Peg))，将非洲猪瘟病毒(ASFV)p12的DNA序列插入鸡白痢沙门氏菌Peg菌毛基因序列(重组载体pBR-Peg)中，构建表达载体pBR-Peg-ASFV-p12，导入大肠杆菌载体菌中扩增表达，验证在载体菌菌体表面成功展示表达ASFV-p12。具体实施程序如下：

通过NCBI数据库(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/)检索ASFV分离株China/2018/AnhuiXCGQ序列(登录号：MK128995.1)，从全基因组中找到p12基因序列和氨基酸序列。利用SWISS-MODEL蛋白结构预测数据库(https://swissmodel.expasy.org/)找到已经预测的p12蛋白同源建模的结构。利用NovoPro在线工具(https://www.novopro.cn/tools/)对p12蛋白RBD区域氨基酸序列进行疏水性分析，筛选亲水基序，并通过蛋白质分析软件Pymol(https://pymol.org/2/)在空间结构上进行进一步分析和比对。筛选出1种表面暴露较好、抗原性最高的靶标抗原的氨基酸序列，命名为：ASFV-p12。ASFV-p12的氨基酸序列为：LDGSSGGGSNQQKKCSKAEECTCNN；ASFV-p12对应的的基因序列分别为：CTTGATGGTTCAAGTGGTGGAGGCTCTAATCAGCAAAAAAAATGTAGCAAGGCTG AAGAATGCACATGTAATAAC。由南京擎科生物科技有限公司合成peg(参考序列为Salmonella enterica SP strain，GenBank登录号CP077668.1，1831920-1827125)和p12嵌合基因，由ASFV p12替代peg操纵子基因序列的替代位点：CTTGATGGTTCAAGTGGTGGAGGCTCTAATCAGCAAAAAAAATGTAGCAAGGCTGAAGAATGCACATGTAATAAC，获得的嵌合基因命名为Peg-ASFV-p12(参见序列表SEQ ID NO.5所示)。以上述嵌合基因为模板(1μL，含1ng嵌合基因)，鸡白痢沙门氏菌标准株CVCC 526(本实验室保存，Yang Yi,Wang Pengzhi,Xia Pengpeng et al.Rapid detection offlagellated and non-flagellated Salmonella by targeting the common flagellarhook gene flgE.[J].Appl Microbiol Biotechnol,2020,104:9719-9732.)基因组作为阳性对照，禽致病性大肠杆菌分离株APEC-XM(本实验室保存，Yang Yi,Wang Pengzhi,XiaPengpeng et al.Rapid detection of flagellated and non-flagellated Salmonellaby targeting the common flagellar hook gene flgE.[J].Appl MicrobiolBiotechnol,2020,104:9719-9732.)基因组和大肠杆菌工程菌DH5α基因组作为阴性对照，并用上游引物SP Peg Up：5’-GCTAGCATGAAACGTTCACTTATTGCTGCT-3'和下游引物SP PegDown：5'-GCATGCTTAATCAGTTAATACCGTCATCGTCAG-3'进行PCR扩增(下划线分别为Nhe I和Sph I的限制性酶切位点)。PCR反应体系为：pfu high-fidelity DNA Polymerase(北京全式金生物技术股份有限公司)2μL，5×pfu DNA polymerase buffer 10μL，dNTPs 5μL，上下游引物(10mM)各2μL，CVCC 526基因组(250ng/μL)2μL，超纯水27μL。将上述体系混合均匀后利用热循环仪(Bio-Red)进行PCR扩增，反应程序如下：预变性94℃5min，扩增阶段共30个循环，包括变性94℃30s、退火52℃30s和延伸72℃5min，进一步扩增72℃10min，扩增结束后温度降低至12℃。配置1％的琼脂糖凝胶，110V电泳45min后利用溴化乙锭染色后在紫外成像仪下成像，PCR结果如图1所示，阳性对照的扩增大小为4850bp；Peg-ASFV-p12的PCR产物为：4850bp；阴性对照无扩增条带。利用通用型DNA纯化试剂盒(天根生化科技(北京)有限公司)回收peg-ASFV-p12的PCR产物的PCR扩增产物。

回收pBR322质粒，利用Nhe I和Sph I限制性内切酶(NEB)对Peg-ASFV-p12的PCR扩增产物与pBR322质粒分别进行双酶切，然后利用T4 DNA连接酶(NEB)对上述线性DNA片段在16℃金属浴中过夜连接，次日将连接产物转化DH-5α感受态细胞，通过涂布含100μg/mL的氨苄青霉素固体培养基进行抗性筛选。挑取平板上的单菌落接种至含100μg/mL的氨苄青霉素LB液体培养基中生长至平台期，回收质粒后经Nhe I和Sph I两种限制性内切酶双酶切。配置1％的琼脂糖凝胶，110V电泳45min后利用溴化乙锭染色后在紫外成像仪下成像，结果如图2所示，重组质粒pBR-Peg-ASFV-p12的Nhe I和Sph I的双酶切产物包含4215bp的线性载体，以及4850bp的Peg-ASFV-p12线性DNA片段，与预期大小一致。

携带重组质粒pBR-Peg-ASFV-p12的DH-5α工程菌在含100μg/mL的氨苄青霉素LB液体培养基中生长至平台期，4000rpm离心5min后弃上清，用等体积无菌生理盐水重悬，如此方式连续离心洗涤2次制备为细菌悬液(终浓度1×10¹⁰CFU/mL)。将携带上述重组质粒的重组DH-5α工程菌细菌悬液与ASFV阴性血清(健康且未感染ASFV血清10份，血清由金宇保灵生物药品有限公司P3实验室提供)进行凝集试验，并利用含pBR-Peg的DH-5α工程菌的细菌悬液作为阴性对照。结果：所有菌株的细菌悬液均不与阴性血清发生反应；携带重组质粒pBR-Peg-ASFV-p12的重组DH-5α工程菌细菌悬液与ASFV阳性血清(血清由金宇保灵生物药品有限公司P3实验室提供)出现明显的凝集现象，凝集颗粒大，背景清晰；而仅含pBR-Peg质粒的DH-5α工程菌细菌悬液与阳性血清均不发生凝集现象，无凝集颗粒，背景呈浑浊状(图4)。该结果表明来自ASFV-p12能够通过Peg菌毛Peg实现菌体表面展呈表达，并且能够特异性检测针对ASFV阳性的凝集抗体。

实施例2感染性凝集抗体特异性检测验证

在该抗体检测系统中，DH-5α+pBR-Peg细菌悬液作为对照系统，与抗体检测系统相比较，该对照系统仅缺失p12靶标表位抗原；而抗体检测系统与对照系统相比较，仅增加p12靶标表位抗原，鉴于p12靶标表位抗原能专一识别与结合特异性抗体，排除非特异假阳性反应，从而保障反应的特异性和确保个体精准诊断；DH-5α+pBR-Peg-ASFV-p12细菌悬液作为ASFV-p12特异性抗体检测系统，能够特异性识别针对ASFV-阳性的凝集抗体。将上述两种细菌悬液分别与不同背景来源的血清进行凝集测试，以验证该凝集抗体检测系统的特异性，参与检测的血清包括：10份健康猪血清、10份蓝耳病毒(PRRSV)感染猪阳性血清、10份猪瘟病毒(CSFV)感染猪阳性血清；10份猪圆环病毒(PCV)感染猪阳性血清(血清均由金宇保灵生物药品有限公司P3实验室提供)。非洲猪瘟病毒感染的阳性血清(10份)与Peg-ASFV-p12感染性凝集抗体检测系统发生凝集反应，阳性结果(表1)；与蓝耳病毒(PRRSV)感染猪血清、猪瘟病毒(CSFV)感染猪血清及猪圆环病毒(PCV)感染猪血清均不发生凝集反应，阴性结果，其特异性为100％(图5)。

表1 p12凝集抗体的特异性检测验证

注：“-”代表凝集反应阴性；“+”代表凝集反应阳性

实施例3感染性凝集抗体敏感性检测

根据实施例2中的相同方法，准备对照系统DH-5α+pBR-Peg细菌悬液、ASFV-p12凝集抗体检测系统DH-5α+pBR-Peg-ASFV-p12细菌悬液。将上述两种细菌悬液分别与ASFV感染猪不同时期的阳性血清进行凝集测试，以验证该凝集抗体检测系统的敏感性。验证携带重组质粒pBR-Peg-ASFV-p12的重组DH-5α工程菌细菌悬液与感染ASFV第3、5、7、9、14天的20份ASFV阳性血清进行混检(其中，10份血清样品由金宇保灵生物药品有限公司提供，10份血清样品由青岛易邦生物工程有限公司提供)出现明显的凝集现象；而不能与携带重组质粒pBR-Peg的重组DH-5α工程菌细菌悬液发生凝集现象(表2)，p12靶标表位抗原能专一识别与结合特异性抗体，排除非特异假阳性反应，同时反应灵敏度高，可在感染后第3天检测到，可作为ASFV感染的早期精准诊断技术。此外，不同公司提供的血清样品检测结果一致，无显著性差异。

表2感染性凝集抗体的敏感性检测验证

注：“-”代表凝集反应阴性；“+”代表凝集反应阳性

实施例4感染性凝集抗体检测应用

根据实施例2中的相同方法，准备对照系统DH-5α+pBR-Peg细菌悬液和ASFV凝集抗体检测系统DH-5α+pBR-Peg-ASFV-p12细菌悬液。

本发明的测试中，分别收集了ASFV毒株人工感染的阳性血清(由青岛易邦生物工程有限公司提供)，血清样品分别为猪感染后3天、4天、5天、7天、9天、11天、13天和17天采集，并通过非洲猪瘟病毒磁颗粒试剂盒(上海鸣捷生物科技有限公司)、非洲猪瘟病毒阻断ELISA试剂盒(杭州艾替捷英科技有限公司)、非洲猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒(北京金诺百泰生物技术有限公司)进行测定。将上述不同时间血清进行2ⁿ倍比稀释：在96孔板各孔中加入10μL无菌生理盐水，然后吸取10μL血清加入每一列的第一孔，与无菌生理盐水充分混合后将10μL稀释的血清加入下一孔，并以此为循环稀释至2¹²倍。将每个稀释度的血清与对照系统DH-5α+pBR-Peg细菌悬液、DH-5α+pBR-Peg-ASFV-p12凝集抗体检测系统细菌悬液分别进行凝集测试，最后一个出现凝集颗粒的稀释度作为该血清凝集抗体效价。凝集试验的阳性率结果如表3所示，最早可以在第3天检测到凝集抗体，该敏感性显著高于传统血清学检测技术，且随着免疫时长的增加，凝集测试的抗体效价呈增加趋势；定量测试结果如表3所示，在免疫后第17天，可测得凝集抗体效价达到1:16。

表3DH-5α+pBR-Peg-ASFV-p12感染性凝集抗体检测系统的应用

注：“-”代表凝集反应阴性；“+”代表凝集反应阳性；“/”代表无数值

综上所述，本发明的ASFV感染性抗体测试方法能够早期诊断、特异性和敏感性好、快速等优势，与目前针对的非洲猪瘟病毒的免疫学检测方法(ELISA检测)结果比较，本技术的敏感性显著性提高，且能定量检测到特异性凝集抗体效价。本发明提供非洲猪瘟病毒p12靶标抗原在鸡白痢沙门氏菌Peg菌毛展呈表达系统及其凝集抗体检测应用。

Claims (10)

1.非洲猪瘟病毒外囊膜蛋白p12表位抗原的特定表位，其特征在于，所述靶标抗原特定表位的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.编码权利要求1的靶标抗原的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子的DNA序列如SEQID NO.1所示。

3.一种重组基因片段，其特征在于，所述重组基因片段是将权利要求2所述的核酸分子导入含有Peg菌毛基因序列的载体中即得，所述重组基因片段的序列如SEQ ID NO.5所示。

4.编码权利要求3所述的重组基因片段的重组蛋白，其特征在于，所述重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示。

5.表达盒、重组载体、重组细胞或重组菌株，其特征在于，其包含权利要求2所述的核酸分子或权利要求3所述的重组基因片段。

6.一种感染性凝集抗体检测系统，其特征在于，所述感染性凝集抗体检测系统包括权利要求5所述的表达盒、重组载体、重组细胞或重组菌株。

7.权利要求5所述的重组载体或重组菌株的构建方法，其特征在于，所述重组载体包括以下步骤：

(1)非洲猪瘟病毒外囊膜蛋白的靶标抗原p12的DNA序列的获得，所述DNA序列如SEQ IDNO.1所示，所述氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

(2)将步骤(1)得到的DNA序列插入含有Peg菌毛基因序列的载体中，构建重组表达载体；

所述重组菌株的构建方法还包括将所述的重组表达载体通过电转化的方式导入载体菌中即得重组菌株。

8.权利要求1所述的靶标抗原特定表位、权利要求2所述的核酸分子、权利要求3所述的重组基因片段、权利要求5所述的表达盒、重组载体、重组细胞或重组菌株、权利要求6所述的感染性凝集抗体检测系统在制备检测非洲猪瘟病毒毒株感染性凝集抗体的试剂或试剂盒中的应用。

9.结合非洲猪瘟病毒毒株的感染性凝集抗体，其特征在于，所述感染性凝集抗体特异性包括权利要求1所述的非洲猪瘟病毒外囊膜蛋白p12表位抗原的特定表位或权利要求4所述的重组蛋白制备而成。

10.一种检测非洲猪瘟病毒毒株感染性凝集抗体的试剂或试剂盒，其特征在于，所述试剂或试剂盒包括权利要求1所述的非洲猪瘟病毒外囊膜蛋白p12抗原表位、权利要求4所述的重组蛋白、权利要求5所述的重组载体、重组细胞或重组菌株、权利要求6所述的感染性凝集抗体检测系统。