CN117158508A - 一种协同改性蛋白纳米颗粒的制备方法及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种协同改性蛋白纳米颗粒的制备方法及应用，涉及植物蛋白加工领域。本发明采用鳕鱼蛋白为壁材，以姜黄素为疏水性多酚模型，通过二硫键断裂协同临界pH成功制备得到澄清的鳕鱼蛋白‑姜黄素复合纳米颗粒。本方法制备的鳕鱼蛋白‑姜黄素复合物颗粒具有较高的包埋率，并且在持续的加热和光照下，鳕鱼蛋白‑姜黄素复合物颗粒仍具有良好的热和光稳定性，可以作为新型的功能性配料或运载体系，用于包埋、传递和运载如姜黄素等疏水性多酚物质。本发明得到了稳定的澄清透明鳕鱼蛋白‑姜黄素复合纳米颗粒，易于实现工业化生产，可广泛应用于功能性食品、药品和化妆品等领域。
Description
技术领域
本发明涉及植物蛋白加工领域，尤其涉及一种协同改性蛋白纳米颗粒的制备方法及应用。
背景技术
近年来，随着人类生活方式和生态环境等因素的改变，导致心血管疾病等慢性病日益高发，严重威胁人们的健康并妨碍社会发展。研究发现，大多数慢性病与膳食相关，因此新型功能性食品的研发愈显迫切。众所周知，部分生物活性物质具有营养和调节功能，可以被纳入食品体系。姜黄素(curcumin,Cur)作为一种天然的生物活性多酚，具有降血脂、抗氧化、抗癌和抗炎等多种生理活性。然而姜黄素存在水溶性差、化学性质不稳定和生物利用率低等问题，限制了它作为食品配料在功能性食品中的应用。
为了克服这些问题，研究人员发现利用输送体系可以提高姜黄素等生物活性物质的稳定性，包括水凝胶、纳米颗粒、乳液、脂质体等多种输送载体。目前已有的研究发现，疏水性生物活性物质一旦负载于某些特殊的纳米颗粒，其溶解性和稳定性均可显著改善，表明利用纳米颗粒作为输送载体是一条有效增溶和稳定姜黄素的途径。在众多包封壁材中，蛋白质的生物相容性和环保性能优于合成聚合物和其它生物大分子。鳕鱼蛋白(CodProtein,CP)是一种氨基酸含量丰富、用途广泛的优质蛋白质，因此可成为蛋白基纳米载体的理想材料，但它是一种未被充分利用的动物蛋白。然而如何改善生物活性物质的溶解性和稳定性，是发展功能性食品亟待解决的技术瓶颈，也是当前食品科学研究的热点。
基于上述问题，设计能够保护并稳定封装姜黄素的运载体系，对其他疏水性生物活性物质的保护及稳定性改善将具有重要意义。尽管具有相当的优越性，蛋白基生物活性物质输送载体也存在一定的缺点和问题，比如在蛋白质分散液中，蛋白质分子中的疏水区域倾向于“隐藏”在内部，使之与疏水性生物活性小分子的相互作用有限。并且有些方法使用技术比较复杂、成本较高，不符合现代食品工业环保绿色的生产原则。例如，于2023年3月13日申请的、专利号为CN202310244832.7中国专利提供了一种无定形姜黄素纳米颗粒及其制备方法与应用，此方法通过自下而上的反溶剂沉淀法，但反溶剂法会涉及有机溶剂和复杂的回收技术。同样于2019年10月23日申请的、专利号为CN201911011384.6中国专利提供了一种姜黄素聚电解质复合膜、制备方法及应用，此方法采用了时间冗长和易造成污染的溶剂挥发法。还有于2022年11月25日申请的、专利号为CN202211507926.0中国专利提供了一种姜黄素喷雾干燥微胶囊的制备方法，此方法采用了喷雾干燥制备姜黄素微胶囊，但喷雾干燥技术能耗大，热效率不高。后期投资费用比较高，不适合推广应用。另于2022年9月14日申请的、专利号为CN202211117772.4中国发明专利提供了一种姜黄素微胶囊的制备方法，本方法以糊精、海藻酸钠、磷脂等为壁材，姜黄素为芯材，加入适量乳化剂，利用微胶囊造粒仪，采用单喷头包埋法制备姜黄素微胶囊。但此方法壁材复杂，包埋程度有限，包埋率较低。因此，亟需要探讨一种简易的、荷载量高的包埋方法。
发明内容
本发明的目的之一在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种简易的、适合工业化的、荷载量高的疏水性多酚新型包埋方法。
本发明通过断裂二硫键协同临界pH处理，使蛋白结构最大限度展开有效包埋姜黄素。
本发明为实现上述目的所采用的技术方案是：提供一种断裂二硫键协同临界pH改性的蛋白纳米颗粒的制备方法，包括以下具体步骤：
S1、分散处理：取鳕鱼蛋白分散在水中得到蛋白质分散液1；
S2、离心处理：将步骤S1的蛋白质分散液1离心，收集上清液得蛋白分散液2；
S3、还原处理：将蛋白质分散液2中加入同体积焦亚硫酸钠搅拌，之后透析、冷冻干燥，得到鳕鱼蛋白粉末1；
S4、碱化处理：将鳕鱼蛋白粉末1和水混合得到鳕鱼蛋白粉末溶液，用NaOH将鳕鱼蛋白粉末溶液pH调节至9.5～10.5，搅拌，然后冷冻干燥，即得协同改性蛋白纳米颗粒。
进一步的，步骤S1中蛋白质分散液1的鳕鱼蛋白质量浓度为5～10％。
进一步的，步骤S3中焦亚硫酸钠的浓度为5～10mM。
进一步的，步骤S3中透析膜分子量为3～3.5kDa。
进一步的，步骤S4中鳕鱼蛋白粉末溶液浓度为3～8mg/mL。
进一步的，步骤S4中NaOH浓度为0.8～1.2M。
进一步的，步骤S4中pH调节至10。
进一步的，步骤S4中搅拌为20～30min。
本发明的提供上述的方法制得的协同改性蛋白纳米颗粒。
本发明提供的协同改性蛋白纳米颗粒作为载体在制备疏水性多酚运载体系中的应用。
本发明提供一种鳕鱼蛋白-姜黄素复合物颗粒的制备方法，包括如下步骤：
将上述协同改性蛋白纳米颗粒溶解，得到浓度为3～6mg/mL的蛋白分散液，然后与等体积的0.25～20mg/mL的姜黄素溶液均匀混合0.5～1.5小时，之后调pH至中性得鳕鱼蛋白-姜黄素复合纳米颗粒。
进一步的，蛋白分散液浓度为5mg/mL，姜黄素溶液浓度为0.25～2.5mg/mL。
进一步的，均匀混合的时间为1小时。
本发明提供一种高姜黄素包埋的鳕鱼蛋白-姜黄素复合物颗粒的制备方法，包括如下步骤：
1、分散处理：取鳕鱼蛋白分散在水中得到蛋白质分散液1；
2、离心处理：将步骤S1的蛋白质分散液1离心，收集上清液得蛋白分散液2；
3、还原处理：将蛋白质分散液2中加入同体积焦亚硫酸钠搅拌，之后透析、冷冻干燥，得到鳕鱼蛋白粉末1；
4、碱化处理：将鳕鱼蛋白粉末1和水混合得到鳕鱼蛋白粉末溶液，用NaOH将鳕鱼蛋白粉末溶液pH调节至9.5～10.5，搅拌，得到蛋白分散液5；
5、包埋处理：将步骤S4所得蛋白分散液5与等体积的0.25～20mg/mL的姜黄素溶液均匀混合0.5～1.5小时，之后调pH至中性得鳕鱼蛋白-姜黄素复合纳米颗粒。
进一步的，步骤1中蛋白质分散液1的鳕鱼蛋白质量浓度为5～10％。
进一步的，步骤3中焦亚硫酸钠的浓度为5～10mM。
进一步的，步骤3中透析膜分子量为3～3.5kDa。
进一步的，步骤4中鳕鱼蛋白粉末溶液浓度为3～8mg/mL。
进一步的，步骤4中NaOH浓度为0.8～1.2M。
进一步的，步骤4中pH调节至10。
进一步的，步骤4中搅拌为20～30min。
进一步的，步骤5中姜黄素溶液浓度为0.25～2.5mg/mL。
进一步的，步骤5中均匀混合的时间为1小时。
本发明提供上述方法制得的鳕鱼蛋白-姜黄素复合物颗粒。
本发明提供的鳕鱼蛋白-姜黄素复合物颗粒在制备功能性食品、药品和化妆品中的应用。
本发明的有益效果：
1、本发明验证了临界pH在实验中的必要性，将有助于提高疏水性功能性物质在生产中的规模化应用。
2、本发明开发了一种适合工业生产的新包封方法。本发明提供了一种断裂二硫键协同临界pH改性的蛋白纳米颗粒及其在递送疏水性多酚的运载体系中的应用。采用鳕鱼蛋白为壁材，以姜黄素为疏水性多酚模型，成功制备得到澄清的鳕鱼蛋白-姜黄素复合纳米颗粒。
3、本发明利用断裂二硫键协同碱性pH改性蛋白纳米颗粒，并通过特定的还原剂浓度和特定pH等具体参数，相较于单独碱化处理得到的鳕鱼蛋白-姜黄素结合物颗粒，显著提高了姜黄素的包埋率，特别是在高浓度的姜黄素的包埋率，取得了预料不到的技术效果。
4、本发明提供的包埋制备方法简单，易于实现工业化生产，扩大了纳米颗粒在食品工业上的应用。
附图说明
图1为本发明实施例1所得鳕鱼蛋白在pH偏移过程中临界点荧光光谱变化，图1A为pH 7～12，其中pH 9～10.5间隔为0.5的结果，图1B为pH 7～12，其中pH 9.6～10.4间隔为0.2的结果。
图2为本发明实施例1所得鳕鱼蛋白在pH偏移过程中临界点圆二光谱变化，图2A为pH 7～12，其中pH 9～10.5间隔0.5的结果，图2B为pH 7～12，其中pH 9.6～10.4间隔0.2的结果。
图3A为本发明实施例2所得鳕鱼蛋白在协同处理过程中的荧光光谱，图3B为本发明实施例2所得鳕鱼蛋白在协同处理过程中的圆二光谱。
图4为本发明实施例3所得鳕鱼蛋白-姜黄素复合物颗粒的包埋率测量结果。
图5为本发明实施例3所得鳕鱼蛋白-姜黄素复合物颗粒的包埋率视觉外观。
图6A为本发明实施例3所得鳕鱼蛋白-姜黄素复合物颗粒的热稳定性测量结果，图6B为所得鳕鱼蛋白-姜黄素复合物颗粒的光稳定性测量结果。
图7为本发明对比例1所得鳕鱼蛋白-姜黄素结合物颗粒的包埋率测量结果。
图8为本发明对比例2所得鳕鱼蛋白-姜黄素结合物颗粒的包埋率测量结果。
图9A为本发明对比例1所得鳕鱼蛋白-姜黄素结合物的热稳定性测量结果，图9B为本发明对比例1所得鳕鱼蛋白-姜黄素结合物的光稳定性测量结果。
图10A为本发明对比例2所得鳕鱼蛋白-姜黄素结合物的热稳定性测量结果，图10A为本发明对比例2所得鳕鱼蛋白-姜黄素结合物的光稳定性测量结果。
图11为本发明对比例3所得鳕鱼蛋白-姜黄素结合物颗粒的包埋率测量结果。
具体实施方式
下面通过具体实施实例对本发明做进一步说明。
原料来源
低温脱脂豆粕(山东宇王实业有限公司，中国)；姜黄素(98％纯度，生工生物科技有限公司，中国)；焦亚硫酸钠(麦克林生化有限公司，中国)；氢氧化钠和盐酸(天津大茂化学试剂有限公司，中国)。其他化学试剂均为分析级。
下述实施例中使用的鳕鱼蛋白是采用如下提取方法得到：将鳕鱼鱼片分散于蒸馏水(1:10，w/v)中，粉碎后用NaOH(1M)调至pH 10.5，搅拌1h，15800×g离心30min，得到的上清液用HCl(1M)调至pH 4.5,10,000×g离心15min，收集沉淀。然后将沉淀物溶解于蒸馏水中，用NaOH中和至pH 7.0。将提取的蛋白冷冻干燥，保存在-20℃的冰箱中。所得鳕鱼蛋白质含量为91.0±0.3％(w/w)。所用鳕鱼鱼片为普通市售鳕鱼。
检测过程
1、荧光光谱(FL)
样品浓度为1mg/mL，设置激发波长为290nm，激发和发射狭缝均为5.0nm，扫描速度240nm/min，在300～500nm范围内进行扫描。测量前，用稀释液进行基线调零。
2、圆二色光谱(CD)
样品浓度为0.1mg/mL，设置扫描范围为190～260nm，扫描速度为50nm/min，扫描次数为3次。用CDSSTR软件对测定结果进行图谱拟合计算二级结构。
3、包埋率(EE)
姜黄素标准曲线：用95％乙醇准确配制质量浓度分别为1、2.5、5和10μg/mL的姜黄素标准溶液。测定不同质量浓度下姜黄素的吸光值，以姜黄素质量浓度为横轴，吸光值为纵轴，绘制标准曲线为y＝0.1423x-0.0021，R2＝1。蛋白质封装的姜黄素的包埋率可以通过以下公式计算：
EE(％)＝(总姜黄素含量-游离姜黄素含量)×100/总姜黄素含量
其中，游离姜黄素含量是离心后沉淀物中所含姜黄素的量。因此，该沉淀物完全溶解在95％乙醇(w/w)中，获得的溶液以10000×g的速度离心15min，以去除蛋白质聚集体。得到的上清液用紫外-可见光分光光度计测定其在420nm处的吸光值，并根据标准曲线计算姜黄素的含量。
4、视觉外观
用照相机记录包埋后样品溶液的视觉外观。
5、热重
实验在氮气保护条件下以10℃/min的速率从40℃到600℃进行。
6、光稳定性
将样品溶液放在白炽灯(50Hz，30W)20cm处(白炽灯光照距离)照射(0～80min)之后进行紫外光谱扫描。扫描波长为200～700nm。
实施例1
S1、分散处理：取鳕鱼蛋白粉末均匀分散在水中得到质量浓度10mg/mL的蛋白质分散液1；
S2、离心处理：将步骤S1所得蛋白质分散液1以10,000×g离心，除去杂质并收集上清液得蛋白分散液2；
S3、碱化处理：将步骤S2所得蛋白分散液2的pH调至7-12后，使其在特定的pH值下保持30分钟以诱导展开后得到蛋白质分散液3。
取本实施例制备的不同pH条件下的鳕鱼蛋白测量荧光光谱和圆二光谱。荧光光谱和圆二光谱测定结果分别如图1和图2所示。
荧光强度的降低和对应于最大荧光强度(λmax)的波长红移表明蛋白质结构展开，因此其中的色氨酸残基处于更亲水的环境中(图1)。当pH>9.5时，荧光强度突然降低，表明蛋白质结构明显展开。如图2所示，通过持续增加pH，二级结构以α-螺旋为主。在pH>9.5时，CP的光谱发生了明显的蓝移，而α-螺旋的螺旋度急剧下降，表明蛋白质结构主要在pH9.5后展开。根据上述数据，估计CP的临界pH在pH 9.5之后(在9.5～10.5的区间内)，并进一步分析pH 10附近的结构变化，间隔为pH 0.2。如图1所示，与其他pH区间相比，CP的荧光强度从pH 9.8到10显著降低了12.78％，红移为2nm，显著高于其他pH区间0.2，表明在该pH下蛋白质的去折叠程度更大。类似地，在图2中，与pH 9.8时的CP相比，pH 10时的CP的光谱蓝移为7.5nm，α-螺旋的含量下降了49.46％，表明在该pH下，CP结构的展开度开始增加，这是一个临界pH。上述结果表明，在pH变化过程中，CP结构去折叠的临界pH为pH 10，此时蛋白质结构的去折叠程度更高。上述结果共同表明，当蛋白质结构展开得相对较大时，CP在pH变化过程中的临界pH为pH 10。
实施例2
S1、分散处理：取鳕鱼蛋白均匀分散在水中得到质量浓度5mg/mL蛋白质分散液1；
S2、离心处理：将步骤S1所得蛋白质分散液1以10,000×g离心，除去杂质并收集上清液得蛋白分散液2；
S3、还原处理：将蛋白质分散液2中逐滴加入同体积焦亚硫酸钠溶液(10mM)搅拌30min以诱导展开，得到的溶液经透析(透析膜分子量：3.5kDa)后冷冻干燥，得到经还原剂处理的鳕鱼蛋白粉末1。
S4、碱化处理：将鳕鱼蛋白粉末1重新溶解(5mg/mL)，用1M NaOH将溶液pH调节至10，然后在此pH下保持30min以诱导蛋白进一步展开，所得溶液记为蛋白分散液5，然后冷冻干燥，即得协同改性蛋白纳米颗粒。
取本实施例制备的鳕鱼蛋白测量荧光光谱和圆二光谱，以单独还原和碱化处理的鳕鱼蛋白为对照。荧光光谱和圆二光谱测定结果如图3所示。
由图可知断裂二硫键协同临界pH处理后，鳕鱼蛋白的最大荧光强度明显降低(与单独还原相比降低了59.47％，与单独碱化处理相比降低了39.01％)，并且λmax发生了较明显的红移(图3A)，说明蛋白结构展开，色氨酸暴露在更亲水的微环境中。在图3B中，协同处理的蛋白中α-螺旋含量的显著降低伴随着无规卷曲含量的增加，表明蛋白结构变得疏松。以上结果共同表明断裂二硫键协同临界pH处理后，SP颗粒尺寸明显减小，结构展开，导致更多的疏水位点暴露在蛋白质的表面。
实施例3
S1、分散处理：取鳕鱼蛋白均匀分散在水中得到质量浓度5mg/mL蛋白质分散液1；
S2、离心处理：将步骤S1所得蛋白质分散液1以10,000×g离心，除去杂质并收集上清液得蛋白分散液2；
S3、还原处理：将蛋白质分散液2中逐滴加入同体积焦亚硫酸钠溶液(10mM)搅拌30min以诱导展开，得到的溶液经透析(透析膜分子量：3.5kDa)后冷冻干燥，得到经还原剂处理的鳕鱼蛋白粉末1。
S4、碱化处理：将鳕鱼蛋白粉末1重新溶解(5mg/mL)，用1M NaOH将溶液pH调节至10，然后在此pH下保持30min以诱导蛋白进一步展开，所得溶液记为蛋白分散液5。
S5、包埋处理：将步骤S4所得蛋白分散液5与等体积的0.25～20mg/mL的姜黄素溶液均匀混合1h后调pH至中性，得鳕鱼蛋白-姜黄素复合纳米颗粒。
对比例1
S1、分散处理：取鳕鱼蛋白均匀分散在水中得到质量浓度5mg/mL蛋白质分散液1；
S2、离心处理：将步骤S1所得蛋白质分散液1以10,000×g离心，除去杂质并收集上清液得蛋白分散液2；
S3、碱化处理：将步骤S2所得蛋白分散液2的pH调至10后，使其在特定的pH值下保持30分钟以诱导展开后得到蛋白质分散液3；
S4、包埋处理：将步骤S3所得蛋白分散液3与等体积的0.25～20mg/mL的姜黄素溶液均匀混合1h后调pH至中性得鳕鱼蛋白-姜黄素复合纳米颗粒。
对比例2
S1、分散处理：取鳕鱼蛋白均匀分散在水中得到质量浓度5mg/mL蛋白质分散液1；
S2、离心处理：将步骤S1所得蛋白质分散液1以10,000×g离心，除去杂质并收集上清液得蛋白分散液2；
S3、还原处理：将蛋白质分散液2中逐滴加入同体积焦亚硫酸钠溶液(10mM)搅拌30min以诱导展开，得到的溶液经透析(透析膜分子量：3.5kDa)后冷冻干燥，得到经还原剂处理的鳕鱼蛋白粉末1。
S4、包埋处理：将步骤S3所得鳕鱼蛋白粉末1重新溶解与等体积的0.25～20mg/mL的姜黄素溶液均匀混合1h后调pH至中性得鳕鱼蛋白-姜黄素复合纳米颗粒。
对比例3
S1、分散处理：取鳕鱼蛋白均匀分散在水中得到质量浓度5mg/mL蛋白质分散液1；
S2、离心处理：将步骤S1所得蛋白质分散液1以10,000×g离心，除去杂质并收集上清液得蛋白分散液2；
S3、还原处理：将蛋白质分散液2中逐滴加入同体积焦亚硫酸钠溶液(10mM)搅拌30min以诱导展开，得到的溶液经透析(透析膜分子量：3.5kDa)后冷冻干燥，得到经还原剂处理的鳕鱼蛋白粉末1。
S4、碱化处理：将鳕鱼蛋白粉末1重新溶解(5mg/mL)，用1M NaOH将溶液pH调节至10，然后在此pH下保持30min以诱导蛋白进一步展开，所得溶液记为蛋白分散液5。
S5、包埋处理：将步骤S4所得蛋白分散液5与等体积的5mg/mL的姜黄素溶液均匀混合0.25～1.5h后调pH至中性得鳕鱼蛋白-姜黄素复合纳米颗粒。
取实施例3制备的鳕鱼蛋白-姜黄素复合纳米颗粒进行视觉外观检测，结果如图5所示，鳕鱼蛋白-姜黄素复合物颗粒溶解性也较高。
取实施例3和对比例1、2制备的鳕鱼蛋白-姜黄素复合纳米颗粒测定包埋率。实施例3的包埋率结果如图4所示，与对比例1和2中的鳕鱼蛋白-姜黄素结合物相比(图7和图8)，还原剂协同碱化处理的鳕鱼蛋白-姜黄素复合物颗粒的包埋率在姜黄素溶液为0.25～20mg/mL均处于较高水平，特别是对于0.25～2.5mg/mL的姜黄素浓度，包埋率几乎达到100％。取实施例3和对比例3制备的鳕鱼蛋白-姜黄素复合纳米颗粒测定包埋率。实施例3的包埋率结果如图4所示，与对比例3中的鳕鱼蛋白-姜黄素结合物相比(图11)，均匀混合1h所得的复合物包埋率处于较高水平。
表1实施例3和对比例1、2包埋率
取本实施例3制备的鳕鱼蛋白-姜黄素复合物颗粒测定加热40～600℃的热稳定性和光照后80min的光稳定性，如图6所示。对比例1制备的鳕鱼蛋白-姜黄素结合物测定热稳定性和光稳定性，结果如图9所示。与鳕鱼蛋白-姜黄素结合物相比，实施例3还原碱化协同处理的鳕鱼蛋白-姜黄素复合物颗粒降解速率缓慢，说明稳定性较高。表明断裂二硫键协同临界pH改性的蛋白纳米颗粒是稳态递送疏水性多酚的有效方法。对比例2制备的鳕鱼蛋白-姜黄素结合物测定热稳定性和光稳定性，结果如图10所示。与鳕鱼蛋白-姜黄素结合物相比，实施例3还原碱化协同处理的鳕鱼蛋白-姜黄素复合物颗粒降解速率缓慢，说明稳定性较高。表明断裂二硫键协同临界pH改性的蛋白纳米颗粒是稳态递送疏水性多酚的有效方法。所以，实施例3所得鳕鱼蛋白-姜黄素复合物颗粒具有较高的稳定性。
取对比例3制备的鳕鱼蛋白-姜黄素复合纳米颗粒测定包埋率，结果如图11和下表2。结果显示，在结合时间为1h下，包埋率最高，为89.66％，但随着结合时间进一步增加，包埋率反而出现下降，这可能是因为反应时间过长，基团相互作用形成聚集体，进而降低包埋率，所以包埋的时间最优选为1h。
表2对比例3包埋率
综上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种协同改性的蛋白纳米颗粒的制备方法，其特征在于，包括以下具体步骤：
S1、分散处理：取鳕鱼蛋白分散在水中得到蛋白质分散液1；
S2、离心处理：将步骤S1的蛋白质分散液1离心，收集上清液得蛋白分散液2；
S3、还原处理：将蛋白质分散液2中加入同体积焦亚硫酸钠搅拌，之后透析、冷冻干燥，得到鳕鱼蛋白粉末1；
S4、碱化处理：将鳕鱼蛋白粉末1和水混合得到鳕鱼蛋白粉末溶液，用NaOH将鳕鱼蛋白粉末溶液pH调节至9.5～10.5，搅拌，然后冷冻干燥，即得协同改性蛋白纳米颗粒。
2.根据权利要求1中所述的方法，其特征在于，步骤S1中蛋白质分散液1的鳕鱼蛋白质量浓度为5～10％；步骤S3中焦亚硫酸钠的浓度为5～10mM；步骤S3中透析膜分子量为3～3.5kDa。
3.根据权利要求1中所述的方法，其特征在于，步骤S4中鳕鱼蛋白粉末溶液浓度为3～8mg/mL；步骤S4中NaOH浓度为0.8～1.2M；步骤S4中pH调节至10；步骤S4中搅拌为20～30min。
4.权利要求1～3任一项所述的方法制得的协同改性蛋白纳米颗粒。
5.权利要求4中所述的协同改性蛋白纳米颗粒作为载体在制备疏水性多酚运载体系中的应用。
6.一种高姜黄素包埋的鳕鱼蛋白-姜黄素复合物颗粒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
将权利要求4中所述协同改性蛋白纳米颗粒溶解，得到浓度为3～6mg/mL的蛋白分散液，然后与等体积的0.25～20mg/mL的姜黄素溶液均匀混合0.5～1.5小时，之后调pH至中性得鳕鱼蛋白-姜黄素复合纳米颗粒。
7.根据权利要求6中所述的方法，其特征在于，蛋白分散液浓度为5mg/mL，姜黄素溶液浓度为0.25～2.5mg/mL。
8.根据权利要求6中所述的方法，其特征在于，均匀混合的时间为1小时。
9.权利要求6～8任一项所述方法制得的鳕鱼蛋白-姜黄素复合物颗粒。
10.权利要求9中所述的鳕鱼蛋白-姜黄素复合物颗粒在制备功能性食品、药品和化妆品中的应用。
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