CN117158443B - 烟碱在制备贝莱斯芽胞杆菌生防作用增强剂中的应用 - Google Patents

烟碱在制备贝莱斯芽胞杆菌生防作用增强剂中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了烟碱在制备贝莱斯芽胞杆菌生防作用增强剂中的应用，属于生物防治技术领域，本发明提供了烟碱在制备贝莱斯芽胞杆菌生防作用增强剂中的应用，烟碱通过增强贝莱斯芽胞杆菌根际定殖能力，从而增强贝莱斯芽胞杆菌的生防作用，所述贝莱斯芽胞杆菌为贝莱斯芽胞杆菌GUMT319，所述生防作用为防治烟草黑胫病的作用。本发明发现烟碱能显著促进贝莱斯芽胞杆菌GUMT319的趋化运动能力，促进生防菌向根系的趋化性游动；同时，具有促进贝莱斯芽胞杆菌GUMT319生物膜的形成及提升其根际定殖能力的作用。

Description

烟碱在制备贝莱斯芽胞杆菌生防作用增强剂中的应用
技术领域
本发明属于生物防治技术领域，尤其涉及烟碱在制备贝莱斯芽胞杆菌生防作用增强剂中的应用。
背景技术
贝莱斯芽胞杆菌(Bacillus velezensis)GUMT319是从贵州遵义地区烤烟根际分离获得的具有防病促生活性的生防细菌，该菌株公开于已授权发明专利，专利号为ZL201811644675.4。该专利公开了于2018～2020年对贝莱斯芽胞杆菌GUMT319进行3年田间防效试验，发现该菌对烟草黑胫病的防效达到70％以上，并实现烤烟增产18.7％。对该菌的生防机制初步研究发现，该菌可产蛋白酶、纤维素酶、嗜铁素和磷酸酯酶等生防相关酶，可产生复杂的生物膜结构，具备良好的运动性，并可对多种植物病原真菌和细菌产生拮抗效果。
生防菌在环境中存活并在植物体上稳定定殖是其发挥生防作用的前提，增强菌株的根际定殖能力是解决其田间效果稳定性的关键。生防菌的定殖过程主要是由生防菌向根系的趋化性游动和随后在根表形成稳定生物膜这两步构成的。根系分泌物是吸引生防菌到达根际的最重要的因素。研究发现贝莱斯芽胞杆菌GUMT319能在烤烟根部稳定定殖并形成复杂的生物膜结构，推测根系分泌物对该菌在烤烟上的定殖起到关键作用。采用GC-MS检测烤烟根系分泌物，初步鉴定发现其中含有烟碱、有机酸类和糖类等物质。
烟碱是一种有机化合物，其化学式为C10H14N2，是一种存在于茄科植物(茄属)中的生物碱，也是烟草的重要成分，烟草根系是其主要合成烟碱的部位。此外，烟沫废弃物中也含有大量烟碱。烟沫废弃物是指除去具有烘烤价值叶片以外的烟草茎株部分，包括废弃烟叶、烟丝、碎烟片、烟梗和烟沫等，我国是烟草种植和消费大国，烟草在烘烤加工制作过程中产生的大量废弃物并没有得到有效的利用。目前未见有关于烟碱促进生防菌防效增强的相关报道。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明提出了烟碱在制备贝莱斯芽胞杆菌生防作用增强剂中的应用，烟碱显著促进贝莱斯芽胞杆菌GUMT319的趋化运动能力，促进生物膜快速形成，从而增强了菌株的根基定殖能力，增强了贝莱斯芽胞杆菌GUMT319的生防作用。
为实现上述目的，本发明提供了烟碱在制备贝莱斯芽胞杆菌生防作用增强剂中的应用。
优选的，烟碱通过增强贝莱斯芽胞杆菌根际定殖能力，增强贝莱斯芽胞杆菌的生防作用。
优选的，所述贝莱斯芽胞杆菌为贝莱斯芽胞杆菌GUMT319，所述生防作用为防治烟草黑胫病的作用。
优选的，所述增强剂的活性成分为烟碱。
优选的，所述烟碱的浓度为100～500μM，所述贝莱斯芽胞杆菌为贝莱斯芽胞杆菌GUMT319。
本发明还提供了烟碱在制备贝莱斯芽胞杆菌运动性增强剂中的应用，所述贝莱斯芽胞杆菌为贝莱斯芽胞杆菌GUMT319。
本发明还提供了烟碱在制备贝莱斯芽胞杆菌向根系趋化性增强剂中的应用，所述贝莱斯芽胞杆菌为贝莱斯芽胞杆菌GUMT319。
本发明还提供了烟碱在制备促进贝莱斯芽胞杆菌生物膜形成制剂中的应用，所述贝莱斯芽胞杆菌为贝莱斯芽胞杆菌GUMT319。
本发明还提供了烟碱在制备贝莱斯芽胞杆菌根际定殖能力增强剂中的应用，所述贝莱斯芽胞杆菌为贝莱斯芽胞杆菌GUMT319。
与现有技术相比，本发明具有如下优点和技术效果：
本发明发现烟碱能显著促进贝莱斯芽胞杆菌GUMT319的趋化运动能力，促进生防菌向根系的趋化性游动；同时，具有促进贝莱斯芽胞杆菌GUMT319生物膜的形成及提升其根际定殖能力的作用。具体的，半固体琼脂培养法发现，烟碱能促进贝莱斯芽胞杆菌GUMT319的运动性，形成明显的菌落圈，其中浓度为300μM烟碱溶液对菌株运动性影响最大，在4h时，菌落圈平均直径可达4.4cm；类毛细血管实验发现，贝莱斯芽胞杆菌GUMT319对不同浓度烟碱溶液均表现出明显的趋化性，趋化指数(RCI)均大于2.00，为正趋化作用，其中烟碱浓度为300μM时，贝莱斯芽胞杆菌GUMT319趋化性最强，RCI值达到最大；结晶紫染色法发现，不同浓度烟碱在不同时间段对贝莱斯芽胞杆菌GUMT319生物膜形成均具有促进作用，在48h时，菌株生物膜形成量均达到最大；结果表明外源添加烟碱增强菌株在烟草根际定殖能力。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为不同浓度烟碱对贝莱斯芽胞杆菌GUMT319生长速率影响图；
图2为含不同浓度烟碱的培养基中贝莱斯芽胞杆菌GUMT319菌落圈形态图；
图3为不同浓度烟碱对贝莱斯芽胞杆菌GUMT319运动性影响图；
图4为不同浓度烟碱对贝莱斯芽胞杆菌GUMT319向根系趋化性影响图(柱顶数字代表对应组的趋化性指数RCI)；
图5为含不同浓度烟碱的培养基中贝莱斯芽胞杆菌GUMT319生物膜形成状态图；
图6为不同浓度烟碱对贝莱斯芽胞杆菌GUMT319生物膜形成影响图；
图7为不同浓度烟碱对贝莱斯芽胞杆菌GUMT319在烟草根际定殖能力影响图；
图8为不同处理组对盆栽的烟草黑胫病防治效果图(CK为接种病原菌未作其他处理的对照组，58％甲霜灵锰锌WP为施用甲霜灵锰锌组，GUMT319为贝莱斯芽胞杆菌GUMT319发酵液处理组，GUMT319+烟碱为贝莱斯芽胞杆菌GUMT319发酵液与烟碱混合物处理组)。
具体实施方式
现详细说明本发明的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本发明的限制，而应理解为是对本发明的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
应理解本发明中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本发明。另外，对于本发明中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本发明内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。
除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本发明仅描述了优选的方法和材料，但是在本发明的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。
在不背离本发明的范围或精神的情况下，可对本发明说明书的具体实施方式做多种改进和变化，这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本发明的说明书得到的其他实施方式对技术人员而言是显而易见得的。本发明说明书和实施例仅是示例性的。
关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等，均为开放性的用语，即意指包含但不限于。
实施例1
(1)供试培养基
0.7％LB(Luria Bertani)半固体琼脂：胰蛋白胨10g/L，氯化钠10g/L，酵母粉5g/L，琼脂粉7g/L，121℃高压蒸汽灭菌20min冷却至55℃倒至直径为85mm的培养皿中备用。
LB液体培养基：胰蛋白胨10g/L，氯化钠10g/L，酵母粉5g/L，用1mol/LNaOH将pH至7.0后，121℃，0.12Mpa高压蒸汽灭菌20min，备用。
(2)主要试剂与器材
烟碱：上海易恩化学技术有限公司生产。用无菌水配制成100、200、300、400、500、750和1000μM浓度梯度备用。
结晶紫：生工生物工程(上海)股份有限公司生产。称取1g结晶紫溶于1L无水乙醇中配制成0.1％结晶紫溶液备用。
器材：体积为1mL、针头规格为0.45×16RWLB毛细血管(江西益康医疗器械集团有限公司)；组培瓶为350mL；12孔细胞培养板、涂布器及吸水纸等。
(3)试验材料
供试烤烟品种为云烟87，选用规格为长53mm、宽35mm、高58mm育苗盆育苗，每盆1株，烤烟幼苗长至5叶1心时备用。
(4)主要仪器
GXZ-280B智能光照培养箱、SW-CJ-2FD洁净工作台、UV-5500紫外可见分光光度计、PTX-JA210S电子天平、GR60DP立式自动压力蒸汽灭菌器、BS-1E数显震荡培养箱、DHP-9272电热恒温培养箱、Heraeus Multifuge X1R高速冷冻离心机、CFX96荧光定量PCR仪及902GP超低温冰箱。
(5)烟碱对贝莱斯芽胞杆菌GUMT319(菌株GUMT319)生长速率影响检测试验
采用生长速率法测定烟碱对菌株GUMT319生长速率的影响。挑取活化好的菌株GUMT319单菌落接种于100mL LB液体培养基中，依次添加100μL不同浓度(100、200、300、400、500μM)的烟碱溶液，以不添加烟碱溶液的组别作为对照组(CK)，将瓶口密封好后，置于37℃、200rpm振荡培养箱中培养，每隔2h用分光光度计在600nm波长处测定菌液的吸光度值(OD)，直至OD值缓慢下降时停止测量。每个浓度设置3个重复，实验重复3次。
生长速率法实验结果如图1所示，表明添加浓度为100～500μM烟碱溶液的处理组，OD600值与对照组(CK)无显著差异，说明浓度为100～500μM烟碱对菌株生长速率基本无影响，可用作后续研究。
(6)烟碱对菌株GUMT319运动性影响检测试验
采用半固体琼脂法测定烟碱对菌株GUMT319运动性的影响。挑取活化好的菌株GUMT319单菌落接种于LB液体培养基中，37℃、200rpm振荡培养至对数生长期后，4℃、10000rpm离心1min收集菌体，用1/10体积无菌水重悬备用。菌株运动性实验采用半固体琼脂法，半固体琼脂培养基设置烟碱终浓度为100、200、300、400、500μM这5个浓度梯度，琼脂含量为0.7％，以不加烟碱的半固体琼脂培养基为对照组(CK)，在半固体琼脂平板上滴加2μL的GUMT319菌悬液，等待菌悬液干燥后，置于37℃培养箱中暗培养，分别于2h、4h、6h、8h、10h进行观察，并采用十字交叉法测量平板上的菌落直径。每处理4皿，重复3次。
半固体琼脂培养法定性实验结果如图2和图3所示，表明菌株GUMT319对不同浓度烟碱溶液均具有一定的运动性，形成明显的菌落圈。培养2h后，处理间菌株运动性差异不显著；培养4h后，浓度为100、200、300、400和500μM烟碱溶液对菌株运动性均具有显著促进作用，其中200和300μM烟碱处理组菌落圈直径较大，菌落圈直径分别为4.14cm和4.40cm、其次为100、400和500μM处理，菌落圈直径分别为3.68cm、3.86cm和3.82cm，均显著高于CK处理(3.18cm)；培养6h后，200、300和400μM对菌株运动性影响最明显，菌落圈直径分别为和6.91cm、7.01cm和6.68cm，显著大于CK(5.91cm)；培养8h时，100、200和300μM处理组菌落圈直径达到最大，分别为7.91cm、8.21cm和8.37cm，其次为400和500μM处理，直径为7.75cm和7.98cm，均显著高于CK；培养10h后，各处理菌落圈达到最大值，处理间无显著差异。
(7)烟碱对菌株GUMT319趋化性影响检测试验
烟碱对菌株GUMT319趋化性影响实验采用类毛细血管法，挑取新鲜菌株GUMT319单菌落接种于LB培养基中过夜振荡培养12h后，按1％的比例将种子液接种于LB培养基中，37℃、200rpm培养至对数期(OD600为1.0)，用移液枪吸取1mL菌悬液待用，用1mL无菌注射器作为趋化实验的毛细血管，分别吸取不同浓度(100、200、300、400和500μM)烟碱溶液100μL后，将注射器针头插入含菌悬液的移液枪细口端，无菌操作台中静置2h后，取出注射器针头，对注射器中的溶液进行稀释涂布，37℃培养24h后计数并计算移动到烟碱溶液中的菌落数(CFU)，以等量无菌水作为对照(CK)，每处理重复3次。趋化性指数(RCI)为处理菌落数与对照菌落数的比值，当RCI≥2时即可认为有正趋化性。
类毛细血管定量实验结果如图4所示，菌株GUMT319对不同浓度烟碱均表现出明显的趋化性，趋化指数(RCI)均大于2.00，与对照组(CK)相比，均具有显著差异。烟碱浓度为300μM时，菌株GUMT319趋化性最强，RCI值达到最大，为3.10，其次为200μM和400μM，趋化指数分别为2.90和2.66，浓度为100μM和500μM处理趋化指数相对较低，分别为2.13和2.1。
(8)烟碱对菌株GUMT319生物膜形成影响检测试验
生物膜形成能力实验采用结晶紫染色法测定。挑取新鲜菌株GUMT319单菌落接种于LB培养基中，37℃、200rpm过夜摇培后，按1:100接种量接种于LB培养基中培养至对数生长期备用。设置烟碱终浓度为100、200、300、400、500μM的5个浓度梯度LB液，以不加烟碱的LB液体培养基为对照组(CK)。将上述溶液分别取1mL加入到12孔细胞培养板中后，每孔滴加1μL菌悬液，盖好盖子，置于37℃恒温培养箱中暗培养12、24、36、48、72h，用移液枪轻轻吸出膜下的培养基后，加入0.1％的结晶紫染色1min后倒掉染液，取200μL的无菌生理盐水漂洗8次，室温晾干后再用70％乙醇脱色，混匀后在OD590nm下测定洗脱液吸光值。
结果如图5所示，不同浓度烟碱溶液对菌株GUMT319生物膜形成具有一定促进作用，均显著高于对照，培养12h后，300μM烟碱溶液处理对菌株GUMT319生物膜形成促进作用最明显，是对照组(CK)的2.22倍，其次是200μM烟碱溶液，生物膜形成量是对照组的2.00倍，100、300、400和500μM烟碱处理组对菌株GUMT319生物膜形成也具有一定促进作用，分别是对照的1.80、2.00、1.80和1.68倍；培养24h后，200和300μM烟碱对菌株GUMT319生物膜促进效果明显，是对照的1.99和2.10倍，100和400μM烟碱处理组次之，是对照的1.88和1.89倍，500μM烟碱处理组促进作用相对较弱，是对照组的1.79倍；培养36h后，300μM烟碱处理组促进效果最明显，其次是200和400μM烟碱处理组，100和500μM烟碱处理组效果相对较差；培养48h和60h时，100、200、300和400μM烟碱处理组生物膜形成量均显著高于对照处理(图6)，500μM烟碱处理效果次之；培养72h后菌株生物膜形成量趋于稳定状态。
(9)烟碱对菌株GUMT319定殖能力影响检测试验
选择培育至4～5片叶的烟草幼苗为材料，规格为350mL组培瓶装有50g蛭石灭菌后加入100mL菌株GUMT319发酵液备用。实验设置6个处理，每处理重复3次。将育苗盘中培育至4～5片叶的烟草幼苗用无菌水洗净根际土壤后移栽至上述组培瓶中，依次加入100、200、300、400、500μM这5个浓度梯度的烟碱溶液各100μL，依次为处理1、2、3、4、5，以不含烟碱溶液的GUMT319发酵液组培瓶为对照。将组培瓶置于25℃温室(光照12h/黑暗12h)环境中培育24h、48h、72h、96h和120h后，分别收集各处理根系并采用稀释涂布平板法对定殖的GUMT319菌株进行计数。将根系取出洗净，吸水纸吸干后，称取1g根系，放入研钵中，加入1mL无菌水研磨成浆后进行梯度稀释，每个梯度取100μL稀释液至LB培养基中，用无菌涂布器涂匀后置于37℃恒温培养箱中暗培养24h后进行菌落计数，每梯度重复3次。
结果如图7所示，不同浓度烟碱在不同时段对菌株GUMT319在烟草根际均具有较好定殖作用，其中200μM烟碱溶液处理组，在不同时间段对菌株在烟草根际定殖均具有较好作用，显著高于其他处理。随着时间的增加，定殖量也不断增加，24h时，菌株在烟草根际定殖量为9.33×107CFU/g，48h后菌株定殖量逐渐增加，72h后定殖量达到最大，为2.37×108CFU/g，是对照组的1.62倍。96h后定殖量开始逐渐降低，定殖量为2.35×108CFU/g，120h后菌株在烟草根际定殖量趋于稳定状态，为2.33×108CFU/g，仍显著高于对照和其他处理。
实施例2
(1)实验材料
供试烤烟品种为云烟87，待烤烟幼苗生长至5叶1心时移栽至底径为140mm、口径180mm、高160mm花盆中生长至8～10片叶备用；58％甲霜灵·锰锌WP(山东利邦农化有限公司生产)。
(2)烟碱对贝莱斯芽胞杆菌GUMT319(菌株GUMT319)防治烟草黑胫病效果测定试验
选择移栽25d后的烟株为试验材料，采用的菌谷接种法接种烟草黑胫病菌，试验设置4个处理，每处理15株，试验重复3次。以接种病原菌后加清水保湿为对照处理(CK)；接种病原菌后接种20mL菌株GUMT319发酵液(浓度约为1×108CFU/mL)为处理2；接种病原菌后接种等量菌株GUMT319与5μL 300μM烟碱溶液混合发酵液为处理3；以58％钾霜·锰锌WP稀释500倍作为化学药剂对照，20mL灌根。置于光照和黑暗各12h、温度为28℃、相对湿度为90％以上的温室中培养，7d后调查发病情况，采用国家标准GB/T 23222—2008《病害分级标准》，调查各处理的发病率和病情指数，并计算相对防效。计算公式：
发病率＝(发病株数/调查总株数)×100％；
病情指数＝∑(各级病株数×病级数)/(调查总株数×最高病级数)×100％；
相对防效＝(对照组病情指数-处理组病情指数)/对照病情指数×100％。
(3)外源添加烟碱对贝莱斯芽胞杆菌GUMT319(GUMT319)田间防治烟草黑胫病影响测定实验
田间防效测定于2022年5月～8月于贵州省安顺市西秀区杨武镇烤烟种植区进行，试验地块平整呈长方形，烟株行距1.3m、株距0.5m，该地块种植烤烟品种为云烟87，为烟草黑胫病常年发生地。
试验共设置4个处理：清水为对照处理(CK)、GUMT319发酵液处理、添加300μM烟碱溶液的GUMT319发酵液处理及58％甲霜灵·锰锌WP作为化学对照药剂处理(均使用灌根对烟株进行处理)。每处理3个重复，一共12个小区，每个小区200株，小区之间设置保护行。具体实施方法如下：
a.GUMT319发酵液处理，共灌根3次，每隔10d施用1次。从烟苗移栽时灌根为第1次。施用方法：GUMT319发酵液与水比例按1:75配置好后，开始进行灌根，每株灌菌液100～200mL(土壤湿度较大时施100mL菌液，土壤湿度较小时施200mL菌液)。
b.添加烟碱溶液和GUMT319发酵液混合液的施用方法同上。
c.化学药剂58％甲霜灵·锰锌WP处理：按照推荐用量施用(58％甲霜灵·锰锌稀释500倍液，每株施用50mL)；第1次用药与提苗肥一起施用，主要起提前预防的作用；进入团棵期后，观察试验地病害发生情况，当烟田内出现病害后，立即用药剂喷施，每10d施用1次，连续2次；
d.清水为对照处理(CK)，灌根次数和灌根量同a。
处理完后，待田间观察到有烟株发病时(2022年7月23日)进行病害调查，以株为调查单位，参照《病害分级标准》GB/T 23222—2008分级调查病害严重程度，并计算发病率和相对防效(计算方法同(2))。
(4)数据分析
所有数据均利用Excel 2010进行统计整理，使用软件SPSS2.0新复极差法对试验数据进行分析，显著性水平设定P＜0.05。
(5)实验结果
烟碱对菌株GUMT319室内防治烟草黑胫病影响结果
结果如图8和表1所示，接种烟草黑胫病菌5d后，烟株出现发病症状。接种病原菌后未作其他处理的对照组(CK)发病较严重，发病率高达84.44％。发病初期叶片开始黄化，然后脱落，茎秆基部变黑，到后期严重时甚至出现整株烟苗倒伏枯死。经58％甲霜灵·锰锌WP、GUMT319发酵液及GUMT319发酵液+烟碱等处理后，烟草黑胫病发病率显著低于对照(表1)，分别为59.22％、61.78％及54.33％，病情指数也相对降低，其中GUMT319+烟碱处理组病情指数最低，为11.36，相对防效也达到最高，为65.93％，显著高于其他处理，并且添加烟碱和GUMT319处理组，烟株最大叶长显著高于其他处理组，最大叶宽也达到最大。
表1烟碱处理GUMT319对烟草黑胫病的盆栽防治效果
处理组别 发病率/％ 病情指数 相对防效/％ 最大叶长/cm 最大叶宽/cm
CK 84.44±0.08a 33.58±0.02a - 16.13±0.31c 8.66±0.47b
58％甲霜灵·锰锌WP 59.22±0.05b 15.06±0.01b 58.99±0.03b 20.28±0.89b 12.95±0.63a
GUMT319 61.78±0.06b 17.18±0.02b 54.64±0.03c 21.58±1.51b 12.87±0.36a
GUMT319+烟碱 54.33±0.09c 11.35±0.03c 65.93±0.04a 25.21±1.10a 13.77±0.32a
烟碱对菌株GUMT319田间防治烟草黑胫病影响结果
结果如表2所示，经58％甲霜灵·锰锌WP、GUMT319发酵液及GUMT319混合发酵液处理后烟草黑胫病发病率显著低于对照处理，发病率分别为3.81％、3.78％和2.21％，病情指数为2.17、2.09和1.91，其中GUMT319混合发酵液处理组相对防效显著高于其他处理组，达到69.07％，该菌发酵液对烤烟具有一定促生效果，经GUMT319发酵液及GUMT319混合发酵液处理后，烟株最大叶长及叶宽均显著高于对照处理组，而化学药剂58％甲霜灵·锰锌WP对烟株促生效果则不明显。
表2烟碱处理GUMT319对烟草黑胫病田间防效
处理组别 发病率/％ 病情指数 相对防效/％ 最大叶长/cm 最大叶宽/cm
CK 5.47±1.01a 3.43±0.39a - 42.21±2.51c 21.09±3.44b
58％甲霜灵·锰锌WP 3.81±0.44b 2.17±0.30b 61.20±0.98b 45.53±2.13b 23.33±1.92ab
GUMT319 3.78±0.23b 2.09±0.18b 63.93±0.15b 47.96±2.45a 24.59±2.47a
GUMT319+烟碱 2.21±0.17c 1.91±0.21b 69.07±1.13a 49.74±2.51a 25.75±2.81a
综上，烟碱对贝莱斯芽胞杆菌GUMT319防治烟草黑胫病具有积极影响。盆栽试验结果表明，在贝莱斯芽胞杆菌GUMT319培养液中添加烟碱后，GUMT319可显著降低烟草黑胫病的发病率，烟叶中最大叶长和叶宽与对照相比，均显著增加；大田防效试验发现，添加烟碱后GUMT319对烟草黑胫病的防治效果增强，烟株发病率显著降低。
以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。

Claims (7)

1.烟碱在制备贝莱斯芽胞杆菌GUMT319防治烟草黑胫病增强剂中的应用，其特征在于，所述烟碱的浓度为100～500μM。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：烟碱通过增强贝莱斯芽胞杆菌GUMT319根际定殖能力，增强贝莱斯芽胞杆菌GUMT319防治烟草黑胫病的能力。
3.一种贝莱斯芽胞杆菌GUMT319防治烟草黑胫病增强剂，其特征在于：所述增强剂的活性成分为烟碱和贝莱斯芽胞杆菌GUMT319发酵液；所述烟碱的浓度为100～500μM，所述贝莱斯芽胞杆菌GUMT319发酵液的浓度为1×108CFU/mL。
4.烟碱在制备贝莱斯芽胞杆菌GUMT319运动性增强剂中的应用，其特征在于：所述烟碱的浓度为100～500μM。
5.烟碱在制备贝莱斯芽胞杆菌GUMT319向根系趋化性增强剂中的应用，其特征在于：所述烟碱的浓度为100～500μM。
6.烟碱在制备促进贝莱斯芽胞杆菌GUMT319生物膜形成制剂中的应用，其特征在于：所述烟碱的浓度为100～500μM。
7.烟碱在制备贝莱斯芽胞杆菌GUMT319根际定殖能力增强剂中的应用，其特征在于：所述烟碱的浓度为100～500μM。
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