CN117136833A - 一种围氏马尾藻种质保存方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种围氏马尾藻种质保存方法，其原理是利用围氏马尾藻受精卵种质在特定条件生长缓慢且不发育，从而达到长期保存的目的。本发明首先对围氏马尾藻生殖托进行阴干处理，加入灭菌海水培养获取受精卵种质，获取受精卵种质后分别依次于不同配方的培养液同培养，然后转移到液氮中超低温保存、需要育苗时取出复活。本发明方法对围氏马尾藻受精卵种质进行离体种质保存，可延长种质保存5个月，解冻后成活率可达60％以上，所获取的种苗形态特征无明显差异。本发明的方法可帮助种苗度过夏季高温期，同时可在短期内获取大量优质种苗，有效避开了高温期种苗生长缓慢、死亡率高的问题，应用前景广泛。
Description
技术领域
本发明涉及经济海藻种质保存技术领域，特别是涉及一种围氏马尾藻种质保存方法。
背景技术
围氏马尾藻(Sargassum wightii)隶属于褐藻门(Phaeophyta)墨角藻目(Fucales)马尾藻科(Sargassaceae)马尾藻属(Sargassum)，是一种大型经济藻体，可作为海参、鲍等经济动物的天然优质饵料，同时藻体可提取多种活性物质在生物医疗领域有广泛应用前景，并且马尾藻有净化水质功能，经济和生态价值较高。目前，人们对围氏马尾藻资源的需求量日益增大，通过受精卵繁殖得到的幼苗体量大、效率高，因此通过有性繁殖实现人工规模化栽培是解决人类对马尾藻资源大量需求和生态资源保护的有效途径。自然状态下围氏马尾藻繁殖季节处于夏季高温期，发育的幼苗在固着后经历较长的休眠期和缓慢生长期，此阶段大量幼苗因沉积物淤泥覆盖、风浪冲刷、低潮干露日晒等导致种苗成活率极低。因此在保护现有野生资源的同时，利用受精卵种质保存技术，使受精卵避开夏季高温期发育增殖对人工育苗及马尾藻床生态修复都具有重要意义。
种质保存是大型经济海藻人工繁育的重要手段。目前马尾藻种质保存普遍存在的问题是成本高、效率低、种质保存时间短、成活率低。中国发明专利“一种利用低温保存铜藻受精卵的方法”(公布号为CN 104145946 A的)中公开了利用低温保存铜藻受精卵的方法，该方法是将受精卵于4-8℃下保存，使其在假根伸长之前完成异地跨地区运输从而进行苗种培育。该方法未能将铜藻受精卵在低温下长期保存。中国发明专利“一种铜藻种质资源的离体保存方法”(公布号为CN 107079804 A)中公开了铜藻利用利用营养繁殖体入添加NaNO3、NaH2PO4和烯效唑的保存方法。该方法是利用营养体实现种质保存，相比于受精卵繁育，该方法效率较低。学者邹定辉等(2021)曾经报道了“羊栖菜离体生殖托低温超低温的保存”，但其方法仅能在低温条件下将生殖托保存30天。据申请人所知，目前对于马尾藻受精卵的室内长周期保存尚无有效的方法。
发明内容
基于此，本发明的目的在于，提供一种围氏马尾藻种质保存方法，从而有效地对围氏马尾藻进行人工育苗和资源生态修复。
本发明是通过以下详细技术方案实现的：
一种围氏马尾藻种质保存方法，包括以下步骤：
1)将围氏马尾藻受精卵种质依次放置于不同配方的种质保存培养液中培养；
其中，所述种质保存培养液是在灭菌海水中加二甲基亚砜以及葡聚糖、脯氨酸或乙二醇中的一种或几种制备的；
2)将培养后的受精卵种质超低温保存；
其中，所述超低温保存为-80℃～-196℃超低温保存。
相对现有技术，本发明对围氏马尾藻受精卵进行离体种质保存，可延长种质保存5个月，可帮助种苗度过夏季高温期，同时可在短期内获取大量优质种苗，有效避开了高温期种苗生长缓慢、死亡率高的问题，应用前景广泛。
进一步的，所述步骤1)中的种质保存培养液是第一培养液、第二培养液、第三培养液、第四培养液、第五培养液和第六培养液中的一种；
其中，所述第一培养液包括体积分数8～10％的二甲基亚砜、体积分数2～3％的乙二醇和体积分数8～10％的葡聚糖；
所述第二培养液包括体积分数8～10％的二甲基亚砜、体积分数6～8％的葡聚糖和体积分数2～4％的脯氨酸；
所述第三培养液包括体积分数8～10％的二甲基亚砜、体积分数4～6％的葡聚糖和体积分数4％的脯氨酸培养液；
所述第四培养液包括体积分数8～10％的二甲基亚砜、体积分数2～4％的葡聚糖和体积分数6％的脯氨酸培养液；
所述第五培养液包括体积分数8～10％的二甲基亚砜、体积分数1～2％的葡聚糖和体积分数8％的脯氨酸培养液；
所述第六培养液包括体积分数8～10％的二甲基亚砜和体积分数8～10％的脯氨酸。
上述种质保存培养液中的二甲基亚砜、乙二醇、葡聚糖和脯氨酸等组分的共同作用能使围氏马尾藻受精卵种质在培养过程中逐渐转换到生长缓慢的阶段，而且经过种质保存培养液培养后，能够提高围氏马尾藻受精卵种质在后续长时间冻存后的成活率。
进一步的，所述步骤1)中的培养方法具体为依次在所述第一培养液和所述第六培养液中各培养3-4小时，或依次在所述第二培养液和第五培养液中各培养3-4小时，或依次在第三培养液和第四培养液中各培养3-4小时。能使围氏马尾藻受精卵种质冻存150天后的成活率稳定在10％以上，达到12～33％左右。
进一步的，所述步骤1)中的培养方法具体为依次在所述第一培养液、所述第二培养液和所述第三培养液中各培养2-2.5小时或者依次在所述第四培养液、所述第五培养液和所述第六培养液中各培养2-2.5小时。能提高围氏马尾藻受精卵种质冻存150天后的成活率到20％以上，达到23～41％左右。
进一步的，所述步骤1)中的培养方法具体为依次在所述第一培养液、所述第二培养液、所述第三培养液、所述第四培养液、所述第五培养液和所述第六培养液中各培养1-1.5小时。大幅提高围氏马尾藻受精卵种质冻存150天后的成活率，使成活率达到60％以上。
进一步的，所述步骤1)的受精卵种质获取方法为从成熟的围氏马尾藻藻体选取健康、成熟的生殖托清洗和阴干，并将阴干后的生殖托放置于灭菌海水中培养以获取受精卵种质，其中阴干温度为15～20℃，阴干时间为12～24小时。阴干能刺激生殖托放散受精卵，提高放散效率。
进一步的，所述阴干后的生殖托的培养方法为将所述阴干后的生殖托放置于水箱中，添加灭菌海水，环境温度控制在20～25摄氏度，微量充气培养，光照强度为2500lx，进一步促使生殖托排出受精卵。
进一步的，所述步骤1)选取的受精卵种质的发育程度为第一次细胞分裂之后和生成假根之前。确保收集到的受精卵完成受精过程，同时保证受精卵的固着能力。
进一步的，所述步骤2)的超低温保存以液氮为媒介，保存过程中将受精卵种质混同种质保存培养液投放于液氮中保存。液氮能使受精卵种质中的自由水直接气化，防止自由水在冻存过程中变成冰晶颗粒破坏细胞结构。而种质保存培养液在冻存时能提高受精卵细胞的抗冻性并充当受精卵细胞的保护剂，提高受精卵细胞的抗冻能力，从而提高围氏马尾藻受精卵种质在后续长时间冻存后的成活率。
进一步的，所述马尾藻种质保存方法还包括冻存受精卵种质的复活，复活方法具体为将冻存的受精卵种质取出后迅速放置于20～25℃的水浴环境中振荡解冻。受精卵种质复活便利，有利于推广育苗。
具体实施方式
下面结合几个实施例对本发明进行详细地描述。
实施例1
本实施例所配制的种质保存培养液有6种，均以灭菌海水为溶剂，其组分分别如下：
1)第一培养液：包括体积分数8％的二甲基亚砜、体积分数2％的乙二醇和体积分数10％的葡聚糖；
2)第二培养液：包括体积分数8％的二甲基亚砜、体积分数8％的葡聚糖和体积分数4％的脯氨酸；
3)第三培养液：包括体积分数10％的二甲基亚砜、体积分数6％的葡聚糖和体积分数4％的脯氨酸；
4)第四培养液：包括体积分数10％的二甲基亚砜、体积分数4％的葡聚糖和体积分数6％的脯氨酸；
5)第五培养液：包括体积分数10％的二甲基亚砜、体积分数2％的葡聚糖+8％的脯氨酸；
6)第六培养液：包括体积分数10％的二甲基亚砜和体积分数10％的脯氨酸；
受精卵种质分别依次在上述种质保存培养液中培养，可保障受精卵种质在冻存期间的活性，达到种质保存的目的。对围氏马尾藻受精卵种质的保存步骤如下：
(1)甄选长势健康的优质成熟藻体，用过滤海水清洗附着的杂质及泥沙；
(2)用镊子摘取生殖托，切片镜检选择成熟度较高的生殖托，放置于20℃环境中阴干12小时；
(3)将阴干后的生殖托放置于40L水箱中，添加灭菌海水，环境温度控制在20～25摄氏度，微量充气培养，光照强度为2500lx，促使其排出受精卵；
(4)及时用用尼龙网袋过滤出受精卵，用于种质保存的受精卵发育程度应在第一次分裂和发育出假根之间；
(5)将收集到的受精卵分别于不同配方培养液中培养(具体如表1所示)。
(6)将培养后的受精卵连同培养液放置于50ml冻存管中，然后迅速将冻存管放置于液氮中超低温保存。
(7)种质复活时，将保存的受精卵种质从液氮中取出后，迅速放置于25℃的水浴环境中振荡解冻。
表1
以解冻后的受精卵种质重新发育为幼苗并生出假根作为判定种质存活的依据。本实施例第1种培养方法培养的受精卵超低温冻存30天、90天和150天后解冻的成活率如下表2所示：
表2
从表2可以看出，本实施例第1种培养方法培养的受精卵冻存30天的成活率最高为83.25％，冻存90天的成活率下降明显，仅为3.24％，冻存150天的受精卵成活率为0。因而本实施例第1种培养方式培养的受精卵无法实现长期保存马尾藻受精卵的目标。
本实施例第2种培养方法培养的受精卵超低温冻存30天、90天和150天后解冻的成活率如下表3所示：
表3
从表3可以看出，本实施例第2种培养方法培养的受精卵冻存30天的成活率最高为53.25％，冻存90天的成活率下降为32.16％，冻存150天的受精卵成活率进一步下降为28.97％。因而本实施例第2种培养方式培养的受精卵能够实现长期保存马尾藻受精卵的目标，但是冻存受精卵解冻激活的成活率较低，仅为30％左右，无法适用于生产育苗。
本实施例第3种培养方法培养的受精卵超低温冻存30天、90天和150天后解冻的成活率如下表4所示：
表4
从表4可以看出，本实施例第3种培养方法培养的受精卵冻存30天的成活率最高为83.25％，冻存90天的成活率略微下降为71.03％，冻存150天的受精卵成活率为63.01％。因而本实施例第3种培养方式培养的受精卵能够实现长期保存马尾藻受精卵的目标，并且冻存受精卵解冻激活的成活率较高，即使冻存150天，受精卵成活率仍然在60％以上。
本实施例第4种培养方法培养的受精卵超低温冻存30天、90天和150天后解冻的成活率如下表5所示：
表5
从表5可以看出，本实施例第4种培养方法培养的受精卵冻存30天的成活率最高为88.13％，冻存90天的成活率下降为43.77％，冻存150天的受精卵成活率进一步下降为16.17％。因而本实施例第4种培养方式培养的受精卵能够实现长期保存马尾藻受精卵的目标，但冻存受精卵解冻激活的成活率较低，仅为16.17％，无法适用于生产育苗。
综上所述，围氏马尾藻依次在本实施例所述第一培养液、所述第二培养液、所述第三培养液、所述第四培养液、所述第五培养液和所述第六培养液中中各培养1小时后再超低温保存150天后所获得的受精卵种质成活率最高，可达60％以上，适用于生产育苗。
实施例2
本实施例所配制的种质保存培养液有6种，以灭菌海水为溶剂，其组分分别如下：
1)第一培养液：包括体积分数9％的二甲基亚砜、体积分数2％的乙二醇和体积分数8％的葡聚糖；
2)第二培养液：包括体积分数9％的二甲基亚砜、体积分数6％的葡聚糖和体积分数3％的脯氨酸；
3)第三培养液：包括体积分数9％的二甲基亚砜、体积分数5％的葡聚糖和体积分数5％的脯氨酸；
4)第四培养液：包括体积分数9％的二甲基亚砜、体积分数3％的葡聚糖和体积分数7％的脯氨酸；
5)第五培养液：包括体积分数9％的二甲基亚砜、体积分数1％的葡聚糖和体积分数8％的脯氨酸；
6)第六培养液：包括体积分数9％的二甲基亚砜和9％的脯氨酸；
受精卵种质分别依次在上述种质保存培养液中培养，可保障受精卵在冻存期间的活性，达到种质保存的目的。对围氏马尾藻受精卵种质的保存步骤如下：
(1)筛选个体饱满长势健康的优质成熟藻体，用过滤海水清洗附着的杂质及泥沙；
(2)用镊子摘取生殖托，切片镜检选择成熟度较高的生殖托，放置于18℃环境中阴干16小时；
(3)将阴干后的生殖托放置于40L水箱中，添加灭菌海水，环境温度控制在25℃，微量充气培养，光照强度为2500lx，促使其排出受精卵；
(4)及时用用尼龙网袋过滤出受精卵，用于种质保存的受精卵发育程度应在观察到第一次分裂之后和发育出假根之前；
(5)将收集到的受精卵分别于不同种质保存培养液中培养(具体如下表6所示)。
(6)将培养后的受精卵连同种质保存培养液放置于50ml冻存管中，然后迅速将冻存管放置于液氮中超低温保存。
(7)种质复活时，将保存的种质从液氮中取出后，迅速放置于25℃的水浴环境中振荡解冻。
表6
同样以解冻后的种质重新发育为幼苗并生出假根作为判定种质存活的依据。本实施例第1种培养方法培养的受精卵超低温冻存30天、90天和150天后解冻的成活率如下表7所示：
表7
从表7可以看出，本实施例第1种培养方法培养的受精卵冻存30天的成活率最高为81.15％，冻存90天的成活率大幅下降为23.63％，冻存150天的受精卵成活率进一步下降为12.83％。因而本实施例第1种培养方式培养的受精卵能够实现长期保存马尾藻受精卵的目标，但冻存受精卵解冻激活的成活率较低，仅为12.83％，无法适用于生产育苗。
本实施例第2种培养方法培养的受精卵超低温冻存30天、90天和150天后解冻的成活率如下表8所示：
表8
从表8可以看出，本实施例第2种培养方法培养的受精卵冻存30天的成活率最高为77.59％，冻存90天的成活率下降为46.61％，冻存150天的受精卵成活率下降为25.12％。因而本实施例第2种培养方式培养的受精卵能够实现长期保存马尾藻受精卵的目标，但冻存受精卵解冻激活的成活率较低，仅为25.12％，无法适用于生产育苗。
本实施例第3种培养方法培养的受精卵超低温冻存30天、90天和150天后解冻的成活率如下表9所示：
表9
从表9可以看出，本实施例第3种培养方法培养的受精卵冻存30天的成活率最高为81.11％，冻存90天的成活率下降为51.22％，冻存150天的受精卵成活率下降为33.01％。因而本实施例第2种培养方式培养的受精卵能够实现长期保存马尾藻受精卵的目标，但冻存受精卵解冻激活的成活率较低，仅为33.01％，无法适用于生产育苗。
本实施例第4种培养方法培养的受精卵超低温冻存30天、90天和150天后解冻的成活率如下表10所示：
表10
从表10可以看出，本实施例第4种培养方法培养的受精卵冻存30天的成活率最高为83.22％，冻存90天的成活率略微下降为73.21％，冻存150天的受精卵成活率下降为63.21％。因而本实施例第2种培养方式培养的受精卵能够实现长期保存马尾藻受精卵的目标，冻存受精卵解冻激活的成活在60％以上，适用于生产育苗。
综上所述，围氏马尾藻依次在本实施例第一培养液、第二培养液、第三培养液、第四培养液、第五培养液和第六培养液中各培养1小时后，再超低温保存所获得的种质成活率最高，冻存150天后解冻的成活率仍超过60％，具有生产推广价值，适用于生产育苗。
通过以上实施例2结果对比实施例1中的结果可以看出，不同培养液组合培养可提升受精卵冻存后的成活率。在6种培养液中依次各自培养1小时，然后冻存所保存的受精卵在冻存150天后成活率最高，可达60％以上，具有生产推广应用价值。
实施例3
本实施例所配制的种质保存培养液有6种，以灭菌海水为溶剂，其组分分别如下：
1)第一培养液：包括体积分数8％的二甲基亚砜、体积分数3％的乙二醇和体积分数9％的葡聚糖；
2)第二培养液：包括体积分数8％的二甲基亚砜、体积分数7％的葡聚糖和体积分数4％的脯氨酸；
3)第三培养液：包括体积分数8％的二甲基亚砜、体积分数4％的葡聚糖和体积分数5％的脯氨酸；
4)第四培养液：包括体积分数9％的二甲基亚砜、体积分数4％的葡聚糖和体积分数8％的脯氨酸；
5)第五培养液：包括体积分数9％的二甲基亚砜、体积分数2％的葡聚糖和体积分数9％的脯氨酸；
6)第六培养液：包括10％的二甲基亚砜和体积分数9％的脯氨酸；
受精卵在上述组分中分别依次培养，可保障受精卵在冻存期间的活性，达到种质保存的目的。对围氏马尾藻受精卵种质的保存步骤如下：
(1)筛选个体饱满长势健康的优质成熟藻体，用过滤海水清洗附着的杂质及泥沙；
(2)用镊子摘取生殖托，切片镜检选择成熟度较高的生殖托，放置于18℃环境中阴干16小时；
(3)将阴干后的生殖托放置于40L水箱中，添加灭菌海水，环境温度控制在25℃，微量充气培养，光照强度为2500lx，促使其排出受精卵；
(4)及时用用尼龙网袋过滤出受精卵，用于种质保存的受精卵发育程度应在观察到第一次分裂(确保受精成功)和发育出假根之前；
(5)将收集到的受精卵分别于不同种质保存培养液中培养(具体如下表11所示)。
(6)将培养后的受精卵连同营养液放置于50ml冻存管中，然后迅速将冻存管放置于液氮中超低温保存。
(7)种质复活时，将保存的种质从液氮中取出后，迅速放置于25℃的水浴环境中振荡解冻。
表11
同样以解冻后的种质重新发育为幼苗并生出假根作为判定种质存活的依据。本实施例第1种培养方法培养的受精卵超低温冻存30天、90天和150天后解冻的成活率如下表12所示：
表12
从表12可以看出，本实施例第1种培养方法培养的受精卵冻存30天的成活率最高为82.33％，冻存90天的成活率下降为43.23％，冻存150天的受精卵成活率进一步下降为23.78％。因而本实施例第2种培养方式培养的受精卵能够实现长期保存马尾藻受精卵的目标，但冻存受精卵解冻激活的成活率仅为23.78％，不适用于生产育苗。
本实施例第2种培养方法培养的受精卵超低温冻存30天、90天和150天后解冻的成活率如下表13所示：
表13
从表13可以看出，本实施例第2种培养方法培养的受精卵冻存30天的成活率最高为71.98％，冻存90天的成活率下降为47.29％，冻存150天的受精卵成活率进略微下降为41.36％。因而本实施例第2种培养方式培养的受精卵能够实现长期保存马尾藻受精卵的目标，但冻存受精卵解冻激活的成活率为41.36％，不适用于生产育苗。
本实施例第3种培养方法培养的受精卵超低温冻存30天、90天和150天后解冻的成活率如下表14所示：
表14
从表14可以看出，本实施例第3种培养方法培养的受精卵冻存30天的成活率最高为84.01％，冻存90天的成活率略微下降为72.17％，冻存150天的受精卵成活率下降为65.16％。因而本实施例第3种培养方式培养的受精卵能够实现长期保存马尾藻受精卵的目标，冻存受精卵解冻激活的成活率高于65％，适用于生产育苗。
综上所述，受精卵依次依次在本实施例第一培养液、第二培养液、第三培养液、第四培养液、第五培养液和第六培养液中各培养1小时，再超低温保存所获得的种质成活率最高，培养150天后，成活率仍超过65％，具有生产推广价值。
通过以上实施例3结果，同时对比实施例2和实施例1中的结果可以看出，相比于实施例2中两种培养液组合培养，本实施例中3种不同培养液组合培养可进一步提升受精卵冻存150天后的成活率。但在6种种质保存培养液中依次各自培养1小时，然后冻存所保存的受精卵在冻存150天后成活率最高，可达65％以上。
相对现有技术，本发明种质保存与激活方法对围氏马尾藻受精卵进行离体种质保存，可延长种质保存5个月，解冻后成活率可达60％以上，所获取的种苗形态特征无明显差异。本发明的方法还可帮助种苗度过夏季高温期，同时可在短期内获取大量优质种苗，有效避开了高温期种苗生长缓慢、死亡率高的问题，应用前景广泛。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，则本发明也意图包含这些改动和变形。
Claims (10)
1.一种围氏马尾藻种质保存方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)将围氏马尾藻受精卵种质依次放置于不同配方的种质保存培养液中培养；
其中，所述种质保存培养液是在灭菌海水中加二甲基亚砜以及葡聚糖、脯氨酸或乙二醇中的一种或几种制备的；
2)将培养后的受精卵种质超低温保存；
其中，所述超低温保存为-80℃～-196℃超低温保存。
2.根据权利要求1所述的围氏马尾藻种质保存方法，其特征在于：所述步骤1)中的种质保存培养液是第一培养液、第二培养液、第三培养液、第四培养液、第五培养液和第六培养液中的一种；
其中，所述第一培养液包括体积分数8～10％的二甲基亚砜、体积分数2～3％的乙二醇和体积分数8～10％的葡聚糖；
所述第二培养液包括体积分数8～10％的二甲基亚砜、体积分数6～8％的葡聚糖和体积分数2～4％的脯氨酸；
所述第三培养液包括体积分数8～10％的二甲基亚砜、体积分数4～6％的葡聚糖和体积分数4％的脯氨酸培养液；
所述第四培养液包括体积分数8～10％的二甲基亚砜、体积分数2～4％的葡聚糖和体积分数6％的脯氨酸培养液；
所述第五培养液包括体积分数8～10％的二甲基亚砜、体积分数1～2％的葡聚糖和体积分数8％的脯氨酸培养液；
所述第六培养液包括体积分数8～10％的二甲基亚砜和体积分数8～10％的脯氨酸。
3.根据权利要求2所述的围氏马尾藻种质保存方法，其特征在于：所述步骤1)中的培养方法具体为依次在所述第一培养液和所述第六培养液中各培养3-4小时，或依次在所述第二培养液和第五培养液中各培养3-4小时，或依次在第三培养液和第四培养液中各培养3-4小时。
4.根据权利要求2所述的围氏马尾藻种质保存方法，其特征在于：所述步骤1)中的培养方法具体为依次在所述第一培养液、所述第二培养液和所述第三培养液中各培养2-2.5小时或者依次在所述第四培养液、所述第五培养液和所述第六培养液中各培养2-2.5小时。
5.根据权利要求2所述的围氏马尾藻种质保存方法，其特征在于：所述步骤1)中的培养方法具体为依次在所述第一培养液、所述第二培养液、所述第三培养液、所述第四培养液、所述第五培养液和所述第六培养液中各培养1-1.5小时。
6.根据权利要求1-5任一所述的围氏马尾藻种质保存方法，其特征在于：所述步骤1)的受精卵种质获取方法为从成熟的围氏马尾藻藻体选取健康、成熟的生殖托清洗和阴干，并将阴干后的生殖托放置于灭菌海水中培养以获取受精卵种质，其中阴干温度为15～20℃，阴干时间为12～24小时。
7.根据权利要求6所述的围氏马尾藻种质保存方法，其特征在于：所述阴干后的生殖托的培养方法为将所述阴干后的生殖托放置于水箱中，添加灭菌海水，环境温度控制在20～25摄氏度，微量充气培养，光照强度为2500lx，促使生殖托排出受精卵。
8.根据权利要求1所述的围氏马尾藻种质保存方法，其特征在于：所述步骤1)选取的受精卵种质的发育程度为第一次细胞分裂之后和生成假根之前。
9.根据权利要求1所述的围氏马尾藻种质保存方法，其特征在于，所述步骤2)的超低温保存以液氮为媒介，保存过程中将受精卵种质混同种质保存培养液投放于液氮中保存。
10.根据权利要求1所述的围氏马尾藻种质保存方法，其特征在于，所述马尾藻种质保存方法还包括冻存受精卵种质的复活，复活方法具体为将冻存的受精卵种质取出后迅速放置于20～25℃的水浴环境中振荡解冻。
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