CN103960182B - 一种应用虾卵离体培养建立脊尾白虾家系的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种应用虾卵离体培养建立脊尾白虾家系的方法，包括：脊尾白虾亲虾的选择与消毒处理亲体虾卵的分离；虾卵的振荡培养参数测定；培养过程中的显微观察；培养过程中盐度递减控制；孵化后幼虾的培养等。本发明可以有效减少亲虾抱卵过程中由于不同因子影响造成的孵化失败机率，提高虾卵的孵化率和幼虾的存活率，对脊尾白虾建立家系的应用中具有良好的应用前景。

Description

一种应用虾卵离体培养建立脊尾白虾家系的方法
技术领域
本发明属于脊尾白虾领域，特别涉及一种应用虾卵离体培养建立脊尾白虾家系的方法。
背景技术
脊尾白虾(Exopalaemoncarinicauda)属于真虾类，其繁殖方式与对虾类有本质的区别，属于抱卵繁殖，交尾后将受精卵抱于腹肢上发育，利用腹肢的不断摆动为胚胎发育提供足够氧气，幼体孵化后脱离母体，孵化出的幼体即为溞状幼体。
家系选育是选择育种的方法之一，水产养殖动物的家系选育由于其养殖特点和繁殖生物学特性，而有较大困难，其中鱼类的家系选育进展最好，已取得很大的成果。而甲壳类水产动物的家系选育由于整个生长过程伴随有蜕壳等生物学特性而发展较为缓慢，现已有不少关于家系构建方法及生长比较的研究，如张天时等对中国对虾家系建立及不同家系生长发育进行了初步研究；张吕平等对凡纳滨对虾全同胞家系的建立及生长比较进行了研究；杨国梁等研究了罗氏沼虾大规模家系构建及培育技术；杨其彬等研究了斑节对虾4个不同群体建立家系的生长及存活；相建海等研究并申请了养殖对虾家系的建立和良种选育方法的专利，也有学者通过构建家系，利用家系进行遗传力估计和构建遗传连锁图谱。目前针对脊尾白虾家系的建立方法存在着孵化失败率高、幼虾存活率的缺点。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种应用虾卵离体培养建立脊尾白虾家系的方法，该方法可以有效减少亲虾抱卵过程中由于不同因子影响造成的孵化失败机率，提高虾卵的孵化率和幼虾的存活率，对脊尾白虾建立家系的应用中具有良好的应用前景。
本发明的一种应用虾卵离体培养建立脊尾白虾家系的方法，包括：
(1)选择个体大、活力强、抱卵量多的脊尾白虾亲虾个体，放入高锰酸钾海水溶液中消毒；将虾卵从亲虾个体中剥离，然后置于高锰酸钾海水溶液浸泡，随后用海水冲洗，转移至装有灭菌海水的玻璃培养皿中；
(2)将玻璃培养皿放置于控温摇床中进行振荡培养(振荡为了增氧)，温度设置为20～25℃，振荡转速为120～150转/分钟；对虾卵的发育情况进行显微观察，检查发育异常情况；每天更换新鲜灭菌海水，并按1个盐度单位/天的进度进行培养海水的盐度递减，保持温度不变，盐度递减到15后不再递减；
(3)经10-21天，脊尾白虾经过卵膜发育孵化至糠虾阶段，将同一培养皿中的糠虾转移到海水容器中，充气增氧，投放混合藻液作饵料，该批糠虾即为同一家系的脊尾白虾。
所述步骤(1)中的高锰酸钾海水溶液浓度为0.0002mg/ml。
所述步骤(1)中的海水的盐度为25。
所述步骤(2)中的显微观察时间节点为4h、10h、20h、48h、72h、144h、198h、240h、300h。
所述步骤(3)中的海水容器的体积为30L，海水盐度为15。
所述步骤(3)中的混合藻液的组成为：角头藻、巴夫藻、骨条藻和小球藻。
有益效果
(1)本发明可以有效、严谨地在受控系统中对脊尾白虾的虾卵进行分离培养，保证同一家系的纯正；
(2)本发明可以有效减少亲虾抱卵过程中由于不同因子影响造成的孵化失败机率；
(3)本发明降低了亲虾在孵化后的残食幼虾率，提高虾卵的孵化率和幼虾的存活率，对脊尾白虾建立家系的应用中具有良好的应用前景。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
实施例1
选择个体较大、活力较强、抱卵量较多的脊尾白虾亲虾个体，放入0.0002mg/ml高锰酸钾海水溶液中消毒5分钟；采用75％酒精棉消毒后的镊子，将虾卵从亲虾个体中轻轻剥离，力度掌握适中，以不损伤虾卵为宜。取单只脊尾白虾亲虾分离的虾卵，立刻置于0.0002mg/ml的高锰酸钾海水溶液浸泡2分钟，用盐度为25的海水冲洗2次，转移至装有30mL、盐度为25的灭菌海水玻璃培养皿(直径为150mm)中；将装有虾卵的玻璃培养皿放置于控温摇床中进行振荡培养，温度设置为20℃，振荡转速为120转/分钟；按4h、10h、20h、48h、72h、144h、198h、240h、300h的时间节点对虾卵的发育情况进行显微观察，检查发育异常情况。每天更换新鲜灭菌海水，并按照1盐度/天的进度进行培养海水的盐度递减，保持温度等理化指标不变。盐度递减到15后不再递减。经20天，脊尾白虾经过无节幼体、蚤状幼体等阶段的卵膜发育，孵化至糠虾阶段。立即将同一培养皿中的糠虾转移到体积为30L、盐度为15的海水容器中，充气增氧，投放角头藻、巴夫藻、骨条藻、小球藻的混合藻液等藻液作饵料。该批糠虾即为同一家系的脊尾白虾，可用来作为脊尾白虾的优良种质的选育用。
实施例2
选择个体较大、活力较强、抱卵量较多的脊尾白虾亲虾个体，放入0.0002mg/ml高锰酸钾海水溶液中消毒5分钟；采用75％酒精棉消毒后的镊子，将虾卵从亲虾个体中轻轻剥离，力度掌握适中，以不损伤虾卵为宜。取单只脊尾白虾亲虾分离的虾卵，立刻置于0.0002mg/ml的高锰酸钾海水溶液浸泡3分钟，用盐度为25的海水冲洗3次，转移至装有40mL、盐度为25的灭菌海水玻璃培养皿(直径为150mm)中；将装有虾卵的玻璃培养皿放置于控温摇床中进行振荡培养，温度设置为25℃，振荡转速为140转/分钟；按4h、10h、20h、48h、72h、144h、198h、240h、300h的时间节点对虾卵的发育情况进行显微观察，检查发育异常情况。每天更换新鲜灭菌海水，并按照1盐度/天的进度进行培养海水的盐度递减，保持温度等理化指标不变。盐度递减到15后不再递减。经16天，脊尾白虾经过无节幼体、蚤状幼体等阶段的卵膜发育，孵化至糠虾阶段。立即将同一培养皿中的糠虾转移到体积为30L、盐度为15的海水容器中，充气增氧，投放角头藻、巴夫藻、骨条藻、小球藻的混合藻液等藻液作饵料。该批糠虾即为同一家系的脊尾白虾，可用来作为脊尾白虾的优良种质的选育用。

Claims (6)

1.一种应用虾卵离体培养建立脊尾白虾家系的方法，包括：
(1)选择个体大、活力强、抱卵量多的脊尾白虾亲虾个体，放入高锰酸钾海水溶液中消毒；将虾卵从亲虾个体中剥离，然后置于高锰酸钾海水溶液浸泡，随后用海水冲洗，转移至装有灭菌海水的玻璃培养皿中；
(2)将玻璃培养皿放置于控温摇床中进行振荡培养，温度设置为20～25℃，振荡转速为120～150转/分钟；对虾卵的发育情况进行显微观察，检查发育异常情况；每天更换新鲜灭菌海水，并按1个盐度单位/天的进度进行培养海水的盐度递减，保持温度不变，盐度递减到15后不再递减；
(3)经10-21天，脊尾白虾经过卵膜发育孵化至糠虾阶段，将同一培养皿中的糠虾转移到海水容器中，充气增氧，投放混合藻液作饵料，该批糠虾即为同一家系的脊尾白虾。
2.根据权利要求1所述的一种应用虾卵离体培养建立脊尾白虾家系的方法，其特征在于：所述步骤(1)中的高锰酸钾海水溶液浓度为0.0002mg/ml。
3.根据权利要求1所述的一种应用虾卵离体培养建立脊尾白虾家系的方法，其特征在于：所述步骤(1)中冲洗采用的海水以及灭菌海水的盐度为25。
4.根据权利要求1所述的一种应用虾卵离体培养建立脊尾白虾家系的方法，其特征在于：所述步骤(2)中的显微观察时间节点为4h、10h、20h、48h、72h、144h、198h、240h、300h。
5.根据权利要求1所述的一种应用虾卵离体培养建立脊尾白虾家系的方法，其特征在于：所述步骤(3)中的海水容器的体积为30L，海水盐度为15。
6.根据权利要求1所述的一种应用虾卵离体培养建立脊尾白虾家系的方法，其特征在于：所述步骤(3)中的混合藻液的组成为：角头藻、巴夫藻、骨条藻和小球藻。
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