CN117136242A - 化合物、组合物及其治疗方法 - Google Patents

Abstract

本公开涉及对已被鉴定具有增加的A_2A表达或A_2AR⁺细胞的密度的受试者的治疗。

Description

化合物、组合物及其治疗方法

发明领域

本公开包括对受试者的治疗，其中该受试者已被鉴定为具有肿瘤浸润免疫细胞(TIL)，该TIL具有高水平A_2A受体(A_2AR)表达。本公开的化合物包括但不限于A_2AR拮抗剂，并且可用作治疗化合物，尤其是在癌症的治疗中。本公开的化合物可以与另外的治疗剂组合使用来治疗癌症。

背景技术

许多肿瘤产生高水平的胞外腺苷，所述胞外腺苷抑制抗肿瘤免疫反应。阻断主要在肿瘤浸润免疫细胞上表达的A_2A受体可以逆转腺苷的免疫抑制作用。Inupadenant被设计为一种非脑渗透性、强效且高度选择性的A_2A受体小分子拮抗剂，其即使在肿瘤中存在的高腺苷浓度下也能保持活性。

发明内容

本公开包括在有需要的受试者中治疗特征在于高水平A_2A受体表达的癌症的方法，包括向受试者施用治疗有效量的A_2AR拮抗剂或其组合。

本公开在所附权利要求中进一步限定。

附图说明

图1包括三个图：显示PD和PR+SD患者中的A_2AR⁺细胞/mm²的图、比较敏感性％与特异性％的ROC曲线、以及肿瘤大小相对于基线的变化百分比，如实施例1中所述。

图2A是基线ADORA2A表达的盒须图，图2B是肿瘤区域内A_2AR⁺细胞密度的盒须图，其中每个在具有实施例2中所述的部分应答或非进行性疾病的受试者中。

图3包括实施例2中讨论的三个图：(图3A)比较敏感性％与特异性％的ROC曲线，(图3B)使用优化截止值通过A_2AR细胞密度进行的存活分析，以及(图3C)可评估RECIST的受试者中目标病灶直径总和的最佳百分比变化的瀑布图。

图4包括实施例3中讨论的两个图：(图4A)在六种人肿瘤细胞系中通过qRT-PCR分析的ADORA2A表达，和(图4B)在六种人肿瘤细胞系中通过免疫印迹评估的A_2AR表达。

图5包括两个图：使用抗A_2AR抗体(图5A)，或A_2AR探针(图5B)通过流式细胞术评估HEK-293野生型(空直方图)或过表达A_2AR(实心直方图)中的A_2AR表达。

图6包括实施例4中描述的两个图：肿瘤组织样品中的A_2AR⁺细胞(图6A)和ADORA2A表达(图6B)。A：用抗A_2AR和抗CD3抗体共染色的组织切片的代表性图像。B：组织切片上CISH的代表性图像。箭头表示ADORA2A RNA分子。

定义

在本公开中，下列术语具有如下含义：

术语“腺苷A_2A受体”、“A_2A受体”和“A_2AR”可互换使用，是指以腺苷作为内源配体的细胞表面腺苷受体。在人类中，A_2AR由ADORA2A基因编码。人A_2AR的示例性氨基酸序列包括SEQ ID NO:1。

术语“醛”是指基团-CHO。

术语“烯基”是指包含一个或多个碳-碳双键的可为直链或支链的不饱和烃基。适合的烯基包含2至6个碳原子，优选2至4个碳原子，更优选2至3个碳原子。烯基的实例为乙烯基、2-丙烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、2-戊烯基和其异构体、2-己烯基和其异构体、2,4-戊二烯基等。

术语“烯基羰基”是指基团-(C＝O)-烯基，其中烯基如本文所定义。

术语“烯基羰基氨基”是指基团-NH-(C＝O)-烯基，其中烯基如本文所定义。

术语“烷氧基”是指基团-O-烷基，其中烷基如本文所定义。

术语“烷基”是指式C_nH_2n+1的烃基，其中n为大于或等于1的数。通常，本公开的烷基包含1至8个碳原子，更优选地，本公开的烷基包含1至6个碳原子。烷基可为直链或支链的。适合的烷基包括甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基以及辛基。

术语“烷基氨基烷基”是指基团-烷基-NH-烷基，其中烷基如本文所定义。

术语“烷基氨基烷基氨基羰基”是指基团-(C＝O)-NH-烷基-NH-烷基，其中烷基如本文所定义。

术语“(烷基氨基烷基)(烷基)氨基羰基”是指基团-(C＝O)-NR¹R²，其中R¹为烷基并且R²为-烷基-NH-烷基，其中烷基如本文所定义。

术语“烷基氨基烷基羰基”是指基团-(C＝O)-烷基-NH-烷基，其中烷基如本文所定义。

术语“烷基羰基”是指基团-(C＝O)-烷基，其中烷基如本文所定义。

术语“烷基羰基胺”是指基团-NH-(C＝O)-烷基，其中烷基如本文所定义。

术语“烷基羰基氧基烷基”是指基团-烷基-O-(C＝O)-烷基，其中烷基如本文所定义。

术语“烷基杂芳基”是指被烷基取代的任何杂芳基，其中烷基如本文所定义。

术语“烷氧基烷基”是指基团-烷基-O-烷基，其中烷基如本文所定义。

术语“烷氧基烷氧基”是指基团-O-烷基-O-烷基，其中烷基如本文所定义。

术语“烷氧基羰基”是指基团-(C＝O)-O-烷基，其中烷基如本文所定义。

术语“烷基磺酰基”是指基团-SO₂-烷基，其中烷基如本文所定义。

术语“烷基磺酰基氨基烷基”是指基团-烷基-NH-SO₂-烷基，其中烷基如本文所定义。

术语“烷基砜烷基”是指基团-烷基-SO₂-烷基，其中烷基如本文所定义。

术语“烷基磺亚胺酰基”是指基团-S(＝O)(＝NH)-烷基，其中烷基如本文所定义。

术语“烷基亚砜”是指基团-(S＝O)-烷基，其中烷基如本文所定义。

术语“烷基亚砜烷基”是指基团-烷基-SO-烷基，其中烷基如本文所定义。

术语“炔”是指一类单价不饱和烃基，其中不饱和是因存在一个或多个碳-碳三键而产生。炔基典型地并且优选具有与上文关于烷基所描述相同数目的碳原子。炔基的非限制性实例为乙炔基、2-丙炔基、2-丁炔基、3-丁炔基、2-戊炔基和其异构体、2-己炔基和其异构体等。

术语“炔烃烷基”是指基团-烷基-炔，其中烷基和炔如本文所定义。

术语“氨基”是指基团-NH₂。

术语“氨基烷基”是指基团-烷基-NH₂，其中烷基如本文所定义。

术语“氨基烷基氨基羰基”是指基团-(C＝O)-NH-烷基-NH₂，其中烷基如本文所定义。

术语“氨基烷基羰基氨基”是指基团-NH-(C＝O)-烷基-NH₂，其中烷基如本文所定义。

术语“氨基羰基”或“氨基羧基”是指基团-(C＝O)-NH₂。

术语“(氨基羰基烷基)(烷基)氨基”是指基团-NR¹R²，其中R¹为烷基并且R²为-烷基-(C＝O)-NH₂基团，其中烷基如本文所定义。

术语“氨基羰基烷基氨基”是指基团-NH-烷基-(C＝O)-NH₂，其中烷基如本文所定义。

术语“氨基磺酰基”是指基团-SO₂-NH₂。

术语“芳基”是指具有单个环(即苯基)或融合在一起的多个芳族环(例如萘基)的多不饱和芳族烃基，典型地含有5至12个原子；优选5至10个；更优选地芳基为5元或6元芳基。芳基的非限制性实例包含苯基、萘基。

术语“芳基烷基”是指基团-烷基-芳基，其中烷基和芳基如本文所定义。

术语“芳基氧基烷基”是指基团-烷基-O-芳基，其中烷基和芳基如本文所定义。

术语“羰基”是指基团-(C＝O)-。

术语“羰基氨基”是指基团-NH-(C＝O)-。

术语“氰基”是指基团-CN。

术语“烷基氰基”是指基团-烷基-CN，其中烷基如本文所定义。

术语“环烷基”是指环状烷基，也就是具有1或2个环状结构的单价、饱和或不饱和烃基。环烷基包括单环或双环烃基。环烷基在环中可包含3个或更多个碳原子，并且通常，根据本公开包含3至10个，更优选3至8个碳原子；更优选环烷基为5元或6元环烷基。环烷基的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基。

术语“环烷氧基”是指基团-O-环烷基，其中环烷基如本文所定义。

术语“二烷基氨基”是指基团-NR¹R²，其中R¹与R²均独立地为如本文所定义的烷基。

术语“二烷基氨基烷基”是指基团-烷基-NR¹R²，其中R¹与R²均独立地为如本文所定义的烷基。

术语“二烷基氨基烷基氨基羰基”是指基团-(C＝O)-NH-烷基-NR¹R²，其中R¹与R²均为如本文所定义的烷基。

术语“二烷基氨基烷基羰基”是指基团-(C＝O)-烷基-NR¹R²，其中R¹与R²均为如本文所定义的烷基。

术语“二羟基烷基”是指用两个羟基(-OH)取代的如本文所定义的烷基。

术语“卤代”或“卤素”是指氟、氯、溴或碘。

术语“卤代烷基”是指其中一个或多个氢原子被卤素原子替代的烷基。

术语“卤代烷氧基”是指基团-O-卤代烷基，其中烷基如本文所定义。

术语“杂芳基”是指其中至少一个碳原子被杂原子替代的如本文所定义的芳基。换句话说，其指5至12碳原子芳族单环或含有稠合在一起的2个环的环系统，典型地含有5至6个原子；其中一个或多个碳原子用氧、氮和/或硫原子替代，其中氮和硫杂原子可任选为氧化的并且氮杂原子可任选为季铵化的。此类杂芳基的非限制性实例包括：吡咯基、呋喃基、噻吩基、吡唑基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、三唑基、噁二唑基、噻二唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基以及吡嗪基。

术语“杂芳基烷基”是指基团-烷基-杂芳基，其中烷基和杂芳基如本文所定义。

术语“杂环基”或“杂环”是指非芳族完全饱和或部分不饱和环状基团(例如3至7元单环、7至11元双环或含有总共3至10个环原子)，所述基团在含至少一个碳原子的环中具有至少一个杂原子。优选地，杂环基为5元或6元杂环基。含有杂原子的杂环基团的每个环可具有1、2、3或4个选自氮原子、氧原子和/或硫原子的杂原子，其中氮和硫杂原子可任选为氧化的并且氮杂原子可任选为季铵化的。在价数允许的情况下，杂环基团可连接在环或环系统的任何杂原子或碳原子处。多环杂环的环可通过一个或多个螺原子稠合、桥接和/或连接。非限制性示例性杂环基团包括哌啶基、哌嗪基、氮杂环丁烷基、氮杂环辛烷基、二氮杂环庚烷基、二氮杂环辛基、吗啉-4-基、氧杂氮杂环庚烷基、吡咯烷基、硫代吗啉-4-基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、吖丙啶基、环氧乙基、硫杂丙环基(thiiranyl)、2-咪唑啉基、吡唑烷基咪唑烷基、异噁唑啉基、噁唑烷基、异噁唑烷基、噻唑烷基、异噻唑烷基、琥珀酰亚胺基、3H-吲哚基、吲哚啉基、异吲哚啉基、2H-吡咯基、1-吡咯烷基、2-吡咯烷基、3-吡咯烷基、4H-喹嗪基、2-氧代哌嗪基、高哌嗪基、2-吡唑啉基、3-吡唑啉基、四氢-2H-吡喃基、2H-吡喃基、4H-吡喃基、3,4-二氢-2H-吡喃基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、3-二氧杂环戊烷基、1,4-二氧杂环己烷基、2,5-二氧杂咪唑烷基、2-氧代哌啶基、2-氧代吡咯烷基(oxopyrrolodinyl)、吲哚啉基、四氢噻吩基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基、1-氧离子基-1-硫代吗啉-4-基、1-二氧离子基-1-硫代吗啉-4-基、1,3-二氧杂环戊烷基、1,4-氧杂硫杂环己烷基、1,4-二硫杂环己烷基、1,3,5-三氧杂环己烷基(trioxanyl)、1H-吡咯嗪基、四氢-1,1-二氧杂噻吩基、N-甲酰基哌嗪基、二氢三唑并吡嗪、二氢咪唑并吡嗪、六氢吡咯并吡咯、六氢吡咯并吡嗪。

术语“杂环基烷基”是指基团-烷基-杂环基，其中烷基和杂环基如本文所定义。

术语“杂环基烷基氨基羰基”是指基团-(C＝O)-NH-烷基-杂环基，其中烷基和杂环基如本文所定义。

术语“(杂环基)(烷基)氨基烷基”是指基团-烷基-NR¹R²，其中R¹为烷基并且R²为杂环基，其中烷基和杂环基如本文所定义。

术语“杂环基烷氧基烷基”是指基团-烷基-O-烷基-杂环基，其中烷基和杂环基如本文所定义。

术语“杂环基羰基”是指基团-(C＝O)-杂环基，其中杂环基如本文所定义。

术语“杂环基氧基”指基团-O-杂环基，其中杂环基如本文所定义。

术语“杂环基磺酰基”是指基团-SO₂-杂环基，其中杂环基如本文所定义。

术语“羟基”是指基团-OH。

术语“羟基烷基”是指基团-烷基-OH，其中烷基如本文所定义。

术语“羟基烷基氨基烷基”是指基团-烷基-NH-烷基-OH，其中烷基如本文所定义。

术语“羟基羰基”是指基团-C(＝O)-OH，其中羰基如本文所定义。换句话说，“羟基羰基”对应于羧酸基团。

术语“氧代”是指＝O取代基。

术语“磺酰基氨基”是指基团-NH-SO₂。

术语“中间体”或“中间化合物”是指在化学合成过程中产生的化合物，所述化合物本身不为最终产物，但在产生最终产物的其他反应中使用。在复杂合成的过程中，在起始物质与终产物之间可能有许多不同的中间化合物。

置于数字前的术语“约”涵盖所述数字的值加上或减去10％或更少。应了解，还特定地并且优选地公开术语“约”所涉及的值本身。

术语“施用(administration)”或其变化型式(例如“施用(administering)”)意味着单独或作为药学上可接受的组合物的一部分为要治疗或预防病症、症状或疾病的患者提供活性剂或活性成分。

术语“拮抗剂”是指结合至蛋白质并且阻断蛋白质的生物活化并且从而阻断所述蛋白质的作用的天然或合成化合物。蛋白质可为受体，即接受来自细胞外部的化学信号的蛋白质分子。因此，“腺苷受体拮抗剂”包括在向患者施用后，导致患者中与腺苷受体的活化相关的生物活性(包括以其他方式由天然配体结合至腺苷受体产生的任何下游生物效应)抑制或下调的任何化学实体。此类腺苷受体拮抗剂包括可阻断腺苷受体活化或腺苷受体活化的任何下游生物效应的任何试剂。

术语“抑制剂”是指具有抑制或显著降低或下调基因和/或蛋白质的表达的生物效应或具有抑制或显著降低蛋白质的生物活性的生物效应的天然或合成化合物。

如本文所用，术语“组合”优选意指两种或更多种治疗剂的组合出现。在一些实施方案中，本公开的组合可以作为一种组合物出现，所述组合物在一个相同的混合物中包含所有组分(例如药物组合物)，或者可以作为部件套件出现，其中不同的组分形成这样的部件套件的不同部件。本公开的组合的每种化合物的施用可以同时或时间交错进行，具有相似或不同的施用时间(即每种组分的施用次数相似或不同)，在相同的施用位点或在不同的施用位点，或在相似或不同剂型下。

术语“化学疗法”是指使用一种或多种抗癌药(化学治疗剂)作为标准化化学治疗方案的一部分的癌症治疗。可以治愈为目的给予化学疗法或者其目标可以是延长寿命或减轻症状。化学治疗剂为例如选自抗癌烷基化剂、抗癌抗代谢物、抗癌抗生素、植物源性抗癌剂、抗癌铂配位化合物以及它们的任何组合。

术语“激素疗法”是指在医学治疗中使用激素。在一个实施方案中，激素疗法为肿瘤学激素疗法。

术语“人”是指两种性别并且处于任何发育阶段(即新生儿、婴儿、幼年、青年、成年)的受试者。

术语“受试者”和“患者”可互换使用，指正在等待接受治疗或正在接受医疗护理或正在/将要成为医疗程序对象的哺乳动物，更优选人。在某些实施方案中，受试者以前接受过A_2AR拮抗剂的治疗。术语“受试者”是指哺乳动物，优选为人。在一个实施方案中，受试者被诊断为患有癌症。在一个实施方案中，受试者为正在等待接受或正在接受医疗护理或过去为/现在为/将为医学程序的对象或被监测疾病(诸如癌症)的发展或进展的患者，优选为人患者。在一个实施方案中，受试者为治疗癌症和/或监测其发展或进展的人患者。在一个实施方案中，受试者为男性。在另一个实施方案中，受试者为女性。在一个实施方案中，受试者为成人。在另一个实施方案中，受试者为儿童。

术语“免疫疗法”是指以诱导和/或增强针对特定靶标(例如针对癌细胞)的免疫反应为目标的疗法。免疫疗法可涉及使用检查点抑制剂、检查点激动剂(也称为T细胞激动剂)、IDO抑制剂、PI3K抑制剂、腺苷受体抑制剂、产腺苷酶抑制剂、过继转移、治疗性疫苗以及它们的组合。

表述“药学上可接受”是指药物组合物的成分彼此相容并且不对施用它的受试者有害。

表述“药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂和/或佐剂”是指当向动物，优选向人施用时不产生有害、过敏性或其他不良反应的物质。它包括任何和所有非活性物质，诸如溶剂、共溶剂、抗氧化剂、表面活性剂、稳定剂、乳化剂、缓冲剂、pH调节剂、防腐剂(或保鲜剂)、抗细菌和抗真菌剂、等渗剂、成粒剂或结合剂、润滑剂、崩解剂、助流剂、稀释剂或填料、吸附剂、分散剂、悬浮剂、包衣剂、增容剂、释放剂、吸收延迟剂、甜味剂、调味剂等。在人类施用中，制剂应满足如监管机构(诸如FDA办公室(FDA Office)或EMA)所要求的无菌性、产热原性、一般安全性以及纯度标准。

如本文所用，术语“预防”是指延迟或阻碍病症或疾病和/或其附带症状发作、防止患者患病症或疾病或降低患者患病症或疾病的风险的方法。

如本文所用的术语“前药”意指式(I)化合物的药理学上可接受的衍生物，诸如酯或酰胺，其体内生物转化产物产生生物活性药物。前药通常以增加生物利用度为特征并且在体内容易代谢成生物活性化合物。

术语“放射疗法”是指采用各种辐射(诸如X射线、γ-射线、中子射线、电子束、质子束以及辐射源)治疗癌症的方法。将其用作癌症治疗的一部分以控制或杀伤恶性细胞。如果放射疗法局部化至身体的一个区域，那么在许多类型的癌症中它可为治愈性的。它还可用作辅助疗法的一部分，以在手术移除原发性恶性肿瘤之后防止肿瘤复发。放射疗法的三个主要分类为：外射束放射疗法(EBRT或XRT)；近程放射疗法或密封源放射疗法；以及全身性放射性同位素疗法(RIT)或非密封源放射疗法。

术语“治疗有效量”或“有效量”或“治疗有效剂量”是指在不对受试者引起显著消极或有害副作用的情况下，以以下为目标的活性成分的量或剂量：(1)延迟或预防受试者的癌症发作；(2)降低癌症的严重程度或发生率；(3)减慢或阻止影响受试者的癌症的一种或多种症状的进展、加重或恶化；(4)引起影响受试者的癌症的症状的改善；或(5)治愈影响受试者的癌症。可在癌症发作之前施用治疗有效量，用于预防性或防止性作用。或者或另外，可在癌症开始之后施用治疗有效量，用于治疗作用。

术语“治疗”是指治疗性治疗；其中目标为阻止或减慢所靶向的病理性病症或疾病。如果在接受根据本公开的治疗之后，受试者或哺乳动物显示可观测的和/或可测量的以下中的一者或多者的降低或以下中的一者或多者不存在，那么受试者或哺乳动物的疾病或影响或病症被成功“治疗”：癌细胞数目降低；和/或与特定疾病或病症相关的症状中的一者或多者在某种程度上缓解；发病率和死亡率降低，以及生活质量问题改善。以上用于评估疾病的成功治疗和改善的参数可通过医师熟悉的常规程序容易地测量。

术语“干细胞移植”是指患者接受健康血液形成细胞(干细胞)来替换他们自己的已被疾病或被作为程序的一部分所给予的辐射或高剂量的抗癌药破坏的细胞的程序。健康干细胞可来自患者的血液或骨髓、来自供给者或来自新生婴儿的脐带血。干细胞移植可为自体的(使用治疗前收集和保存的患者自己的干细胞)、同种异体的(使用由不为同卵双胞胎的某人贡献的干细胞)或同源的(使用由同卵双胞胎贡献的干细胞)。

发明详述

我们已经证明，在如肿瘤微环境中发现的高浓度腺苷存在的情况下，T细胞增殖和细胞因子产生受到抑制。我们还证明A_2A受体拮抗剂可以恢复具有高腺苷浓度的肿瘤中的T细胞活性(参见，例如，PCT公开WO2018/178338“2-Oxo-Thiazole Derivatives as A_2AInhibitors and Compounds for Use in the Treatment of Cancers,”，美国公开2020/0102319“Non Brain Penetrant A2A Inhibitors and Methods for Use in theTreatment of Cancers,”和PCT公开WO2020/065036“Thiocarbamate Derivatives as A_2AInhibitors,Pharmaceutical Composition Thereof and Combinations withAnticancer Agents”，每一篇均通过引用整体并入)。特别地，本公开尤其显示使用A_2A受体作为生物标志物与临床益处相关。

A_2A的检测

在一些实施方案中，本公开提供了确定受试者是否具有升高的A_2A受体表达水平的方法，包括：(a)使用体外测定法检测来自受试者的样品中的A_2A受体表达水平，以及(b)将A_2A受体表达水平与A_2A受体表达的合适参考水平进行比较。在一些实施方案中，向具有升高的A_2A受体表达的受试者施用有效治疗具有升高的A_2A受体表达水平的患者的化合物或化合物的组合。在一些实施方案中，选择具有升高的A_2AR表达水平的受试者用对于治疗具有升高的A_2AR表达水平的患者有效的化合物的组合进行治疗。在一些实施方案中，化合物或化合物的组合包含腺苷受体拮抗剂，如下文进一步定义。在一些实施方案中，腺苷受体拮抗剂是A₁受体、A_2A受体、A_2B受体、A₃受体或其组合的拮抗剂；优选地，腺苷受体拮抗剂是A_2A受体、A_2B受体或其组合的拮抗剂；更优选地，腺苷受体拮抗剂是A_2A受体拮抗剂。

在一些实施方案中，本公开提供了确定受试者是否具有升高的A_2AR⁺细胞密度的方法，包括：(a)使用体外测定法检测来自受试者的样品中的A_2AR⁺细胞密度，以及(b)将A_2AR⁺细胞的密度与A_2AR⁺细胞密度的合适参考水平进行比较。在一些实施方案中，向患有具有升高的A_2AR⁺细胞密度的肿瘤的受试者施用有效治疗患有具有升高的A_2AR⁺细胞密度的肿瘤的患者的化合物或化合物的组合。在一些实施方案中，选择患有具有A_2AR⁺细胞密度升高的肿瘤的受试者，用对于治疗患有具有A_2AR⁺细胞密度升高的肿瘤的患者有效的化合物或化合物组合进行治疗。在一些实施方案中，化合物或化合物的组合包含腺苷受体拮抗剂，如下文进一步定义。在一些实施方案中，腺苷受体拮抗剂是A₁受体、A_2A受体、A_2B受体、A₃受体或其组合的拮抗剂；优选地，腺苷受体拮抗剂是A_2A受体、A_2B受体或其组合的拮抗剂；更优选地，腺苷受体拮抗剂是A_2A受体拮抗剂。

在一些实施方案中，A_2AR⁺细胞是淋巴细胞。在一些实施方案中，A_2AR⁺细胞是肿瘤浸润淋巴细胞。

在一些实施方案中，A_2A受体表达或A_2AR⁺细胞的密度可以使用合适的体外测定确定。在一些实施方案中，A_2A受体表达或A_2AR⁺细胞的密度可以通过在RNA或蛋白质水平测量A_2AR的水平、量或浓度来确定。在一些实施方案中，A_2A表达或A_2AR⁺细胞的密度可以通过测量样品中的RNA或蛋白质水平来确定。用于在RNA水平测量A_2AR的水平、量或浓度的体外测定法包括但不限于逆转录酶定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)、原位杂交(ISH)、DNA微阵列、纳米串(Nanostring)技术等。用于在蛋白质水平测量A_2AR的水平、量或浓度的体外测定法包括但不限于免疫组织化学(IHC)、荧光IHC、流式细胞术、免疫印迹、酶联免疫吸附测定法(ELISA)等。

在一些实施方案中，将肿瘤中的A_2A受体表达或A_2AR⁺细胞的密度与对照，即合适的参考标准进行比较。

术语“对照”指适合提供与测试样品中的表达产物的比较的任何参考标准。在一个实施方案中，对照包括获得“对照样品”，从中检测表达产物水平并与来自测试样品的表达产物水平进行比较。这样的对照样品可以包括任何合适的样品，包括但不限于来自具有已知结果的对照癌症患者的样品(可以是存储的样品或先前的样品测量)；从受试者例如正常患者或癌症患者分离的正常组织或细胞，从受试者例如正常受试者或癌症患者分离的培养的原代细胞/组织，从癌症患者的相同器官或身体位置获得的邻近正常细胞/组织，从正常受试者分离的组织或细胞样品，或从保藏处获得的原代细胞/组织。在另一个优选的实施方案中，对照可以包含来自任何合适来源(包括但不限于管家基因)的参考标准表达产物水平，来自正常组织(或其他先前分析的对照样品)的表达产物水平范围，先前测定的来自一组患者或一组具有特定结果(例如，生存一年、两年、三年、四年等)或接受特定治疗(例如，标准护理癌症治疗)的患者的测试样品中的表达产物水平范围。本领域技术人员应当理解，此类对照样品和参考标准表达产物水平可以组合使用作为本公开的方法中的对照。在一个实施方案中，对照可包含正常或非癌性细胞/组织样品。在另一个优选的实施方案中，对照可以包括一组患者的表达水平，例如一组癌症患者，或一组接受特定治疗的癌症患者，或一组具有一种结果与另一种结果对比的患者的表达水平。在前一种情况下，每个患者的特异性表达产物水平可以指定为表达的百分位水平，或者表示为高于或低于参考标准表达水平的均值或平均值。在另一个优选的实施方案中，对照可以包含正常细胞、来自用联合化学疗法治疗的患者的细胞和来自患有良性癌症的患者的细胞。在另一个实施方案中，对照还可以包含测量值，例如与相同群体中管家基因的表达水平相比的群体中特定基因的平均表达水平。这样的群体可以包括正常受试者、未接受任何治疗(即，未接受过治疗)的癌症患者、接受标准护理治疗的癌症患者或患有良性癌症的患者。在另一个优选的实施方案中，对照包括表达产物水平的比率变换，包括但不限于确定测试样品中两个基因的表达产物水平的比率并将其与参考标准中相同的两个基因的任何合适的比率进行比较；确定测试样品中两个或更多个基因的表达产物水平并确定任何合适对照中表达产物水平的差异；确定测试样品中两个或更多个基因的表达产物水平，将它们的表达标准化为测试样品中管家基因的表达，并与任何合适的对照进行比较。在特别优选的实施方案中，对照包括与测试样品具有相同谱系和/或类型的对照样品。在另一个实施方案中，对照可以包含在一组患者样品内或基于一组患者样品(例如所有患有癌症的患者)分组为百分位数的表达产物水平。在一个实施方案中，建立了对照表达产物水平，其中相对于例如特定百分位的较高或较低水平的表达产物被用作预测结果的基础。在另一个优选的实施方案中，使用来自具有已知结果的癌症对照患者的表达产物水平建立对照表达产物水平，并且将来自测试样品的表达产物水平与对照表达产物水平进行比较作为预测结果的基础。如下面的数据所证明的，本公开的方法不限于在比较测试样品与对照中的表达产物的水平中使用特定的分界点。

在一些实施方案中，合适的对照或参考标准是未受癌症影响和/或未诊断患有癌症的受试者中的A_2A受体表达水平或A_2AR⁺细胞的密度。在一些实施方案中，合适的参考标准是未受癌症影响和/或未诊断患有癌症的受试者群体中的平均A_2AR表达水平或A_2AR⁺细胞的平均密度。在一些实施方案中，合适的参考标准是来自受试者本身的样品的A_2A受体表达水平或A_2AR⁺细胞的密度。在一些实施方案中，合适的参考标准是与来自受试者本身的肿瘤相邻的非癌性细胞样品中的A_2A受体表达水平或A_2AR⁺细胞的密度。

在一些实施方案中，本公开包括测定受试者肿瘤中A_2A受体表达水平或A_2AR⁺细胞的密度，包括从受试者获得或已经获得生物样品；对生物样品进行测定以确定肿瘤是否具有升高的A_2A受体表达水平或A_2AR⁺细胞密度。

在一些实施方案中，本文公开的测定A_2AR表达水平或A_2AR⁺细胞的密度的方法是体外方法。换句话说，该方法是非侵入性的并且不包括从受试者采集样品的步骤。在一些实施方案中，对先前从受试者获得的样品进行该方法。

在一些实施方案中，样品是体液。在一些实施方案中，样品是身体组织。在一些实施方案中，样品是肿瘤组织样品。在一些实施方案中，肿瘤组织样品包含肿瘤细胞。在一些实施方案中，肿瘤组织样品还包含肿瘤浸润免疫细胞。在一些实施方案中，肿瘤组织样品不包含肿瘤浸润免疫细胞。

在一些实施方案中，当A_2AR表达水平比对照受试者或群体(例如，在未受癌症影响和/或未诊断患有癌症的受试者或受试者群体中，或在样品，例如来自受试者本身的非癌性样品中)的A_2AR表达水平高至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％或更多时，所述水平被认为是“升高的”或“增加的”或“更高的”。

在一些实施方案中，当A_2AR表达水平高于约3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3或4.4，所述水平被认为是“升高的”或“增加的”或“更高的”。在一些实施方案中，当A_2AR表达水平高于约3.95时，所述水平被认为是“升高的”或“增加的”或“更高的”。在一些实施方案中，当A_2AR log2表达值相对于参考值大于约3.5-4.5时，A_2AR表达水平被认为是“升高的”或“增加的”或“更高的”。在一些实施方案中，当A_2AR log2表达值相对于参考值大于约3.7-4.3时，A_2AR表达水平被认为是“升高的”或“增加的”或“更高的”。在一些实施方案中，当A_2AR log2表达值相对于参考值大于约3.9-4.0时，A_2AR表达水平被认为是“升高的”或“增加的”或“更高的”。在一些实施方案中，当A_2AR log2表达值相对于参考值大于约3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3或4.4时，A_2AR表达水平被认为是“升高的”或“增加的”或“更高的”。在一些实施方案中，当A_2AR log2表达值相对于参考值大于约3.95时，A_2AR表达水平被认为是“升高的”或“增加的”或“更高的”。

在一些实施方案中，当A_2AR⁺细胞的密度比对照受试者或群体(例如，在未受癌症影响和/或未诊断患有癌症的受试者或受试者群体中，或在样品，例如来自受试者本身的非癌性样品中)A_2AR⁺细胞的密度高至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％或更多时，所述密度被认为是“升高的”或“增加的”或“更高的”。

在一些实施方案中，当A_2AR⁺细胞的密度等于或高于约13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或更高A_2AR⁺细胞/mm²，优选等于或高于约18A_2AR⁺细胞/mm²时，所述密度被认为是“升高的”或“增加的”或“更高的”。在一些实施方案中，当A_2AR⁺细胞的密度等于或高于约13-23细胞/mm²时，所述密度被认为是“升高的”或“增加的”或“更高的”。在一些实施方案中，当A_2AR⁺细胞的密度等于或高于约15-21细胞/mm²时，所述密度被认为是“升高的”或“增加的”或“更高的”。在一些实施方案中，当A_2AR⁺细胞的密度等于或高于约17-19细胞/mm²时，所述密度被认为是“升高的”或“增加的”或“更高的”。在一些实施方案中，可以在身体组织、特别是肿瘤组织的4至5μm厚切片中测定A_2AR⁺细胞的密度。

腺苷受体拮抗剂及其使用方法

如上文所定义，“腺苷受体拮抗剂”是指在向患者施用后，导致患者中与腺苷受体的活化相关的生物活性(包括以其他方式由天然配体结合至腺苷受体产生的任何下游生物效应)抑制或下调的化合物。此类腺苷受体拮抗剂包括可阻断腺苷受体活化或腺苷受体活化的任何下游生物效应的任何试剂。

腺苷受体(或P1受体)为一类以腺苷作为内源性配体的嘌呤能G蛋白偶联受体。在人中存在四种已知类型的腺苷受体：A₁、A_2A、A_2B以及A₃；每一种由不同基因编码(分别为ADOARA1、ADORA2A、ADORA2B以及ADORA3)。

在一个实施方案中，腺苷受体拮抗剂为A₁受体、A_2A受体、A_2B受体、A₃受体或它们的组合的拮抗剂。

在一个实施方案中，腺苷受体拮抗剂为A_2A受体、A_2B受体或它们的组合的拮抗剂。在一个实施方案中，腺苷受体拮抗剂为A_2A或A_2B受体拮抗剂。

在一个实施方案中，腺苷受体拮抗剂为A_2A受体的拮抗剂(A_2AR拮抗剂)。在一个实施方案中，腺苷受体拮抗剂为A_2B受体的拮抗剂(A_2BR拮抗剂)。

在一个实施方案中，腺苷受体拮抗剂为相对于其他腺苷受体对A_2A受体具选择性的拮抗剂。在一个实施方案中，腺苷受体拮抗剂为相对于A_2B受体对A_2A受体具选择性的拮抗剂。

在一个实施方案中，腺苷受体拮抗剂为相对于其他腺苷受体对A_2B受体具选择性的拮抗剂。在一个实施方案中，腺苷受体拮抗剂为相对于A_2A受体对A_2B受体具选择性的拮抗剂。

A_2A受体拮抗剂

“A_2AR拮抗剂”是指在向患者施用后，导致患者中与A_2A受体的活化相关的生物活性(包括以其他方式由天然配体结合至A_2A受体产生的任何下游生物效应)抑制或下调的化合物。此类A_2AR拮抗剂包括可阻断A_2A受体的活化或A_2A受体活化的任何下游生物效应的任何试剂。

在一些实施方案中，A_2AR拮抗剂包括但不限于普瑞丁奈(Preladenant)(SCH-420,814)、维帕丁奈(Vipadenant)(BIIB-014)、托扎纳丁(Tozadenant)(SYK-115)、ATL-444、伊曲茶碱(Istradefylline)(KW-6002)、MSX-3、SCH-58261、SCH-412,348、SCH-442,416、ST-1535、咖啡因、VER-6623、VER-6947、VER-7835、ZM-241,385、茶碱。在一些实施方案中，A_2AR拮抗剂包括但不限于WO2018/178338、WO2011/121418、WO2009/156737、WO2011/095626或WO2018/136700中公开的化合物，其内容通过引用并入本文。

在一个实施方案中，A_2AR拮抗剂是WO2018/178338中公开的硫代氨基甲酸酯。更优选地，A_2AR拮抗剂是式(II)的化合物：

或其药学上可接受的盐或溶剂合物，

其中

R¹表示5元或6元杂芳基或5元或6元芳基，其中杂芳基或芳基任选地被一个或多个选自C1-C6烷基(优选甲基)和卤代(优选氟代或氯代)的取代基取代；优选地，R¹表示5元杂芳基；更优选地，R¹表示呋喃基；

R²表示6元芳基或6元杂芳基，

其中杂芳基或芳基任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：卤代、烷基、杂环基、烷氧基、环烷氧基、杂环基氧基、羰基、烷基羰基、氨基羰基、羟基羰基、杂环基羰基、烷基亚砜、烷基磺酰基、氨基磺酰基、杂环基磺酰基、烷基磺亚胺酰基、羰基氨基、磺酰基氨基以及烷基砜烷基；

所述取代基任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：氧代、卤代、羟基、氰基、烷基、烯基、醛、杂环基烷基、羟基烷基、二羟基烷基、羟基烷基氨基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、(杂环基)(烷基)氨基烷基、杂环基、杂芳基、烷基杂芳基、炔、烷氧基、氨基、二烷基氨基、氨基烷基羰基氨基、氨基羰基烷基氨基、(氨基羰基烷基)(烷基)氨基、烯基羰基氨基、羟基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、氨基烷基氨基羰基、烷基氨基烷基氨基羰基、二烷基氨基烷基氨基羰基、杂环基烷基氨基羰基、(烷基氨基烷基)(烷基)氨基羰基、烷基氨基烷基羰基、二烷基氨基烷基羰基、杂环基羰基、烯基羰基、炔基羰基、烷基亚砜、烷基亚砜烷基烷基磺酰基以及烷基砜烷基；

或杂芳基或芳基任选地被两个取代基取代，所述两个取代基与它们所连接的原子一起形成5元或6元芳环、5元或6元杂芳基环、5元或6元环烷基环或5元或6元杂环基环；任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：氧代、卤代、羟基、氰基、烷基、烯基、醛、杂环基烷基、羟基烷基、二羟基烷基、羟基烷基氨基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、(杂环基)(烷基)氨基烷基、杂环基、杂芳基、烷基杂芳基、炔、烷氧基、氨基、二烷基氨基、氨基烷基羰基氨基、氨基羰基烷基氨基、(氨基羰基烷基)(烷基)氨基、烯基羰基氨基、羟基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、氨基烷基氨基羰基、烷基氨基烷基氨基羰基、二烷基氨基烷基氨基羰基、杂环基烷基氨基羰基、(烷基氨基烷基)(烷基)氨基羰基、烷基氨基烷基羰基、二烷基氨基烷基羰基、杂环基羰基、烯基羰基、炔基羰基、烷基亚砜、烷基亚砜烷基、烷基磺酰基以及烷基砜烷基。

在一个实施方案中，A_2AR拮抗剂是式(IIa)的化合物：

或其药学上可接受的盐或溶剂合物，

其中：

R¹表示5元或6元杂芳基或5元或6元芳基，其中杂芳基或芳基任选地被一个或多个选自C1-C6烷基(优选甲基)和卤代(优选氟代或氯代)的取代基取代；优选地，R¹表示5元杂芳基；更优选地，R¹表示呋喃基；

X¹和X²各自独立地表示C或N；

当X¹为N时，R^1’不存在；或当X¹为C时，R^1’表示H、卤代、烷基、杂环基、烷氧基、环烷氧基、杂环基氧基、羰基、烷基羰基、氨基羰基、羟基羰基、杂环基羰基、烷基亚砜、烷基磺酰基、氨基磺酰基、杂环基磺酰基、烷基磺亚胺酰基、羰基氨基、磺酰基氨基或烷基砜烷基；

所述取代基任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：氧代、卤代、羟基、氰基、烷基、烯基、醛、杂环基烷基、羟基烷基、二羟基烷基、羟基烷基氨基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、(杂环基)(烷基)氨基烷基、杂环基、杂芳基、烷基杂芳基、炔、烷氧基、氨基、二烷基氨基、氨基烷基羰基氨基、氨基羰基烷基氨基、(氨基羰基烷基)(烷基)氨基、烯基羰基氨基、羟基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、氨基烷基氨基羰基、烷基氨基烷基氨基羰基、二烷基氨基烷基氨基羰基、杂环基烷基氨基羰基、(烷基氨基烷基)(烷基)氨基羰基、烷基氨基烷基羰基、二烷基氨基烷基羰基、杂环基羰基、烯基羰基、炔基羰基、烷基亚砜、烷基亚砜烷基、烷基磺酰基以及烷基砜烷基；

R^2’表示H、卤代、烷基、杂环基、烷氧基、环烷氧基、杂环基氧基、羰基、烷基羰基、氨基羰基、羟基羰基、杂环基羰基、烷基亚砜、烷基磺酰基、氨基磺酰基、杂环基磺酰基、烷基磺亚胺酰基、羰基氨基、磺酰基氨基或烷基砜烷基；

所述取代基任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：氧代、卤代、羟基、氰基、烷基、烯基、醛、杂环基烷基、羟基烷基、二羟基烷基、羟基烷基氨基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、(杂环基)(烷基)氨基烷基、杂环基、杂芳基、烷基杂芳基、炔、烷氧基、氨基、二烷基氨基、氨基烷基羰基氨基、氨基羰基烷基氨基、(氨基羰基烷基)(烷基)氨基、烯基羰基氨基、羟基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、氨基烷基氨基羰基、烷基氨基烷基氨基羰基、二烷基氨基烷基氨基羰基、杂环基烷基氨基羰基、(烷基氨基烷基)(烷基)氨基羰基、烷基氨基烷基羰基、二烷基氨基烷基羰基、杂环基羰基、烯基羰基、炔基羰基、烷基亚砜、烷基亚砜烷基、烷基磺酰基以及烷基砜烷基；

或R^1’和R^2’与它们所连接的原子一起形成5元或6元芳环、5元或6元杂芳基环、5元或6元环烷基环或5元或6元杂环基环；任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：氧代、卤代、羟基、氰基、烷基、烯基、醛、杂环基烷基、羟基烷基、二羟基烷基、羟基烷基氨基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、(杂环基)(烷基)氨基烷基、杂环基、杂芳基、烷基杂芳基、炔、烷氧基、氨基、二烷基氨基、氨基烷基羰基氨基、氨基羰基烷基氨基、(氨基羰基烷基)(烷基)氨基、烯基羰基氨基、羟基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、氨基烷基氨基羰基、烷基氨基烷基氨基羰基、二烷基氨基烷基氨基羰基、杂环基烷基氨基羰基、(烷基氨基烷基)(烷基)氨基羰基、烷基氨基烷基羰基、二烷基氨基烷基羰基、杂环基羰基、烯基羰基、炔基羰基、烷基亚砜、烷基亚砜烷基、烷基磺酰基以及烷基砜烷基；

当X²为N时，R^3’不存在；或当X²为C时，R^3’表示H或卤代，优选H或F；

R^4'表示H或卤代，优选H或F；并且

R^5'表示H或卤代，优选H或F。

在一些实施方案中，A_2AR拮抗剂是式(IIa-1)的化合物：

或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中R¹、R^1’、R^2’、R^3’、R^4’以及R^5’如式(IIa)中所定义。

在一些实施方案中，A_2AR拮抗剂是式(IIa-1a)的化合物：

或其药学上可接受的盐或溶剂合物，

其中：

R¹和R^3’如式(Ia)中所定义；并且

R^1”表示被一个或多个选自以下的基团取代的烷基或杂环基：氧代、卤代、羟基、氰基、烷基、烯基、醛、杂环基烷基、羟基烷基、二羟基烷基、羟基烷基氨基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、(杂环基)(烷基)氨基烷基、杂环基、杂芳基、烷基杂芳基、炔、烷氧基、氨基、二烷基氨基、氨基烷基羰基氨基、氨基羰基烷基氨基、(氨基羰基烷基)(烷基)氨基、烯基羰基氨基、羟基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、氨基烷基氨基羰基、烷基氨基烷基氨基羰基、二烷基氨基烷基氨基羰基、杂环基烷基氨基羰基、(烷基氨基烷基)(烷基)氨基羰基、烷基氨基烷基羰基、二烷基氨基烷基羰基、杂环基羰基、烯基羰基、炔基羰基、烷基亚砜、烷基亚砜烷基、烷基磺酰基以及烷基砜烷基。

在一个实施方案中，A_2AR拮抗剂是式(IIa-1b)的化合物：

或其药学上可接受的盐或溶剂合物，

其中：

R¹和R^3’如式(IIa)中所定义；

R¹'表示H或卤代，优选H或F；并且

R^2”表示被一个或多个选自以下的基团取代的烷基或杂环基：氧代、卤代、羟基、氰基、烷基、烯基、醛、杂环基烷基、羟基烷基、二羟基烷基、羟基烷基氨基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、(杂环基)(烷基)氨基烷基、杂环基、杂芳基、烷基杂芳基、炔、烷氧基、氨基、二烷基氨基、氨基烷基羰基氨基、氨基羰基烷基氨基、(氨基羰基烷基)(烷基)氨基、烯基羰基氨基、羟基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、氨基烷基氨基羰基、烷基氨基烷基氨基羰基、二烷基氨基烷基氨基羰基、杂环基烷基氨基羰基、(烷基氨基烷基)(烷基)氨基羰基、烷基氨基烷基羰基、二烷基氨基烷基羰基、杂环基羰基、烯基羰基、炔基羰基、烷基亚砜、烷基亚砜烷基、烷基磺酰基以及烷基砜烷基。

在一个实施方案中，A_2AR拮抗剂是式(IIa-1c)或(IIa-1d)的化合物：

或其药学上可接受的盐或溶剂合物，

其中：

R¹和R^3’如式(Ia)中所定义；

R¹'表示H或卤代，优选H或F；

R²'表示H或卤代，优选H或F；

R¹ⁱ和R¹ⁱⁱ各自独立地表示氢、羟基、烷基、烯基、杂环基烷基、羟基烷基、二羟基烷基、羟基烷基氨基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、(杂环基)(烷基)氨基烷基、杂环基、杂芳基、烷基杂芳基、炔烷基、烷氧基、氨基、二烷基氨基、氨基烷基羰基氨基、氨基羰基烷基氨基、(氨基羰基烷基)(烷基)氨基、烯基羰基氨基、羟基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、氨基烷基氨基羰基、烷基氨基烷基氨基羰基、二烷基氨基烷基氨基羰基、杂环基烷基氨基羰基、(烷基氨基烷基)(烷基)氨基羰基、烷基氨基烷基羰基、二烷基氨基烷基羰基、杂环基羰基、烯基羰基、炔基羰基、烷基亚砜烷基或烷基砜烷基；并且

R²ⁱ和R²ⁱⁱ各自独立地表示氢、羟基、烷基、烯基、杂环基烷基、羟基烷基、二羟基烷基、羟基烷基氨基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、(杂环基)(烷基)氨基烷基、杂环基、杂芳基、烷基杂芳基、炔烷基、烷氧基、氨基、二烷基氨基、氨基烷基羰基氨基、氨基羰基烷基氨基、(氨基羰基烷基)(烷基)氨基、烯基羰基氨基、羟基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、氨基烷基氨基羰基、烷基氨基烷基氨基羰基、二烷基氨基烷基氨基羰基、杂环基烷基氨基羰基、(烷基氨基烷基)(烷基)氨基羰基、烷基氨基烷基羰基、二烷基氨基烷基羰基、杂环基羰基、烯基羰基、炔基羰基、烷基亚砜烷基或烷基砜烷基。

在一些实施方案中，A_2AR拮抗剂是式(IIa-2)或(IIa-3)的化合物：

或其药学上可接受的盐或溶剂合物，

其中R¹、R^2’、R^3’、R^4’以及R^5’如式(IIa)中所定义。

在一些实施方案中，A_2AR拮抗剂是选自以下的化合物：

3-(2-(4-(4-((1H-1,2,3-三唑-4基)甲氧基-2氟苯基)哌嗪-1-基)乙基)-5-氨基-(8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

5-((4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟苯氧基)甲基)-1,3,4-噁二唑-2(3H)-酮；

5-氨基-3-(2-(4-(3-氟吡啶-4-基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

2-(5-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-2,4-二氟苯氧基)乙酰胺；

(S)-5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(2-(甲基亚磺酰基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

(R)-5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(2-(甲基亚磺酰基)乙氧基)苯基)-哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

(R,S)-5-氨基-3-(2-(4-(2,4-二氟-5-(2-(甲基亚磺酰基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

(+)-5-氨基-3-(2-(4-(2,4-二氟-5-(2-(甲基亚磺酰基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

(-)-5-氨基-3-(2-(4-(2,4-二氟-5-(2-(甲基亚磺酰基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

5-氨基-8-(呋喃-2-基)-3-(2-(4-(4-(2-羟基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

2-(4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)苯氧基)乙酸；

2-(4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)苯氧基)乙酰胺；

5-氨基-3-(2-(4-(4-(2,3-二羟基丙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

5-氨基-3-(2-(4-(4-(2-氨基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)苯甲酰胺；

4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-N-甲基苯甲酰胺；

5-氨基-8-(呋喃-2-基)-3-(2-(4-(4-(2-吗啉基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

5-氨基-3-(2-(4-(4-(2-(二甲基氨基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)苯磺酰胺；

4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-N-甲基苯磺酰胺；

5-氨基-8-(呋喃-2-基)-3-(2-(4-(4-(甲基磺酰基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

5-氨基-8-(呋喃-2-基)-3-(2-(4-(4-(甲基亚磺酰基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

3-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)苯甲酰胺；

5-氨基-8-(呋喃-2-基)-3-(2-(4-(3-(2-羟基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(2-氧代-2-(哌嗪-1-基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(哌啶-4-基甲氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(哌嗪-1-羰基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(2-(哌嗪-1-基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(哌嗪-1-基磺酰基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(甲基磺酰基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-N-(2-氨基乙基)-3-氟苯甲酰胺；

4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟-N-(2-(甲基氨基)乙基)苯甲酰胺；

4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-N-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-氟苯甲酰胺；

4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟-N-(2-羟基乙基)苯甲酰胺；

4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-N-(2,3-二羟基丙基)-3-氟苯甲酰胺；

2-(4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟苯氧基)乙酸；

2-(4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3,5-二氟苯氧基)乙酸；

2-(4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟苯氧基)丙酸；

(S)-2-(4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟苯氧基)丙酸；

2-(4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟苯氧基)-2-甲基丙酸；

3-(4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟苯基)丙酸；

4-(4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟苯氧基)丁酸；

2-(3-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-2,6-二氟苯氧基)乙酸；

2-(5-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-2,4-二氟苯氧基)乙酸；

4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟苯甲酸；

2-((2-(4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟苯氧基)乙基)氨基)乙酰胺；

2-((2-(4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟苯氧基)乙基)(甲基)氨基)乙酰胺；

5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(哌啶-4-基氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(吡咯烷-3-基氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

3-(2-(4-(4-((1H-1,2,4-三唑-3-基)甲氧基)-2-氟苯基)哌嗪-1-基)乙基)-5-氨基-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

2-(4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟苯氧基)-N-(2-(甲基氨基)乙基)乙酰胺；

2-(4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟苯氧基)-N-(2-(二甲基氨基)乙基)乙酰胺；

2-(4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟苯氧基)-N-(2-氨基乙基)乙酰胺；

(R)-2-(4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟苯氧基)丙酸；

2-(4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟苯氧基)乙酰胺；

4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟-N-甲基-N-(2-(甲基氨基)乙基)苯甲酰胺；

4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-N-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-氟-N-甲基苯甲酰胺；

(R)-4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-N-(1-(二甲基氨基)丙-2-基)-3-氟苯甲酰胺；

2-(4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟苯氧基)-N-甲基-N-(2-(甲基氨基)乙基)乙酰胺；

2-(5-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-2,4-二氟苯氧基)-2-甲基丙酸；

(S)-2-(5-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-2,4-二氟苯氧基)丙酸；

(R)-2-(5-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-2,4-二氟苯氧基)丙酸；

2-(5-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-2,4-二氟苯氧基)-N-(2-(甲基氨基)乙基)乙酰胺；

2-(5-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-2,4-二氟苯氧基)-N-(2-(二甲基氨基)乙基)乙酰胺；

5-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-N-(2-(二甲基氨基)乙基)-2,4-二氟-N-甲基苯甲酰胺；

4-(5-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-2,4-二氟苯氧基)丁酸；

3-(2-(4-(5-((1H-四唑-5-基)甲氧基)-2,4-二氟苯基)哌嗪-1-基)乙基)-5-氨基-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-((1-甲基-1H-1,2,4-三唑-3-基)甲氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

5-氨基-3-(2-(4-(2,4-二氟-5-((1-甲基-1H-1,2,4-三唑-3-基)甲氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟-N-(2-(甲基(氧杂环丁-3-基)氨基)乙基)苯甲酰胺；

4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟-N-(2-((2-羟基乙基)氨基)乙基)苯甲酰胺；

2-氨基-N-(2-(4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟苯氧基)乙基)乙酰胺；

(S)-2-氨基-N-(2-(4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟苯氧基)乙基)-3-甲基丁酰胺；

2-(5-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-2,4-二氟苯氧基)乙酸乙酯；

2-(5-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-2,4-二氟苯氧基)乙腈；

5-氨基-8-(呋喃-2-基)-3-(2-(4-(吡啶-4-基)哌嗪-1-基)乙基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

5-氨基-8-(呋喃-2-基)-3-(2-(4-(嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)乙基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

5-氨基-3-(2-(4-(2,4-二氟-5-(2-(甲基磺酰基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(2-(甲基磺酰基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

5-氨基-3-(2-(4-(6-氟-2-氧代吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(S-甲基磺亚胺酰基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

5-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-N-(2-(二甲基氨基)乙基)-2,4-二氟苯甲酰胺；

5-氨基-3-(2-(4-(5-氟-2-甲基吡啶-4-基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(((3R,4R)-4-羟基四氢呋喃-3-基)氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(((3S,4S)-4-羟基四氢呋喃-3-基)氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(2-羟基-2-甲基丙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(2-羟基丙-2-基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(3,3,3-三氟-2-羟基丙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-5-(2-羟基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

5-氨基-3-(2-(4-(2,4-二氟-5-(吗啉-2-基甲氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

5-氨基-3-(2-(4-(2,4-二氟-5-(吗啉-3-基甲氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

5-氨基-3-(2-(4-(2,4-二氟-5-(((3S,4S)-4-氟吡咯烷-3-基)氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

5-氨基-3-(2-(4-(2,4-二氟-5-(((3S,4S)-4-氟吡咯烷-3-基)氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

5-氨基-3-(2-(4-(2,4-二氟-5-(((3R,4S)-4-氟吡咯烷-3-基)氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

5-氨基-3-(2-(4-(2,4-二氟-5-(((3S,4R)-4-氟吡咯烷-3-基)氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

(S)-5-氨基-3-(2-(4-(2,4-二氟-5-((2-氧代吡咯烷-3-基)氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

(R)-5-氨基-3-(2-(4-(2,4-二氟-5-((2-氧代吡咯烷-3-基)氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

2-(5-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-2,4-二氟苯氧基)-N-(2-吗啉基乙基)乙酰胺；

5-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-2,4-二氟-N-(吗啉-3-基甲基)苯甲酰胺；

5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(吗啉-3-基甲氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(吗啉-2-基甲氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(((3R,4R)-4-氟吡咯烷-3-基)氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(((3S,4S)-4-氟吡咯烷-3-基)氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(((3R,4S)-4-氟吡咯烷-3-基)氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(((3S,4R)-4-氟吡咯烷-3-基)氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

2-(4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟苯氧基)-N-(2-吗啉基乙基)乙酰胺；

4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟-N-(2-吗啉基乙基)苯甲酰胺；

4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟-N-(吗啉-3-基甲基)苯甲酰胺；

5-氨基-3-(2-(4-(4-(氮杂环丁烷-3-基氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

(S)-5-氨基-3-(2-(4-(2,4-二氟-5-(甲基亚磺酰基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

(R)-5-氨基-3-(2-(4-(2,4-二氟-5-(甲基亚磺酰基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

5-氨基-3-(2-(4-(2,4-二氟-5-(((1s,4s)-1-氧离子基四氢-2H-噻喃-4-基)氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

5-氨基-3-(2-(4-(2,4-二氟-5-(((1r,4r)-1-氧离子基四氢-2H-噻喃-4-基)氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

(S)-5-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-2,4-二氟-N-(2-(甲基亚磺酰基)乙基)苯甲酰胺；

(R)-5-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-2,4-二氟-N-(2-(甲基亚磺酰基)乙基)苯甲酰胺；

(S)-5-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-2,4-二氟-N-甲基-N-(2-(甲基亚磺酰基)乙基)苯甲酰胺；

(R)-5-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-2,4-二氟-N-甲基-N-(2-(甲基亚磺酰基)乙基)苯甲酰胺；

5-氨基-3-(2-(4-(2,4-二氟-5-(1-氧离子基硫代吗啉-4-羰基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

5-氨基-3-(2-(4-(2,4-二氟-5-(1-氧离子基硫代吗啉基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

(R)-5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(甲基亚磺酰基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

(S)-5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(甲基亚磺酰基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(((1s,4s)-1-氧离子基四氢-2H-噻喃-4-基)氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(((1r,4r)-1-氧离子基四氢-2H-噻喃-4-基)氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

(S)-4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟-N-(2-(甲基亚磺酰基)乙基)苯甲酰胺；

(R)-4-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-3-氟-N-(2-(甲基亚磺酰基)乙基)苯甲酰胺；

5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(1-氧离子基硫代吗啉-4-羰基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

5-氨基-3-(2-(4-(2-氟-4-(1-氧离子基硫代吗啉基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

(S)-5-氨基-3-(2-(4-(5-(2,3-二羟基丙氧基)-2,4-二氟苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

(R)-5-氨基-3-(2-(4-(5-(2,3-二羟基丙氧基)-2,4-二氟苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

(S)-5-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-N-(2,3-二羟基丙基)-2,4-二氟苯甲酰胺；

(R)-5-(4-(2-(5-氨基-8-(呋喃-2-基)-2-氧代噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-3(2H)-基)乙基)哌嗪-1-基)-N-(2,3-二羟基丙基)-2,4-二氟苯甲酰胺；

5-氨基-3-(2-(4-(4-(氮杂环丁烷-3-基氧基)-2-氟苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

5-氨基-3-(2-(4-(5-(氮杂环丁烷-3-基氧基)-2,4-二氟苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；和

(S)-5-氨基-3-(2-(4-(2,4-二氟-5-(3-(甲基亚磺酰基)丙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮,

或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，A_2AR拮抗剂选自以下：

(R,S)-5-氨基-3-(2-(4-(2,4-二氟-5-(2-(甲基亚磺酰基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

(+)-5-氨基-3-(2-(4-(2,4-二氟-5-(2-(甲基亚磺酰基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；和

(-)-5-氨基-3-(2-(4-(2,4-二氟-5-(2-(甲基亚磺酰基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮,

或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，A_2AR拮抗剂选自以下：

(R,S)-5-氨基-3-(2-(4-(2,4-二氟-5-(2-(甲基亚磺酰基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

(R)-5-氨基-3-(2-(4-(2,4-二氟-5-(2-(甲基亚磺酰基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；和

(S)-5-氨基-3-(2-(4-(2,4-二氟-5-(2-(甲基亚磺酰基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮,

或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，A_2AR拮抗剂是(+)-5-氨基-3-(2-(4-(2,4-二氟-5-(2-(甲基亚磺酰基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮。

在一些实施方案中，A_2AR拮抗剂是(-)-5-氨基-3-(2-(4-(2,4-二氟-5-(2-(甲基亚磺酰基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮。

在另一个实施方案中，A_2AR拮抗剂是WO2011/121418中公开的A_2AR拮抗剂。特别地，A_2AR拮抗剂是WO2011/121418的实施例1的化合物，即5-溴-2,6-二-(1H-吡唑-1-基)嘧啶-4-胺，也称为NIR178：

在另一个实施方案中，A_2AR拮抗剂是WO2009/156737中公开的A_2AR拮抗剂。特别地，A_2AR拮抗剂是WO2009/156737的实施例1S的化合物，即(S)-7-(5-甲基呋喃-2-基)-3-((6-(([四氢呋喃-3-基])氧基)甲基)吡啶-2-基)甲基)-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-5-胺，也称为CPI-444：

在另一个实施方案中，A_2AR拮抗剂是WO2011/095626中公开的A_2AR拮抗剂。特别地，A_2AR拮抗剂是WO2011/095626的化合物(cxiv)，即6-(2-氯-6-甲基吡啶-4-基)-5-(4-氟苯基)-1,2,4-三嗪-3-胺，也称为AZD4635：

在另一个实施方案中，A_2AR拮抗剂是WO2018/136700中公开的A_2AR拮抗剂。特别地，A_2AR拮抗剂为WO2018/136700的实施例1的化合物，即3-(2-氨基-6-(1-((6-(2-羟基丙-2-基)吡啶-2-基))甲基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)嘧啶-4-基)-2-甲基苯甲腈，也称为AB928：

在另一个实施方案中，A_2AR拮抗剂是普瑞丁奈(SCH-420,814)，即2-(2-呋喃基)-7-(2-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)-1-哌嗪基)乙基)-7H-吡唑并(4,3-e)(1,2,4)三唑并(1,5-c)嘧啶-5-胺：

在另一个实施方案中，A_2AR拮抗剂是维帕丁奈(BIIB-014)，即3-(4-氨基-3-甲基苄基)-7-(2-呋喃基)-3H-(1,2,3)三唑并(4,5-d)嘧啶-5-胺:

在另一个实施方案中，A_2AR拮抗剂是托扎纳丁(SYK-115)，即4-羟基-N-(4-甲氧基-7-吗啉基苯并[d]噻唑-2-基)-4-甲基哌啶-1-甲酰胺：

在一个实施方案中，腺苷受体拮抗剂选自：

5-溴-2,6-二-(1H-吡唑-1-基)嘧啶-4-胺；

(S)-7-(5-甲基呋喃-2-基)-3-((6-(([四氢呋喃-3-基]氧基)甲基)吡啶-2-基)甲基)-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-5-胺；

6-(2-氯-6-甲基吡啶-4-基)-5-(4-氟苯基)-1,2,4-三嗪-3-胺；

3-(2-氨基-6-(1-((6-(2-羟基丙-2-基)吡啶-2-基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)嘧啶-4-基)-2-甲基苯甲腈；

2-(2-呋喃基)-7-(2-(4-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)-1-哌嗪基)乙基)-7H-吡唑并(4,3-e)(1,2,4)三唑并(1,5-c)嘧啶-5-胺；

3-(4-氨基-3-甲基苄基)-7-(2-呋喃基)-3H-(1,2,3)三唑并(4,5-d)嘧啶-5-胺；和

4-羟基-N-(4-甲氧基-7-吗啉基苯并[d]噻唑-2-基)-4-甲基哌啶-1-甲酰胺。

在一个实施方案中，腺苷受体拮抗剂是5-溴-2,6-二-(1H-吡唑-1-基)嘧啶-4-胺。在一个实施方案中，腺苷受体拮抗剂是(S)-7-(5-甲基呋喃-2-基)-3-((6-(([四氢呋喃-3-基]氧基)甲基)吡啶-2-基)甲基)-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-5-胺。在一个实施方案中，腺苷受体拮抗剂是6-(2-氯-6-甲基吡啶-4-基)-5-(4-氟苯基)-1,2,4-三嗪-3-胺。在一个实施方案中，腺苷受体拮抗剂是3-(2-氨基-6-(1-((6-(2-羟基丙-2-基)吡啶-2-基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)嘧啶-4-基)-2-甲基苯甲腈。

A_2B和A₃受体拮抗剂

“A_2BR拮抗剂”是指在施用于患者后，导致患者中与A_2B受体激活相关的生物活性(包括以其他方式由天然配体结合至A_2B受体产生的任何下游生物效应)抑制或下调的化合物。此类A_2B R拮抗剂包括可阻断A_2B受体激活或A_2B受体激活的任何下游生物效应的任何试剂。

A_2BR拮抗剂的实例包括：维帕丁奈(BIIB-014)、CVT-6883、MRS-1706、MRS-1754、PSB-603、PSB-0788、PSB-1115、OSIP-339,391、ATL-801、茶碱或咖啡因。

A_2B受体抑制剂的实例包括ATL-801、CVT-6883、MRS-1706、MRS-1754、OSIP-339,391、PSB-603、PSB-0788和PSB-1115。

A₃受体抑制剂的实例包括KF-26777、MRS-545、MRS-1191、MRS-1220、MRS-1334、MRS-1523、MRS-3777、MRE-3005-F20、MRE-3008-F20、PSB-11、OT-7999、VUF-5574和SSR161421。

方法

在一些实施方案中，本公开包括治疗以有需要的受试者中A_2A受体表达或A_2AR⁺细胞密度增加为特征的癌症的方法，其包括向受试者施用治疗有效量的腺苷受体拮抗剂。在一些实施方案中，本公开包括治疗以有需要的受试者的肿瘤中A_2A受体表达或A_2AR⁺细胞密度增加为特征的癌症的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的腺苷受体拮抗剂。

在一些实施方案中，本公开包括腺苷受体拮抗剂，其用于在有需要的受试者中治疗癌症，其中所述癌症的特征在于A_2A表达或A_2AR⁺细胞密度增加。

在一些实施方案中，受试者先前已被鉴定为与参考相比在肿瘤微环境中具有增加的A_2A受体表达或A_2AR⁺细胞的密度。

在一些实施方案中，本公开包括在有需要的受试者中治疗的癌症的方法，包括向受试者施用治疗有效量的腺苷受体拮抗剂，其中受试者先前已被鉴定为在受试者肿瘤中具有增加的A_2A受体表达或A_2AR⁺细胞的密度。在一些实施方案中，本公开包括腺苷受体拮抗剂，其用于治疗有需要的受试者的癌症，其中所述癌症的特征在于A_2AR表达或A_2AR⁺细胞密度增加，并且其中所述受试者先前已被鉴定为在受试者的肿瘤中具有增加的A_2AR表达或A_2AR⁺细胞密度。在一些实施方案中，受试者先前已被鉴定为与参考相比在肿瘤微环境中具有增加的A_2A受体表达或A_2AR⁺细胞的密度。在一些实施方案中，受试者先前已被鉴定为与参考相比在肿瘤微环境中具有增加的A_2A受体表达或A_2AR⁺细胞的密度。

在一些实施方案中，本公开包括在有需要的受试者中治疗癌症的方法，包括：

选择患有癌症的受试者，该受试者被诊断为受试者肿瘤中具有增加的A_2A受体表达或A_2AR⁺细胞的密度；和

用腺苷受体拮抗剂治疗患者。

在一些实施方案中，本公开包括选择患有癌症的受试者以用腺苷受体拮抗剂进行治疗的方法，包括：

检测来自受试者的样品中，例如来自受试者的肿瘤样品中的A_2AR表达水平或A_2AR⁺细胞的密度；

基于所述水平或密度与参考水平或密度的比较来选择受试者用腺苷受体拮抗剂进行治疗。

在一些实施方案中，本公开包括选择患有癌症的受试者以用腺苷受体拮抗剂进行治疗的方法，包括：

检测来自受试者的样品中，例如来自受试者的肿瘤样品中的A_2AR表达水平或A_2AR⁺细胞的密度；

当A_2AR表达水平或A_2AR⁺细胞的密度增加时，选择受试者用腺苷受体拮抗剂进行治疗。

在一些实施方案中，与参考相比，A_2AR表达水平或A_2AR⁺细胞的密度增加。在一些实施方案中，与参考相比，在肿瘤微环境中A_2AR表达水平或A_2AR⁺细胞的密度增加。

在一些实施方案中，用腺苷受体拮抗剂治疗受试者作为一线疗法，即受试者之前未接受过抗癌治疗。在一些实施方案中，用腺苷受体拮抗剂治疗受试者作为二线、三线或更多线疗法，即受试者之前已接受过另一种抗癌剂的抗癌治疗。

组合

在一些实施方案中，本公开包括在有需要的受试者中治疗特征在于增加的A_2A受体表达或A_2AR⁺细胞密度的癌症的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的腺苷受体拮抗剂和治疗有效量的抗癌剂的组合。在一些实施方案中，本公开包括在有需要的受试者中治疗特征在于肿瘤中A_2A受体表达或A_2AR⁺细胞密度增加的癌症的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的腺苷受体拮抗剂和治疗有效量的抗癌剂的组合。在一些实施方案中，本公开包括治疗有效量的腺苷受体拮抗剂和治疗有效量的抗癌剂的组合，其用于在有需要的受试者中治疗癌症，其中所述癌症的特征在于增加的A_2AR表达或A_2AR⁺细胞的密度。在一些实施方案中，本公开包括腺苷受体拮抗剂，其用于在有需要的受试者中治疗癌症，其中所述癌症的特征在于增加的A_2AR表达或A_2AR⁺细胞密度，并且其中向所述受试者进一步施用抗癌剂。

在一个实施方案中，抗癌剂选自免疫治疗剂、化学治疗剂、抗血管生成剂、多药耐药相关蛋白抑制剂、放射治疗剂及其任何组合。

在一个实施方案中，组合包含单一抗癌剂。在另一个实施方案中，组合包含多种抗癌剂；优选两种、三种或四种如下定义的抗癌剂。在组合中使用抗癌剂的组合的情况下，抗癌剂可以是相同类别的试剂或不同类别的试剂。例如，免疫治疗剂和化学治疗剂的组合可以与腺苷受体拮抗剂一起使用。

在本公开的上下文中，抗癌剂和腺苷受体拮抗剂的施用可以如下文进一步概述的以类似或不同剂型在相同施用位点或在不同施用位点同时或在时间上交错进行。

在本公开的上下文中，抗癌剂和腺苷受体拮抗剂的施用可以如下文进一步概述的以类似或不同剂型在相同施用位点或在不同施用位点同时或在时间上交错进行。

在一个实施方案中，在施用腺苷受体拮抗剂之前、同时或之后施用抗癌剂。为确保由抗癌剂和腺苷受体拮抗剂引发的单独机制不会消极地彼此影响，腺苷受体拮抗剂和抗癌剂可在时间上(以时间交错方式)分开(即依序)施用，和/或在不同施用位点施用。这意味着，腺苷受体拮抗剂可例如在抗癌剂之前、同时或之后施用，或反之亦然。或者或另外，优选地，当以时间交错方式施用时，腺苷受体拮抗剂和抗癌剂可在不同施用位点或在相同施用位点施用。

在一个实施方案中，腺苷受体拮抗剂要在抗癌剂之前和/或与其同时施用。在一个实施方案中，腺苷受体拮抗剂要在施用抗癌剂的日期之前或在同一天施用。在另一个实施方案中，抗癌剂要在腺苷受体拮抗剂之前和/或与其同时施用。在一个实施方案中，抗癌剂要在施用腺苷受体拮抗剂的日期之前或在同一天施用。在一个实施方案中，腺苷受体拮抗剂要在抗癌剂之前和/或与其同时并且此后连续施用。在另一个实施方案中，抗癌剂要在腺苷受体拮抗剂之前和/或与其同时并且此后连续施用。

根据要预防或治疗的病症以及施用形式，抗癌剂和腺苷受体拮抗剂可以单个日剂量施用、对一个或多个日剂量进行划分。

应了解，腺苷受体拮抗剂和抗癌剂的总每天用量将由主治医师在合理医学判断范围内决定。用于任何特定受试者的具体剂量将取决于多种因素，诸如要治疗的癌症；患者的年龄、体重、一般健康、性别以及膳食；以及医学领域中熟知的类似因素。

免疫治疗剂

在一个实施方案中，组合包含免疫治疗剂作为抗癌剂。

在这种情况下，本公开涉及包含以下的组合：

(a)至少一种腺苷受体拮抗剂，和

(b)至少一种免疫治疗剂。

在本公开中，“免疫疗法”是指旨在诱导和/或增强针对特定靶标例如针对癌细胞的免疫应答的疗法。在这后一种情况下，它被称为癌症免疫疗法。

在一些实施方案中，免疫治疗剂例如选自检查点抑制剂、检查点激动剂(也称为T细胞激动剂)、IDO抑制剂、PI3K抑制剂、腺苷受体抑制剂、产腺苷的酶抑制剂、CD40激动剂、IL2变体、免疫细胞(用于进行过继转移)、治疗性疫苗及其组合。在一个特定实施方案中，免疫治疗剂是检查点抑制剂。

在一个实施方案中，与如上所述的腺苷受体拮抗剂组合的免疫治疗剂包括以下或由以下组成：检查点抑制剂、检查点激动剂、IDO抑制剂、PI3K抑制剂、腺苷受体抑制剂、产腺苷的酶抑制剂、CD40激动剂、IL2变体、免疫细胞(用于进行过继转移)、治疗性疫苗或其任何混合物。

检查点抑制剂

在一个实施方案中，组合包含至少一种检查点抑制剂作为免疫治疗剂。

在一些实施方案中，检查点抑制剂(CPI)(也可称为免疫检查点抑制剂(ICI))阻断T细胞上表达的抑制性受体与其配体之间的相互作用。作为癌症治疗，检查点抑制剂的使用旨在防止肿瘤所表达的配体激活T细胞上表达的抑制性受体。因此，检查点抑制剂的使用旨在防止抑制肿瘤中存在的T细胞，即肿瘤浸润性T细胞，并因此增强受试者对肿瘤的免疫应答。

因此，本公开的组合可以通过使用A_2AR抑制剂作为第一组分来恢复肿瘤环境中的免疫功能，并且通过优选地使用检查点抑制剂作为免疫治疗剂用作第二组分来抑制或遏止信号转导从而拮抗检查点途径的信号传导。

检查点抑制剂的实例包括但不限于：

-细胞表面受体PD-1(程序性细胞死亡蛋白1)，也称为CD279(分化簇279)的抑制剂；

-配体PD-L1(程序性死亡配体1)，也称为CD274(分化簇274)或B7-H1(B7同系物1)的抑制剂；

-细胞表面受体CTLA4或CTLA-4(细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4)，也称为CD152(分化簇152)的抑制剂；

-LAG-3(淋巴细胞活化基因3)，也称为CD223(分化簇223)的抑制剂；

-TIM-3(T细胞免疫球蛋白和粘蛋白结构域-3)，也称为HAVCR2(甲型肝炎病毒细胞受体2)或CD366(分化簇366)的抑制剂；

-TIGIT(具有Ig和ITIM结构域的T细胞免疫受体)，也称为VSIG9(V-Set和免疫球蛋白结构域蛋白9)或VSTM3(V-Set和跨膜结构域蛋白3)的抑制剂；

-BTLA(B和T淋巴细胞衰减子)，也称为CD272(分化簇272)的抑制剂；

-CEACAM-1(癌胚抗原相关细胞粘附分子1)，也称为CD66a(分化簇66a)的抑制剂；以及

-GITR(糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白)，也称为TNFRSF18(肿瘤坏死因子受体超家族成员18)或AITR(活化诱导型TNFR家族受体)的抑制剂。

在一个实施方案中，检查点抑制剂选自包括以下或由以下组成的组：PD-1抑制剂、PD-L1抑制剂、CTLA4抑制剂、LAG-3抑制剂、TIM-3抑制剂、TIGIT抑制剂、BTLA抑制剂、CEACAM-1抑制剂、GITR抑制剂及其任何混合物。

在一个实施方案中，检查点抑制剂选自包括以下或由以下组成的组：PD-1抑制剂、PD-L1抑制剂、CTLA-4抑制剂、TIGIT抑制剂及其任何混合物。

在一个实施方案中，检查点抑制剂选自包括以下或由以下组成的组：PD-1抑制剂、PD-L1抑制剂、CTLA-4抑制剂及其任何混合物。

在一个实施方案中，检查点抑制剂是PD-1抑制剂，也称为抗PD-1。PD-1抑制剂可以包括靶向PD-1的抗体，特别是单克隆抗体，以及非抗体抑制剂，诸如小分子抑制剂。

PD-1抑制剂的实例包括但不限于派姆单抗、纳武单抗、西米普利单抗(cemiplimab)、替雷利珠单抗(tislelizumab)、斯巴达珠单抗(spartalizumab)、ABBV-181、JNJ-63723283、BI 754091、MAG012、TSR-042、AGEN2034。派姆单抗也被称为MK-3475、MK03475、兰博单抗(lambrolizumab)或SCH-900475。派姆单抗的商品名称是纳武单抗也被称为ONO-4538、BMS-936558、MDX1106或GTPL7335。纳武单抗的商品名称是西米普利单抗也被称为REGN2810或REGN-2810。替雷利珠单抗也被称为BGB-A317。斯巴达珠单抗也被称为PDR001或PDR-001。

在一个实施方案中，检查点抑制剂选自包括以下或由以下组成的组：派姆单抗、纳武单抗、西米普利单抗、替雷利珠单抗、斯巴达珠单抗、ABBV-181、JNJ-63723283、BI754091、MAG012、TSR-042、AGEN2034及其任何混合物。

在一个实施方案中，检查点抑制剂是PD-L1的抑制剂，也称为抗PD-L1。PD-L1抑制剂可以包括靶向PD-L1的抗体，特别是单克隆抗体，以及非抗体抑制剂，诸如小分子抑制剂。

PD-L1抑制剂的实例包括但不限于阿维鲁单抗、阿特珠单抗、德瓦鲁单抗和LY3300054。阿维鲁单抗也被称为MSB0010718C、MSB-0010718C、MSB0010682或MSB-0010682。阿维鲁单抗的商品名称是阿特珠单抗也被称为MPDL3280A(克隆YW243.55.S70)、MPDL-3280A、RG-7446或RG7446。阿特珠单抗的商品名称是/>德瓦鲁单抗也被称为MEDI4736或MEDI-4736。德瓦鲁单抗的商品名称是/>

在一个实施方案中，检查点抑制剂选自包括以下或由以下组成的组：阿维鲁单抗、阿特珠单抗、德瓦鲁单抗、LY3300054及其任何混合物。

在一个实施方案中，检查点抑制剂是CTLA-4的抑制剂，也称为抗CTLA-4。

CTLA-4抑制剂可以包括靶向CTLA-4的抗体，特别是单克隆抗体，以及非抗体抑制剂，诸如小分子抑制剂。

CTLA-4抑制剂的实例包括但不限于易普利单抗和替西木单抗。易普利单抗也被称为BMS-734016、MDX-010或MDX-101。易普利单抗的商品名称是替西木单抗也被称为替卡单抗(ticilimumab)、CP-675或CP-675,206。

在一个实施方案中，至少一种检查点抑制剂选自包括以下或由以下组成的组：易普利单抗、替西木单抗及其任何混合物。

在一个实施方案中，检查点抑制剂是TIGIT的抑制剂，也称为抗TIGIT。

在本文所提供的各种方法、药物组合物、试剂盒或用途的一个实施方案中，抗人TIGIT单克隆抗体或其抗原结合片段是BMS-986207(Bristol-Myers Squibb,New York,NY)。

在本文所提供的各种方法、药物组合物、试剂盒或用途的另一个实施方案中，抗人TIGIT单克隆抗体或其抗原结合片段是OMP-313M32(OncoMed Pharmaceuticals,Redwoodcity,CA)。

在本文所提供的各种方法、药物组合物、试剂盒或用途的另一个实施方案中，抗人TIGIT单克隆抗体或其抗原结合片段是MK-7684(Merck&Co.,Kenilworth,NJ)。

在本文所提供的各种方法、药物组合物、试剂盒或用途的又一个实施方案中，抗人TIGIT单克隆抗体或其抗原结合片段是MTIG7192A(也称为RG6058，美国公布第2017/0088613号)。

在本文所提供的各种方法、药物组合物、试剂盒或用途的又一个实施方案中，抗人TIGIT单克隆抗体或其抗原结合片段是PTZ-201(Potenza Therapeutics,Cambridge,MA；也称为ASP8374，Astellas Pharma,Tokyo,Japan)。

在本文所提供的各种方法、药物组合物、试剂盒或用途的另一个实施方案中，抗人TIGIT单克隆抗体或其抗原结合片段是COM902(Compugen LTD,Holon,IL)。

在本文所提供的各种方法、药物组合物、试剂盒或用途的又一个实施方案中，抗人TIGIT单克隆抗体或其抗原结合片段是如WO2018/160704中所述的(Seattle Genetics,Seattle,WA)。

在本文所提供的各种方法、药物组合物、试剂盒或用途的又一个实施方案中，抗人TIGIT单克隆抗体或其抗原结合片段是如WO2019/023504中所述的(Iteos Therapeutics)。在某些优选实施方案中，抗人TIGIT抗体或抗原结合片段包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3的组合，其中：

HCDR1包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:2(YTFTSYYMH)，

HCDR2包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:3(VIGPSGASTSYAQKFQG)，

HCDR3包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:4(ARDHSDYWSGIMEV)，

LCDR1包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:5(RASQSVRSSYLA)，

LCDR2包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:6(GASSRAT)，并且

LCDR3包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:7(QQYFSPPWT)。

检查点激动剂(T细胞激动剂)

在一个实施方案中，本公开的组合包含至少一种检查点激动剂(也称为T细胞激动剂)作为免疫治疗剂。

T细胞激动剂通过激活免疫细胞(诸如T细胞)上表达的刺激性受体起作用。如本文所用，术语“刺激性受体”是指在激活后诱导刺激性信号并因此导致免疫应答增强的受体。作为癌症治疗，T细胞激动剂疗法旨在激活存在于肿瘤中的免疫细胞上表达的刺激性受体。具体说来，T细胞激动剂疗法旨在增强存在于肿瘤中的T细胞(即，肿瘤浸润性T细胞)的活化，并因此增强受试者对肿瘤细胞的免疫应答。

T细胞激动剂的实例包括但不限于：

-CD137(分化簇137)，也称为4-1BB或TNFRS9(肿瘤坏死因子受体超家族，成员9)的激动剂；

-OX40受体，也称为CD134(分化簇134)或TNFRSF4(肿瘤坏死因子受体超家族，成员4)的激动剂。

在一个实施方案中，检查点激动剂选自包括以下或由以下组成的组：CD137激动剂、OX40激动剂及其任何混合物。

CD137激动剂的实例包括但不限于乌托米单抗(utomilumab)和乌瑞芦单抗(urelumab)。

IDO抑制剂

在一个实施方案中，本公开的组合包含至少一种吲哚胺-2,3-双加氧酶(IDO)的抑制剂作为免疫治疗剂。

吲哚胺2,3-双加氧酶催化L-色氨酸(Trp)分解代谢的第一步和限速步骤。IDO通过限制T细胞功能和参与免疫耐受机制而参与免疫调节。肿瘤中的IDO活性可削弱抗肿瘤反应。因此，抑制IDO能够恢复肿瘤免疫监视。

IDO抑制剂的实例包括β-咔啉(也称为norharmane)、迷迭香酸、1-甲基-L-色氨酸(也称为L-1-MT)、依帕卡司他(epacadostat)、萘伏莫德(navoximod)或WO2015/173764中公开的那些，且更优选为式II、II’或II”的那些。

在一个优选实施方案中，IDO抑制剂选自WO2015/173764中公开的那些，且更优选为式II、II’或II”的那些。

PI3Kγ抑制剂

在一个实施方案中，本公开的组合包含至少一种PI3K抑制剂作为免疫治疗剂。

磷酸肌醇3-激酶抑制剂(PI3K抑制剂)是一类医学药物，其作用是抑制一种或多种磷酸肌醇3-激酶，这些酶是PI3K/AKT/mTOR途径的组成部分，PI3K/AKT/mTOR途径是许多细胞功能诸如生长控制、代谢及翻译起始的重要信号传导途径。许多类型的癌症都激活了PI3K途径，阻止了肿瘤细胞的细胞死亡。

PI3K有许多不同的类别和同工型。1类PI3K具有称为p110的催化亚基，其具有4种类型(同工型)–p110α、p110β、p110γ和p110δ。

在一个优选实施方案中，PI3K抑制剂是PI3K-γ抑制剂。

PI3K抑制剂的实例包括渥曼青霉素、LY294002、脱甲氧基维立顿、hibiscone C、依达拉西布、库潘尼西布(Copanlisib)、杜韦利西布(Duvelisib)、泰尼西布(Taselisib)、布帕利西布(Buparlisib)、艾培西布(Alpelisib)、厄布利西布(Umbralisib)、达克利西布(Dactolisib)、沃塔西布(Voxtalisib)、IPI-549、RP6530、IC87114和TG100-115。

PI3K-γ抑制剂的实例包括库潘尼西、杜韦利西布、IPI-549、RP6530、IC87114和TG100-115。

CD40激动剂

在一个实施方案中，本公开的组合包含至少一种CD40激动剂作为免疫治疗剂。

CD40是肿瘤坏死因子(TNF)受体超家族的细胞表面受体成员。它通过激活免疫系统介导间接的肿瘤细胞杀伤和直接的肿瘤细胞凋亡。与内源性CD40配体(CD40L或CD154)相似，CD40激动剂与多种免疫细胞类型上的CD40结合。这会触发抗原呈递细胞(APC)的细胞增殖和活化，并激活B细胞、效应T细胞和记忆T细胞。这导致针对肿瘤细胞的增强的免疫应答。

CD40激动剂的实例包括CD40激动性抗体和重组CD40激动剂(即蛋白质，而不是抗体)。CD40激动性抗体的实例包括塞利克鲁单抗(selicrelumab)(先前称为RO7009789和CP-870,893)、APX005M、JNJ-64457107(先前称为ADC-1013)、SEA-CD40、ChiLob 7/4、CDX-1140H、达西珠单抗(dacetuzumab)(SGN-40)和ABBV-428。重组CD40激动剂的实例包括MEDI5083和HERA-CD40L。

产腺苷的酶抑制剂

在一个实施方案中，本公开的组合包含至少一种产腺苷的酶抑制剂作为免疫治疗剂。

外核苷酸酶(Ectonuclectidase)是核苷酸代谢酶的家族，其将核苷酸代谢成核苷。外核苷酸酶的亚家族包括：CD39/NTPDase(外核苷酸三磷酸二磷酸水解酶)、核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶(NPP)型外磷酸二酯酶、碱性磷酸酶和外-5’-核苷酸酶/CD73。

除其他功能外，外核苷酸酶生成胞外腺苷，第一步涉及由ENTPD1(也称为CD39)进行的ATP/ADP向AMP的转化。第二步涉及AMP向腺苷的转化。它由NT5E(也称为CD73)进行。因此，外核苷酸酶是产腺苷的酶。

产腺苷的酶抑制剂的实例包括：

CD39，也称为ENTPD1或外核苷三磷酸二磷酸水解酶(EC 3.6.1.5，腺苷三磷酸酶双磷酸酶)的抑制剂，

CD73，也称为5'-核苷酸酶(5'-NT)或外-5'-核苷酸酶或NT5E的抑制剂，外核苷酸焦磷酸酶/PDE(EC 3.6.1.9和EC 3.1.4.1)的抑制剂，以及碱性磷酸酶(AP；EC 3.1.3.1)的抑制剂，

CD38，也称为环状ADP核糖水解酶或ADP核糖基环化酶/环状ADP-核糖(cADPR)水解酶)的抑制剂。

产腺苷的酶抑制剂的实例包括IPH5201、A001485、SRF617、ARL67156、POM-1、IPH5301、A000830、A001190、A001421、SRF373/NZV930、达鲁单抗(Darutumumab)。更确切地说，CD39抑制剂的实例包括IPH5201、A001485、SRF617、ARL67156和POM-1；CD73抑制剂的实例包括IPH5301、A000830、A001190、A001421和SRF373/NZV930；且CD38抑制剂的实例包括达鲁单抗。

IL2变体

在一个实施方案中，本公开的组合包含至少一种IL2变体作为免疫治疗剂。

白介素-2(IL-2)是一种强大的免疫生长因子，在维持T细胞应答中起重要作用。IL-2在扩增T细胞而不丧失功能性方面的潜力已导致其在癌症免疫疗法中的早期使用。

IL2变体的实例包括重组的、PEG化的和/或突变的IL2变体，例如阿地白介素、单甲氧基PEG IL2、NKTR-214、MDNA-109、RO6874281和ALKS-4230。

免疫细胞-过继细胞转移

根据一个实施方案，免疫治疗剂是用于细胞的过继转移中的免疫细胞，也称为过继细胞疗法(两者也称为ACT)，特别是T细胞的过继转移，也称为过继T细胞疗法。

如本文所用，细胞的过继转移或过继细胞疗法被定义为免疫细胞向受试者的转移，例如输注。作为癌症治疗，免疫细胞向受试者的过继转移旨在增强受试者对癌细胞的免疫应答。

在一个实施方案中，免疫细胞是T细胞，特别是效应T细胞。效应T细胞的实例包括CD4+T细胞和CD8+T细胞。

在一个实施方案中，转移的T细胞是细胞毒性细胞。细胞毒性T细胞的实例包括CD8+T细胞和自然杀伤(NK)细胞，特别是自然杀伤(NK)T细胞。

在一个实施方案中，如上文所述的转移的免疫细胞是抗原特异性细胞。在一个实施方案中，如上文所述的转移的免疫细胞是抗原特异性免疫细胞，其中所述抗原由癌细胞特异性和/或大量表达。在一个实施方案中，如上文所述的转移的免疫细胞是癌症特异性免疫细胞，换句话说，如上文所述的转移的免疫细胞通过由癌细胞特异性和/或大量表达的抗原而特异性地识别所述癌细胞。在一个实施方案中，如上文所述的转移的免疫细胞是癌症特异性效应T细胞。在一个实施方案中，如上文所述的转移的免疫细胞是癌症特异性CD8+效应T细胞，特别是癌症特异性细胞毒性CD8+T细胞。在一个实施方案中，如上文所述的转移的免疫细胞是癌症特异性细胞毒性细胞。在一个实施方案中，如上文所述的转移的免疫细胞是癌症特异性NK细胞。在一个实施方案中，如上文所述的转移的免疫细胞是肿瘤特异性免疫细胞，换句话说，如上文所述的转移的免疫细胞通过由肿瘤细胞特异性和/或大量表达的抗原而特异性地识别所述肿瘤细胞。在一个实施方案中，如上文所述的转移的免疫细胞是肿瘤特异性效应T细胞。在一个实施方案中，如上文所述的转移的免疫细胞是肿瘤特异性CD8+效应T细胞，特别是肿瘤特异性细胞毒性CD8+T细胞。在一个实施方案中，如上文所述的转移的免疫细胞是肿瘤特异性细胞毒性细胞。在一个实施方案中，如上文所述的转移的免疫细胞是肿瘤特异性NK细胞。

在一个实施方案中，如上文所述的转移的免疫细胞是自体免疫细胞，特别是自体T细胞。在另一个实施方案中，如上文所述的转移的免疫细胞是同种异体(或异体)免疫细胞，特别是同种异体NK细胞。

从受试者分离T细胞(特别是抗原特异性T细胞，例如肿瘤特异性T细胞)的方法是本领域中公知的(参见例如Rosenberg和Restifo,2015,Science348,62-68；Prickett等人,2016,Cancer Immunol Res 4,669-678；或Hinrichs和Rosenberg,2014,Immunol Rev 257,56-71)。离体扩增T细胞的方法是本领域中公知的(参见例如Rosenberg和Restifo,2015,Science 348,62-68；Prickett等人,2016,Cancer Immunol Res 4,669-678；或Hinrichs和Rosenberg,2014,Immunol Rev 257,56-71)。在受试者中输注T细胞的方案，包括输注前调整方案，是本领域中公知的(参见例如Rosenberg和Restifo,2015,Science 348,62-68；Prickett等人,2016,Cancer Immunol Res 4,669-678；或Hinrichs和Rosenberg,2014,Immunol Rev 257,56-71)。

在一个实施方案中，在CAR免疫细胞疗法和CAR T细胞疗法各自的背景下，免疫细胞是CAR免疫细胞，特别是CAR T细胞。

如本文所用，CAR免疫细胞疗法是过继细胞疗法，其中转移的细胞是上文所述的免疫细胞，诸如T细胞或NK细胞，它们被基因工程改造以表达嵌合抗原受体(CAR)。作为癌症治疗，CAR免疫细胞向受试者的过继转移旨在增强受试者对癌细胞的免疫应答。

CAR是由与单一融合分子或若干分子中的一个或多个信号传导结构域相关的靶向部分组成的合成受体。通常，CAR的结合部分由单链抗体(scFv)的抗原结合结构域组成，该结构域包含通过柔性接头连接的单克隆抗体的轻片段和可变片段。基于受体或配体结构域的结合部分也已成功使用。第一代CAR的信号传导结构域通常来源于CD3ζ或Fc受体γ链的胞质区。第一代CAR已被证明能够成功地重定向T细胞的细胞毒性，但是，它们无法在体内提供延长的扩增和抗肿瘤活性。因此，单独添加(第二代)或组合添加(第三代)来自包括CD28、OX-40(CD134)和4-1BB(CD137)的共刺激分子的信号传导结构域，以提高CAR修饰的T细胞的存活率并增强其增殖。

因此，在一个实施方案中，如上文所述的转移的T细胞是CAR T细胞。CAR的表达使T细胞能够针对选定的抗原(诸如在癌细胞表面上表达的抗原)进行重定向。在一个实施方案中，转移的CAR T细胞识别肿瘤特异性抗原。

在另一个实施方案中，如上文所述的转移的NK细胞是CAR NK细胞。CAR的表达使NK细胞能够针对选定的抗原(诸如在癌细胞表面上表达的抗原)进行重定向。在一个实施方案中，转移的CAR NK细胞识别肿瘤特异性抗原。

在一个实施方案中，如上文所述的CAR免疫细胞是自体CAR免疫细胞，特别是自体CAR T细胞。在另一个实施方案中，如上文所述的CAR免疫细胞是同种异体(或异体)CAR免疫细胞，特别是同种异体CAR NK细胞。

治疗性疫苗

根据一个实施方案，免疫治疗剂是治疗性疫苗(有时也称为治疗疫苗)。

如本文所用，治疗性疫苗被定义为至少一种肿瘤特异性抗原(例如，合成的长肽或SLP)或编码所述肿瘤特异性抗原的核酸的施用；选择性地进入肿瘤细胞和/或在肿瘤细胞中复制的重组病毒载体的施用；肿瘤细胞的施用；和/或被工程改造以呈递肿瘤特异性抗原并触发针对这些抗原的免疫应答的免疫细胞(例如树突状细胞)的施用。

作为癌症治疗，治疗性疫苗旨在增强受试者对肿瘤细胞的免疫应答。

旨在增强受试者对肿瘤细胞的免疫应答的治疗性疫苗的实例包括但不限于基于病毒载体的治疗性疫苗，诸如腺病毒(例如，溶瘤性腺病毒)、牛痘病毒(例如，改良的牛痘安卡拉(MVA))、甲型病毒(例如，塞姆利基森林病毒(Semliki Forrest Virus)(SFV))、麻疹病毒、单纯疱疹病毒(HSV)和柯萨奇病毒；合成的长肽(SLP)疫苗；以及树突状细胞疫苗。

化学治疗剂

在一个实施方案中，本公开的组合包含至少一种化学治疗剂作为抗癌剂。

化学治疗剂例如选自抗癌烷基化剂、抗癌抗代谢物、抗癌抗生素、植物来源的抗癌剂、抗癌铂配位化合物、Parp抑制剂、抗激素敏感性癌症剂及其任何组合。

在一个实施方案中，待与如上文所述的式(I)的A_2AR抑制剂组合的化学治疗剂包括以下或由以下组成：抗癌烷基化剂、抗癌抗代谢物、抗癌抗生素、植物来源的抗癌剂、抗癌铂配位化合物、Parp抑制剂、抗激素敏感性癌症剂及其任何组合。

抗癌烷基化剂

在一个实施方案中，本公开的组合包含至少一种抗癌烷基化剂作为化学治疗剂。

抗癌烷基化剂是指具有抗癌活性的烷基化剂，并且本文中的术语“烷基化剂”通常是指在烷基化反应中给出烷基的剂，其中有机化合物的氢原子被烷基取代。

抗癌烷基化剂的实例包括氮芥N-氧化物、环磷酰胺、异环磷酰胺、美法仑、白消安、二溴甘露醇、卡波醌、噻替派、rammustine、尼莫司汀、替莫唑胺和卡莫司汀。

抗癌抗代谢物

在一个实施方案中，本公开的组合包含至少一种抗癌抗代谢物作为化学治疗剂。

抗癌抗代谢物是指具有抗癌活性的抗代谢物，并且本文中的术语“抗代谢物”在广义上包括干扰正常代谢的物质和抑制电子转移系统以防止产生高能中间体的物质，这是由于它们与对活生物体而言重要的代谢物(诸如维生素、辅酶、氨基酸和糖)的结构或功能相似性。

抗癌抗代谢物的实例包括甲氨蝶呤、6-巯基嘌呤核糖苷、巯基嘌呤、5-氟尿嘧啶(也称为“5-FU”)、替加氟、去氧氟尿苷、卡诺氟、阿糖胞苷、阿糖胞苷烷磷酯、依诺他滨、S-1、吉西他滨、氟达拉滨和培美曲塞二钠。优选地，抗癌抗代谢物选自5-FU、吉西他滨和培美曲塞。

抗癌抗生素

在一个实施方案中，本公开的组合包含至少一种抗癌抗生素作为化学治疗剂。

“抗癌抗生素”是指具有抗癌活性的抗生素，并且本文中的“抗生素”包括由微生物或通过部分或全部合成产生的物质及其衍生物；并且抑制微生物及其他活生物体的细胞生长和其他功能。

抗癌抗生素的实例包括放线菌素D、阿霉素、柔红霉素、新制癌菌素、博来霉素、培洛霉素、丝裂霉素C、阿柔比星、吡柔比星、表柔比星、净司他丁斯酯、伊达比星、雷帕霉素和valrabicin。优选地，抗癌抗生素是阿霉素。

植物来源的抗癌剂

在一个实施方案中，本公开的组合包含至少一种植物来源的抗癌剂作为化学治疗剂。

在说明书中使用的“植物来源的抗癌剂”包括源自植物的具有抗癌活性的化合物，或通过对上述化合物进行化学修饰而制备的化合物。

植物来源的抗癌剂的实例包括长春新碱、长春花碱、长春地辛、依托泊苷、索布佐生、多西他赛、紫杉醇、nab-紫杉醇和长春瑞滨。优选地，植物来源的抗癌剂是多西他赛。

抗癌铂配位化合物

在一个实施方案中，本公开的组合包含至少一种抗癌铂配位化合物作为化学治疗剂。

“抗癌铂配位化合物”是指具有抗癌活性的铂配位化合物，并且术语“铂配位化合物”在本文中是指以离子形式提供铂的铂配位化合物。

优选的铂化合物包括顺铂；顺式-二氨二水合铂(O)-离子；氯(二亚乙基三胺)-氯化铂(II)；二氯(乙二胺)-铂(II)；二胺(1,1-环丁烷二羧酸)铂(II)(卡铂)；螺铂；异丙铂；二胺(2-乙基丙二酸)铂(II)；乙二胺丙二酸铂(H)；水合(1,2-二氨基二环己烷)硫酸铂(II)；水合(1,2-二氨基二环己烷)丙二酸铂(II)；(1,2-二氨基环己烷)丙二酸铂(II)；(4-羧基邻苯二甲酸)(1,2-二氨基环己烷)铂(II)；(1,2-二氨基环己烷)-(异柠檬酸)铂(II)；(1,2-二氨基环己烷)草酸铂(II)；奥马铂；四铂；卡铂；奈达铂和奥沙利铂。优选地，抗癌铂配位化合物选自卡铂和奥沙利铂。

Parp抑制剂

在一个实施方案中，本公开的组合包含至少一种Parp抑制剂作为化学治疗剂。

“Parp抑制剂”是指聚ADP核糖聚合酶(PARP)的抑制剂。此酶对于修复DNA中的单链断裂是重要的。如果这种断裂在复制DNA之前一直未修复，则该复制会导致双链断裂的形成。因此，PARP抑制剂可致使在肿瘤中形成多个双链断裂，从而导致肿瘤细胞的死亡。

Parp抑制剂的实例包括奥拉帕尼、卢卡帕尼、尼拉帕尼、维利帕尼、帕米帕尼、伊尼帕尼(iniparib)和他拉唑帕尼(talazoparib)。

抗激素敏感性癌症剂

在一个实施方案中，本公开的组合包含至少一种抗激素敏感性癌症剂作为化学治疗剂。

“抗激素敏感性癌症剂”是指对激素敏感性癌症具有活性的抗癌剂。抗激素敏感性癌症剂的实例包括抗雄激素、GnRH激动剂和GnRH拮抗剂。

“抗雄激素”是指防止雄激素如睾酮和二氢睾酮(DHT)介导其在体内的生物作用的一类药物。抗雄激素可以用于例如治疗前列腺癌。抗雄激素的实例包括比卡鲁胺、氟他胺、尼鲁米特、阿帕鲁胺、恩杂鲁胺和阿比特龙。

“促性腺激素释放激素激动剂”(GnRH激动剂)是指影响促性腺激素和性激素的一类药物。它们可用于在激素敏感性癌症(诸如前列腺癌和乳腺癌)的治疗中降低性激素的水平。GnRH激动剂的实例包括戈舍瑞林、亮丙瑞林和曲普瑞林。

“促性腺激素释放激素拮抗剂”(GnRH拮抗剂)是指拮抗促性腺激素释放激素(GnRH)作用的一类药物。它们可以用于例如治疗前列腺癌。GnRH拮抗剂的实例是地加瑞克。

化学治疗剂的组合

化学治疗剂的组合可用作本公开的组合的第二组分。

例如，可以使用被称为folfox的组合。Folfox包括氟尿嘧啶(抗代谢药)、奥沙利铂(铂化合物)和亚叶酸(化学保护剂)的组合使用。

或者，可以使用由卡铂(铂化合物)和紫杉醇(植物来源的剂)组成的组合。另一个实例是由吉西他滨(抗代谢药)和nab-紫杉醇(植物来源的剂)组成的组合。

在一个实施方案中，化学治疗剂的组合选自：

(i)由亚叶酸、氟尿嘧啶和奥沙利铂组成的组合(folfox)；

(ii)由卡铂和紫杉醇组成的组合；以及

(iii)由吉西他滨和nab-紫杉醇组成的组合。

抗血管生成剂

在一个实施方案中，本公开的组合包含至少一种抗血管生成剂作为抗癌剂。

血管生成，即新血管的生长，在肿瘤的发展和恶性肿瘤的进展中起重要作用。已显示抑制血管生成可抑制肿瘤生长和转移。抗血管生成剂的最突出靶标是血管内皮生长因子(VEGF)及其受体。若干其他因子也受到关注，包括整联蛋白、基质金属蛋白酶和内源性抗血管生成因子。

因此，抗血管生成剂包括VEGF抑制剂、整联蛋白抑制剂和基质金属蛋白酶抑制剂。

抗血管生成剂的实例包括雷莫芦单抗、IMC-18F1、贝伐单抗、Ziv-阿柏西普、索拉非尼、舒尼替尼、阿西替尼、尼达尼布、瑞格非尼、帕唑巴尼(Pazobanib)、卡博替尼、范德他尼和沙利度胺。在一个特定实施方案中，抗血管生成剂是VEGF抑制剂，例如雷莫芦单抗。

多药耐药相关蛋白抑制剂

在一个实施方案中，本公开的组合包含至少一种多药耐药相关蛋白抑制剂作为抗癌剂。

多药耐药相关蛋白(MRP/ABCC)是ATP结合盒转运蛋白的亚家族，其能够主动地将多种有机阴离子化合物逆着它们的浓度梯度泵送穿过质膜。这些蛋白通过将多种药物转运到细胞外而参与了多药耐药性，其中包括抗癌药。抑制多药耐药相关蛋白可因此提高抗癌药的功效。

多药耐药相关蛋白抑制剂的实例包括MRP4/ABCC4的抑制剂、MRP5/ABCC5的抑制剂和MRP8/ABCC11的抑制剂。

放射治疗剂-放射疗法

在一个实施方案中，本公开的组合包含至少一种放射治疗剂作为抗癌剂。

“放射疗法”是指使用诸如X射线、γ射线、中子射线、电子束、质子束和放射线源的各种放射线来治疗癌症的方法。它被用作癌症治疗的一部分，以控制或杀伤恶性细胞。如果将放射疗法定位于身体的一个区域，那么放射疗法可能会治愈许多类型的癌症。它也可以用作辅助疗法的一部分，以防止手术切除原发性恶性肿瘤后肿瘤的复发。

放射疗法的三个主要部分是：外束放射疗法(EBRT或XRT)；近距离放射疗法或密封源放射疗法；以及全身放射性同位素疗法(RIT)或未密封源放射疗法。差异与放射源的位置有关；外部是在体外，近距放射疗法使用精确放置在治疗区域中的密封放射源，并且全身放射性同位素是通过输注或经口摄取给予。粒子疗法是外束放射疗法的一种特殊情况，其中粒子是质子或重离子。放射线可以通过线性加速器传递。

全身放射性同位素疗法(RIT)是靶向疗法的一种形式。靶向作用可能是由于同位素(诸如放射性碘)的化学特性所致，它特异性地被甲状腺吸收，比其他身体器官好一千倍。也可以通过将放射性同位素连接到另一种分子或抗体以将其引导至靶组织，从而形成放射性药剂来实现靶向。

为了增强癌症的放射敏感性，可以在放射疗法期间施用放射增敏剂。放射增敏剂的实例包括：顺铂、尼莫拉唑和西妥昔单抗。

因此，在一个实施方案中，放射治疗剂选自在放射疗法过程中有用的密封放射源、放射性同位素、放射性药剂、放射增敏剂等。

在另一个实施方案中，本公开还提供了如上所述的腺苷受体拮抗剂与放射疗法组合的用途，所述放射疗法包括通过外束放射或X射线放射；近距放射疗法；以及全身放射性同位素疗法进行的放射疗法。

具体组合

在一个实施方案中，本公开的组合包含至少一种如上所限定的A_2AR抑制剂和至少一种如上所限定的抗癌剂。

在一个特定实施方案中，本公开的组合包含至少一种如上所限定的A_2AR抑制剂和至少一种如上所限定的免疫治疗剂。

在一个特定实施方案中，本公开的组合包含至少一种如上所限定的A_2AR抑制剂和至少一种如上所限定的检查点抑制剂，优选为PD-1抑制剂、PD-L1抑制剂、CTLA-4抑制剂或TIGIT抑制剂、或其任何混合物。

在一个特定实施方案中，本公开的组合包含至少一种如上所限定的A_2AR抑制剂和至少一种如上所限定的产腺苷的酶抑制剂，优选为至少一种CD39抑制剂，例如ARL67156和POM-1。

在一个特定实施方案中，本公开的组合包含至少一种如上所限定的A_2AR抑制剂和至少一种如上所限定的化学治疗剂。

在一个特定实施方案中，本公开的组合包含至少一种如上所限定的A_2AR抑制剂和至少一种如上所限定的抗癌抗生素，例如阿霉素。

在一个特定实施方案中，本公开的组合包含至少一种如上所限定的A_2AR抑制剂和至少一种如上所限定的抗癌铂配位化合物，例如奥沙利铂。

在一个特定实施方案中，本公开的组合包含至少一种如上所限定的A_2AR抑制剂、至少一种如上所限定的免疫治疗剂和至少一种如上所限定的化学治疗剂。

在一个特定实施方案中，本公开的组合包含至少一种如上所限定的A_2AR抑制剂、至少一种如上所限定的检查点抑制剂和至少一种如上所限定的化学治疗剂。在一个特定实施方案中，本公开的组合包含至少一种如上所限定的A_2AR抑制剂、至少一种如上所限定的PD-L1抑制剂、CTLA-4抑制剂或TIGIT抑制剂和至少一种化学治疗剂。在一个特定实施方案中，本公开的组合包含至少一种如上所限定的A_2AR抑制剂、至少一种如上所限定的检查点抑制剂和至少一种。在一个特定实施方案中，本公开的组合包含至少一种如上所限定的A_2AR抑制剂、至少一种如上所限定的PD-L1抑制剂、CTLA-4抑制剂或TIGIT抑制剂和至少一种如上所限定的抗癌抗生素，例如阿霉素。

在一个特定实施方案中，本公开的组合包含至少一种如上所限定的A_2AR抑制剂和至少两种如上所限定的检查点抑制剂。在一个特定实施方案中，本公开的组合包含至少一种如上所限定的A_2AR抑制剂、至少一种如上所限定的PD-L1抑制剂和至少一种如上所限定的TIGIT抑制剂。

疾病与病症

在一些实施方案中，本公开包括治疗增殖性疾病(包括癌症)的方法。在一些实施方案中，本公开包括用于治疗和/或预防增殖性疾病(包括癌症)的化合物。因此，在一个实施方案中，本公开提供了化合物在制造用于治疗和/或预防癌症的药物中的用途。本公开还提供了治疗癌症的方法，其包括向有需要的哺乳动物物种施用治疗有效量的化合物。

本公开还提供了用于延迟患者癌症发作的方法，包括向有需要的患者施用药学有效量的本公开化合物。

各种癌症是本领域中已知的。可以使用本公开的方法治疗的癌症包括实体癌和非实体癌，尤其是良性和恶性实体肿瘤以及良性和恶性非实体肿瘤。癌症可以是转移性或非转移性的。癌症可以是家族性或散发性的。

在一些实施方案中，癌症是实体癌。如本文所用，术语“实体癌”涵盖形成离散的肿瘤胞块的任何癌症(也称为恶性肿瘤)，与扩散地浸润组织而不形成胞块的癌症(或恶性肿瘤)相反。

实体肿瘤的实例包括但不限于：胆管癌、脑癌(包括成胶质细胞瘤和成神经管细胞瘤)、乳腺癌、类癌瘤、宫颈癌、绒毛膜癌、结肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌、食道癌、胃癌、神经胶质瘤、头颈癌、上皮内肿瘤(包括鲍温氏病和佩吉特氏病)、肝癌、肺癌、神经母细胞瘤、口腔癌(包括鳞状细胞癌)、卵巢癌(包括来源于上皮细胞、基质细胞、生殖细胞和间充质细胞的那些)、胰腺癌、前列腺癌、直肠癌、肾癌(包括腺癌和维尔姆氏肿瘤)、肉瘤(包括平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、脂肪肉瘤、纤维肉瘤和骨肉瘤)、皮肤癌(包括黑素瘤、卡波西氏肉瘤、基底细胞癌和鳞状细胞癌)、睾丸癌包括胚组织肿瘤(精原细胞瘤和非精原细胞瘤，诸如畸胎瘤和绒毛膜癌)、基质肿瘤、生殖细胞肿瘤、甲状腺癌(包括甲状腺腺癌和髓样癌)以及尿路上皮癌。

在一些实施方案中，癌症选自结肠直肠癌、胃癌、肝癌、前列腺癌、乳腺癌、子宫内膜癌和卵巢癌。

在另一个实施方案中，癌症是非实体癌。非实体肿瘤的实例包括但不限于血液肿瘤。如本文所用，血液肿瘤是本领域的术语，其包括淋巴疾病、骨髓疾病和与AIDS相关的白血病。

淋巴疾病包括但不限于急性淋巴细胞性白血病和慢性淋巴增生性病症(例如淋巴瘤、骨髓瘤和慢性淋巴性白血病)。淋巴瘤包括例如霍奇金氏病、非霍奇金氏淋巴瘤和淋巴细胞性淋巴瘤。慢性淋巴性白血病包括例如T细胞慢性淋巴性白血病和B细胞慢性淋巴性白血病。

在一个特定实施方案中，癌症选自乳腺癌、类癌瘤、宫颈癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌、神经胶质瘤、头颈癌、肝癌、肺癌、黑素瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肾癌、胃癌、甲状腺癌和尿路上皮癌。

在一个特定实施方案中，癌症是乳腺癌。在一个特定实施方案中，癌症是类癌瘤。在一个特定实施方案中，癌症是子宫颈癌。在一个特定实施方案中，癌症是结肠直肠癌。在一个特定实施方案中，癌症是子宫内膜癌。在一个特定实施方案中，癌症是神经胶质瘤。在一个特定实施方案中，癌症是头颈癌。在一个特定实施方案中，癌症是肝癌。在一个特定实施方案中，癌症是肺癌。在一个特定实施方案中，癌症是黑素瘤。在一个特定实施方案中，癌症是卵巢癌。在一个特定实施方案中，癌症是胰腺癌。在一个特定实施方案中，癌症是前列腺癌。在一个特定实施方案中，癌症是肾癌。在一个特定实施方案中，癌症是胃癌。在一个特定实施方案中，癌症是甲状腺癌。在一个特定实施方案中，癌症是尿路上皮癌。

在另一特定实施方案中，癌症选自由以下组成的组：白血病和多发性骨髓瘤。

在一个实施方案中，受试者之前已经接受了至少一种在先治疗性治疗，并且在施用至少一种在先治疗性治疗之后和在施用治疗剂之前已经发生进展。在一个实施方案中，先前的治疗性治疗选自化学疗法、免疫疗法、放射疗法、干细胞移植、激素疗法和手术。

制剂

本公开还提供了药物组合物，其包含本文公开的化合物或其药学上可接受的盐和溶剂化物，以及至少一种药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂和/或佐剂。

本公开还提供了药物，其包含至少一种本文公开的化合物或其药学上可接受的盐和溶剂化物作为活性成分。

一般而言，对于药物用途，本文公开的化合物可以配制为药物制剂，其包含至少一种公开的化合物和至少一种药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂和/或佐剂，以及任选的一种或多种另外的药学活性化合物。下文提供了关于其他药学活性化合物的存在的细节。

通过非限制性实例的方式，这样的制剂可以是适于口服施用、胃肠外施用(例如通过静脉内、肌内或皮下注射或静脉内输注)、局部施用(包括眼部)、通过吸入施用、通过皮肤贴剂、通过植入物、通过栓剂等的形式。这样的合适的施用形式(取决于施用的方式，其可以是固体、半固体或液体的)-以及用于制备其的方法和载体、稀释剂和赋形剂对于本领域技术人员将是清楚；参考最新版的Remington’s Pharmaceutical Sciences。

这样的制剂的一些优选、但非限制性的实例包括片剂、丸剂、粉剂、锭剂、囊剂、扁囊剂、酏剂、悬浮剂、乳剂、溶液、糖浆、气雾剂、软膏、乳膏剂、洗剂、软和硬明胶胶囊、栓剂、滴眼剂、无菌注射液和无菌包装粉剂(其通常在使用前重构)，其用于作为推注施用和/或用于连续施用，其可与载体、赋形剂和稀释剂进行配制，所述载体、赋形剂和稀释剂本身适合用于这样的制剂，例如为乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、淀粉、阿拉伯树胶、磷酸钙、藻酸盐、黄蓍胶、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇、纤维素、(无菌)水、甲基纤维素、甲基-和丙基羟苯酸酯、滑石、硬脂酸镁、食用油、植物油和矿物油或其合适的混合物。制剂可任选含有通常用于药物制剂的其它物质，诸如润滑剂、湿润剂、乳化剂和悬浮剂、分散剂、崩解剂、增量剂、填充剂、防腐剂、甜味剂、调味剂、流动调节剂、脱模剂等等。组合物还可以配制以提供其中含有的活性化合物的快速、持续或延迟释放。

本公开的药物制剂优选为单位剂型，并且可以适当地包装在例如盒子、泡罩、小瓶、瓶子、小袋、安瓿中或任何其他合适的单剂量或多剂量保持器或容器(可以正确标记)中；任选地带有一张或多张包含产品信息和/或使用说明的传单。

取决于待预防或治疗的病症以及施用途径，所公开的化合物可以作为单次日剂量、分成一次或多次日剂量施用、或基本上连续地施用，例如使用点滴输注。

本公开的另一个目的是该组合作为药物的用途，即用于医疗用途。因此，在一个实施方案中，本公开提供了本公开的组合用于制造药物的用途。特别地，本公开提供了本公开的组合药物组合物或本公开的试剂盒用于制造药物的用途。

实施例

实施例1-Inupadenant的剂量递增

正在进行的多中心、首次人类临床试验的I期部分旨在评估inupadenant在已用尽标准治疗方案的成年实体瘤患者中的安全性/耐受性、药代动力学、药效学和抗肿瘤活性。此外，通过免疫组织化学(IHC)正在评估肿瘤生物标志物，包括腺苷途径标志物。

结果：总体而言，截至数据截止时，有42名患者(剂量递增中的21名患者和单一疗法扩展中的另外21名患者)接受了中位数为3种既往治疗方案的治疗。表1列出了所研究的剂量水平以及所有剂量水平中最常见(>15％)治疗引起的不良事件(TEAE)。有7种AE导致停药，其中2种(心房颤动和心肌梗死)被研究者认为可能与研究药物有关。无需减少剂量。在黑色素瘤和前列腺癌患者中报告了两例部分缓解(PR)。黑色素瘤(NRAS突变)患者之前接受过派姆单抗和易普利姆玛免疫治疗，前列腺癌患者之前接受过抗雄激素治疗和2次前线化学疗法。截至截止日期，两项PR仍在持续，应答持续时间>230天。在12名头颈癌和非小细胞肺癌患者中观察到疾病稳定(SD)作为最佳应答，并在3名头颈癌和非小细胞肺癌患者中观察到SD延长(>6个月)。根据IHC测量，应答和疾病稳定与基线时肿瘤内表达A2A受体的细胞数量较多有关。

结论：截至截止日期，剂量为80mg，每天两次的inupadenant单一疗法治疗总体耐受性良好，初步证据显示临床获益，包括在用尽标准治疗方案的患者中出现2例持久部分缓解。治疗前肿瘤活检分析已确定A2A受体作为可能与临床获益相关的生物标志物。

表1：剂量递增和单一疗法扩展中最常见的TEAE(>15％)

实施例2-评估收集的临床肿瘤样品中的A_2AR表达

收集来自实施例1的患者的样品。将在inupadenant启动(SCR)前1-28天收集的基线福尔马林固定石蜡包埋的活检切片为4μm，并分别使用Nanostring技术和免疫组织化学评估RNA和蛋白质水平的A_2AR表达。对于每个受试者，收集1-3个活检，分别分析，然后取平均值。每8周进行一次肿瘤评估，并使用RECIST或PCWG3标准评估肿瘤应答。从首次inupadenant剂量到疾病进展(事件)或最后一次患者就诊(审查)计算无进展生存期(PFS)。

与经历疾病进展的患者(PD，灰点)相比，具有部分应答或非进展性疾病(PR+SD，分别为红点和蓝点)的受试者中肿瘤区域内基线ADORA2A表达(图2A)和A_2AR⁺细胞密度(图2B)作为对inupadunant单一疗法的最佳应答。每个点代表可用活检的平均值。显示中位数和四分位数的箱线图，带有从最小值到最大值的须线。+是平均值。P来自t检验(A)或Mann-Whitney(B)(视情况而定)。

为了进行基因表达分析，使用高纯FFPET RNA提取试剂盒从宏观解剖的肿瘤区域中提取RNA，并使用Quant-iT RiboGreen RNA试剂和试剂盒进行定量。使用定制的nCounterPanCancer IO360 panel测定总RNA(100ng)，并计算专有的Nanostring基因签名分数(genesignature score)。使用QCed标准化数据对ADORA2A进行分析。或者，可以使用nCounter基因表达组、ADORA2A的独特探针对以及基于RNA测序方法的读数计数来评估ADORA2A基因表达水平。

为了进行蛋白质表达分析，在Ventana Discovery Ultra上用小鼠单克隆抗A_2AR抗体(克隆7F6-G5-A2，Novus Biologicals，稀释1:750)通过IHC对切片进行染色。使用Visiopharm软件扫描和分析染色的载玻片以确定肿瘤区域中A_2AR⁺细胞的密度(细胞/mm²)。受试者工作特征(ROC)曲线分析用于确定A_2AR⁺细胞基线密度的最佳截止值和对inupadenan的最佳应答。选定的截止值是18A_2AR⁺细胞/mm²。根据基线A_2AR⁺细胞密度的最佳截止值对患者进行分组，使用Kaplan-Meier方法估计PFS，并使用对数秩检验比较生存分布。还计算了目标病灶相对于基线大小的最佳百分比变化。A_2A受体表达的评估可以使用石蜡包埋或用石蜡、树脂或冷冻包埋介质(OCT或类似介质)包埋的样本的冷冻组织切片的显色或荧光免疫组织化学染色来评估。

图3A显示了肿瘤区域内A_2AR⁺细胞的基线密度和对inupadenan的最佳应答的ROC曲线(n＝28)。曲线下面积(AUC)为0.71(95％置信区间：0.47-0.94)。在选定的截止值，灵敏度为75％，特异性为70％。

图3B显示了使用优化截止值通过_2AR⁺细胞密度进行的存活分析。显示了无进展生存期的风险比(HR)，置信区间为95％和对数秩检验(n＝29)的p值。

图3C显示了可评估RECIST受试者(n＝38)中目标病灶直径总和的最佳百分比变化的瀑布图。绿色：具有低基线肿瘤A_2AR的受试者；深蓝色：A_2AR高的受试者；浅蓝色：A_2AR数据不可用。对于无法获得A_2AR数据的两名患者，显示了通过Nanostring评估的低于(低)或高于(高)平均ADORA2A水平的基因表达水平。*无进展>6个月。

实施例3-人细胞系中A_2AR表达的评估

使用定量逆转录PCR(RT-qPCR)、免疫印迹和流式细胞术在人细胞系包括肿瘤来源的细胞系(购自ATCC和DSMZ)和过表达A_2AR或A2B的HEK-293(分别为hA_2AR HEK-293和hA_2BRHEK-293，均来自Perkin Elmer)上分析A_2AR表达。

相同的方法可应用于从任何患者来源的组织材料中提取的RNA和蛋白质，包括肿瘤切除、活检或抽吸物。

如图4A所示，通过qRT-PCR在六种人肿瘤细胞系以及HEK-293野生型或过表达A_2AR中分析ADORA2A表达。每个条代表平均CNRQ(校准的归一化相对数量)。该实验一式三份进行。

如图4B所示，通过免疫印迹评估了六种人肿瘤细胞系中的A_2AR表达，并以HEK-293野生型或过表达A_2AR或A_2BR作为对照。

使用流式细胞术在HEK-293野生型或过表达A_2AR(hA_2AR HEK-293)上分析A_2AR表达。流式细胞术允许使用识别细胞内和细胞外A_2AR结构域的抗体并使用靶向A_2AR的探针来检测A_2AR。

相同的方法可以应用于从新鲜或冷冻肿瘤样品中分离的人类细胞和血细胞。

收获在适当的培养基中生长至亚汇合状态的细胞并用磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤一次。从200万个细胞沉淀物中提取总RNA(RNeasy Plus Mini Kit，Qiagen)，并使用TurboDNA-free试剂盒(Ambion)去除最终的污染DNA。通过Nanodrop one(Thermo Scientific，Isogen Lifescience)定量后，将2μg RNA逆转录为cDNA(RevertAid RT试剂盒，ThermoScientific)。使用针对ADORA2A基因的人ADORA2A FAM-MGB引物/探针组(Hs00169123_m1/1571730，ThermoFisher Scientific)以及人POLR2A FAM-MGB和人SDHA FAM-MGB引物/探针组(Hs00172187_m1/160358和Hs00417200_m1/1506652，都来自ThermoFisher Scientific)在LightCycler 96机器(Roche)上每孔20ng cDNA进行qPCR。使用软件“qbase+”(Biogazelle)分析数据并由此计算校准的归一化相对数量(CNRQ)值。使用2个管家基因(POLR2A和SDHA)进行归一化。

收集200万个细胞，并与RIPA裂解缓冲液(R0278，Sigma-Aldrich)和蛋白酶抑制剂(8159680747，Thermo Scientific)在冰上孵育30分钟。以13,000rpm(10min，4℃)离心后，收集上清液并使用BCA蛋白质检测试剂盒(23227，Thermo Scientific)测定蛋白质浓度。将5微克(hA_2AR HEK-293)或20微克(其他细胞系)蛋白质与Laemmli缓冲液(补充有10％新鲜β-巯基乙醇)一起在95℃煮沸(5分钟)。通过电泳分离后，将蛋白质转移到硝酸纤维素膜上。然后用TBST 5％脱脂奶在室温将膜封闭一小时。将原代小鼠单克隆抗A_2AR抗体(克隆7F6-G5-A2，Novus Biologicals，在TBST 1％脱脂牛奶中按1:1000稀释)在4℃孵育过夜。洗膜3次后，将抗小鼠HRP二抗(7076S，Cell Signaling Technology，1:1000稀释)在室温孵育1小时。洗涤三次后，通过添加ECL底物(170-5060，Bio-Rad)并在Westburg LI_OCR机器中读取，对膜进行显影。

为了使用A_2AR抗体进行细胞内染色，按照供应商的建议(Foxp3/转录因子染色缓冲液套装，eBioscience)对HEK-293野生型和hA_2AR HEK-293细胞进行洗涤、固定和透化，并使用AF647缀合的小鼠单克隆抗A_2AR抗体(克隆7F6-G5-A2，Novus Biologicals，稀释1:50)在4℃染色30分钟。洗涤后，将细胞重悬于FACS缓冲液中，在BD LSR Fortessa中采集并使用FlowJo v10.7.2进行分析。

为了用A_2AR探针(A647缀合的EOS850)染色，洗涤HEK-293野生型和hA_2AR HEK-293，并且在使用人FoxP3缓冲液组(#560098，BD Bioscience)进行固定和透化之后(灰色)，之前(紫色)或不使用(粉色)的情况下，在4℃将A_2AR探针添加到细胞中持续30分钟。洗涤后，将细胞重悬于FACS缓冲液中，在BD LSR Fortessa中采集并使用FlowJo v10.7.2进行分析。

实施例4-非临床肿瘤组织样品中A_2AR表达的评估

使用荧光IHC和原位杂交(ISH)评估人类肿瘤组织样品中的A_2AR和ADORA2A表达，如显色ISH(CISH)所示。

肿瘤组织样品中的A_2AR⁺细胞(图6A)和ADORA2A表达(图6B)。A：用抗A_2AR(绿色)和抗CD3(红色)抗体共染色的组织切片的代表性图像。B：组织切片上CISH的代表性图像。箭头表示ADORA2A RNA分子。

免疫荧光

脱蜡后，将人类肿瘤组织切片(4-5μm)与载玻片一起孵育，并与CC1缓冲液(#06414575001，Roche，pH 9)在95℃孵育40分钟以进行抗原修复。抑制内源性过氧化物酶8分钟并封闭非特异性位点4分钟后，一抗(小鼠单克隆抗A_2AR抗体，克隆7F6-G5-A2，NovusBiologicals，1:500稀释和预稀释抗CD3(2GV6)兔单克隆抗体，#5278422001，Ventana)在37℃孵育1小时，然后与二抗(Alexa Fluor 488缀合的山羊抗兔IgG(H+L)高度交叉吸附二抗，#A11034，来自Thermo Fisher，1:200稀释，以及Alexa Fluor 568缀合的山羊抗小鼠IgG(H+L)高度交叉吸附二抗，#A11031，来自Thermo Fisher，1:1000稀释))在室温孵育1小时。载玻片清洁后，添加DAPI持续5分钟。免疫荧光结果如图6A所示。

显色原位杂交(CISH)

在Leica Bond RX平台上使用RNAscope 2.5LS Red Assay通过CISH评估A_2A受体RNA表达。在应用A2A探针之前，使用dapB阴性探针和Hs-PPIB阳性探针验证肿瘤组织的mRNA质量和可及性(accessibility)。ADORA2A染色的载玻片和对照用Nanozoomer(HAMAMATSU)进行数字化。病理学家根据细胞中可视化的RNA信号(点)的数量使用RNAscope评分系统(半定量评分范围为0到4)对ADORA2A ISH染色的样本进行评分。每个切片分析了三到四个视野。对于每个切片，还使用RNAscope评分指南和HALO软件计算H分数。CISH的结果示于图6B中。

Claims (32)

1.在有需要的受试者中治疗特征在于增加的A_2AR表达或A_2AR⁺细胞密度的癌症的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的腺苷受体拮抗剂。

2.在有需要的受试者中治疗癌症的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的腺苷受体拮抗剂，其中所述受试者先前已被鉴定为具有增加的A_2AR表达或A_2AR⁺细胞密度。

3.在有需要的受试者中治疗疾病或病症的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的腺苷受体拮抗剂，其中所述受试者先前已被鉴定为具有增加的A_2AR表达或A_2AR⁺细胞密度。

4.在有需要的患者中治疗癌症的方法，其包括

选择患有诊断为增加的A_2AR表达水平或A_2AR⁺细胞密度的癌症的患者；和

用腺苷受体拮抗剂治疗所述患者。

5.选择患有癌症的受试者用腺苷受体拮抗剂进行治疗的方法，其包括

检测来自所述受试者的样品中的A_2AR表达水平或A_2AR⁺细胞密度；

将A_2AR表达水平或A_2AR⁺细胞密度与参考水平或密度进行比较；

基于上一步的比较选择受试者用腺苷受体拮抗剂进行治疗。

6.权利要求5所述的方法，其中当A_2AR表达或A_2AR⁺细胞密度增加时，选择所述受试者进行治疗。

7.权利要求5或6所述的方法，其中所述样品是肿瘤组织样品。

8.腺苷受体拮抗剂，其用于治疗有需要的患者的癌症，其中所述癌症的特征在于增加的A_2AR表达或A_2AR⁺细胞密度。

9.权利要求1-4或6-7中任一项所述的方法，或根据权利要求8所述使用的腺苷受体拮抗剂，其中A_2AR表达或A_2AR⁺细胞密度通过与来自未受癌症影响和/或未诊断患有癌症的受试者的样品中测定的参考水平或密度相比增加。

10.权利要求1-4或6-7中任一项所述的方法，或根据权利要求8所述使用的腺苷受体拮抗剂，其中A_2AR表达水平或A_2AR⁺细胞密度通过与来自同一受试者的非癌性样品中测定的参考水平或密度相比增加。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法或所述使用的腺苷受体拮抗剂，其中A_2AR表达水平使用基因表达谱分析来测量。

12.根据权利要求1-11中任一项所述的方法或所述使用的腺苷受体拮抗剂，其中A_2AR表达水平或A_2AR⁺细胞密度使用选自Nanostring技术、免疫组织化学(IHC)、定量逆转录PCR(RT-qPCR)、免疫印迹、流式细胞术、荧光IHC和原位杂交的测定来测量。

13.根据权利要求12所述的方法或所述使用的腺苷受体拮抗剂，其中所述测定是Nanostring技术。

14.根据权利要求12所述的方法或所述使用的腺苷受体拮抗剂，其中所述测定是免疫组织化学(IHC)。

15.根据权利要求12所述的方法或所述使用的腺苷受体拮抗剂，其中所述测定是RT-qPCT。

16.根据权利要求12所述的方法或所述使用的腺苷受体拮抗剂，其中所述测定是免疫印迹。

17.根据权利要求12所述的方法或所述使用的腺苷受体拮抗剂，其中所述测定是流式细胞术。

18.根据权利要求12所述的方法或所述使用的腺苷受体拮抗剂，其中所述测定是荧光IHC。

19.根据权利要求12所述的方法或所述使用的腺苷受体拮抗剂，其中所述测定是原位杂交。

20.根据权利要求1-19中任一项所述的方法或所述使用的腺苷受体拮抗剂，其中A_2ARlog2表达值相对于参考值大于约3.95。

21.根据权利要求1-19中任一项所述的方法或所述使用的腺苷受体拮抗剂，其中增加的A_2AR⁺细胞密度等于或高于约13A_2AR⁺细胞/mm²。

22.根据权利要求1-19中任一项所述的方法或所述使用的腺苷受体拮抗剂，其中增加的A_2AR⁺细胞密度等于或高于约18A_2AR⁺细胞/mm²。

23.根据权利要求1-22中任一项所述的方法或所述使用的腺苷受体拮抗剂，其中所述腺苷受体拮抗剂是A_2AR拮抗剂。

24.根据权利要求1-23中任一项所述的方法或所述使用的腺苷受体拮抗剂，其中所述腺苷受体拮抗剂选自：

(R,S)-5-氨基-3-(2-(4-(2,4-二氟-5-(2-(甲基亚磺酰基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；

(R)-5-氨基-3-(2-(4-(2,4-二氟-5-(2-(甲基亚磺酰基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮；和

(S)-5-氨基-3-(2-(4-(2,4-二氟-5-(2-(甲基亚磺酰基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-8-(呋喃-2-基)噻唑并[5,4-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-2(3H)-酮，

或其药学上可接受的盐。

25.根据权利要求1-24中任一项所述的方法或所述使用的腺苷受体拮抗剂，其进一步包括施用另外的治疗剂。

26.根据权利要求25所述的方法或所述使用的腺苷受体拮抗剂，其中所述腺苷受体拮抗剂在所述另外的治疗剂之前施用。

27.根据权利要求25所述的方法或所述使用的腺苷受体拮抗剂，其中所述腺苷受体拮抗剂与所述另外的治疗剂同时施用。

28.根据权利要求25所述的方法或所述使用的腺苷受体拮抗剂，其中所述腺苷受体拮抗剂在所述另外的治疗剂之后施用。

29.根据权利要求1-28中任一项所述的方法或所述使用的腺苷受体拮抗剂，其中所述受试者先前已接受过用另外的治疗剂治疗。

30.根据权利要求1-29中任一项所述的方法或所述使用的腺苷受体拮抗剂，其中所述癌症选自肺癌、子宫内膜癌、胃癌、黑色素瘤、乳腺癌、结肠直肠癌、口腔鳞状细胞癌和头/颈癌。

31.根据权利要求1-29中任一项所述的方法或所述使用的腺苷受体拮抗剂，其中所述癌症选自黑色素瘤、前列腺癌、头颈癌和非小细胞肺癌。

32.根据权利要求1-30中任一项所述的方法，其中所述A_2AR⁺细胞是TIL。