CN117126749A - 一种南海海百合来源真菌及其应用 - Google Patents
一种南海海百合来源真菌及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN117126749A CN117126749A CN202311077055.8A CN202311077055A CN117126749A CN 117126749 A CN117126749 A CN 117126749A CN 202311077055 A CN202311077055 A CN 202311077055A CN 117126749 A CN117126749 A CN 117126749A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- fungus
- lilium
- source
- sea
- south
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 241000233866 Fungi Species 0.000 title claims abstract description 37
- 241001634096 Lilium martagon Species 0.000 title description 3
- 241000234435 Lilium Species 0.000 claims abstract description 42
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims abstract description 14
- 241001157003 Penicillium brocae Species 0.000 claims abstract description 9
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 8
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 claims abstract description 5
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 claims abstract description 5
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 23
- SIOXPEMLGUPBBT-UHFFFAOYSA-N picolinic acid Chemical class OC(=O)C1=CC=CC=N1 SIOXPEMLGUPBBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 7
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 claims description 5
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 claims description 5
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 5
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims description 4
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 claims 1
- -1 picolinic acid alkaloid compounds Chemical class 0.000 abstract description 36
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 abstract description 28
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 abstract description 12
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 abstract description 12
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 abstract description 6
- 239000002994 raw material Substances 0.000 abstract description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 abstract description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 abstract description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 abstract description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000000235 effect on cancer Effects 0.000 abstract 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 13
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 10
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 description 10
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 241000209094 Oryza Species 0.000 description 8
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 8
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 7
- 229930013930 alkaloid Natural products 0.000 description 6
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 6
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 5
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 5
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 238000002330 electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 4
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 4
- SRCZQMGIVIYBBJ-UHFFFAOYSA-N ethoxyethane;ethyl acetate Chemical compound CCOCC.CCOC(C)=O SRCZQMGIVIYBBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 4
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 4
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 101800005151 Cholecystokinin-8 Proteins 0.000 description 3
- 102400000888 Cholecystokinin-8 Human genes 0.000 description 3
- 241000228143 Penicillium Species 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N sincalide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C1=CC=C(OS(O)(=O)=O)C=C1 IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LDVVTQMJQSCDMK-UHFFFAOYSA-N 1,3-dihydroxypropan-2-yl formate Chemical compound OCC(CO)OC=O LDVVTQMJQSCDMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000223600 Alternaria Species 0.000 description 2
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 2
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 2
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 2
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 2
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 2
- 238000002114 high-resolution electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 2
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 description 2
- 230000005311 nuclear magnetism Effects 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 238000005191 phase separation Methods 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Chemical class 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 229930000044 secondary metabolite Natural products 0.000 description 2
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 2
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 108010069514 Cyclic Peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000001189 Cyclic Peptides Human genes 0.000 description 1
- 241000258955 Echinodermata Species 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- SESFRYSPDFLNCH-UHFFFAOYSA-N benzyl benzoate Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(=O)OCC1=CC=CC=C1 SESFRYSPDFLNCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 239000002532 enzyme inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229940125721 immunosuppressive agent Drugs 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 229940081066 picolinic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000010069 protein adhesion Effects 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 235000019991 rice wine Nutrition 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000013341 scale-up Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 150000003505 terpenes Chemical class 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
- C12N1/145—Fungal isolates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/06—Fungi, e.g. yeasts
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/16—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing two or more hetero rings
- C12P17/165—Heterorings having nitrogen atoms as the only ring heteroatoms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
- C12R2001/80—Penicillium
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Mycology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Botany (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Virology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
Abstract
本发明属于生物医药技术领域,具体涉及一种南海海百合来源真菌及其应用。本发明的南海海百合来源真菌命名为Penicillium brocae SYSU‑CJ‑17,所述南海海百合来源真菌的发酵代谢物可以分离纯化得到吡啶甲酸类生物碱化合物,这类化合物对癌症具有显著的抑制作用,在制备抗癌药物中具有较好的开发前景;并且本发明提供的南海海百合来源真菌可以利用现代微生物发酵工程技术进行再生产、无原材料后顾之忧,也不会破坏生态平衡,易实现大规模产业化,可以作为可再生性药物资源,为研究与开发海洋微生物制品和海洋微生物药物提供了丰富的原料来源。
Description
技术领域
本发明属于生物医药技术领域。更具体地,涉及一种南海海百合来源真菌及其应用。
背景技术
海洋真菌是海洋微生物的重要组成部分,海洋真菌活性代谢产物是海洋微生物代谢产物的重要分支之一。海洋真菌菌株的代谢产物包括新颖的骨架和各种类型取代基,具有不同的结构类型,如萜类化合物、肽类化合物、生物碱类化合物、酮类化合物、酯类化合物等,具有不同的生物活性。其中,萜类化合物具有抗癌、抗菌、抗微生物等活性;肽类化合物,尤其是环肽类化合物,可以是抗生素、毒素、免疫抑制剂、离子转移调节器、蛋白黏合抑制剂、酶抑制剂等。
海百合是目前现存的古老的棘皮动物,主要分为有柄海百合和无柄海百合。海百合心动迟缓,为了躲避敌人的进攻,往往会产生一些具有刺激性的“化学武器”进行防御,并且大部分的海百合都有着鲜艳的色彩,预示着其含有较强的活性化合物。已有文献报道,可以从海百合中提取分离得到多种抗肿瘤活性和抗菌活性的化合物。并且,研究表明,一些生物体的活性代谢产物实际上是由其共附生微生物产生的。如李永芳等对采自湛江海百合共附生真菌Alternaria brassicae93的次级代谢产物进行分离纯化,得到5个化合物,确定所得化合物的理化性质、波谱数据,发现不同化合物具有不同的生理活性(李永芳.海百合Comanthinaschlegeli共附生真菌Alternaria brassicae 93次级代谢产物研究[J].中山大学学报(自然科学版),2015(54):75-78.DOI:10.13471/j.cnki.acta.snus.2015.04.014.)。除此以外,海洋微生物中还含有大量的微生物或活性物质有待发掘。
发明内容
本发明要解决的技术问题是海洋微生物中还含有大量的微生物或活性物质未被发掘的缺陷和不足,提供一种南海海百合来源真菌,所述真菌的发酵产物中可以分离纯化得到具有抑制癌细胞的吡啶甲酸类生物碱。
因此,本发明的另一个目的是提供所述南海海百合来源真菌在制备吡啶甲酸类生物碱中的应用。
所述吡啶甲酸类生物碱具有抗癌效果本发明还有一目的是提供所述南海海百合来源真菌在制备抗癌药物中的应用。
本发明上述目的通过以下技术方案实现:
一种南海海百合来源真菌,所述南海海百合来源真菌命名为PenicilliumbrocaeSYSU-CJ-17,保藏在广东省微生物菌种保藏中心,保藏日期是2023年05月26日,保藏号是GDMCC No:63444。
进一步地,所述南海海百合来源真菌在中国南海海百合中分离得到。
更进一步地,所述南海海百合来源真菌的培养基为PDA培养基、PDB培养基、孟加拉红培养基中的一种或多种。优选地,种子培养时,可以加入20~30g/L的盐。
进一步地,所述南海海百合来源真菌的培养条件为:25-28℃,3-5天。
优选地,放大发酵时,可以采用大米培养基。具体的,所述大米培养基为40~50g大米,50mL 2~3%的盐水,置于培养瓶混匀后密封,经高温灭菌锅121℃(0.1MPa)高温灭菌25min冷却至室温,放置2天,即得。
另外的,本发明还提供了所述南海海百合来源真菌在制备吡啶甲酸类生物碱中的应用。
进一步地,所述吡啶甲酸类生物碱具有式(I)、(II)结构:
更进一步地,所述吡啶甲酸类生物碱具有抗癌效果。
因此,本发明进一步要求保护所述南海海百合来源真菌在制备抗癌药物中的应用。
进一步地,所述癌为胃癌、乳腺癌。
更进一步地,所述药物的剂型为口服剂、注射剂、外用剂或吸入剂。
本发明具有以下有益效果:
本发明提供了一种南海海百合来源真菌,命名为Penicillium brocaeSYSU-CJ-17,所述南海海百合来源真菌的发酵代谢物可以分离纯化得到吡啶甲酸类生物碱化合物,这类化合物对癌症具有显著的抑制作用,在制备抗癌药物中具有较好的开发前景;并且本发明提供的南海海百合来源真菌可以利用现代微生物发酵工程技术进行再生产、无原材料后顾之忧,也不会破坏生态平衡,易实现大规模产业化,可以作为可再生性药物资源,为研究与开发海洋微生物制品和海洋微生物药物提供了丰富的原料来源。
附图说明
图1为本发明实施例1所得吡啶甲酸类生物碱化合物(I)的核磁共振氢谱图。
图2为本发明实施例1所得吡啶甲酸类生物碱化合物(I)的核磁共振碳谱图。
图3为本发明实施例1所得吡啶甲酸类生物碱化合物(I)的HRESIMS质谱图。
图4为本发明实施例2所得吡啶甲酸类生物碱化合物(II)的核磁共振氢谱图。
图5为本发明实施例2所得吡啶甲酸类生物碱化合物(II)的核磁共振碳谱图。
图6为本发明实施例2所得吡啶甲酸类生物碱化合物(II)的HRESIMS质谱图。
图7为本发明所得吡啶甲酸类生物碱化合物(I)和(II)在不同梯度浓度下抑制各种胃癌细胞系的实验结果数据统计图。
具体实施方式
以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本发明,但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明,本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。
本发明实施例中所采用的真菌为海洋真菌,该海洋真菌为一株来自中国南海海百合的萼部分离得到的真菌。通过测序得到该菌株的ITS-rRNA基因片段序列为:
GTGCTTCTGAGTGAGGTCTCTGGGTCCACCTCCCACCCGTGTTTACCGTACCCTGTTGCTTCGGCGCGCCCGCCCTCGCGGCCGCCGGGGGGCCTCCGCCCCCGGGCCCGTGCCCGCCGAAGACACCCCTGAACGCTGTCTGAAGATTGTCGTCTGAGCGAATAGCGAAAAATAAGTTAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCCGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAACTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAGTCTTTGAACGCACATTGCGCCCCCTGGTATTCCGGGGGGCATGCCTGTCCGAGCGTCATTGCTGCCCTCAAGCCCGGCTTGTGTGTTGGGCCGCCGTCCCCCCCTTCCCGGGGGGACGGGCCCGAAAGGCAGCGGCGGCACCGCGTCCGGTCCTCGAGCGTATGGGGCTCTGTCACCCGCTCTGCAGGCCCGGCCGGCGCCAGCCGACCCCCATCATCCTTTTTTTCAGGTTGACCTCGGATCAGGTAGGGATACCCGCTGAACTTAAGCATATCAAAA。
经过分子生物学鉴定,其分类为Penicillium brocae,真菌命名为Penicilliumbrocae SYSU-CJ-17,保藏在广东省微生物菌种保藏中心,保藏日期是2023年05月26日,保藏号是GDMCC No:63444。
种子培养基:按照每升水中加入30g海盐和24g PDB培养基粉末进行配制,平均分配到4个1L锥形瓶内,经高温灭菌锅121℃(0.1MPa)条件灭菌25min,冷却至室温,静置24小时,即得。
大米培养基:50g大米,50mL3%的盐水,置于培养瓶混匀后密封,经高温灭菌锅121℃(0.1MPa)高温灭菌25min冷却至室温,放置2天,即得。
除非特别说明,以下实施例所用试剂和材料均为市购。
实施例1南海海百合来源真菌Penicillium brocae SYSU-CJ-17发酵制备吡啶甲酸类生物碱化合物(I)
1、南海海百合来源真菌Penicillium brocae SYSU-CJ-17发酵制备吡啶甲酸类生物碱化合物(I)具体包括以下步骤:
S1、种子培养液的获得:将南海海百合来源真菌Penicillium brocaeSYSU-CJ-17接入种子培养基,将接种后的锥形瓶放置在摇床上,摇床转速100~150rpm,25℃恒温培养72小时,获得种子培养液。
S2、发酵培养:挑选瓶内无染菌现象的培养基接种到大米培养基中,每瓶接种10mL菌种(步骤S1所得种子培养液),共接种200瓶,室温静置培养30天得发酵物。
S3、提取分离:发酵培养后,将S2所得发酵物用乙酸乙酯浸泡提取,减压浓缩提取液得粗浸膏;分别以不同体积比的石油醚-乙酸乙酯作为洗脱剂,依次用体积比为5:1、4:1、3:1、2:1、1:1、2:3、1:4、0:1的石油醚-乙酸乙酯进行梯度洗脱,对粗浸膏采用硅胶柱进行层析分离,分别得到不同极性组分。
S4、高效液相分离纯化:将步骤S3中所得石油醚-乙酸乙酯体积比为1:1的洗脱部分通过高效液相色谱分离纯化,所述高效液相色谱的条件为:流动相:60%MeOH–40%H2O;流速:3mL/min,检测波长为230nm或275nm,色谱柱:半制备柱Ultimate XB-Phenyl,10×250mm,5μm;仪器Essentia LC-16,在保留时间12min处得到白色粉末。
2、吡啶甲酸类生物碱化合物(I)的表征:
对所得白色粉末进行核磁共振和质谱检测,所得谱图如图1~3所示,经分析检测,该化合物结构的理化性质数据如下:
UV(MeOH)λmax(logε)229.6(4.08),269.4(3.78);
IR(neat)νmax 3367cm-1,2917cm-1,2844cm-1,1720cm-1,1574cm-1,1431cm-1,1389cm-1,1312cm-1,1254cm-1,1216cm-1,1154cm-1,1119cm-1,1077cm-1,1016cm-1,869,796cm-1,708cm-1,630cm-1;
HR-ESIMS m/s 515.2752[M+H]+(calcd for C28H39N2O7,515.2752),详细信息如表1所示。
表1吡啶甲酸类生物碱化合物(I)的HR-ESIMS信息
NMR核磁的数据:
13C NMR(150MHz,CDCl3)δC 171.11C,165.92C,165.06C,150.12CH,149.75CH,145.58C,144.93C,142.96C,142.35C,137.23CH,136.80CH,125.46CH,125.04CH,67.85CH,67.13CH2,65.08CH2,52.88CH3,33.15CH2,33.12CH2,30.92CH2,30.90CH2,29.52CH2,29.40CH2,29.17CH2,29.14CH2,20.93CH2.
1H NMR(600MHz,CDCl3)δH 8.54s,8.53s,8.06d,8.04d,7.65dd,7.62dd,4.47dd,4.41dd,4.29–4.25m,4.22d,3.98s,2.67td,2.07s,1.61q,1.33–1.20m。
从质谱和核磁共振的结果分析可确定化合物式(I)的分子式为C28H38N2O7。
从平面结构发现化合物(I)的一个手性中心C-19,由于该化合物具有一条柔性的长链,无法通过ECD计算得到准确的构型。但这种具有单甘油片段且只有一个手性中心的化合物手性可以通过旋光来判断,若旋光值若为负值,则该手性中心为S构型,若为正值则是R构型。
因此,通过测定白色粉末的旋光,得到该化合物的旋光数据为(c0.001,MeOH),可判断该化合物(I)的构型为19R。
综上所述,所得白色粉末为吡啶甲酸类生物碱化合物(I),具体结构式如下:
实施例2南海海百合来源真菌Penicillium brocae SYSU-CJ-17发酵制备吡啶甲酸类生物碱化合物(II)
1、南海海百合来源真菌Penicillium brocae SYSU-CJ-17发酵制备吡啶甲酸类生物碱化合物(II)具体包括以下步骤:
S1、种子培养液的获得:将南海海百合来源真菌Penicillium brocaeSYSU-CJ-17接入种子培养基中,将接种后的锥形瓶放置在摇床上,摇床转速100~150rpm,25℃恒温培养72小时,获得种子培养液。
S2、发酵培养:挑选瓶内无染菌现象的培养基进行接种到大米培养基中,每瓶接种10mL菌种(步骤S1所得种子培养液),共接种200瓶,静置培养30天得发酵物。
S3、提取分离:发酵培养后,将S2所得发酵物用乙酸乙酯浸泡提取,减压浓缩提取液得粗浸膏;分别以不同体积比的石油醚-乙酸乙酯作为洗脱剂,依次用体积比为5:1、4:1、3:1、2:1、1:1、2:3、1:4、0:1的石油醚-乙酸乙酯进行梯度洗脱,对粗浸膏采用硅胶柱进行层析分离,分别得到不同极性组分。
S4、高效液相分离纯化:将步骤S3中所得石油醚-乙酸乙酯体积比为1:1的洗脱部分通过高效液相色谱分离纯化,所述高效液相色谱的条件为:流动相:60%MeOH-H2O;流速:3mL/min,色谱柱:半制备柱Ultimate XB-Phenyl,10×250mm,5μm;仪器Essentia LC-16,在保留时间8.5min处得到淡黄色无定形物。
2、吡啶甲酸类生物碱化合物(II)的表征:
对所得淡黄色无定形物进行核磁共振和质谱检测,所得谱图如图4~6所示,经分析检测,该化合物结构的理化性质数据如下:
UV(MeOH)λmax(logε)229.8(4.07),268.7(3.78)nm;
IR(neat)νmax 3352cm-1,2913cm-1,2852cm-1,1704cm-1,1655cm-1,1570cm-1,1428cm-1,1389cm-1,1312cm-1,1246cm-1,1204cm-1,1116cm-1,1023cm-1,862cm-1,773cm-1,696cm-1,626cm-1;
HR-ESIMS m/s 473.2650[M+H]+(calcd for C26H37N2O6,473.2646),详细信息如表2所示。
表2吡啶甲酸类生物碱化合物(II)的HR-ESIMS信息
NMR核磁的数据:
13C NMR(150MHz,CD3OD)δC 166.57C,165.95C,150.71CH,150.67CH,146.27C,146.24C,144.54C,144.40C,138.85CH,138.75CH,126.42CH,126.18CH,71.13CH,68.15CH2,63.88CH2,53.10CH3,33.76CH2,31.97CH2,31.95CH2,30.52CH2,30.38CH2,30.17CH2.
1H NMR(600MHz,CD3OD)δH 8.51dd,8.12d,8.06d,7.83ddd,4.46dd 4.33dd,4.00dt,3.95s,3.65d,2.73q,1.68–1.61m,1.35–1.25m。
从质谱和核磁共振的结果分析可确定化合物式(II)的分子式为C26H36N2O6。
从平面结构发现化合物(II)的一个手性中心C-19,由于该化合物具有一条柔性的长链,无法通过ECD计算得到准确的构型。但这种具有单甘油片段且只有一个手性中心的化合物手性可以通过旋光来判断,若旋光值若为负值,则该手性中心为S构型,若为正值则是R构型。
因此,测定所得淡黄色无定形物的旋光,得到该化合物的旋光数据为 (c0.001,MeOH)可以判断该化合物的手性为19S。
综上所述,所得淡黄色无定形物为吡啶甲酸类生物碱化合物(II),具体结构式如下:
实施例3化合物的抗癌活性测试
1、细胞培养
本实施例中所用胃癌细胞系(MGC803、MKN45、HGC27、AGS、SNU1和KATO3)培养于含有10%胎牛血清(FBS)和1%青霉素/链霉素的RPIM-1640培养基(以下简称为培养基)中,细胞放置于含有5%CO2,温度为37℃的细胞培养箱中培养。
2、CCK8法测定细胞活力
将500个细胞均匀稀释于100μL培养基,接种于96孔板中,细胞培养24h后,将化合物(I)或化合物(II)稀释成不同浓度,并以50μL的培养基添加到每孔中;连续4天细胞孵育后加入CCK8试剂,96孔板在含5%CO2,37℃的培养箱中继续孵育1~2小时;根据CCK8试剂盒的说明在450nm处测量吸光度。最终结果显示为百分比,采用GraphPad Prism 7软件计算体外IC50值。其抑制率计算公式为[OD(加药组)-OD(对照组)]/[OD(对照组)-OD(空白组)]×100%。
结果参见图7,由图可见化合物(I)和(II)可以剂量依赖性的抑制胃癌细胞的增殖活性。
上述实施例为本发明较佳的实施方式,但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制,其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化,均应为等效的置换方式,都包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种南海海百合来源真菌,其特征在于,所述南海海百合来源真菌命名为Penicillium brocae SYSU-CJ-17,保藏在广东省微生物菌种保藏中心,保藏日期是2023年05月26日,保藏号是GDMCC No:63444。
2.根据权利要求1所述南海海百合来源真菌,其特征在于,所述南海海百合来源真菌在中国南海海百合中分离得到。
3.根据权利要求1所述南海海百合来源真菌,其特征在于,所述南海海百合来源真菌的培养基为PDB培养基、PDA培养基、孟加拉红培养基中的一种或多种。
4.根据权利要求1所述南海海百合来源真菌,其特征在于,所述南海海百合来源真菌的培养条件为:25-28℃,3-5天。
5.权利要求1~4任一所述南海海百合来源真菌在制备吡啶甲酸类生物碱中的应用。
6.根据权利要求5所述应用,其特征在于,所述吡啶甲酸类生物碱具有式(I)、(II)结构:
7.根据权利要求6所述应用,其特征在于,所述吡啶甲酸类生物碱具有抗癌效果。
8.权利要求1~4任一所述南海海百合来源真菌在制备抗癌药物中的应用。
9.根据权利要求8所述应用,其特征在于,所述癌为胃癌、乳腺癌。
10.根据权利要求8所述应用,其特征在于,所述药物的剂型为口服剂、注射剂、外用剂或吸入剂。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202311077055.8A CN117126749A (zh) | 2023-08-24 | 2023-08-24 | 一种南海海百合来源真菌及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202311077055.8A CN117126749A (zh) | 2023-08-24 | 2023-08-24 | 一种南海海百合来源真菌及其应用 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN117126749A true CN117126749A (zh) | 2023-11-28 |
Family
ID=88857796
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202311077055.8A Pending CN117126749A (zh) | 2023-08-24 | 2023-08-24 | 一种南海海百合来源真菌及其应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN117126749A (zh) |
-
2023
- 2023-08-24 CN CN202311077055.8A patent/CN117126749A/zh active Pending
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN103865808A (zh) | 一种源于桔青霉的青霉烯醇a1的抗肿瘤新用途 | |
CN107298672B (zh) | 源于草酸青霉的黑麦酮酸i在制备抗人结肠癌药物的应用 | |
CN103865809A (zh) | 一种源于桔青霉的青霉烯醇b1的抗肿瘤新用途 | |
CN113105428A (zh) | 一种氧杂蒽酮类化合物及其制备方法和用途 | |
CN104531540A (zh) | 一种源于桔青霉的青霉烯醇a2的抗肿瘤用途 | |
CN110117546B (zh) | 一种海洋真菌来源的萘醌类化合物及其抗炎应用 | |
CN107298669B (zh) | 源于草酸青霉的黑麦酮酸i及抗人口腔表皮样癌药物应用 | |
CN104592082A (zh) | 源于桔青霉的青霉烯醇d2制备方法及其应用 | |
CN102030753B (zh) | 异戊烯基化吲哚类生物碱及其制备方法和应用 | |
CN117126749A (zh) | 一种南海海百合来源真菌及其应用 | |
CN111072670A (zh) | 一种二酮哌嗪类化合物及其制备方法和用途 | |
CN107686817B (zh) | 一株阔苞菊内生真菌CYSK-4及其生产的Ascomylactam类化合物的应用 | |
CN110511228A (zh) | 一种灰黄青霉碱双醚a及制备和用途 | |
CN112300243B (zh) | 一种环肽化合物及其制备方法和应用 | |
CN106047751B (zh) | 一株拟诺卡氏放线菌及其活性代谢产物的分离方法与应用 | |
CN110407794B (zh) | 源于草酸青霉的黑麦酮酸k及在抑制癌细胞增殖上的应用 | |
CN116199695B (zh) | 一类桔霉素衍生物及其制备方法和应用 | |
CN101302211A (zh) | 一种含有双噁唑环的大环内酯化合物 | |
WO2005063963A1 (en) | Microorganism producing tacrolimus and mass-productive method tacrolimus using the same | |
CN101423521A (zh) | 两种异黄酮类化合物制备方法及其抗肿瘤与抗植物病菌用途 | |
CN109134417B (zh) | 源于草酸青霉的黑麦酮酸i及抗人子宫颈癌药物的应用 | |
CN117126105A (zh) | 一种吡啶甲酸类生物碱及其制备方法与应用 | |
CN115073413B (zh) | 一种苯并环醚类倍半萜类化合物及其制备方法与应用 | |
CN109384828A (zh) | 抗耐药菌活性物质青霉碱醚a及制备和用途 | |
CN104447475B (zh) | 源于桔青霉的青霉烯醇 d1制备方法及其应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination |