CN117126154A - 一种芳基取代五元芳杂环化合物的结晶及其制备方法 - Google Patents

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CN117126154A
CN117126154A CN202310585427.1A CN202310585427A CN117126154A CN 117126154 A CN117126154 A CN 117126154A CN 202310585427 A CN202310585427 A CN 202310585427A CN 117126154 A CN117126154 A CN 117126154A
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孙龙伟
侯延婷
朱嘉俊
王中利
谢蓝
罗志阳
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Abstract

本公开涉及一种芳基取代五元芳杂环化合物的结晶及其制备方法，具体而言，提供了如式I所示化合物的晶型及其制备方法。

Description

一种芳基取代五元芳杂环化合物的结晶及其制备方法
技术领域
本公开属于药物领域，涉及一种芳基取代五元芳杂环化合物的结晶及其制备方法。
背景技术
磷酸二酯酶(PDEs)为一类裂解在第二信使分子3',5'-环腺苷单磷酸(cAMP)和3',5'-环鸟苷单磷酸(cGMP)上的磷酸二酯键的细胞内酶。环核苷酸cAMP和cGMP在各种细胞途径中充当第二信使。其中，PDE4对cAMP具有高度特异性，有4种亚型：PDE4A、PDE4B、PDE4C和PDE4D。PDE4参与了促进单核细胞与巨噬细胞活化、中性粒细胞浸润、血管平滑肌的增殖、血管扩张以及心肌收缩等相关生理病理过程，对中枢神经系统功能、心血管功能、炎症/免疫系统、细胞黏附等都有影响。PDE4在促炎介质和抗炎介质的表达中起主要调节作用，PDE4抑制剂能够抑制炎症细胞释放有害介质。
近年发现许多PDE4抑制剂。例如，罗氟司特获准用于严重慢性阻塞性肺病(COPD)以减少突然发作的次数或防止COPD症状恶化，阿普司特获批用于治疗患有活动性牛皮癣性关节炎的成人。虽然PDE4抑制剂显示良好药理活性，但这些PDE抑制剂会出现副作用，诸如诱发性胃肠症状如呕吐及腹泻，仍需要开发选择性PDE4抑制剂，尤其对PDE4B和PDE4D具有亲和力的选择性PDE4抑制剂。
PCT/CN2021/133316提供了一类新型的PDE4抑制剂，其化学名为(R)-N-(1-(2-(4-(二氟甲氧基)-3-((四氢呋喃-3-基)氧基)苯基)恶唑-4-基)环丙基)噻唑-4-甲酰胺，具有式I所示的结构，
作为药用活性成分的晶型往往影响到该药物的化学稳定性，结晶条件及储存条件的不同有可能导致化合物的晶型结构的变化，有时还会伴随着产生其他形态的晶型。一般来说，无定形的药物产品没有规则的晶型结构，往往具有其它缺陷，比如产物稳定性较差，析晶较细，过滤较难，易结块，流动性差等。药物的多晶型对产品储存、生产及放大有不同的要求。因此，深入研究前述化合物的晶型，改善前述化合物的各方面性质是很有必要的。
发明内容
本公开提供了式I所示化合物的晶型A，以衍射角2θ角度表示的X-射线粉末衍射图，在12.329、17.273、18.426、20.930、22.954、24.716处有特征峰。
在一些实施方案中，所述晶型A，以衍射角2θ角度表示的X-射线粉末衍射图，在11.475、12.329、17.273、18.426、20.341、20.628、20.930、21.239、22.954、23.785、24.716处有特征峰。
在一些实施方案中，所述晶型A，以衍射角2θ角度表示的X-射线粉末衍射图，在6.222、9.721、11.475、12.329、14.385、17.273、18.426、20.341、20.628、20.930、21.239、21.883、22.954、23.785、24.716、26.156、26.917、27.351处有特征峰。
在一些实施方案中，所述晶型A，以衍射角2θ角度表示的X-射线粉末衍射图谱如图3所示。
本公开还提供了一种上述晶型A的制备方法，其为方法一或方法二：
方法一包括：
(a)将式I所示化合物与溶剂(1)混合；
(b)搅拌析晶；
所述溶剂(1)选自水、硝基甲烷、N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、乙腈、甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇(IPA)、甲基乙基酮(MEK)、四氢呋喃(THF)、1,2-二甲氧基乙烷、乙酸乙酯、氯仿、甲基叔丁基醚(MTBE)、1,2-二甲苯、甲苯、1,4-二氧己环和己烷中的一种或多种；
方法二包括：
(a)将式I所示化合物与溶剂(2)混合；
(b)挥发析晶；
所述溶剂(2)选自丙酮、乙腈、二氯甲烷(DCM)、二氧六环、乙醇、乙酸乙酯、庚烷、异丙醇、甲醇、甲基乙基酮、甲基叔丁基醚、四氢呋喃、甲苯和水中的一种或多种。
在一些实施方案中，所述溶剂(1)为水、硝基甲烷、N,N-二甲基甲酰胺、乙腈、甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇、甲基乙基酮、四氢呋喃、1,2-二甲氧基乙烷、乙酸乙酯、氯仿、甲基叔丁基醚、1,2-二甲苯、甲苯、1,4-二氧己环、己烷、或水和甲醇的混合溶剂。
在一些实施方案中，当所述溶剂(1)为水和甲醇的混合溶剂时，所述水和所述甲醇的摩尔比为0.10-0.95，在非限制性实施方案中为0.10、0.14、0.20、0.26、0.30、0.37、0.40、0.47、0.50、0.57、0.60、0.66、0.70、0.74、0.80、0.82、0.90、0.95。
在一些实施方案中，所述搅拌析晶时的温度为10-60℃，在非限制性实施方案中为10℃、20℃、25℃、30℃、35℃、40℃、45℃、50℃、55℃、60℃。
在一些实施方案中，所述搅拌析晶时的温度为室温。
在一些实施方案中，所述搅拌析晶为打浆析晶。
在一些实施方案中，所述溶剂(2)为丙酮、乙腈、二氯甲烷、二氧六环、乙醇、乙酸乙酯、庚烷、异丙醇、甲醇、甲基乙基酮、甲基叔丁基醚、四氢呋喃、甲苯、水、或以下任一组的混合溶剂：丙酮和二氯甲烷、丙酮和二氧六环、丙酮和乙醇、丙酮和乙酸乙酯、丙酮和庚烷、丙酮和异丙醇、丙酮和甲醇、丙酮和甲基乙基酮、丙酮和甲基叔丁基醚、丙酮和四氢呋喃、丙酮和甲苯、丙酮和水、乙腈和二氯甲烷、乙腈和二氧六环、乙腈和乙醇、乙腈和乙酸乙酯、乙腈和异丙醇、乙腈和甲醇、乙腈和甲基乙基酮、乙腈和甲基叔丁基醚、乙腈和四氢呋喃、乙腈和甲苯、乙腈和水、二氯甲烷和二氧六环、二氯甲烷和乙酸乙酯、二氯甲烷和庚烷、二氯甲烷和异丙醇、二氯甲烷和甲醇、二氯甲烷和甲基乙基酮、二氯甲烷和甲基叔丁基醚、二氯甲烷和四氢呋喃、二氯甲烷和甲苯、二氧六环和乙醇、二氧六环和乙酸乙酯、二氧六环和庚烷、二氧六环和异丙醇、二氧六环和甲醇、二氧六环和甲基乙基酮、二氧六环和甲基叔丁基醚、二氧六环和四氢呋喃、二氧六环和甲苯、二氧六环和水、乙醇和乙酸乙酯、乙醇和庚烷、乙醇和甲醇、乙醇和甲基乙基酮、乙醇和甲基叔丁基醚、乙醇和四氢呋喃、乙醇和甲苯、乙醇和水、乙酸乙酯和庚烷、乙酸乙酯和异丙醇、乙酸乙酯和甲醇、乙酸乙酯和甲基乙基酮、乙酸乙酯和甲基叔丁基醚、乙酸乙酯和四氢呋喃、乙酸乙酯和甲苯、庚烷和异丙醇、庚烷和甲基乙基酮、庚烷和甲基叔丁基醚、庚烷和四氢呋喃、庚烷和甲苯、异丙醇和甲醇、异丙醇和甲基乙基酮、异丙醇和甲基叔丁基醚、异丙醇和四氢呋喃、异丙醇和甲苯、异丙醇和水、甲醇和甲基乙基酮、甲醇和甲基叔丁基醚、甲醇和四氢呋喃、甲醇和甲苯、甲醇和水、甲基乙基酮和甲基叔丁基醚、甲基乙基酮和四氢呋喃、甲基乙基酮和甲苯、甲基叔丁基醚和四氢呋喃、甲基叔丁基醚和甲苯、四氢呋喃和甲苯、四氢呋喃和水。在一些实施方案中，当所述溶剂(2)为混合溶剂时，两者的体积比为1:3-3:1，例如3:1、2:1、1:1、1:2、1:3。
在一些实施方案中，所述挥发析晶时的温度为10-40℃，在非限制性实施方案中为10℃、20℃、25℃、30℃、35℃、40℃。
在一些实施方案中，所述挥发析晶时的温度为室温。
在一些实施方案中，所述溶剂(1)和(2)所用体积(μl)为前述式I所示化合物质量(mg)的1-200倍，在非限制性实施方案中为1、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、200或任意两数之间的值。
在一些实施方案中，所述的搅拌析晶或挥发析晶之后，还包括过滤、洗涤或干燥步骤。
本公开还提供了一种药物组合物，其包括上述晶型A或由上述制备方法制得的晶型A，和任选自药学上可接受的赋形剂。
本公开还提供了一种药物组合物的制备方法，其包括将上述晶型A或由上述制备方法制得的晶型A与药学上可接受的赋形剂混合的步骤。
本公开还提供了一种上述晶型A或由上述制备方法制得的晶型A或上述药物组合物在制备用于预防和/或治疗PDE相关病症的药物中的用途。在一些实施方案中，所述与PDE相关病症为气喘、阻塞性肺病、败血病、肾炎、糖尿病、变应性鼻炎、变应性结膜炎、溃疡性肠炎或风湿病。
本公开还提供了一种上述晶型A或由上述制备方法制得的晶型A或上述药物组合物在制备用于预防和/或治疗气喘、阻塞性肺病、败血病、肾炎、糖尿病、变应性鼻炎、变应性结膜炎、溃疡性肠炎或风湿病的药物中的用途。
本公开所述的“2θ或2θ角度”是指衍射角，θ为布拉格角，单位为°或度；每个特征峰2θ的误差范围为±0.2(包括超过1位小数的数字经过四舍五入后的情况)，可以为-0.20、-0.19、-0.18、-0.17、-0.16、-0.15、-0.14、-0.13、-0.12、-0.11、-0.10、-0.09、-0.08、-0.07、-0.06、-0.05、-0.04、-0.03、-0.02、-0.01、0.00、0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.10、0.11、0.12、0.13、0.14、0.15、0.16、0.17、0.18、0.19、0.20。
依据《中国药典》2015年版四部中“9103药物引湿性指导原则”中引湿性特征描述与引湿性增重的界定，
潮解：吸收足量水分形成液体；
极具引湿性：引湿增重不小于15％；
有引湿性：引湿增重小于15％但不小于2％；
略有引湿性：引湿增重小于2％但不小于0.2％；
无或几乎无引湿性：引湿增重小于0.2％。
本公开中所述的“差示扫描量热分析或DSC”是指在样品升温或恒温过程中，测量样品与参考物之间的温度差、热流差，以表征所有与热效应有关的物理变化和化学变化，得到样品的相变信息。
本公开中所述干燥温度一般为25℃～100℃，优选40℃～70℃，可以常压干燥，也可以减压干燥，压强＜-0.08MPa。
本公开中所述的“赋形剂”包括但不限于任何已经被美国食品和药物管理局批准对于人类或家畜动物使用可接受的任何助剂、载体、助流剂、甜味剂、稀释剂、防腐剂、染料/着色剂、增香剂、表面活性剂、润湿剂、分散剂、助悬剂、稳定剂、等渗剂或乳化剂。
本公开所述的“打浆”是指利用物质在溶剂中溶解性差，但杂质在溶剂中溶解性好的特性进行纯化的方法，打浆提纯可以去色、改变晶型或去除少量杂质。
本公开晶型制备方法中所用的起始原料可以是任意形式化合物，具体形式包括但不限于：无定形、任意晶型、水合物、溶剂合物等。
本公开中数值如有关物质含量为测定计算的数据，不可避免存在一定程度的误差。一般而言，±10％均属于合理误差范围内。随其所用之处的上下文而有一定程度的误差变化，该误差变化不超过±10％，可以为±9％、±8％、±7％、±6％、±5％、±4％、±3％、±2％或±1％，优选±5％。
本公开式I化合物(R)-N-(1-(2-(4-(二氟甲氧基)-3-((四氢呋喃-3-基)氧基)苯基)恶唑-4-基)环丙基)噻唑-4-甲酰胺(以下简称化合物I)参照PCT/CN2021/133316中方法制备获得，本文本引用相关内容以示说明。
附图说明
图1：实施例1中目标化合物I无定型的XRPD谱图。
图2：模型中各组耳肿胀抑制率。
图3：模型中各组耳厚增加量。
图4：晶型A的XRPD谱图。
图5：晶型A的DSC谱图。
图6：晶型A的TGA谱图。
图7：晶型A的DVS谱图。
具体实施方式
以下将结合实施例或实验例更详细地解释本公开内容，本公开中的实施例或实验例仅用于说明本公开中的技术方案，并非限定本公开中的实质和范围。
本发明所用到的缩写的解释如下：
XRPD X-射线粉末衍射
DSC 示差扫描量热法
TGA 热重分析
DVS 动态水分吸附
1H-NMR 液态核磁氢谱
DMF N,N-二甲基甲酰胺
MEK 甲基乙基酮
MTBE 甲基叔丁基醚
THF 四氢呋喃
IPA 异丙醇
DCM 二氯甲烷
ACN 乙腈
本公开中实验所用仪器的测试条件：
1、X-射线粉末衍射谱(X-ray Powder Diffraction,XRPD)
仪器型号：Malver Panalytical Aeris X-射线粉末衍射仪
射线：单色Cu-Kα射线(λ＝1.54188)
扫描方式：θ/2θ，扫描范围(2θ范围)：3.5～50°
电压：40kV，电流：15mA
2、差示扫描量热仪(Differential Scanning Calorimeter,DSC)
仪器型号：TA DSC250
吹扫气：氮气；氮气吹扫速度：50mL/min
升温速率：10℃/min
温度范围：25℃-300℃
3、热重分析仪(Thermogravimetric Analysis，TGA)
仪器型号：TA TGA550
吹扫气：氮气；氮气吹扫速度：20ml/min
升温速率：10℃/min
温度范围：30℃-350℃
4、动态水分吸附(DVS)
检测采用SMS Intrinsic PLUS，在25℃，湿度从50％-0％-90％，步进为10％，判断标准为每个梯度质量变化dM/dT小于0.0002％，TMAX 360min，循环两圈。
5、本发明晶型A稳定性测试中所述的高效液相色谱法(HPLC)图在Agilent1260Infinity II上采集，HPLC条件：色谱柱：Welch XB C18 5μm 4.6*150mm；流动相：A-0.05％H3PO4(水中)，B-ACN；流速：1.0ml/min；波长：210nm
6、化合物的结构是通过核磁共振(NMR)或/和质谱(MS)来确定的。NMR位移(δ)以10-6(ppm)的单位给出。NMR的测定是用Bruker AVANCE-400核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d6)，氘代氯仿(CDCl3)，氘代甲醇(Methanol-d4)，内标为四甲基硅烷(TMS)。
7、化合物I制备实施例中HPLC的测定使用Agilent1100高压液相色谱仪，GAS15BDAD紫外检测器，Water Vbridge C18 150*4.6mm 5μM色谱柱。
8、MS的测定用Agilent6120三重四级杆质谱仪，G1315D DAD检测器，WatersXbridge C18 4.6*50mm,5μM色谱柱，以正/负离子模式扫描，质量扫描范围为80～1200。
9、薄层层析硅胶板使用烟台黄海HSGF254硅胶板，薄层色谱法(TLC)使用硅胶板采用规格是0.2mm±0.03mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm-0.5mm。
10、快速柱纯化系统使用Combiflash Rf150(TELEDYNE ISCO)或者Isolara one(Biotage)。
11、正向柱层析一般使用烟台黄海硅胶200～300目或300～400目硅胶为载体，或者使用常州三泰预填预填超纯正相硅胶柱(40-63μm，60g，24g，40g，120g或其它规格)。
本公开中的已知的起始原料可以采用或按照本领域已知的方法来合成，或可购买自上海泰坦科技，ABCR GmbH&Co.KG，Acros Organics，Aldrich Chemical Company，韶远化学科技(Accela ChemBio Inc)，毕得医药等公司。
实施例中无特殊说明，反应能够均在氮气氛下进行。
氮气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氮气气球。
氢气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氢气气球。
氢气是由上海全浦科学仪器公司QPH-1L型氢气发生仪制得。
氮气氛或氢化氛通常抽真空，充入氮气或氢气，反复操作3次。
实施例中无特殊说明，溶液是指水溶液。
实施例中无特殊说明，反应的温度为室温，为20℃～30℃。
实施例中的反应进程的监测采用薄层色谱法(TLC)，反应所使用的展开剂，纯化化合物采用的柱层析的洗脱剂的体系和薄层色谱法的展开剂体系，溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节，也可以加入少量的三乙胺和醋酸等碱性或酸性试剂进行调节。
实施例1：化合物I的制备
步骤1：中间体21a的合成
室温下，向25mL单口瓶中依次加入18h(620mg，1.67mmol)，噻唑-4-羧酸(215mg，1.67mmol)，2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(760mg，2.00mmol)，N,N-二异丙基乙胺(431mg，3.34mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(10mL)。反应液在20℃搅拌6小时。LCMS监测，反应完成。反应液用水(40mL)稀释，乙酸乙酯(20mL X 3)萃取。合并的有机相用饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。浓缩有机相，剩余物经柱层析(石油醚/乙酸乙酯)得到21a(483mg)。
LCMS:m/z:484.0(M+H)+。
步骤2：中间体21b的合成
室温下，向25mL单口瓶中依次加入21b(200mg,0.41mmol)，三甲基碘硅烷(331mg,1.65mmol)和乙腈(4mL)搅拌至溶解。反应液在60℃搅拌6小时。减压浓缩反应液，剩余物用二氯甲烷(50mL)溶解，饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。浓缩有机相，剩余物经制备板层析纯化得到21c(86mg)。
LCMS:m/z 394.0(M+H)+。
步骤3：化合物I的合成
室温下，向25毫升三口瓶中依次加入21c(40mg，0.11mmol)，(S)-四氢呋喃-3-醇(35.2mg，0.41mmol)，三苯基膦(107mg,0.41mmol)和四氢呋喃(5mL)搅拌至溶解。向反应液加入偶氮二甲酸二异丙酯(82.2mg,0.408mmol)。反应液在室温下搅拌反应16小时。LCMS监测，反应完成。减压浓缩反应液，剩余物经制备级液相色谱纯化得到目标化合物I(9.37mg)，经XRPD检测该目标化合物I为无定型，其XRPD谱图如图1所示。
LCMS:m/z 464.2(M+H)+。
1H NMR(400MHz,氘代甲醇-d4)δ9.02(d,J＝2.0Hz,1H),8.29(d,J＝2.0Hz,1H),7.74(s,1H),7.66(d,J＝2.0Hz,1H),7.60(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H),7.26(d,J＝8.4Hz,1H),6.80(t,J＝74.4Hz,1H),5.18-5.16(m,1H),4.02-3.88(m,4H),2.32-2.26(m,1H),2.18-2.16(m,1H),1.53-1.50(m,2H),1.35-1.32(m,2H).
生物学评价
以下结合测试例进一步描述解释本公开中，但这些测试例并非意味着限制本公开中的范围。
化合物A的结构为：
的方化法制合物备而A得是的采。用专利申请“CN104603116A中说明书第25页的实施例1”公开
测试例1：体外PDE4B酶活性检测实验
1.实验材料
名称 品牌 货号/型号
PDE4B1 BPS 60041
Trequinsin T℃RIS 2337/10
IMAP FP IPP Explorer Kit Molecular Device R8124
FAM-cAMP Molecular Device R7506
OptiPlateTM-384F black assay plate PerkinElmer 6007279
384well Echo plate Labcyte PP-0200
2.实验步骤
为了进行化合物测试，先在试管中以90％的DMSO(10％的水)配置浓度为10mM的化合物储备溶液，并用其制备稀释梯度为1:5的系列稀释液，终浓度从100μM开始，低至0.05nM。为了进行酶测定，将0.2μL化合物溶液转入384孔反应板中，阴性对照和阳性对照均转入0.2μL的100％DMSO。然后向孔中加入10μL的2倍浓度PDE4B1酶溶液(终浓度为0.04nM)，对于无酶活对照孔，用10μL的1倍反应缓冲液替代酶溶液。1000rpm离心1min，室温下孵育15分钟。接着向384孔反应板每孔中加入10μL的2倍FAM-cAMP底物溶液(底物终浓度为0.1μM)，1000rpm离心1min，25℃反应30分钟。反应结束后向384孔反应板每孔中加入60μL的反应终止液终止反应，室温下摇床600rpm振荡避光孵育60分钟。孵育结束后读取RLU数据并计算抑制率，根据浓度和抑制率拟合曲线计算出IC50值，其中最大值是指DMSO对照的读值，最小值是指无酶活对照的读值。
本公开的实施例在体外对PDE4B1酶活性抑制通过以上的试验进行测定，测得的IC50值见表1。
表1
编号 PDE4B1/IC50(nM)
化合物I 21
化合物A 31.78
测试例2：化合物对外周血单核细胞(PBMC)促炎细胞因子的释放的抑制作用
解冻冻存的PBMC，台盼蓝染色检测细胞活率和数目。用RPMI1640完全培养基(RPMI1640+10％FBS+1％PS)清洗解冻后的PBMC，离心后弃去上清。用RPMI1640完全培养基重悬PBMC，将细胞密度调至2×106cells/mL。铺2×105PBMC细胞于96孔细胞培养板中，加入不同浓度的待测化合物，从化合物最大浓度100μM开始，按照1:5的比例做9个浓度的梯度稀释，双复孔检测。加入终浓度为0.1ng/mL的LPS，总体积为200μL。设置阴性和阳性对照，阴性对照孔内只加LPS和终浓度为DMSO，阳性对照孔内除细胞和LPS之外，还加入1μg/mL的地塞米松作为阳性对照。将细胞于37度培养箱孵育24小时。孵育完成后，收集100μL细胞培养上清，用ELISA检测TNF-α的水平。向每孔剩余的细胞中加入100μL CellTiter-Glo，检测细胞活力水平。计算化合物抑制TNF-α释放的IC50值。
本公开的实施例在体外对PBMC促炎细胞因子释放的抑制通过以上的试验进行测定，测得的IC50值见表2。
表2
编号 PBMC/IC50(nM)
化合物I 12.01
化合物A 213
测试例3过敏性皮炎抑制实验
取适量化合物I配制成下述成分的软膏：1％的化合物I，10％的三乙酸甘油酯，62.5％的白凡士林，20％的液状石蜡，3％的石蜡，3.5％的白蜂蜡，机械搅拌至软膏
造模和给药：
选用CD-1雄性小鼠，实验当天在实验鼠左耳固定位置量耳厚(MDC-1“SB，MitutoyoCorporation)后，在左耳涂20μL(12-)十四酸佛波酯(-13-)乙酸盐(PMA，P1585，Sigma)丙酮溶液(2μg/耳)致耳肿胀的前2小时以及后15分钟，在左耳内外两面分别涂抹10mg受试物或阳性药或空白制剂，即20mg/耳。在PMA涂抹6小时后测量耳厚。本实验设正常对照组，模型对照组，低、中、高剂量组以及参比化合物组。
评价指标：PMA诱导耳肿胀6小时后耳厚的改变以及肿胀抑制率([IC-IT]/IC X100％，IC和IT分别为对照组与治疗组小鼠的耳厚增加数(mm))作为炎症指标；PMA诱导24小时后体重改变作为系统毒副作用指标。
实验结果：如图2和图3所示，化合物I可以剂量依赖性的抑制PMA诱导的小鼠耳肿胀，低中高三个剂量组抑制率显著高于模型组，耳肿胀抑制率分别为36.7±14.5％，81.0％±18.5％和93.9±5.9％(均值±SD)。参比化合物A的低高剂量也对PMA诱导小鼠的耳肿胀有抑制作用，低高剂量组耳肿胀抑制率分别为12.7％±16.2％和45.3％±23.0％(均值±SD)。
以上结果说明，化合物I在PMA诱导的皮肤炎症模型上的治疗效果优于参比化合物A。
实施例2：化合物I的晶型A的制备方法
将约10mg化合物I加入到0.2ml溶剂中，保持式I在溶剂中成浆，室温(约25℃)或50℃搅拌7天，迅速使用滤纸去除溶剂，所得固体经XRPD检测为晶型A，如下表3所示。
表3.打浆析晶制备晶型A选择溶剂及XRPD检测结果
实施例3：化合物I的晶型A的制备方法
将10mg的化合物I加入到0.30ml-0.60ml溶剂中(如表4所示)，室温下挥发，7天后置于50℃真空干燥箱中去除溶剂，所得固体经XRPD检测为晶型A。
表4挥发析晶制备晶型A选用溶剂及XRPD检测结果
实施例2和3中所得固体经X-射线粉末衍射检测，将该产物定义为晶型A，XPRD谱图如图4所示，其特征峰位置如表5所示。DSC谱图如图5所示，显示吸热峰峰值120.12℃。TGA谱图如图6所示，显示25℃-100℃失重0.58％。
DVS检测如图7所示，显示在正常储存条件下(即25℃，60％RH)，该样品吸湿增重约为1.24％；在加速实验条件(即70％RH)，吸湿增重约为1.79％；在极端条件下(即90％RH)，吸湿增重约为5.36％。在0％-90％RH湿度变化过程中，该样品的解吸附与吸附过程重合。且DVS检测后复测晶型，XRPD检测显示DVS检测前后晶型未转变。
表5.晶型A的XRPD特征衍射峰数据
实施例4：化合物I晶型A的稳定性实验
测定温度和湿度对化合物I晶型A的稳定性是否有影响：
将晶型A置于稳定箱中，使用一系列温湿度组合条件进行加速稳定性实验。在各个温湿度条件下放置不同天数后取出样品，将所得固体与初始晶型A比较，高效液相色谱法测定化合物I的含量并进行XRPD检测，如表6所示。
显示晶型A无变化，具有良好的稳定性。
表6.晶型A稳定性实验温湿度条件、含量测定结果
温度(℃) 湿度(％) 天数(天) 晶型 纯度(％)
/ / 0 A 99.63
55 30 24 A 99.46
55 79 20 A 99.61
65 11 20 A 99.54
65 50 21 A 99.35
65 75 21 A 99.60
70 11 21 A 99.50
70 75 18 A 99.56
75 0 20 A 99.54
75 30 20 A 99.09
75 50 18 A 99.20
实施例5：化合物I晶型A的稳定性实验
测定光照对化合物I晶型A的稳定性是否有影响：
将晶型A置于光照稳定箱中，达到ICH强度后，取出，将所得固体与初始晶型A比较，高效液相色谱法测定化合物I的含量，如表7所示。
表7.晶型A光照稳定性
0时 晶型A光照-0.5ICH 晶型A光照-1.0ICH
纯度(％) 99.63 97.13 94.10
晶型 A A A

Claims (10)

1.一种式I所示化合物的晶型A，其中以衍射角2θ角度表示的X-射线粉末衍射图，在12.329、17.273、18.426、20.930、22.954、24.716处有特征峰；优选在11.475、12.329、17.273、18.426、20.341、20.628、20.930、21.239、22.954、23.785、24.716处有特征峰；更优选在6.222、9.721、11.475、12.329、14.385、17.273、18.426、20.341、20.628、20.930、21.239、21.883、22.954、23.785、24.716、26.156、26.917、27.351处有特征峰；进一步优选以衍射角2θ角度表示的X-射线粉末衍射图谱如图3所示，
2.根据如权利要求1所述的晶型A，其中所述2θ值误差范围为±0.2。
3.一种如权利要求1或2所述的晶型A的制备方法，其为方法一或方法二：
方法一包括：
(a)将式I所示化合物与溶剂(1)混合；
(b)搅拌析晶；
所述溶剂(1)选自水、硝基甲烷、N,N-二甲基甲酰胺、乙腈、甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇、甲基乙基酮、四氢呋喃、1,2-二甲氧基乙烷、乙酸乙酯、氯仿、甲基叔丁基醚、1,2-二甲苯、甲苯、1,4-二氧己环和己烷中的一种或多种；
方法二包括：
(a)将式I所示化合物与溶剂(2)混合；
(b)挥发析晶；
所述溶剂(2)选自丙酮、乙腈、二氯甲烷、二氧六环、乙醇、乙酸乙酯、庚烷、异丙醇、甲醇、甲基乙基酮、甲基叔丁基醚、四氢呋喃、甲苯和水中的一种或多种。
4.如权利要求3所述的制备方法，其中所述溶剂(1)为水、硝基甲烷、N,N-二甲基甲酰胺、乙腈、甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇、甲基乙基酮、四氢呋喃、1,2-二甲氧基乙烷、乙酸乙酯、氯仿、甲基叔丁基醚、1,2-二甲苯、甲苯、1,4-二氧己环、己烷、或水和甲醇的混合溶剂。
5.如权利要求4所述的制备方法，其中当所述溶剂(1)为水和甲醇的混合溶剂时，所述水和所述甲醇的摩尔比为0.10-0.95，优选0.10、0.14、0.20、0.26、0.30、0.37、0.40、0.47、0.50、0.57、0.60、0.66、0.70、0.74、0.80、0.82、0.90、0.95。
6.如权利要求3-5中任一项所述的制备方法，其中所述溶剂(2)为丙酮、乙腈、二氯甲烷、二氧六环、乙醇、乙酸乙酯、庚烷、异丙醇、甲醇、甲基乙基酮、甲基叔丁基醚、四氢呋喃、甲苯、水、或以下任一组的混合溶剂：丙酮和二氯甲烷、丙酮和二氧六环、丙酮和乙醇、丙酮和乙酸乙酯、丙酮和庚烷、丙酮和异丙醇、丙酮和甲醇、丙酮和甲基乙基酮、丙酮和甲基叔丁基醚、丙酮和四氢呋喃、丙酮和甲苯、丙酮和水、乙腈和二氯甲烷、乙腈和二氧六环、乙腈和乙醇、乙腈和乙酸乙酯、乙腈和异丙醇、乙腈和甲醇、乙腈和甲基乙基酮、乙腈和甲基叔丁基醚、乙腈和四氢呋喃、乙腈和甲苯、乙腈和水、二氯甲烷和二氧六环、二氯甲烷和乙酸乙酯、二氯甲烷和庚烷、二氯甲烷和异丙醇、二氯甲烷和甲醇、二氯甲烷和甲基乙基酮、二氯甲烷和甲基叔丁基醚、二氯甲烷和四氢呋喃、二氯甲烷和甲苯、二氧六环和乙醇、二氧六环和乙酸乙酯、二氧六环和庚烷、二氧六环和异丙醇、二氧六环和甲醇、二氧六环和甲基乙基酮、二氧六环和甲基叔丁基醚、二氧六环和四氢呋喃、二氧六环和甲苯、二氧六环和水、乙醇和乙酸乙酯、乙醇和庚烷、乙醇和甲醇、乙醇和甲基乙基酮、乙醇和甲基叔丁基醚、乙醇和四氢呋喃、乙醇和甲苯、乙醇和水、乙酸乙酯和庚烷、乙酸乙酯和异丙醇、乙酸乙酯和甲醇、乙酸乙酯和甲基乙基酮、乙酸乙酯和甲基叔丁基醚、乙酸乙酯和四氢呋喃、乙酸乙酯和甲苯、庚烷和异丙醇、庚烷和甲基乙基酮、庚烷和甲基叔丁基醚、庚烷和四氢呋喃、庚烷和甲苯、异丙醇和甲醇、异丙醇和甲基乙基酮、异丙醇和甲基叔丁基醚、异丙醇和四氢呋喃、异丙醇和甲苯、异丙醇和水、甲醇和甲基乙基酮、甲醇和甲基叔丁基醚、甲醇和四氢呋喃、甲醇和甲苯、甲醇和水、甲基乙基酮和甲基叔丁基醚、甲基乙基酮和四氢呋喃、甲基乙基酮和甲苯、甲基叔丁基醚和四氢呋喃、甲基叔丁基醚和甲苯、四氢呋喃和甲苯、四氢呋喃和水；优选地，当所述溶剂(2)为混合溶剂时，两者的体积比为1:3-3:1。
7.一种药物组合物，其包括如权利要求1或2所述的晶型A或由如权利要求3-6中任一项所述的制备方法制得的晶型A，和任选自药学上可接受的赋形剂。
8.一种如权利要求7所述的药物组合物的制备方法，其包括将如权利要求1或2所述的晶型A或由如权利要求3-6中任一项所述的制备方法制得的晶型A与药学上可接受的赋形剂混合的步骤。
9.一种如权利要求1或2所述的晶型A或由如权利要求3-6中任一项所述的制备方法制得的晶型A或如权利要求7所述的药物组合物在制备用于预防和/或治疗PDE相关病症的药物中的用途；优选地，所述PDE相关病症为气喘、阻塞性肺病、败血病、肾炎、糖尿病、变应性鼻炎、变应性结膜炎、溃疡性肠炎或风湿病。
10.一种如权利要求1或2所述的式I所示化合物的晶型A或由如权利要求3-6中任一项所述的制备方法制得的晶型A或如权利要求7所述的药物组合物在制备用于预防和/或治疗气喘、阻塞性肺病、败血病、肾炎、糖尿病、变应性鼻炎、变应性结膜炎、溃疡性肠炎或风湿病的药物中的用途。
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