CN117110628A - 用于确定血型抗原的检测试剂 - Google Patents

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CN117110628A
CN117110628A CN202310441335.6A CN202310441335A CN117110628A CN 117110628 A CN117110628 A CN 117110628A CN 202310441335 A CN202310441335 A CN 202310441335A CN 117110628 A CN117110628 A CN 117110628A
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antigens
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田利华
刘鹤
刘瑶
刘希
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Beijing Strong Biotechnologies Inc
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Beijing Strong Biotechnologies Inc
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    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
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Abstract

本申请涉及用于确定血型抗原的检测试剂。所述检测试剂包含：抗血型抗原的抗体或其抗原结合片段、钠盐、磷酸二氢钾、牛血清白蛋白、甘氨酸、糖、任选促聚剂、防腐剂。本申请的检测试剂与红细胞混合后，阳性结果可在基于微柱凝胶法的抗人球蛋白检测卡或血型反定型检测卡中形成可视凝集。

Description

用于确定血型抗原的检测试剂
技术领域
本申请涉及临床、医学、生物领域。具体地，涉及一种用于确定红细胞表面或血液样本中的血型抗原的检测试剂。
背景技术
人体内具有多个血型系统。输血时，血型抗原不相符会带来不同程度的溶血反应。除此之外，部分血型系统对于临床疾病的研究也存在协助作用。稀有血型定型试剂是除ABO和Rh系统之外的血型系统抗原检测试剂，主要用于检测Kidd系统Jka/Jkb抗原、Duffy系统Fya/Fyb抗原、Kell系统K/k抗原、P1系统P1抗原、MNS系统M/N/S/s、Lewis系统Lea/Leb抗原的检测定型。
MNS系统是继ABO血型后被检出的第二个血型，在血清学、遗传学，生物化学等表现出复杂性，目前已明确抗原有40多个。此系统中有许多变异性及卫星抗原，其中Milten-berger亚型系统的抗原抗体反应在黄种人群中的比率较其他群高，其抗原与抗体的研究在临床上较为重要。近年来有不断报道Mur抗原与抗体发生的溶血性输血反应。
Lewis系统，是血浆中的抗原，红细胞上的该抗原是从血浆中吸附来的，主要是抗原在分泌液中有可溶性抗原，但不存在于血浆中，再从血浆中吸附到红细胞上，表现为红细胞抗原。
P系统是该血型系统中唯一的抗原，P、PK与LKE抗原在血清学，生物化学方面与P抗原密切相关，但不是由它的基因所控制，有关天然抗P引起配血不合及定型困难，国内文献屡有报道。
Kell系统，是有5组对立抗原，由12种高频率抗原，5种低频率抗原构成，其中，K抗原在白种人中较常见，而kk表现型在黑种人和黄种人中出现频率很低。
Kidd系统，由Jka、Jkb抗原组成，在欧洲白种人和非洲黑种人中Jka基因频率较高，东方人群一般Jkb基因频率高于Jka。
Duffy系统，在1950年发现，主要有Fya，Fyb，Fy抗原，在中国，日本，朝鲜等地区的东方人的Fya基因频率高于白种人和非洲黑种人，白种人以Fyb基因频率出现，黑种人人群以Fy抗原基因居多。近年来国内学者研究发现，以Fya基因频率出现最多，由此认为它的基因频率在国内未见明显规律性，但在不同人种中的差异很大(徐爱蕾，稀有血型系统的研究进展，医学综述，2011，2658-2660)。
本领域仍需要一种能实现对稀有血型进行快速鉴定的工具。
发明内容
检测试剂
本申请提供了一种用于确定Duffy血型的检测试剂，其包含抗Duffy血型抗原抗体或其抗原结合片段。
本申请还提供了一种用于确定Kidd血型的检测试剂，其包含抗Kidd血型抗原抗体或其抗原结合片段。
本申请还提供了一种用于确定Kell血型的检测试剂，其包含抗Kell血型抗原抗体或其抗原结合片段。
本申请还提供了一种用于确定P1血型的检测试剂，其包含抗P1血型抗原抗体或其抗原结合片段。
本申请还提供了一种用于确定MNS血型的检测试剂，其包含抗MNS血型抗原抗体或其抗原结合片段。
本申请还提供了一种用于确定Lewis血型的检测试剂，其包含抗Lewis血型抗原抗体或其抗原结合片段。
微柱凝胶法检测技术将凝胶测试技术、离心分离技术、抗原抗体特异性反应结合在一起。作为一个示例，红细胞表面的抗原与相应的抗体发生反应。抗原和抗体接触后，使抗原-抗体结合(细胞致敏)。利用在微柱凝胶介质中(如添加了抗人球蛋白抗体的凝胶柱)，致敏的细胞与抗人球蛋白抗体结合而形成可见的凝集物。经过离心，此凝集物被阻挡在凝胶柱上层或悬于凝胶中，而呈现阳性结果。反之，如果红细胞表面没有相应的抗原，游离的红细胞可以通过凝胶间隙，离心后沉积于凝胶微柱的底部，呈现阴性结果。
在一些实施方案中，提供了一种用于确定Duffy、Kidd、Kell、P1、MNS、或Lewis血型的检测试剂，其包含1g/L至10g/L抗体或其抗原结合片段(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10g/L，或前述任意两个数值之间的范围，可以是整数或小数)，优选1g/L至6g/L抗Duffy、抗Kidd、抗Kell、抗P1、抗MNS、或抗Lewis血型抗原抗体或其抗原结合片段。
术语“抗体”以最广义的范围使用，并且涵盖各种抗体结构，包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体(例如双特异性抗体)、和抗体片段，只要它们展现出期望的抗原结合活性。抗体(免疫球蛋白)是由两条重链和两条轻链通过链间二硫键连接而成的四肽链结构。免疫球蛋白的重链恒定区的氨基酸组成和排列顺序不同，故其抗原性也不同。据此，可将免疫球蛋白分为：IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。
术语“抗原结合片段”是指抗体的片段及抗体类似物，其通常包括至少部分母体抗体的抗原结合区或可变区(例如一个或多个CDR)。抗体片段保留了母体抗体的结合特异性。抗体片段的实例包括但不限于Fv、Fab、Fab’、Fab’-SH、F(ab′)2、Fd、dAb；VHH结构域；线性抗体；单链抗体分子(scFv)。
确定Duffy、Kidd、Kell、P1、MNS、或Lewis血型是指对待测样本进行检测，根据检测结果确定待测样本在Duffy、Kidd、Kell、P1、MNS、或Lewis血型系统中的分类。这种确定可以是定性的、或定量的；优选定性的。
在一些实施方案中，用于确定Duffy、Kidd、Kell、P1、MNS、或Lewis血型的检测试剂还包含：不超过7g/L钠盐，例如，1、2、3、4、5、6、7g/L，或前述任意两个数值之间的范围，可以是整数或小数，优选2g/L至6g/L钠盐，最优选5g/L钠盐。
在一些实施方案中，用于确定Duffy、Kidd、Kell、P1、MNS、或Lewis血型的检测试剂还包含：0.1g/L至0.5g/L磷酸二氢钾(例如，0.1、0.2、0.3、0.4、0.5g/L，或前述任意两个数值之间的范围，可以是整数或小数)，优选0.2g/L至0.4g/L磷酸二氢钾。
在一些实施方案中，用于确定Duffy、Kidd、Kell、P1、MNS、或Lewis血型的检测试剂还包含：不低于20g/L牛血清白蛋白(例如，20、25、30、35、40、45、50g/L，或前述任意两个数值之间的范围，可以是整数或小数)，优选30g/L牛血清白蛋白。
在一些实施方案中，用于确定Duffy、Kidd、Kell、P1、MNS、或Lewis血型的检测试剂还包含：10g/L至15g/L甘氨酸(例如，10、11、12、13、14、15g/L，或前述任意两个数值之间的范围，可以是整数或小数)，优选11g/L至14g/L甘氨酸。
在一些实施方案中，用于确定Duffy、Kidd、Kell、P1、MNS、或Lewis血型的检测试剂还包含：0.5g/L至5g/L糖(例如，0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5g/L，或前述任意两个数值之间的范围，可以是整数或小数)，优选0.5g/L至2g/L糖。
在一些实施方案中，所述糖选自以下的任一项或组合：葡萄糖、海藻糖、蔗糖。
在一些实施方案中，用于确定Duffy、Kidd、Kell、P1、MNS、或Lewis血型的检测试剂还任选包含1g/L至2g/L促聚剂(例如1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0g/L，或前述任意两个数值之间的范围，可以是整数或小数)，优选1g/L促聚剂。
在一些实施方案中，所述促聚剂选自以下的任一项：PEG6000、PEG8000、PEG20000。
在一些实施方案中，用于确定Duffy、Kidd、Kell、P1、MNS、或Lewis血型的检测试剂还包含：0.5g/L至5g/L防腐剂(例如，0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5g/L，或前述任意两个数值之间的范围，可以是整数或小数)，优选0.5g/L至3g/L防腐剂。
在一些实施方案中，所述防腐剂选自以下的任一项：叠氮钠、叠氮锂、ProClin300。
在一些实施方案中，所述钠盐选自以下的任一项：氯化钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、碳酸钠。
在一些实施方案中，用于确定Duffy、Kidd、Kell、P1、MNS、或Lewis血型的检测试剂制备成选自以下的任一项：微柱凝胶法试剂、胶体金试剂、聚凝胺法试剂、试管法试剂、玻璃珠法试剂。
在一些实施方案中，用于确定Duffy、Kidd、Kell、P1、MNS、或Lewis血型的检测试剂是微柱凝胶法的试剂。
在一些实施方案中，用于确定Duffy、Kidd、Kell、P1、MNS、或Lewis血型的检测试剂体积为20μL至50μL(例如，20、25、30、35、40、45、50μL或前述任意两个数值之间的范围，可以是整数或小数)，优选25μL。
在一些实施方案中，所述抗Duffy、Kidd、Kell、P1、MNS、或Lewis血型抗原抗体的类型选自以下的任一项：IgG抗体、IgM抗体、IgY抗体、IgA抗体。
在一些实施方案中，所述Duffy血型系统的抗原选自以下任一项的抗原或其表位：Fya(001)、Fyb(002)、Fy3(003)、Fy4(004)、Fy5(005)、Fy6(006)、或其组合。
在一些实施方案中，所述Kidd血型系统的抗原选自以下任一项的抗原或其表位：JKa(JK1)、JKb(JK2)、JK3(JK3)、或其组合。
在一些实施方案中，所述Kell血型系统的抗原是XK1或其表位。
在一些实施方案中，所述P1血型系统的抗原选自以下任一项的抗原或其表位：P1PK1(P1)、P1PK3(PK)、P1PK4(NOR)、或其组合。
在一些实施方案中，所述MN血型系统的抗原选自以下任一项的抗原或其表位：M、N、S、s、或其组合。
在一些实施方案中，所述Lewis血型系统的抗原选自以下任一项的抗原或其表位：Lea、Leb、ALeb、Bleb、或其组合。
术语“表位”是指Duffy、Kidd、Kell、P1、MNS、或Lewis血型系统的抗原上与免疫球蛋白(或抗体)结合的位点。表位可以由相邻的氨基酸形成、或由不相邻的氨基酸通过蛋白质的三级折叠而形成。表位通常以独特的空间构象包括至少3-15个氨基酸。确定抗体结合什么表位的方法在本领域中是熟知的，包括免疫印迹和免疫沉淀检测分析等。确定表位的空间构象的方法包括本领域中的技术和本文所述的技术，例如X射线晶体分析法和二维核磁共振等。
本申请的用于确定Duffy、Kidd、Kell、P1、MNS、或Lewis血型的检测试剂可以制备成各种形式，例如但不限于：试剂盒、试纸、检测卡、芯片、孔板、管、柱。
在一个代表性示例中，用于确定Duffy、Kidd、Kell、P1、MNS、或Lewis血型的检测试剂制备成检测卡的形式。检测卡是指一种体外诊断试剂，其呈现为一个或多个管或柱的组合，在管或柱中包含确定Duffy、Kidd、Kell、P1、MNS、或Lewis血型的检测试剂，以实现对鉴定结果的对比或展示。
在一个代表性示例中，用于确定Duffy、Kidd、Kell、P1、MNS、或Lewis血型的检测试剂制备成凝胶微柱的形式。当抗体是IgG型时，微柱中装载有凝胶介质(例如含有抗人球蛋白抗体的凝胶介质)。当待测细胞接触本申请的检测试剂后，致敏的细胞将与抗人球蛋白抗体结合而形成可见的凝集物，被阻挡在凝胶柱上层或悬于凝胶中；未致敏的细胞则流穿凝胶介质。对于IgG型抗体的检测原理(涉及抗人球蛋白抗体)，以Fya为例：红细胞表面抗原与相应的抗体发生反应。含有抗Fya IgG的试剂与红细胞表面Fya抗原结合(致敏)，但不会产生直接的凝集反应。离心时，被含有抗Fya IgG的试剂所致敏的红细胞通过含抗人球蛋白试剂的凝胶微柱，彼此连接引起凝集。
在另一个代表性示例中，用于确定Duffy、Kidd、Kell、P1、MNS、或Lewis血型的检测试剂制备成凝胶微柱的形式。当抗体是IgM型时，微柱中装载有凝胶介质(不含有抗人球蛋白抗体的凝胶介质)。当待测细胞接触本申请的检测试剂后，致敏的细胞形成可见的凝集物，被阻挡在凝胶柱上层或悬于凝胶中；未致敏的细胞则流穿凝胶介质。对于IgM型抗体检测原理，例如Fyb：红细胞表面抗原与相应的IgM抗体会发生反应。含抗Fyb IgM的试剂可以与红细胞表面Fyb抗原结合产生直接凝集反应，因为IgM的结构是五聚体，容易形成凝集。
在一个具体的实施方案中，提供了一种用于确定Duffy、Kidd、Kell、P1、MNS、或Lewis血型的抗人球蛋白检测卡，其包含：
1g/L抗Duffy、Kidd、Kell、P1、MNS、或Lewis血型抗原抗体(优选IgG型、IgM抗体)、
5g/L氯化钠、
0.4g/L磷酸二氢钾、
1.5g/L海藻糖、
14g/L甘氨酸、
30g/L牛血清白蛋白、
任选1g/L PEG8000、
2g/L叠氮钠；
以及，凝胶介质(优选含抗人球蛋白抗体的凝胶介质)。
用途
本申请还提供前述的用于确定Duffy、Kidd、Kell、P1、MNS、或Lewis血型的检测试剂在制备鉴定装置中的用途。
在一些实施方案中，鉴定装置选自以下的任一项：试剂盒、试纸、检测卡、芯片、孔板、管、柱；优选地，检测卡或凝胶微柱。
在一些实施方案中，鉴定装置用于确定样本的Duffy、Kidd、Kell、P1、MNS、或Lewis血型。
在一些实施方案中，样本包含红细胞。
在另一些实施方案中，样本是全血；更优选，含抗凝剂(EDTA、柠檬酸、或肝素等)的全血。
在一些实施方案中，样本的体积为25μL至75μL(25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75μL或前述任意两个数值之间的范围，可以是整数或小数)，优选50μL。
在一些实施方案中，样本中的细胞浓度为0.8％至1.0％(v/v)。
在一些实施方案中，鉴定装置还可以包含使用说明书、辅助工具(比如但不限于采样工具)、包装。
在本申请上下文中，当提及具体的数值时，如无特别指明，不应当理解为精确的点值，而是允许包含适当的误差(如操作过程而引入的误差、测量精度所致误差、方法学自身的误差等)。例如，0.4g/L磷酸二氢钾可以包含0.4g/L±5％范围内的数值。
具体实施方式
实施例1.抗人球蛋白检测卡(微柱凝胶法)
1.每卡含有多个(例如6支)微管，上部是反应室，下部是微柱；每支微管中都填充含有抗人球蛋白(兔IgG多克隆抗体，鼠IgM单克隆抗-C3d、BRIC-8)的绿色凝胶(其他颜色均可，为便于识别)，保存于浓度不大于0.1％的NaN3溶液中。
2.抗人球蛋白检测卡(微柱凝胶法)制备方法：
凝胶浸泡于清洗液中进行清洗，去除杂质，按照比例加入含有抗人球蛋白(兔IgG多克隆抗体，鼠IgM单克隆抗-C3d、BRIC-8)的绿色缓冲液，此时凝胶呈绿色。准备空卡膜，取适量凝胶加入卡膜中，对卡膜进行封口，制备完成。
实施例2.血型反定型检测卡(微柱凝胶法)
1.每卡含有多个(例如六支)微管，上部是反应室，下部是微柱；每支微柱中均充填不含抗体的凝胶呈白色。保存于浓度不大于0.1％的NaN3溶液中。
2.血型反定型检测卡制备方法：
凝胶浸泡于清洗液中进行清洗，去除杂质，按照比例加入缓冲液，此时凝胶呈白色。准备空卡膜，取适量凝胶加入卡膜中，对卡膜进行封口，制备完成。
实施例3.用于确定Duffy、Kidd、Kell、P1、MNS、或Lewis血型的检测试剂
按照以下各组分溶解混合后，制备用于确定Duffy、Kidd、Kell、P1、MNS、或Lewis血型的检测试剂：
1g/L抗Fya抗体(抗人球蛋白检测法时为IgG，血型反定型法时为IgM)(或抗Fyb、或Jka、或Jkb、或Lea、或Leb、或M、或N、或S、或s、或K、或k、或P1抗体)；
5g/L氯化钠、
0.4g/L磷酸二氢钾、
1.5g/L海藻糖、
14g/L甘氨酸、
30g/L牛血清白蛋白、
任选1g/L PEG8000、
2g/L叠氮钠。
优化例1.试剂成分优化(氯化钠浓度)
1.组成1(本申请)：
1g/L抗Fya抗体(IgG作为示例)(或抗Fyb、或Jka、或Jkb、或Lea、或Leb、或M、或N、或S、或s、或K、或k、或P1抗体)；
5g/L氯化钠、
0.4g/L磷酸二氢钾、
1.5g/L海藻糖、
14g/L甘氨酸、
30g/L牛血清白蛋白、
任选1g/L PEG8000、
2g/L叠氮钠。
2.组成2(对照试剂)：和组成1的区别在于7g/L氯化钠。
3.实验过程：检测Sanquin抗筛细胞I、II、III。实验数据：
表1
表2
表3
表4
备注：w＝弱凝集。
4.实验结论：根据实验数据可知5g/L氯化钠浓度结果反应强度要优于7g/L氯化钠，所以氯化钠浓度为5g/L。
当高于7g/L(如7.5、8、10g/L)氯化钠时，反应强度受到显著不利影响(数据未显示)。
优化例2.调整BSA浓度
1.组成1(本申请)：
1g/L抗Fya抗体(IgG作为示例)(或抗Fyb、或Jka、或Jkb、或Lea、或Leb、或M、或N、或S、或s、或K、或k、或P1抗体)；
5g/L氯化钠、
0.4g/L磷酸二氢钾、
1.5g/L海藻糖、
14g/L甘氨酸、
30g/L牛血清白蛋白、
任选1g/L PEG8000、
2g/L叠氮钠。
2.组成2(对照)：和组成1的区别仅在于20g/L牛血清白蛋白。
3.实验过程：检测Sanquin抗筛细胞I、II、III。
实验数据：
表5
表6
表7
表8
4.实验结论：根据实验数据可知30g/L BSA浓度结果反应强度要优于20g/LBSA，所以BSA浓度为30g/L。
当低于20g/L(如10、15)或超过40g/L(如40、45、50)BSA时，反应强度受到显著不利影响(数据未显示)。
测试例1.特异性及重复性
1.样本：已知抗原阴/阳性的样本。
2.实验步骤：
在实施例1制备的抗人球蛋白检测卡中对样本Fya+、Fya-、M+、M-、N+、N-、S+、S-、s+、s-、k+、k-进行重复检测，37℃孵育15分钟；离心10分钟；记录凝集强度(表9)。
实施例2制备的反定型卡中对样本Fyb+、Fyb-、Jka+、Jka-、Jkb+、Jkb-、Lea+、Lea-、Leb+、Leb-、K+、K-、P1+、P1-进行重复检测，室温孵育15分钟；离心5分钟；记录凝集强度要求阴阳性结果一致，允许凝集强度偏差≤1+(表10)。
表9.特异性及重复性
表10.特异性及重复性
Fyb+ Fyb- Jka+ Jka- Jkb+ Jkb- Lea+ Lea- Leb+ Leb- K+ K- P1+ P1-
1 2+ 0 2+ 0 4+ 0 2+ 0 2+ 0 2+ 0 2+ 0
2 2+ 0 2+ 0 4+ 0 2+ 0 2+ 0 2+ 0 2+ 0
3 2+ 0 2+ 0 4+ 0 2+ 0 2+ 0 2+ 0 2+ 0
4 2+ 0 2+ 0 4+ 0 2+ 0 2+ 0 2+ 0 2+ 0
5 2+ 0 2+ 0 4+ 0 2+ 0 2+ 0 2+ 0 2+ 0
6 2+ 0 2+ 0 4+ 0 2+ 0 2+ 0 2+ 0 2+ 0
7 2+ 0 2+ 0 4+ 0 2+ 0 2+ 0 2+ 0 2+ 0
8 2+ 0 2+ 0 4+ 0 2+ 0 2+ 0 2+ 0 2+ 0
9 2+ 0 2+ 0 4+ 0 2+ 0 2+ 0 2+ 0 2+ 0
10 2+ 0 2+ 0 4+ 0 2+ 0 2+ 0 2+ 0 2+ 0
11 2+ 0 2+ 0 4+ 0 2+ 0 2+ 0 2+ 0 2+ 0
12 2+ 0 2+ 0 4+ 0 2+ 0 2+ 0 2+ 0 2+ 0
强度判定标准(半定量)：根据凝集强度从强到弱依次为4+、3+、2+、1+；0为阴性。抗原性越强，凝集强度就越强；抗原性越弱，凝集强度越弱。若红细胞表面不具有相应抗原，结果为阴性。
由表9和表10数据可知，12次的检测结果一致，偏差≤1+，阴阳性判断结果符合细胞已知抗原结果。
测试例2.和试管法的比对
1.样本：未知抗原阴/阳性的样本。
2.实验步骤：
在实施例1制备的抗人球蛋白检测卡中对样本进行检测，37℃孵育15分钟；离心10分钟；记录凝集强度，比对现有市售试剂(DIAGAST)用试管法进行检测。
实施例2制备的反定型卡中对样本进行检测，室温孵育15分钟；离心5分钟；记录凝集强度，比对试剂用试管法进行检测。
表11.微柱凝胶法(抗人球蛋白检测卡)与试管法比对
备注：w＝弱凝集。
表12.微柱凝胶法(反定型卡)与试管法比对
备注：w＝弱凝集。
由以上表11和表12数据可知，本申请的微柱凝胶法试剂与比对试剂(DIAGAST)的试管法结果阴阳性一致。
和试管法相比，本申请的试剂更加便于兼容多种血型系统之间的配套使用，成本降低，判读标准化。
测试例3.加速稳定性
1.样本：已知抗原阴/阳性的样本。
2.实验步骤：分别在37℃存放3天、5天、7天、10天、14天时检测Sanquin抗筛细胞I、II、III，并与初始结果进行对比，并记录凝集强度。要求结果判定前后一致，允许凝集强度偏差≤1+。
表13.37℃加速稳定性
Fya 4℃ 37℃5天 37℃10天 37℃14天 37℃16天
I抗筛细胞 0 0 0 0 0
II抗筛细胞 0 0 0 0 0
III抗筛细胞 3+ 3+ 3+ 3+ 3+
样本1 + + + + +
样本2 + + + + +
样本3 + + + + +
表14
M 4℃ 37℃5天 37℃10天 37℃14天 37℃16天
I抗筛细胞 3+ 3+ 3+ 3+ 3+
II抗筛细胞 0 0 0 0 0
III抗筛细胞 3+ 4+ 3+ 3+ 4+
样本1 3+w 3+w 3+ 3+w 3+
样本2 0 0 0 0 0
样本3 3+ 3+ 3+ 3+ 3+
表15
N 4℃ 37℃5天 37℃10天 37℃14天 37℃16天
I抗筛细胞 3+ 3+ 2+ 2+ 3+w
II抗筛细胞 3+ 3+ 3+ 3+ 3+
III抗筛细胞 0 0 0 0 0
样本1 0 0 0 0 0
样本2 3+w 3+w 3+w 2+ 2+
样本3 0 0 0 0 0
表16
表17
表18
表19
表20
表21
表22
表23
Leb 4℃ 37℃5天 37℃10天 37℃14天 37℃16天
I抗筛细胞 2+ 2+ 4+w 3+ 3+w
II抗筛细胞 2+ 2+ 4+w 2+ 3+w
III抗筛细胞 0 0 0 0 0
样本1 2+ 2+ 2+ 2+ 2+
样本2 2+ 2+ 2+ 2+ 2+
样本3 0 0 0 0 0
表24
K 4℃ 37℃5天 37℃10天 37℃14天 37℃16天
I抗筛细胞 0 0 0 0 0
II抗筛细胞 2+ 2+ 2+ 2+ 2+
III抗筛细胞 0 0 0 0 0
样本1 0 0 0 0 0
样本2 0 0 0 0 0
样本3 0 0 0 0 0
表25
P1 4℃ 37℃5天 37℃10天 37℃14天 37℃16天
I抗筛细胞 ± ± 1+ ± 1+
II抗筛细胞 2+ 2+ 3+ 2+ 3+
III抗筛细胞 3+ 3+ 4+ 3+ 4+
样本1 0 0 0 0 0
样本2 2+ 2+ 2+ 2+ 2+
样本3 2+ 2+ 2+ 2+ 2+
备注：w＝弱凝集。
3.结论：
-本申请中基于微柱凝胶法的确定血型抗原的检测试剂，显示出至少16天的加速稳定性。
-试剂的准确性与试管法一致。
-试剂与已知阴阳性的样本反应，结果符合，证实检测试剂的特异性。
-重复检测10次结果一致，证实检测试剂的重复性。

Claims (9)

1.一种用于确定血型抗原的检测试剂，其包含：
1g/L至10g/L，优选1g/L至6g/L抗血型抗原抗体或其抗原结合片段；
不超过7g/L，优选2g/L至6g/L钠盐；
0.1g/L至0.5g/L，优选0.2g/L至0.4g/L磷酸二氢钾；
不低于20g/L，优选20g/L至30g/L牛血清白蛋白；
10g/L至15g/L，优选11g/L至14g/L甘氨酸；
0.5g/L至5g/L，优选0.5g/L至2g/L糖；
任选地，1g/L至2g/L，优选1g/L促聚剂；
0.5g/L至5g/L，优选0.5g/L至3g/L防腐剂；
其中：
所述糖选自以下的任一项或其组合：葡萄糖、海藻糖、蔗糖，优选海藻糖；
所述钠盐选自以下的任一项或其组合：氯化钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、碳酸钠，优选氯化钠；
所述防腐剂选自以下的任一项或其组合：叠氮钠、叠氮锂、PC300，优选叠氮钠；
所述促凝剂选自以下任一项：PEG6000、PEG8000、PEG20000；优选PEG8000；
所述血型抗原选自以下的任一项或其组合：Duffy血型系统的抗原、Kidd血型系统的抗原、Kell血型系统的抗原、P1血型系统的抗原、MNS血型系统的抗原、Lewis血型系统的抗原。
2.根据权利要求1所述的用于确定血型抗原的检测试剂，所述试剂制备成选自以下的任一项：微柱凝胶法试剂、胶体金试剂、聚凝胺法试剂、试管法试剂、玻璃珠法试剂；优选微柱凝胶法试剂。
3.根据权利要求2所述的用于确定血型抗原的检测试剂，其是微柱凝胶法试剂，所述检测试剂的体积为20μL至50μL，优选25μL。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的用于确定血型抗原的检测试剂，其中：
所述抗血型抗原抗体的类型选自以下的任一项：IgG抗体、IgM抗体；
所述Duffy血型系统的抗原选自以下任一项的抗原或其表位：Fya(001)、Fyb(002)、Fy3(003)、Fy4(004)、Fy5(005)、Fy6(006)、或其组合；
所述Kidd血型系统的抗原选自以下任一项的抗原或其表位：JKa(JK1)、JKb(JK2)、JK3(JK3)、或其组合；
所述Kell血型系统的抗原选自以下任一项的抗原或其表位：K、k、或其组合；
所述P1血型系统的抗原选自以下任一项的抗原或其表位：P1PK1(P1)、P1PK3(PK)、P1PK4(NOR)、或其组合；
所述MNS血型系统的抗原选自以下任一项的抗原或其表位：M、N、S、s、或其组合；
所述Lewis血型系统的抗原选自以下任一项的抗原或其表位：Lea、Leb、ALeb、Bleb、或其组合。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的用于确定血型抗原的检测试剂，其包含：
1g/L权利要求1或4所限定的抗血型抗原抗体、
5g/L氯化钠、
0.4g/L磷酸二氢钾、
1.5g/L海藻糖、
14g/L甘氨酸、
30g/L牛血清白蛋白、
1g/L PEG8000、
2g/L叠氮钠；
其中，所述抗血型抗原抗体是IgG或IgM型抗体。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的用于确定血型抗原的检测试剂，其还包含凝胶介质；
优选，所述凝胶介质包含或者不含抗人球蛋白抗体。
7.检测试剂在用于制备血型抗原鉴定装置中的用途，其中：
所述检测试剂是权利要求1至6中任一项所述的用于确定血型抗原的检测试剂；
所述鉴定装置选自以下的任一项：试剂盒、试纸、检测卡、芯片、孔板、管、柱；优选地，检测卡或凝胶微柱。
8.根据权利要求7所述的用途，所述鉴定装置用于鉴定样本中的血型抗原；
所述样本包含红细胞，优选所述样本是全血；更优选，含抗凝剂的全血；
所述样本的体积为25μL至75μL，优选50μL。
9.根据权利要求8所述的用途，所述样本中的红细胞浓度为v/v0.8％至1.0％。
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