JP2022122283A - Ｄｕｐａｎ－２抗原の測定方法、測定試薬及び測定キット - Google Patents
Ｄｕｐａｎ－２抗原の測定方法、測定試薬及び測定キット Download PDFInfo
- Publication number
- JP2022122283A JP2022122283A JP2022017844A JP2022017844A JP2022122283A JP 2022122283 A JP2022122283 A JP 2022122283A JP 2022017844 A JP2022017844 A JP 2022017844A JP 2022017844 A JP2022017844 A JP 2022017844A JP 2022122283 A JP2022122283 A JP 2022122283A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- dupan
- antigen
- less
- antibody
- recognizes
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
【課題】異なる種類の標準物質を測定した際の測定値の差を無くし、又は測定値の差を小さくし、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原を正確に測定できる測定方法、測定試薬及び測定キットを提供する。【解決手段】水性媒体と、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原と、不溶性担体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体と、を含む混合液を調製することを含み、前記混合液において、前記不溶性担体と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、が結合し、前記混合液において、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の量が、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体の量の３重量倍以上１００重量倍以下である、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法。【選択図】なし
Description
本発明は、ＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法、測定試薬及び測定キットに関する。
モノクローナル抗体ＤＵＰＡＮ－２は、ヒト膵癌培養細胞ＨＰＡＦを免疫原として用いて作製されたモノクローナル抗体であり、膵癌細胞から高率に産生されるムチン様タンパク質（抗原）に反応することが報告されている（非特許文献１、２）。この抗原は、ＤＵＰＡＮ－２抗原と呼ばれており、膵癌及び胆道系癌などの癌マーカーとして用いられている。
ＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法としては、ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｏｎ ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ（非特許文献１）及びＥｎｚｙｍｅ－Ｌｉｎｋｅｄ ＩｍｍｕｎｏＳｏｒｂｅｎｔ Ａｓｓａｙ（特許文献１）が報告されている。
Ｍｅｔｚｇａｒら、"Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｃａｎｃｅｒ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ａｎｔｉｇｅｎ （ＤＵ－ＰＡＮ－２ ａｎｔｉｇｅｎ） ｉｎ ｓｅｒｕｍ ａｎｄ ａｓｃｉｔｅｓ ｏｆ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ"、Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ、１９８４年，Ｖｏｌ．８１，ｐｐ．５２４２－５２４６
櫻林ら、「膵癌関連糖蛋白抗原，ＤＵ－ＰＡＮ－２に関する研究Ｉ．酵素免疫測定法における基礎的検討および健常人の測定値の分布」、臨床病理、１９８６年，Ｖｏｌ．３４，ｐｐ．７０５－７１０
試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原を測定する場合、標準物質の測定値を基準として、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の濃度を決定する。ＤＵＰＡＮ－２抗原の測定に用いられる標準物質として、ヒト膵癌患者の腹水由来のＤＵＰＡＮ－２抗原、ヒト膵癌培養細胞ＨＰＡＦ由来のＤＵＰＡＮ－２抗原等が用いられるが、異なる種類の標準物質を測定した場合に、同じ濃度の標準物質であるにもかかわらず、それぞれの測定値が異なることがあった。そのため、どの種類の標準物質を使用したかによって、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の濃度が変わることがあった。そこで、異なる種類の標準物質を測定した際の測定値の差を無くし、又は測定値の差を小さくし、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原を正確に測定できる測定方法及び測定試薬が必要とされていた。
本発明の課題は、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原を正確に測定できる測定方法、測定試薬及び測定キットを提供することにある。
本発明の課題は、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原を正確に測定できる測定方法、測定試薬及び測定キットを提供することにある。
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意検討を行った結果、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原と、不溶性担体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体とを反応させる際に、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体とを所定の割合で混合させることにより、異なる種類の標準物質を測定した際の測定値の差を無くし、又は測定値の差を小さくすることができ、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原を正確に測定できることを見出し、本開示内容の発明を完成するに至った。
すなわち、本開示は一態様において以下を提供する。
［１］ 水性媒体と、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原と、不溶性担体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体と、を含む混合液を調製することを含み、
前記混合液において、前記不溶性担体と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、が結合し、
前記混合液において、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の量が、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体の量の３重量倍以上１００重量倍以下である、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法。
［１］ 水性媒体と、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原と、不溶性担体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体と、を含む混合液を調製することを含み、
前記混合液において、前記不溶性担体と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、が結合し、
前記混合液において、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の量が、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体の量の３重量倍以上１００重量倍以下である、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法。
［２］ （１）水性媒体中で、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原に、不溶性担体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体と、を反応させ、前記不溶性担体上に、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体と、からなる免疫複合体を生成させる工程；及び
（２）工程（１）で生成された免疫複合体を測定する工程、
を含み、
工程（１）において、前記不溶性担体と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、が結合し、
工程（１）において、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の量が、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体の量の３重量倍以上１００重量倍以下である、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法。
（２）工程（１）で生成された免疫複合体を測定する工程、
を含み、
工程（１）において、前記不溶性担体と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、が結合し、
工程（１）において、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の量が、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体の量の３重量倍以上１００重量倍以下である、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法。
［３］ （１）水性媒体中で、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原に、不溶性担体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、を反応させ、前記不溶性担体上に、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原と、からなる免疫複合体１を生成させる工程；
（２）ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体を、水性媒体中で、工程（１）で生成した免疫複合体１と反応させ、前記不溶性担体上に、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体とからなる免疫複合体２を生成させる工程；及び
（３）工程（２）で生成された免疫複合体２を測定する工程、
を含み、
工程（１）において、前記不溶性担体と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、が結合し、
工程（２）おいて、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の量が、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体の量の３重量倍以上１００重量倍以下である、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法。
（２）ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体を、水性媒体中で、工程（１）で生成した免疫複合体１と反応させ、前記不溶性担体上に、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体とからなる免疫複合体２を生成させる工程；及び
（３）工程（２）で生成された免疫複合体２を測定する工程、
を含み、
工程（１）において、前記不溶性担体と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、が結合し、
工程（２）おいて、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の量が、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体の量の３重量倍以上１００重量倍以下である、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法。
［４］ （１）ＤＵＰＡＮ－２抗原を含む試料に、不溶性担体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体と、を添加する工程；
（２）水性媒体中で、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原に、前記不溶性担体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体と、を反応させ、前記不溶性担体上に、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体と、からなる免疫複合体を生成させる工程；及び
（３）工程（２）で生成された免疫複合体を測定する工程、
を含み、
工程（２）において、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、前記不溶性担体とが結合し、
工程（１）において、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の添加量が、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体の添加量の３重量倍以上１００重量倍以下である、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法。
（２）水性媒体中で、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原に、前記不溶性担体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体と、を反応させ、前記不溶性担体上に、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体と、からなる免疫複合体を生成させる工程；及び
（３）工程（２）で生成された免疫複合体を測定する工程、
を含み、
工程（２）において、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、前記不溶性担体とが結合し、
工程（１）において、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の添加量が、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体の添加量の３重量倍以上１００重量倍以下である、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法。
［５］ （１）ＤＵＰＡＮ－２抗原を含む試料に、不溶性担体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、を添加する工程；
（２）水性媒体中で、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原に、前記不溶性担体と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、を反応させ、前記不溶性担体上に、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原と、からなる免疫複合体１を生成させる工程；
（３）工程（２）で生成した免疫複合体１に、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体を添加する工程；
（４）水性媒体中で、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体を、工程（２）で生成した免疫複合体１と反応させ、前記不溶性担体上に、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体と、からなる免疫複合体２を生成させる工程；及び
（５）工程（４）で生成された免疫複合体２を測定する工程、
を含み、
工程（２）において、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、前記不溶性担体とが結合し、
工程（１）における、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の添加量が、工程（３）における、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体の添加量の３重量倍以上１００重量倍以下である、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法。
［６］ 前記不溶性担体と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体とは、２つの親和性物質を介して結合することができ、前記不溶性担体には２つの親和性物質のうちの片方が結合し、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体には２つの親和性物質のうちのもう一方が結合している、［１］～［５］のいずれか１に記載の方法。
［７］ ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体に標識が結合している、［１］～［６］のいずれか１に記載の方法。
［８］ 標識がアルカリホスファターゼである、［７］に記載の方法。
（２）水性媒体中で、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原に、前記不溶性担体と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、を反応させ、前記不溶性担体上に、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原と、からなる免疫複合体１を生成させる工程；
（３）工程（２）で生成した免疫複合体１に、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体を添加する工程；
（４）水性媒体中で、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体を、工程（２）で生成した免疫複合体１と反応させ、前記不溶性担体上に、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体と、からなる免疫複合体２を生成させる工程；及び
（５）工程（４）で生成された免疫複合体２を測定する工程、
を含み、
工程（２）において、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、前記不溶性担体とが結合し、
工程（１）における、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の添加量が、工程（３）における、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体の添加量の３重量倍以上１００重量倍以下である、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法。
［６］ 前記不溶性担体と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体とは、２つの親和性物質を介して結合することができ、前記不溶性担体には２つの親和性物質のうちの片方が結合し、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体には２つの親和性物質のうちのもう一方が結合している、［１］～［５］のいずれか１に記載の方法。
［７］ ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体に標識が結合している、［１］～［６］のいずれか１に記載の方法。
［８］ 標識がアルカリホスファターゼである、［７］に記載の方法。
［９］ 不溶性担体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体と、を含み、
前記不溶性担体と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体とは、２つの親和性物質を介して結合することができ、
前記不溶性担体には２つの親和性物質のうちの片方が結合し、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体には２つの親和性物質のうちのもう一方が結合しており、
前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の量が、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体の量の３重量倍以上１００重量倍以下である、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定試薬。
前記不溶性担体と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体とは、２つの親和性物質を介して結合することができ、
前記不溶性担体には２つの親和性物質のうちの片方が結合し、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体には２つの親和性物質のうちのもう一方が結合しており、
前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の量が、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体の量の３重量倍以上１００重量倍以下である、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定試薬。
［１０］ 不溶性担体を含む第１試薬と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体を含む第２試薬と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体を含む第３試薬と、を含み、
前記不溶性担体と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体とは、２つの親和性物質を介して結合することができ、
前記不溶性担体には２つの親和性物質のうちの片方が結合し、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体には２つの親和性物質のうちのもう一方が結合しており、
第２試薬における前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の量が、第３試薬における前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体の量の３重量倍以上１００重量倍以下である、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定キット。
前記不溶性担体と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体とは、２つの親和性物質を介して結合することができ、
前記不溶性担体には２つの親和性物質のうちの片方が結合し、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体には２つの親和性物質のうちのもう一方が結合しており、
第２試薬における前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の量が、第３試薬における前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体の量の３重量倍以上１００重量倍以下である、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定キット。
本開示によれば、異なる種類の標準物質を測定した場合であっても、それぞれの標準物質の測定値の差が無くなる、又は測定値の差が小さくなる。従って、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原を正確に測定できる方法、試薬及びキットを提供することができる。
以下、本開示を実施するための形態ついて詳細に説明する。なお、以下に説明する実施形態は、本開示の代表的な実施形態の一例を示したものであり、これにより開示の範囲が狭く解釈されることはない。
なお、「～」を用いて示された数値範囲は、「～」の前後に記載される数値をそれぞれ最小値及び最大値として含む範囲を示す。また、溶液中の各成分の量は、溶液中に各成分に該当する物質が複数存在する場合、特に断らない限り、試薬中に存在する当該複数の物質の合計量を意味する。
本開示において、「％（ｗ／ｖ）」とは、体積（１００ｍＬ）を基準とする質量（ｇ）の百分率を意味する。
なお、「～」を用いて示された数値範囲は、「～」の前後に記載される数値をそれぞれ最小値及び最大値として含む範囲を示す。また、溶液中の各成分の量は、溶液中に各成分に該当する物質が複数存在する場合、特に断らない限り、試薬中に存在する当該複数の物質の合計量を意味する。
本開示において、「％（ｗ／ｖ）」とは、体積（１００ｍＬ）を基準とする質量（ｇ）の百分率を意味する。
本開示において、抗体とＤＵＰＡＮ－２抗原とが「結合する」、「反応する」、あるいは抗体がＤＵＰＡＮ－２抗原を「認識する」と表現する場合、本開示の分野で通常使用される意味を含み、いずれも同義で用いる。抗体とＤＵＰＡＮ－２抗原とが「結合する」ことを確認する方法としては、当業者に周知の競合ＥＬＩＳＡ法、サンドイッチＥＬＩＳＡ法、表面プラズモン共鳴の原理を利用した方法などにより行うことができる。
「水性媒体」
本開示における水性媒体としては、脱イオン水、蒸留水、緩衝液等が挙げられ、緩衝液が好ましい。緩衝液の調製に使用される緩衝剤としては、酢酸緩衝液、グッド緩衝剤等が挙げられる。緩衝剤は、１種を単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。
水性媒体には、塩類、金属イオン、糖類、蛋白質、界面活性剤等が含有されてもよい。
塩類としては、塩化リチウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、塩化マグネシウム等が挙げられる。金属イオンとしては、ナトリウムイオン、マグネシウムイオン、マンガンイオン、亜鉛イオン等が挙げられる。糖類としては、マンニトール、ソルビトール等が挙げられる。蛋白質としては、ウシ血清アルブミン（以下、ＢＳＡと記す）等が挙げられる。界面活性剤としては、陰イオン性界面活性剤、陽イオン性界面活性剤、両イオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤等が挙げられる。
本開示における水性媒体としては、脱イオン水、蒸留水、緩衝液等が挙げられ、緩衝液が好ましい。緩衝液の調製に使用される緩衝剤としては、酢酸緩衝液、グッド緩衝剤等が挙げられる。緩衝剤は、１種を単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。
水性媒体には、塩類、金属イオン、糖類、蛋白質、界面活性剤等が含有されてもよい。
塩類としては、塩化リチウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、塩化マグネシウム等が挙げられる。金属イオンとしては、ナトリウムイオン、マグネシウムイオン、マンガンイオン、亜鉛イオン等が挙げられる。糖類としては、マンニトール、ソルビトール等が挙げられる。蛋白質としては、ウシ血清アルブミン（以下、ＢＳＡと記す）等が挙げられる。界面活性剤としては、陰イオン性界面活性剤、陽イオン性界面活性剤、両イオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤等が挙げられる。
「試料」
本開示における試料としては、ＤＵＰＡＮ－２抗原を含有する可能性がある試料であれば特に制限はなく、全血、血漿、血清、尿、腹水、髄液、唾液、羊水、尿、汗及び膵液からなる群から選択されるいずれか１以上の生体試料等が挙げられ、好ましくは全血、血漿、血清、腹水等が挙げられる。また、ヒト膵癌培養細胞ＨＰＡＦの細胞可溶化物（ｃｅｌｌ ｌｙｓａｔｅ）、ヒト膵癌培養細胞ＨＰＡＦを培養した際に得られる培養上清であってもよい。
本開示における試料は、水性媒体に含まれるＤＵＰＡＮ－２抗原であってもよく、例えば、リン酸緩衝化生理食塩水（０．１５ｍｏｌ／Ｌの塩化ナトリウムを含有する１０ｍｍｏｌ／Ｌリン酸緩衝液、ｐＨ７．２、以下、ＰＢＳと記す）等で希釈されたＤＵＰＡＮ－２抗原が挙げられる。水性媒体に含まれるＤＵＰＡＮ－２抗原としては、前記生体試料、前記細胞可溶化物又は前記培養上清から精製されたＤＵＰＡＮ－２抗原を用いることができる。
本開示における試料としては、ＤＵＰＡＮ－２抗原を含有する可能性がある試料であれば特に制限はなく、全血、血漿、血清、尿、腹水、髄液、唾液、羊水、尿、汗及び膵液からなる群から選択されるいずれか１以上の生体試料等が挙げられ、好ましくは全血、血漿、血清、腹水等が挙げられる。また、ヒト膵癌培養細胞ＨＰＡＦの細胞可溶化物（ｃｅｌｌ ｌｙｓａｔｅ）、ヒト膵癌培養細胞ＨＰＡＦを培養した際に得られる培養上清であってもよい。
本開示における試料は、水性媒体に含まれるＤＵＰＡＮ－２抗原であってもよく、例えば、リン酸緩衝化生理食塩水（０．１５ｍｏｌ／Ｌの塩化ナトリウムを含有する１０ｍｍｏｌ／Ｌリン酸緩衝液、ｐＨ７．２、以下、ＰＢＳと記す）等で希釈されたＤＵＰＡＮ－２抗原が挙げられる。水性媒体に含まれるＤＵＰＡＮ－２抗原としては、前記生体試料、前記細胞可溶化物又は前記培養上清から精製されたＤＵＰＡＮ－２抗原を用いることができる。
「不溶性担体」
本開示において、不溶性担体は、本開示のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法を可能とし、又は本開示の測定試薬若しくは測定キットに使用可能な不溶性担体であれば特に制限はなく、スライドグラス、ＥＬＩＳＡプレート（マイクロタイタープレート）、ビーズ、ラテックス粒子、磁性粒子、フィルター、フィルム、メンブレン等が挙げられる。不溶性担体の材料としては、無機基材、多糖類基材、高分子基材等からなるものが挙げられ、例えばガラス、シリコン、セラミック、セルロース、ニトロセルロース、ナイロン、ポリカーボネート、ポリエチレン、ポリプルピレン、ポリスチレン、ポリエチレンテレフタレート、ポリウレタンが挙げられる。
本開示において、不溶性担体は、本開示のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法を可能とし、又は本開示の測定試薬若しくは測定キットに使用可能な不溶性担体であれば特に制限はなく、スライドグラス、ＥＬＩＳＡプレート（マイクロタイタープレート）、ビーズ、ラテックス粒子、磁性粒子、フィルター、フィルム、メンブレン等が挙げられる。不溶性担体の材料としては、無機基材、多糖類基材、高分子基材等からなるものが挙げられ、例えばガラス、シリコン、セラミック、セルロース、ニトロセルロース、ナイロン、ポリカーボネート、ポリエチレン、ポリプルピレン、ポリスチレン、ポリエチレンテレフタレート、ポリウレタンが挙げられる。
「ＤＵＰＡＮ－２抗原」
本開示におけるＤＵＰＡＮ－２抗原は、モノクローナル抗体「ＤＵＰＡＮ－２」（Ｍｅｔｚｇａｒら、“Ａｎｔｉｇｅｎｓ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ Ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ Ｃｅｌｌｓ Ｄｅｆｉｎｅｄ ｂｙ Ｍｕｒｉｎｅ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ”、 ＣＡＮＣＥＲ ＲＥＳＥＡＲＣＨ（１９８２）， ４２：６０１－６０８）が結合するムチン様タンパク質（糖タンパク質）、モノクローナル抗体「ＤＵＰＡＮ－２」が結合する糖鎖、又は当該糖鎖を含むペプチドをいう。具体的には、ＤＵＰＡＮ－２抗原は、モノクローナル抗体「ＤＵＰＡＮ－２」が結合すると報告されているシアリルルイスＣ糖鎖（Ｋａｗａら、“Ｅｐｉｔｏｐｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｓｐａｎ－１ ａｎｄ ＤＵＰＡＮ－２ ｕｓｉｎｇ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄ Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ Ｓｉａｌｙｌｌａｃｔ－Ｎ－Ｆｕｃｏｐｅｎｔａｏｓｅ ＩＩ ａｎｄ Ｓｉａｌｙｌｌａｃｔ－Ｎ－Ｔｅｔｒａｏｓｅ”、 Ｐａｎｃｒｅａｓ （１９９４）， ９ （６）：６９２－６９７）、当該糖鎖を有するタンパク質、又は当該糖鎖を有するペプチドをいう。ＤＵＰＡＮ－２抗原としては、ヒト膵癌患者の腹水、又はヒト膵癌培養細胞ＨＰＡＦの培養上清に含まれるＤＵＰＡＮ－２抗原を使用することができる。ヒト膵癌培養細胞ＨＰＡＦは、「ＨＰＡＦ－ＩＩ」という名称でＡＴＣＣ（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）から入手することができる。
本開示におけるＤＵＰＡＮ－２抗原は、モノクローナル抗体「ＤＵＰＡＮ－２」（Ｍｅｔｚｇａｒら、“Ａｎｔｉｇｅｎｓ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ Ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ Ｃｅｌｌｓ Ｄｅｆｉｎｅｄ ｂｙ Ｍｕｒｉｎｅ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ”、 ＣＡＮＣＥＲ ＲＥＳＥＡＲＣＨ（１９８２）， ４２：６０１－６０８）が結合するムチン様タンパク質（糖タンパク質）、モノクローナル抗体「ＤＵＰＡＮ－２」が結合する糖鎖、又は当該糖鎖を含むペプチドをいう。具体的には、ＤＵＰＡＮ－２抗原は、モノクローナル抗体「ＤＵＰＡＮ－２」が結合すると報告されているシアリルルイスＣ糖鎖（Ｋａｗａら、“Ｅｐｉｔｏｐｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｓｐａｎ－１ ａｎｄ ＤＵＰＡＮ－２ ｕｓｉｎｇ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄ Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ Ｓｉａｌｙｌｌａｃｔ－Ｎ－Ｆｕｃｏｐｅｎｔａｏｓｅ ＩＩ ａｎｄ Ｓｉａｌｙｌｌａｃｔ－Ｎ－Ｔｅｔｒａｏｓｅ”、 Ｐａｎｃｒｅａｓ （１９９４）， ９ （６）：６９２－６９７）、当該糖鎖を有するタンパク質、又は当該糖鎖を有するペプチドをいう。ＤＵＰＡＮ－２抗原としては、ヒト膵癌患者の腹水、又はヒト膵癌培養細胞ＨＰＡＦの培養上清に含まれるＤＵＰＡＮ－２抗原を使用することができる。ヒト膵癌培養細胞ＨＰＡＦは、「ＨＰＡＦ－ＩＩ」という名称でＡＴＣＣ（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）から入手することができる。
「ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体」
本開示において、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体（ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体）とは、ＤＵＰＡＮ－２抗原のシアリルルイスＣを認識し、ＤＵＰＡＮ－２抗原に結合することができる抗体をいう。
本開示において、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体（ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体）とは、ＤＵＰＡＮ－２抗原のシアリルルイスＣを認識し、ＤＵＰＡＮ－２抗原に結合することができる抗体をいう。
ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体は、マウス抗体、ラット抗体、ウサギ抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体若しくはキメラ抗体であってよく、又は他の種由来抗体であってもよい。また、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体は、免疫グロブリン分子の任意のクラス（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ及びＩｇＡ）、任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）であり得る。
ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体としては、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、二量体、多量体等が挙げられ、均質性及び安定性の観点からはモノクローナル抗体が好ましい。
本開示において、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体は抗体断片であってもよい。抗体断片とは、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体の一部であって、抗体の可変ドメインを含むか、少なくとも抗原結合領域を含むものをいう。本開示における抗体断片としては、例えばＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片、線状抗体、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）、ｓｃ（Ｆｖ）２、Ｆａｂ３、ドメイン抗体（ｄＡｂ）、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ及びミニボディが挙げられる。「Ｆｖ断片」は最小の抗体断片であり、完全な抗原認識領域と抗原結合領域を含む。
本開示のＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体とは、それぞれの抗体が結合するＤＵＰＡＮ－２抗原の部位は同じであっても、異なっていてもよい。また、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体とは同一の抗体であってもよいし、異なる抗体であってもよい。
本開示におけるＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する抗体は、ＤＵＰＡＮ－２抗原、又はＤＵＰＡＮ－２抗原を産生する癌細胞を免疫原として用いて、通常の抗体の作製方法により取得することができる。例えば、前記免疫原を動物に免疫することで得られる抗体産生細胞と、ミエローマ細胞とを融合した細胞（ハイブリドーマ）を作製し、前記ハイブリドーマが産生するモノクローナル抗体を得ることにより取得することができる。ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識するモノクローナル抗体としては、前述のモノクローナル抗体「ＤＵＰＡＮ－２」（Ｍｅｔｚｇａｒら、“Ａｎｔｉｇｅｎｓ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ Ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ Ｃｅｌｌｓ Ｄｅｆｉｎｅｄ ｂｙ Ｍｕｒｉｎｅ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ”、ＣＡＮＣＥＲ ＲＥＳＥＡＲＣＨ（１９８２），４２：６０１－６０８）等が挙げられる。なお、本開示において、当該モノクローナル抗体ＤＵＰＡＮ－２を「ＤＵＰＡＮ－２抗体」とも記載する。
「試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法」
本開示における試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法の一つの態様は、水性媒体と、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原と、不溶性担体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体と、を含む混合液を調製することを含む、ＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法である。
本開示における試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法の一つの態様は、水性媒体と、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原と、不溶性担体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体と、を含む混合液を調製することを含む、ＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法である。
水性媒体と、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原と、不溶性担体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体と、を含む混合液を調製した後、以下の工程を行うことで、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原を測定することができる。
（１）ＤＵＰＡＮ－２抗原と、不溶性担体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体とを反応させ、前記不溶性担体上に、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体と、からなる免疫複合体を生成させる工程；及び
（２）工程（１）で生成された免疫複合体を測定する工程。
（１）ＤＵＰＡＮ－２抗原と、不溶性担体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体とを反応させ、前記不溶性担体上に、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体と、からなる免疫複合体を生成させる工程；及び
（２）工程（１）で生成された免疫複合体を測定する工程。
前記工程（１）において、前記不溶性担体と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体とが結合し、不溶性担体に結合した、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体が生成する。
ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の、不溶性担体への結合方法としては、本開示のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法を可能とする結合方法であれば特に制限はなく、物理吸着による結合、化学結合による結合等が挙げられる。物理吸着としては、静電的結合、水素結合、疎水結合等が挙げられる。化学結合としては、共有結合、配位結合等が挙げられる。
ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の、不溶性担体への結合方法としては、本開示のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法を可能とする結合方法であれば特に制限はなく、物理吸着による結合、化学結合による結合等が挙げられる。物理吸着としては、静電的結合、水素結合、疎水結合等が挙げられる。化学結合としては、共有結合、配位結合等が挙げられる。
ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体は、前述の物理吸着及び／又は化学結合を利用して、直接、不溶性担体に結合させてもよいし、間接的に不溶性担体に結合させてもよい。間接的な結合方法としては、ビオチンとアビジン類（アビジン、ストレプトアビジン、ニュートラアビジン等）等の一組の親和性物質の特異的結合を利用して、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体を不溶性担体に結合する方法、リンカーを介した共有結合により不溶性担体に結合する方法等が挙げられる。
一組の親和性物質を用いる場合、一組の親和性物質の一方（Ａ）が結合したＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、一組の親和性物質の他方（ａ）が結合した不溶性担体とを、結合させることにより、不溶性担体に結合した、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体を生成させることができる。
Ａ－ａの組み合わせとしては、以下の組み合わせ等が挙げられる。
・ビオチンとアビジン類（アビジン、ニュートラアビジン、ストレプトアビジン等）との組み合わせ；
・アビジン類（アビジン、ニュートラアビジン、ストレプトアビジン等）とビオチンとの組み合わせ；
・ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体のＦｃ領域と、Ｆｃ領域と結合する抗体との組み合わせ。
・ビオチンとアビジン類（アビジン、ニュートラアビジン、ストレプトアビジン等）との組み合わせ；
・アビジン類（アビジン、ニュートラアビジン、ストレプトアビジン等）とビオチンとの組み合わせ；
・ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体のＦｃ領域と、Ｆｃ領域と結合する抗体との組み合わせ。
リンカーとしては、不溶性担体表面の官能基と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体が有する官能基との両者を共有結合できる分子等が挙げられ、例えば、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体が有する官能基と反応することができる第１の反応活性基と、不溶性担体表面の官能基と反応することができる第２の反応活性基とを同時に持つ分子であって、第１の反応活性基と第２の反応活性基とが異なる基である分子が好ましく用いられる。ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体が有する官能基、及び不溶性担体がその表面に保持している官能基としては、カルボキシル基、アミノ基、グリシジル基、スルフヒドリル基、水酸基、アミド基、イミノ基、Ｎ－ヒドロキシサクシニル基、マレイミド基等が挙げられる。リンカーにおける反応活性基としては、アリルアジド、カルボジイミド、ヒドラジド、アルデヒド、ヒドロキシメチルホスフィン、イミドエステル、イソシアネート、マレイミド、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル、ペンタフルオロフェニル（ＰＦＰ）エステル、ソラレン、ピリジルジスルフィド、ビニルスルホン等の基が挙げられる。
前記工程（２）の後に、以下の工程（３）及び工程（４）を行うことにより、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の濃度を決定することもできる。
（３）試料として既知濃度のＤＵＰＡＮ－２抗原を用いて、前記工程（１）から（２）を行い、ＤＵＰＡＮ－２抗原濃度と測定値との関係を表す検量線を作成する工程；
（４）工程（３）で作成された検量線と、工程（２）の測定により得られた測定値とから、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の濃度を決定する工程。
（３）試料として既知濃度のＤＵＰＡＮ－２抗原を用いて、前記工程（１）から（２）を行い、ＤＵＰＡＮ－２抗原濃度と測定値との関係を表す検量線を作成する工程；
（４）工程（３）で作成された検量線と、工程（２）の測定により得られた測定値とから、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の濃度を決定する工程。
既知濃度のＤＵＰＡＮ－２抗原としては、ヒト膵癌患者の腹水由来のＤＵＰＡＮ－２抗原（以下、単に「腹水由来のＤＵＰＡＮ－２抗原」と記す）又はヒト膵癌培養細胞ＨＰＡＦ由来のＤＵＰＡＮ－２抗原をＰＢＳで希釈したＤＵＰＡＮ－２抗原溶液等が挙げられる。既知濃度のＤＵＰＡＮ－２抗原について、複数の濃度を用意してもよい。
既知濃度のＤＵＰＡＮ－２抗原におけるＤＵＰＡＮ－２抗原の濃度としては、ＤＵＰＡＮ－２抗原の測定を可能とする濃度であれば特に限定はなく、１０Ｕ／ｍＬ以上、２０Ｕ／ｍＬ以上、３０Ｕ／ｍＬ以上、４０Ｕ／ｍＬ以上、５０Ｕ／ｍＬ以上、６０Ｕ／ｍＬ以上、７０Ｕ／ｍＬ以上、８０Ｕ／ｍＬ以上、９０Ｕ／ｍＬ以上、又は１００Ｕ／ｍＬ以上であってよい。また、既知濃度のＤＵＰＡＮ－２抗原におけるＤＵＰＡＮ－２抗原の濃度は、２００Ｕ／ｍＬ以下、３００Ｕ／ｍＬ以下、３５０Ｕ／ｍＬ以下、４００Ｕ／ｍＬ以下、５００Ｕ／ｍＬ以下、６００Ｕ／ｍＬ以下、７００Ｕ／ｍＬ以下、８００Ｕ／ｍＬ以下、９００Ｕ／ｍＬ以下、１０００Ｕ／ｍＬ以下、１１００Ｕ／ｍＬ以下、１２００Ｕ／ｍＬ以下、１４００Ｕ／ｍＬ以下、１６００Ｕ／ｍＬ以下、１８００Ｕ／ｍＬ以下、２０００Ｕ／ｍＬ以下、３０００Ｕ／ｍＬ以下、４０００Ｕ／ｍＬ以下、５０００Ｕ／ｍＬ以下、６０００Ｕ／ｍＬ以下、７０００Ｕ／ｍＬ以下、８０００Ｕ／ｍＬ以下、９０００Ｕ／ｍＬ以下、１００００Ｕ／ｍＬ以下、又は１５０００Ｕ／ｍＬ以下であってよい。
なお、ＤＵＰＡＮ－２抗原の濃度単位「Ｕ／ｍＬ」について、「特定の膵癌患者の血清を競合ラジオイムノアッセイ法により測定した場合の、当該血清に含まれるＤＵＰＡＮ－２抗原の濃度を１０００Ｕ／ｍＬする」と定義される（Ｍｅｔｚｇａｒら、“Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｃａｎｃｅｒ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ａｎｔｉｇｅｎ （ＤＵ－ＰＡＮ－２ ａｎｔｉｇｅｎ） ｉｎ ｓｅｒｕｍ ａｎｄ ａｓｃｉｔｅｓ ｏｆ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ”、Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ、１９８４年，Ｖｏｌ．８１，ｐｐ．５２４２－５２４６）。
なお、ＤＵＰＡＮ－２抗原の濃度単位「Ｕ／ｍＬ」について、「特定の膵癌患者の血清を競合ラジオイムノアッセイ法により測定した場合の、当該血清に含まれるＤＵＰＡＮ－２抗原の濃度を１０００Ｕ／ｍＬする」と定義される（Ｍｅｔｚｇａｒら、“Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｃａｎｃｅｒ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ａｎｔｉｇｅｎ （ＤＵ－ＰＡＮ－２ ａｎｔｉｇｅｎ） ｉｎ ｓｅｒｕｍ ａｎｄ ａｓｃｉｔｅｓ ｏｆ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ”、Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ、１９８４年，Ｖｏｌ．８１，ｐｐ．５２４２－５２４６）。
前記の数値は自由に組み合わせることができる。例えば、１０Ｕ／ｍＬ～１００００Ｕ／ｍＬであってよく、２０Ｕ／ｍＬ～５０００Ｕ／ｍＬであってよく、３０Ｕ／ｍＬ～１６００Ｕ／ｍＬであってよく、４０Ｕ／ｍＬ～４００Ｕ／ｍＬであってよく、４０Ｕ／ｍＬ～３５０Ｕ／ｍＬであってよい。
本開示では、ある濃度について、上限値の例と下限値の例とからそれぞれ任意の数値を選択し、それらを組み合わせて得られる数値範囲も、本開示に例示されているものとみなす。重量倍、モル当量倍、温度、時間の他の数値についても同様である。
本開示では、ある濃度について、上限値の例と下限値の例とからそれぞれ任意の数値を選択し、それらを組み合わせて得られる数値範囲も、本開示に例示されているものとみなす。重量倍、モル当量倍、温度、時間の他の数値についても同様である。
前記工程（２）の前に、洗浄工程を設けることもできる。不溶性担体の洗浄に使用する洗浄液としては、ＤＵＰＡＮ－２抗原の測定を可能とする洗浄液であれば特に制限はなく、ＰＢＳ、界面活性剤を含有するＰＢＳ等が挙げられる。界面活性剤としては、例えばＴｗｅｅｎ（登録商標） ２０等の非イオン性界面活性剤が挙げられる。
前記混合液を調製することにおいて、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原と、不溶性担体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体とを、どのような順序で混合してもよい。例えば、不溶性担体に、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体とを混合してもよいし、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体に、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原と、不溶性担体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体とを混合してもよいし、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体に、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原と、不溶性担体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体とを混合してもよいし、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原に、不溶性担体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体とを混合してもよい。
前記混合液において、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の量は、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体の量の２．６重量倍以上、２．７重量倍以上、２．８重量倍以上、２．９重量倍以上、３重量倍以上、４重量倍以上、５重量倍以上、６重量倍以上、７重量倍以上、８重量倍以上、又は９重量倍以上であってよい。また、前記混合液において、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の量は、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体の量の１０重量倍以下、１２重量倍以下、１３重量倍以下、１４重量倍以下、１５重量倍以下、２０重量倍以下、２５重量倍以下、３０重量倍以下、３５重量倍以下、４０重量倍以下、４５重量倍以下、５０重量倍以下、６０重量倍以下、７０重量倍以下、８０重量倍以下、９０重量倍以下、１００重量倍以下、１５０重量倍以下、又は２００重量倍以下であってよい。
前記の数値は自由に組み合わせることができる。例えば、前記混合液において、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の量は、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体の量の２．６重量倍以上２００重量倍以下であってもよく、２．８重量倍以上１５０重量倍以下であってもよく、３重量倍以上１００重量倍以下であってもよく、３重量倍以上３０重量倍以下であってもよく、５重量倍以上３０重量倍以下であってもよく、５重量倍以上１０重量倍以下であってもよい。
前記混合液において、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の量は、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体の量の２．６モル当量倍以上、２．７モル当量倍以上、２．８モル当量倍以上、２．９モル当量倍以上、３モル当量倍以上、４モル当量倍以上、５モル当量倍以上、６モル当量倍以上、７モル当量倍以上、８モル当量倍以上、又は９モル当量倍以上であってよい。また、前記混合液において、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の量は、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体の量の１０モル当量倍以下、１２モル当量倍以下、１３モル当量倍以下、１４モル当量倍以下、１５モル当量倍以下、２０モル当量倍以下、２５モル当量倍以下、３０モル当量倍以下、３５モル当量倍以下、４０モル当量倍以下、４５モル当量倍以下、５０モル当量倍以下、６０モル当量倍以下、７０モル当量倍以下、８０モル当量倍以下、９０モル当量倍以下、１００モル当量倍以下、１５０モル当量倍以下、又は２００モル当量倍以下であってよい。
前記の数値は自由に組み合わせることができる。例えば、前記混合液において、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の量は、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体の量の２．６モル当量倍以上２００モル当量倍以下、２．８モル当量倍以上１５０モル当量倍以下であってもよく、３モル当量倍以上１００モル当量倍以下であってもよく、３モル当量倍以上３０モル当量倍以下であってもよく、５モル当量倍以上３０モル当量倍以下であってもよく、５モル当量倍以上１０モル当量倍以下であってもよい。
前記混合液における不溶性担体の濃度は、本開示のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定を可能とする濃度であれば特に限定はなく、０．００１ｍｇ／ｍＬ以上、０．００２ｍｇ／ｍＬ以上、０．００３ｍｇ／ｍＬ以上、０．００４ｍｇ／ｍＬ以上、０．００５ｍｇ／ｍＬ以上、０．０１ｍｇ／ｍＬ以上、０．０２ｍｇ／ｍＬ以上、０．０３ｍｇ／ｍＬ以上、０．０４ｍｇ／ｍＬ以上、０．０５ｍｇ／ｍＬ以上、０．０６ｍｇ／ｍＬ以上、０．０７ｍｇ／ｍＬ以上、０．０８ｍｇ／ｍＬ以上、０．０９ｍｇ／ｍＬ以上、０．１ｍｇ／ｍＬ以上、０．２ｍｇ／ｍＬ以上、０．３ｍｇ／ｍＬ以上、０．４ｍｇ／ｍＬ以上、又は０．５ｍｇ／ｍＬ以上であってよい。また、前記混合液における不溶性担体の濃度は、０．６ｍｇ／ｍＬ以下、０．７ｍｇ／ｍＬ以下、０．８ｍｇ／ｍＬ以下、０．９ｍｇ／ｍＬ以下、１ｍｇ／ｍＬ以下、２ｍｇ／ｍＬ以下、３ｍｇ／ｍＬ以下、４ｍｇ／ｍＬ以下、５ｍｇ／ｍＬ以下、６ｍｇ／ｍＬ以下、７ｍｇ／ｍＬ以下、８ｍｇ／ｍＬ以下、９ｍｇ／ｍＬ以下、又は１０ｍｇ／ｍＬ以下であってよい。
前記の数値は自由に組み合わせることができる。例えば、前記混合液における不溶性担体の濃度は、０．００３ｍｇ／ｍＬ～１０ｍｇ／ｍＬであってもよく、０．０１ｍｇ／ｍＬ～３ｍｇ／ｍＬであってもよく、０．０５ｍｇ／ｍＬ～１ｍｇ／ｍＬであってもよい。
前記混合液中の、ＤＵＰＡＮ－２抗原に結合する第１抗体の濃度は、本開示のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定を可能とする濃度であれば特に制限はなく、０．０１μｇ／ｍＬ以上、０．０２μｇ／ｍＬ以上、０．０３μｇ／ｍＬ以上、０．０４μｇ／ｍＬ以上、０．０５μｇ／ｍＬ以上、０．０６μｇ／ｍＬ以上、０．０７μｇ／ｍＬ以上、０．０８μｇ／ｍＬ以上、０．０９μｇ／ｍＬ以上、０．１μｇ／ｍＬ以上、０．２μｇ／ｍＬ以上、０．３μｇ／ｍＬ以上、０．４μｇ／ｍＬ以上、０．５μｇ／ｍＬ以上、０．６μｇ／ｍＬ以上、０．７μｇ／ｍＬ以上、０．８μｇ／ｍＬ以上、０．９μｇ／ｍＬ以上、１μｇ／ｍＬ以上、２μｇ／ｍＬ以上、３μｇ／ｍＬ以上、４μｇ／ｍＬ以上、５μｇ／ｍＬ以上、６μｇ／ｍＬ以上、７μｇ／ｍＬ以上、７．５μｇ／ｍＬ以上、８μｇ／ｍＬ以上、９μｇ／ｍＬ以上、又は１０μｇ／ｍＬ以上であってよい。また、前記混合液中の、ＤＵＰＡＮ－２抗原に結合する第１抗体の濃度は、１１μｇ／ｍＬ以下、１２μｇ／ｍＬ以下、１３μｇ／ｍＬ以下、１４μｇ／ｍＬ以下、１５μｇ／ｍＬ以下、１６μｇ／ｍＬ以下、１７μｇ／ｍＬ以下、１８μｇ／ｍＬ以下、１９μｇ／ｍＬ以下、２０μｇ／ｍＬ以下、３０μｇ／ｍＬ以下、４０μｇ／ｍＬ以下、５０μｇ／ｍＬ以下、又は１００μｇ／ｍＬ以下であってよい。
前記の数値は自由に組み合わせることができる。例えば、前記混合液中の、ＤＵＰＡＮ－２抗原に結合する第１抗体の濃度は、０．０１μｇ／ｍＬ～１００μｇ／ｍＬであってもよく、０．１μｇ／ｍＬ～３０μｇ／ｍＬであってもよく、６μｇ／ｍＬ～３０μｇ／ｍＬであってもよく、１０μｇ／ｍＬ～２０μｇ／ｍＬであってもよい。
前記混合液中の、ＤＵＰＡＮ－２抗原に結合する第２抗体の濃度は、本開示のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定を可能とする濃度であれば特に制限はなく、０．００１μｇ／ｍＬ以上、０．０１μｇ／ｍＬ以上、０．０２μｇ／ｍＬ以上、０．０３μｇ／ｍＬ以上、０．０４μｇ／ｍＬ以上、０．０５μｇ／ｍＬ以上、０．０６μｇ／ｍＬ以上、０．０７μｇ／ｍＬ以上、０．０８μｇ／ｍＬ以上、０．０９μｇ／ｍＬ以上、０．１μｇ／ｍＬ以上、０．２μｇ／ｍＬ以上、０．３μｇ／ｍＬ以上、０．３３μｇ／ｍＬ以上、０．４μｇ／ｍＬ以上、０．５μｇ／ｍＬ以上、０．６μｇ／ｍＬ以上、０．７μｇ／ｍＬ以上、０．８μｇ／ｍＬ以上、又は０．９μｇ／ｍＬ以上であってよい。また、前記混合液中の、ＤＵＰＡＮ－２抗原に結合する第２抗体の濃度は、１μｇ／ｍＬ以下、２μｇ／ｍＬ以下、３μｇ／ｍＬ以下、４μｇ／ｍＬ以下、５μｇ／ｍＬ以下、６μｇ／ｍＬ以下、７μｇ／ｍＬ以下、７．５μｇ／ｍＬ以下、８μｇ／ｍＬ以下、９μｇ／ｍＬ以下、１０μｇ／ｍＬ以下、１１μｇ／ｍＬ以下、１２μｇ／ｍＬ以下、１３μｇ／ｍＬ以下、１４μｇ／ｍＬ以下、１５μｇ／ｍＬ以下、１６μｇ／ｍＬ以下、１７μｇ／ｍＬ以下、１８μｇ／ｍＬ以下、１９μｇ／ｍＬ以下、２０μｇ／ｍＬ以下、３０μｇ／ｍＬ以下、４０μｇ／ｍＬ以下、５０μｇ／ｍＬ以下、又は１００μｇ／ｍＬ以下であってよい。
前記の数値は自由に組み合わせることができる。例えば、前記混合液中の、ＤＵＰＡＮ－２抗原に結合する第２抗体の濃度は、０．０１μｇ／ｍＬ～１００μｇ／ｍＬであってもよく、０．０３μｇ／ｍＬ～３０μｇ／ｍＬであってもよく、０．１μｇ／ｍＬ～２０μｇ／ｍＬであってもよく、０．１μｇ／ｍＬ～１μｇ／ｍＬであってもよい。
なお、本明細書において、ＤＵＰＡＮ－２抗原に結合する第２抗体の量又は濃度とは、当該第２抗体自体の量又は濃度を意味する他、後述の標識と当該第２抗体とが結合した標識抗体の量又は濃度も意味する。
なお、本明細書において、ＤＵＰＡＮ－２抗原に結合する第２抗体の量又は濃度とは、当該第２抗体自体の量又は濃度を意味する他、後述の標識と当該第２抗体とが結合した標識抗体の量又は濃度も意味する。
前記混合液中のＤＵＰＡＮ－２抗原の濃度としては、ＤＵＰＡＮ－２抗原の測定を可能とする濃度であれば特に限定はなく、１Ｕ／ｍＬ～１０００Ｕ／ｍＬであってよく、２Ｕ／ｍＬ～５００Ｕ／ｍＬであってよく、３Ｕ／ｍＬ～１６０Ｕ／ｍＬであってよく、４Ｕ／ｍＬ～１６０Ｕ／ｍＬであってよく、４Ｕ／ｍＬ～４０Ｕ／ｍＬであってよく、６Ｕ／ｍＬ～３５Ｕ／ｍＬであってよい。
本開示における試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法の他の態様は、
（１）水性媒体中で、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原に、不溶性担体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体と、を反応させ、前記不溶性担体上に、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体と、からなる免疫複合体を生成させる工程；及び
（２）工程（１）で生成された免疫複合体を測定する工程、
を含む、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法である。
（１）水性媒体中で、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原に、不溶性担体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体と、を反応させ、前記不溶性担体上に、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体と、からなる免疫複合体を生成させる工程；及び
（２）工程（１）で生成された免疫複合体を測定する工程、
を含む、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法である。
更に、工程（２）の後に、以下の工程（３）及び工程（４）を行うことにより、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の濃度を決定することもできる。
（３）試料として既知濃度のＤＵＰＡＮ－２抗原を用いて、前記工程（１）から（２）を行い、ＤＵＰＡＮ－２抗原濃度と測定値との関係を表す検量線を作成する工程；
（４）工程（３）で作成された検量線と、工程（２）の測定により得られた測定値とから、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の濃度を決定する工程。
（３）試料として既知濃度のＤＵＰＡＮ－２抗原を用いて、前記工程（１）から（２）を行い、ＤＵＰＡＮ－２抗原濃度と測定値との関係を表す検量線を作成する工程；
（４）工程（３）で作成された検量線と、工程（２）の測定により得られた測定値とから、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の濃度を決定する工程。
既知濃度のＤＵＰＡＮ－２抗原としては、腹水由来のＤＵＰＡＮ－２抗原又はヒト膵癌培養細胞ＨＰＡＦ由来のＤＵＰＡＮ－２抗原をＰＢＳで希釈したＤＵＰＡＮ－２抗原溶液等が挙げられる。既知濃度のＤＵＰＡＮ－２抗原について、複数の濃度を用意してもよい。
既知濃度のＤＵＰＡＮ－２抗原におけるＤＵＰＡＮ－２抗原の濃度としては、ＤＵＰＡＮ－２抗原の測定を可能とする濃度であれば特に限定はなく、例えば、前述の濃度等が挙げられる。
既知濃度のＤＵＰＡＮ－２抗原におけるＤＵＰＡＮ－２抗原の濃度としては、ＤＵＰＡＮ－２抗原の測定を可能とする濃度であれば特に限定はなく、例えば、前述の濃度等が挙げられる。
前記工程（２）の前に、洗浄工程を設けることもできる。不溶性担体の洗浄に使用する洗浄液としては、ＤＵＰＡＮ－２抗原の測定を可能とする洗浄液であれば特に制限はなく、ＰＢＳ、界面活性剤を含有するＰＢＳ等が挙げられる。界面活性剤としては、例えばＴｗｅｅｎ ２０等の非イオン性界面活性剤が挙げられる。
＜工程（１）＞
工程（１）は、水性媒体中で、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原に、不溶性担体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体と、を反応させ、前記不溶性担体上に、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体と、からなる免疫複合体を生成させる工程である。
工程（１）は、水性媒体中で、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原に、不溶性担体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体と、を反応させ、前記不溶性担体上に、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体と、からなる免疫複合体を生成させる工程である。
工程（１）において、ＤＵＰＡＮ－２抗原と、不溶性担体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体との反応は、不溶性担体上に、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体とからなる免疫複合体が生成する限りは特に制限はなく、例えば、ＤＵＰＡＮ－２抗原に、不溶性担体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体とを反応させて、不溶性担体上に、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体とＤＵＰＡＮ－２抗原との免疫複合体を生成させた後に、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体を反応させてもよいし、ＤＵＰＡＮ－２抗原に、不溶性担体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体とを混合して反応させてもよい。
ＤＵＰＡＮ－２抗原に、不溶性担体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体とを混合して反応させる場合、不溶性担体、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体、及びＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体を添加する順番は、いかなる順番であってもよい。例えば、不溶性担体を添加した後に、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体とを添加してもよいし、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体を添加した後に、不溶性担体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体とを添加してもよいし、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体を添加した後に、不溶性担体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体とを添加してもよい。
工程（１）は、以下の工程（１－１）と工程（１－２）に分けて行い、その後、工程（２）を行ってもよい。
（１－１）水性媒体中で、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原に、不溶性担体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体とを反応させ、前記不溶性担体上に、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原と、からなる免疫複合体１を生成させる工程；
（１－２）ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体を、水性媒体中で、工程（１）で生成した免疫複合体１と反応させ、前記不溶性担体上に、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体とからなる免疫複合体２を生成させる工程；及び
（２）工程（１－２）で生成された免疫複合体２を測定する工程、
（１－１）水性媒体中で、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原に、不溶性担体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体とを反応させ、前記不溶性担体上に、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原と、からなる免疫複合体１を生成させる工程；
（１－２）ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体を、水性媒体中で、工程（１）で生成した免疫複合体１と反応させ、前記不溶性担体上に、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体とからなる免疫複合体２を生成させる工程；及び
（２）工程（１－２）で生成された免疫複合体２を測定する工程、
前記工程（１－１）と工程（１－２）の間に、洗浄工程を設けることもできる。また、前記工程（１－２）と工程（２）の間に、洗浄工程を設けることもできる。不溶性担体の洗浄に使用する洗浄液としては、ＤＵＰＡＮ－２抗原の測定を可能とする洗浄液であれば特に制限はなく、ＰＢＳ、界面活性剤を含有するＰＢＳ等が挙げられる。界面活性剤としては、例えばＴｗｅｅｎ（登録商標） ２０等の非イオン性界面活性剤が挙げられる。
前記工程（１）及び工程（１－１）において、前記不溶性担体と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体とが結合し、不溶性担体に結合した、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体が生成する。
ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の、不溶性担体への結合方法としては、本開示のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法を可能とする結合方法であれば特に制限はなく、例えば前述結合方法等が挙げられる。
ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の、不溶性担体への結合方法としては、本開示のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法を可能とする結合方法であれば特に制限はなく、例えば前述結合方法等が挙げられる。
ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体は、前述の物理吸着及び／又は化学結合を利用して、直接、不溶性担体に結合させてもよいし、間接的に不溶性担体に結合させてもよい。間接的な結合方法としては、前述の一組の親和性物質の特異的結合を利用して、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体を不溶性担体に結合する方法、リンカーを介した共有結合により不溶性担体に結合する方法等が挙げられる。
一組の親和性物質を用いる場合、一組の親和性物質の一方（Ａ）が結合したＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、一組の親和性物質の他方（ａ）が結合した不溶性担体とを、結合させることにより、不溶性担体に結合した、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体を生成させることができる。
Ａ－ａの組み合わせとしては、前述の組み合わせ等が挙げられる。
リンカーとしては、前述の分子等が挙げられる。
Ａ－ａの組み合わせとしては、前述の組み合わせ等が挙げられる。
リンカーとしては、前述の分子等が挙げられる。
前記工程（１）、工程（１－１）及び工程（１－２）において、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の量は、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体の量の２．６重量倍以上、２．７重量倍以上、２．８重量倍以上、２．９重量倍以上、３重量倍以上、４重量倍以上、５重量倍以上、６重量倍以上、７重量倍以上、８重量倍以上、又は９重量倍以上であってよい。また、前記工程（１）、工程（１－１）及び工程（１－２）において、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の量は、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体の量の１０重量倍以下、１２重量倍以下、１３重量倍以下、１４重量倍以下、１５重量倍以下、２０重量倍以下、２５重量倍以下、３０重量倍以下、３５重量倍以下、４０重量倍以下、４５重量倍以下、５０重量倍以下、６０重量倍以下、７０重量倍以下、８０重量倍以下、９０重量倍以下、１００重量倍以下、１５０重量倍以下、又は２００重量倍以下であってよい。
前記の数値は自由に組み合わせることができる。例えば、前記工程（１）、工程（１－１）及び工程（１－２）において、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の量は、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体の量の２．６重量倍以上２００重量倍以下であってもよく、２．８重量倍以上１５０重量倍以下であってもよく、３重量倍以上１００重量倍以下であってもよく、３重量倍以上３０重量倍以下であってもよく、５重量倍以上３０重量倍以下であってもよく、５重量倍以上１０重量倍以下であってもよい。
前記工程（１）、工程（１－１）及び工程（１－２）において、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の量は、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体の量の２．６モル当量倍以上、２．７モル当量倍以上、２．８モル当量倍以上、２．９モル当量倍以上、３モル当量倍以上、４モル当量倍以上、５モル当量倍以上、６モル当量倍以上、７モル当量倍以上、８モル当量倍以上、又は９モル当量倍以上であってよい。また、前記工程（１）、工程（１－１）及び工程（１－２）において、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の量は、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体の量の１０モル当量倍以下、１２モル当量倍以下、１３モル当量倍以下、１４モル当量倍以下、１５モル当量倍以下、２０モル当量倍以下、２５モル当量倍以下、３０モル当量倍以下、３５モル当量倍以下、４０モル当量倍以下、４５モル当量倍以下、５０モル当量倍以下、６０モル当量倍以下、７０モル当量倍以下、８０モル当量倍以下、９０モル当量倍以下、１００モル当量倍以下、１５０モル当量倍以下、又は２００モル当量倍以下であってよい。
前記の数値は自由に組み合わせることができる。例えば、前記工程（１）、工程（１－１）及び工程（１－２）において、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の量は、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体の量の２．６モル当量倍以上２００モル当量倍以下、２．８モル当量倍以上１５０モル当量倍以下であってもよく、３モル当量倍以上１００モル当量倍以下であってもよく、３モル当量倍以上３０モル当量倍以下であってもよく、５モル当量倍以上３０モル当量倍以下であってもよく、５モル当量倍以上１０モル当量倍以下であってもよい。
前記工程（１）及び工程（１－１）における不溶性担体の濃度は、本開示のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定を可能とする濃度であれば特に限定はなく、０．００１ｍｇ／ｍＬ以上、０．００２ｍｇ／ｍＬ以上、０．００３ｍｇ／ｍＬ以上、０．００４ｍｇ／ｍＬ以上、０．００５ｍｇ／ｍＬ以上、０．０１ｍｇ／ｍＬ以上、０．０２ｍｇ／ｍＬ以上、０．０３ｍｇ／ｍＬ以上、０．０４ｍｇ／ｍＬ以上、０．０５ｍｇ／ｍＬ以上、０．０６ｍｇ／ｍＬ以上、０．０７ｍｇ／ｍＬ以上、０．０８ｍｇ／ｍＬ以上、０．０９ｍｇ／ｍＬ以上、０．１ｍｇ／ｍＬ以上、０．２ｍｇ／ｍＬ以上、０．３ｍｇ／ｍＬ以上、０．４ｍｇ／ｍＬ以上、又は０．５ｍｇ／ｍＬ以上であってよい。また、前記工程（１）及び工程（１－１）における不溶性担体の濃度は、０．６ｍｇ／ｍＬ以下、０．７ｍｇ／ｍＬ以下、０．８ｍｇ／ｍＬ以下、０．９ｍｇ／ｍＬ以下、１ｍｇ／ｍＬ以下、２ｍｇ／ｍＬ以下、３ｍｇ／ｍＬ以下、４ｍｇ／ｍＬ以下、５ｍｇ／ｍＬ以下、６ｍｇ／ｍＬ以下、７ｍｇ／ｍＬ以下、８ｍｇ／ｍＬ以下、９ｍｇ／ｍＬ以下、又は１０ｍｇ／ｍＬ以下であってよい。
前記の数値は自由に組み合わせることができる。例えば、前記工程（１）及び工程（１－１）における不溶性担体の濃度は、０．００３ｍｇ／ｍＬ～１０ｍｇ／ｍＬであってもよく、０．０１ｍｇ／ｍＬ～３ｍｇ／ｍＬであってもよく、０．０５ｍｇ／ｍＬ～１ｍｇ／ｍＬであってもよい。
前記工程（１）、工程（１－１）及び工程（１－２）における、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の量は、本開示のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定を可能とする量であれば特に制限はなく、０．５ｎｇ以上、１ｎｇ以上、１．５ｎｇ以上、２ｎｇ以上、２．５ｎｇ以上、３ｎｇ以上、３．５ｎｇ以上、４ｎｇ以上、４．５ｎｇ以上、５ｎｇ以上、１０ｎｇ以上、１５ｎｇ以上、２０ｎｇ以上、２５ｎｇ以上、３０ｎｇ以上、３５ｎｇ以上、４０ｎｇ以上、４５ｎｇ以上、５０ｎｇ以上、１００ｎｇ以上、１５０ｎｇ以上、２００ｎｇ以上、２５０ｎｇ以上、３００ｎｇ以上、３５０ｎｇ以上、４００ｎｇ以上、４５０ｎｇ以上、又は５００ｎｇ以上であってよい。また、前記工程（１）、工程（１－１）及び工程（１－２）における、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の量は、５５０ｎｇ以下、６００ｎｇ以下、６５０ｎｇ以下、７００ｎｇ以下、７５０ｎｇ以下、８００ｎｇ以下、８５０ｎｇ以下、９００ｎｇ以下、９５０ｎｇ以下、１μｇ以下、１．５μｇ以下、２μｇ以下、２．５μｇ以下、又は５μｇ以下であってよい。
前記の数値は自由に組み合わせることができる。例えば、前記工程（１）、工程（１－１）及び工程（１－２）における、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の量は、０．５ｎｇ～５μｇであってもよく、５ｎｇ～１．５μｇであってもよく、１５０ｎｇ～１μｇであってもよく、３００ｎｇ～１μｇであってもよく、５００ｎｇ～１μｇであってもよい。
前記工程（１）、工程（１－１）及び工程（１－２）における、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の濃度は、本開示のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定を可能とする濃度であれば特に制限はなく、０．０１μｇ／ｍＬ以上、０．０２μｇ／ｍＬ以上、０．０３μｇ／ｍＬ以上、０．０４μｇ／ｍＬ以上、０．０５μｇ／ｍＬ以上、０．０６μｇ／ｍＬ以上、０．０７μｇ／ｍＬ以上、０．０８μｇ／ｍＬ以上、０．０９μｇ／ｍＬ以上、０．１μｇ／ｍＬ以上、０．２μｇ／ｍＬ以上、０．３μｇ／ｍＬ以上、０．４μｇ／ｍＬ以上、０．５μｇ／ｍＬ以上、０．６μｇ／ｍＬ以上、０．７μｇ／ｍＬ以上、０．８μｇ／ｍＬ以上、０．９μｇ／ｍＬ以上、１μｇ／ｍＬ以上、２μｇ／ｍＬ以上、３μｇ／ｍＬ以上、４μｇ／ｍＬ以上、５μｇ／ｍＬ以上、６μｇ／ｍＬ以上、７μｇ／ｍＬ以上、７．５μｇ／ｍＬ以上、８μｇ／ｍＬ以上、９μｇ／ｍＬ以上、又は１０μｇ／ｍＬ以上であってよい。また、前記工程（１）、工程（１－１）及び工程（１－２）における、ＤＵＰＡＮ－２抗原に結合する第１抗体の濃度は、１１μｇ／ｍＬ以下、１２μｇ／ｍＬ以下、１３μｇ／ｍＬ以下、１４μｇ／ｍＬ以下、１５μｇ／ｍＬ以下、１６μｇ／ｍＬ以下、１７μｇ／ｍＬ以下、１８μｇ／ｍＬ以下、１９μｇ／ｍＬ以下、２０μｇ／ｍＬ以下、３０μｇ／ｍＬ以下、４０μｇ／ｍＬ以下、５０μｇ／ｍＬ以下、又は１００μｇ／ｍＬ以下であってよい。
前記の数値は自由に組み合わせることができる。例えば、前記工程（１）、工程（１－１）及び工程（１－２）における、ＤＵＰＡＮ－２抗原に結合する第１抗体の濃度は、０．０１μｇ／ｍＬ～１００μｇ／ｍＬであってもよく、０．１μｇ／ｍＬ～３０μｇ／ｍＬであってもよく、６μｇ／ｍＬ～３０μｇ／ｍＬであってもよく、１０μｇ／ｍＬ～２０μｇ／ｍＬであってもよい。
前記工程（１）及び工程（１－２）における、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体の量は、本開示のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定を可能とする量であれば特に限定はなく、０．１ｎｇ以上、１ｎｇ以上、２ｎｇ以上、３ｎｇ以上、４ｎｇ以上、５ｎｇ以上、６ｎｇ以上、７ｎｇ以上、８ｎｇ以上、９ｎｇ以上、１０ｎｇ以上、２０ｎｇ以上、３０ｎｇ以上、４０ｎｇ以上、５０ｎｇ以上、６０ｎｇ以上、７０ｎｇ以上、８０ｎｇ以上、又は９０ｎｇ以上であってよい。また、前記工程（１）及び工程（１－２）における、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体の量は、１００ｎｇ以下、２００ｎｇ以下、３００ｎｇ以下、４００ｎｇ以下、５００ｎｇ以下、６００ｎｇ以下、７００ｎｇ以下、８００ｎｇ以下、９００ｎｇ以下、１μｇ以下、１．１μｇ以下、１．２μｇ以下、１．３μｇ以下、１．４μｇ以下、１．５μｇ以下、１．６μｇ以下、１．７μｇ以下、１．８μｇ以下、１．９μｇ以下、２μｇ以下、３μｇ以下、４μｇ以下、５μｇ以下、又は１０μｇ以下であってよい。
前記の数値は自由に組み合わせることができる。例えば、前記工程（１）及び工程（１－２）における、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体の量は、１ｎｇ～１０μｇであってもよく、３ｎｇ～３μｇであってもよく、１０ｎｇ～２μｇであってもよく、１０ｎｇ～１００ｎｇであってもよい。
前記工程（１）及び工程（１－２）における、ＤＵＰＡＮ－２抗原に結合する第２抗体の濃度は、本開示のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定を可能とする濃度であれば特に制限はなく、０．００１μｇ／ｍＬ以上、０．０１μｇ／ｍＬ以上、０．０２μｇ／ｍＬ以上、０．０３μｇ／ｍＬ以上、０．０４μｇ／ｍＬ以上、０．０５μｇ／ｍＬ以上、０．０６μｇ／ｍＬ以上、０．０７μｇ／ｍＬ以上、０．０８μｇ／ｍＬ以上、０．０９μｇ／ｍＬ以上、０．１μｇ／ｍＬ以上、０．２μｇ／ｍＬ以上、０．３μｇ／ｍＬ以上、０．３３μｇ／ｍＬ以上、０．４μｇ／ｍＬ以上、０．５μｇ／ｍＬ以上、０．６μｇ／ｍＬ以上、０．７μｇ／ｍＬ以上、０．８μｇ／ｍＬ以上、又は０．９μｇ／ｍＬ以上であってよい。また、前記工程（１）及び工程（１－２）における、ＤＵＰＡＮ－２抗原に結合する第２抗体の濃度は、１μｇ／ｍＬ以下、２μｇ／ｍＬ以下、３μｇ／ｍＬ以下、４μｇ／ｍＬ以下、５μｇ／ｍＬ以下、６μｇ／ｍＬ以下、７μｇ／ｍＬ以下、７．５μｇ／ｍＬ以下、８μｇ／ｍＬ以下、９μｇ／ｍＬ以下、１０μｇ／ｍＬ以下、１１μｇ／ｍＬ以下、１２μｇ／ｍＬ以下、１３μｇ／ｍＬ以下、１４μｇ／ｍＬ以下、１５μｇ／ｍＬ以下、１６μｇ／ｍＬ以下、１７μｇ／ｍＬ以下、１８μｇ／ｍＬ以下、１９μｇ／ｍＬ以下、２０μｇ／ｍＬ以下、３０μｇ／ｍＬ以下、４０μｇ／ｍＬ以下、５０μｇ／ｍＬ以下、又は１００μｇ／ｍＬ以下であってよい。
前記の数値は自由に組み合わせることができる。例えば、前記工程（１）及び工程（１－２）における、ＤＵＰＡＮ－２抗原に結合する第２抗体の濃度は、０．０１μｇ／ｍＬ～１００μｇ／ｍＬであってもよく、０．０３μｇ／ｍＬ～３０μｇ／ｍＬであってもよく、０．１μｇ／ｍＬ～２０μｇ／ｍＬであってもよく、０．１μｇ／ｍＬ～１μｇ／ｍＬであってもよい。
前記工程（１）、工程（１－１）及び工程（１－２）は水性媒体中で行うことが好ましい。水性媒体としては、例えば前述の水性媒体が挙げられる。
また、前記工程（１）、工程（１－１）及び工程（１－２）には、前述の塩類、金属イオン、糖類、蛋白質、界面活性剤等が含有されてもよい。
また、前記工程（１）、工程（１－１）及び工程（１－２）には、前述の塩類、金属イオン、糖類、蛋白質、界面活性剤等が含有されてもよい。
前記工程（１）、工程（１－１）及び工程（１－２）の反応温度は、ＤＵＰＡＮ－２抗原の測定を可能とする温度であれば特に制限はなく、例えば、０～５０℃であり、４～４５℃が好ましく、２０～４０℃が特に好ましい。また、前記工程（１）、工程（１－１）及び工程（１－２）の反応時間は、ＤＵＰＡＮ－２抗原の測定を可能とする時間であれば特に限定はなく、例えば、５分間～３時間であり、１０分間～２時間が好ましい。
＜工程（２）＞
工程（２）において、前記工程（１）で生成した免疫複合体又は前記工程（１－２）で生成した免疫複合体２を以下の方法を用いて測定することにより、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定値が決定される。
工程（２）において、前記工程（１）で生成した免疫複合体又は前記工程（１－２）で生成した免疫複合体２を以下の方法を用いて測定することにより、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定値が決定される。
[ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体に標識が結合していない場合]
ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体に結合する抗体（以下、第３抗体と記す）に標識が結合した標識化第３抗体を用いて、前記免疫複合体又は前記免疫複合体２を測定することができる。すなわち、前記免疫複合体に前記標識化第３抗体を反応させ、前記免疫複合体又は前記免疫複合体２と、標識化第３抗体との複合体３を形成させ、当該複合体３の標識を後述の方法により測定することにより、前記工程（１）で生成した免疫複合体の量、又は工程（１－２）で生成した免疫複合体２の量を測定することができる。第３抗体としては、例えばＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体のＦｃ領域に結合する抗体等が挙げられる。
ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体に結合する抗体（以下、第３抗体と記す）に標識が結合した標識化第３抗体を用いて、前記免疫複合体又は前記免疫複合体２を測定することができる。すなわち、前記免疫複合体に前記標識化第３抗体を反応させ、前記免疫複合体又は前記免疫複合体２と、標識化第３抗体との複合体３を形成させ、当該複合体３の標識を後述の方法により測定することにより、前記工程（１）で生成した免疫複合体の量、又は工程（１－２）で生成した免疫複合体２の量を測定することができる。第３抗体としては、例えばＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体のＦｃ領域に結合する抗体等が挙げられる。
標識化第３抗体と、前記免疫複合体又は前記免疫複合体２との反応の反応温度は、ＤＵＰＡＮ－２抗原の測定を可能とする温度であれば特に制限はなく、例えば、０～５０℃であってよく、４～４５℃であってよく、２０～４０℃であってよい。当該反応の反応時間は、ＤＵＰＡＮ－２抗原の測定を可能とする時間であれば特に制限はなく、例えば、１分間～４時間であってよく、５分間～３時間であってよく、１０分間～２時間であってよい。標識化第３抗体の反応溶液中の濃度は、ＤＵＰＡＮ－２抗原の測定を可能とする濃度であれば特に制限はなく、例えば、０．０１～１００μｇ／ｍＬであってよく、０．１～２０μｇ／ｍＬであってよい。
［ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体に標識が結合している場合］
工程（２）は、標識を用いて、前記免疫複合体又は前記免疫複合体２を測定することにより行うことができる。
ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体に、標識を結合させる方法は、免疫測定の技術分野において公知である。例えば、１個若しくは数個のアミノ酸を介して、又は、１個若しくは数個のアミノ酸とリンカーを介して、抗体に標識を結合させることができる。また、標識をタンパク質に結合させるキットも各種市販されている。
工程（２）は、標識を用いて、前記免疫複合体又は前記免疫複合体２を測定することにより行うことができる。
ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体に、標識を結合させる方法は、免疫測定の技術分野において公知である。例えば、１個若しくは数個のアミノ酸を介して、又は、１個若しくは数個のアミノ酸とリンカーを介して、抗体に標識を結合させることができる。また、標識をタンパク質に結合させるキットも各種市販されている。
標識としては、通常の免疫測定方法において用いられる、酵素、放射性同位元素、蛍光性物質、発光性物質、ＤＮＡ、ＲＮＡ、補酵素又は補酵素と特異的に結合するもの（ビオチン、アビジン）、タグ、紫外部～赤外部に吸収を有する物質、発色性微粒子、蛍光性微粒子、金属性微粒子、磁性物質、スピンラベル化剤としての性質を有する物質等が挙げられる。
酵素としては、アルカリホスファターゼ、ペルオキシダーゼ、ガラクトシダーゼ、グルクロニダーゼ、ルシフェラーゼ等が挙げられる。放射性同位元素としては、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、３２Ｐ、１２５Ｐ、１３１Ｉ等が挙げられる。蛍光性物質としては、ＦＩＴＣ（フルオレッセイン イソチオシアナート）、ＲＩＴＣ（ローダミンＢ－イソチオシアナート）等が挙げられる。発光性物質としては、アクリジニウム及びその誘導体、ルテニウム錯体化合物、ロフィン等が挙げられる。
これらの標識から生じるシグナルを検出することにより、前記免疫複合体又は前記免疫複合体２を測定することができる。
前記標識から生じるシグナルの測定方法は、用いる標識により適宜選択すればよい。
標識が発色物質、すなわちある波長の光を吸収する物質の場合には、分光光度計、マルチウェルプレートリーダー等を用いて吸光度を測定することにより、標識を測定することができる。
標識が蛍光性物質の場合には、蛍光光度計、蛍光マルチウェルプレートリーダー等を用いて蛍光強度を測定することにより、標識を測定することができる。
標識が発光性物質の場合には、発光光度計、発光マルチウェルプレートリーダー等を用いて、発光強度を測定することにより、標識を測定することができる。
標識が放射性同位元素である場合、放射活性をシンチレーションカウンター、γ－ウェルカウンター等により、放射活性を測定することにより、標識を測定することができる。
標識が酵素である場合には、酵素活性を測定することにより、標識を測定することができる。例えば酵素の基質を当該酵素と反応させ、生成した物質を測定することにより、標識を測定することができる。
前記標識から生じるシグナルの測定方法は、用いる標識により適宜選択すればよい。
標識が発色物質、すなわちある波長の光を吸収する物質の場合には、分光光度計、マルチウェルプレートリーダー等を用いて吸光度を測定することにより、標識を測定することができる。
標識が蛍光性物質の場合には、蛍光光度計、蛍光マルチウェルプレートリーダー等を用いて蛍光強度を測定することにより、標識を測定することができる。
標識が発光性物質の場合には、発光光度計、発光マルチウェルプレートリーダー等を用いて、発光強度を測定することにより、標識を測定することができる。
標識が放射性同位元素である場合、放射活性をシンチレーションカウンター、γ－ウェルカウンター等により、放射活性を測定することにより、標識を測定することができる。
標識が酵素である場合には、酵素活性を測定することにより、標識を測定することができる。例えば酵素の基質を当該酵素と反応させ、生成した物質を測定することにより、標識を測定することができる。
本開示における測定方法は、前記工程（１）の前に、以下の添加工程（Ａ）を含んでいてもよい。
（Ａ）水性媒体中で、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原に、不溶性担体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体と、を添加する工程。
（Ａ）水性媒体中で、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原に、不溶性担体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体と、を添加する工程。
本開示における測定方法は、前記工程（１－１）の前に、以下の添加工程（Ａ１）を含んでいてもよい。
（Ａ１）ＤＵＰＡＮ－２抗原を含む試料に、不溶性担体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、を添加する工程。
前記工程（Ａ１）は、不溶性担体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体とに、ＤＵＰＡＮ－２抗原を含む試料を添加する工程であってもよい。
（Ａ１）ＤＵＰＡＮ－２抗原を含む試料に、不溶性担体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、を添加する工程。
前記工程（Ａ１）は、不溶性担体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体とに、ＤＵＰＡＮ－２抗原を含む試料を添加する工程であってもよい。
本開示における測定方法は、前記工程（１－２）の前に、以下の添加工程（Ａ２）を含んでいてもよい。
（Ａ２）前記工程（１－１）で生成した免疫複合体１に、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体を添加する工程。
前記工程（Ａ２）は、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体に、前記工程（１－２）で生成した免疫複合体１を添加する工程であってもよい。
（Ａ２）前記工程（１－１）で生成した免疫複合体１に、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体を添加する工程。
前記工程（Ａ２）は、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体に、前記工程（１－２）で生成した免疫複合体１を添加する工程であってもよい。
前記工程（Ａ）及び工程（Ａ１）において、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の添加量は、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体の添加量の２．６重量倍以上、２．７重量倍以上、２．８重量倍以上、２．９重量倍以上、３重量倍以上、４重量倍以上、５重量倍以上、６重量倍以上、７重量倍以上、８重量倍以上、又は９重量倍以上であってよい。また、前記工程（Ａ）及び工程（Ａ１）において、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の添加量は、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体の添加量の１０重量倍以下、１２重量倍以下、１３重量倍以下、１４重量倍以下、１５重量倍以下、２０重量倍以下、２５重量倍以下、３０重量倍以下、３５重量倍以下、４０重量倍以下、４５重量倍以下、５０重量倍以下、６０重量倍以下、７０重量倍以下、８０重量倍以下、９０重量倍以下、１００重量倍以下、１５０重量倍以下、又は２００重量倍以下であってよい。
前記の数値は自由に組み合わせることができる。例えば、前記工程（Ａ）及び工程（Ａ１）において、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の添加量は、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体の添加量の２．６重量倍以上２００重量倍以下であってもよく、２．８重量倍以上１５０重量倍以下であってもよく、３重量倍以上１００重量倍以下であってもよく、３重量倍以上３０重量倍以下であってもよく、５重量倍以上３０重量倍以下であってもよく、５重量倍以上１０重量倍以下であってもよい。
前記工程（Ａ）及び工程（Ａ１）において、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の添加量は、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体の添加量の２．６モル当量倍以上、２．７モル当量倍以上、２．８モル当量倍以上、２．９モル当量倍以上、３モル当量倍以上、４モル当量倍以上、５モル当量倍以上、６モル当量倍以上、７モル当量倍以上、８モル当量倍以上、又は９モル当量倍以上であってよい。また、前記工程（Ａ）及び工程（Ａ１）において、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の添加量は、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体の添加量の１０モル当量倍以下、１２モル当量倍以下、１３モル当量倍以下、１４モル当量倍以下、１５モル当量倍以下、２０モル当量倍以下、２５モル当量倍以下、３０モル当量倍以下、３５モル当量倍以下、４０モル当量倍以下、４５モル当量倍以下、５０モル当量倍以下、６０モル当量倍以下、７０モル当量倍以下、８０モル当量倍以下、９０モル当量倍以下、１００モル当量倍以下、１５０モル当量倍以下、又は２００モル当量倍以下であってよい。
前記の数値は自由に組み合わせることができる。例えば、前記工程（Ａ）及び工程（Ａ１）において、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の添加量は、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体の添加量の２．６モル当量倍以上２００モル当量倍以下、２．８モル当量倍以上１５０モル当量倍以下であってもよく、３モル当量倍以上１００モル当量倍以下であってもよく、３モル当量倍以上３０モル当量倍以下であってもよく、５モル当量倍以上３０モル当量倍以下であってもよく、５モル当量倍以上１０モル当量倍以下であってもよい。
前記工程（Ａ）及び工程（Ａ１）における、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の添加量は、本開示のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定を可能とする添加量であれば特に制限はなく、０．５ｎｇ以上、１ｎｇ以上、１．５ｎｇ以上、２ｎｇ以上、２．５ｎｇ以上、３ｎｇ以上、３．５ｎｇ以上、４ｎｇ以上、４．５ｎｇ以上、５ｎｇ以上、１０ｎｇ以上、１５ｎｇ以上、２０ｎｇ以上、２５ｎｇ以上、３０ｎｇ以上、３５ｎｇ以上、４０ｎｇ以上、４５ｎｇ以上、５０ｎｇ以上、１００ｎｇ以上、１５０ｎｇ以上、２００ｎｇ以上、２５０ｎｇ以上、３００ｎｇ以上、３５０ｎｇ以上、４００ｎｇ以上、４５０ｎｇ以上、又は５００ｎｇ以上であってよい。また、前記工程（Ａ）及び工程（Ａ１）における、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の添加量は、５５０ｎｇ以下、６００ｎｇ以下、６５０ｎｇ以下、７００ｎｇ以下、７５０ｎｇ以下、８００ｎｇ以下、８５０ｎｇ以下、９００ｎｇ以下、９５０ｎｇ以下、１μｇ以下、１．５μｇ以下、２μｇ以下、２．５μｇ以下、又は５μｇ以下であってよい。
前記の数値は自由に組み合わせることができる。例えば、前記工程（Ａ）及び工程（Ａ１）における、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の添加量は、０．５ｎｇ～５μｇであってもよく、５ｎｇ～１．５μｇであってもよく、１５０ｎｇ～１μｇであってもよく、３００ｎｇ～１μｇであってもよく、５００ｎｇ～１μｇであってもよい。
前記工程（Ａ）及び工程（Ａ１）における、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の添加濃度は、本開示のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定を可能とする添加濃度であれば特に制限はなく、０．０１μｇ／ｍＬ以上、０．０２μｇ／ｍＬ以上、０．０３μｇ／ｍＬ以上、０．０４μｇ／ｍＬ以上、０．０５μｇ／ｍＬ以上、０．０６μｇ／ｍＬ以上、０．０７μｇ／ｍＬ以上、０．０８μｇ／ｍＬ以上、０．０９μｇ／ｍＬ以上、０．１μｇ／ｍＬ以上、０．２μｇ／ｍＬ以上、０．３μｇ／ｍＬ以上、０．４μｇ／ｍＬ以上、０．５μｇ／ｍＬ以上、０．６μｇ／ｍＬ以上、０．７μｇ／ｍＬ以上、０．８μｇ／ｍＬ以上、０．９μｇ／ｍＬ以上、１μｇ／ｍＬ以上、２μｇ／ｍＬ以上、３μｇ／ｍＬ以上、４μｇ／ｍＬ以上、５μｇ／ｍＬ以上、６μｇ／ｍＬ以上、７μｇ／ｍＬ以上、７．５μｇ／ｍＬ以上、８μｇ／ｍＬ以上、９μｇ／ｍＬ以上、又は１０μｇ／ｍＬ以上であってよい。また、前記工程（Ａ）及び工程（Ａ１）における、ＤＵＰＡＮ－２抗原に結合する第１抗体の添加濃度は、１１μｇ／ｍＬ以下、１２μｇ／ｍＬ以下、１３μｇ／ｍＬ以下、１４μｇ／ｍＬ以下、１５μｇ／ｍＬ以下、１６μｇ／ｍＬ以下、１７μｇ／ｍＬ以下、１８μｇ／ｍＬ以下、１９μｇ／ｍＬ以下、２０μｇ／ｍＬ以下、３０μｇ／ｍＬ以下、４０μｇ／ｍＬ以下、５０μｇ／ｍＬ以下、又は１００μｇ／ｍＬ以下であってよい。
前記の数値は自由に組み合わせることができる。例えば、前記工程（Ａ）及び工程（Ａ１）における、ＤＵＰＡＮ－２抗原に結合する第１抗体の添加濃度は、０．０１μｇ／ｍＬ～１００μｇ／ｍＬであってもよく、０．１μｇ／ｍＬ～３０μｇ／ｍＬであってもよく、６μｇ／ｍＬ～３０μｇ／ｍＬであってもよく、１０μｇ／ｍＬ～２０μｇ／ｍＬであってもよい。
前記工程（Ａ）及び工程（Ａ２）における、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体の添加量は、本開示のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定を可能とする添加量であれば特に制限はなく、０．１ｎｇ以上、１ｎｇ以上、２ｎｇ以上、３ｎｇ以上、４ｎｇ以上、５ｎｇ以上、６ｎｇ以上、７ｎｇ以上、８ｎｇ以上、９ｎｇ以上、１０ｎｇ以上、２０ｎｇ以上、３０ｎｇ以上、４０ｎｇ以上、５０ｎｇ以上、６０ｎｇ以上、７０ｎｇ以上、８０ｎｇ以上、又は９０ｎｇ以上であってよい。また、前記工程（Ａ）及び工程（Ａ２）における、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体の添加量は、１００ｎｇ以下、２００ｎｇ以下、３００ｎｇ以下、４００ｎｇ以下、５００ｎｇ以下、６００ｎｇ以下、７００ｎｇ以下、８００ｎｇ以下、９００ｎｇ以下、１μｇ以下、１．１μｇ以下、１．２μｇ以下、１．３μｇ以下、１．４μｇ以下、１．５μｇ以下、１．６μｇ以下、１．７μｇ以下、１．８μｇ以下、１．９μｇ以下、２μｇ以下、３μｇ以下、４μｇ以下、５μｇ以下、又は１０μｇ以下であってよい。
前記の数値は自由に組み合わせることができる。例えば、前記工程（Ａ）及び工程（Ａ２）における、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体の添加量は、１ｎｇ～１０μｇであってもよく、３ｎｇ～３μｇであってもよく、１０ｎｇ～２μｇであってもよく、１０ｎｇ～１００ｎｇであってもよい。
前記工程（Ａ）及び工程（Ａ２）における、ＤＵＰＡＮ－２抗原に結合する第２抗体の添加濃度は、本開示のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定を可能とする添加濃度であれば特に制限はなく、０．００１μｇ／ｍＬ以上、０．０１μｇ／ｍＬ以上、０．０２μｇ／ｍＬ以上、０．０３μｇ／ｍＬ以上、０．０４μｇ／ｍＬ以上、０．０５μｇ／ｍＬ以上、０．０６μｇ／ｍＬ以上、０．０７μｇ／ｍＬ以上、０．０８μｇ／ｍＬ以上、０．０９μｇ／ｍＬ以上、０．１μｇ／ｍＬ以上、０．２μｇ／ｍＬ以上、０．３μｇ／ｍＬ以上、０．３３μｇ／ｍＬ以上、０．４μｇ／ｍＬ以上、０．５μｇ／ｍＬ以上、０．６μｇ／ｍＬ以上、０．７μｇ／ｍＬ以上、０．８μｇ／ｍＬ以上、又は０．９μｇ／ｍＬ以上であってよい。また、前記工程（Ａ）及び工程（Ａ２）における、ＤＵＰＡＮ－２抗原に結合する第２抗体の添加濃度は、１μｇ／ｍＬ以下、２μｇ／ｍＬ以下、３μｇ／ｍＬ以下、４μｇ／ｍＬ以下、５μｇ／ｍＬ以下、６μｇ／ｍＬ以下、７μｇ／ｍＬ以下、７．５μｇ／ｍＬ以下、８μｇ／ｍＬ以下、９μｇ／ｍＬ以下、１０μｇ／ｍＬ以下、１１μｇ／ｍＬ以下、１２μｇ／ｍＬ以下、１３μｇ／ｍＬ以下、１４μｇ／ｍＬ以下、１５μｇ／ｍＬ以下、１６μｇ／ｍＬ以下、１７μｇ／ｍＬ以下、１８μｇ／ｍＬ以下、１９μｇ／ｍＬ以下、２０μｇ／ｍＬ以下、３０μｇ／ｍＬ以下、４０μｇ／ｍＬ以下、５０μｇ／ｍＬ以下、又は１００μｇ／ｍＬ以下であってよい。
前記の数値は自由に組み合わせることができる。例えば、前記工程（Ａ）及び工程（Ａ２）における、ＤＵＰＡＮ－２抗原に結合する第２抗体の添加濃度は、０．０１μｇ／ｍＬ～１００μｇ／ｍＬであってもよく、０．０３μｇ／ｍＬ～３０μｇ／ｍＬであってもよく、０．１μｇ／ｍＬ～２０μｇ／ｍＬであってもよく、０．１μｇ／ｍＬ～１μｇ／ｍＬであってもよい。
「試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定試薬」
本開示の試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定試薬は、本開示の試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法に用いられる試薬であり、当該測定試薬の１つの態様としては、不溶性担体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体と、を含む、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定試薬である。
本開示の試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定試薬は、本開示の試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法に用いられる試薬であり、当該測定試薬の１つの態様としては、不溶性担体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体と、を含む、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定試薬である。
本開示の測定試薬において、前記不溶性担体と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体とは、２つの親和性物質を介して結合することができる。ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の、不溶性担体への結合方法としては、例えば前述の結合方法等が挙げられる。
ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体は、前述の物理吸着及び／又は化学結合を利用して、直接、不溶性担体に結合させてもよいし、間接的に不溶性担体に結合させてもよい。間接的な結合方法としては、前述の一組の親和性物質の特異的結合を利用して、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体を不溶性担体に結合する方法、リンカーを介した共有結合により不溶性担体に結合する方法等が挙げられる。
一組の親和性物質を用いる場合、一組の親和性物質の一方（Ａ）が結合したＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、一組の親和性物質の他方（ａ）が結合した不溶性担体とを、結合させることにより、不溶性担体に結合した、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体を生成させることができる。
Ａ－ａの組み合わせとしては、前述の組み合わせ等が挙げられる。
リンカーとしては、前述の分子等が挙げられる。
Ａ－ａの組み合わせとしては、前述の組み合わせ等が挙げられる。
リンカーとしては、前述の分子等が挙げられる。
本開示のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定試薬において、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の量は、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体の量の２．６重量倍以上、２．７重量倍以上、２．８重量倍以上、２．９重量倍以上、３重量倍以上、４重量倍以上、５重量倍以上、６重量倍以上、７重量倍以上、８重量倍以上、又は９重量倍以上であってよい。また、本開示のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定試薬において、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の量は、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体の量の１０重量倍以下、１２重量倍以下、１３重量倍以下、１４重量倍以下、１５重量倍以下、２０重量倍以下、２５重量倍以下、３０重量倍以下、３５重量倍以下、４０重量倍以下、４５重量倍以下、５０重量倍以下、６０重量倍以下、７０重量倍以下、８０重量倍以下、９０重量倍以下、１００重量倍以下、１５０重量倍以下、又は２００重量倍以下であってよい。
前記の数値は自由に組み合わせることができる。例えば、本開示のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定試薬において、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の量は、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体の量の２．６重量倍以上２００重量倍以下であってもよく、２．８重量倍以上１５０重量倍以下であってもよく、３重量倍以上１００重量倍以下であってもよく、３重量倍以上３０重量倍以下であってもよく、５重量倍以上３０重量倍以下であってもよく、５重量倍以上１０重量倍以下であってもよい。
本開示のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定試薬において、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の量は、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体の量の２．６モル当量倍以上、２．７モル当量倍以上、２．８モル当量倍以上、２．９モル当量倍以上、３モル当量倍以上、４モル当量倍以上、５モル当量倍以上、６モル当量倍以上、７モル当量倍以上、８モル当量倍以上、又は９モル当量倍以上であってよい。また、本開示のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定試薬において、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の量は、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体の量の１０モル当量倍以下、１２モル当量倍以下、１３モル当量倍以下、１４モル当量倍以下、１５モル当量倍以下、２０モル当量倍以下、２５モル当量倍以下、３０モル当量倍以下、３５モル当量倍以下、４０モル当量倍以下、４５モル当量倍以下、５０モル当量倍以下、６０モル当量倍以下、７０モル当量倍以下、８０モル当量倍以下、９０モル当量倍以下、１００モル当量倍以下、１５０モル当量倍以下、又は２００モル当量倍以下であってよい。
前記の数値は自由に組み合わせることができる。例えば、本開示のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定試薬において、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の量は、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体の量の２．６モル当量倍以上２００モル当量倍以下、２．８モル当量倍以上１５０モル当量倍以下であってもよく、３モル当量倍以上１００モル当量倍以下であってもよく、３モル当量倍以上３０モル当量倍以下であってもよく、５モル当量倍以上３０モル当量倍以下であってもよく、５モル当量倍以上１０モル当量倍以下であってもよい。
本開示のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定試薬における不溶性担体の濃度は、本開示のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定を可能とする濃度であれば特に限定はなく、０．００１ｍｇ／ｍＬ以上、０．００２ｍｇ／ｍＬ以上、０．００３ｍｇ／ｍＬ以上、０．００４ｍｇ／ｍＬ以上、０．００５ｍｇ／ｍＬ以上、０．０１ｍｇ／ｍＬ以上、０．０２ｍｇ／ｍＬ以上、０．０３ｍｇ／ｍＬ以上、０．０４ｍｇ／ｍＬ以上、０．０５ｍｇ／ｍＬ以上、０．０６ｍｇ／ｍＬ以上、０．０７ｍｇ／ｍＬ以上、０．０８ｍｇ／ｍＬ以上、０．０９ｍｇ／ｍＬ以上、０．１ｍｇ／ｍＬ以上、０．２ｍｇ／ｍＬ以上、０．３ｍｇ／ｍＬ以上、０．４ｍｇ／ｍＬ以上、又は０．５ｍｇ／ｍＬ以上であってよい。また、前記測定試薬における不溶性担体の濃度は、０．６ｍｇ／ｍＬ以下、０．７ｍｇ／ｍＬ以下、０．８ｍｇ／ｍＬ以下、０．９ｍｇ／ｍＬ以下、１ｍｇ／ｍＬ以下、２ｍｇ／ｍＬ以下、３ｍｇ／ｍＬ以下、４ｍｇ／ｍＬ以下、５ｍｇ／ｍＬ以下、６ｍｇ／ｍＬ以下、７ｍｇ／ｍＬ以下、８ｍｇ／ｍＬ以下、９ｍｇ／ｍＬ以下、又は１０ｍｇ／ｍＬ以下であってよい。
前記の数値は自由に組み合わせることができる。例えば、前記測定試薬における不溶性担体の濃度は、０．００３ｍｇ／ｍＬ～１０ｍｇ／ｍＬであってもよく、０．０１ｍｇ／ｍＬ～３ｍｇ／ｍＬであってもよく、０．０５ｍｇ／ｍＬ～１ｍｇ／ｍＬであってもよい。
本開示のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定試薬における、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の濃度は、本開示のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定を可能とする濃度であれば特に制限はなく、０．０１μｇ／ｍＬ以上、０．０２μｇ／ｍＬ以上、０．０３μｇ／ｍＬ以上、０．０４μｇ／ｍＬ以上、０．０５μｇ／ｍＬ以上、０．０６μｇ／ｍＬ以上、０．０７μｇ／ｍＬ以上、０．０８μｇ／ｍＬ以上、０．０９μｇ／ｍＬ以上、０．１μｇ／ｍＬ以上、０．２μｇ／ｍＬ以上、０．３μｇ／ｍＬ以上、０．４μｇ／ｍＬ以上、０．５μｇ／ｍＬ以上、０．６μｇ／ｍＬ以上、０．７μｇ／ｍＬ以上、０．８μｇ／ｍＬ以上、０．９μｇ／ｍＬ以上、１μｇ／ｍＬ以上、２μｇ／ｍＬ以上、３μｇ／ｍＬ以上、４μｇ／ｍＬ以上、５μｇ／ｍＬ以上、６μｇ／ｍＬ以上、７μｇ／ｍＬ以上、７．５μｇ／ｍＬ以上、８μｇ／ｍＬ以上、９μｇ／ｍＬ以上、又は１０μｇ／ｍＬ以上であってよい。また、本開示のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定試薬における、ＤＵＰＡＮ－２抗原に結合する第１抗体の濃度は、１１μｇ／ｍＬ以下、１２μｇ／ｍＬ以下、１３μｇ／ｍＬ以下、１４μｇ／ｍＬ以下、１５μｇ／ｍＬ以下、１６μｇ／ｍＬ以下、１７μｇ／ｍＬ以下、１８μｇ／ｍＬ以下、１９μｇ／ｍＬ以下、２０μｇ／ｍＬ以下、３０μｇ／ｍＬ以下、４０μｇ／ｍＬ以下、５０μｇ／ｍＬ以下、又は１００μｇ／ｍＬ以下であってよい。
前記の数値は自由に組み合わせることができる。例えば、本開示のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定試薬における、ＤＵＰＡＮ－２抗原に結合する第１抗体の濃度は、０．０１μｇ／ｍＬ～１００μｇ／ｍＬであってもよく、０．１μｇ／ｍＬ～３０μｇ／ｍＬであってもよく、６μｇ／ｍＬ～３０μｇ／ｍＬであってもよく、１０μｇ／ｍＬ～２０μｇ／ｍＬであってもよい。
本開示のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定試薬における、ＤＵＰＡＮ－２抗原に結合する第２抗体の濃度は、本開示のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定を可能とする濃度であれば特に制限はなく、０．００１μｇ／ｍＬ以上、０．０１μｇ／ｍＬ以上、０．０２μｇ／ｍＬ以上、０．０３μｇ／ｍＬ以上、０．０４μｇ／ｍＬ以上、０．０５μｇ／ｍＬ以上、０．０６μｇ／ｍＬ以上、０．０７μｇ／ｍＬ以上、０．０８μｇ／ｍＬ以上、０．０９μｇ／ｍＬ以上、０．１μｇ／ｍＬ以上、０．２μｇ／ｍＬ以上、０．３μｇ／ｍＬ以上、０．３３μｇ／ｍＬ以上、０．４μｇ／ｍＬ以上、０．５μｇ／ｍＬ以上、０．６μｇ／ｍＬ以上、０．７μｇ／ｍＬ以上、０．８μｇ／ｍＬ以上、又は０．９μｇ／ｍＬ以上であってよい。また、本開示のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定試薬における、ＤＵＰＡＮ－２抗原に結合する第２抗体の濃度は、１μｇ／ｍＬ以下、２μｇ／ｍＬ以下、３μｇ／ｍＬ以下、４μｇ／ｍＬ以下、５μｇ／ｍＬ以下、６μｇ／ｍＬ以下、７μｇ／ｍＬ以下、７．５μｇ／ｍＬ以下、８μｇ／ｍＬ以下、９μｇ／ｍＬ以下、１０μｇ／ｍＬ以下、１１μｇ／ｍＬ以下、１２μｇ／ｍＬ以下、１３μｇ／ｍＬ以下、１４μｇ／ｍＬ以下、１５μｇ／ｍＬ以下、１６μｇ／ｍＬ以下、１７μｇ／ｍＬ以下、１８μｇ／ｍＬ以下、１９μｇ／ｍＬ以下、２０μｇ／ｍＬ以下、３０μｇ／ｍＬ以下、４０μｇ／ｍＬ以下、５０μｇ／ｍＬ以下、又は１００μｇ／ｍＬ以下であってよい。
前記の数値は自由に組み合わせることができる。例えば、本開示のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定試薬における、ＤＵＰＡＮ－２抗原に結合する第２抗体の濃度は、０．０１μｇ／ｍＬ～１００μｇ／ｍＬであってもよく、０．０３μｇ／ｍＬ～３０μｇ／ｍＬであってもよく、０．１μｇ／ｍＬ～２０μｇ／ｍＬであってもよく、０．１μｇ／ｍＬ～１μｇ／ｍＬであってもよい。
本開示の測定試薬は、凍結乾燥状態でも液状でもよい。凍結乾燥状態の測定試薬を使用する場合には、測定前に水性媒体で溶解して液状にして測定に供する。
液状の測定試薬においては、不溶性担体、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体、及びＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体からなる群より選ばれる少なくとも１種は、水性媒体で溶解された状態となっている。
液状の測定試薬においては、不溶性担体、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体、及びＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体からなる群より選ばれる少なくとも１種は、水性媒体で溶解された状態となっている。
水性媒体としては、例えば前述の水性媒体が挙げられる。水性媒体には、前述の塩類、金属イオン、糖類、蛋白質、界面活性剤等が含有されてもよい。
「試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定キット」
本開示の試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定試薬は、保存、運搬、流通等の観点からキットの形態を取ることもできる。
以下、本開示の、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定キットの好適な実施形態を例示する。なお、下記の実施形態において、不溶性担体、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体、及びＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体としては、例えば前述の不溶性担体、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体、及びＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体を用いることができる。
本開示の試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定試薬は、保存、運搬、流通等の観点からキットの形態を取ることもできる。
以下、本開示の、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定キットの好適な実施形態を例示する。なお、下記の実施形態において、不溶性担体、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体、及びＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体としては、例えば前述の不溶性担体、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体、及びＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体を用いることができる。
［測定キット（１）］
不溶性担体を含む第１試薬；
ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体を含む第２試薬；及び
ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体を含む第３試薬、
を含む、測定キット。
不溶性担体を含む第１試薬；
ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体を含む第２試薬；及び
ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体を含む第３試薬、
を含む、測定キット。
［測定キット（２）］
不溶性担体を含む第１試薬；並びに
ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体、及びＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体を含む第２試薬、
を含む、測定キット。
不溶性担体を含む第１試薬；並びに
ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体、及びＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体を含む第２試薬、
を含む、測定キット。
本開示の測定キットにおける、前記不溶性担体と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体とは、２つの親和性物質を介して結合することができる。ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の、不溶性担体への結合方法としては、例えば前述結合方法等が挙げられる。
ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体は、前述の物理吸着及び／又は化学結合を利用して、直接、不溶性担体に結合させてもよいし、間接的に不溶性担体に結合させてもよい。間接的な結合方法としては、前述の一組の親和性物質の特異的結合を利用して、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体を不溶性担体に結合する方法、リンカーを介した共有結合により不溶性担体に結合する方法等が挙げられる。
一組の親和性物質を用いる場合、一組の親和性物質の一方（Ａ）が結合したＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、一組の親和性物質の他方（ａ）が結合した不溶性担体とを、結合させることにより、不溶性担体に結合した、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体を生成させることができる。
Ａ－ａの組み合わせとしては、前述の組み合わせ等が挙げられる。
リンカーとしては、前述の分子等が挙げられる。
Ａ－ａの組み合わせとしては、前述の組み合わせ等が挙げられる。
リンカーとしては、前述の分子等が挙げられる。
前記測定キット（１）～（２）には、試料を希釈するための試薬として、水性媒体を含む試薬を含んでいてもよい。水性媒体としては、例えば前述の水性媒体が挙げられる。水性媒体には、前述の塩類、金属イオン、糖類、蛋白質、界面活性剤等が含有されてもよい。また、前記測定キット（１）～（２）には、前述の洗浄液、標準物質としての既知濃度のＤＵＰＡＮ－２抗原、本開示の測定方法が記載された取扱説明書等が含まれていてもよい。
前記測定キット（１）において、前記第２試薬におけるＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の量は、前記第３試薬におけるＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体の量の２．６重量倍以上、２．７重量倍以上、２．８重量倍以上、２．９重量倍以上、３重量倍以上、４重量倍以上、５重量倍以上、６重量倍以上、７重量倍以上、８重量倍以上、又は９重量倍以上であってよい。また、前記測定キット（１）において、前記第２試薬におけるＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の量は、前記第３試薬におけるＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体の量の１０重量倍以下、１２重量倍以下、１３重量倍以下、１４重量倍以下、１５重量倍以下、２０重量倍以下、２５重量倍以下、３０重量倍以下、３５重量倍以下、４０重量倍以下、４５重量倍以下、５０重量倍以下、６０重量倍以下、７０重量倍以下、８０重量倍以下、９０重量倍以下、１００重量倍以下、１５０重量倍以下、又は２００重量倍以下であってよい。
前記の数値は自由に組み合わせることができる。例えば、前記測定キット（１）において、前記第２試薬におけるＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の量は、前記第３試薬におけるＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体の量の２．６重量倍以上２００重量倍以下であってもよく、２．８重量倍以上１５０重量倍以下であってもよく、３重量倍以上１００重量倍以下であってもよく、３重量倍以上３０重量倍以下であってもよく、５重量倍以上３０重量倍以下であってもよく、５重量倍以上１０重量倍以下であってもよい。
前記測定キット（１）において、前記第２試薬におけるＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の量は、前記第３試薬におけるＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体の量の２．６モル当量倍以上、２．７モル当量倍以上、２．８モル当量倍以上、２．９モル当量倍以上、３モル当量倍以上、４モル当量倍以上、５モル当量倍以上、６モル当量倍以上、７モル当量倍以上、８モル当量倍以上、又は９モル当量倍以上であってよい。また、前記測定キット（１）において、前記第２試薬におけるＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の量は、前記第３試薬におけるＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体の量の１０モル当量倍以下、１２モル当量倍以下、１３モル当量倍以下、１４モル当量倍以下、１５モル当量倍以下、２０モル当量倍以下、２５モル当量倍以下、３０モル当量倍以下、３５モル当量倍以下、４０モル当量倍以下、４５モル当量倍以下、５０モル当量倍以下、６０モル当量倍以下、７０モル当量倍以下、８０モル当量倍以下、９０モル当量倍以下、１００モル当量倍以下、１５０モル当量倍以下、又は２００モル当量倍以下であってよい。
前記の数値は自由に組み合わせることができる。例えば、前記測定キット（１）において、前記第２試薬におけるＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の量は、前記第３試薬におけるＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体の量の２．６モル当量倍以上２００モル当量倍以下、２．８モル当量倍以上１５０モル当量倍以下であってもよく、３モル当量倍以上１００モル当量倍以下であってもよく、３モル当量倍以上３０モル当量倍以下であってもよく、５モル当量倍以上３０モル当量倍以下であってもよく、５モル当量倍以上１０モル当量倍以下であってもよい。
前記測定キット（２）の第２試薬において、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の量は、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体の量の２．６重量倍以上、２．７重量倍以上、２．８重量倍以上、２．９重量倍以上、３重量倍以上、４重量倍以上、５重量倍以上、６重量倍以上、７重量倍以上、８重量倍以上、又は９重量倍以上であってよい。また、前記測定キット（２）の第２試薬において、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の量は、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体の量の１０重量倍以下、１２重量倍以下、１３重量倍以下、１４重量倍以下、１５重量倍以下、２０重量倍以下、２５重量倍以下、３０重量倍以下、３５重量倍以下、４０重量倍以下、４５重量倍以下、５０重量倍以下、６０重量倍以下、７０重量倍以下、８０重量倍以下、９０重量倍以下、１００重量倍以下、１５０重量倍以下、又は２００重量倍以下であってよい。
前記の数値は自由に組み合わせることができる。例えば、前記測定キット（２）の第２試薬において、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の量は、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体の量の２．６重量倍以上２００重量倍以下であってもよく、２．８重量倍以上１５０重量倍以下であってもよく、３重量倍以上１００重量倍以下であってもよく、３重量倍以上３０重量倍以下であってもよく、５重量倍以上３０重量倍以下であってもよく、５重量倍以上１０重量倍以下であってもよい。
前記測定キット（２）の第２試薬において、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の量は、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体の量の２．６モル当量倍以上、２．７モル当量倍以上、２．８モル当量倍以上、２．９モル当量倍以上、３モル当量倍以上、４モル当量倍以上、５モル当量倍以上、６モル当量倍以上、７モル当量倍以上、８モル当量倍以上、又は９モル当量倍以上であってよい。また、前記測定キット（２）の第２試薬において、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の量は、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体の量の１０モル当量倍以下、１２モル当量倍以下、１３モル当量倍以下、１４モル当量倍以下、１５モル当量倍以下、２０モル当量倍以下、２５モル当量倍以下、３０モル当量倍以下、３５モル当量倍以下、４０モル当量倍以下、４５モル当量倍以下、５０モル当量倍以下、６０モル当量倍以下、７０モル当量倍以下、８０モル当量倍以下、９０モル当量倍以下、１００モル当量倍以下、１５０モル当量倍以下、又は２００モル当量倍以下であってよい。
前記の数値は自由に組み合わせることができる。例えば、前記測定キット（２）の第２試薬において、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の量は、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体の量の２．６モル当量倍以上２００モル当量倍以下、２．８モル当量倍以上１５０モル当量倍以下であってもよく、３モル当量倍以上１００モル当量倍以下であってもよく、３モル当量倍以上３０モル当量倍以下であってもよく、５モル当量倍以上３０モル当量倍以下であってもよく、５モル当量倍以上１０モル当量倍以下であってもよい。
前記測定キット（１）及び測定キット（２）の第１試薬における、不溶性担体の濃度は、０．００１ｍｇ／ｍＬ以上、０．０１ｍｇ／ｍＬ以上、０．０２ｍｇ／ｍＬ以上、０．０３ｍｇ／ｍＬ以上、０．０４ｍｇ／ｍＬ以上、０．０５ｍｇ／ｍＬ以上、０．０６ｍｇ／ｍＬ以上、０．０７ｍｇ／ｍＬ以上、０．０８ｍｇ／ｍＬ以上、０．０９ｍｇ／ｍＬ以上、０．１ｍｇ／ｍＬ以上、０．２ｍｇ／ｍＬ以上、０．３ｍｇ／ｍＬ以上、０．４ｍｇ／ｍＬ以上、又は０．５ｍｇ／ｍＬ以上であってよい。また、前記測定キット（１）及び測定キット（２）の第１試薬における、不溶性担体の濃度は、０．６ｍｇ／ｍＬ以下、０．７ｍｇ／ｍＬ以下、０．８ｍｇ／ｍＬ以下、０．９ｍｇ／ｍＬ以下、１ｍｇ／ｍＬ以下、２ｍｇ／ｍＬ以下、３ｍｇ／ｍＬ以下、４ｍｇ／ｍＬ以下、５ｍｇ／ｍＬ以下、６ｍｇ／ｍＬ以下、７ｍｇ／ｍＬ以下、８ｍｇ／ｍＬ以下、９ｍｇ／ｍＬ以下、又は１０ｍｇ／ｍＬ以下であってよい。
前記の数値は自由に組み合わせることができる。例えば、前記測定キット（１）及び測定キット（２）の第１試薬における、不溶性担体の濃度は、０．０１ｍｇ／ｍＬ～１０ｍｇ／ｍＬであってもよく、０．０３ｍｇ／ｍＬ～５ｍｇ／ｍＬであってもよく、０．１ｍｇ／ｍＬ～２ｍｇ／ｍＬであってもよい。
前記測定キット（１）及び測定キット（２）の第２試薬における、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の濃度は、０．０１μｇ／ｍＬ以上、０．０２μｇ／ｍＬ以上、０．０３μｇ／ｍＬ以上、０．０４μｇ／ｍＬ以上、０．０５μｇ／ｍＬ以上、０．０６μｇ／ｍＬ以上、０．０７μｇ／ｍＬ以上、０．０８μｇ／ｍＬ以上、０．０９μｇ／ｍＬ以上、０．１μｇ／ｍＬ以上、０．２μｇ／ｍＬ以上、０．３μｇ／ｍＬ以上、０．４μｇ／ｍＬ以上、０．５μｇ／ｍＬ以上、０．６μｇ／ｍＬ以上、０．７μｇ／ｍＬ以上、０．８μｇ／ｍＬ以上、０．９μｇ／ｍＬ以上、１μｇ／ｍＬ以上、２μｇ／ｍＬ以上、３μｇ／ｍＬ以上、４μｇ／ｍＬ以上、５μｇ／ｍＬ以上、６μｇ／ｍＬ以上、７μｇ／ｍＬ以上、７．５μｇ／ｍＬ以上、８μｇ／ｍＬ以上、９μｇ／ｍＬ以上、又は１０μｇ／ｍＬ以上であってよい。また、前記測定キット（１）及び測定キット（２）の第２試薬における、ＤＵＰＡＮ－２抗原に結合する第１抗体の濃度は、１１μｇ／ｍＬ以下、１２μｇ／ｍＬ以下、１３μｇ／ｍＬ以下、１４μｇ／ｍＬ以下、１５μｇ／ｍＬ以下、１６μｇ／ｍＬ以下、１７μｇ／ｍＬ以下、１８μｇ／ｍＬ以下、１９μｇ／ｍＬ以下、２０μｇ／ｍＬ以下、３０μｇ／ｍＬ以下、４０μｇ／ｍＬ以下、５０μｇ／ｍＬ以下、又は１００μｇ／ｍＬ以下であってよい。
前記の数値は自由に組み合わせることができる。例えば、前記測定キット（１）及び測定キット（２）の第２試薬における、ＤＵＰＡＮ－２抗原に結合する第１抗体の濃度は、０．０１μｇ／ｍＬ～１００μｇ／ｍＬであってもよく、０．１μｇ／ｍＬ～３０μｇ／ｍＬであってもよく、６μｇ／ｍＬ～３０μｇ／ｍＬであってもよく、１０μｇ／ｍＬ～２０μｇ／ｍＬであってもよい。
前記測定キット（１）の第３試薬及び測定キット（２）の第２試薬における、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体の濃度は、０．００１μｇ／ｍＬ以上、０．０１μｇ／ｍＬ以上、０．０２μｇ／ｍＬ以上、０．０３μｇ／ｍＬ以上、０．０４μｇ／ｍＬ以上、０．０５μｇ／ｍＬ以上、０．０６μｇ／ｍＬ以上、０．０７μｇ／ｍＬ以上、０．０８μｇ／ｍＬ以上、０．０９μｇ／ｍＬ以上、０．１μｇ／ｍＬ以上、０．２μｇ／ｍＬ以上、０．３μｇ／ｍＬ以上、０．３３μｇ／ｍＬ以上、０．４μｇ／ｍＬ以上、０．５μｇ／ｍＬ以上、０．６μｇ／ｍＬ以上、０．７μｇ／ｍＬ以上、０．８μｇ／ｍＬ以上、又は０．９μｇ／ｍＬ以上であってよい。また、前記測定キット（１）の第３試薬及び測定キット（２）の第２試薬における、ＤＵＰＡＮ－２抗原に結合する第２抗体の濃度は、１μｇ／ｍＬ以下、２μｇ／ｍＬ以下、３μｇ／ｍＬ以下、４μｇ／ｍＬ以下、５μｇ／ｍＬ以下、６μｇ／ｍＬ以下、７μｇ／ｍＬ以下、７．５μｇ／ｍＬ以下、８μｇ／ｍＬ以下、９μｇ／ｍＬ以下、１０μｇ／ｍＬ以下、１１μｇ／ｍＬ以下、１２μｇ／ｍＬ以下、１３μｇ／ｍＬ以下、１４μｇ／ｍＬ以下、１５μｇ／ｍＬ以下、１６μｇ／ｍＬ以下、１７μｇ／ｍＬ以下、１８μｇ／ｍＬ以下、１９μｇ／ｍＬ以下、２０μｇ／ｍＬ以下、３０μｇ／ｍＬ以下、４０μｇ／ｍＬ以下、５０μｇ／ｍＬ以下、又は１００μｇ／ｍＬ以下であってよい。
前記の数値は自由に組み合わせることができる。例えば、前記測定キット（１）の第３試薬及び測定キット（２）の第２試薬における、ＤＵＰＡＮ－２抗原に結合する第２抗体の濃度は、０．０１μｇ／ｍＬ～１００μｇ／ｍＬであってもよく、０．０３μｇ／ｍＬ～３０μｇ／ｍＬであってもよく、０．１μｇ／ｍＬ～２０μｇ／ｍＬであってもよく、０．１μｇ／ｍＬ～１μｇ／ｍＬであってもよい。
本開示の測定キットの構成試薬は、凍結乾燥状態でも液状でもよい。
測定キットの構成試薬が凍結乾燥状態である場合には、測定前に水性媒体で溶解して液状にして測定に供する。水性媒体としては、例えば前述の水性媒体が挙げられる。水性媒体には、前述の塩類、金属イオン、糖類、蛋白質、界面活性剤等が含有されてもよい。
測定キットの構成試薬が凍結乾燥状態である場合には、測定前に水性媒体で溶解して液状にして測定に供する。水性媒体としては、例えば前述の水性媒体が挙げられる。水性媒体には、前述の塩類、金属イオン、糖類、蛋白質、界面活性剤等が含有されてもよい。
測定キットの構成試薬が液状である場合には、不溶性担体、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体、及びＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体からなる群より選ばれる少なくとも１種は、水性媒体で溶解された状態となっている。水性媒体としては、例えば前述の水性媒体が挙げられる。水性媒体には、前述の塩類、金属イオン、糖類、蛋白質、界面活性剤等が含有されてもよい。
標準物質としての既知濃度のＤＵＰＡＮ－２抗原としては、腹水由来のＤＵＰＡＮ－２抗原又はヒト膵癌培養細胞ＨＰＡＦ由来のＤＵＰＡＮ－２抗原をＰＢＳで希釈したＤＵＰＡＮ－２抗原溶液等が挙げられる。本開示のキットにおいて、複数の既知濃度のＤＵＰＡＮ－２抗原を含んでいてもよい。
標準物質としての既知濃度のＤＵＰＡＮ－２抗原における、ＤＵＰＡＮ－２抗原の濃度としては、例えば前述の濃度等が挙げられる。
以下、本開示を実施例により、更に詳細に説明するが、これらは本開示の範囲を何ら制限するものではない。なお、以下の実施例においては、次のメーカーの試薬類を使用した。
リン酸水素二ナトリウム（無水）（関東化学株式会社製）、リン酸二水素ナトリウム（無水）（関東化学株式会社製）、トリスヒドロキシメチルアミノメタン（関東化学株式会社製）、塩化ナトリウム（富士フイルム和光純薬株式会社製）、ＭＥＳ（株式会社同仁化学研究所製）、ＭＯＰＳ（株式会社同仁化学研究所製）、ＮＰ－４０（シグマアルドリッチ社製）、Ｔｗｅｅｎ ２０（関東化学株式会社製）、Ｍｉｎｉｍｕｍ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｍｅｄｉｕｍ Ｅａｇｌｅ（シグマアルドリッチ社製）、ウシ胎仔血清（サーモフィッシャーサイエンティフィック社製）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）（Ｂｏｖｏｇｅｎ社製）、「デタミナーＤＵＰＡＮ－２ Ｎ」（日立化成ダイアグノスティックス・システムズ株式会社製）の構成試薬「検体希釈液」を使用した。
［実施例１］
以下の磁性粒子懸濁液、ビオチン結合ＤＵＰＡＮ－２抗体溶液、及びアルカリホスファターゼ標識ＤＵＰＡＮ－２抗体溶液を含む、ＤＵＰＡＮ－２抗原の測定キット１を作製した。
以下の磁性粒子懸濁液、ビオチン結合ＤＵＰＡＮ－２抗体溶液、及びアルカリホスファターゼ標識ＤＵＰＡＮ－２抗体溶液を含む、ＤＵＰＡＮ－２抗原の測定キット１を作製した。
＜磁性粒子懸濁液＞
磁性粒子として、ストレプトアビジンが結合した市販の磁性粒子［Ｄｙｎａｂｅａｄｓ ＭｙＯｎｅ Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ Ｔ１（サーモフィッシャーサイエンティフィック社製）］を用いて、以下の組成の磁性粒子懸濁液を調製した。
磁性粒子として、ストレプトアビジンが結合した市販の磁性粒子［Ｄｙｎａｂｅａｄｓ ＭｙＯｎｅ Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ Ｔ１（サーモフィッシャーサイエンティフィック社製）］を用いて、以下の組成の磁性粒子懸濁液を調製した。
ＭＥＳ（ｐＨ６．５） ５０ ｍｍｏｌ／Ｌ
ストレプトアビジン結合磁性粒子 ０．４ ｍｇ／ｍＬ
ＢＳＡ ０．１ ％（ｗ／ｖ）
塩化ナトリウム ０．１ ｍｏｌ／Ｌ
ストレプトアビジン結合磁性粒子 ０．４ ｍｇ／ｍＬ
ＢＳＡ ０．１ ％（ｗ／ｖ）
塩化ナトリウム ０．１ ｍｏｌ／Ｌ
＜ビオチン結合ＤＵＰＡＮ－２抗体溶液：第１抗体＞
Ｂｉｏｔｉｎ Ｌａｂｅｌｉｎｇ ｋｉｔ－ＮＨ２（株式会社同仁化学研究所製）を用いて、当該キットの取扱説明書に従い、ＤＵＰＡＮ－２抗体にビオチンが結合した、ビオチン結合ＤＵＰＡＮ－２抗体を作製した。得られたビオチン結合ＤＵＰＡＮ－２抗体を用いて、以下の組成のビオチン結合ＤＵＰＡＮ－２抗体溶液を調製した。
Ｂｉｏｔｉｎ Ｌａｂｅｌｉｎｇ ｋｉｔ－ＮＨ２（株式会社同仁化学研究所製）を用いて、当該キットの取扱説明書に従い、ＤＵＰＡＮ－２抗体にビオチンが結合した、ビオチン結合ＤＵＰＡＮ－２抗体を作製した。得られたビオチン結合ＤＵＰＡＮ－２抗体を用いて、以下の組成のビオチン結合ＤＵＰＡＮ－２抗体溶液を調製した。
ＭＥＳ（ｐＨ６．５） ５０ ｍｍｏｌ／Ｌ
ビオチン結合ＤＵＰＡＮ－２抗体 ７．５ μｇ／ｍＬ
ＢＳＡ ０．１ ％（ｗ／ｖ）
塩化ナトリウム ０．１ ｍｏｌ／Ｌ
ビオチン結合ＤＵＰＡＮ－２抗体 ７．５ μｇ／ｍＬ
ＢＳＡ ０．１ ％（ｗ／ｖ）
塩化ナトリウム ０．１ ｍｏｌ／Ｌ
＜アルカリホスファターゼ標識ＤＵＰＡＮ－２抗体溶液：第２抗体＞
Ａｌｋａｌｉｎｅ Ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ Ｌａｂｅｌｉｎｇ ｋｉｔ－ＳＨ２（株式会社同仁化学研究所製）を用いて、当該キットの取扱説明書に従い、ＤＵＰＡＮ－２抗体にアルカリホスファターゼが結合した、アルカリホスファターゼ標識ＤＵＰＡＮ－２抗体を作製した。得られたアルカリホスファターゼ標識ＤＵＰＡＮ－２抗体を用いて、以下の組成のアルカリホスファターゼ標識ＤＵＰＡＮ－２抗体溶液を調製した。
Ａｌｋａｌｉｎｅ Ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ Ｌａｂｅｌｉｎｇ ｋｉｔ－ＳＨ２（株式会社同仁化学研究所製）を用いて、当該キットの取扱説明書に従い、ＤＵＰＡＮ－２抗体にアルカリホスファターゼが結合した、アルカリホスファターゼ標識ＤＵＰＡＮ－２抗体を作製した。得られたアルカリホスファターゼ標識ＤＵＰＡＮ－２抗体を用いて、以下の組成のアルカリホスファターゼ標識ＤＵＰＡＮ－２抗体溶液を調製した。
ＭＥＳ（ｐＨ６．５） ５０ ｍｍｏｌ／Ｌ
アルカリホスファターゼ標識ＤＵＰＡＮ－２抗体 ０．３ μｇ／ｍＬ
ＢＳＡ ０．１ ％（ｗ／ｖ）
塩化ナトリウム ０．１ ｍｏｌ／Ｌ
アルカリホスファターゼ標識ＤＵＰＡＮ－２抗体 ０．３ μｇ／ｍＬ
ＢＳＡ ０．１ ％（ｗ／ｖ）
塩化ナトリウム ０．１ ｍｏｌ／Ｌ
［比較例］
比較例として、ＤＵＰＡＮ－２抗体結合マイクロプレート、及びペルオキシダーゼ（ＰＯＤ）標識ＤＵＰＡＮ－２抗体溶液を含む、ＤＵＰＡＮ－２抗原の測定キットＡを作製した。なお、下記のＤＵＰＡＮ－２抗体結合マイクロプレートの作製時において、ＤＵＰＡＮ－２抗体溶液におけるＤＵＰＡＮ－２抗体濃度を５μｇ／ｍＬとした。
比較例として、ＤＵＰＡＮ－２抗体結合マイクロプレート、及びペルオキシダーゼ（ＰＯＤ）標識ＤＵＰＡＮ－２抗体溶液を含む、ＤＵＰＡＮ－２抗原の測定キットＡを作製した。なお、下記のＤＵＰＡＮ－２抗体結合マイクロプレートの作製時において、ＤＵＰＡＮ－２抗体溶液におけるＤＵＰＡＮ－２抗体濃度を５μｇ／ｍＬとした。
＜ＤＵＰＡＮ－２抗体結合マイクロプレート：第１抗体＞
９６ウェルポリスチレンプレート（サーモフィッシャーサイエンティフィック社製）の各ウェルに、結合用緩衝液［０．１４ｍｏｌ／Ｌの塩化ナトリウムを含有する０．０１ｍｏｌ／Ｌリン酸緩衝液（ｐＨ７．３）］で調製したＤＵＰＡＮ－２抗体溶液を５０μＬ添加し、２５℃で１６時間インキュベートした。次いで、当該ＤＵＰＡＮ－２抗体溶液を除去し、ブロッキング液［１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ、０．０５％（ｗ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ ２０を含むリン酸緩衝液（ｐＨ７．２）］を各ウェルに２５０μＬ加えて洗浄した後、当該ブロッキング液を各ウェルに２５０μＬ加えて、４℃で１６時間インキュベートした。その後、当該ブロッキング液を除去し、ＤＵＰＡＮ－２抗体結合マイクロプレートを調製した。
９６ウェルポリスチレンプレート（サーモフィッシャーサイエンティフィック社製）の各ウェルに、結合用緩衝液［０．１４ｍｏｌ／Ｌの塩化ナトリウムを含有する０．０１ｍｏｌ／Ｌリン酸緩衝液（ｐＨ７．３）］で調製したＤＵＰＡＮ－２抗体溶液を５０μＬ添加し、２５℃で１６時間インキュベートした。次いで、当該ＤＵＰＡＮ－２抗体溶液を除去し、ブロッキング液［１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ、０．０５％（ｗ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ ２０を含むリン酸緩衝液（ｐＨ７．２）］を各ウェルに２５０μＬ加えて洗浄した後、当該ブロッキング液を各ウェルに２５０μＬ加えて、４℃で１６時間インキュベートした。その後、当該ブロッキング液を除去し、ＤＵＰＡＮ－２抗体結合マイクロプレートを調製した。
＜ＰＯＤ標識ＤＵＰＡＮ－２抗体溶液：第２抗体＞
Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ Ｌａｂｅｌｉｎｇ Ｋｉｔ－ＮＨ２（株式会社同仁化学研究所製）を用いて、当該キットの取扱説明書に従い、ＤＵＰＡＮ－２抗体をＰＯＤで標識し、ＰＯＤ標識ＤＵＰＡＮ－２抗体を作製した。得られたＰＯＤ標識ＤＵＰＡＮ－２抗体を用いて、以下の組成のＰＯＤ標識ＤＵＰＡＮ－２抗体溶液を調製した。
Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ Ｌａｂｅｌｉｎｇ Ｋｉｔ－ＮＨ２（株式会社同仁化学研究所製）を用いて、当該キットの取扱説明書に従い、ＤＵＰＡＮ－２抗体をＰＯＤで標識し、ＰＯＤ標識ＤＵＰＡＮ－２抗体を作製した。得られたＰＯＤ標識ＤＵＰＡＮ－２抗体を用いて、以下の組成のＰＯＤ標識ＤＵＰＡＮ－２抗体溶液を調製した。
ＭＥＳ（ｐＨ６．５） ０．１ ｍｏｌ／Ｌ
ＰＯＤ標識ＤＵＰＡＮ－２抗体 １ μｇ／ｍＬ
ＢＳＡ ０．１ ％（ｗ／ｖ）
ＮＰ－４０ ０．２ ％（ｗ／ｖ）
塩化ナトリウム ０．１５ ｍｏｌ／Ｌ
ＰＯＤ標識ＤＵＰＡＮ－２抗体 １ μｇ／ｍＬ
ＢＳＡ ０．１ ％（ｗ／ｖ）
ＮＰ－４０ ０．２ ％（ｗ／ｖ）
塩化ナトリウム ０．１５ ｍｏｌ／Ｌ
［実施例２］
＜ＤＵＰＡＮ－２抗原溶液の調製＞
ヒト膵癌患者の腹水由来のＤＵＰＡＮ－２抗原（以下、単に「腹水由来のＤＵＰＡＮ－２抗原」と記す）を、抗原希釈液［１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ、０．１５ｍｏｌ／Ｌ塩化ナトリウムを含む０．０５ｍｏｌ／Ｌトリス緩衝液（ｐＨ８．０）］で３５０Ｕ／ｍＬに調整した腹水由来ＤＵＰＡＮ－２抗原溶液を調製した。同様に、ヒト膵癌培養細胞ＨＰＡＦ－ＩＩの培養上清由来のＤＵＰＡＮ－２抗原を、前記抗原希釈液で３５０Ｕ／ｍＬに調整したヒト膵癌培養細胞ＨＰＡＦ－ＩＩ由来のＤＵＰＡＮ－２抗原溶液を調製した。
なお、公知の方法（Ｒ． Ｓ． Ｍｅｔｚｇａｒ ｅｔ． ａｌ． ＣＡＮＣＥＲ ＲＥＳＥＡＲＣＨ （１９８２）， ４２ （２）：ｐｐ．６０１－６０８）に従い、ヒト膵癌培養細胞ＨＰＡＦ－ＩＩを培養し、当該培養で得られた培養上清を、ヒト膵癌培養細胞ＨＰＡＦ－ＩＩ由来のＤＵＰＡＮ－２抗原として用いた。
＜ＤＵＰＡＮ－２抗原溶液の調製＞
ヒト膵癌患者の腹水由来のＤＵＰＡＮ－２抗原（以下、単に「腹水由来のＤＵＰＡＮ－２抗原」と記す）を、抗原希釈液［１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ、０．１５ｍｏｌ／Ｌ塩化ナトリウムを含む０．０５ｍｏｌ／Ｌトリス緩衝液（ｐＨ８．０）］で３５０Ｕ／ｍＬに調整した腹水由来ＤＵＰＡＮ－２抗原溶液を調製した。同様に、ヒト膵癌培養細胞ＨＰＡＦ－ＩＩの培養上清由来のＤＵＰＡＮ－２抗原を、前記抗原希釈液で３５０Ｕ／ｍＬに調整したヒト膵癌培養細胞ＨＰＡＦ－ＩＩ由来のＤＵＰＡＮ－２抗原溶液を調製した。
なお、公知の方法（Ｒ． Ｓ． Ｍｅｔｚｇａｒ ｅｔ． ａｌ． ＣＡＮＣＥＲ ＲＥＳＥＡＲＣＨ （１９８２）， ４２ （２）：ｐｐ．６０１－６０８）に従い、ヒト膵癌培養細胞ＨＰＡＦ－ＩＩを培養し、当該培養で得られた培養上清を、ヒト膵癌培養細胞ＨＰＡＦ－ＩＩ由来のＤＵＰＡＮ－２抗原として用いた。
＜測定キット１を用いる、試料中のＤＵＰＡＮ－２の測定＞
３５０Ｕ／ｍＬの腹水由来ＤＵＰＡＮ－２抗原溶液、及び、３５０Ｕ／ｍＬのヒト膵癌培養細胞ＨＰＡＦ－ＩＩ由来のＤＵＰＡＮ－２抗原溶液を測定用試料とした。
測定用試料１０μＬに、実施例１で調製した磁性粒子懸濁液、ビオチン結合ＤＵＰＡＮ－２抗体溶液、及びアルカリホスファターゼ標識ＤＵＰＡＮ－２抗体溶液を各３０μＬ加えて攪拌し、３７℃で２０分間反応させた。磁性粒子を磁力で集めて、磁性粒子以外の反応溶液を除去すると共に、洗浄液［０．１％（ｗ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ ２０を含有する５０ｍｍｏｌ／Ｌ ＭＯＰＳ緩衝液（ｐＨ７．３５）］で磁性粒子を５回洗浄した。その後、９－（４－クロロフェニルチオホスホリルオキシメチリデン）－１０－メチルアクリダン・二ナトリウム塩を主成分とする発光基質液を１００μＬ加えて攪拌し、生じた発光量を、全自動化学発光免疫測定装置「ＣＬ－ＪＡＣＫ ＮＸ」（日立化成ダイアグノスティックス・システムズ株式会社製）を用いて測定した。
腹水由来のＤＵＰＡＮ－２抗原溶液を測定したときの発光量を（Ａ）、ヒト膵癌培養細胞ＨＰＡＦ－ＩＩ由来のＤＵＰＡＮ－２抗原溶液を測定したときの発光量を（Ｂ）とした場合の（Ｂ）／（Ａ）値を算出した。（Ｂ）／（Ａ）値を表１に示す。
３５０Ｕ／ｍＬの腹水由来ＤＵＰＡＮ－２抗原溶液、及び、３５０Ｕ／ｍＬのヒト膵癌培養細胞ＨＰＡＦ－ＩＩ由来のＤＵＰＡＮ－２抗原溶液を測定用試料とした。
測定用試料１０μＬに、実施例１で調製した磁性粒子懸濁液、ビオチン結合ＤＵＰＡＮ－２抗体溶液、及びアルカリホスファターゼ標識ＤＵＰＡＮ－２抗体溶液を各３０μＬ加えて攪拌し、３７℃で２０分間反応させた。磁性粒子を磁力で集めて、磁性粒子以外の反応溶液を除去すると共に、洗浄液［０．１％（ｗ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ ２０を含有する５０ｍｍｏｌ／Ｌ ＭＯＰＳ緩衝液（ｐＨ７．３５）］で磁性粒子を５回洗浄した。その後、９－（４－クロロフェニルチオホスホリルオキシメチリデン）－１０－メチルアクリダン・二ナトリウム塩を主成分とする発光基質液を１００μＬ加えて攪拌し、生じた発光量を、全自動化学発光免疫測定装置「ＣＬ－ＪＡＣＫ ＮＸ」（日立化成ダイアグノスティックス・システムズ株式会社製）を用いて測定した。
腹水由来のＤＵＰＡＮ－２抗原溶液を測定したときの発光量を（Ａ）、ヒト膵癌培養細胞ＨＰＡＦ－ＩＩ由来のＤＵＰＡＮ－２抗原溶液を測定したときの発光量を（Ｂ）とした場合の（Ｂ）／（Ａ）値を算出した。（Ｂ）／（Ａ）値を表１に示す。
＜測定キットＡを用いる、試料中のＤＵＰＡＮ－２の測定＞
３５０Ｕ／ｍＬの腹水由来ＤＵＰＡＮ－２抗原溶液、及び、３５０Ｕ／ｍＬのヒト膵癌培養細胞ＨＰＡＦ－ＩＩ由来のＤＵＰＡＮ－２抗原溶液を測定用試料とした。
ＤＵＰＡＮ－２抗体結合マイクロプレートの各ウェルに、検体希釈液を１００μＬ添加した。その後、当該各ウェルに、測定用試料２０μＬをそれぞれ添加し、２５℃で１時間インキュベートした（１次反応）。１次反応後のプレートの各ウェルを、洗浄液［０．０５％（ｗ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ ２０、０．１５ｍｏｌ／Ｌ塩化ナトリウムを含む０．０１ｍｏｌ／Ｌリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）］で洗浄した後、各ウェルに、ＰＯＤ標識ＤＵＰＡＮ－２抗体溶液１００μＬを添加し、２５℃で１時間反応を行った（２次反応）。２次反応後のプレートの各ウェルを前記洗浄液で洗浄した後、各ウェルに、ＴＭＢ（３，３´，５，５´－テトラメチルベンジジン）水溶液を１００μＬ添加し、２５℃で３０分間インキュベートし、０．５ｍｏｌ／Ｌ硫酸５０μＬを添加し反応を停止した（発色反応）。発色反応で得られた反応液の吸光度（主波長４５０ｎｍ、副波長６５０ｎｍ）を、マイクロプレートリーダー「Ｅｍａｘ」（モレキュラーデバイスジャパン株式会社製）を用いて測定した。
腹水由来のＤＵＰＡＮ－２抗原溶液を測定したときの吸光度を（Ａ）、ヒト膵癌培養細胞ＨＰＡＦ－ＩＩ由来のＤＵＰＡＮ－２抗原溶液を測定したときの吸光度を（Ｂ）とした場合の（Ｂ）／（Ａ）値を算出した。（Ｂ）／（Ａ）値を表１に示す。
３５０Ｕ／ｍＬの腹水由来ＤＵＰＡＮ－２抗原溶液、及び、３５０Ｕ／ｍＬのヒト膵癌培養細胞ＨＰＡＦ－ＩＩ由来のＤＵＰＡＮ－２抗原溶液を測定用試料とした。
ＤＵＰＡＮ－２抗体結合マイクロプレートの各ウェルに、検体希釈液を１００μＬ添加した。その後、当該各ウェルに、測定用試料２０μＬをそれぞれ添加し、２５℃で１時間インキュベートした（１次反応）。１次反応後のプレートの各ウェルを、洗浄液［０．０５％（ｗ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ ２０、０．１５ｍｏｌ／Ｌ塩化ナトリウムを含む０．０１ｍｏｌ／Ｌリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）］で洗浄した後、各ウェルに、ＰＯＤ標識ＤＵＰＡＮ－２抗体溶液１００μＬを添加し、２５℃で１時間反応を行った（２次反応）。２次反応後のプレートの各ウェルを前記洗浄液で洗浄した後、各ウェルに、ＴＭＢ（３，３´，５，５´－テトラメチルベンジジン）水溶液を１００μＬ添加し、２５℃で３０分間インキュベートし、０．５ｍｏｌ／Ｌ硫酸５０μＬを添加し反応を停止した（発色反応）。発色反応で得られた反応液の吸光度（主波長４５０ｎｍ、副波長６５０ｎｍ）を、マイクロプレートリーダー「Ｅｍａｘ」（モレキュラーデバイスジャパン株式会社製）を用いて測定した。
腹水由来のＤＵＰＡＮ－２抗原溶液を測定したときの吸光度を（Ａ）、ヒト膵癌培養細胞ＨＰＡＦ－ＩＩ由来のＤＵＰＡＮ－２抗原溶液を測定したときの吸光度を（Ｂ）とした場合の（Ｂ）／（Ａ）値を算出した。（Ｂ）／（Ａ）値を表１に示す。
表１の結果より、キット１の（Ｂ）／（Ａ）値は１．０に近い値となった。このような（Ｂ）／（Ａ）値を示すキット１は、比較例キットＡと比べて、腹水由来のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定値と、ヒト膵癌培養細胞ＨＰＡＦ－ＩＩ由来のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定値との差が小さい傾向にあり、正確な測定ができていることが判明した。
本開示により、膵癌、胆道系癌などの癌診断に有効で且つ正確な、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法、測定試薬及び測定キットが提供される。
Claims (10)
- 水性媒体と、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原と、不溶性担体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体と、を含む混合液を調製することを含み、
前記混合液において、前記不溶性担体と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、が結合し、
前記混合液において、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の量が、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体の量の３重量倍以上１００重量倍以下である、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法。 - （１）水性媒体中で、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原に、不溶性担体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体と、を反応させ、前記不溶性担体上に、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体と、からなる免疫複合体を生成させる工程；及び
（２）工程（１）で生成された免疫複合体を測定する工程、
を含み、
工程（１）において、前記不溶性担体と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、が結合し、
工程（１）において、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の量が、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体の量の３重量倍以上１００重量倍以下である、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法。 - （１）水性媒体中で、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原に、不溶性担体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、を反応させ、前記不溶性担体上に、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原と、からなる免疫複合体１を生成させる工程；
（２）ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体を、水性媒体中で、工程（１）で生成した免疫複合体１と反応させ、前記不溶性担体上に、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体とからなる免疫複合体２を生成させる工程；及び
（３）工程（２）で生成された免疫複合体２を測定する工程、
を含み、
工程（１）において、前記不溶性担体と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、が結合し、
工程（２）おいて、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の量が、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体の量の３重量倍以上１００重量倍以下である、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法。 - （１）ＤＵＰＡＮ－２抗原を含む試料に、不溶性担体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体と、を添加する工程；
（２）水性媒体中で、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原に、前記不溶性担体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体と、を反応させ、前記不溶性担体上に、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体と、からなる免疫複合体を生成させる工程；及び
（３）工程（２）で生成された免疫複合体を測定する工程、
を含み、
工程（２）において、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、前記不溶性担体とが結合し、
工程（１）において、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の添加量が、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体の添加量の３重量倍以上１００重量倍以下である、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法。 - （１）ＤＵＰＡＮ－２抗原を含む試料に、不溶性担体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、を添加する工程；
（２）水性媒体中で、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原に、前記不溶性担体と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、を反応させ、前記不溶性担体上に、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原と、からなる免疫複合体１を生成させる工程；
（３）工程（２）で生成した免疫複合体１に、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体を添加する工程；
（４）水性媒体中で、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体を、工程（２）で生成した免疫複合体１と反応させ、前記不溶性担体上に、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体と、からなる免疫複合体２を生成させる工程；及び
（５）工程（４）で生成された免疫複合体２を測定する工程、
を含み、
工程（２）において、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、前記不溶性担体とが結合し、
工程（１）における、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の添加量が、工程（３）における、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体の添加量の３重量倍以上１００重量倍以下である、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定方法。 - 前記不溶性担体と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体とは、２つの親和性物質を介して結合することができ、前記不溶性担体には２つの親和性物質のうちの片方が結合し、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体には２つの親和性物質のうちのもう一方が結合している、請求項１～５のいずれか１項に記載の方法。
- ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体に標識が結合している、請求項１～６のいずれか１項に記載の方法。
- 標識がアルカリホスファターゼである、請求項７に記載の方法。
- 不溶性担体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体と、を含み、
前記不溶性担体と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体とは、２つの親和性物質を介して結合することができ、
前記不溶性担体には２つの親和性物質のうちの片方が結合し、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体には２つの親和性物質のうちのもう一方が結合しており、
前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の量が、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体の量の３重量倍以上１００重量倍以下である、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定試薬。 - 不溶性担体を含む第１試薬と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体を含む第２試薬と、ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体を含む第３試薬と、を含み、
前記不溶性担体と、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体とは、２つの親和性物質を介して結合することができ、
前記不溶性担体には２つの親和性物質のうちの片方が結合し、前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体には２つの親和性物質のうちのもう一方が結合しており、
第２試薬における前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第１抗体の量が、第３試薬における前記ＤＵＰＡＮ－２抗原を認識する第２抗体の量の３重量倍以上１００重量倍以下である、試料中のＤＵＰＡＮ－２抗原の測定キット。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2021019002 | 2021-02-09 | ||
| JP2021019002 | 2021-02-09 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2022122283A true JP2022122283A (ja) | 2022-08-22 |
Family
ID=82933211
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2022017844A Pending JP2022122283A (ja) | 2021-02-09 | 2022-02-08 | Ｄｕｐａｎ－２抗原の測定方法、測定試薬及び測定キット |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2022122283A (ja) |
-
2022
- 2022-02-08 JP JP2022017844A patent/JP2022122283A/ja active Pending
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| WO2017061546A1 (ja) | Ｐｉｖｋａ－ｉｉの測定方法、及びｐｉｖｋａ－ｉｉ免疫測定試薬又はキットの製造方法 | |
| US8664007B2 (en) | Immune complex-specific antibodies for increased sensitivity in immunoassay array tests | |
| JP2022043219A (ja) | 糖ペプチドと反応するモノクローナル抗体およびその用途 | |
| JP7382071B2 (ja) | 糖化ヘモグロビン（％）の測定方法 | |
| US9952230B2 (en) | Method of inhibiting nonspecific reaction in PIVKA-II assay reagent | |
| EP3264085A1 (en) | Immunoassay method and assay reagent used in said method | |
| EP3885362A1 (en) | Antibody conjugate | |
| JP3537331B2 (ja) | Ｉｖ型コラーゲンの免疫測定法及び試薬 | |
| WO2022138460A1 (ja) | Ｄｕｐａｎ－２抗原の測定試薬及び測定キット | |
| US11320427B2 (en) | Tandemly repeated antibody-binding protein and its applications | |
| EP4047017A1 (en) | Monoclonal antibody, measurement reagent for cytokeratin 18 fragment, reagent kit, and measurement method | |
| JP2022122283A (ja) | Ｄｕｐａｎ－２抗原の測定方法、測定試薬及び測定キット | |
| EP3252073A1 (en) | Monoclonal antibody reacting with glycopeptide, and use thereof | |
| JP2022122282A (ja) | Ｄｕｐａｎ－２抗原の測定方法、測定試薬及び測定キット | |
| JP2023050158A (ja) | Ｄｕｐａｎ－２抗原の測定方法、測定試薬及び測定キット | |
| WO2014147873A1 (ja) | Ｈｍｇｂ１の分解産物と特異的に結合する抗体、並びにｈｍｇｂ１の分解産物の測定方法及び測定試薬 | |
| US11327078B2 (en) | Monoclonal antibody against APOA4, immunological measurement method, and kit for measurement | |
| CN115023611A (zh) | 免疫学分析方法和免疫学分析试剂盒 | |
| US20060275849A1 (en) | Monoclonal antibody reagents | |
| JP6935184B2 (ja) | 糖ペプチドと反応するモノクローナル抗体およびその用途 | |
| WO2021182555A1 (ja) | アルドステロン検出用抗体及びアルドステロンの免疫測定方法 | |
| JP7222501B2 (ja) | 末端シアル酸残基がα２，３結合でガラクトースに結合した糖鎖に特異的に結合するモノクローナル抗体、及び、末端シアル酸残基がα２，３結合でガラクトースに結合した糖鎖の測定方法 | |
| JP7246603B2 (ja) | 末端シアル酸残基がα２，６結合でガラクトースに結合した糖鎖に特異的に結合するモノクローナル抗体、及び、末端シアル酸残基がα２，６結合でガラクトースに結合した糖鎖の測定方法 | |
| WO2021182558A1 (ja) | 試料中の対象物質を免疫測定するための方法及びキット | |
| Zeng et al. | Fully synthetic phosphorylated Tau181, Tau217, and Tau231 calibrators for Alzheimer's disease diagnosis |