CN117100673B - 一种调节毛囊周期的动物脐带提取物及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种调节毛囊周期的动物脐带提取物及其制备方法和应用。该动物脐带提取物的制备方法包括以下步骤：将动物脐带清洗干净，剪碎，经酶消化后，加入无血清间充质干细胞培养基，吹打分散组织，然后过滤，将过滤后的组织液依次进行低能量红光照射、恒温孵育、反复冻融处理、超声处理，再次过滤，用无菌水稀释过滤后的组织液，得到动物脐带提取物。实验证明，采用本发明方法制备得到的动物脐带提取物具有调节毛囊周期的作用，能促进静止期毛囊进入生长期，可以作为一种具有防脱发作用的原料，用于制备调节毛囊周期和/或防脱发的产品，具有广阔的应用前景。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种调节毛囊周期的动物脐带提取物及其制备方法和应用。
背景技术
世界卫生组织将“头发有光泽、无头皮屑”列为人体健康的标准之一，这意味着“头发问题”受到全世界的关注与讨论。而头发是由毛囊生成的一种角蛋白纤维，毛囊是人体中十分微小但结构完整的器官，每个毛囊都是个独立的单位，有着独立的生长周期，任何引起毛囊周期循环异常的均会引起毛发异常或者脱发，而目前大多化妆品防脱类原料为植物提取活性物质，效果并不显著。
生理活性物质，即具有生物活性的化合物，是指对生命现象具有影响的微量或少量的物质，包括多糖、萜类、甾醇类、生物碱、肽类、核酸、蛋白质、氨基酸、甙类、油脂、蜡、树脂类、植物色素、矿物质元素、酶和维生素等。生物活性物质的用途非常广泛，主要应用于食品、化妆品和药品行业，对于化妆品行业来说，包括多肽，蛋白质，核酸，氨基酸等活性物质，在国内化妆品行业中的应用才刚刚开始起步，生物活性物质作为功能性因子在功能性食品以及功效型护肤品中的地位日趋重要。
而植物类的生物活性化合物的在皮肤及其器官的生理作用研究较多，但是动物来源的生物活性物质研究较少，而且其生物学作用也有很多未知的领域。动物脐带是一种易于获取，免疫原性比较低的动物类来源化妆品原料，动物原料因为其提取过程，提取方法以及处理方式的不同，获得的生物活性物质有很大的不同。
发明内容
本发明的第一个目的在于提供一种动物脐带提取物的制备方法，提取的生物活性物质对于毛囊周期具有调节作用，可以促进静止期毛囊进入生长期，可以作为一种具有防脱发作用的原料。
具体的，所述的制备方法，包括以下步骤：将动物脐带清洗干净，剪碎，经酶消化后，加入无血清间充质干细胞培养基，吹打分散组织，然后过滤，将过滤后的组织液依次进行低能量红光照射、恒温孵育、反复冻融处理、超声处理，再次过滤，用无菌水稀释过滤后的组织液，得到动物脐带提取物。
优选的，所述的低能量红光照射是使用620 nm低能量红光照射10-15 min，能量密度为0.5-1 J/cm2。
优选的，所述的恒温孵育是在5% CO2培养箱中37℃孵育6~12 h。
优选的，所述的反复冻融处理,具体为：-80℃急冻3-6 h至变成固体，37℃温水融化；-80℃急冻3-6 h至变成固体，37℃温水融化。
优选的，所述的超声处理,具体为：4℃超声处理4-10 min，工作频率是80千赫兹。
优选的，第一次过滤是使用100-300 μm过滤器过滤，第二次过滤是使用10-40 μm过滤器过滤。
优选的，所述的酶消化处理,具体为：用0.25%胰蛋白酶，4℃下处理8-12 h。
优选的，所述的用无菌水稀释，具体是稀释至质量分数1-5%的浓度。
本发明的第二个目的是提供一种由上述制备方法制备得到的动物脐带提取物。
本发明的第三个目的是提供上述的动物脐带提取物在制备调节毛囊周期的产品中的应用。优选的，是在制备促进毛囊由静止期进入生长期的产品中的应用。
本发明的第四个目的是提供上述的动物脐带提取物在制备防脱发产品中的应用。
优选的，所述的产品包括化妆品和药品。
本发明的第五个目的是提供一种调节毛囊周期和/或防脱发的产品，含有上述的动物脐带提取物作为活性成分。
本发明提供了一种调节毛囊周期的动物脐带提取物及其制备方法。实验证明，采用本发明方法制备得到的动物脐带提取物具有调节毛囊周期的作用，能促进静止期毛囊进入生长期，可以作为一种具有防脱发作用的原料，用于制备调节毛囊周期和/或防脱发的产品，具有广阔的应用前景。
附图说明
图1为动物脐带提取物促进小鼠毛囊由静止期进入生长期。1：Control组，不做任何处理；2：UCE组，涂抹不用620 nm低能量红光照射的脐带提取物；3：RL组，红光照射组；4：RL-UCE组，涂抹620 nm低能量红光照射的脐带提取物。
图2为HE染色观察动物脐带提取物促进小鼠毛囊由静止期进入生长期。1：Control组，不做任何处理；2：UCE组，涂抹不用620 nm低能量红光照射的脐带提取物；3：RL组，红光照射组；4：RL-UCE组，涂抹620 nm低能量红光照射的脐带提取物。
具体实施方式
以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。
实施例1
1、动物脐带处理及脐带提取物制备
在超净工作台中，取新鲜的猪脐带，放入含有青霉素（100 U/mL）和链霉素（0.1mg/mL）的PBS中清洗3次，每次5 min；之后利用锐利剪刀，将组织剪碎至1 mm2左右，用无钙镁PBS清洗2次，每次5 min；之后加入等体积的0.25%的胰蛋白酶，4℃摇匀12 h。加入等体积的无血清间充质干细胞培养基（依科赛生物科技（太仓）有限公司生产的无血清培养基，其货号为：ME000-N023），吹打分散组织2 h后，使用100 μm过滤器过滤组织液体；过滤后组织液，置于敞口平板上，620 nm低能量红光照射10 min，能量密度达到0.5-1 J/cm2，之后将组织液置于5% CO2培养箱中37℃孵育6 h，取出组织液，装瓶，10 mL/瓶，置于-80℃急冻3 h至变成固体；37℃温水融化；-80℃急冻3 h至变成固体，37℃温水融化；之后4℃超声处理，500W超声波细胞破碎仪，工作频率是80千赫兹，时长4 min；获得的组织液使用40 μm过滤器过滤；之后将过滤后组织液用无菌水稀释至质量分数5%的浓度，获得的液体即是脐带提取物，-80℃保存。
参照上述的方法制备不用620 nm低能量红光照射的脐带提取物，其具体步骤与上述步骤大体相同，区别在于，缺少620 nm低能量红光照射的步骤。
2、动物脐带提取物促进小鼠毛囊由静止期进入生长期
6-8周的C57BL/6小鼠，12只，皮肤粉红色，毛囊处于静止期。同一只小鼠背部画4个直径1 cm的圈，分别进行如下处理：1：Control组，不做任何处理；2：UCE组，涂抹不用620 nm低能量红光照射的脐带提取物，每天2次，每次涂抹50 μL，涂抹14天；3：RL组，红光照射组，仅用620 nm低能量红光照射小鼠皮肤，能量密度达到0.5-1 J/cm2，每天照射10 min，连续照射14天；4：RL-UCE组，涂抹620 nm低能量红光照射的脐带提取物，每天2次，每次涂抹50 μL，涂抹14天。大体观察皮肤的颜色，判断毛囊的周期，结果见图1所示。HE染色观察毛囊的结构，结果见图2所示。
图1结果显示，处理的第10天可以看到，Control组，UCE组，RL组，小鼠皮肤是粉红色，毛囊处于静止期，而RL-UCE组皮肤已经变成深灰色，说明毛囊进入生长期，而且可以看到皮肤表面已经由毛发长出。第14天可以看到，Control组，皮肤依然是粉红色，毛囊处于静止期；UCE组和RL组，小鼠皮肤刚进入灰色，说明刚进入生长期，而RL-UCE组皮肤已经变成深黑色，皮肤表面毛发长出较长。
图2结果显示，处理的第14天可以看到，Control组，小鼠皮肤中毛囊毛乳头位置在皮肤真皮，说明毛囊还是在静止期，UCE组和RL组，毛囊毛乳头增大，说明毛囊刚进入生长期，而RL-UCE组毛囊的毛乳头到达皮下组织深处，说明毛囊已经处于生长期。
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出的是，上述优选实施方式不应视为对本发明的限制，本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明的精神和范围内，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (8)
1.一种调节毛囊周期的动物脐带提取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将新鲜的猪脐带清洗干净，剪碎，加入等体积的0.25%胰蛋白酶4℃消化8-12 h后，加入无血清间充质干细胞培养基，吹打分散组织，然后用100-300 μm过滤器过滤，将过滤后的组织液依次进行低能量红光照射、恒温孵育、反复冻融处理、超声处理，然后用10-40 μm过滤器过滤，将过滤后组织液用无菌水稀释至质量分数1-5%的浓度，得到动物脐带提取物；
所述的低能量红光照射是使用620 nm低能量红光照射10-15 min，能量密度为0.5-1J/cm2；
所述的恒温孵育是在5% CO2培养箱中37℃孵育6~12 h；
所述的反复冻融处理,具体为：-80℃急冻3-6 h，37℃温水融化；-80℃急冻3-6 h；37℃温水融化；
所述的超声处理,具体为：4℃超声处理4-10 min，工作频率是80千赫兹。
2.根据权利要求1所述的制备方法制备得到的动物脐带提取物。
3.权利要求2所述的动物脐带提取物在制备调节毛囊周期的产品中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，是在制备促进毛囊由静止期进入生长期的产品中的应用。
5.权利要求2所述的动物脐带提取物在制备防脱发产品中的应用。
6.根据权利要求3或5所述的应用，其特征在于，所述的产品包括化妆品和药品。
7.一种调节毛囊周期的产品，其特征在于，含有权利要求2所述的动物脐带提取物作为活性成分。
8.一种防脱发的产品，其特征在于，含有权利要求2所述的动物脐带提取物作为活性成分。
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