CN117089531A - 一种血灵芝提取活性酶的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种血灵芝提取活性酶的制备方法，包括以下步骤：1)采集新鲜血灵芝进行清洗和切碎；2)将切碎的血灵芝放入缓冲液中进行浸泡；3)将混合物在低温条件下搅拌均匀；4)对溶液进行过滤，以去除残余物质和固体颗粒；5)对溶液进行精细处理和澄清；6)利用亲和层析材料对澄清液中的活性酶进行分离和富集；7)进行纯化和浓缩。该血灵芝提取活性酶的制备方法，制备步骤简单明了，易于操作和扩展应用，通过物理和生物化学技术相结合，大大提高了活性酶的提取效率，采用温度控制、离心和澄清等技术，确保了活性酶的活性和稳定性，利用亲和层析材料或离子交换层析材料进行分离和富集，适用于大规模生产和应用。
Description
技术领域
本发明涉及血灵芝技术领域，具体为一种血灵芝提取活性酶的制备方法。
背景技术
血灵芝指赤灵芝，即多孔菌科真菌赤芝，作为灵芝入药，药用部位为子实体，具有增益心气、补充内脏、增长智慧、增强记忆力的功效，主治胸中的郁结不舒，血灵芝含有多种生物活性成分，包括多糖、三萜类化合物、多肽和酶等，其中，酶类物质具有重要的药理学和生物学功能，包括抗氧化、抗炎症、免疫调节等作用。
活性酶在人体内是不可缺少的重要物质，人体内部的各种反应都需要活性酶的参与，而且活性酶具有消毒和杀菌的作用，当患者的机体内部出现炎症反应时，活性酶可以有效的维持各个器官的正常功能，同时也能够杀灭细菌。
血灵芝是一种珍贵的中草药，富含各种生物活性成分，其中包括多种有益的活性酶，传统的血灵芝提取方法存在着效率低、活性酶易受到热、酸和碱等因素影响的问题，限制了活性酶的使用，同时活性酶的纯度不够高，为了保证血灵芝中活性酶的活性和稳定性，为此提出一种血灵芝提取活性酶的制备方法来解决上述问题。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明提供了一种血灵芝提取活性酶的制备方法，具备提取效果好的优点，解决了传统的血灵芝提取方法存在着效率低、活性酶易受到热、酸和碱等因素影响的问题，限制了活性酶的使用，同时活性酶纯度不够高的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种血灵芝提取活性酶的制备方法，包括以下步骤：
1)采集新鲜血灵芝，并进行清洗和切碎；
2)将步骤1)中切碎的血灵芝放入缓冲液中进行浸泡；
3)将步骤2)中的混合物在低温条件下搅拌均匀，加速活性酶的释放；
4)对步骤3)中的溶液进行过滤，以去除残余物质和固体颗粒；
5)对步骤4)中的溶液进行精细处理和澄清；
6)利用亲和层析材料对澄清液中的活性酶进行分离和富集；
7)进行纯化和浓缩，得到纯度较高的活性酶溶液。
进一步，所述步骤2)中的缓冲液为Tris-HCl缓冲液，所述Tris-HCl缓冲液的浓度为0.1mol/L。
进一步，所述步骤2)中的缓冲液的pH值为8，浸泡时间为4-6小时。
进一步，所述步骤3)中对混合物的搅拌通常采用搅拌桶或者搅拌罐，通过电动方式实现对混合物的搅拌，搅拌时间为15-30min，搅拌转速为600-800r/min。
进一步，所述步骤3)中的搅拌温度为2-4摄氏度，所述步骤4)中对溶液的过滤需要用到滤纸、烧瓶和漏斗，所述滤纸的孔径为30-50微米。
进一步，所述步骤5)中的精细处理需要用到离心机，所述离心机的转速为2000-4000r/min，所述离心机的离心力为2770g，所述离心温度为2-4摄氏度。
进一步，所述步骤6)中的亲和层析材料为Ni-NTA琼脂糖。
进一步，所述步骤7)中的纯化方法为离子交换层析技术，所述纯化步骤需要用到离子交换层析检测仪，所述离子交换层析检测仪的检测波长为280nm，所述离子交换层析检测仪的光程为4mm。
进一步，所述步骤7)中的浓缩需要用到旋转浓缩器，所述旋转浓缩器的转速为4-12r/min。
进一步，所述步骤7)中所得的活性酶溶液需要储存在干燥、阴凉的地方，储存温度为4-8摄氏度。
与现有技术相比，本申请的技术方案具备以下有益效果：
该血灵芝提取活性酶的制备方法，制备步骤简单明了，易于操作和扩展应用，通过物理和生物化学技术相结合，大大提高了活性酶的提取效率，采用温度控制、离心和澄清等技术，确保了活性酶的活性和稳定性，同时利用亲和层析材料或离子交换层析材料进行分离和富集，得到高纯度的活性酶溶液，适用于大规模生产和应用，具有广阔的市场前景，解决了传统的血灵芝提取方法存在着效率低、活性酶易受到热、酸和碱等因素影响的问题，限制了活性酶的使用，同时活性酶纯度不够高的问题。
附图说明
图1为本发明流程框图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例一：
请参阅图1，本实施例中的一种血灵芝提取活性酶的制备方法，包括以下步骤：
1)采集新鲜血灵芝，并进行清洗和切碎；
2)将步骤1)中切碎的血灵芝放入缓冲液中进行浸泡；
3)将步骤2)中的混合物在低温条件下搅拌均匀，加速活性酶的释放；
4)对步骤3)中的溶液进行过滤，以去除残余物质和固体颗粒；
5)对步骤4)中的溶液进行精细处理和澄清；
6)利用亲和层析材料对澄清液中的活性酶进行分离和富集；
7)进行纯化和浓缩，得到纯度较高的活性酶溶液。
步骤2)中的缓冲液为Tris-HCl缓冲液，Tris-HCl缓冲液的浓度为0.1mol/L。
步骤2)中的缓冲液的pH值为8，浸泡时间为4-6小时。
步骤3)中对混合物的搅拌通常采用搅拌桶或者搅拌罐，通过电动方式实现对混合物的搅拌，搅拌时间为15min，搅拌转速为600r/min。
步骤3)中的搅拌温度为2-4摄氏度，步骤4)中对溶液的过滤需要用到滤纸、烧瓶和漏斗，滤纸的孔径为30微米。
步骤5)中的精细处理需要用到离心机，离心机的转速为2000r/min，离心机的离心力为2770g，离心温度为2摄氏度。
步骤6)中的亲和层析材料为Ni-NTA琼脂糖，步骤7)中的纯化方法为离子交换层析技术，纯化步骤需要用到离子交换层析检测仪，离子交换层析检测仪的检测波长为280nm，离子交换层析检测仪的光程为4mm。
步骤7)中的浓缩需要用到旋转浓缩器，旋转浓缩器的转速为4r/min，步骤7)中所得的活性酶溶液需要储存在干燥、阴凉的地方，储存温度为4摄氏度。
本实施例中，制备步骤简单明了，易于操作和扩展应用，通过物理和生物化学技术相结合，大大提高了活性酶的提取效率，采用温度控制、离心和澄清等技术，确保了活性酶的活性和稳定性，同时利用亲和层析材料或离子交换层析材料进行分离和富集，得到高纯度的活性酶溶液，适用于大规模生产和应用，具有广阔的市场前景。
实施例二：
请参阅图1，本实施例中的一种血灵芝提取活性酶的制备方法，包括以下步骤：
1)采集新鲜血灵芝，并进行清洗和切碎；
2)将步骤1)中切碎的血灵芝放入缓冲液中进行浸泡；
3)将步骤2)中的混合物在低温条件下搅拌均匀，加速活性酶的释放；
4)对步骤3)中的溶液进行过滤，以去除残余物质和固体颗粒；
5)对步骤4)中的溶液进行精细处理和澄清；
6)利用亲和层析材料对澄清液中的活性酶进行分离和富集；
7)进行纯化和浓缩，得到纯度较高的活性酶溶液。
步骤2)中的缓冲液为Tris-HCl缓冲液，Tris-HCl缓冲液的浓度为0.1mol/L。
步骤2)中的缓冲液的pH值为8，浸泡时间为5小时。
步骤3)中对混合物的搅拌通常采用搅拌桶或者搅拌罐，通过电动方式实现对混合物的搅拌，搅拌时间为22min，搅拌转速为700r/min。
步骤3)中的搅拌温度为3摄氏度，步骤4)中对溶液的过滤需要用到滤纸、烧瓶和漏斗，滤纸的孔径为40微米。
步骤5)中的精细处理需要用到离心机，离心机的转速为3000r/min，离心机的离心力为2770g，离心温度为3摄氏度。
步骤6)中的亲和层析材料为Ni-NTA琼脂糖，步骤7)中的纯化方法为离子交换层析技术，纯化步骤需要用到离子交换层析检测仪，离子交换层析检测仪的检测波长为280nm，离子交换层析检测仪的光程为4mm。
步骤7)中的浓缩需要用到旋转浓缩器，旋转浓缩器的转速为8r/min，步骤7)中所得的活性酶溶液需要储存在干燥、阴凉的地方，储存温度为6摄氏度。
本实施例中，制备步骤简单明了，易于操作和扩展应用，通过物理和生物化学技术相结合，大大提高了活性酶的提取效率，采用温度控制、离心和澄清等技术，确保了活性酶的活性和稳定性，同时利用亲和层析材料或离子交换层析材料进行分离和富集，得到高纯度的活性酶溶液，适用于大规模生产和应用，具有广阔的市场前景。
实施例三：
请参阅图1，本实施例中的一种血灵芝提取活性酶的制备方法，包括以下步骤：
1)采集新鲜血灵芝，并进行清洗和切碎；
2)将步骤1)中切碎的血灵芝放入缓冲液中进行浸泡；
3)将步骤2)中的混合物在低温条件下搅拌均匀，加速活性酶的释放；
4)对步骤3)中的溶液进行过滤，以去除残余物质和固体颗粒；
5)对步骤4)中的溶液进行精细处理和澄清；
6)利用亲和层析材料对澄清液中的活性酶进行分离和富集；
7)进行纯化和浓缩，得到纯度较高的活性酶溶液。
步骤2)中的缓冲液为Tris-HCl缓冲液，Tris-HCl缓冲液的浓度为0.1mol/L。
步骤2)中的缓冲液的pH值为8，浸泡时间为6小时。
步骤3)中对混合物的搅拌通常采用搅拌桶或者搅拌罐，通过电动方式实现对混合物的搅拌，搅拌时间为30min，搅拌转速为800r/min。
步骤3)中的搅拌温度为4摄氏度，步骤4)中对溶液的过滤需要用到滤纸、烧瓶和漏斗，滤纸的孔径为50微米。
步骤5)中的精细处理需要用到离心机，离心机的转速为4000r/min，离心机的离心力为2770g，离心温度为4摄氏度。
步骤6)中的亲和层析材料为Ni-NTA琼脂糖，步骤7)中的纯化方法为离子交换层析技术，纯化步骤需要用到离子交换层析检测仪，离子交换层析检测仪的检测波长为280nm，离子交换层析检测仪的光程为4mm。
步骤7)中的浓缩需要用到旋转浓缩器，旋转浓缩器的转速为8r/min，步骤7)中所得的活性酶溶液需要储存在干燥、阴凉的地方，储存温度为8摄氏度。
本实施例中，制备步骤简单明了，易于操作和扩展应用，通过物理和生物化学技术相结合，大大提高了活性酶的提取效率，采用温度控制、离心和澄清等技术，确保了活性酶的活性和稳定性，同时利用亲和层析材料或离子交换层析材料进行分离和富集，得到高纯度的活性酶溶液，适用于大规模生产和应用，具有广阔的市场前景。
与现有技术相比，本申请的技术方案具备以下有益效果：
该血灵芝提取活性酶的制备方法，对于血灵芝提取活性酶的制备方法做出了改进，制备步骤简单明了，易于操作和扩展应用，通过物理和生物化学技术相结合，大大提高了活性酶的提取效率，采用温度控制、离心和澄清等技术，确保了活性酶的活性和稳定性，同时利用亲和层析材料或离子交换层析材料进行分离和富集，得到高纯度的活性酶溶液，适用于大规模生产和应用，具有广阔的市场前景，解决了传统的血灵芝提取方法存在着效率低、活性酶易受到热、酸和碱等因素影响的问题，限制了活性酶的使用，同时活性酶纯度不够高的问题。
需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括一个……”限定的要素，并不排除在包括所述要素的过程、方法、物品或者设备中还存在另外的相同要素。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型。
Claims (10)
1.一种血灵芝提取活性酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)采集新鲜血灵芝，并进行清洗和切碎；
2)将步骤1)中切碎的血灵芝放入缓冲液中进行浸泡；
3)将步骤2)中的混合物在低温条件下搅拌均匀，加速活性酶的释放；
4)对步骤3)中的溶液进行过滤，以去除残余物质和固体颗粒；
5)对步骤4)中的溶液进行精细处理和澄清；
6)利用亲和层析材料对澄清液中的活性酶进行分离和富集；
7)进行纯化和浓缩，得到活性酶溶液。
2.根据权利要求1所述的一种血灵芝提取活性酶的制备方法，其特征在于，所述步骤2)中的缓冲液为Tris-HCl缓冲液，所述Tris-HCl缓冲液的浓度为0.1mol/L。
3.根据权利要求1所述的一种血灵芝提取活性酶的制备方法，其特征在于，所述步骤2)中的缓冲液的pH值为8，浸泡时间为4-6小时。
4.根据权利要求1所述的一种血灵芝提取活性酶的制备方法，其特征在于，所述步骤3)中对混合物的搅拌采用搅拌桶或者搅拌罐，通过电动方式实现对混合物的搅拌，搅拌时间为15-30min，搅拌转速为600-800r/min。
5.根据权利要求1所述的一种血灵芝提取活性酶的制备方法，其特征在于，所述步骤3)中的搅拌温度为2-4摄氏度，所述步骤4)中对溶液的过滤采用滤纸，所述滤纸的孔径为30-50微米。
6.根据权利要求1所述的一种血灵芝提取活性酶的制备方法，其特征在于，所述步骤5)中采用离心机进行精细处理，所述离心机的转速为2000-4000r/min，所述离心机的离心力为2770g，离心温度为2-4摄氏度。
7.根据权利要求1所述的一种血灵芝提取活性酶的制备方法，其特征在于，所述步骤6)中的亲和层析材料为Ni-NTA琼脂糖。
8.根据权利要求1所述的一种血灵芝提取活性酶的制备方法，其特征在于，所述步骤7)中的纯化方法为离子交换层析技术，采用离子交换层析检测仪实现，所述离子交换层析检测仪的检测波长为280nm，所述离子交换层析检测仪的光程为4mm。
9.根据权利要求1所述的一种血灵芝提取活性酶的制备方法，其特征在于，所述步骤7)中采用旋转浓缩器进行浓缩，所述旋转浓缩器的转速为4-12r/min。
10.根据权利要求1所述的一种血灵芝提取活性酶的制备方法，其特征在于，所述步骤7)中所得的活性酶溶液储存在干燥、阴凉的地方，储存温度为4-8摄氏度。
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