CN117085056A - 天山雪莲提取物的制备方法及其产品和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及植物有效成分提取技术领域，尤其涉及一种天山雪莲提取物的制备方法及其产品和应用。本发明提供了一种天山雪莲提取物的制备方法及其产品和应用。所述方法在制备天山雪莲提取物时，采用复合酶酶解和微波提取相结合的方式，使天山雪莲中的活性成分在更短的时间内充分高效溶出，得到的天山雪莲提取液中功能性活性成分的含量相较更高，功效表现良好。利用本发明提供的方法制备得到的天山雪莲提取物颜色浅，气味淡，对细菌(尤其是金黄色葡萄球菌)的抑菌作用明显，适合用于妇科相关产品，具有良好的推广应用前景。

Description

天山雪莲提取物的制备方法及其产品和应用
技术领域
本发明涉及植物有效成分提取技术领域，尤其涉及一种天山雪莲提取物的制备方法及其产品和应用。
背景技术
天山雪莲是维吾尔医药中的常用民族药，为菊科植物天山雪莲Saussureainvolucrata的干燥地上部分。天山雪莲能够在海拔3000m左右，常年积雪不化/气候严寒的雪峰生长，有着极强的生命力，特殊的生长环境使其天然而稀有，并造就其独特神奇的药理作用。天山雪莲作为药用植物，在民间习用已久，具有温肾助阳，祛风胜湿，通经活血的功效，用于风寒湿痹痛、类风湿性关节炎，小腹冷痛，月经不调，白带过多等。
阴道炎为妇科高发疾病，具有流行范围广、病原菌种类多等特点，患者多伴有不同程度的白带异常及外阴不适等，对患者身心健康及生活质量造成了极大影响。当前临床常见的阴道炎类型包括滴虫性阴道炎、霉菌性阴道炎及细菌性阴道炎等，有研究表明，金黄色葡萄球菌和大肠杆菌是引起细菌性阴道炎的主要致病菌，白色念珠菌是引起霉菌性阴道炎的主要致病菌。
市面上用于细菌性阴道炎的妇科相关产品通常添加化学抑菌成分，对皮肤刺激作用较强，不够温和。部分产品中添加中药成分，或是通过简单的煎煮获得，提取物颜色深、气味重，抑菌效果不明显；或是直接使用中药粉末，产品性状及功效等方面的表现均不理想。
有鉴于此，特提出本发明。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明提供了一种天山雪莲提取物的制备方法及其产品和应用。利用本发明提供的方法制备得到的天山雪莲提取物颜色浅，气味淡，具有抑菌作用；尤其是对金黄色葡萄球菌的抑菌作用明显，适合在妇科相关产品中加以应用。
具体的，本发明的技术方案如下：
第一方面，本发明提供了一种天山雪莲提取物的制备方法，包括：以天山雪莲为原料，依次经复合酶酶解、微波提取、大孔树脂分离纯化，得到天山雪莲提取液；所述复合酶包括纤维素酶和蛋白酶；所述纤维素酶和蛋白酶的质量比为1-2:1-2；所述复合酶酶解的pH值为5.5-7.0；所述微波提取的功率为250-350W；所述微波提取的时间为5-12min；所述大孔树脂分离纯化依次包括蒸馏水洗脱除杂和乙醇溶液洗脱收集的步骤；所述乙醇溶液的浓度为65％-75％。
本发明所述方法在制备天山雪莲提取物时，采用复合酶酶解和微波提取相结合的方式，使天山雪莲中的活性成分在更短的时间内充分高效溶出，得到的天山雪莲提取液中功能性活性成分的含量相较更高，功效表现良好。同时，本发明所述方法结合大孔树脂对提取物料进行分离纯化，使制得的天山雪莲提取物颜色浅，气味淡，杂质少，功能性活性成分的纯度更高，抑菌效果更好。
本发明以天山雪莲为原料。
在本发明中，所述天山雪莲优选经干燥处理。本发明对所述干燥的工艺步骤及条件参数不作特别限定，本领域常用于药材干燥的工艺步骤及条件参数均可。将该干燥处理后的天山雪莲用于后续酶解及微波提取，获得的提取物纯度更高，且功效表现相较更好。
在本发明中，所述天山雪莲在酶解前，优选经粉碎处理。本发明对所述粉碎的工艺步骤及条件参数不作特别限定，本领域常用于药材粉碎的工艺步骤及条件参数均可。粉碎后得到天山雪莲粉末，所述天山雪莲粉末的规格优选为过40目筛。该规格的天山雪莲粉末的酶解时间更短，提取效果更好。
本发明以天山雪莲为原料，先进行复合酶酶解处理。
在本发明中，所述复合酶包括纤维素酶和蛋白酶；所述纤维素酶和蛋白酶的质量比为1-2:1-2；优选为1-1.2:1-1.2；更优选为1:1。上述优选比例的复合酶功效成分溶出更为彻底，效果最好。本发明对所述纤维素酶和蛋白酶的来源不作特别限定，本领域常规市售来源的生物活性酶均可。
进一步的，在本发明所述复合酶酶解过程中，复合酶的添加量优选为0.15％-0.25％，更优选为0.2％。所述复合酶酶解的pH值优选为5.5-6.5，更优选为6.0；温度优选为35-45℃，更优选为40℃；时间优选为1.5-2.5h，更优选为2h。上述优选的复合酶酶解反应条件有助于提升提取物的抑菌功效。
在本发明中，所述复合酶酶解后进行灭酶处理。所述灭酶处理优选通过煮沸的方式进行，所述煮沸的时间优选为8-15min，更优选为10-12min。
在本发明更为优选的具体实施方式中，所述复合酶酶解的步骤优选包括：取干燥的天山雪莲粉碎，过40目筛，称取一定量(如100g)天山雪莲粉末，加入10倍的水，用柠檬酸和磷酸氢二钠缓冲液调节pH为6.0，向其中加入0.2％的复合酶(纤维素酶和蛋白酶比例1：1)，保温40℃，酶解反应2h，结束后煮沸10min进行灭酶。
复合酶酶解处理后，进行微波提取。
在本发明中，所述微波提取的功率优选为250-350W，更优选为290-310W，更优选为300W；所述微波提取的时间优选为5-12min，更优选为8-12min，更优选为10min。
微波提取后，进行大孔树脂分离纯化，得到天山雪莲提取液。
在本发明中，所述大孔树脂分离纯化依次包括蒸馏水洗脱除杂和乙醇溶液洗脱收集的步骤。其中，所述蒸馏水洗脱除杂的蒸馏水用量优选为2-4倍柱体积，更优选为3倍柱体积；所述乙醇溶液洗脱收集的乙醇溶液浓度为65％-75％，优选为68％-72％，更优选为70％；所述乙醇溶液洗脱手机的乙醇溶液用量优选为2-4倍柱体积，更优选为3倍柱体积。
在本发明中，所述大孔树脂的规格优选为D101大孔树脂。相较于其他规格的大孔树脂，D101大孔树脂的分离纯化效果更好，获得的提取液中功能性活性成分含量更高，抑菌效果好。
进一步的，在本发明更为具体的实施方式中，所述天山雪莲提取物的制备方法包括：以天山雪莲为原料，依次经复合酶酶解、微波提取、大孔树脂分离纯化，得到天山雪莲提取液；还包括：将所述天山雪莲提取液进行减压浓缩和冷冻干燥处理，得到天山雪莲提取物。
本发明对所述减压浓缩和冷冻干燥处理的具体工艺步骤及参数不作特别限定，本领域常规用于药材提取加工的减压浓缩和冷冻干燥处理工艺步骤和参数均可。
第二方面，本发明提供了一种天山雪莲提取物，所述天山雪莲提取物由前述天山雪莲提取物的制备方法制得。
本发明提供的天山雪莲提取物具有颜色浅、气味淡的优点，对细菌(尤其是金黄色葡萄球菌)的抑菌作用明显，适合在妇科相关产品中加以应用。1％添加量的所述天山雪莲提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌的10min抑菌率≥99％。
第三方面，本发明提供了所述天山雪莲提取物的制备方法，或者所述天山雪莲提取物在制备抑菌产品中的应用。
优选的，所述抑菌产品包括用于妇科阴道炎症的抑菌产品。
有益效果：
本发明提供了一种天山雪莲提取物的制备方法及其产品和应用。所述方法在制备天山雪莲提取物时，采用复合酶酶解和微波提取相结合的方式，使天山雪莲中的活性成分在更短的时间内充分高效溶出，得到的天山雪莲提取液中功能性活性成分的含量相较更高，功效表现良好。利用本发明提供的方法制备得到的天山雪莲提取物颜色浅，气味淡，对细菌(尤其是金黄色葡萄球菌)的抑菌作用明显，适合用于妇科相关产品，具有良好的推广应用前景。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。若未特别指明，实施例中所使用的实验方法均为常规方法；所用的材料、试剂等均可从商业途径得到。
实施例1
本实施例提供了一种天山雪莲提取物的制备方法，包括如下步骤：
取干燥的天山雪莲，粉碎，过40目筛。称取100g天山雪莲粉末，加入10倍的水，用柠檬酸和磷酸氢二钠缓冲液调节pH为6.0，向其中加入0.2％的复合酶(纤维素酶和蛋白酶比例1：1)，保温40℃，酶解反应2h，结束后煮沸10min进行灭酶。之后进行微波提取，微波功率300W，时间9min，提取结束后过滤，提取液浓缩，上D101大孔树脂柱，先用3倍柱体积的蒸馏水进行洗脱，后用3倍柱体积的70％的乙醇进行洗脱，收集乙醇洗脱液，减压进行浓缩，后经冷冻干燥，获得雪莲提取物。
实施例2
本实施例提供了一种天山雪莲提取物的制备方法，包括如下步骤：
取干燥的天山雪莲，粉碎，过40目筛。称取100g天山雪莲粉末，加入10倍的水，用柠檬酸和磷酸氢二钠缓冲液调节pH为6.0，向其中加入0.22％的复合酶(纤维素酶和蛋白酶比例1：1)，保温40℃，酶解反应2.5h，结束后煮沸10min进行灭酶。之后进行微波提取，微波功率300W，时间10min，提取结束后过滤，提取液浓缩，上D101大孔树脂柱，先用3倍柱体积的蒸馏水进行洗脱，后用3倍柱体积的70％的乙醇进行洗脱，收集乙醇洗脱液，减压进行浓缩，后经冷冻干燥，获得雪莲提取物。
实施例3
本实施例提供了一种天山雪莲提取物的制备方法，包括如下步骤：
取干燥的天山雪莲，粉碎，过40目筛。称取100g天山雪莲粉末，加入10倍的水，用柠檬酸和磷酸氢二钠缓冲液调节pH为6.5，向其中加入0.2％的复合酶(纤维素酶和蛋白酶比例1：1)，保温42℃，酶解反应2h，结束后煮沸10min进行灭酶。之后进行微波提取，微波功率300W，时间9min，提取结束后过滤，提取液浓缩，上D101大孔树脂柱，先用3倍柱体积的蒸馏水进行洗脱，后用3倍柱体积的65％的乙醇进行洗脱，收集乙醇洗脱液，减压进行浓缩，后经冷冻干燥，获得雪莲提取物。
实施例4
本实施例提供了一种天山雪莲提取物的制备方法，包括如下步骤：
取干燥的天山雪莲，粉碎，过40目筛。称取100g天山雪莲粉末，加入10倍的水，用柠檬酸和磷酸氢二钠缓冲液调节pH为6.0，向其中加入0.15％的复合酶(纤维素酶和蛋白酶比例1：1)，保温40℃，酶解反应2h，结束后煮沸10min进行灭酶。之后进行微波提取，微波功率350W，时间12min，提取结束后过滤，提取液浓缩，上D101大孔树脂柱，先用3倍柱体积的蒸馏水进行洗脱，后用3倍柱体积的70％的乙醇进行洗脱，收集乙醇洗脱液，减压进行浓缩，后经冷冻干燥，获得雪莲提取物。
实施例5
本实施例提供了一种天山雪莲提取物的制备方法，包括如下步骤：
取干燥的天山雪莲，粉碎，过40目筛。称取100g天山雪莲粉末，加入10倍的水，用柠檬酸和磷酸氢二钠缓冲液调节pH为5.5，向其中加入0.2％的复合酶(纤维素酶和蛋白酶比例1：1)，保温40℃，酶解反应2.5h，结束后煮沸10min进行灭酶。之后进行微波提取，微波功率300W，时间9min，提取结束后过滤，提取液浓缩，上D101大孔树脂柱，先用3倍柱体积的蒸馏水进行洗脱，后用3倍柱体积的75％的乙醇进行洗脱，收集乙醇洗脱液，减压进行浓缩，后经冷冻干燥，获得雪莲提取物。
实施例6
本实施例提供了一种天山雪莲提取物的制备方法，包括如下步骤：
取干燥的天山雪莲，粉碎，过40目筛。称取100g天山雪莲粉末，加入10倍的水，用柠檬酸和磷酸氢二钠缓冲液调节pH为7.0，向其中加入0.2％的复合酶(纤维素酶和蛋白酶比例1：1)，保温35℃，酶解反应2h，结束后煮沸10min进行灭酶。之后进行微波提取，微波功率250W，时间9min，提取结束后过滤，提取液浓缩，上D101大孔树脂柱，先用3倍柱体积的蒸馏水进行洗脱，后用3倍柱体积的70％的乙醇进行洗脱，收集乙醇洗脱液，减压进行浓缩，后经冷冻干燥，获得雪莲提取物。
对比例1
本对比例提供了一种天山雪莲提取物的制备方法，包括如下步骤：
取干燥的天山雪莲，粉碎，过40目筛。称取100g天山雪莲粉末，加入10倍的水，用柠檬酸和磷酸氢二钠缓冲液调节pH为6.0，向其中加入0.1％的复合酶(纤维素酶和蛋白酶比例1：1)，保温40℃，酶解反应2h，结束后煮沸10min进行灭酶。之后进行微波提取，微波功率500W，时间2min，提取结束后过滤，提取液浓缩，上D101大孔树脂柱，先用3倍柱体积的蒸馏水进行洗脱，后用3倍柱体积的70％的乙醇进行洗脱，收集乙醇洗脱液，减压进行浓缩，后经冷冻干燥，获得雪莲提取物。
对比例2
本对比例提供了一种天山雪莲提取物的制备方法，包括如下步骤：
取干燥的天山雪莲，粉碎，过40目筛。称取100g天山雪莲粉末，加入10倍的水，用柠檬酸和磷酸氢二钠缓冲液调节pH为6.0，向其中加入0.2％的复合酶(纤维素酶和蛋白酶比例1：1)，保温30℃，酶解反应2h，结束后煮沸10min进行灭酶。之后进行微波提取，微波功率300W，时间15min，提取结束后过滤，提取液浓缩，上D101大孔树脂柱，先用3倍柱体积的蒸馏水进行洗脱，后用3倍柱体积的90％的乙醇进行洗脱，收集乙醇洗脱液，减压进行浓缩，后经冷冻干燥，获得雪莲提取物。
对比例3
本对比例提供了一种天山雪莲提取物的制备方法，包括如下步骤：
取干燥的天山雪莲，粉碎，过40目筛。称取100g天山雪莲粉末，加入10倍的水，用柠檬酸和磷酸氢二钠缓冲液调节pH为4.0，向其中加入0.4％的复合酶(纤维素酶和蛋白酶比例1：1)，保温40℃，酶解反应2h，结束后煮沸10min进行灭酶。之后进行微波提取，微波功率300W，时间9min，提取结束后过滤，提取液浓缩，上D101大孔树脂柱，先用3倍柱体积的蒸馏水进行洗脱，后用3倍柱体积的55％的乙醇进行洗脱，收集乙醇洗脱液，减压进行浓缩，后经冷冻干燥，获得雪莲提取物。
对比例4
本对比例提供了一种天山雪莲提取物的制备方法，包括如下步骤：
取干燥的天山雪莲，粉碎，过40目筛。称取100g天山雪莲粉末，加入10倍的水，用柠檬酸和磷酸氢二钠缓冲液调节pH为6.0，向其中加入0.2％的复合酶(纤维素酶和蛋白酶比例1：1)，保温50℃，酶解反应4h，结束后煮沸10min进行灭酶。之后进行微波提取，微波功率100W，时间9min，提取结束后过滤，提取液浓缩，上D101大孔树脂柱，先用3倍柱体积的蒸馏水进行洗脱，后用3倍柱体积的70％的乙醇进行洗脱，收集乙醇洗脱液，减压进行浓缩，后经冷冻干燥，获得雪莲提取物。
实验例1
本实验例对实施例1-6和对比例1-4制备的天山雪莲提取物的抑菌作用进行测试。
测试方法如下：
测试菌种：金黄色葡萄球菌(ATCC 6538)，大肠杆菌(8099)，白色念珠菌(ATCC10231)。
菌悬液制备：取菌种24h新鲜斜面培养物，用5ml灭菌PBS洗下，稀释配置成含菌量为104-105cfu/ml的菌悬液备用。
抑菌实验：在无菌试管中加入4.5ml含量为1％的雪莲提取物溶液与0.5ml菌悬液，混匀，作用10min。将试管中的样液分别取1ml接种于2个无菌平皿中，倒入融化后冷却至45℃的营养琼脂培养基，或沙氏琼脂培养基(白色念珠菌)，混匀，冷却后于37℃培养箱中培养48h(细菌)或72h(白色念珠菌)，计数。用无菌蒸馏水代替药液做相同处理，作为阳性对照。所有试验重复三次，计算平均抑菌率，计算公式为：抑菌率(％)＝(对照平均菌落数-被试药液平均菌落数)/对照平均菌落数×100％。
测试结果如表1所示：
表1抑菌测试结果
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，便于具体和详细地理解本发明的技术方案，但并不能因此而理解为对发明专利保护专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。

Claims (10)

1.天山雪莲提取物的制备方法，其特征在于，包括：以天山雪莲为原料，依次经复合酶酶解、微波提取、大孔树脂分离纯化，得到天山雪莲提取液；所述复合酶包括纤维素酶和蛋白酶；所述纤维素酶和蛋白酶的质量比为1-2:1-2；所述复合酶酶解的pH值为5.5-7.0；所述微波提取的功率为250-350W；所述微波提取的时间为5-12min；所述大孔树脂分离纯化依次包括蒸馏水洗脱除杂和乙醇溶液洗脱收集的步骤；所述乙醇溶液的浓度为65％-75％。
2.根据权利要求1所述天山雪莲提取物的制备方法，其特征在于，在所述复合酶酶解过程中，复合酶的添加量为0.15％-0.25％。
3.根据权利要求1或2所述天山雪莲提取物的制备方法，其特征在于，所述复合酶酶解的温度为35-45℃，时间为1.5-2.5h。
4.根据权利要求1所述天山雪莲提取物的制备方法，其特征在于，所述大孔树脂的规格为D101大孔树脂。
5.根据权利要求1-4任意一项所述天山雪莲提取物的制备方法，其特征在于，所述天山雪莲为过40目筛的天山雪莲粉末。
6.根据权利要求1-5任意一项所述天山雪莲提取物的制备方法，其特征在于，得到天山雪莲提取液后，还包括：将所述天山雪莲提取液进行减压浓缩和冷冻干燥处理，得到天山雪莲提取物。
7.天山雪莲提取物，其特征在于，所述天山雪莲提取物由权利要求1-6任意一项所述天山雪莲提取物的制备方法制得。
8.根据权利要求7所述天山雪莲提取物，其特征在于，1％添加量的所述天山雪莲提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌或白色念珠菌的10min抑菌率≥99％。
9.权利要求1-6任意一项所述天山雪莲提取物的制备方法，或者权利要求7或8所述天山雪莲提取物在制备抑菌产品中的应用。
10.根据权利要求9所述应用，其特征在于，所述抑菌产品包括用于妇科阴道炎症的抑菌产品。
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