CN117065036A - 一种碳化钒包裹多柔比星的纳米制剂及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及纳米药物技术领域，特别是涉及一种碳化钒包裹多柔比星的纳米制剂及其应用。碳化钒包裹多柔比星的纳米制剂包括碳化钒纳米片以及多柔比星；所述多柔比星被包裹在所述碳化钒纳米片中。制备方法为方法一或方法二；方法一包括以下步骤：将V2C纳米片与多柔比星和PBS缓冲液混合溶解后，涡旋、超声，得到所述碳化钒包裹多柔比星的纳米制剂。方法二包括以下步骤：将泊洛沙姆溶解于PBS缓冲液中，得到泊洛沙姆溶液；将V2C纳米片与多柔比星和泊洛沙姆溶液混合溶解后，涡旋、超声，得到所述碳化钒包裹多柔比星的纳米制剂。本发明通过将多柔比星包裹在二维纳米材料碳化钒中，提高多柔比星对肿瘤细胞的致死率，降低其对正常细胞的毒性。

Description

一种碳化钒包裹多柔比星的纳米制剂及其应用
技术领域
本发明涉及纳米药物技术领域，特别是涉及一种碳化钒包裹多柔比星的纳米制剂及其应用。
背景技术
癌症是全球人类死亡的主要原因之一，其中，乳腺癌被认为占所有估计的新癌症病例的30％。研究表明，参与肿瘤细胞增殖、侵袭、转移和凋亡的几个基因的表观遗传变化可导致乳腺癌，并且这些变化不伴有基因序列的变化。因此，它们被认为是基因表达的可逆变化。不幸的是，传统的癌症治疗，如化疗、免疫疗法和放疗，具有细胞选择性，疗效有限，增加了对正常和健康组织的风险。
多柔比星(Dox)是一种蒽环类抗生素，适用于多种恶性肿瘤。作为一线抗癌疗法之一，Dox在多种类型的癌症中具有临床活性，包括乳腺癌、卵巢癌、肺癌和肝癌、霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤。长期使用Dox这种抗癌药物具有心脏毒性等副作用。因此有必要建立一种提高肿瘤细胞致死率，降低正常细胞毒性副作用的新型药物递送系统。
发明内容
基于上述内容，本发明提供一种碳化钒包裹多柔比星的纳米制剂及其应用，通过将多柔比星包裹在二维纳米材料碳化钒中，提高多柔比星对肿瘤细胞(比如人乳腺癌细胞)的致死率，降低其对正常细胞的毒性。
为实现上述目的，本发明提供了如下方案：
本发明技术方案之一，一种碳化钒包裹多柔比星的纳米制剂，包括碳化钒纳米片以及多柔比星；所述多柔比星被包裹在所述碳化钒纳米片中；所述多柔比星与所述碳化钒纳米片的质量比为2.5:1。
本发明技术方案之二，一种上述的碳化钒包裹多柔比星的纳米制剂的制备方法，制备方法为方法一或方法二；
所述方法一包括以下步骤：
将V2C纳米片与多柔比星和PBS缓冲液混合溶解后，涡旋、超声，得到所述碳化钒包裹多柔比星的纳米制剂；
所述方法二包括以下步骤：
将泊洛沙姆溶解于PBS缓冲液中，得到泊洛沙姆溶液；
将V2C纳米片与多柔比星和泊洛沙姆溶液混合溶解后，涡旋、超声，得到所述碳化钒包裹多柔比星的纳米制剂。
本发明技术方案之三，上述的碳化钒包裹多柔比星的纳米制剂在制备抗肿瘤药物中的应用。
本发明公开了以下技术效果：
(1)碳化钒(V2C)具有很好的生物相容性，可以被酶生物降解。本发明构建的二维纳米材料碳化钒纳米片包裹多柔比星的纳米制剂，提高了多柔比星的利用率；碳化钒作为光热剂在近红外808nm波长下实现光热转换，同时通过被动靶向，促进多柔比星在肿瘤细胞的蓄积和释放；本发明利用二维纳米材料碳化钒纳米片包裹多柔比星，提高了多柔比星对肿瘤细胞的杀伤率；
(2)多柔比星为广谱的抗癌药物，本发明将碳化钒包裹多柔比星的纳米制剂制备成溶液(实施例2)或者凝胶剂型(实施例3)，溶液剂型能够进入全身各部位，具有缓释特点；而凝胶剂型能够被动固定在肿瘤部位(避免药物在其他部分的扩散)。本发明构建的溶液剂型以及凝胶剂型的碳化钒包裹多柔比星的纳米制剂，一方面可避免药物的过早释放，另一方面可提高多柔比星的载药量，改善多柔比星的生物利用度且避免多柔比星释放在健康部位，对抗肿瘤药物与纳米生物医药领域的应用结合提供了依据与方向；
(3)本发明碳化钒包裹多柔比星的纳米制剂的制备方法，具有工艺简单、产率高的特点，最终产物的溶剂为水，没有毒性，对环境友好，可实现低成本大规模生产；
(4)本发明的碳化钒包裹多柔比星的纳米制剂具有集成的、无创的、靶向的和生物相容、近红外响应特点。本发明涉及的光热效应治疗策略，可实现药物的被动靶向与释放，克服了肿瘤药物对正常细胞毒害较大的缺点，同时具有良好的生物相容性，为设计肿瘤药物递送载体提供了新的方法与思路；
(5)本发明提供的二维纳米材料碳化钒包裹多柔比星的纳米制剂有望在疾病治疗方向作为药物递送策略使用。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为实施例1-3制备的V2C纳米片、V2C-Dox、V2C-Dox@Gel的表征图；其中，A为V2C和V2C-Dox的粒径；B为V2C和V2C-Dox的zeta电位；C为V2C的透射电镜图像；D为V2C的HRTEM图像；E为V2C-Dox的HRTEM图像；F为V2C的EDS元素映射图像；G为凝胶和V2C-Dox@Gel在不同温度下的透明度；H为基于温度范围透明度差异的水凝胶LCST估计；I为水凝胶G'和G”模量的频谱；J为凝胶Gel在不同扫描频率下的粘度变化；K为V2C-Dox@Gel在不同扫描频率下的粘度变化；L为凝胶Gel和V2C-Dox@Gel的动态应变扫描；M为凝胶的SEM图像；N为V2C-Dox@Gel的SEM图像。
图2为实施例1制备的V2C纳米片、实施例2制备的V2C-Dox的安全性评估图；其中A为红细胞溶血试验；B为MDA-MB-231细胞活性；C为MCF-7细胞活性；D为血糖检测结果；E为血脂检测结果；F为离子检测结果；G为肝功能检查结果；H为常规血液检查结果。
图3为实施例2制备的V2C-Dox进入细胞自发产生荧光图。
图4为实施例1制备的V2C纳米片、实施例2制备的V2C-Dox在近红外激光联合应用下的抑制细胞生长图；其中，A为MDA-MB-231细胞在指定时间内的细胞活力；B为集落形成效率；C为细胞凋亡率。
图5为实施例1制备的V2C纳米片、实施例2制备的V2C-Dox在近红外激光联合应用下的抑制细胞转移图；其中A为MDA-MB-231细胞的划痕图；B为迁移率；C为细胞的迁移图；D为细胞迁移数量图。
图6为实施例1-3制备的V2C纳米片、V2C-Dox、V2C-Dox@Gel在近红外激光联合应用下的动物体内抑制肿瘤作用图；其中A为肿瘤生长大小曲线图；B为肿瘤大小图；C为Ki67染色图；D为Ki67统计图。
具体实施方式
现详细说明本发明的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本发明的限制，而应理解为是对本发明的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
应理解本发明中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本发明。另外，对于本发明中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值，以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本发明内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。
除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本发明仅描述了优选的方法和材料，但是在本发明的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。
在不背离本发明的范围或精神的情况下，可对本发明说明书的具体实施方式做多种改进和变化，这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本发明的说明书得到的其他实施方式对技术人员而言是显而易见的。本发明说明书和实施例仅是示例性的。
关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等，均为开放性的用语，即意指包含但不限于。
本发明中所述的“％”，如无特殊说明，均表示质量百分数。
本发明中所述的“室温”，如无特殊说明，均表示20-30℃。
本发明第一方面提供一种碳化钒包裹多柔比星的纳米制剂，包括碳化钒纳米片以及多柔比星；所述多柔比星被包裹在所述碳化钒纳米片中；所述多柔比星被与所述碳化钒纳米片的质量比为2.5:1。
上述多柔比星被与所述碳化钒纳米片的质量比变小，多柔比星的载药率较低；质量比变大，载体减少，影响光热效果及药效。
在本发明中，所述碳化钒包裹多柔比星的纳米制剂的剂型包括溶液或凝胶。
本发明第二方面提供一种上述的碳化钒包裹多柔比星的纳米制剂的制备方法，制备方法为方法一或方法二；
所述方法一包括以下步骤：
将V2C纳米片与多柔比星和PBS缓冲液混合溶解后，涡旋、超声，得到所述碳化钒包裹多柔比星的纳米制剂；
所述方法二包括以下步骤：
将泊洛沙姆溶解于PBS缓冲液中，得到泊洛沙姆溶液；
将V2C纳米片与多柔比星和泊洛沙姆溶液混合溶解后，涡旋、超声，得到所述碳化钒包裹多柔比星的纳米制剂。
在本发明中，所述方法一中，所述V2C纳米片与多柔比星和PBS缓冲液的质量体积比为1mg:2.5mg:2mL。
在本发明中，所述方法二中，所述泊洛沙姆溶液中泊洛沙姆的浓度为200mg/mL；所述V2C纳米片与多柔比星和泊洛沙姆溶液的质量体积比为1mg:2.5mg:2mL。所述泊洛沙姆为泊洛沙姆407。
在本发明中，所述方法一以及所述方法二中，涡旋的时间为2min；超声具体为冰浴超声30min；PBS缓冲液的pH值7.2。
在本发明中，所述方法一以及所述方法二中，所述V2C纳米片的制备方法包括以下步骤：
将V2AlC加入到HF溶液中刻蚀，之后离心，所得沉淀与TPAOH溶液混合搅拌，离心纯化，得到所述V2C纳米片。
在本发明中，HF溶液为浓HF溶液；所述刻蚀过程具体为搅拌72h；所述离心后还包括洗涤所得沉淀直至上清液的pH值不小于5.0的步骤；所述混合搅拌的温度为室温，时间为24h；所述离心纯化后还包括用氩气脱气、用水冲洗的步骤。
采用上述方法一得到的碳化钒包裹多柔比星的纳米制剂的剂型为溶液，采用上述方法二得到的碳化钒包裹多柔比星的纳米制剂的剂型为凝胶。
本发明第三方面提供上述的碳化钒包裹多柔比星的纳米制剂在制备抗肿瘤药物中的应用。
在本发明中，所述抗肿瘤药物包括但不限于化疗药物、靶向治疗药物、内分泌治疗药物以及抗肿瘤血管生成药物等。在本发明更优选的实施方式中，所述抗肿瘤药物为抗乳腺癌药物。
有效的药物递送的一个重要特征是能够避免治疗药物的过早释放。碳化钒(V2C)纳米是一种良好的光吸收剂，具有出色的光热转换能力；同时V2C具有很好的生物相容性，可以被酶生物降解；V2C还具有较大的载药能力。因此，本发明V2C包封Dox可以调节Dox药物活性成分的扩散。在近红外光辐射下，碳化钒包裹多柔比星的纳米制剂能够将光转化为热能，实现药物的被动靶向肿瘤并促进药物释放，同时具有良好的生物相容性。
本发明的碳化钒包裹多柔比星的纳米制剂可避免药物的过早释放，提高多柔比星的生物利用度。碳化钒包裹多柔比星的纳米制剂可作为光热剂在近红外808nm波长下实现光热转换，同时实现多柔比星在肿瘤(比如乳腺癌肿瘤)中的蓄积和释放，且凝胶剂型可避免多柔比星释放在健康组织。本发明以裸鼠作为体内评价的动物模型，对碳化钒包裹多柔比星的纳米制剂的安全性进行系统的评价。结果证明碳化钒包裹多柔比星的纳米制剂在正常状态下不会对细胞产生毒副作用，近红外808nm波长下有效抑制肿瘤生长和转移。本发明提供的碳化钒包裹多柔比星的纳米制剂的制备、生产工艺简单，产率高，效果强，安全性好，对环境友好，可实现低成本大规模生产。
本发明实施例中涉及到的材料，如无特殊说明，均可通过市售途径获得。
本发明实施例中所用V2AlC粉末、HF溶液、TPAOH(四丙基氢氧化铵)、泊洛沙姆407均购自国药化学试剂有限公司；多柔比星购自阿拉丁生物科技有限公司；MCF-10A(人正常乳腺上皮细胞)、MCF-7(人乳腺癌细胞)和MDA-MB-231(人乳腺癌细胞)细胞均购自AmericanType Culture Collection Catalogue。
本发明实施例中所用PBS缓冲液的pH值为7.2。
实施例1二维V2C纳米片的制备
将1克V2AlC粉末在室温下缓慢加入到30mL 50％的浓HF溶液中，同时用磁棒搅拌72h，通过HF蚀刻去除V2AlC中的Al层后，将悬浮液以2292×g离心10分钟，用蒸馏水循环洗涤3次500×g离心10分钟所得沉淀，直到上清液的pH值达到5.0以上，获得大块沉淀，并在室温下与40mL的质量浓度80％TPAOH水溶液搅拌混合24h。最终，通过离心纯化V2C，并用氩气(Ar)脱气，蒸馏水冲洗三次以去除残留的TPAOH，然后以1467×g离心50分钟，收集胶体上清液，即可得到V2C纳米片分散液。
实施例2V2C包裹多柔比星的纳米制剂的制备
将实施例1中得到的V2C纳米片分散液先离心，得到V2C纳米片，用PBS缓冲液洗涤三次，然后用PBS缓冲液稀释至V2C纳米片浓度为480μg/mL，得到V2C纳米片分散液。Dox用PBS缓冲液溶解至浓度为1.2mg/mL，得到Dox溶液。将2mLDox溶液加入到2mLV2C纳米片分散液中，涡旋2分钟，冰浴超声30分钟，即可得到剂型为溶液的V2C包裹多柔比星的纳米制剂(V2C-Dox)，放于4℃冰箱备用。
实施例3V2C包裹多柔比星的纳米制剂的制备
称取2克泊洛沙姆407，加入10mL的PBS缓冲液中，放置冰箱溶胀12h，得到200mg/mL的泊洛沙姆407溶液(即空白凝胶Gel)。实施例1制备的V2C纳米片分散液先离心，用上述泊洛沙姆407溶液洗涤三次，然后用泊洛沙姆407溶液稀释至V2C纳米片浓度为480μg/mL得到V2C纳米片分散液。Dox用泊洛沙姆407溶液溶解至浓度为1.2mg/mL的Dox溶液。将2mLDox溶液加入到2mLV2C纳米片分散液中，涡旋2分钟，冰浴超声30分钟，即可得到剂型为凝胶的V2C包裹多柔比星的纳米制剂(V2C-Dox@Gel)，放于4℃冰箱备用。
效果例1
实施例1-3制备的V2C纳米片(简称V2C)、V2C-Dox、V2C-Dox@Gel的形态表征描述使用ZetasizerNano ZS90系统(英国马尔文仪器)测量粒度分布和zeta电位。使用扫描电子显微镜(SEM)观察冻干空白凝胶Gel及V2C-Dox@Gel的形貌。透射电子显微镜(TEM)图像使用FEI Tecnai G2仪器获得。使用FEI Tecnai G2 F30仪器获得高分辨率TEM(HRTEM)图像。对V2C进行相应的元素映射成像。使用流变仪分析凝胶(V2C-Dox@Gel)的流变特性，对空白凝胶Gel和V2C-Dox@Gel进行剪切稀化试验，剪切速率为0.1-100s-1，应变范围为0.01-100％，检测水凝胶的储能模量(G')和损耗模量(G)。结果如图1所示。
图1中，A为V2C和V2C-Dox的粒径；B为V2C和V2C-Dox的zeta电位；C为V2C的透射电镜图像；D为V2C的HRTEM图像；E为V2C-Dox的HRTEM图像；F为V2C的EDS元素映射图像；G为空白凝胶Gel和V2C-Dox@Gel在不同温度下的透明度；H为基于温度范围透明度差异的水凝胶LCST估计；I为空白凝胶Gel G'和G”模量的频谱；J为空白凝胶Gel在不同扫描频率下的粘度变化；K为V2C-Dox@Gel在不同扫描频率下的粘度变化；L为空白凝胶Gel和V2C-Dox@Gel的动态应变扫描；M为空白凝胶Gel的SEM图像；N为V2C-Dox@Gel的SEM图像。由图1能够看出，测量了V2C和V2C-Dox的粒径(图1中A)和zeta电位(图1中B)。动态光散射(DLS)实验表明，负载Dox的V2C的平均流体直径为194.77±4.82nm，而负载Dox的V2C的平均流体直径为202.90±5.16nm。此外，V2C的ζ电位测量值为-22.05±1.13mV，而V2C-Dox的zeta电位为4.47±0.33mV，表明Dox的成功加载。为了进一步分析V2C的形态特征和大小，进行了TEM(图1中C)；观察到的V2C和V2C-Dox纳米片的尺寸与DLS分析的结果一致。随后的HRTEM观察表明，V2C和V2C-Dox具有层状晶体结构，晶格条纹分别为0.241nm和0.252nm(图1中D-E)。能量色散光谱(EDS)映射显示，V2C纳米片的表面覆盖着元素C和V(图1中F)。随后研究了水凝胶透明度的温度依赖性，空白凝胶Gel和V2C-Dox@Gel的低临界溶液温度(LCST)分别为22.5℃和22.2℃(图1中G-H)。频率扫描测试显示了空白凝胶Gel G'和G“模量的频率依赖性。G'和G“均随角频率的增加而增加，G'超过G”，表明形成稳定的固体水凝胶(图1中I)。使用静态剪切速率扫描测试所制备凝胶的剪切稀化性能，空白凝胶Gel和V2C-Dox@Gel的粘度在0.1–100s-1的剪切速率范围内降低(图1中J-K)。这表明两种凝胶具有优异的剪切稀化性能，适用于原位肿瘤注射。此外，在应变变化范围内，空白凝胶Gel与V2C-Dox@Gel的G'大于G“(图1中L)，表明凝胶具有弹性并且其结构没有损坏。空白凝胶Gel和V2C-Dox@Gel冻干后进行SEM测试，通过SEM评估凝胶的内部形貌，两种冻干凝胶显示出均匀且相互连接的多孔结构(图1中M-N)。这些结果表明V2C-Dox和V2C-Dox@Gel制备成功。
效果例2
实施例1制备的V2C、实施例2制备的V2C-Dox的安全性评估
采用不同浓度的V2C以及V2C-Dox(与V2C浓度等量)处理人红细胞后，红细胞没有溶血，表明无激光照射条件下V2C和V2C-Dox是无毒性的(图2中A所示)。此外，本发明用0.58μg/mL的Dox、0.24μg/mLV2C以及V2C-Dox(等量Dox和V2C)处理乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7，孵育12、24、48、72、96小时后采用CCK8法测定细胞活力。结果如图2中B-C所示(图2中的Con表示空白对照组)，V2C和V2C-Dox不影响乳腺癌细胞增殖能力，表明在无激光照射条件下V2C和V2C-Dox是安全无毒性的。另外，本发明进一步在动物上评估V2C和V2C-Dox的安全性。用V2C和V2C-Dox处理动物后，收集血液标本检测血糖(图2中D所示)、血脂(图2中E所示)、离子(图2中F所示)、肝功能指标(图2中G所示)和血细胞(图2中H所示)，发现无激光照射条件下V2C和V2C-Dox都没有影响这些指标的变化，进一步说明V2C和V2C-Dox是安全无毒性的。综上所述，正常条件下，V2C-Dox纳米载体安全性良好，对细胞和动物都没有毒副作用。
效果例3
实施例2制备的V2C-Dox能够被细胞摄取进入细胞内
将乳腺癌细胞MDA-MB-231接种于六孔板上，待细胞密度达到70％时，加入V2C-Dox，孵育24小时后，在荧光倒置显微镜下观察自发荧光现象，如图3所示(图3中的Con表示空白对照组)，结果显示V2C-Dox处理的MDA-MB-231细胞有荧光表达，表明V2C-Dox能被摄取进入细胞内，进一步发挥其作用。
效果例4
PTT治疗下，实施例2制备的V2C-Dox抑制肿瘤生长和转移作用
用CCK8法分析PTT治疗下V2C-Dox对细胞的增殖作用：取乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7接种于96孔板，加入Dox(0.58μg/mL)、V2C(0.24μg/mL)、V2C-Dox(0.58μg/mL)并进行激光照射，处理不同时间(24h、48h、72h)，加入10μLCCK8试剂培养一个小时后，测定450nm各孔吸光度值并求得抑制率。其次还通过Colony formation实验分析PTT治疗下V2C-Dox对细胞的增殖作用：MDA-MB-231细胞接种于6孔板内，加入Dox(0.58μg/mL)、V2C(0.24μg/mL)、V2C-Dox(0.58μg/mL)并进行激光照射，孵育两周后，拍照并计算克隆形成率。此外，本发明采用AnnexinV-PI双染法检测PTT治疗下V2C-Dox对细胞凋亡的影响：Dox(0.58μg/mL)、V2C(0.24μg/mL)、V2C-Dox(0.58μg/mL)分别处理乳腺癌细胞24小时，收集细胞加入AnnexinV和PI室温避光染色，流式细胞仪分析凋亡率。结果如图4所示，PTT作用下V2C-Dox明显地抑制肿瘤生长(图4中A和B)和诱导其凋亡(图4中C)。图4中Con表示空白对照组，V2C+L表示加入V2C后激光照射组，V2C-Dox+L表示加入V2C-Dox后激光照射组。
为了评估PTT治疗下V2C-Dox对肿瘤细胞迁移的影响，本发明进行了Woundhealing实验：将长至80-90％的MDA-MB-231细胞进行划痕，加入Dox(0.58μg/mL)、V2C(0.24μg/mL)、V2C-Dox(0.58μg/mL)处理并进行激光照射，24h后进行观察细胞迁移能力(图5中A-B)。此外，还进行了Migration实验进一步评估PTT治疗下V2C-Dox对细胞迁移的影响：取对数生长期的MDA-MB-231细胞接种于Transwell小室中，加入Dox(0.58μg/mL)、V2C(0.24μg/mL)、V2C-Dox(0.58μg/mL)处理并进行激光照射，12h后计算迁移率(图5中C-D)。由图5能够看出，PTT作用下V2C-Dox具有明显地抑制肿瘤转移作用。图5中Con表示对照组，V2C+L表示加入V2C后激光照射组，V2C-Dox+L表示加入V2C-Dox后激光照射组。
以上结果表明，V2C-Dox+Laser(即V2C-Dox+L)在具备良好兼容性的情况下，比单独的Dox具有更明显的肿瘤细胞杀伤作用，且不对其他正常细胞及其器官产生细胞毒性作用。
效果例5
PTT治疗下，实施例1-3制备的V2C、V2C-Dox、V2C-Dox@Gel抑制乳腺癌动物种植瘤生长作用
每只小鼠注射107个MDA-MB-231细胞，成瘤后进行瘤内注射Dox、V2C、V2C-Dox、V2C-Dox@Gel，并进行激光照射。隔天监测肿瘤大小并绘制肿瘤生长曲线，十五天后，处死小鼠，对肿瘤切片后进行免疫组化，观察增殖指标Ki67表达。结果如图6所示，V2C-Dox、V2C-Dox@Gel在PTT作用下时，明显抑制小鼠乳腺癌肿瘤的生长(图6中A-B)，同时抑制肿瘤Ki67表达(图6中C-D)。图中Con表示对照组，V2C+Laser表示加入V2C后激光照射组，V2C-Dox+Laser表示加入V2C-Dox后激光照射组，V2C-Dox@Gel+Laser表示加入V2C-Dox@Gel后激光照射组。
以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。

Claims (8)

1.一种碳化钒包裹多柔比星的纳米制剂，其特征在于，包括碳化钒纳米片以及多柔比星；所述多柔比星被包裹在所述碳化钒纳米片中；所述多柔比星与所述碳化钒纳米片的质量比为2.5:1。
2.根据权利要求1所述的碳化钒包裹多柔比星的纳米制剂，其特征在于，所述碳化钒包裹多柔比星的纳米制剂的剂型为溶液或凝胶。
3.一种权利要求1或2所述的碳化钒包裹多柔比星的纳米制剂的制备方法，其特征在于，制备方法为方法一或方法二；
所述方法一包括以下步骤：
将V2C纳米片与多柔比星和PBS缓冲液混合溶解后，涡旋、超声，得到所述碳化钒包裹多柔比星的纳米制剂；
所述方法二包括以下步骤：
将泊洛沙姆溶解于PBS缓冲液中，得到泊洛沙姆溶液；
将V2C纳米片与多柔比星和泊洛沙姆溶液混合溶解后，涡旋、超声，得到所述碳化钒包裹多柔比星的纳米制剂。
4.根据权利要求3所述的碳化钒包裹多柔比星的纳米制剂的制备方法，其特征在于，所述方法一中，所述V2C纳米片与多柔比星和PBS缓冲液的质量体积比为1mg:2.5mg:2mL。
5.根据权利要求3所述的碳化钒包裹多柔比星的纳米制剂的制备方法，其特征在于，所述方法二中，所述泊洛沙姆溶液中泊洛沙姆的浓度为200mg/mL；所述V2C纳米片与多柔比星和泊洛沙姆溶液的质量体积比为1mg:2.5mg:2mL。
6.根据权利要求3所述的碳化钒包裹多柔比星的纳米制剂的制备方法，其特征在于，所述方法一以及所述方法二中，涡旋的时间为2min；超声具体为冰浴超声30min。
7.根据权利要求3所述的碳化钒包裹多柔比星的纳米制剂的制备方法，其特征在于，所述方法一以及所述方法二中，所述V2C纳米片的制备方法包括以下步骤：
将V2AlC加入到HF溶液中刻蚀，之后离心，所得沉淀与TPAOH溶液混合搅拌，离心纯化，得到所述V2C纳米片。
8.如权利要求1或2所述的碳化钒包裹多柔比星的纳米制剂在制备抗肿瘤药物中的应用。
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