CN117064850B

CN117064850B - 一种甲氨蝶呤注射液及其制备方法

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Publication number: CN117064850B
Application number: CN202311030265.1A
Authority: CN
Inventors: 何东; 常慧; 冯少敏
Original assignee: Hainan Choitec Pharmaceutical Co ltd
Current assignee: Hainan Choitec Pharmaceutical Co ltd
Priority date: 2023-08-16
Filing date: 2023-08-16
Publication date: 2024-05-03
Anticipated expiration: 2043-08-16
Also published as: CN117064850A

Abstract

本发明提供一种甲氨蝶呤注射液及其制备方法，涉及药物制剂领域。该甲氨蝶呤注射液的制备方法，包括以下步骤：(1)取终量70～75％v/v注射用水于配液罐中，加入处方量氯化钠，搅拌溶解后，加入处方量甲氨蝶呤，搅拌，得混悬液；(2)称取氢氧化钠，用终量9～11％v/v注射用水溶解，制成氢氧化钠溶液，放冷；(3)将步骤(2)氢氧化钠溶液转移至步骤(1)混悬液中，使甲氨蝶呤完全溶解，得中间体溶液；(4)调节中间体溶液pH值至7.5～8.0搅拌均匀；(5)加注射用水至终量，搅拌均匀，得药液；(6)药液经灭菌处理；(7)将灭菌后的药液灌装于西林瓶中，充氮；(8)压塞，密封。采用本发明的制备方法，有效降低关键杂质含量，提高注射液稳定性及安全性。

Description

一种甲氨蝶呤注射液及其制备方法

技术领域

本发明涉及药物制剂领域，特别涉及一种甲氨蝶呤注射液及其制备方法。

背景技术

甲氨蝶呤，是一种叶酸还原酶抑制剂，主要抑制二氢叶酸还原酶而使二氢叶酸不能还原成有生理活性的四氢叶酸，从而使嘌呤核苷酸和嘧啶核苷酸的生物合成过程中一碳基团的转移作用受阻，导致DNA的生物合成受到抑制。此外，本品也有对胸腺核苷酸合成酶的抑制作用，但抑制RNA与蛋白质合成的作用则较弱，本品主要作用于细胞周期的S期，属细胞周期特异性药物，对G1/S期的细胞也有延缓作用，对G1期细胞的作用较弱。

CN115501180A公开一种甲氨蝶呤脂肪乳注射剂及其制备方法，该注射液是由如下重量百分比的成分组成：1％-5％甲氨蝶呤、5％-25％植物油、2％-10％甘油、1％-3％蛋黄卵磷脂、0.01％-0.1％氢氧化钠、60％-85％注射用水。该方法在制备中植物油、甘油、蛋黄卵磷脂，分别配制油相、水相，再制备初乳、精乳，制备过程加0.1M氢氧化钠溶液调节pH至8.5-9.5，还采用121℃旋转灭菌12-30分钟。该方法制得产品总杂含量高，而且引入植物油、甘油、蛋黄卵磷脂，增加不可控风险，增加了药品隐患。CN113633610A公开一种甲氨蝶呤注射液及其制备方法，该注射液的组成为：甲氨蝶呤0.5％-5％(w/v)，稳定剂0.005％-0.5％(w/v)，抑菌剂0.5％-1.5％(w/v)，pH调节剂适量，使得pH范围为7-9.0，余量为注射用水。该方法在制备中加入稳定剂(依地酸钙钠)、抑菌剂等，而且其pH范围为7-9.0，导致其产品实际生产杂质B、杂质C含量偏高。

甲氨蝶呤注射液生产过程，杂质B、杂质C、杂质E作为关键控制杂质。发明人旨在降低甲氨蝶呤注射液中杂质B、杂质C等关键杂质含量，更好地保障药品生产质量，具有重要意义。

发明内容

鉴于此，本发明提出一种甲氨蝶呤注射液及其制备方法，有效降低杂质B、杂质C等关键杂质含量，而且稳定性良好。

本发明的技术方案是这样实现的：

一种甲氨蝶呤注射液的制备方法，包括以下步骤：

(1)取终量70～75％v/v注射用水于配液罐中，所述注射用水的温度≤35℃，加入处方量氯化钠，搅拌溶解后，加入处方量甲氨蝶呤，搅拌，得混悬液，所述混悬液的存放温度≤35℃；

(2)称取氢氧化钠，用终量9～11％v/v注射用水溶解，制成氢氧化钠溶液，放冷；

(3)将步骤(2)氢氧化钠溶液转移至步骤(1)混悬液中，使甲氨蝶呤完全溶解，得中间体溶液；

(4)使用pH值调节剂调节中间体溶液pH值至7.5～8.0搅拌均匀，调节过程控制中间体溶液的温度为19～21℃，在该温度下、无pH缓冲体系情况下更好精准调控pH值；

(5)加注射用水至终量，搅拌均匀，得药液；

(6)药液经灭菌处理；

(7)将灭菌后的药液灌装于西林瓶中，充氮；

(8)压塞，密封。

本发明先加入氯化钠和甲氨蝶呤制备甲氨蝶呤混悬液，后加入氢氧化钠溶液，有效避免团聚现象发生，使甲氨蝶呤充分、快速溶解，缩短溶解时间，而且提高其配液的稳定性。

优选地，每毫升甲氨蝶呤注射液中含甲氨蝶呤24.5～25.5mg、氯化钠4.85～4.95mg。更优选地，每毫升甲氨蝶呤注射液中含甲氨蝶呤25mg、氯化钠4.9mg。

优选地，步骤(1)中，所述注射用水的温度30±2℃，所述混悬液的存放温度30±2℃；步骤(3)中，搅拌过程控制温度30±2℃，控制上述配液温度，能够进一步降低杂质B、C等关键杂质含量。

优选地，步骤(2)中，所述氢氧化钠溶液的浓度为4～5％(w/v)，使甲氨蝶呤完全溶解，制得良好的中间体溶液。

优选地，步骤(4)中，所述pH值调节剂为0.5～1.5mol/L的氢氧化钠溶液。

优选地，步骤(1)，所述注射用水的温度25～35℃，所述混悬液的存放温度25～35℃。

优选地，步骤(3)中，控制温度≤40℃。

优选地，步骤(3)中，将步骤(2)氢氧化钠溶液转移至内置有步骤(1)混悬液的超声波微波组合反应系统中，微波频率为2400～2500MHz，超声频率为20～30KHz，采用超声波协同微波工艺处理40～60s。本发明采用超声波协同微波技术，使得甲氨蝶呤混悬液与氢氧化钠溶液反应更加彻底，减少杂质残留，而且形成更为稳定体系，所制的甲氨蝶呤注射液不但杂质B、C含量低，稳定性较为良好。

优选地，步骤(6)中，所述灭菌处理采用过滤除菌，过滤滤膜材质为聚醚砜微孔滤膜或聚偏氟乙烯微孔滤膜，规格为0.22μm。采用本发明除菌工艺，不会对药液中活性成分产生吸附，而且降低除菌环节增加杂质含量的风险，进一步提高除菌效能。

优选地，步骤(7)中，灌装后顶空充氮至残氧量<8％，更优选<4％。

优选地，步骤(7)中，所述西林瓶为中硼硅玻璃瓶且未覆膜；步骤(8)，压塞使用的胶塞材质为注射液用覆乙烯四氟乙烯共聚物膜溴化丁基橡胶塞，采用该组件具有良好的相容性，更加利于长期存储。

一种甲氨蝶呤注射液的制备方法，由本发明任一项所述的方法制得。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

(1)采用本发明的制备方法，不但保障甲氨蝶呤的稳定，而且有效降低杂质B、杂质C等关键杂质的含量，还降低杂质K、杂质L等杂质含量，而且本发明处方工艺重现性、稳定性良好，质量可控，有效提高药物安全性，更好保障其有效性；本发明还缩短了工序时间，提高了生产效率。

(2)本发明先制备甲氨蝶呤混悬液、后加入氢氧化钠溶液，有效避免团聚现象发生，使甲氨蝶呤充分、快速溶解，缩短溶解时间，减少杂质产生，而且提高其配液的稳定性。

(3)本发明采用超声波协同微波技术，在较短的时间内使得甲氨蝶呤混悬液与氢氧化钠溶液反应更加彻底，减少杂质残留，而且形成更为稳定体系，所制的甲氨蝶呤注射液不但杂质B、C含量低，含量接近100％，稳定性较为良好。

(4)本发明控制初始加水量，不但能够降低杂质C等有关物质残留，而且较好地缩短原辅料的溶解时间，提高药液的稳定性。

(5)本发明中间体溶液优选pH值为7.8～8.2，进一步降低有关物质总杂，有助提高产品质量。

(6)本发明制备工艺简单，可控制性高，而且工序周期短，生产效率高，能够更好满足放大生产要求。

具体实施方式

为了更好理解本发明技术内容，下面提供具体实施例，对本发明做进一步的说明。

本发明实施例所用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

本发明实施例所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

本发明实施例均按照以下处方比例进行配制：

表1处方表

名称	每毫升	厂家
			甲氨蝶呤	25mg	湖州展望药业有限公司
氯化钠	4.9mg	江苏省勤奋药业有限公司
			氢氧化钠	适量	湖南尔康制药股份有限公司
注射用水	至1ml	--

实施例1

一种甲氨蝶呤注射液的制备方法，包括以下步骤：

(1)取终量70％v/v注射用水(30℃±2℃)于配液罐中，加入处方量氯化钠，搅拌溶解后，加入处方量甲氨蝶呤，搅拌，得混悬液，该混悬液存放温度30℃±2℃；

(2)称取氢氧化钠，用终量10％v/v注射用水溶解，制成浓度为4.4％(w/v)的氢氧化钠溶液，放冷；

(3)将步骤(2)氢氧化钠溶液转移至步骤(1)混悬液中，搅拌，控制温度≤40℃，使甲氨蝶呤完全溶解，得中间体溶液；

(4)用1mol/L氢氧化钠溶液调节中间体溶液pH值至8.0±0.2，温度控制在20℃±1℃，搅拌均匀；

(5)加注射用水至终量，搅拌均匀，得药液；

(6)药液经0.22μm聚醚砜(PES)微孔滤膜滤过除菌；

(7)将灭菌后的药液灌装于西林瓶中，灌装后顶空充氮至充氮，残氧量<8％；

(8)压塞，密封，制得甲氨蝶呤注射液，每毫升甲氨蝶呤注射液中含甲氨蝶呤25mg、氯化钠4.9mg。

采用实施例1的工艺制备样品，各项指标均符合质量标准要求。

其中，有关物质照高效液相色谱法(中国药典2020年版四部通则0512)测定。

缓冲液称取柠檬酸8.7g与无水磷酸氢二钠17.9g,加适量水溶解，并定容至1000ml。

流动相A为乙腈-缓冲液(v/v)＝45:955；

流动相B为乙腈；

溶剂为流动相A；

稀氨水取氨水适量，加水稀释至体积浓度为45％(v/v)的氨水溶液。

供试品溶液精密量取本品适量，加溶剂稀释制成每1ml约含甲氨蝶呤0.1mg的溶液。

对照品溶液取甲氨蝶呤对照品适量，精密称定，加约0.2％量瓶体积的稀氨水及约4％量瓶体积的溶剂使溶解，并加溶剂稀释制成每1ml约含甲氨蝶呤0.2μg的溶液。

灵敏度溶液精密量取对照品溶液适量，加溶剂稀释制成每1ml约含甲氨蝶呤0.05μg的溶液。

杂质D储备液取杂质D对照品适量，精密称定，加约0.2％量瓶体积的稀氨水及约4％量瓶体积的溶剂使溶解，并加溶剂稀释制成每1ml中约含杂质D1μg的溶液。

系统适用性溶液取甲氨蝶呤对照品适量，精密称定，加约0.2％量瓶体积的稀氨水及约4％量瓶体积的溶剂使溶解，同时加杂质D储备液适量，并加溶剂稀释制成每1ml中约含甲氨蝶呤和杂质D分别为0.1mg和0.2μg的溶液。

色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充柱(BDS Hypersil C18,250mm×4.6mm,5μm)；以磷酸盐缓冲溶液(取无水磷酸氢二钠和柠檬酸分别17.9g和8.7g,加水1000ml使溶解)-乙腈＝955:45为流动相A,乙腈为流动相B,按下表进行

梯度洗脱；流速为1.5ml/min；检测波长为265nm；柱温为35℃；进样体积为20μl。

表2梯度洗脱程序

系统适用性要求系统适用性溶液色谱图中，出峰顺序依次为杂质D和甲氨蝶呤，两者分离度不小于2.0；对照品溶液色谱图中，甲氨蝶呤峰面积相对标准偏差不得大于5.0％；灵敏度溶液色谱图中，甲氨蝶呤峰信噪比(S/N)不得小于10。

测定法精密量取供试品溶液与对照品溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。

限度供试品溶液色谱图中如有杂质峰，按乘以校正因子的主成分外标法计算，各杂质相对保留时间、校正因子及限度见下表。

表3相对保留时间、校正因子及限度表

【含量测定】照高效液相色谱法(中国药典2020年版四部通则0512)测定

缓冲液称取柠檬酸7.8g与无水磷酸氢二钠17.9g,加适量水溶解后定容至1000ml。

流动相为乙腈-缓冲液(v/v)＝7:93

溶剂为流动相

稀氨水取氨水适量，加水稀释至体积浓度为45％(v/v)的氨水溶液。(或者直接用市售稀氨水溶液)

对照品溶液取甲氨蝶呤对照品适量，精密称定，加0.2％量瓶体积的稀氨水及约4％量瓶体积的溶剂使溶解，并加溶剂稀释制成每1ml约含甲氨蝶呤0.1mg的溶液。

系统适用性溶液取甲氨蝶呤对照品适量，精密称定，加约0.2％量瓶体积的稀氨水及约4％量瓶体积的溶剂使溶解，同时加杂质D储备液适量，并加溶剂稀释制成每1ml约含甲氨蝶呤和杂质D分别为0.1mg和0.2μg的溶液。

色谱条件用十八烷基硅烷健合硅胶为填充柱(BDS Hypersil C18,250mm×4.6mm,5μm)；以磷酸盐缓冲溶液(取无水磷酸氢二钠和柠檬酸分别17.9g和7.8g,加水1000ml使溶解)-乙腈＝93:7为流动相；流速为每分钟1.2ml；检测波长为302nm；柱温为25℃；进样体积20μl；运行时间约为主峰保留时间的2倍。

系统适用性要求系统适用性溶液色谱图中，出峰顺序依次为杂质D和甲氨蝶呤，两者分离度不小于2.0；对照品溶液色谱图中，甲氨蝶呤峰面积相对标准偏差不得大于2.0％。

测定法精密量取供试品溶液与对照品溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法以峰面积计算。

采用实施例1的工艺制备3批样品，检测结果如表4所示，三批样品检测结果无明显差异，表明本发明所开发的处方工艺重现性良好。其中，杂质K、杂质L、杂质B、杂质C含量均低于参比制剂，尤其杂质C含量仅为参比制剂杂质C含量的18％。

表4甲氨蝶呤注射液三批与参比制剂检测结果

将本品结果与英美药典标准进行对比，对比表如下表5：

实施例2

与实施例1主要1区别在于，步骤(2)中，初始加水量调整为75％。采用与实施例1同一批号原料药进行试验。以药液的性状、pH值、有关物质、原料药溶解时间为考察指标。结果显示，实施例5各项指标结果与实施例1无明显差异。

实施例3

采用的过滤除菌工艺。除菌过滤器与药液可能发生相互作用，一方面会影响除菌过滤器的除菌过滤效能，另一方面可能对药液中活性成分产生吸附。考察不同滤膜材质的影响。

与实施例1主要1区别在于，步骤(6)，药液经0.22μm聚偏氟乙烯(PVDF)微孔滤膜滤过除菌。采用与实施例1同一批号原料药进行试验。以药液的性状、pH值、含量、有关物质为考察指标，结果显示，实施例4的结果与实施例1无显著差异。但PES滤膜过滤效率更高，成本更低。

对比研究例1-关于加料顺序研究

加料顺序可能影响原辅料溶解时间，从而影响药液稳定性。

本对比研究例与实施例1主要区别在于，先加入氢氧化钠，后加入甲氨蝶呤、氯化钠，具体为：取终量70％的水，先加入氢氧化钠，搅拌溶解后依次加入甲氨蝶呤、氯化钠，搅拌至溶解后，调节pH值至8.0±0.2，定重。采用与实施例1同一批号原料药进行试验。

结果显示，该配制过程中观察到原料药加入后团聚的现象，使得原料药溶解变慢，溶解时间20min，远大于实施例1的溶解时间(4.7min)，而且杂质含量有所增加。

对比研究例2-关于pH值研究

USP、BP收载本品的质量标准，成品pH范围为7.0～9.0；CP、JP、BP收载了注射用甲氨蝶呤质量标准，成品复溶后pH范围为7.0～9.0。

本对比研究例-与实施例1主要区别在于，步骤(4)中，用1mol/L氢氧化钠溶液调节中间体溶液pH值至7.0或9.0。采用与实施例1同一批号原料药进行试验。

结果显示，其有关物质总杂均明显提高；pH值为7.0时，其有关物质总杂提高16.7％以上，pH值为9.0时，其有关物质总杂提高22.2％以上。

对比研究例3-关于初始加水量研究

初始加水量影响原辅料的溶解时间，从而可能影响药液的稳定性。

本对比研究例与实施例1主要区别在于，步骤(2)中，初始加水量调整为60％。采用与实施例1同一批号原料药进行试验。其他处理与实施例1一致。

结果显示，相比实施例1，其有关物质总杂明显提高，尤其杂质C含量增加明显。

对比研究例4-关于中间体配液温度研究

配液温度可能影响原辅料的溶解时间，而且可能影响产品的关键质量属性。

本对比研究例与实施例1主要区别在于，步骤(3)中，控制温度为60℃，考察0h、8h与24h的稳定性。采用与实施例1同一批号原料药进行试验。

结果显示，当配液温度为60℃时，相比实施例1，其杂质B、杂质C含量明显偏高，而且随存放时间的推移逐渐增大。

对比研究例5-关于灭菌工艺研究

一般湿热灭菌工艺是首先考虑的灭菌方法。注射剂的湿热灭菌工艺应首选过度杀灭法，即F0(标准灭菌时间)值大于等于12分钟的灭菌工艺；对热不稳定的药物，可以选择残存概率法，即F0值大于等于8分钟的灭菌工艺。

本对比研究例-与实施例1主要区别在于，步骤(6)中，未采用过滤除菌，而采用121℃分别灭菌8min、12min、15min。采用与实施例1同一批号原料药进行试验。

结果显示，灭菌后样品性状、pH值无明显变化，有关物质显著升高，且有关物质随着灭菌时间的延长增加。

实施例6

一种甲氨蝶呤注射液的制备方法，包括以下步骤：

(1)取终量70％v/v注射用水(30℃±2℃)于配液罐中，加入处方量氯化钠，搅拌溶解后，加入处方量甲氨蝶呤(批号FI012-230503)，搅拌，得混悬液，该混悬液存放温度30℃±2℃；

(2)称取氢氧化钠，用终量10％v/v注射用水溶解，制成浓度为4～5％(w/v)的氢氧化钠溶液，放冷；

(3)将步骤(1)混悬液置于超声波微波组合反应系统中，将步骤(2)氢氧化钠溶液转移至混悬液中，设定微波频率为2450MHz，超声频率为25KHz，采用超声波协同微波工艺处理50s，控制温度≤40℃，使甲氨蝶呤完全溶解，得中间体溶液；

(5)加注射用水至终量，搅拌均匀，得药液；

(6)药液经0.22μm聚醚砜(PES)微孔滤膜滤过除菌；

本实施例所制的甲氨蝶呤注射液，性状为橙色澄明液体，pH为8.10，含量为100.2％，杂质B含量为0.012％，杂质C含量为0.093％，杂质E未检出，其他总杂(除杂质B、C、E外)含量为0.07％。结果显示，相比实施例1，采用超声波协同微波工艺，进一步降低杂质B、杂质C等有关物质含量。

稳定性研究

将实施例1、实施例6同一批号(FI012-230503)所制的甲氨蝶呤注射液以及参比制剂(FJ4497AB)甲氨蝶呤注射液置于加速条件进行稳定性考察，置于40℃，湿度为75％，放置30天。考察指标包括药液的性状、pH值、有关物质、含量等。与0天结果进行对比，如表6所示。

表6稳定性考察结果(加速条件)

结果显示，实施例1、实施例6所制的甲氨蝶呤注射液具有良好的稳定性，尤其是实施例6所制的甲氨蝶呤注射液的稳定性相对更加良好。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种甲氨蝶呤注射液的制备方法，其特征在于，

配制注射液的处方如下：

名称每毫升

甲氨蝶呤 25mg

氯化钠 4.9mg

氢氧化钠适量

注射用水至1ml；

包括以下步骤：

（1）取终量70~75%v/v注射用水于配液罐中，所述注射用水的温度≤35℃，加入处方量氯化钠，搅拌溶解后，加入处方量甲氨蝶呤，搅拌，得混悬液，所述混悬液的存放温度≤35℃；

（2）称取氢氧化钠，用终量9~11%v/v注射用水溶解，制成氢氧化钠溶液，放冷；所述氢氧化钠溶液的浓度为4~5%(w/v)；

（3）将步骤（2）氢氧化钠溶液转移至步骤（1）混悬液中，控制温度≤40℃，使甲氨蝶呤完全溶解，得中间体溶液；

（4）使用pH值调节剂调节中间体溶液pH值至7.5~8.0 搅拌均匀，调节过程控制中间体溶液的温度为19~21℃；

（5）加注射用水至终量，搅拌均匀，得药液；

（6）药液经灭菌处理；所述灭菌处理采用过滤除菌；

（7）将灭菌后的药液灌装于西林瓶中，充氮；

（8）压塞，密封；

步骤（3）中，将步骤（2）氢氧化钠溶液转移至内置有步骤（1）混悬液的超声波微波组合反应系统中，微波频率为2400~2500MHz，超声频率为20~30KHz，采用超声波协同微波工艺处理40~60s。

2.根据权利要求1所述的一种甲氨蝶呤注射液的制备方法，其特征在于，步骤（1），所述注射用水的温度25~35℃，所述混悬液的存放温度25~35℃。

3.根据权利要求1所述的一种甲氨蝶呤注射液的制备方法，其特征在于，步骤（4）中，所述pH值调节剂为0.5~1.5mol/L的氢氧化钠溶液。

4.根据权利要求1所述的一种甲氨蝶呤注射液的制备方法，其特征在于，步骤（6）中，过滤滤膜材质为聚醚砜微孔滤膜或聚偏氟乙烯微孔滤膜，规格为0.22 μm。

5.根据权利要求1所述的一种甲氨蝶呤注射液的制备方法，其特征在于，步骤（7）中，灌装后顶空充氮后的残氧量<8%。

6.一种甲氨蝶呤注射液，其特征在于，由权利要求1-5任一项所述的制备方法制得。