CN117045572B - 一种抑制皮肤多种类型基质金属蛋白酶功能的组合物及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明属于化妆品技术领域,具体涉及一种抑制皮肤多种类型基质金属蛋白酶功能的组合物及其用途。所述组合物包含以下一种或多种组分:表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)、二氢槲皮素、甘蔗多酚、薏仁粉、人参或高良姜。本发明组合物同时具有抑制皮肤成纤维细胞中多种类型基质金属蛋白酶表达、抑制基质金属蛋白酶活性、提高胶原蛋白含量、抑制弹性蛋白酶作用,并且没有明显的副作用。本发明组合物可用于制备抗皮肤衰老相关的各种化妆品、功能性食品和保健品,具有广阔的应用前景。

Description

一种抑制皮肤多种类型基质金属蛋白酶功能的组合物及其 用途
技术领域
本发明属于化妆品技术领域,具体涉及一种抑制皮肤多种类型基质金属蛋白酶功能的组合物及其用途。
背景技术
肌肤深层组织的衰老与胶原蛋白的流失有着密切的关系,胶原蛋白组成了真皮组织的80%,并形成具有强大锁水能力的网状支撑结构。宏观上看导致胶原蛋白降解的情况有很多,影响因素包括年龄,紫外线,不良的生活习惯和生活压力,环境污染,电子辐射等,这些外在或者内在习惯均会导致胶原蛋白的流失。皮肤中胶原蛋白含量降低会使肌肤出现干燥、粗糙、松弛进而形成皱纹,还会使皮肤毛孔粗大并伴随皮肤光泽感消失、出现色斑等衰老现象。除了胶原蛋白,皮肤中起支撑作用的还有弹性蛋白,皮肤中弹性蛋白的减少会导致皮肤失去弹性,弹性蛋白有助于减缓和减少皮肤下垂,弹性蛋白的损失或缺乏会影响皮肤外观。
基质金属蛋白酶(Matrix metalloproteinase, MMP)是一类含有Zn2+并且依赖于Ca2+的一类酶,可以降解细胞外基质尤其是胶原蛋白,从而导致皮肤衰老。因此,目前主流的观点为MMP会诱发皱纹,松弛皮肤,以及造成微血管的扩张,并且随着年龄的增长,基质金属蛋白酶会日渐增加。已发现人类MMP的25种亚型,按照结构和底物的特异性可分为胶原酶(MMP1,MMP8,MMP13,MMP18),明胶酶(MMP2,MMP9),间质溶解酶(MMP3,MMP10,MMP11),基质溶解因子(MMP7,MMP26)以及膜型基质金属蛋白酶(MMP14,MMP15至MMP17,MMP24,MMP25),除此之外还有其他的MMP(MMP12,MMP19至MMP23,MMP27,MMP28)。
目前针对抑制基质金属蛋白酶功能的研究基本上是基于单一物质,且其大部分是通过高通量筛选实验得到的化学物质。这些化学物质可能普遍存在生产成本较高或者毒副作用较强,不适于作为化妆品或者功能性食品原料使用的问题。
有鉴于此,本发明人通过对大量药食同源物质以及功能性食品原料进行筛选和复配,进而获得了一种同时具有抑制皮肤成纤维细胞中多种类型基质金属蛋白酶表达、抑制基质金属蛋白酶活性、提高胶原蛋白含量、抑制弹性蛋白酶作用的组合物。
发明内容
为了克服现有技术的缺陷以及丰富现有技术,本发明提供了一种同时具有抑制皮肤成纤维细胞中多种类型基质金属蛋白酶表达、抑制基质金属蛋白酶活性、提高胶原蛋白含量、抑制弹性蛋白酶作用的组合物及其用途。
具体地,通过以下几个方面的技术方案实现了本发明:
在第一个方面中,本发明提供了一种抑制皮肤多种类型基质金属蛋白酶功能的组合物,所述组合物包含以下一种或多种组分:表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)、二氢槲皮素、甘蔗多酚、薏仁粉、人参或高良姜。
作为可选的方式,在上述组合物中,所述组合物由以下组分组成:EGCG、二氢槲皮素、甘蔗多酚、薏仁粉、人参和高良姜。
作为可选的方式,在上述组合物中,所述基质金属蛋白酶的类型选自以下一种或多种:MMP1、MMP8、MMP13、MMP18、MMP2、MMP9、MMP3、MMP10、MMP11、MMP7、MMP26、MMP14、MMP15、MMP16、MMP17、MMP24、MMP25、MMP12、MMP19、MMP20、MMP21、MMP22、MMP23、MMP27或MMP28。
作为可选的方式,在上述组合物中,所述基质金属蛋白酶的类型为以下一种或多种:MMP1、MMP2、MMP3或MMP8。
作为可选的方式,在上述组合物中,所述组合物抑制基质金属蛋白酶表达、分泌和/或活化,以及所述组合物促进胶原蛋白分泌,抑制弹性蛋白酶活性。
作为可选的方式,在上述组合物中,EGCG:二氢槲皮素:甘蔗多酚:薏仁粉:人参:高良姜的用量比例范围为(0.2-1.2)μM:(2-10)μM:(0.2-28)μg/mL:(0.01-20)μg/mL:(0.05-2)μg/mL:(0.01-1)μg/mL。
作为可选的方式,在上述组合物中,EGCG:二氢槲皮素:甘蔗多酚:薏仁粉:人参:高良姜的用量比例为0.50 μM:4.00 μM:12.00 μg/mL:8.00 μg/mL:0.80 μg/mL:0.01 μg/mL。
作为可选的方式,在上述组合物中,EGCG:二氢槲皮素:甘蔗多酚:薏仁粉:人参:高良姜的用量比例为0.31 μM:8.34 μM:25.01 μg/mL:16.67 μg/mL:1.67 μg/mL:0.02 μg/mL。
作为可选的方式,在上述组合物中,EGCG:二氢槲皮素:甘蔗多酚:薏仁粉:人参:高良姜的用量比例为1.04 μM:2.50 μM:25.01 μg/mL:16.67 μg/mL:1.67 μg/mL:0.02 μg/mL。
作为可选的方式,在上述组合物中,EGCG:二氢槲皮素:甘蔗多酚:薏仁粉:人参:高良姜的用量比例为1.04 μM:8.34 μM:25.01 μg/mL:5.00 μg/mL:1.67 μg/mL:0.02 μg/mL。
作为可选的方式,在上述组合物中,EGCG:二氢槲皮素:甘蔗多酚:薏仁粉:人参:高良姜的用量比例为1.04 μM:8.335 μM:0.834 μg/mL:0.03 μg/mL:0.167 μg/mL:0.834 μg/mL。
作为可选的方式,在上述组合物中,EGCG:二氢槲皮素:甘蔗多酚:薏仁粉:人参:高良姜的用量比例为0.625 μM:5 μM:0.5 μg/mL:0.02 μg/mL:0.1 μg/mL:0.5 μg/mL。
作为可选的方式,在上述组合物中,EGCG:二氢槲皮素:甘蔗多酚:薏仁粉:人参:高良姜的用量比例为0.5 μM:4 μM:0.4 μg/mL:0.016 μg/mL:0.08 μg/mL:0.4 μg/mL。
作为可选的方式,在上述组合物中,EGCG:二氢槲皮素:甘蔗多酚:薏仁粉:人参:高良姜的用量比例为16.67 μM:20 μM:200 μg/mL:520.83 μg/mL:1.67 μg/mL:0.19 μg/mL。
在第二个方面中,本发明提供了上述第一个方面所述的组合物在制备抗衰老的产品中的用途。
作为可选的方式,在上述用途中,所述抗衰老包括减轻或预防皮肤衰老、细胞衰老或光老化。
作为可选的方式,在上述用途中,所述产品是口服产品或外用产品,所述产品是化妆品、功能性食品、饮料或营养补充剂。
作为可选的方式,在上述用途中,所述产品是口服溶液、液体混悬剂、注射剂、片剂、丸剂、颗粒剂、粉剂、膜剂、胶囊剂、喷雾剂、气雾剂、糖浆剂、饮料、营养品、零食、能量棒、口香糖、糖果、面膜、面霜、精华、乳液、爽肤水或彩妆。
作为可选的方式,在上述用途中,所述产品中还包含化妆品、功能性食品、饮料或营养补充剂中常用的辅料或赋形剂,以重量百分比计,所述组合物在所述产品中的用量是0.5%-20%。
本发明相对于现有技术,具有以下有益效果:
(1)本发明人通过对大量药食同源物质以及功能性食品原料进行筛选和复配,首次获得了一种同时具有抑制皮肤成纤维细胞中多种类型基质金属蛋白酶表达、抑制基质金属蛋白酶活性、提高胶原蛋白含量、抑制弹性蛋白酶作用并且没有明显副作用的组合物。
(2)与现有技术相比,本发明为多个物质的组合配比,相较现有单一物质本发明的组合物具有多种类型MMP(胶原酶、明胶酶、间质溶解酶)的多重靶向作用,表现为对成纤维细胞内MMP1、MMP2、MMP3和MMP8蛋白的表达具有抑制作用,并对MMP2酶活性具有显著抑制作用,对外界刺激模拟的胶原蛋白的降低具有保护作用,同时能够明显抑制皮肤弹性蛋白酶活性。本发明的创新点主要体现在EGCG、二氢槲皮素、薏仁粉、人参、甘蔗多酚和高良姜这六种物质的组合在抑制皮肤弹性蛋白酶活性方面的功能,综合强调了6种物质的多种组合方式对MMP蛋白的抑制、对胶原蛋白流失的保护、对MMP2酶活性的抑制、对弹性蛋白酶的抑制方面的作用,进而强调了上述6种物质的组合在抑制皮肤衰老中的作用。
(3)本发明组合物可用于制备抗皮肤衰老相关的各种化妆品、功能性食品和保健品,具有广阔的应用前景。
附图说明
图1:单一物质对小鼠皮肤成纤维细胞的毒性检测。
图2:几种物质不同的组合配比对小鼠皮肤成纤维细胞的毒性检测。
图3:单一物质和组合配比对多种MMP蛋白表达的抑制率。
图4:单一物质和组合配比对刺激细胞之后分泌的羟脯氨酸含量的影响。
图5:单一物质和组合配比对MMP2酶活性抑制率。
图6:单一物质和组合配比对弹性蛋白酶活性抑制率。
具体实施方式
在上面的发明内容和具体实施方式,以及权利要求书中,提到了本发明的特定特征,应当理解,本发明的说明书中公开了包括这些特定特征的所有可能的组合。例如,当在本发明的特定方面或实施例或特定权利要求中公开了特定特征时,则该特征也可以尽可能的和/或与本发明的其他特定方面和实施方式结合使用。
皮肤衰老是一个复杂的过程。宏观上,皮肤衰老表现为细纹、失去弹性、橘皮或皮肤暗沉、表皮和真皮厚度减少。微观上,皮肤衰老的典型特征包括表皮萎缩、基底角质细胞有丝分裂率降低、增殖能力降低和细胞衰老、真皮细胞外基质萎缩和结缔组织生理特性改变。
以下对于本发明中涉及到的几种活性成分,进行简要说明:
本发明中提供了6种能够抑制MMP功能的物质,并提供了含有上述6种物质中的一种或多种组合的复配方式,上述6种物质组合配比之后对MMP功能抑制作用显著增强。上述6种物质包括药食同源物质薏仁粉,中药药材人参、高良姜,多酚类物质EGCG(Epigallocatechin gallate,表没食子儿茶素没食子酸酯)、甘蔗多酚,以及类黄酮物质二氢槲皮素(Taxifolin)。
如本文所用,“EGCG(Epigallocatechin gallate),表没食子茶素没食子酸酯”,是茶多酚的主要组成成分,由绿茶中分离得到,分子式为C22H18O11,具有抗菌、抗病毒、抗氧化等多种功效。由于EGCG独特的化学结构使其具有十分强的抗氧化作用,对氧自由基的清楚能力极强。EGCG可以抑制透明质酸酶从而抑制透明质酸的降解。EGCG还可以抑制UVA诱导的人皮肤成纤维细胞中基质金属蛋白酶的mRNA表达水平升高。EGCG结构式为:
如本文所用,“二氢槲皮素”,又名栎精,CAS登录号:480-41-1,其化学名称为3,3',4',5,7-五羟基黄酮,化学式为C15H10O7。槲皮素是植物界分布广泛,具有多种生物活性的黄酮醇类化合物。槲皮素在许多食物中也均有发现,如洋葱、苹果、芒果等。另外,约有100多种药用植物(如槐米、侧柏叶、高良姜、款冬花、桑寄生、三七、银杏、接骨木等)中均含有此成分。槲皮素是一种多羟基黄酮类化合物,具有抗氧化及清除自由基的作用。有研究表明槲皮素可以促进人皮肤成纤维细胞的增殖、刺激其分泌胶原及透明质酸,对维持皮肤弹性、减少皮肤皱纹形成、延缓衰老有重要意义。槲皮素无毒性,因此,对癌症、衰老、心血管疾病的治疗和预防有重要意义,具有较大的开发价值。二氢槲皮素结构式为:
如本文所用,“薏仁粉”是一种古老的药食同源物质,薏仁粉主要含丰富的营养素类、维生素和酯类等成分,包括蛋白质、脂肪酸、碳水化合物、糖类、少量维生素B1,亮氨酸、赖氨酸、精氨酸、酪氨酸以及薏苡素、薏苡酯、薏苡内酯、α-β-谷甾醇、三萜等化合物,薏仁粉还富含钙、磷、钾、硒、磷、钠、镁等人体必须微量元素。薏仁粉可预防高血脂症、高血压、中风、心血管疾病以及心脏病。薏仁粉含有丰富的水溶性纤维,可以吸附胆盐,胆盐负责消化脂肪,因此服用薏仁粉之后肠道对脂肪的吸收率变差,进而可以降低血脂、降低血糖。薏仁粉可以促进体内血液和水分的新陈代谢,有利尿、消水肿等作用,并可帮助排便,帮助减轻体重。薏仁粉因富含蛋白质,可以淡化皮肤斑点,使肌肤变得白皙,可饮用也可做成面膜敷脸。但目前暂未有研究表明薏仁粉能够影响皮肤中MMP的功能。
如本文所用,“人参”是五加科植物人参的根,人参含有100种以上的有效成分,适用于元气虚脱,食用人参能够补脾益肺、生津止渴,人参还具有安神的功效。人参中的人参皂苷是最主要的活性物质,具有抗老化、抗感染的作用;加上人参中多糖、矿物质及维生素等营养成分,能有效抵抗胆固醇,帮助新陈代谢,促进皮下微血管的血液循环,并增加皮肤的营养供应等功能,所以人参能延缓皮肤老化,使皮肤看起来红润有光泽。目前有含有人参提取物的护肤产品,其中人参提取物可通过调节人成纤维细胞中MAPK和NF-κB通路来达到抗光老化的作用。人参提取物还具有抗炎的功效,人参提取物还能够活化细胞,显著提高皮肤的含水量和皮肤弹性,减少皮肤皱纹。
如本文所用,“甘蔗多酚”是以甘蔗为原料,经压榨、过滤、提取,且除去多余糖分和盐分后得到甘蔗糖蜜,再以水、乙醇为提取溶剂,经过滤、真空浓缩、离子交换和喷雾干燥等工艺制成的粉体物质;或经过滤、真空蒸馏等工艺制成的液体物质,主要特征成分为总多酚。国家卫生健康委员会2022年第2号公告正式将甘蔗多酚规定为《新食品原料》。甘蔗多酚能够抗氧化,具有较强的抗氧化和清除自由基的作用,甘蔗多酚还能够抗微生物、具有抗炎的功效。甘蔗多酚对皮肤衰老相关酶具有抑制作用,并能够促进胶原蛋白的合成。
如本文所用,“高良姜”是姜科植物高良姜中的根茎,能够调节肠胃功能、养脾温胃,可以用于治疗食欲不振、消化不良。高良姜可以消炎镇痛,还可以抗细菌、真菌。高良姜对人体造血机能具有显著的促进作用。在某些护肤品中添加了高良姜提取物,这种物质具有改善皮肤松弛,提高皮肤弹力的作用。
下面参照具体的实施例对本发明做进一步说明。应当理解,此处所描述的具体实施例仅用于解释本发明,并不用于限定本发明的范围。
实施例中未注明具体技术或条件者,按照本领域内的文献所描述的技术或条件,或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者,均为可通过正规渠道购买得到的常规产品。
下面实施例中的实验方法,如无特殊说明,均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料,如无特殊说明,均为市售产品。
实施例:
由于皮肤中胶原蛋白主要由成纤维细胞产生并分泌,使皮肤更有弹性和韧性,因此本发明应用小鼠皮肤成纤维细胞进行实验,本发明检测了用几种物质处理皮肤成纤维细胞是否能够抑制皮肤成纤维细胞中的MMP蛋白的表达,并依据结果进行物质组合配比再进行皮肤成纤维细胞中MMP蛋白表达抑制作用的检测。
实验材料为C57BL/6J P0代乳鼠,处理方式为去除头尾和四肢,留取躯干,用手术剪刀从小鼠颈部沿臀部剪开,取皮肤组织,用皮肤组织消化液消化皮肤组织,分离获得小鼠皮肤成纤维细胞。
1. 6种物质对小鼠皮肤成纤维细胞毒性检测:
将EGCG(购买自浙江天草生物科技股份有限公司,Lot 202210121),二氢槲皮素(购买自吉林省健维天然生物科技有限公司,Lot 2308002),薏仁粉(购买自黄山华绿元生物科技有限公司,Lot 220318),人参(购买自广东青云山药业有限公司,Lot 20220601),甘蔗多酚(购买自陕西百川康泽生物科技有限公司,Lot BCKZ221109-2)和高良姜(购买自玉林市升鼎聚原生中草药有限公司,Lot 20221216)分别按照下表1中的浓度进行配制。
表1:物质浓度表
另外,对于6种物质进行了不同方式的组合来评价6种物质不同方式的组合对小鼠皮肤成纤维细胞的毒性,具体浓度以及配比方式见下表2。
表2:6种物质组合复配表
在96孔细胞培养板中接种1万个小鼠皮肤成纤维细胞,次日按照表1和表2中方式处理细胞18 h。由于ATP(adenosine-triphosphate,腺嘌呤核苷三磷酸)是细胞内的一种恒定的物质,细胞内源ATP的数量可以反映细胞的活性,因此测定细胞内ATP含量并以此为指标进行以上单一物质以及组合对细胞的毒性的评价。结果如图1和图2所示。选择对皮肤成纤维细胞无毒性或者毒性小于80%的浓度进行后续实验。
2. 6种物质对多种类型的MMP蛋白表达具有抑制作用:
将小鼠皮肤成纤维细胞接种于培养皿中,贴壁培养24 h,设置对照组,模型组选择用阿霉素进行皮肤成纤维细胞MMP蛋白表达升高模型的建立。阿霉素是一种抗生素类药物,化学式为C27H29NO11,通过插入DNA双螺旋并稳定拓扑异构酶II裂解活化复合体来结合核酸,导致在特定阿霉素诱导位点发生DNA链断裂,阿霉素能够抑制RNA和DNA的合成,经常被用来进行细胞损伤或者细胞衰老模型的建立。
实验组按照下表3所示用6种物质的多种浓度处理皮肤成纤维细胞18h。之后收集细胞,提取蛋白,用于WB(Western Blot)。本发明检测了比较全面的多种类型MMP包括胶原酶MMP1、MMP8,明胶酶MMP2,间质溶解酶MMP3。通过与对照组相比可以判断模型组是否建立成功,若模型组与对照组相比MMP蛋白表达明显升高则模型建立成功,反之不成功。同时对比实验组MMP蛋白的表达是否降低,来判断6种物质对MMP蛋白表达是否具有抑制效果。
对6种物质每一种物质由低到高均设置3个浓度,分别进行MMP1、MMP2、MMP3和MMP8蛋白表达量的检测。
结果表明,6种物质对MMP1、MMP2、MMP3和MMP8抑制作用不同。6种物质中某些物质对某些MMP抑制效果较强,对某些MMP抑制效果较弱,6种物质的某些浓度对MMP甚至无抑制效果,见表3数据。对MMP1抑制效果最强的为150 μg/mL甘蔗多酚,对MMP2抑制效果最强的为10 μg/mL人参,对MMP3抑制效果最强的为10 μg/mL人参,对MMP8抑制效果最强的为150 μg/mL甘蔗多酚。
为了评估6种物质对皮肤成纤维细胞中多类型MMP的综合作用,因此选择对每种物质的每一浓度对多个MMP抑制效率进行平均,得出每种物质的最佳抑制浓度。
结果显示在所设计的浓度梯度中6.25 μM EGCG、50 μM二氢槲皮素、100 μg/mL薏仁粉、10 μg/mL人参、150 μg/mL甘蔗多酚、0.125 μg/mL高良姜对MMP蛋白的平均抑制率更高,因此选择这一浓度作为后续实验浓度。
表3:6种物质不同浓度对皮肤成纤维细胞中4个MMP蛋白表达的抑制率
3. 6种物质组合对MMP蛋白表达具有显著地抑制作用:
将小鼠皮肤成纤维细胞接种于培养皿中,设置对照组(Control)和模型组(阿霉素),同时分别加入最适浓度的6种物质(EGCG、二氢槲皮素、薏仁粉、人参、甘蔗多酚和高良姜)并按照下表4中浓度进行复配,之后继续培养18 h,之后收集细胞,提取蛋白,进行WB。通过与模型组相比可以评价以上6种物质的组合对MMP蛋白的表达是否具有抑制作用,以及与单一物质相比组合配比是否具有显著抑制功效。
表4:6种物质组合复配表
对单一物质组以及组合复配两组数据进行正态分布检验以及方差齐性检验之后进行T检验,两组数据相比P值小于0.05,表明有显著性差异,图中用*表示,P值小于0.01表明有极显著性差异,图中用**表示。
结果如图3所示,结果显示6种物质的组合复配对小鼠皮肤成纤维细胞内的MMP1、MMP2、MMP3和MMP8蛋白表达均有明显的抑制作用,且6种物质组合复配组对MMP1、MMP2和MMP3蛋白表达的抑制率较单一物质组具有极显著性,复配组对MMP8蛋白表达与单一物质组相比具有显著性差异。6种物质的几种组合复配中组合3对多种MMP均的抑制效果均强于其他复配方式。并且与广谱性MMP抑制剂GM6001(Med Chem Express,HY-15768)相比本发明组合物的物质复配方式表现出更加明显的抑制作用。
4. 6种单一物质和6种物质的组合对细胞分泌胶原蛋白的影响检测:
将小鼠皮肤成纤维细胞接种于培养皿中,设置对照组(Control)和模型组(阿霉素),同时分别加入6.25 μM EGCG、50 μM二氢槲皮素、100 μg/mL薏仁粉、10 μg/mL人参、150μg/mL甘蔗多酚、0.125 μg/mL高良姜,并按照表4中进行复配,继续培养细胞22 h,取培养基进行细胞分泌胶原蛋白含量的检测。
由于羟脯氨酸是胶原蛋白中的标志性氨基酸,因此选择检测培养基中的羟脯氨酸含量来标定总胶原蛋白的量。结果如图4所示。通过检测发现与对照Control相比模型组(阿霉素,3 μM)细胞分泌到培养基中的胶原蛋白量明显减少,加入EGCG、薏仁粉、人参和高良姜之后,细胞分泌的胶原蛋白量高于模型组,加入6种物质的不同方式的复配之后细胞分泌的胶原蛋白量同样高于模型组,其中组合4、组合5和组合6胶原蛋白含量高于单一物质,将6种物质复配组和单一物质组两组数据进行正态分布和T检验,结果复配组显著高于单药组。表明6种物质复配组合4、组合5和组合6能够显著回复由于刺激导致的细胞分泌胶原蛋白含量的降低,即复配组合4、组合5和组合6能够增强胶原蛋白的含量。
5. 6种单一物质的多种浓度和6种物质的组合对MMP2酶活性抑制作用检测:
以上检测结果证明EGCG、二氢槲皮素、薏仁粉、人参、甘蔗多酚、高良姜6种物质对多种基质金属蛋白酶MMP蛋白的表达均有抑制作用,根据以上结果推测上述6种物质可能对MMP的酶活性具有抑制作用,因此进行了MMP2蛋白酶活性的检测。
对单一物质进行了由低到高不同浓度的检测,验证了单一物质对MMP2酶活性具有不同程度地抑制作用,对6种物质选择合适的浓度进行组合(表5),同时进行单一物质所选浓度的检测。结果如图5所示。结果显示6种物质的3种组合方式对MMP2酶活性具有明显地抑制作用,抑制率高达57%-65%,将复配组与单一物质组数据统计分析,进行数据正态分布检验以及方差齐性检验之后进行T检验,统计P值小于0.01,图中用**表示,表明复配组与单一物质组两组相比复配组对MMP2酶活性抑制效果更加显著。
表5:用于检测MMP2酶活性的6种物质组合配比表
6. 6种单一物质的多种浓度和6种物质的组合对弹性蛋白酶活性抑制作用检测:
弹性蛋白酶(Elastase)也称弹性酶,在分子生物学中是一种来自蛋白酶类的酶,可以分解弹性蛋白。弹性蛋白是一种弹性纤维能够与胶原蛋白一起决定了结缔组织的性能,能够维持皮肤的韧性和紧致程度。在皮肤中胶原蛋白含量高皮肤会变得饱满紧致,但是缺少胶原蛋白之后皮肤会变得没有弹性。本发明检测了6种单一物质和6种物质组合配比之后对弹性蛋白酶活性的影响,进而可以反映皮肤中弹性蛋白的含量。
本发明设计了6种单一物质的不同浓度,检测对弹性蛋白酶的抑制作用,从中选择对弹性蛋白酶抑制作用最强的浓度进行6种物质的组合,作为组合13(EGCG:二氢槲皮素:甘蔗多酚:薏仁粉:人参:高良姜的用量比例为16.67 μM:20 μM:200 μg/mL:520.83 μg/mL:1.67 μg/mL:0.19 μg/mL)。结果如图6所示,实验结果表明,6种物质中对弹性蛋白酶活性抑制较高的浓度为100 μM EGCG、120 μM二氢槲皮素、3125 μg/mL薏仁粉、10 μg/mL人参、1200μg/mL甘蔗多酚、1.125 μg/mL高良姜。6种物质组合之后对弹性蛋白酶活性抑制效果显著高于单一物质,表明本发明中6种物质的组合方式对弹性蛋白酶抑制作用强,能够减少皮肤成纤维细胞中的弹性蛋白的降解(其中阳性抑制剂CAS号:70967-90-7)。
综上所述,通过效果实验能够获得以下结论:(1)本发明组合物在所选用浓度范围内对细胞无毒性;(2)本发明首次发现本发明组合物中的单一物质甘蔗多酚以及二氢槲皮素能够抑制皮肤MMP功能;(3)本发明组合物中的物质组合配比对皮肤成纤维细胞内多种MMP蛋白的表达升高有明显的抑制作用,且强于单一物质;(4)本发明组合物中的物质组合配比对MMP2酶活性具有显著的抑制作用;(5)本发明组合物能够显著抑制由刺激导致的胶原蛋白含量的降低;(6)目前没有文献提到本发明组合物中的EGCG、二氢槲皮素、薏仁粉、人参、甘蔗多酚和高良姜能够抑制皮肤弹性蛋白酶活性;(7)本发明组合物的物质组合配比对皮肤弹性蛋白酶活性具有显著的抑制作用,且明显优于单一物质;(8)本发明组合物提供了天然且安全的能够抑制皮肤成纤维细胞胶原蛋白降解和弹性蛋白降解的配方。
显然,本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样,倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内,则本发明也意图包含这些改动和变型在内。

Claims (7)

1. 一种抑制皮肤多种类型基质金属蛋白酶功能的组合物,其特征在于:所述基质金属蛋白酶的类型为MMP1、MMP2、MMP3和MMP8,所述组合物由以下组分组成:表没食子儿茶素没食子酸酯、二氢槲皮素、甘蔗多酚、薏仁粉、人参和高良姜,在所述组合物中,表没食子儿茶素没食子酸酯:二氢槲皮素:甘蔗多酚:薏仁粉:人参:高良姜的用量比例范围为0.2-1.2 μM:2-10 μM:0.2-28 μg/mL:0.01-20 μg/mL:0.05-2 μg/mL:0.01-1 μg/mL。
2.根据权利要求1所述的组合物,其特征在于:所述组合物抑制基质金属蛋白酶表达、分泌和活化,以及所述组合物促进胶原蛋白分泌,抑制弹性蛋白酶活性。
3.权利要求1或权利要求2所述的组合物在制备抗衰老的外用产品中的用途,其特征在于:以重量百分比计,所述组合物在所述外用产品中的用量是0.5%-20%。
4.根据权利要求3所述的用途,其特征在于:所述抗衰老包括减轻或预防皮肤衰老、细胞衰老或光老化。
5.根据权利要求3所述的用途,其特征在于:所述产品是化妆品。
6.根据权利要求5所述的用途,其特征在于:所述产品中还包含化妆品中常用的辅料或赋形剂。
7.根据权利要求5所述的用途,其特征在于:所述产品是面膜、面霜、乳液、爽肤水或彩妆。
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