CN117031047A - 血小板聚集功能检测花生四烯酸试剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及生物技术领域，特别涉及血小板聚集功能检测花生四烯酸试剂及其制备方法。本发明提供了乙氧基喹啉、二巯基丙醇和/或泊洛沙姆124在制备血小板聚集功能检测试剂盒中的应用。本发明使用乙氧基喹啉和二巯基丙醇作为联合抗氧化剂，提高了花生四烯酸试剂的稳定性；添加泊洛沙姆124并进行超声处理，促进试剂体系的均匀分散、保持稳定，进而提高了对抗血小板聚集药物，如阿司匹林的灵敏度。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，特别涉及血小板聚集功能检测花生四烯酸试剂及其制备方法。
背景技术
血液中的血小板对于止血和凝血、修补破损血管有着重要的作用，参与血栓形成、动脉粥样硬化、癌肿转移和炎症反应等多种生理或病理过程。这些过程与血小板的粘附、释放和聚集等活性密切相关。对血小板聚集功能的检测可用于评估血栓性和出血性相关疾病的诊断和治疗，获知病人对抗血小板治疗的反应性，预测病人的血栓风险，从而有针对性地采取个体化抗血小板治疗方案，减少血栓事件的并发症的发生。
血小板表面有多种与聚集功能相关的受体，其中血小板GP IIb/IIIa膜受体是位于血小板表面的一种粘附性糖蛋白，该受体被激活后对可溶性纤维蛋白原的亲和力增加，可使血小板聚集在桥联纤维蛋白上，形成血小板血栓。细胞膜中的磷脂可在磷脂酶A2的作用下催化释放花生四烯酸(arachidonic acid，AA)，AA能在环氧化酶(cyclooxygenase，COX)的作用下生成血栓素A2(TXA2)，该物质能间接激活GP IIb/IIIa受体，导致血小板聚集。上述反应过程称为血小板聚集的AA途径，该途径能被相关抗血小板药物抑制，如阿司匹林，其作用原理是与COX的活性部位发生不可逆的乙酰化，导致COX失活，阻断AA转化为TXA2的途径，从而抑制血小板聚集。
临床上常使用光学比浊法，作为血小板聚集功能检测的金标准，但该方法存在操作复杂、重复性差等缺点。血栓弹力图检测(thromboelastography，TEG)是一种新的凝血功能检测手段，使用全血作为检测样本，模拟体内环境，可对血液凝固的动态变化过程进行检测，判断血液凝结的速度和强度。利用该方法进行血小板聚集功能检测，具有操作简便、可利用全血检测等优点，具体检测原理为：在过量肝素抗凝的情况下，血液中的凝血酶被完全抑制。纤维蛋白激活剂中含有对肝素不敏感的类凝血酶，可作用于纤维蛋白原，将其转变为纤维蛋白单体，随后在凝血因子的作用下，纤维蛋白单体形成网状结构。在此过程中，血小板未被激活，测得的MA值主要为纤维蛋白的强度(MAF)。纤维蛋白激活剂与花生四烯酸试剂联合使用时，能检测纤维蛋白和血小板聚集的总强度(MAAA)。若病人服用过抗AA药物，则仅能反映纤维蛋白与未被抑制的血小板凝聚强度。另外，使用高岭土激活剂测试枸橼酸抗凝全血，能测得病人的最大凝血强度，是纤维蛋白与所有血小板聚集的最大强度(MAT)。根据下列式I，能计算血小板的抑制率(AA％)，判断服药后病人血小板的功能，从而得出各类抗血小板药物的抑制效果。
当前国内市场上AA激活途径的血小板聚集功能检测相关产品，配合血栓弹力图仪使用，可简化样本制备方式和检测操作，但存在试剂稳定性较差、重复性不佳等问题，且对相关血小板抑制药物的灵敏度不足。现有产品中花生四烯酸试剂(AA试剂)易氧化酸败而失去活性，且油状的AA在水相的试剂体系中易聚集分层，进一步影响了试剂的稳定性和重复性，检测结果与抗血小板聚集药物浓度的相关性不好，缺乏灵敏度。针对上述问题，当前技术鲜有系统的解决方案。比如一些现有试剂缺乏抑制AA氧化的相关组分；而另一些试剂则未解决均匀性问题，缺乏对试剂稳定性能的验证。
因此，提供一种稳定性好、精密度好以及药物灵敏性好的AA激活途径的血小板聚集功能检测试剂盒具有重要的现实意义。
发明内容
有鉴于此，本发明提供的组合物及其应用，用于制备稳定性高、精密度好以及药物灵敏性好的AA激活途径的血小板聚集功能检测试剂盒。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了组合物，包括乙氧基喹啉和二巯基丙醇。
本发明还提供了上述组合物在如下任意项中的应用：
(1)、减少试剂中的花生四烯酸氧化酸败；
(2)、提高试剂中的花生四烯酸的稳定性；
(3)、延长含花生四烯酸的试剂的使用期限；
(4)、制备含花生四烯酸的试剂；
(5)、制备血小板聚集功能检测试剂盒；
所述试剂包括血小板聚集功能检测试剂盒中的试剂；
所述血小板聚集功能检测试剂盒包括花生四烯酸激活途径的血小板聚集功能检测试剂盒。
在本发明的一些具体实施方案中，上述组合物还包括泊洛沙姆124。
本发明还提供了上述组合物在如下任意项中的应用：
(1)、减少试剂中的花生四烯酸氧化酸败；
(2)、提高试剂中的花生四烯酸的稳定性；
(3)、延长含花生四烯酸的试剂的使用期限；
(4)、促进含花生四烯酸的试剂体系的均匀分散；
(5)、提高血小板聚集功能检测试剂对抗血小板聚集药物的灵敏度和/或准确性；
(6)、制备含花生四烯酸的试剂；
(7)、制备血小板聚集功能检测试剂盒；
所述试剂包括血小板聚集功能检测试剂盒中的试剂；
所述抗血小板聚集药物包括阿司匹林；
所述血小板聚集功能检测试剂盒包括花生四烯酸激活途径的血小板聚集功能检测试剂盒。
本发明还提供了试剂，包括上述组合物，以及可接受的辅料或助剂。
在本发明的一些具体实施方案中，上述试剂还包括花生四烯酸、缓冲液、冻干保护剂或防腐剂中的一种或多种；
所述缓冲液包括Tris缓冲液；
所述冻干保护剂包括海藻糖；
所述防腐剂包括庆大霉素。
在本发明的一些具体实施方案中，上述组合物或试剂中，所述花生四烯酸可由花生四烯酸钠或花生四烯酸钠盐替代。
在本发明的一些具体实施方案中，上述试剂包括1.0％(v/v)花生四烯酸、0.5％(w/v)海藻糖、0.01％(w/v)乙氧基喹啉、0.001％(w/v)二巯基丙醇、0.05％(v/v)泊洛沙姆124、0.005％(w/v)庆大霉素和20mM pH值为7.5的Tris，以及可接受的辅料或助剂。
本发明所述w/v为质量体积比，单位为g/mL。
在本发明的一些具体实施方案中，上述试剂的制备方法包括超声混匀的步骤。
在本发明的一些具体实施方案中，上述试剂的制备方法包括如下步骤：
步骤(a)：取所述缓冲液与所述防腐剂混合，调pH值至7.5，获得溶液1；
步骤(b)：取步骤(a)所述的溶液1与如权利要求3所述的组合物、所述冻干保护剂混合，获得溶液2；
步骤(c)：取花生四烯酸与步骤(b)所述的溶液2混合，超声混匀，获得所述试剂。
本发明还提供了试剂盒，包括上述组合物或上述试剂。
本发明还提供了血小板聚集功能检测方法，包括基于如下任一项检测血小板聚集功能；
(I)、上述组合物；
(II)、上述试剂。
本发明还提供了血小板聚集功能检测方法，包括取如下任一项与待测样品混合的步骤：
(I)、上述组合物；
(II)、上述试剂。
在本发明的一些具体实施方案中，上述血小板聚集功能检测方法包括如下步骤：
步骤(a)：取高岭土激活剂、氯化钙与枸橼酸化的待测样品混合，获得普通杯；
步骤(b)：取纤维蛋白激活剂与肝素化的待测样品混合，获得纤维蛋白杯；
步骤(c)：取纤维蛋白激活剂、AA试剂与肝素化的待测样品混合，获得AA杯；
步骤(d)：对步骤(a)所述的普通杯、步骤(b)所述的纤维蛋白杯或步骤(c)所述的AA杯分别进行血栓弹力图试验，获得检测结果；
所述AA试剂为如下任一项：
(I)、上述组合物；
(II)、上述试剂。
本发明的组合物及其应用有如下效果：
本发明一方面提出了联合使用乙氧基喹啉和二巯基丙醇来提高AA试剂的稳定性，防止氧化酸败，延长试剂的使用期限；另一方面通过使用泊洛沙姆124并进行超声混匀处理，使得AA试剂体系有着更好的均匀性和稳定性，提高了AA试剂对抗血小板类药物的灵敏度，从而更好地指导临床诊断和用药。本发明的提出提供了同类产品中更好的性能标准。
具体实施方式
本发明公开了组合物及其应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
目前，大多数血小板聚集功能检测试剂盒少有针对AA试剂性能提出相关解决方案的，如维持试剂的稳定性、均匀性等。针对现有技术的问题，本发明拟制备一种稳定性、精密度好以及药物灵敏性好的AA激活途径的血小板聚集功能检测试剂盒。
本发明血小板聚集功能检测试剂盒(AA)(凝固法)主要与血栓弹力图仪配套使用，通过对病人血小板聚集功能的定性和定量检测，评估血栓性疾病和出血性疾病的诊断和治疗，判断抗血小板聚集药物的临床效果等。
本发明提出在花生四烯酸试剂中使用乙氧基喹啉和二巯基丙醇作为联合抗氧化剂，可以提高AA试剂的稳定性；同时在试剂中添加泊洛沙姆124并进行超声处理，促进试剂体系的均匀分散、保持稳定，进而提高了对抗血小板聚集药物，如阿司匹林的灵敏度，由此获得一种稳定性、精密度好，可有效反映相关药物对患者的血小板聚集功能影响的试剂盒产品。
AA试剂为含有花生四烯酸(AA)、海藻糖、硫酸庆大霉素、乙氧基喹啉、二巯基丙醇、泊洛沙姆124，以及Tris的冻干粉：0.1-2.5％AA，优选浓度1.0％(v/v)；0.1-2.0％海藻糖，优选浓度0.5％(w/v)；0.0005-0.1％硫酸庆大霉素，优选浓度0.005％(w/v)；0.001-0.1％乙氧基喹啉，优选浓度0.01％(v/v)；0.001-0.1％二巯基丙醇，优选浓度0.001％(v/v)；0.001-1.0％泊洛沙姆124，优选浓度0.05％(v/v)；10-100mM Tris，优选浓度20mM；pH 7.0～8.0，优选7.5。
制备方法：
(1)按配方量取Tris和硫酸庆大霉素，加入纯化水充分溶解，调pH值至7.0-8.0；
(2)按配方量取海藻糖、乙氧基喹啉、二巯基丙醇、泊洛沙姆124加入步骤(1)的缓冲液中，搅拌使其充分溶解；
(3)按配方量取花生四烯酸加入步骤(2)的溶液中，混匀得到AA试剂；
(4)将步骤(3)得到的AA试剂按照每瓶100μL分装，真空冷冻干燥得到AA试剂冻干粉。
如无特殊说明，本发明涉及的原料、试剂、耗材以及仪器皆为普通市售品，均可由市场购得。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1
(1)取Tris和硫酸庆大霉素，加入纯化水充分溶解，调pH值至7.5；
(2)取海藻糖加入步骤(1)的缓冲液中，搅拌使其充分溶解；
(3)取花生四烯酸(AA)加入步骤(2)的溶液中，混匀得到AA试剂；
(4)将步骤(3)得到的AA试剂按照每瓶100μL分装，真空冷冻干燥得到AA试剂冻干粉。
其中，所述AA试剂中各组分的终含量分别为：0.5％(v/v)AA、0.5％(w/v)海藻糖、0.005％(w/v)庆大霉素、20mM Tris(pH 7.5)。
实施例2
(1)取Tris和硫酸庆大霉素，加入纯化水充分溶解，调pH值至7.5；
(2)取海藻糖加入步骤(1)的缓冲液中，搅拌使其充分溶解；
(3)取花生四烯酸(AA)加入步骤(2)的溶液中，混匀得到AA试剂；
(4)将步骤(3)得到的AA试剂按照每瓶100μL分装，真空冷冻干燥得到AA试剂冻干粉。
其中，所述AA试剂中各组分的终含量分别为：1.0％(v/v)AA、0.5％(w/v)海藻糖、0.005％(w/v)庆大霉素、20mM Tris(pH 7.5)。
实施例3
(1)取Tris和硫酸庆大霉素，加入纯化水充分溶解，调pH值至7.5；
(2)取海藻糖、乙氧基喹啉、二巯基丙醇、加入步骤(1)的缓冲液中，搅拌使其充分溶解；
(3)取花生四烯酸(AA)加入步骤(2)的溶液中，混匀得到AA试剂；
(4)将步骤(3)得到的AA试剂按照每瓶100μL分装，真空冷冻干燥得到AA试剂冻干粉。
其中，所述AA试剂中各组分的终含量分别为：2.0％(v/v)AA、0.5％(w/v)海藻糖、0.001％(w/v)乙氧基喹啉、0.001％(w/v)二巯基丙醇、0.005％(w/v)庆大霉素、20mM Tris(pH 7.5)。
实施例4
(1)取Tris和硫酸庆大霉素，加入纯化水充分溶解，调pH值至7.5；
(2)取海藻糖、乙氧基喹啉、二巯基丙醇加入步骤(1)的缓冲液中，搅拌使其充分溶解；
(3)取花生四烯酸(AA)加入步骤(2)的溶液中，混匀得到AA试剂；
(4)将步骤(3)得到的AA试剂按照每瓶100μL分装，真空冷冻干燥得到AA试剂冻干粉。
其中，所述AA试剂中各组分的终含量分别为：1.0％(v/v)AA、0.5％(w/v)海藻糖、0.01％(w/v)乙氧基喹啉、0.001％(w/v)二巯基丙醇、0.005％(w/v)庆大霉素、20mM Tris(pH 7.5)。
实施例5
(1)取Tris和硫酸庆大霉素，加入纯化水充分溶解，调pH值至7.5；
(2)取海藻糖、乙氧基喹啉、二巯基丙醇、泊洛沙姆124加入步骤(1)的缓冲液中，搅拌使其充分溶解；
(3)取花生四烯酸(AA)加入步骤(2)的溶液中，进行超声混匀得到AA试剂；
(4)将步骤(3)得到的AA试剂按照每瓶100μL分装，真空冷冻干燥得到AA试剂冻干粉。
其中，所述AA试剂中各组分的终含量分别为：1.0％(v/v)AA、0.5％(w/v)海藻糖、0.05％(w/v)乙氧基喹啉、0.01％(w/v)二巯基丙醇、0.01％(v/v)泊洛沙姆124、0.005％(w/v)庆大霉素、20mM Tris(pH 7.5)。
实施例6
(1)取Tris和硫酸庆大霉素，加入纯化水充分溶解，调pH值至7.5；
(2)取海藻糖、乙氧基喹啉、二巯基丙醇、泊洛沙姆124加入步骤(1)的缓冲液中，搅拌使其充分溶解；
(3)取花生四烯酸(AA)加入步骤(2)的溶液中，进行超声混匀得到AA试剂；
(4)将步骤(3)得到的AA试剂按照每瓶100μL分装，真空冷冻干燥得到AA试剂冻干粉。
其中，所述AA试剂中各组分的终含量分别为：1.0％(v/v)AA、1.0％(w/v)海藻糖、0.01％(w/v)乙氧基喹啉、0.001％(w/v)二巯基丙醇、0.01％(v/v)泊洛沙姆124、0.0005％(w/v)庆大霉素、20mM Tris(pH 7.5)。
实施例7
(1)取Tris和硫酸庆大霉素，加入纯化水充分溶解，调pH值至7.5；
(2)取海藻糖、乙氧基喹啉、二巯基丙醇、泊洛沙姆124加入步骤(1)的缓冲液中，搅拌使其充分溶解；
(3)取花生四烯酸(AA)加入步骤(2)的溶液中，进行超声混匀得到AA试剂；
(4)将步骤(3)得到的AA试剂按照每瓶100μL分装，真空冷冻干燥得到AA试剂冻干粉。
其中，所述AA试剂中各组分的终含量分别为：1.0％(v/v)AA、0.5％(w/v)海藻糖、0.01％(w/v)乙氧基喹啉、0.001％(w/v)二巯基丙醇、0.05％(v/v)泊洛沙姆124、0.005％(w/v)庆大霉素、20mM Tris(pH 7.5)。
实施例8
(1)取Tris和硫酸庆大霉素，加入纯化水充分溶解，调pH值至7.5；
(2)取海藻糖、乙氧基喹啉、二巯基丙醇、泊洛沙姆124加入步骤(1)的缓冲液中，搅拌使其充分溶解；
(3)取花生四烯酸(AA)加入步骤(2)的溶液中，进行超声混匀得到AA试剂；
(4)将步骤(3)得到的AA试剂按照每瓶100μL分装，真空冷冻干燥得到AA试剂冻干粉。
其中，所述AA试剂中各组分的终含量分别为：1.0％(v/v)AA、0.5％(w/v)海藻糖、0.01％(w/v)乙氧基喹啉、0.001％(w/v)二巯基丙醇、0.05％(v/v)泊洛沙姆124、0.005％(w/v)庆大霉素、50mM Tris(pH 7.5)。
实施例9
(1)取Tris和硫酸庆大霉素，加入纯化水充分溶解，调pH值至7.0；
(2)取海藻糖、乙氧基喹啉、二巯基丙醇、泊洛沙姆124加入步骤(1)的缓冲液中，搅拌使其充分溶解；
(3)取花生四烯酸(AA)加入步骤(2)的溶液中，进行超声混匀得到AA试剂；
(4)将步骤(3)得到的AA试剂按照每瓶100μL分装，真空冷冻干燥得到AA试剂冻干粉。
其中，所述AA试剂中各组分的终含量分别为：1.0％(v/v)AA、0.5％(w/v)海藻糖、0.01％(w/v)乙氧基喹啉、0.001％(w/v)二巯基丙醇、0.05％(v/v)泊洛沙姆124、0.005％(w/v)庆大霉素、20mM Tris(pH 7.0)。
对比例1
(1)取Tris和硫酸庆大霉素，加入纯化水充分溶解，调pH值至7.5；
(2)取海藻糖、乙氧基喹啉加入步骤(1)的缓冲液中，搅拌使其充分溶解；
(3)取花生四烯酸(AA)加入步骤(2)的溶液中，混匀得到AA试剂；
(4)将步骤(3)得到的AA试剂按照每瓶100μL分装，真空冷冻干燥得到AA试剂冻干粉。
其中，所述AA试剂中各组分的终含量分别为：1.0％(v/v)AA、0.5％(w/v)海藻糖、0.01％(w/v)乙氧基喹啉、0.005％(w/v)庆大霉素、20mM Tris(pH 7.5)。
对比例2
(1)取Tris和硫酸庆大霉素，加入纯化水充分溶解，调pH值至7.5；
(2)取海藻糖、二巯基丙醇加入步骤(1)的缓冲液中，搅拌使其充分溶解；
(3)取花生四烯酸(AA)加入步骤(2)的溶液中，混匀得到AA试剂；
(4)将步骤(3)得到的AA试剂按照每瓶100μL分装，真空冷冻干燥得到AA试剂冻干粉。
其中，所述AA试剂中各组分的终含量分别为：1.0％(v/v)AA、0.5％(w/v)海藻糖、0.001％(w/v)二巯基丙醇、0.005％(w/v)庆大霉素、20mM Tris(pH 7.5)。
对比例3
(1)取Tris和硫酸庆大霉素，加入纯化水充分溶解，调pH值至7.5；
(2)取海藻糖、乙氧基喹啉、二巯基丙醇、Triton x-100加入步骤(1)的缓冲液中，搅拌使其充分溶解；
(3)取花生四烯酸(AA)加入步骤(2)的溶液中，进行超声混匀得到AA试剂；
(4)将步骤(3)得到的AA试剂按照每瓶100μL分装，真空冷冻干燥得到AA试剂冻干粉。
其中，所述AA试剂中各组分的终含量分别为：1.0％(v/v)AA、0.5％(w/v)海藻糖、0.01％(w/v)乙氧基喹啉、0.001％(w/v)二巯基丙醇、0.05％(v/v)Triton x-100、0.005％(w/v)庆大霉素、20mM Tris(pH 7.5)。
效果例1
用实施例1～9结合自制纤维蛋白激活剂对同一人的血液样本(肝素抗凝)进行检测，以某进口试剂为比对试剂。
表1：实施例1～9筛选结果
从表1可以看出，实施例2、4、7各参数检测结果与比对试剂相对偏差(计算公式如式II)相对较小，说明试剂组分有效，因而本发明的AA试剂可优选实施例2、4、7，三者的性能差异可进一步进行比较。
效果例2
将本发明实施例2、4、7以及对比例1、2和比对试剂均置于2-8℃环境中10天，定时取样对同一人的血液样本(肝素抗凝)进行检测。其中，对比例1中抗氧化剂仅含0.01％乙氧基喹啉、对比例2中抗氧化剂仅含0.001％二巯基丙醇，二者其余配方组成与实施例4一致。
表2：稳定性检测结果
从表2可以看出，本发明AA试剂实施例4、7在10天内稳定性较好，检测所得MA值的相对极差在10％以内，性能优于比对试剂与实施例2、对比例1、2。
实施例2由于未添加任何抗氧化剂组分且无均匀试剂体系的操作，试剂快速失活；对比例1、2分别添加了一种抗氧化剂，较实施例2稳定性明显提高，但在10天时与比对试剂一样发生了完全失活。实施例4将两种抗氧化剂进行了联合使用，存放至第10天时试剂仍保持了活性，相对极差小于10％。实施例7再额外添加了泊洛沙姆124并进行了超声混匀处理，试剂稳定性进一步提高，相对极差小于实施例4。
效果例3
用实施例4、7以及对比例3结合自制纤维蛋白激活剂对同一人的血液样本(肝素抗凝，且加入不同浓度的阿司匹林)进行检测，以某进口试剂为比对试剂。其中，对比例3中的表面活性剂使用0.05％ Triton x-100，其余组成和超声处理方式与实施例7一致。
表3：线性范围检测结果
从表3可以看出，本发明AA试剂的实施例7为添加了泊洛沙姆124并进行超声混匀处理的配方，与抗血小板聚集药物阿司匹林的浓度具有较好的相关性，相关系数r为0.995，灵敏度高，优于比对试剂、未进行上述处理的实施例4以及使用Triton x-100作为表面活性剂的对比例3，因而本发明的AA试剂优选实施例7，可以对患者服用药物的效果进行准确评估，指导临床用药剂量。
效果例4
利用同批血小板聚集功能检测试剂盒(AA途径)(AA试剂制备方法如实施例7所示)，对同一人的血液样本(包括枸橼酸钠和肝素抗凝样本，且加入一定量的阿司匹林)进行10次检测，检测方法如下：
1、将检测试剂放置于室温复温，分别在纤维蛋白激活剂和AA试剂瓶中加入200μL和100μL蒸馏水，摇晃使其充分混匀。
2、打开仪器应用软件，输入患者信息，选择对应的测试类型。
3、在血栓弹力图仪3个通道上装载样品杯。
4、将1mL枸橼酸化的血液加入高岭土激活剂管中，并上下颠倒混匀5次。
5、吸取20μL氯化钙加入通道1样品杯底，吸取340μL上述高岭土激活剂激活的血样至该杯中，点击按键开始测试。
6、吸取10μL复溶好的纤维蛋白激活剂，分别加入通道2、通道3样品杯底。
7、吸取10μL复溶好的AA试剂加入通道3样品杯底。
8、在通道2、3的样品杯中分别加入360μL肝素化的血液，并吹吸混匀3次，加样后迅速点击按键开始测试。
9、测试完成后，在测试界面点击“停止”结束测试，卸去样品杯，按医疗废物处理。
10、在数据界面选中3个杯子的检测结果，点击“AA抑制率”，得到血小板抑制率。
表4：试剂盒精密度检测结果
从表4可以看出，本发明试剂盒(使用实施例7的AA试剂)检测所得MA值的CV都在5％以内，且血小板抑制率的CV也在5％以内，说明本发明血小板聚集功能检测试剂盒的检测精密度良好。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (9)
1.组合物，其特征在于，包括乙氧基喹啉和二巯基丙醇。
2.如权利要求1所述的组合物在如下任意项中的应用：
(1)、减少试剂中的花生四烯酸氧化酸败；
(2)、提高试剂中的花生四烯酸的稳定性；
(3)、延长含花生四烯酸的试剂的使用期限；
(4)、制备含花生四烯酸的试剂；
(5)、制备血小板聚集功能检测试剂盒；
所述试剂包括血小板聚集功能检测试剂盒中的试剂；
所述血小板聚集功能检测试剂盒包括花生四烯酸激活途径的血小板聚集功能检测试剂盒。
3.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，还包括泊洛沙姆124。
4.如权利要求3所述的组合物在如下任意项中的应用：
(1)、减少试剂中的花生四烯酸氧化酸败；
(2)、提高试剂中的花生四烯酸的稳定性；
(3)、延长含花生四烯酸的试剂的使用期限；
(4)、促进含花生四烯酸的试剂体系的均匀分散；
(5)、提高血小板聚集功能检测试剂对抗血小板聚集药物的灵敏度和/或准确性；
(6)、制备含花生四烯酸的试剂；
(7)、制备血小板聚集功能检测试剂盒；
所述试剂包括血小板聚集功能检测试剂盒中的试剂；
所述抗血小板聚集药物包括阿司匹林；
所述血小板聚集功能检测试剂盒包括花生四烯酸激活途径的血小板聚集功能检测试剂盒。
5.试剂，其特征在于，包括如权利要求1所述的组合物或如权利要求3所述的组合物，以及可接受的辅料或助剂。
6.如权利要求5所述的试剂，其特征在于，还包括花生四烯酸、缓冲液、冻干保护剂或防腐剂中的一种或多种；
所述缓冲液包括Tris缓冲液；
所述冻干保护剂包括海藻糖；
所述防腐剂包括庆大霉素。
7.如权利要求5或6所述的试剂，其特征在于，包括1.0％(v/v)花生四烯酸、0.5％(w/v)海藻糖、0.01％(w/v)乙氧基喹啉、0.001％(w/v)二巯基丙醇、0.05％(v/v)泊洛沙姆124、0.005％(w/v)庆大霉素和20mM pH值为7.5的Tris，以及可接受的辅料或助剂。
8.如权利要求6或7所述的试剂，其特征在于，所述试剂的制备方法包括如下步骤：
步骤(a)：取所述缓冲液与所述防腐剂混合，调pH值至7.5，获得溶液1；
步骤(b)：取步骤(a)所述的溶液1与如权利要求3所述的组合物、所述冻干保护剂混合，获得溶液2；
步骤(c)：取花生四烯酸与步骤(b)所述的溶液2混合，超声混匀，获得所述试剂。
9.试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1所述的组合物、如权利要求3所述的组合物或如权利要求5至8任一项所述的试剂，以及可接受的辅料或助剂。
Priority Applications (1)
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